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VIP - KC SOLID spol. s ro

1. SYMBOLS USED WITH DEVICES CONTINUED ON NEXT PAGE CONTINUED FROM PREVIOUS PAGE SYMBOLS USED WITH DEVICES gt FER IVD BU D CA CONTROL Portugu s Conformidade com as normas europeias Prazo de validade Fabricante Consulte as instru es de utiliza o Temperatura m xima Diagn stico in vitro N do lote Anti soro Precipitado no reagente Tra ador ant geno marcado Tamp o Calibrador Soro de controlo Radioactivo Nocivo Distribu Par DiaSorin S A 11 rue Georges Besse 92160 Antony France E ce DiaSorin Inc 1951 Northwestern Avenue For Customer Service in the P O Box 285 U S and Canada Call Toll Free Stillwater MN 55082 0285 U S A 800 328 1482 In the United Kingdom Call 44 118 9364200 FAX 44 118 9792061 Phone 651 439 9710 FAX 651 779 7847 10403 PRINTED IN U S A
2. REAGENTES COM AZIDA DE S DIO CUIDADO Alguns reagentes deste kit cont m azida de s dio A azida de s dio pode reagir com o chumbo ou cobre das canaliza es e formar azidas de metal altamente explosivo Elimine a com grandes quantidades de gua para evitar a acumula o de azida Para mais informa es consulte Descontamina o de tubos de pias de laborat rios para remover sais de azidas no Manual Guia Gest o de Seguran a N CDC 22 emitido pelos Centros de Controlo e Preven o de Doen as Atlanta GA EUA 1976 Frases de Risco de Subst ncias Perigosas da Comunidade Europeia Directiva do Conselho 1999 45 EC R20 21 22 Nocivo pela inala o em contacto com a pele e se ingerido R32 O contacto com cidos liberta g s muito t xico S28 Ap s contacto com a pele lave imediatamente com uma quantidade abundante de gua REAGENTES COM TIMEROSAL Alguns reagentes deste kit cont m timerosal o qual inclui um composto de merc rio A elimina o do merc rio elementar do merc rio inorg nico dos xidos de merc rio e de compostos de merc rio deve ser feita em conformidade com as normas locais e nacionais ADVERT NCIA Este produto cont m um elemento qu mico considerado pelo Estado da Calif rnia como causador de defici ncias cong nitas ou de outras les es reprodutivas REAGENTES COM IODO 125 Este kit cont m material radioactivo que n o excede 2 uCi 74 kBq de iodo 125 Devem ser tomadas todas a
3. When performing the centrifugation step the temperature must be controlled so that it does not exceed 25 C g 1118 x 10 radius in cm rpm 10 7 To completely monitor the consistent performance of an RIA there are additional factors which may be checked DiaSorin suggests a check of the following parameters to assure consistent kit performance a Total Counts b Maximum Binding Average counts per minute CPM of calibrator O Tubes Average CPM of Total Count Tubes c Nonspecific Binding Average CPM of NSB Tubes Average CPM of Total Count Tubes d Slope of Calibrator Curve For example monitor the 80 50 and 20 suppression points of the calibrator line 11 QUALITY CONTROL Each laboratory should include at least two kit controls in every assay to ensure the validity of each assay s results A mean and standard deviation should then be determined for each control using a minimum of ten assays An acceptable range of values may then be obtained for these controls using 2 standard deviations of the values previously determined The DiaSorin Quality Control Laboratory has determined a range for the controls included with this kit These ranges are printed on the quality control vials 12 CALCULATION OF RESULTS There are many methods in existence for calculating results of RIAs Each is based on obtaining a calibration curve by plotting the extent of binding against stated concentrations of the calibration calibrators
4. 38 97 25 33 85 50 78 50 48 75 85 75 100 86 75 2 4 0 14 23 gt 5 38 90 0 48 50 75 80 2 5 100 80 68 Renae 89 ro medio 80 e 74 47 15 3 Sensibilit analitica La quantit minima rilevabile se definita come concentrazione apparente a tre deviazioni standard dai conteggi a legame massimo di 1 0 pg provetta 5 pg mL 15 4 Specificit analitica Il confronto della reattivit incrociata dell anticorpo VIP stato eseguito con i seguenti peptidi Peptidi di reattivit incrociata Somatostatina lt 0 1 pMotilina lt 0 1 p Polipeptide inibitorio gastrico GIP lt 0 1 Glucagone lt 0 1 p Peptide di rilascio gastrina GRP lt 0 1 Gastrina 7l lt 0 1 Gastrina l lt 0 1 pSecretina lt 0 1 hPolipeptide pancreatico PPP lt 0 1 hProinsulina lt 0 1 pInsulina lt 0 1 Colecistochinina CCK8 lt 0 1 Sostanza P lt 0 1 Neurotensina lt 0 1 Met encefalina lt 0 1 Leu encefalina lt 0 1 Bombesina lt 0 1 FARE RIFERIMENTO ALL ULTIMA PAGINA PER LA BIBLIOGRAFIA 48 SCHEMA DI ANALISI 1 ATTENZIONE Preparare l analisi su ghiaccio tritato Il VIP labile nel plasma se conservato a temperatura ambiente pertanto questa precauzione necessaria per ottenere risultati validi 2 Ricostituire i reagenti liofilizzati e lasciar scongelare completamente eventuali campioni congelati Evitare che i reagenti raggiungano temperature superiori a 25 C Contrassegnare due serie di provett
5. o do VIP no plasma Em 21 indiv duos do sexo masculino o valor foi de 42 8 11 9 pg mL de VIP m dia desvio padr o e em 24 indiv duos do sexo feminino 42 6 7 2 pg mL Uma vez que n o h nenhuma diferen a significativa entre os valores dos indiv duos do sexo masculino e feminino a m dia global de 42 7 9 5 pg mL em adultos em jejum Um intervalo provis rio para o desvio padr o seria 23 63 pg mL Este intervalo normal pode ser mais alargado se se utilizarem indiv duos de uma popula o hospitalar sem doen a gastro intestinal como grupo de controlo Outros estudos indicam que o intervalo normal ascende a 200 pg mL O intervalo normal do ensaio efectuado na Universidade Estatal de Ohio n o detect vel at 170 pg mL com uma m dia de 62 44 pg mL Uma vez que o ensaio da Universidade Estatal de Ohio reporta os valores inferiores a 50 como n o detect veis o seu ensaio n o t o sens vel como o procedimento da DiaSorin 57 O Dr Thomas O Dorisio da Universidade Estatal de Ohio recolheu uma s rie de amostras cl nicas resultantes de um ensaio duplo cego as quais inclu am v rios VIPomas e ganglioneuroblastomas Posteriormente ele revelou os resultados obtidos com essas mesmas amostras eles s o apresentados na TABELA IV Os dados demonstram muitos valores de VIP extremamente elevados os quais s o caracter sticos dos tumores produtores de VIP e demonstram que o kit VIP da DiaSorin mede de facto os valores eleva
6. 10 3 Die Einweg R hrchen einiger Hersteller f hren zu hohen nichtspezifischen Bindungen 10 4 Falls Sie es vorziehen den berstand vom Pr zipitat abzusaugen achten Sie dabei sorgf ltig darauf das Pr zipit t nicht aufzur hren 10 5 Jede Probe deren Wert gr er ist als der gr te Kalibratorwert muss mit dem Nullkalibrator verd nnt und erneut getestet werden Das Ergebnis muss mit dem entsprechenden Verd nnungsfaktor korrigiert werden 10 6 Bei der Durchf hrung des Zentrifugierschritts muss die Temperatur so kontrolliert werden dass sie 25 C nicht berschreitet 10 7 Um die konsistente Leistung eines Radioimmunoassays vollst ndig zu berwachen m ssen m glicherweise weitere Faktoren berpr ft werden DiaSorin empfiehlt die folgenden Parameter regelm ig zu berpr fen um eine konsistente Leistung des Kits sicherzustellen a Gesamtz hlung b Maximale Bindung Durchschnittliche Z hlungen pro Minute CPM der Nullkalibrator R hrchen Durchschnittliche CPM der Totalaktivit t R hrchen c Nichtspezifische Bindung Durchschnittliche CPM der NSB R hrchen Durchschnitiliche CPM der Totalaktivit t R hrchen d Steigung der Kalibratorkurve Z B Uberwachung der Suppressions Punkte 80 50 und 20 der Kalibratorkurve 11 QUALIT TSKONTROLLE Jedes Labor sollte mindestens zwei Kit Kontrollen f r jeden Test vorsehen damit die G ltigkeit der Testergebnisse berpr ft werden kann Ein Mittelwert und ein
7. 3 573 C 54 2 768 2 767 1 835 48 8 2 766 D 140 1 948 1 988 1 056 28 0 2 028 E 290 1 297 1 352 420 11 1 1 408 chantillons inconnus 1 2 051 2 060 1128 29 9 126 2070 2 3210 3 209 2277 60 3 40 3 207 Des donn es d chantillons typiques et une courbe d talonnage sont pr sent es au TABLEAU III et la FIGURE 1 ces informations sont propos es titre de r f rence uniquement et ne peuvent en aucun cas tre utilis es pour calculer des valeurs 19 COURBE D TALONNAGE POUR L CHANTILLON VIP oa FIGURE 1 Le laboratoire CQ DiaSorin utilise un programme d ajustement smoothed spline curve 13 LIMITES DU DOSAGE 13 1 Si la concentration initiale d un chantillon d terminer est sup rieure la valeur de l talon le plus haut le diluer avec l talon 0 uniquement 13 2 Ne pas congeler un chantillon qui a t d congel 13 3 Les temps de num ration doivent tre suffisants pour emp cher l erreur statistique par exemple l accumulation de 2 000 CPM donnera une erreur de 5 10 000 CPM donneront une erreur de 1 14 VALEURS ATTENDUES INTERPRETATION CLINIQUE DES VALEURS Quarante cinq personnes normales jeun moyenne d ge de 28 ans ont t choisies pour tudier la concentration de VIP dans le plasma Chez 21 hommes la valeur tait de 42 8 11 9 pg ml de VIP moyenne cart type et chez 24 femmes 42 6 7 2 pg ml Comme il n y a pas de diff rence significative entre les valeurs
8. 4 6 Complexe pr cipitant GAR PPT r actif lyophilis Le s rum de lapin normal pr pr cipit avec du s rum anti lapin de ch vre et du poly thyl ne glycol PEG est dilu dans un tampon BSA borate contenant du thim rosal et d autres conservateurs Reconstituer chaque tube avec 35 ml d eau purifi e bien m langer jusqu ce que la suspension apparaisse homog ne et laisser reposer pendant 30 minutes minimum temp rature ambiante m langer de temps en temps 4 7 Contr le VIP niveaux 1 et 2 r actif lyophilis Le plasma humain d fibrin est dos si besoin est avec la quantit appropri e de VIP pour obtenir une concentration comprise dans l intervalle sp cifi De l azide de sodium est ajout comme conservateur Reconstituer chaque tube avec 2 0 ml d eau purifi e m langer et laisser reposer pendant 15 20 minutes jusqu dissolution compl te du contenu 5 AVERTISSEMENTS ET PRECAUTIONS POUR USAGE DIAGNOSTIQUE N VITRO UNIQUEMENT Non pr vu pour une utilisation interne ou externe sur l homme ou l animal R ACTIFS CONTENANT DES PRODUITS D ORIGINE HUMAINE Traiter comme potentiellement infectieux Chaque don de s rum plasma intervenant dans la pr paration de ce produit a t test par une m thode US agr e par la FDA et s est av r non r actif en pr sence de HBsAg d anticorps anti VHC et d anticorps anti VIH1 2 M me si ces m thodes sont extr mement pr cises elles ne garantissent pas l
9. D canterles surnageants 15 Compter chaque tube dans un compteur gamma pendant 60 secondes minimum Lo LOI g 1 118 x 10 rayon en cm tr min 24 RADIOIMMUNOASSAY F R VASOAKTIVES INTESTINALES PEPTID VIP 1 VERWENDUNGSZWECK NUR ZUR N VITRO DIAGNOSTIK Dieses Kit dient zur quantitativen Bestimmung von vasoaktivem intestinalem Peptid VIP im Plasma durch Radioimmunoassay RIA 2 BERBLICK UND ERKL RUNG VIP ist eine aus 28 Aminos uren bestehende Zusammensetzung die urspr nglich aus dem D nndarm des Schweins extrahiert wurde Im Vergleich zu verschiedenen verwandten Peptiden weist VIP die folgende Aminos uresequenz auf 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 VIP His Ser Asp Ala Val Phe Thr Asp Asn Tyr Tyr Arg Leu Arg Sekretin His Ser Asp Gly Thr Phe Thr Ser Glu Leu Ser Arg Leu Arg Glukagon His Ser Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu GIP Tyr Ala Gin Gly Thr Phe lle Ser Asp Tyr Ser Lys Ala Met 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 VIP Lys Gin Met Ala Val Lys Lys Tyr Leu Asn Ser lle Leu Asn NH2 Sekretin Asp Ser Ala Arg Leu Gin Asp Leu Leu Gin Gly Leu Val NH2 Glukagon Asp Ser Arg Arg Ala Gin Asp Phe Val Gin Trp Leu Met Asn Thr GIP Asp Lys lle Arg Gin Gin Asp Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala etc Es bestehen
10. est connue sous le nom de syndrome de Verner et Morrison Set est caract ris e par une diarrh e aqueuse r sistante hypokali mie et achlorhydrie syndrome WDHA Les individus qui ont ce syndrome ont des taux de VIP plasmatiques tr s lev s souvent des milliers de fois sup rieurs la concentration normale 9 Une autre forme de diarrh e qui se manifeste par des sympt mes tr s similaires ceux du syndrome de Verner et Morrison est le r sultat d une hyperplasie des il ts Cependant la diff rence du syndrome de Verner et Morrison cette condition est caract ris e par des taux normaux de VIP ces cas ont t d sign s par Bloom et Polak comme le pseudo syndrome de Verner et Morrison Les tumeurs diff rentes de celles des il ts qui produisent des taux lev s de VIP incluent le ganglioneuroblastome le cancer broncho pulmonaire le ph ochromocytome le cancer m dullaire de la thyro de et l histiocytome r trop riton al 5 21 23 13 3 DESCRIPTION DE LA METHODE DE DOSAGE Le VIP est mesur par dosage radio immunologique en utilisant l addition retard e d un traceur pour augmenter la sensibilit L chantillon et l anti VIP de lapin sont ajout s puis le tout est incub pendant 24 heures entre 2 et 8 C Du VIP est ensuite ajout avant de proc der une deuxi me incubation pendant 24 heures entre 2 et 8 C Un vecteur pr alablement pr cipit un deuxi me anticorps et le poly thyl ne glycol sont a
11. hrend die Packungsbeilage die theoretische Radioaktivit t des Kits angibt 6 ANZEICHEN F R M GLICHEN VERFALL DER KIT REAGENZIEN 6 1 Das Vorhandensein abnormer Partikel in einem der Reagenzien 6 2 Eine Verschiebung der Steigung oder Position der Kalibratorkurve im Vergleich zu den normalen Ergebnissen 6 3 Eine Abnahme der maximalen Bindung 6 4 Eine hohe nichtspezifische Bindung 7 PROBENGEWINNUNG UND VORBEREITUNG F r den VIP Test werden 200 Mikroliter aprotininhaltiges EDTA Plasma in zweifacher Ausf hrung ben tigt Die Plasmaproben k nnen direkt getestet werden ohne dass eine Extraktion erforderlich ist Bei der anf nglichen Probengewinnung f r VIP muss EDTA und aprotininhaltiges Plasma verwendet werden Blut in einem evakuierten Glasr hrchen f r 5 oder 10 ml unter Verwendung von EDTA als Antikoagulationsmittel sammeln Aprotinin sollte unverz glich zu dem Sammelr hrchen hinzugegeben werden um einen Abbau des VIP in den Proben bei einer Konzentration von 2 500 KIU 5 ml Gesamtblut zu vermeiden Die Proben a Pon 28 9 unverz glich 15 Minuten lang bei 760 x g zentrifugieren um h molysefreies Plasma zu erhalten Das Serum von den Zellen trennen und in R hrchen f llen Wenn die Proben nicht unverz glich verwendet werden sollten sie bei h chstens 15 C gelagert werden Proben d rfen nicht wiederholt eingefroren und aufgetaut werden Alle Kunststoffteile Glasteile und sonstige Materialien die Kontakt mi
12. o versus as concentra es declaradas dos calibradores Este gr fico pode ser em escala linear ou logar tmica Cada um destes m todos d essencialmente os mesmos valores para os controlos e amostras embora alguns ensaios se possam adequar melhor do que outros a determinado m todo O m todo de c lculo do Laborat rio de Controlo de Qualidade da DiaSorin B Bo versus a concentra o logar tmica 55 12 1 Calcule a m dia das CPM para cada calibrador controlo e amostra desconhecida 12 2 Subtraia a m dia das CPM dos tubos NSB a todas as contagens 12 3 Divida as CPM corrigidas de cada calibrador controlo ou amostra pelas CPM corrigidas do calibrador 0 CPM do calibrador ou amostra desconhecida CPM de NSB B Bo x 100 CPM do calibrador 0 CPM de NSB 12 4 Utilizando papel milim trico semi logar tmico ou log logit de dois ciclos desenhe a percentagem de B Bo para os calibradores VIP eixo vertical versus a concentra o eixo horizontal 12 5 Desenhe a linha de melhor ajuste atrav s dos pontos 12 6 Interpole os n veis de VIP nas amostras desconhecidas a partir do gr fico 12 7 Se uma amostra desconhecida tiver sido dilu da corrija de acordo com o factor de dilui o adequado 12 8 Calcule a liga o m xima dividindo as CPM do calibrador O pela m dia de contagens totais obtida nos tubos de contagens totais TABELA III Dados da amostra no ensaio RIA de VIP da DiaSorin Percentagem CPM M
13. val Gin Trp Leu Met Asn Thr Asp Lys lle Arg Gin Gin Asp Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala etc There are similarities between the amino terminal region of VIP and the amino terminal regions of secretin glucagon and gastric inhibitory polypeptide GIP The carboxy terminal region i e residues 15 28 however is quite different VIP has widespread occurrence throughout the gastrointestinal tract where Bloom and Polak find tissue concentrations of VIP to be higher than any other gut peptide Peripheral effects of VIP in the gut include increased alkaline juice flow from the pancreas inhibition of gastric acid production stimulation of insulin release hyper glycemia as a result of glycogenolysis stimulation of small intestinal juice flow and increased cyclic adenosine monophosphate CAMP content of the intestine 8 VIP is also found in high concentration throughout the central nervous system where it has strong vasodilator and hypotensive effects on the cardiovascular system and in the respiratory system where it influences bronchiodilation and augments ventilation VIP is located in both neurons and endocrine cells although more predominantly stimulation 14 in the former and appears to be released through neuronal VIP measurement is used to research certain types of pancreatic islet tumors which secrete excessive amounts of the peptide This condition has been designated as
14. 0 CPM moyenne des tubes de num ration totale c Liaison non sp cifique CPM moyenne des tubes NSB CPM moyenne des tubes de num ration totale d Pente de la courbe d talonnage Par exemple surveiller les points d inhibition de 80 50 et 20 de la courbe d talonnage CONTR LE QUALIT Chaque laboratoire doit inclure au moins deux contr les de la trousse pour chaque dosage afin de garantir la validit de leurs r sultats D terminer ensuite la moyenne et l cart type pour chaque contr le sur un minimum de dix dosages Une gamme de valeurs acceptable peut donc tre obtenue pour ces contr les en utilisant l cart type 2 par rapport aux valeurs pr c demment calcul es Le laboratoire de contr le qualit de DiaSorin a d termin un intervalle pour les contr les fournis dans cette trousse Ces intervalles sont imprim s sur les tubes de contr le qualit 12 CALCUL DES R SULTATS Il existe de nombreuses m thodes de calcul des r sultats des dosages radio immunologiques Chacune est bas e sur l obtention d une courbe d talonnage en tra ant l ampleur de la liaison par rapport aux concentrations indiqu es pour les talons 18 Ce graphe peut tre l chelle lin aire ou logarithmique Chacune de ces m thodes donne essentiellement les m mes valeurs pour les contr les et les chantillons m me si certains dosages peuvent tre mieux adapt s une m thode particuli re que d autres La m thode
15. 82 5 4 058 B 30 3 542 3 558 2 626 69 5 3 573 C 54 2 768 2 767 1 835 48 8 2 766 D 140 1 948 1 988 1 056 28 0 2 028 E 290 1 297 1 352 420 11 1 1 408 Campioni non noti 1 2 051 2 060 1 128 29 9 126 2 070 2 3 210 3 209 2 277 60 3 40 3 207 I dati di campioni tipici e una curva di calibrazione sono riportati nella TABELLA Ill e nella FIGURA I queste informazioni servono solo a scopo di riferimento e non devono essere usate per il calcolo dei valori 44 ESEMPIO DI CURVA DI CALIBRAZIONE VIP Figura 1 Il Laboratorio di controllo di qualit DiaSorin utilizza una retta curvilinea uniforme 13 LIMITI DELLA PROCEDURA 13 1 Se la concentrazione iniziale del campione non noto maggiore del calibratore superiore diluire solo con il Calibratore 0 13 2 campioni non devono essere congelati e scongelati pi volte 13 3 Il conteggio delle volte dovrebbe essere sufficiente per prevenire errori statistici ad esempio l accumulo di 2 000 CPM produrr un errore del 5 10 000 CPM produrr un errore dell 1 14 VALORI PREVISTI INTERPRETAZIONE CLINICA DEI VALORI Per la determinazione di VIP nel plasma sono stati prelevati campioni da 45 persone normali a digiuno et media 28 anni Il valore di VIP in 21 uomini era 42 8 11 9 pg mL deviazione standard media mentre in 24 donne era 42 6 7 2 pg mL Poich non c differenza significativa fra i valori degli uomini e delle donne la media generale di 42 7 9 5 pg m
16. DiaSorin consiglia di controllare i seguenti parametri per garantire prestazioni costanti del kit a Conteggi totali b Legame massimo Conteggi medi al minuto CPM delle provette del calibratore 0 CPM medio delle provette per il conteggio totale c Legame non specifico CPM medio delle provette NSB CPM medio delle provette per il conteggio totale d Pendenza della curva di calibrazione Ad esempio monitorare i punti di soppressione a 80 50 e 20 della linea del calibratore 11 CONTROLLO DI QUALITA Ogni laboratorio dovrebbe includere almeno due campioni di controllo di ogni analisi per garantire la validit dei risultati Determinare quindi la deviazione media e standard per ogni controllo usando un minimo di dieci analisi Si pu quindi ottenere un range accettabile di valori per questi controlli utilizzando 2 deviazioni standard dei valori determinati in precedenza Il Laboratorio di Controllo della Qualit DiaSorin ha stabilito un range per i controlli inclusi nel kit range sono stampati sulle fiale per il controllo di qualit 12 CALCOLO DEI RISULTATI Esistono molti metodi per calcolare i risultati di RIA ognuno tende ad ottenere una curva di calibrazione mediante tracciamento dell estensione del legame rispetto alle concentrazioni indicate dei calibratori Il grafico pu essere su scala lineare o logaritmica Ciascun metodo d essenzialmente gli stessi valori per i controlli e i campioni anche se certe analisi poss
17. Dorisio da Universidade Estatal de Ohio Valores picogramas mL Caso VIP DiaSorin VIP Universidade Ohio Comentarios I Ganglioneuroblastoma 1 1888 1700 WDHA sintomatica 1A 248 135 assintom tica 1B 464 430 WDHA sintom tica 2 3776 gt 2000 2A 4672 1700 2B 352 225 p s ressec o com diarreia Il VIPoma 1 368 960 1A 184 290 p s ressec o 2 1152 1200 metast tica 3 304 290 metast tica ap s ressec o 4 208 230 p s ressec o Ill Diarreia aquosa sem diagn stico documentado 1 11250 gt 14500 2 368 185 3 928 880 explora o neg IV Diarreia aquosa com outros tumores 1 192 390 hipernefroma 2 2360 1500 carcinoma de c lulas pequenas 3 208 330 hipernefroma com vasodilata o 4 272 360 feocromocitoma V Pacientes normais 1 64 lt 50 2 96 lt 50 3 104 lt 50 4 96 lt 50 5 176 110 VI Desconhecidos 1 720 1150 2 512 1200 3 320 170 O ensaio da DiaSorin foi efectuado ap s v rias congela es e descongela es A an lise da regress o exclui os pares lt 50 y 0 79x 335 r 0 94 y VIP DiaSorin x VIP Universidade Ohio 59 15 CARACTER STICAS ESPEC FICAS DE DESEMPENHO 15 1 Precis o Varia o intra ensaio valores N mero da Valor n C V amostra Baixo 62 6 Alto 87 8 Es 35 Varia o inter ensaio valores 73 N mero da Valor m dio C V amostra Baixo 56 3 5 4 9 58 Alto 80 4 5 7 7 07 15 2 VERACIDADE A VERACIDADE DO ENSAIO FOI VERIFICADA ATRAVES DO TESTE DE DILUIC
18. Leu Ser Arg Leu Arg Glucagone His Ser Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu GIP Tyr Ala Gin Gly Thr Phe lle Ser Asp Tyr Ser Lys Ala Met 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 VIP Lys Gin Met Ala Val Lys Lys Tyr Leu Asn Ser lle Leu Asn NH2 Secretina Asp Ser Ala Arg Leu Gin Asp Leu Leu Gin Gly Leu Val NH2 Glucagone Asp Ser Arg Arg Ala Gin Asp Phe Val Gin Trp Leu Met Asn Thr GIP Asp Lys lle Arg Gin Gin Asp Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala etc Esistono similitudini fra la regione terminale aminica di VIP e le regioni terminali aminiche della secretina glucagone e il polipeptide inibitorio gastrico GIP La regione terminale carbossilica ad esempio residui 15 28 tuttavia molto diversa Il VIP compare diffusamente in tutto il tratto gastrointestinale dove Bloom e Polak hanno notato concentrazioni tissutali di VIP superiori rispetto a qualsiasi altro peptide intestinale Gli effetti periferici di VIP nell intestino comprendono maggiore flusso di succhi alcalinici dal pancreas inibizione della produzione di acido gastrico s stimolazione del rilascio di insulina iperglicemia risultante da glicogenolisi stimolazione di succhi nell intestino tenue e maggiore adenosinmonofosfato ciclico CAMP nell intestino 8 Il VIP si trova inoltre in concentrazione elevata in tutto il sistema nervoso centrale dove ha forti effetti vasod
19. Pr parer les l ments du dosage sur de la glace pil e VIP est labile dans le plasma conserv temp rature ambiante il est donc n cessaire de respecter cette pr caution pour obtenir des r sultats valides 2 Reconstituer les r actifs lyophilis s et permettre aux chantillons congel s de d congeler compl tement Ne pas laisser les r actifs atteindre une temp rature sup rieure 25 C Identifier les tubes en double 3 Ajouter les r actifs dans les tubes comme suit Num NSB talon Contr les et Tubes R actifs rations 0 5 chantillons totales inconnus Tampon citrate VIP S 100 pl 200 pl Etalons 0 5 200 ul 200 ul Contr les 200 ul Echantillons inconnus 200 ul Antis rum 100 ul 100 ul Couvrir les tubes avec du parafilm et agiter d licatement l aide du vortex Incuber pendant 24 heures 2 heures entre 2 et 8 C Distribuer 100 pl de traceur dans tous les puits Couvrir et m langer doucement l aide du vortex Incuber pendant 24 heures 2 heures entre 2 et 8 C Distribuer 1ml de solution sal e 0 85 dans tous les puits l exception des tubes de num ration totale 10 Distribuer 500 ul de GAR PPT dans tous les puits l exception des tubes de num ration totale 11 Couvrirles tubes et agiter doucement l aide du vortex 12 Incuber pendant 2 heures 15 minutes entre 2 et 8 C 13 Centrifuger 760 x g pendant 20 minutes 14
20. Precipitating Complex GAR PPT 1 vial 35 mL VIP Controls Level 1 and 2 2 vials 2 mL Number of tests STORAGE Upon receipt and prior to reconstitution store all reagents at 2 8 C After reconstitution store all reagents at 15 or lower until the expiration date on the label Reagents should not be used past the expiration date When reconstituting the contents of the vials mix gently to avoid foaming Reagents from different batches must not be mixed 4 1 VIP Citrate Buffer lyophilized reagent BSA citrate buffer contains thimerosal as a preservative Reconstitute the vial with 2 mL of purified water mix and allow it to stand for 15 20 minutes until the contents are completely dissolved mix thoroughly before using 4 2 VIP Calibrator O lyophilized reagent Citrated plasma is diluted in BSA citrate buffer containing thimerosal and other stabilizers Reconstitute the vial with 5 mL of purified water mix and allow it to stand for 15 20 minutes until the contents are completely dissolved mix thoroughly before using 4 3 VIP Calibrators lyophilized reagent VIP calibrators at nominal concentrations ranging from 25 400 pg mL are prediluted in VIP free plasma and BSA citrate buffer Exact concentration values are assigned according to each lot Reconstitute each vial with 2 0 mL of purified water mix and allow them to stand for 15 20 minutes until the contents are completely dissolved mix thoroughly before using This kit is sta
21. The box label and the tracer vial label indicate the actual amount of radioactivity at the calibration date where the package insert indicates the theoretical radioactivity of the kit 6 INDICATIONS OF POSSIBLE DETERIORATION OF KIT REAGENTS 6 1 The presence of abnormal particulate matter in any of the reagents 6 2 A shift in the slope or position of the calibrator curve from what is normally obtained 6 3 A decrease in maximum binding 6 4 A high nonspecific binding 7 COLLECTION AND PREPARATION OF SPECIMEN Two hundred microliters in duplicate of EDTA plasma containing Aprotinin are required for the VIP assay Plasma samples may be assayed directly with no extraction required The use of plasma containing EDTA and Aprotinin is necessary in the initial sample collection for VIP Collect blood in a 5 mL or 10 mL evacuated glass tube using EDTA as an anticoagulant Aprotinin should be added immediately to the collection tube to prevent degradation of the VIP in the specimen at a concentration of 2 500 KIU 5 mL of whole blood Immediately centrifuge the samples for 15 minutes at 760 x g to obtain hemolysis free plasma Separate the serum from the cells and place in storage tubes If the specimen is not used immediately store it at 15 C or lower Specimens should not be repeatedly frozen and thawed All plastics glassware or other materials coming into contact with the specimen should be entirely free of any contamination 8 EQUIPMENT AN
22. This graph may be either a linear or logarithmic scale Each of these methods gives essentially the same values for controls and samples although certain assays may fit better into one particular method versus another The calculation method for the DiaSorin Quality Control Laboratory is B Bo versus log concentration 12 1 Calculate the average CPM for each calibrator control and unknown sample 12 2 Subtract the average CPM of the NSB tubes from all counts 12 3 Divide the corrected CPM of each calibrator control or sample by the corrected CPM of the calibrator 0 CPM of Calibrator or Unknown Sample CPM of NSB B Bo x 100 CPM of Calibrator O CPM of NSB 12 4 Using two cycle semi log or log logit graph paper plot percent B Bo for the VIP calibrators vertical axis versus the concentration horizontal axis 12 5 Draw a best fit line through the points 12 6 Interpolate the levels of VIP in the unknown samples from the plot 12 7 If an unknown sample has been diluted correct for the appropriate dilution factor 12 8 Calculate maximum binding by dividing CPM of calibrator O by the average total counts obtained in the total count tubes TABLE III DiaSorin VIP RIA Sample Data Percent Duplicate Average Corrected Bound Percent Conc Tube CPM CPM CPM B T B Bo pg mL Total Count 10 928 10 930 10 931 NSB 808 932 8 5 1 055 calibrator 0 4 603 4 709 3 777 43 1 100 0 4 834 Calibrators pg mL A 19 4 0
23. VIPome 1 368 960 1A 184 290 post r section 2 1152 1 200 m tastatique 3 304 290 m tastatique apr s r section 4 208 230 post r section Ill Diarrh e aqueuse sans diagnostic document 1 11 250 gt 14 500 2 368 185 3 928 880 exploration n gative IV Diarrh e aqueuse avec d autres tumeurs 1 192 390 hypern phrome 2 2 360 1 500 cancer petites cellules 3 208 330 hypern phrome avec vasodilatation 4 272 360 ph ochromocytome V Patients normaux 1 64 lt 50 2 96 lt 50 3 104 lt 50 4 96 lt 50 5 176 110 VI Inconnu 1 720 1150 2 512 1200 3 320 170 Le dosage DiaSorin a t fait apr s plusieurs cong lations et d cong lations Analyse de r gression excluant lt 50 paires y 0 79x 335 r 0 94 y VIP DiaSorin x VIP Etat de l Ohio 21 15 CRIT RES DE QUALIT 15 1 Pr cision Variation intra essai valeurs Num ro SE Ecart type C V d chantillon moyenne Bas 62 6 Elev 87 8 26 30 Variation entre les essais valeurs 73 Num ro Valeur Ecart type C V d chantillon moyenne Bas 56 3 5 4 9 58 lev 80 4 5 7 7 07 15 2 PURET LA PURET DU DOSAGE A T V RIFI E PAR LES TESTS DE DILUTION ET DE R CUP RATION Lin arit Parall lisme tude de dilution en s rie sur cinq chantillons patient Valeurs pg ml Num ro 1 8 1 16 1 32 d EN 1 584 1 696 1 888 3 040 4 192 4 672 gt 3 200 3 440 3 776 e a I 500 1150 11200 R cup ration Exactitude V
24. con iodio 125 e diluito in un tampone BSA citrato EDTA contenente timerosal ed altri stabilizzanti Ricostituire la fiala con 12 5 mL di acqua purificata mescolare e lasciare riposare per 15 20 minuti fino a quando il contenuto completamente disciolto mescolare accuratamente prima dell uso 4 6 Complesso precipitante GAR PPT reagente liofilizzato Il siero normale di coniglio pre precipitato con siero capra anti coniglio e polietilene glicolico PEG diluito in un tampone BSA borato contenente timerosal ed altri conservanti Ricostituire ogni fiala con 35 mL di acqua purificata agitare bene fino a quando la sospensione si presenta omogenea e lasciare riposare per almeno 30 minuti a temperatura ambiente agitando di tanto in tanto 39 4 7 Controllo VIP livello 1 e livello 2 reagente liofilizzato Nel plasma umano defibrinato si aggiunge se necessario una quantit necessaria di VIP in modo da ottenere una concentrazione nei range specificati Viene aggiunta sodio azide come conservante Ricostituire ogni fiala con 2 0 mL di acqua purificata mescolare e lasciare riposare per 15 20 minuti fino a quando il contenuto completamente disciolto 5 AVVERTENZE E PRECAUZIONI SOLTANTO PER USO DIAGNOSTICOIN VITRO Non per uso interno o esterno su animali o persone REAGENTI CONTENENTI MATERIALE DI PROVENIENZA UMANA Trattare come potenzialmente infettivi Ogni unit di siero plasma da donatore usata nella preparazione di questo prod
25. dia CPM Liga o Percentagem Conc Tubo Duplicado CPM Corrigidas B T B Bo pg mL Contagens totais 10 928 10 930 10 931 NSB 808 932 8 5 1 055 Calibrador 0 4 603 4 709 3 777 43 1 100 0 4 834 Calibradores pg mL A 19 4 034 4 046 3 114 82 5 4 058 B 30 3 542 3 558 2 626 69 5 3 573 C 54 2 768 2 767 1 835 48 8 2 766 D 140 1 948 1 988 1 056 28 0 2 028 E 290 1 297 1 352 420 11 1 1 408 Amostras desconhecidas 1 2 051 2 060 1 128 29 9 126 2 070 2 3 210 3 209 2 277 60 3 40 3 207 Os dados t picos da amostra e a curva de calibragem s o apresentados na TABELA Ill e na FIGURA 1 esta informa o serve apenas como refer ncia e n o dever ser utilizada para o c lculo de qualquer valor 56 CURVA DE CALIBRAGEM DA AMOSTRA DE VIP FIGURA 1 O Laborat rio de controlo de qualidade da DiaSorin utiliza o m todo de curvas spline 13 LIMITA ES DO PROCEDIMENTO 13 1 Se a concentra o inicial da amostra desconhecida for superior do calibrador mais alto dilua apenas com o Calibrador 0 13 2 N o congele e descongele repetidamente as amostras 13 3 Os tempos de contagem devem ser suficientes para prevenir os erros estat sticos por exemplo a acumula o de 2 000 CPM produzir um erro de 5 10 000 CPM produzir o um erro de 1 14 VALORES DE REFER NCIA INTERPRETA O CL NICA DOS VALORES Recolheram se amostras de quarenta e cinco pessoas normais em jejum idade m dia de 28 anos para a determina
26. genehmigtes Testverfahren gibt Da keine der zur Zeit bekannten Testmethoden absolute Gew hr f r die Abwesenheit des Hepatitis B Virus HBV des Hepatitis C Virus HCV des Retrovirus HIV oder anderer Infektionserreger bieten kann sind alle Produkte mit Komponenten humanen Ursprungs unter Einhaltung guter Laborpraktiken und entsprechender Vorsichtsma nahmen laut Empfehlungen des Leitfadens im Handbuch Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories Biosicherheit in mikrobiologischen und biomedizinischen Laboren 4 Auflage Mai 1999 oder aktuelle Auflage der Centers for Disease Control and Prevention und der National Institutes of Health amerikanische Krankheitsforschungszentren Staatliche Gesundheitsinstitute beschrieben REAGENZIEN MIT NATRIUMAZID ACHTUNG Einige Reagenzien in diesem Kit enthalten Natriumazid das ggf mit Blei oder Kupferleitungen reagieren und h chst explosive Metallazide bilden kann Zur Entsorgung mit reichlich Wasser nachsp len um Azidbildung zu vermeiden Weitere Informationen finden Sie im Abschnitt Decontamination of Laboratory Sink Drains to Remove Azide Salts des Handbuches Safety Management Nr CDC 22 herausgegeben vom Centers for Disease Control and Prevention Atlanta Georgia 1976 Europ ische Gemeinschaften Gefahrenbezeichnungen fir gef hrliche Stoffe Richtlinie 1999 45 EG R20 21 22 Gesundheitssch dlich beim Einatmen Verschlucken und Ber hrung mit der Haut
27. gouttes de surnageant qui peuvent rester sur les bords avant de les replacer l endroit 9 12 Utiliser un compteur scintillation gamma pour effectuer la num ration du pr cipit dans chaque tube et des tubes de num ration totale pendant 60 secondes minimum consulter la section Limitations de la proc dure COMMENTAIRES SUR LA PROC DURE 10 1 Doser tous les chantillons en doublet pour garantir la validit des valeurs obtenues 10 2 Ajouter chaque aliquote de r actif dans le tiers inf rieur du tube essai de mani re assurer le m lange complet des r actifs 10 3 Certains fabricants vendent des tubes jetables qui donnent des liaisons non sp cifiques lev es 10 4 Si le surnageant est aspir dans le pr cipit prendre soin de ne pas remuer le pr cipit 10 5 Tout chantillon inconnu ayant une valeur sup rieure l talon le plus lev doit tre dilu avec l talon 0 et dos de nouveau Corriger le r sultat l aide du facteur de dilution appropri 10 6 Lors de la centrifugation la temp rature doit tre contr l e pour ne pas d passer 25 C 10 7 Pour surveiller compl tement la pr cision constante d un dosage RIA il faut parfois v rifier des facteurs suppl mentaires DiaSorin sugg re de v rifier les param tres suivants afin d assurer la constance des performances de la trousse a Num rations totales b Liaison maximale Num rations moyennes par minute CPM des tubes de l talon
28. laboratoire in vitro n impliquant pas l administration interne ou externe du produit ni par rayonnement l homme ou l animal Sa r ception son acquisition sa d tention son utilisation et son transfert sont sujets aux r glementations et la licence g n rale de I U S Nuclear Regulatory Commission de l Etat avec lequel la Commission a conclu un accord pour l exercice de l autorit r glementaire 1 Le produit radioactif doit tre conserv un endroit d sign L acc s aux produits radioactifs doit tre limit au personnel autoris Ne pas pipeter des solutions radioactives avec la bouche Ne pas manger ni boire dans les zones de travail radioactives En cas de d versement de produits radioactifs dans une zone nettoyer la zone puis la laver l aide d un produit d tergent base d alcali ou d une solution de d contamination radiologique Tout article en verre utilis doit tre enti rement lav l eau avant de laver les autres articles en verre du laboratoire Pour les praticiens ou les tablissements recevant des radio isotopes dans le cadre d une licence sp cifique La r ception l utilisation le transfert et la mise au rebut de produits radioactifs sont sujets aux r glementations et conditions de votre licence sp cifique AVERTISSEMENT Ce produit contient un produit chimique connu dans l Etat de Californie comme tant canc rig ne ATTENTION La radioactivit imprim e sur la notice d utilisation
29. les r actifs comme suit a Tubes de num ration totale Laisser de c t jusqu l tape 5 b Tubes de liaison non sp cifique NSB 200 ul d talon O 100 pl de tampon citrate VIP c talon0 200 ul d talon O 100 ul d antis rum VIP d talons VIP A E 200 ul d talon VIP 100 ul d antis rum VIP e Contr les et chantillons inconnus 200 ul de plasma 100 ul d antis rum VIP 9 4 M langer doucement les tubes l aide du vortex sans former de mousse et les incuber pendant 24 heures 2 heures entre 2 et 8 C 9 5 Ajouter 100 ul de 1251 VIP dans tous les tubes 9 6 M langer doucement les tubes l aide du vortex sans former de mousse et les incuber pendant 24 heures 2 heures entre 2 et 8 C 9 7 Ajouter 1 ml de solution sal e 0 85 dans tous les tubes l exception des tubes de num ration totale g 1118x 10 rayon en cm tr min 17 10 11 9 8 M langer vigoureusement le GAR PPT ajouter 500 ul dans tous les tubes l exception des tubes de num ration totale 9 9 M langer doucement les tubes l aide du vortex sans former de mousse et les incuber pendant 2 heures 15 minutes entre 2 et 8 C 9 10 Centrifuger les tubes 760 x g pendant 20 minutes entre 20 et 25 C 9 11 D canter imm diatement le surnageant dans tous les tubes l exception des tubes de num ration totale en les renversant pendant 2 minutes minimum Placer les tubes sur du papier absorbant pour liminer toutes les
30. o y est la valeur de 20 DiaSorin et x la valeur de l tat de l Ohio Le coefficient de corr lation est de 0 94 Les chantillons de contr le utilis s dans le laboratoire de l Etat de l Ohio ont aussi t mesur s avec la trousse DiaSorin Lors de 3 analyses s par es avec la trousse DiaSorin leur contr le bas intervalle de l Etat de l Ohio lt 50 100 pg ml avait une valeur moyenne de 53 pg ml et le contr le lev intervalle de l tat de l Ohio 450 1014 pg ml tait de 1077 pg ml Plusieurs de ces chantillons de l tat de l Ohio obtenus chez des personnes normales avaient des valeurs allant de 65 176 pg ml lors du dosage DiaSorin L intervalle tendu des chantillons des pathologies du syndrome WDHA est typique de la litt rature et plut t similaire aux taux de gastrine obtenus dans les cas de gastrinome Ces chantillons avaient t stock s pendant un temps inconnu dans le laboratoire du Dr O Dorisio On ne conna t pas le nombre de cong lation et d cong lation entre leur analyse et notre analyse TABLEAU IV R sultats des chantillons fractionn s en double aveugle avec le Dr Thomas O Dorisio l universit de l tat de l Ohio valeurs picogrammes ml Cas VIP DiaSorin VIP tat de l Ohio Commentaires I Ganglioneuroblastome 1 1888 1700 WDHA symptomatique 1A 248 135 asymptomatique 1B 464 430 WDHA symptomatique 2 3776 gt 2 000 2A 4 672 1 700 2B 352 225 post r section avec diarrh es ll
31. of 1251 VIP to all tubes 9 6 Vortex the tubes gently without foaming and incubate them for 24 hours 2 hours at 2 8 C 9 7 Add1mLof0 85 saline to all tubes except the total count tubes 9 8 Vigorously mix the GAR PPT add 500 uL to all tubes except the total count tubes 9 9 Vortex the tubes gently without foaming and incubate them for 2 hours 15 minutes at 2 8 C 9 10 Centrifuge the tubes using 760 x g for 20 minutes at 20 25 C 9 11 Immediately decant the supernatant from all the tubes except the total count tubes by inverting them for a minimum time of 2 minutes Blot the tubes on absorbent paper to remove any drops of supernatant that may be remaining on the rims before turning the tubes upright 9 12 Using a gamma scintillation counter count the precipitate of each tube and the total count tubes for 60 seconds or longer see Limitations of the Procedure section PROCEDURAL COMMENTS 10 1 Assay all samples in duplicate to ensure confidence in values obtained 10 2 Add each aliquot of reagent to the lower third of assay tube to ensure complete mixture of reagents 10 3 Some manufacturers disposable tubes yield elevated nonspecific bindings 10 4 If you choose to aspirate the supernatant from the precipitate be careful not to 10 5 10 6 disturb the precipitate Any value greater than the highest calibrator must be diluted with calibrator 0 and assayed again Correct result using the appropriate dilution factor
32. vitro tal como recomendado 4 4 Anti soro VIP reagente liofilizado O soro de coelho anti VIP dilu do em tamp o borato BSA com timerosal Reconstitua o frasco com 12 5 mL de gua purificada agite e deixe assentar durante 15 20 minutos at que o conte do se dissolva completamente agite devidamente antes da utiliza o 4 5 VIP 3 reagente liofilizado O VIP marcado com iodo 125 e dilu do em tamp o BSA citrato EDTA com timerosal e outros estabilizadores Reconstitua o frasco com 12 5 mL de gua purificada agite e deixe assentar durante 15 20 minutos at que o conte do se dissolva completamente agite devidamente antes da utiliza o 4 6 Complexo de precipita o GAR PPT reagente liofilizado O soro de coelho normal pr precipitado com soro de cabra anti coelho e polietileno glicol PEG dilu do em tamp o borato BSA com timerosal e outros conservantes 51 Reconstitua cada frasco com 35 mL de gua purificada agite devidamente at a suspens o ficar homog nea e de seguida deixe assentar durante pelo menos 30 minutos temperatura ambiente agitando ocasionalmente 4 7 Controlo VIP n vel 1 e n vel 2 reagente liofilizado O plasma humano desfibrinado artificialmente contaminado se necess rio com a quantidade adequada de VIP para se obter uma concentra o dentro de um determinado intervalo E adicionada azida de s dio como conservante Reconstitua cada frasco com 2 0 mL de gua purificada agit
33. vortexen und 24 Stunden 2 Stunden lang bei 2 8 C inkubieren 9 5 100 ul 1251 VIP zu allen R hrchen hinzugeben 9 6 Vorsichtig die R hrchen ohne Schaumbildung vortexen und 24 Stunden 2 Stunden lang bei 2 8 C inkubieren 9 7 1 ml 0 85 Kochsalzl sung zu allen R hrchen au er den Totalaktivit t R hrchen hinzugeben 9 8 Den GAR PPT Komplex gr ndlich mischen 500 ul zu allen R hrchen au er den Totalaktivit t R hrchen hinzugeben g 1118 x 10 Radius in cm U Min 9 9 Vorsichtig die R hrchen ohne Schaumbildung vortexen und 2 Stunden 15 Minuten lang bei 2 8 C inkubieren 29 9 10 Die R hrchen 20 Minuten lang bei 20 25 C mit 760 x g zentrifugieren 9 11 Die berst nde durch mindestens 2 Minuten langes Umdrehen der R hrchen sofort aus allen R hrchen auBer den Totalaktivit t R hrchen dekantieren Bevor Sie die R hrchen aufrecht stellen die R hrchen auf Saugpapier abtupfen um alle eventuellen Tropfen von Uberst nden auf den R ndern zu entfernen 9 12 Mit einem Gammaszintillationsz hler den Niederschlag in jedem R hrchen und den Totalaktivit t R hrchen mindestens 60 Sekunden lang messen Siehe Abschnitt Grenzen des Verfahrens 10 ANMERKUNGEN ZUM VERFAHREN 10 1 Alle Proben in doppelter Ausf hrung testen um die gemessenen Werte zu best tigen 10 2 Jedes Aliquot des Reagenzes in das untere Drittel des Testr hrchens hinzugeben damit sich die Reagenzien vollst ndig vermischen
34. 1 Metionina Encefalina lt 0 1 Leucina Encefalina lt 0 1 Bombesina lt 0 1 CONSULTE A LTIMA P GINA PARA OBTER REFER NCIAS 61 ESQUEMA DO ENSAIO CUIDADO Prepare o ensaio sobre gelo picado O VIP l bil no plasma armazenado temperatura ambiente pelo que necess rio adoptar esta precau o para obter resultados v lidos 2 Reconstitua os reagentes liofilizados e deixe descongelar totalmente qualquer amostra congelada N o permita que os reagentes atinjam temperaturas superiores a 25 C Identifique os tubos em duplicado 3 Distribua os reagentes de acordo com o esquema seguinte Conta NSB Cal Controlos e Tubos Reagentes gens 0 5 amostras totais desconhecidas Tamp o Citrato VIP E 100 uL 200 uL a Calibradores 0 5 200 uL 200 uL Controlos E 200 uL Amostras desconhecidas 200 uL Anti soro 100 uL 100 uL 4 Tape os tubos com parafilme e agite os delicadamente num misturador tipo Vortex 5 Incube durante 24 horas 2 horas a 2 8 C 6 Deite 100 uL de tra ador em todos os po os 7 Tape e agite delicadamente num misturador tipo Vortex 8 Incube durante 24 horas 2 horas a 2 8 C 9 Deite 1mL de solu o salina 0 85 em todos os po os excep o dos tubos de contagens totais 10 Deite 500 uL de GAR PPT em todos os po os excep o dos tubos de contagens totais 11 Tape os tubos e agite os delicadamente num misturador tipo Vortex 12 Incube durante 2 horas
35. 15 minutos a 2 8 C 13 Centrifugue utilizando 760 x g durante 20 minutos 14 Decante os sobrenadantes 15 Conte cada tubo num contador gama durante 60 segundos ou mais g 1118 x 10 raio em cm rpm 62 REFERENCES BIBLOGRAPHIE LITERATUR BIBLIOGRAFIA REFER NCIAS 10 11 12 18 14 15 16 17 18 Said S l and V Mutt Isolation from Porcine Intestinal Wall of a Vasoactive Octa cosapeptide Related to Secretin and to Glucagon European Journal of Biochemistry 28 199 1972 Said S I and V Mutt Polypeptide with Broad Biological Activity Isolation from Small Intestine Science 169 1217 1970 Bloom S R and J M Polak VIP Measurement in Distinguishing Verner Morrison Syndrome and Pseudo Verner Morrison Syndrome Clinical Endocrinology 5 228 1976 Barbezat G O and M l Grossman Intestinal Secretion Stimulation by Peptides Science 174 422 1971 Makhlouf G M and S I Said The Effect of Vasoactive Intestinal Peptide VIP on Digestive and Hormonal Function In Gastrointestinal Hormones Ed J C Thompson Texas University Press pp 599 610 1975 keins C and S I Said Hyperglycemic and Glycogenolytic Effects of Vasoactive Intestinal Polypeptide Proceedings of the Society for Experimental Biology and Medicine 142 1014 1972 Schebalin M S I Said and G M Makhlouf Stimulation of Insulin and Glucagon Secretio
36. 192 390 ipernefroma 2 2360 1500 carcinoma a piccole cellule 3 208 330 ipernefroma con vasodilatazione 4 272 360 feocromocitoma V Pazienti normali 1 64 lt 50 2 96 lt 50 3 104 lt 50 4 96 lt 50 5 176 110 VI Non noto 1 720 1150 2 512 1200 3 320 170 L analisi DiaSorin stata eseguita dopo diversi congelamenti e scongelamenti Analisi di regressione escludendo lt 50 coppie y 0 79x 335 r 0 94 y DiaSorin VIP x Ohio State VIP 46 15 CARATTERISTICHE SPECIFICHE DELLE PERFORMANCE 15 1 Precisione Variazione intra analisi valori Numero Valore a C V campione BASSO 62 6 ALTO 87 8 a 35 Variazione intra analisi valori Numero Valore Se CM campione BASSO 56 3 5 4 9 58 ALTO 80 4 5 7 7 07 15 2 ACCURATEZZA L ACCURATEZZA DELL ANALISI STATA CONTROLLATA MEDIANTE TEST DI DILUIZIONE E TEST DI RECUPERO Linearit Parallelismo Studio di diluizione seriale di cinque campioni Valori pg mL Ea EE 1 16 1 32 1584 1696 1888 3040 4192 4672 gt 3200 3440 3776 EE I 00 150 120 Recupero Attendibilit Valori pg mL TABELLA V Recuperi di VIP a diversi livelli approssimanti il range normale da plasma fresco contenente EDTA e aprotinina ogni punto la media delle analisi in duplice serie Cam Cam pione HE VIP di pione di ME VIP di aggiunto rilevato aggiunto rilevato di L recupero plasma L L recupero plasma pg mL VIP pg mL pg mL 14 3 0
37. 34 4 046 3 114 82 5 4 058 B 30 3 542 3 558 2 626 69 5 3 573 C 54 2 768 2 767 1 835 48 8 2 766 D 140 1 948 1 988 1 056 28 0 2 028 E 290 1 297 1 352 420 11 1 1 408 Unknown Samples 1 2 051 2 060 1 128 29 9 126 2 070 2 3 210 3 209 2 277 60 3 40 3 207 Typical sample data and a calibrator curve are shown in TABLE Ill and FIGURE 1 this information is for reference only and should not be used for the calculation of any value VIP SAMPLE CALIBRATOR CURVE B Ba 100 FIGURE 1 The DiaSorin QC lab uses a smoothed spline curve fit 13 LIMITATIONS OF THE PROCEDURE 13 1 If the initial concentration of the unknown sample is greater than the highest calibrator dilute with calibrator O only 13 2 Specimens should not be repeatedly frozen and thawed 13 3 Counting times should be sufficient to prevent statistical error for example accumulation of 2 000 CPM will yield 5 error 10 000 CPM will yield 1 error 14 EXPECTED VALUES CLINICAL INTERPRETATION OF VALUES Forty five normal fasting persons mean age 28 were sampled for plasma VIP determination In 21 males the value was 42 8 11 9 pg mL VIP mean standard deviation and in 24 females 42 6 7 2 pg mL Since there is no significant difference between the values for males and females the overall average is 42 7 9 5 pg mL in fasting adults A tentative two standard deviation range would be 23 63 pg mL This normal range may be broader if persons from a hospital p
38. AO E DO TESTE DE RECUPERA O Linearidade Paralelismo Estudo de dilui o em s rie de cinco amostras de pacientes Valores pg mL N mero da 1 8 1 16 1 32 amostra 1584 1696 1888 3040 4192 4672 gt 3200 3440 3776 1 10 1 15 1 20 2630 2130 2360 Do 1 100 1 150 1 200 7200 11250 10400 Recupera o Exactid o Valores pg mL TABELA V Recupera es do VIP a v rios n veis aproximando se do intervalo normal utilizando plasma fresco com EDTA e Aprotinina Cada ponto a m dia das an lises em duplicado VIP Recu VIP VIP adicio pera o Amostra adicionado Recupe de ra o plasma 97 78 75 85 92 50 78 100 Recu 89 pera o 80 m dia 100 74 60 15 3 Sensibilidade anal tica Quando definida como a concentra o aparente em 3 desvios padr o das contagens na liga o m xima a quantidade m nima detect vel de 1 0 pg tubo 5 pg mL 15 4 Especificidade anal tica A compara o da reactividade cruzada do anticorpo anti VIP foi feita com os seguintes pept deos Pept deos Reactividade cruzada Somatostatina lt 0 1 pMotilina lt 0 1 pPolipept deo inibit rio de gastrina GIP lt 0 1 Glucagon lt 0 1 pPept deo de liberta o de gastrina GRP lt 0 1 Gastrina 7l lt 0 1 Gastrina l lt 0 1 pSecretina lt 0 1 hPolipept deo Pancre tico PPP lt 0 1 hProinsulina lt 0 1 pInsulina lt 0 1 Colecistoquinina CCK8 lt 0 1 Subst ncia P lt 0 1 Neurotensina lt 0
39. D MATERIALS REQUIRED BUT NOT SUPPLIED 8 1 Disposable borosilicate glass tubes 12 x 75 mm 8 2 Temperature controlled centrifuge to accommodate 12 x 75 mm tubes 8 3 Gamma scintillation counter capable of counting iodine 125 8 4 Vortex 8 5 Suggested pipetting devices a Micropipettors calibrated to deliver 100 uL and 200 pL b Repeating dispensers calibrated to deliver 100 uL 500 uL and 1 mL 8 6 0 85 saline 8 7 Purified water 9 ASSAY PROCEDURE CAUTION SET UP ASSAY ON CRUSHED ICE VIP IS LABILE IN PLASMA STORED AT ROOM TEMPERATURE THEREFORE THIS PRECAUTION IS NECESSARY TO OBTAIN VALID RESULTS 9 1 Reconstitute lyophilized reagents and allow any frozen reagents to thaw completely Do not allow reagents to reach temperatures above 25 C Gently mix all reagents before using g 1118 x 10 radius in cm rpm 10 9 2 Set up labeled 12 x 75 mm disposable glass tubes in duplicate according to the Scheme of the Assay on the back page 9 3 Add reagents as follows a Total count tubes Set aside until step 5 b Nonspecific binding tubes NSB 200 uL of Calibrator 0 100 uL of VIP citrate buffer c Calibrator 0 200 uL of Calibrator 0 100 uL of VIP antiserum d VIP calibrators A E 200 uL of VIP calibrator 100 uL of VIP antiserum e Controls and unknown samples 200 uL of plasma 100 uL of VIP antiserum 9 4 Vortex the tubes gently without foaming and incubate them for 24 hours 2 hours at 2 8 C 9 5 Add 100 uL
40. Der Normalbereich beim Test der Ohio State University ist bis 170 pg ml nicht erkennbar wobei der Durchschnitt bei 62 44 pg ml liegt Da beim Ohio State Test Werte unter 50 als nicht erkennbar angegeben werden besitzt dieser Test eine geringere Empfindlichkeit als das DiaSorin Verfahren Eine Serie von klinischen Doppelblindproben einschlie lich mehrerer VIPome und Ganglioneuroblastome wurde von Dr Thomas O Dorisio an der Ohio State University erhalten Sp ter gab er seine Ergebnisse zu diesen Proben bekannt die in TABELLE IV dargestellt sind Die Daten zeigen viele extrem erh hte VIP Werte ein charakteristisches Merkmal f r VIP produzierende Tumore und belegen dass mit dem DiaSorin VIP Kit tats chlich erh hte Werte bei Menschen gemessen werden k nnen und dass dieses Kit im Vergleich zu einem etablierten Forschungslabor gut abschneidet Die Regressionsgleichung f r die ersten 22 Proben mit Ausnahme der von Ohio State berichteten 4 Normalpersonen mit nicht erkennbaren Konzentrationen betr gt y 0 78x 32 wobei y der DiaSorin Wert und x der Ohio State Wert ist Der Korrelationskoeffizient betr gt 0 94 Die im Ohio State Labor verwendeten Kontrollproben wurden ebenfalls mit dem DiaSorin Kit gemessen Die niedrige Kontrolle dieser Proben Ohio State Bereich lt 50 100 pg ml wies einen Mittelwert von 53 pg ml auf und f r die hohe Kontrolle Ohio State Bereich 450 1 014 pg ml wurde bei 3 getrennten Analysen mit dem DiaSorin Kit
41. EXPLICA O O VIP um composto de 28 amino cidos originariamente extra do do intestino delgado do porco A sua sequ ncia de amino cidos quando comparada com v rios pept deos relacionados a seguinte His Ser Asp Ala Val Phe Thr Asp Asn Tyr Tyr Arg Leu Arg His Ser Asp Gly Thr Phe Thr Ser Glu Leu Ser Arg Leu Arg His Ser Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Tyr Ala Gin Gly Thr Phe lle Ser Asp Tyr Ser Lys Ala Met 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 Lys Gin Met Ala Val Lys Lys Tyr Leu Asn Ser lle Leu Asn NH2 Asp Ser Ala Arg Leu Gin Asp Leu Leu Gin Gly Leu Val NH2 Asp Ser Arg Arg Ala Gin Asp Phe Val Gin Trp Leu Met Asn Thr Asp Lys lle Arg Gin Gin Asp Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala etc Existem semelhan as entre a regi o amino terminal do VIP e as regi es amino terminais da secretina do glucagon e do polipept deo g strico inibit rio GIP A regi o carboxi terminal i e res duos 15 28 no entanto bastante diferente O VIP ocorre de forma bastante abrangente em todo o tracto gastrointestinal onde segundo Bloom e Polak as concentra es de tecidos de VIP s o mais elevadas do que de qualquer outro peptideo intestinal Os efeitos perif ricos do VIP nos intestinos incluem aumento do fluxo alcalino de suco pancrea
42. Karzinom Hypernephrom mit Vasodilation Pheochromozytom Der DiaSorin Test wurde nach mehreren Gefrier Auftau Zyklen durchgef hrt Regressionsanalyse mit Ausnahme von lt 50 Paaren y 0 79 335 r 0 94 y DiaSorin VIP x Ohio State VIP 34 15 SPEZIELLE LEISTUNGSMERKMALE 15 1 Prazision Intra Testvarianz Werte 5 Mittelwert TC ue Niedrig 62 6 e 9 Hoch 87 8 3 0 Inter Testvarianz Werte 73 Hoch 80 4 5 7 7 07 15 2 RICHTIGKEIT DIE RICHTIGKEIT DES ASSAYS WURDE MIT HILFE DES VERD NNUNGS UND DES WIEDERFINDUNGSTESTS BERPR FT Linearit t Parallelit t Serienverd nnung von 5 Patientenproben Werte pg ml Probennummer 1 8 i 1584 1696 1888 3040 4192 4672 gt 3200 3440 3776 e RR as vo Do 1 100 1 150 1 200 7200 11250 10400 Wiederfindung Genauigkeit Werte pg ml TABELLE V VIP Wiederfindungen bei verschiedenen sich dem Normalbereich n hernden Konzentrationen aus frischem EDTA und aprotininhaltigem Plasma Jeder Punkt stellt den Mittelwert von zweifachen Analysen dar Plasma VIP VIP Wiederfi VIP VIP VIP Wiederfi probe hinzuge ermittelt ndung Plasma hinzugeg ermittelt ndung geben pg ml probe eben pg ml pg ml Durchsch n Wiederfi ndung 35 15 3 Analytische Sensitivit t Wenn die geringste nachweisbare Konzentration als die scheinbare Konzentration bei 3 Standardabweichungen von den Z hlungen bei maximaler Bindung definiert wird b
43. L negli adulti a digiuno Un range sperimentale a due deviazioni standard potrebbe essere 23 63 pg mL Questo range normale pu essere pi ampio se si impiegano come gruppo di controllo pazienti di un ospedale non affetti da malattie gastrointestinali Altre fonti riferiscono di un range normale fino a 200 pg mL Il range normale nelle analisi compiute presso l Ohio State University non rilevabile fino a 170 pg mL con una media di 62 44 pg mL Poich le analisi dell Ohio State indicano valori al di sotto di 50 come non rilevabili le loro analisi non possono considerarsi sensibili al pari della procedura stabilita da DiaSorin Una serie di campioni clinici a doppio cieco comprendenti diversi ViPoma e neuroblastoma del ganglio sono stati raccolti dal Dr Thomas O Dorisio della Ohio State University Successivamente il Dott O Dorisio ha reso noto i suoi risultati sugli stessi campioni qui riportati nella TABELLA IV dati dimostrano molti valori VIP estremamente elevati che sono caratteristici di tumori che producono VIP e dimostrano che il kit VIP DiaSorin misura efficacemente valori elevati negli uomini ed perfettamente affidabile secondo un noto laboratorio di ricerca L equazione di regressione per i primi 22 campioni escludendo i 4 normali con livelli non rilevabili riportati dall Ohio State y 0 78x 32 dove y il valore di DiaSorin ed x il valore dell Ohio State Il coefficiente di correlazione 0 94 Anche i campioni di co
44. On disposal flush with a large volume of water to prevent azide build up For further information refer to Decontamination of Laboratory Sink Drains to Remove Azide Salts in the Manual Guide Safety Management No CDC 22 issued by the Centers for Disease Control and Prevention Atlanta GA 1976 European Communities Hazardous Substance Risk Phrases Council Directive 1999 45 EC R20 21 22 Harmful by inhalation in contact with skin and if swallowed R32 Contact with acids liberates very toxic gas S28 After contact with skin wash immediately with plenty of water REAGENTS CONTAINING THIMEROSAL Some reagents in this kit contain thimerosal which contains a mercury compound Disposal of elemental mercury inorganic mercury mercury oxides and mercury compounds should be done in strict compliance with all local state and federal regulations WARNING This product contains a chemical known to the State of California to cause birth defects or other reproductive harm REAGENTS CONTAINING IODINE 125 This kit contains radioactive material which does not exceed 2 uCi 74 kBq of iodine 125 Appropriate precautions and good laboratory practices should be used in the storage handling and disposal of this material For practitioners or institutions receiving radioisotopes under a general license This radioactive material may be received acquired possessed and used only by physicians veterinarians in the practice of veterinary medicin
45. P 15 SPECIFIC PERFORMANCE CHARACTERISTICS 15 1 Precision Intra Assay Variation values Sample Mean SE YC V Number Low 62 6 High 87 8 Ge 30 Inter Assay Variation values 73 Sample Mean Value YC V Number Low 56 3 5 4 9 58 High 80 4 5 7 7 07 15 2 TRUENESS THE ASSAY TRUENESS HAS BEEN VERIFIED BY THE DILUTION TEST AND THE RECOVERY TEST Linearity Parallelism Serial Dilution Study of five Patient Samples Values pg mL Sample 1 8 1 16 1 32 ner 1584 1696 1888 3040 4192 4672 gt 3200 3440 3776 e eer I too 150 1200 Recovery Accuracy Values pg mL TABLE V Recoveries of VIP at Several Level Approximating the Normal Range from Fresh Plasma Containing EDTA and Aprotinin a is the mean of Se analyses Plasma en ME Recover aa i Ra y ae Added Ge S y P co un PE em un gt e e 75 85 75 86 75 2 14 2 38 90 De 80 E 68 Moan 89 Recovery 80 i 2 74 10 15 3 Analytical Sensitivity When defined as the apparent concentration at 3 standard deviations from the counts at maximum binding the minimum detectable amount is 1 0 pg tube 5 pg mL 15 4 Analytical Specificity Comparison of the cross reactivity of the VIP antibody was made with the following peptides Peptides Cross reactivity Somatostatin lt 0 1 pMotilin lt 0 1 pGastrin Inhibitory Polypeptide GIP lt 0 1 Glucagon lt 0 1 pGastrin Releasing Peptide GRP lt 0 1 Gastrin I lt 0 1 Gastr
46. R32 Entwickelt bei Ber hrung mit S ure sehr giftige Gase S28 Bei Ber hrung mit der Haut sofort mit viel Wasser abwaschen THIMEROSALHALTIGE REAGENZIEN Einige Reagenzien in diesem Kit enthalten Thimerosal das unter anderem auch eine Quecksilberverbindung enth lt Die Entsorgung von elementarem oder anorganischem Quecksilber sowie von Quecksilberoxiden und komponenten muss unter strikter Einhaltung aller lokalen einzelstaatlichen und bundesstaatlichen Vorschriften erfolgen 27 ACHTUNG Dieses Produkt enth lt eine Chemikalie die nach Erkenntnissen des Staates Kalifornien zu Sch den des Erbgutes sowie zu Missbildungen f hren kann REAGENZIEN MIT IOD 125 Dieses Kit enth lt radioaktives Material mit h chstens 2 uCi 74 kBq Jod 125 Bei der Lagerung Handhabung und Entsorgung dieses Materials sind entsprechende VorsichtsmaBnahmen und gute Laborpraktiken einzuhalten F r rzte bzw Institutionen die im Rahmen einer Generallizenz Radioisotope erhalten gilt Folgendes p Dieses radioaktive Material darf nur von Arzten veterin rmedizinisch t tigen Tier rzten klinischen Laboren oder Krankenh usern und nur f r klinische n vitro Tests oder In vitro Labortests bei denen das Material oder dessen Strahlung keinen Menschen oder Tieren intern oder extern verabreicht wird empfangen erworben besessen und verwendet werden Entgegennahme Erwerb Besitz Verwendung und Weitergabe des Materials unterliegen den Vorschriften und der Ge
47. RECAU O PARA OBTER RESULTADOS VALIDOS 9 1 9 2 9 3 9 4 9 5 9 6 9 7 9 8 9 9 9 10 Reconstitua os reagentes liofilizados e deixe descongelar completamente quaisquer reagentes congelados N o deixe os reagentes atingirem temperaturas superiores a 25 C Agite delicadamente todos os reagentes antes de os utilizar Prepare tubos de vidro descart veis de 12 x 75 mm marcados em duplicado de acordo com o Esquema do Ensaio da ltima p gina Adicione os reagentes da seguinte forma a Tubos de contagens totais Reserve at ao passo 5 b Tubos de liga o n o espec fica NSB 200 uL de Calibrador O 100 uL de tamp o citrato VIP c Calibrador 0 200 uL de Calibrador 0 100 uL de anti soro VIP d Calibradores VIP A E 200 uL de calibrador VIP 100 uL de anti soro VIP e Controlos e amostras desconhecidas 200 uL de plasma 100 uL de anti soro VIP Agite delicadamente os tubos no misturador tipo Vortex evitando a forma o de espuma e incube os durante 24 horas 2 horas a 2 8 C Adicione 100 uL de VIP 125 a todos os tubos Agite delicadamente os tubos no misturador tipo Vortex evitando a forma o de espuma e incube os durante 24 horas 2 horas a 2 8 C Adicione 1 mL de solu o salina 0 85 a todos os tubos excep o dos tubos de contagens totais Agite vigorosamente o GAR PPT adicione 500 uL a todos os tubos excep o dos tubos de contagens totais Agite delicadamente os tubos no mistura
48. U 5 mL di sangue intero Centrifugare immediatamente i campioni per 15 minuti a 760 x g per ottenere plasma senza emolisi Separare il siero dalle cellule e disporlo nelle provette per la conservazione Se i campioni non vengono utilizzati immediatamente conservarli a 15 C o a temperatura inferiore campioni non devono essere congelati e scongelati pi volte Tutto il materiale in plastica oggetti in vetro o altro materiale che viene a contatto con i campioni deve essere completamente esente da qualsiasi contaminazione 8 ATTREZZATURE E MATERIALI NECESSARI NON FORNITI IN DOTAZIONE 8 1 Provette in vetro borosilicato monouso 12 x 75 mm 8 2 Centrifuga a temperatura controllata adatta per 12 provette da 75 mm gt g 1118 x 10 raggio in cm rpm 8 3 Contatore ad emissione di scintille gamma adatto per il conteggio di iodio 125 41 8 4 8 5 8 6 8 7 Mixer Vortex Dispositivi consigliati per operazioni con pipetta a Micropipette calibrate per erogare 100 uL e 200 uL b Dosatori a ripetizione calibrati per erogare 100 uL 500 uL e 1 mL Soluzione salina allo 0 85 Acqua purificata 9 PROCEDURA DI ANALISI ATTENZIONE PREPARARE L ANALISI SU GHIACCIO TRITATO IL VIP LABILE NEL PLASMA SE CONSERVATO A TEMPERATURA AMBIENTE PERTANTO QUESTA PRECAUZIONE NECESSARIA PER OTTENERE RISULTATI VALIDI 9 1 9 2 9 3 9 4 9 5 9 6 9 7 9 8 9 9 9 10 9 11 9 12 Ricostituire i reagenti liof
49. VIP 1235 RIA Kit For the quantitative determination of vasoactive intestinal peptide VIP in plasma Instruction Manual Manuel d Instructions Testanleitung Manuale di Istruzioni Manual de instru es Catalog No REF KAT NR Numero di Catalogo N de Cat logo 39125 DiaSorin Stillwater Minnesota 55082 0285 U S A TABLE OF CONTENTS English asser HERD uen mule Fran ais Italiano Portugu s VIP 1 2 Secretin Glucagon GIP VIP Secretin Glucagon GIP 3 VASOACTIVE INTESTINAL PEPTIDE VIP RADIOIMMUNOASSAY INTENDED USE FOR IN VITRO DIAGNOSTIC USE This kit is intended for the quantitative determination of vasoactive intestinal peptide VIP in plasma by radioimmunoassay RIA SUMMARY AND EXPLANATION VIP is a 28 amino acid compound originally extracted from the small intestine of the pig Its amino acid sequence compared to several related peptides is as follows 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 Ala Val Phe Thr Asp Asn Tyr Tyr Arg Leu Arg Gly Thr Phe Thr Ser Glu Leu Ser Arg Leu Arg Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Gly Thr Phe lle Ser Asp Tyr Ser Lys Ala Met 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 Lys Gin Met Ala Val Lys Lys Tyr Leu Asn Ser lle Leu Asn NH2 Asp Ser Ala Arg Leu Gin Asp Leu Leu Gin Gly Leu Val NH2 Asp Ser Arg Arg Ala Gin Asp Phe
50. VVERTENZA Questo prodotto contiene un prodotto chimico noto nello Stato della California per provocare cancro ATTENZIONE La radioattivit stampata sulle istruzioni allegate alla confezione pu essere leggermente diversa dalla radioattivit stampata sull etichetta della scatola e sull etichetta della fiala di tracciante L etichetta sulla scatola e sulla fiala di tracciante indicano la quantit effettiva di radioattivit alla data di calibrazione mentre il materiale informativo della confezione indica la radioattivit teorica del kit 6 INDICAZIONI DI POSSIBILE DETERIORAMENTO DEI REAGENTI DEL KIT 6 1 La presenza di particolato anomalo in uno qualsiasi dei reagenti 6 2 Uno sfasamento nella pendenza o posizione della curva di calibrazione rispetto a quella che normalmente si ottiene 6 3 Una diminuzione del legame massimo 6 4 Un legame altamente non specifico 7 RACCOLTA E PREPARAZIONE DEI CAMPIONI Sono richiesti duecento 200 microlitri in due serie di plasma EDTA plasma contenente aprotinina da usare per l analisi VIP campioni di plasma possono essere analizzati direttamente senza alcuna estrazione L uso di plasma contenente EDTA e aprotinina necessario nella raccolta iniziale del campione per VIP Prelevare sangue in una provetta di vetro sotto vuoto da 5 mL o 10 mL usando EDTA come anticoagulante Aggiungere immediatamente aprotinina nella provetta per evitare il degrado di VIP nei campioni in concentrazione di 2 500 KI
51. Verner J V and A B Morrison Islet Cell Tumor and a Syndrome of Refractory Watery Diarrhea and Hypokalemia American Journal of Medicine 25 374 1958 Bloom S R and J M Polak Glucagonomas VIPomas and Somatostatinomas Clinics in Endocrinology and Metabolism 9 2 285 1980 Modlin IM and S R Bloom VIPomas and the Watery Diarrhea Syndrome South African Medical Journal 54 53 1978 Yamaguchi K K Abe S Miyakawa S Ohnami M Sakagami and N Yanaihara The Presence of Macromolecular Vasoactive Intestinal Polypeptide VIP in VIP Producing Tumors Gastroenterology 79 4 1980 19 20 21 22 23 Kidd G S M Donowitz T O Dorisio S Cataland and F Newman Mild Chronic Watery Diarrhea Hypokalemia Syndrome Associated with Pancreatic Islet Cell Hyper plasia The American Journal of Medicine 66 883 1979 O Dorisio M S T M O Dorisio S Cataland and S P Balcerzak Vasoactive Intestinal Polypeptide as a Biochemical Marker of Polymorphonuclear Leukocytes Journal of Laboratory Clinical Medicine 96 4 666 1980 Kaplan S J C T Holbrook H G McDaniel W L Buntain and W M Crist Vasoactive Intestinal Peptide Secreting Tumors of Childhood American Journal Diseases of Child 134 21 1980 lida Y O Nose H Kai A Okada T Mori P Lee K Kakudo and N Yanaihara Watery Diarrhea with a Vasoactive Intestinal Peptide producing Ganglioneuro b
52. a d tection de tous les dons infect s Ce produit peut galement contenir d autres produits d origine humaine pour lesquelles il n existe aucun test agr Comme aucune m thode de test connue ne peut offrir l assurance compl te de l absence du virus de l h patite B HBV ou de l h patite C HCV du virus de l immunod ficience humaine VIH ou d autres agents infectieux tous les produits d origine humaine doivent tre manipul s conform ment aux bonnes pratiques de laboratoire en prenant les pr cautions appropri es d crites dans le document U S Centers for Disease Control and Prevention National Institutes of Health Manual Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories 4 d mai 1999 ou derni re dition R ACTIFS CONTENANT DE L AZIDE DE SODIUM ATTENTION Certains r actifs de cette trousse contiennent de l azide de sodium L azide de sodium peut r agir avec la plomberie en plomb ou en cuivre et former des azotures ultra explosifs Pour leur mise au rebut rincer grande eau pour emp cher l accumulation d azide Pour plus d informations consulter Decontamination of Laboratory Sink Drains to Remove Azide Salts dans le manuel Guide Safety Management No CDC 22 publi par les Centers for Disease Control and Prevention Atlanta GA 1976 D claration des risques relatifs aux substances dangereuses des communaut s europ ennes Directive du conseil 1999 45 EC R20 21 22 Nocif en cas d inhalati
53. aleurs pg ml TABLEAU V R cup ration de VIP plusieurs taux proches de l intervalle normal partir de plasma frais contenant de EDTA et de l aprotinine Chaque point est la moyenne d analyses en doublet Echantil VIP VIP R cup r Echantil VIP VIP R cup r lon de ajout trouv ation lon de ajout trouv ation plasma pg ml plasma pg ml pg ml VIP 97 25 33 85 78 50 48 75 75 100 86 75 4 0 14 8 85 5 38 90 EC 25 50 50 75 2 5 100 80 68 R cup r 89 ation 80 moyenne 100 74 92 78 22 15 3 Sensibilit analytique D finie comme la concentration obtenue 3 carts types de l activit de liaison maximale la quantit minimale d celable est de 1 0 pg tube 5 pg ml 15 4 Sp cificit analytique La comparaison de la r activit crois e de l anticorps anti VIP a t effectu e avec les peptides suivants Peptides R activit crois e Somatostatine lt 0 1 pMotiline lt 0 1 Peptide inhibiteur pGastrine GIP lt 0 1 Glucagon lt 0 1 Peptide lib rateur de pGastrine GRP lt 0 1 Gastrine 7l lt 0 1 Gastrines lt 0 1 pS cr tine lt 0 1 Polypeptide hPancr atique PPP lt 0 1 hProinsuline lt 0 1 pInsuline lt 0 1 Chol cystokinine CCK8 lt 0 1 Substance P lt 0 1 Neurotensine lt 0 1 M thionine enk phaline lt 0 1 Leucine enk phaline lt 0 1 Bombesine lt 0 1 VOIR LA DERNI RE PAGE POUR R F RENCE 23 PROC DURE DE DOSAGE 1 ATTENTION
54. ardata di tracciante per aumentare la sensibilit Dopo l aggiunta di campione e di siero coniglio anti VIP ha luogo una incubazione di 24 ore a 2 8 C Viene quindi aggiunto 251 VIP a cui fa seguito una seconda incubazione di 24 ore a 2 8 C Il carrier pre precipitato il secondo anticorpo e polietilene glicolico vengono aggiunti in un unica operazione Il composto pu essere centrifugato e decantato dopo un incubazione minima di due ore a 2 8 C 4 REAGENTI FORNITI CON IL KIT Tampone citrato VIP 1 fiala 2 mL Calibratore 0 VIP 1 fiala 5 ml Calibratori VIP 0 5 5 fiale 2 ml Antisiero VIP 1 fiala 12 5 mL 5 VIP 1 fiala 12 5 mL Complesso precipitante GAR PPT 1 fiala 35 mL Controlli VIP Livello 1 e 2 2 fiale 2 ml Numero di test CONSERVAZIONE Dopo il ricevimento dei reagenti e prima della ricostituzione conservarli a 2 8 C Dopo la ricostituzione conservare tutti i reagenti a 15 o a una temperatura inferiore fino alla data di scadenza indicata sull etichetta reagenti non devono essere utilizzati dopo la data di scadenza Durante la ricostituzione del contenuto delle fiale mescolare delicatamente al fine di evitare la formazione di schiuma Non si devono mescolare reagente di lotti diversi 4 1 Tampone citrato VIP reagente liofilizzato Il tampone BSA citrato contiene timerosal come conservante Ricostituire la fiala con 2 mL di acqua purificata mescolare e lasciare riposare per 15 20 minuti fino a quando il cont
55. cellules et mettre dans des tubes de stockage CARON 16 9 Si l chantillon n est pas utilis imm diatement conserver une temp rature inf rieure ou gale 15 C Ne pas congeler un chantillon qui a t d congel Tous les plastiques articles en verre ou autres produits entrant en contact avec l chantillon ne doivent absolument pas tre contamin s MAT RIEL ET PRODUITS REQUIS MAIS NON FOURNIS 8 1 Tubes en verre borosilicat jetables 12 x 75 mm 8 2 Centrifugeuse thermostat pour tubes 12 x 75 mm 8 3 Compteur scintillation gamma pouvant mesurer l iode 125 8 4 Vortex 8 5 Pipettes propos es a Micropipettes gradu es pour distribuer 100 ul et 200 ul b Pipettes r p tition gradu es pour distribuer 100 ul 500 ul et 1 ml 8 6 solution sal e 0 85 8 7 Eau purifi e PROC DURE DE DOSAGE ATTENTION PREPARER LES ELEMENTS DU DOSAGE SUR DE LA GLACE PILEE VIP EST LABILE DANS LE PLASMA CONSERVE A TEMPERATURE AMBIANTE IL EST DONC NECESSAIRE DE RESPECTER CETTE PRECAUTION AFIN D OBTENIR DES RESULTATS VALIDES 9 1 Reconstituer les r actifs lyophilis s et permettre aux r actifs congel s de d congeler compl tement Ne pas laisser les r actifs atteindre une temp rature sup rieure 25 C M langer d licatement tous les r actifs avant utilisation 9 2 Installer des tubes en verre jetables de 12 x 75 mm tiquet s en doublet selon le Profil de dosage de la derni re page 9 3 Ajouter
56. chtig sch tteln 24 Stunden 2 Stunden lang bei 2 8 C inkubieren 100 ul des Tracers in alle Wells dispensieren Abdecken und vorsichtig sch tteln 24 Stunden 2 Stunden lang bei 2 8 C inkubieren 1 ml 0 85 Kochsalzl sung in alle Wells au er den Totalaktivit t R hrchen dispensieren 10 500 ul GAR PPT in alle Wells mit Ausnahme der Totalaktivit t R hrchen dispensieren 11 Die R hrchen abdecken und vorsichtig vortexen 12 2 Stunden 15 Minuten lang bei 2 8 C inkubieren 13 20 Minuten lang mit 760 x g zentrifugieren 14 Die berst nde dekantieren 15 Jedes R hrchen mindestens 60 Sekunden lang in einem Gamma Z hler z hlen Lo LOI g 1118 x 10 Radius in cm U min 37 ANALISI RADIOIMMUNOLOGICA DI PEPTIDE VASOATTIVO INTESTINALE VIP 1 USO PREVISTO PER USO DIAGNOSTICOIN VITRO Questo kit serve per la determinazione quantitativa di peptide vasoattivo intestinale VIP nel plasma mediante analisi radioimmunologica RIA 2 SOMMARIO E SPIEGAZIONI Il peptide vasoattivo intestinale un composto di 28 amino acidi originariamente estratto dall intestino tenue del maiale La sua sequenza di amino acidi confrontata con diversi peptidi affini la seguente 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 VIP His Ser Asp Ala Val Phe Thr Asp Asn Tyr Tyr Arg Leu Arg Secretina His Ser Asp Gly Thr Phe Thr Ser Glu
57. controllo e la Prevenzione delle malattie di Atlanta GA 1976 Frasi di rischio per sostanze pericolose della Comunit Europea Direttiva del Consiglio 1999 45 CE R20 21 22 Harmful by inhalation in contact with skin and if swallowed Dannoso per inalazione per contatto con la pelle ed ingestione R32 Contact with acids liberates very toxic gas Il contatto con acidi libera gas altamente tossico S28 After contact with skin wash immediately with plenty of water Dopo il contatto con la pelle lavare immediatamente con abbondante acqua REAGENTI CONTENENTI TIMEROSAL Alcuni reagenti di questo kit contengono timerosal in cui presente un composto di mercurio Lo smaltimento del mercurio allo stato di elemento inorganico di ossidi di mercurio e composti di mercurio deve essere effettuato in piena conformit con tutte le normative locali statali e federali AVVERTENZA Questo prodotto contiene un prodotto chimico noto nello Stato della California per provocare difetti congeniti o altre lesioni ai feti REAGENTI CONTENENTI IODIO 125 Questo kit contiene materiale radioattivo che non supera 2uCi 74kBq di iodio 125 Adottare precauzioni adeguate e le buone pratiche di laboratorio per la conservazione la manipolazione e lo smaltimento di questo materiale Per i professionisti o gli istituti che utilizzano radioisotopi con una licenza generale Questo materiale radioattivo pu essere consegnato acquisito conservato e usato un
58. de calcul pour le laboratoire de contr le qualit DiaSorin est B Bo par rapport la concentration logarithmique 12 1 Calculer la CPM moyenne pour chaque talon contr le et chantillon inconnu 12 2 Soustraire la CPM moyenne des tubes NSB de toutes les num rations 12 3 Diviser les CPM corrig es de chaque talon contr le ou chantillon par les CPM corrig es de l talon 0 CPM de l talon ou de l chantillon inconnu CPM de NSB B Bo x 100 CPM de l talon 0 CPM de NSB 12 4En utilisant du papier semi logarithmique ou logarithmique deux cycles tracer le pourcentage B Bo pour les talons VIP axe vertical par rapport la concentration axe horizontal 12 5 Tracer la droite de meilleur ajustement d un point l autre 12 6 Interpoler les niveaux de VIP dans les chantillons inconnus I aide du trac 12 7 Si un chantillon inconnu a t dilu corriger en fonction du facteur de dilution appropri 12 8 Calculer la liaison maximale en divisant la CPM de l talon O par les num rations totales moyennes obtenues dans les tubes de num ration totale TABLEAU III Donn es d chantillon RIA VIP DiaSorin Pourcentage CPM CPM CPM de liaison Pourcentage Conc Tube en doublet moyenne corrig e B T B Bo pg ml Num ration tot 10 928 10 930 10 931 NSB 808 932 8 5 1055 talon O 4603 4709 3777 43 1 100 0 4834 Etalons pg ml A 19 4 034 4 046 3 114 82 5 4 058 B 30 3 542 3 558 2 626 69 5
59. dor tipo Vortex evitando a forma o de espuma e incube os durante 2 horas 15 minutos a 2 8 C Centrifugue os tubos utilizando 760 x g durante 20 minutos a 20 25 C g 1118 x 108 raio em cm rpm 54 9 11 Decante imediatamente os sobrenadantes de todos os tubos excep o dos tubos de contagens totais invertendo os durante pelo menos 2 minutos Seque os tubos com papel absorvente para retirar quaisquer gotas de sobrenadante que tenham eventualmente ficado nos rebordos antes de os colocar na posi o vertical 9 12 Utilizando um contador de cintila o gama conte o precipitado de cada tubo e dos tubos de contagens totais durante 60 segundos ou mais consulte a sec o Limita es do Procedimento 10 COMENT RIOS SOBRE O PROCEDIMENTO 10 1 Efectue o ensaio de todas as amostras em duplicado para garantir um elevado grau de confian a nos valores obtidos 10 2 Adicione cada al quota de reagente no ter o inferior do tubo de ensaio de modo a garantir a mistura total dos reagentes 10 3 Os tubos descart veis de alguns fabricantes originam liga es n o espec ficas elevadas 10 4Se optar por aspirar o sobrenadante do precipitado tenha cuidado para n o agitar o precipitado 10 5 Qualquer valor superior ao do calibrador mais elevado deve ser dilu do com calibrador O e novamente determinado Corrija o resultado utilizando um factor de dilui o adequado 10 6 Controle a temperatura durante a fase de cen
60. dos nos humanos sendo perfeitamente compar vel a um laborat rio de pesquisa estabelecido A equa o de regress o para as primeiras 22 amostras excluindo as 4 normais com n veis n o detect veis referidos pela Universidade Estatal de Ohio y 0 78x 32 sendo que y o valor da DiaSorin e x o valor da Universidade Estatal de Ohio O coeficiente de correla o 0 94 As amostras de controlo utilizadas no laborat rio da Universidade Estatal de Ohio foram igualmente medidas com o kit da DiaSorin O seu controlo baixo intervalo da Universidade Estatal de Ohio lt 50 100 pg mL tinha um valor m dio de 53 pg mL e o controlo alto intervalo da Universidade Estatal de Ohio 450 1014 pg mL foi determinado como sendo 1077 pg mL em 3 an lises separadas efectuadas com o kit da DiaSorin V rias destas amostras da Universidade Estatal de Ohio obtidas a partir de indiv duos normais tinham valores compreendidos entre 65 e 176 pg mL no ensaio da DiaSorin A vasta gama de amostras patol gicas na s ndrome de WDHA t pica da literatura e bastante semelhante situa o dos n veis de gastrina no gastrinoma Estas amostras tinham sido conservadas no laborat rio do Dr O Dorisio durante um espa o de tempo desconhecido Desconhece se o n mero de congela es e descongela es efectuadas entre a an lise da Universidade e a nossa pr pria an lise 58 TABELA IV Resultados das amostras desdobradas do ensaio duplo cego do Dr Thomas O
61. e 3 Versare il reagente seguendo lo schema seguente Conteggi NSB CAL Controlli e Provette Reagenti totali 0 5 campioni non noti Tampone citrato VIP 100 uL 200 uL Calibratori 0 5 200 uL 200 uL Controlli 5 200 uL Campioni non noti i E 200 uL Antisiero 100 uL 100 uL 4 Coprire le provette con pellicola e agitare lentamente nel Vortex 5 Lasciare in incubazione per 24 ore 2 ore a 2 8 C 6 Versare 100 uL di tracciante in tutti i pozzetti 7 Coprire e agitare lentamente nel Vortex 8 Lasciare in incubazione per 24 ore 2 ore a 2 8 C 9 Versare 1 mL di soluzione salina allo 0 85 in tutti i pozzetti eccetto le provette per il conteggio totale 10 Versare 500 uL di GAR PPT nei pozzetti eccetto nelle provette per il conteggio totale 11 Coprire le provette e agitare lentamente nel Vortex 12 Lasciare in incubazione per 2 ore 15 minuti a 2 8 C 13 Centrifugare a 760 x g per 20 minuti 14 Far decantare i liquidi superficiali 15 Contare ogni provetta in un contatore a raggi gamma per 60 secondi o pi g 1118x 10 raggio in cm rpm 49 1 2 VIP Secretina Glucagon GIP VIP Secretina Glucagon GIP RADIOIMUNOENSAIO DE PEPT DEO INTESTINAL VASOACTIVO VIP USO INDICADO PARA USO DIAGN STICO IN VITRO Este kit est indicado para a determina o quantitativa do peptideo intestinal vasoactivo VIP no plasma atrav s de um radioimunoensaio RIA RESUMO E
62. e Standardabweichung sind dann f r jede Kontrolle in mindestens zehn Versuchsg ngen zu bestimmen Ein zul ssiger Wertebereich kann dann f r diese Kontrollen mit 2 Standardabweichungen der zuvor bestimmten Werte ermittelt werden Das Qualit tskontrolllabor von DiaSorin hat f r die in diesem Kit enthaltenen Kontrollen einen Bereich festgelegt Diese Bereiche sind auf den Fl schchen mit den Qualit tskontrollen aufgedruckt g 1118 x 10 8 Radius in cm U Min 30 12 ERGEBNISBERECHNUNG Es gibt viele M glichkeiten die Ergebnisse von Radioimmunoassays zu berechnen Bei jeder Methode wird eine Kalibratorkurve angelegt indem die prozentualen Bindungen gegen die angegebenen Konzentrationen der Kalibrations Kalibratoren aufgetragen werden Die Kurve kann entweder eine lineare oder eine logarithmische Skala haben Jede dieser Methoden f hrt im Wesentlichen zu denselben Werten f r Kontrollen und Proben bei einigen Tests ist die eine Methode jedoch m glicherweise besser geeignetals die andere Die Umrechnungsmethode f r das DiaSorin Qualit tskontrolllabor lautet B Bo gegen log Konzentration 12 1 Die durchschnittlichen CPM f r jeden Kalibrator jede Kontrolle und jede unbekannte Probe berechnen 12 2 Die durchschnittlichen CPM der NSB R hrchen von allen Z hlungen abziehen 12 3 Den korrigierten CPM Wert f r jeden Kalibrator jede Kontrolle oder jede Patientenprobe durch den korrigierten CPM Wert des Nullkalibrators dividiere
63. e clinical laboratories or hospitals and only for in vitro clinical or laboratory tests not involving internal or external administration of the material or the radiation therefrom to human beings or animals lts receipt acquisition possession use and transfer are subject to the regulations and the general license of the U S Nuclear Regulatory Commission or of the state with which the Commission has entered into an agreement for the exercise of regulatory authority 1 Storage of radioactive material should be limited to a specifically designated area 2 Access to radioactive materials must be limited to authorized personnel only 3 Do not pipette radioactive material by mouth 4 Do not eat or drink within designated radioactive work areas 5 Areas where spills may occur should be wiped up then washed with an alkali detergent or radiological decontamination solution Any glassware used must be rinsed completely with water before washing with other laboratory glassware For practitioners or institutions receiving radioisotopes under a specific license The receipt use transfer and disposal of radioactive materials are subject to the regulations and conditions of your specific license WARNING This product contains a chemical known to the State of California to cause cancer ATTENTION Radioactivity printed in the package insert may be slightly different from the radioactivity printed on the box label and on the tracer vial label
64. e e deixe assentar durante 15 20 minutos at que o conte do se dissolva completamente 5 AVISOS E PRECAU ES APENAS PARA USO DIAGNOSTICO IN VITRO N o recomendado para o uso interno ou externo em seres humanos ou animais REAGENTES COM MATERIAL DE ORIGEM HUMANA Trate como se fossem potencialmente infecciosos Cada unidade de doador de soro plasma usada na prepara o deste produto foi testada por um m todo aprovado pela FDA e determinada como sendo n o reactiva no que diz respeito presen a de HBsAg anticorpos anti HCV e anticorpos anti HIV 1 2 Embora estes m todos sejam bastante precisos n o garantem que todas as unidades infectadas sejam detectadas Este produto tamb m pode conter outros materiais de origem humana para os quais n o h teste aprovado Como nenhum m todo de teste conhecido pode oferecer seguran a total no que concerne aus ncia do v rus da hepatite B HBV do v rus da hepatite C HCV do v rus da Imunodefici ncia Humana VIH ou de outros agentes infecciosos todos os produtos que cont m materiais de origem humana devem ser manuseados de acordo com as boas pr ticas laboratoriais adoptando as precau es adequadas tal como descrito no Manual dos Centros Americanos para Controlo e Preven o de Doen as e Institutos Nacionais de Sa de Bioseguran a em Laborat rios Microbiol gicos e Biom dicos Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories A ed Maio 1999 ou edi o actual
65. ein Wert von 1 077 pg ml ermittelt Mehrere dieser Ohio State Proben von Normalpersonen wiesen beim DiaSorin Test Werte zwischen 65 und 176 pg ml auf Der gro e Bereich von pathologischen Proben beim WDHA Syndrom ist in der Literatur typisch und hnelt sehr der Situation von Gastrinkonzentrationen in Gastrinomen Diese Proben waren f r einen unbekannten Zeitraum im Labor von Dr O Dorisio aufbewahrt worden Der Unterschied hinsichtlich der H ufigkeit des Einfrierens und Auftauens zwischen der Ohio State und der DiaSorin Analyse ist nicht bekannt 33 TABELLE IV Ergebnisse von getrennten Doppelblindproben von Dr Thomas O Dorisio an der Ohio State University Werte Pikogramm ml Kommentare Fall VIP DiaSorin VIP Ohio State I Ganglioneuroblastom 1 1888 1700 1A 248 135 1B 464 430 2 3776 gt 2000 2A 4672 1700 2B 352 225 Il VIPom 1 368 960 1A 184 290 2 1152 1200 3 304 290 4 208 230 III W ssrige Diarrh mit undokumentierter Diagnose 1 11250 gt 14500 2 368 185 3 928 880 IV Wassrige Diarrh bei anderen Tumoren 1 192 390 2 2360 1500 3 208 330 4 272 360 V Normalpatienten 1 64 lt 50 2 96 lt 50 3 104 lt 50 4 96 lt 50 5 176 110 VI Unbekannt 1 720 1150 2 512 1200 3 320 170 symptomatisch f r WDHA asymptomatisch symptomatisch f r WDHA nach Resektion bei Diarrh nach Resektion metastatisch metastatisch nach Resektion nach Resektion neg Untersuchung Hypernephrom kleinzelliges
66. enuto completamente disciolto mescolare accuratamente prima dell uso 4 2 Calibratore 0 VIP reagente liofilizzato Il plasma citrato diluito in un tampone BSA citrato contenente timerosal ed altri stabilizzanti Ricostituire la fiala con 5 mL di acqua purificata mescolare e lasciare riposare per 15 20 minuti fino a quando il contenuto completamente disciolto mescolare accuratamente prima dell uso 4 3 Calibratori VIP reagente liofilizzato calibratori VIP a concentrazioni nominali varianti fra 25 400 pg mL sono prediluiti nel plasma privo di VIP e nel tampone BSA citrato valori esatti della concentrazione sono assegnati per ogni lotto Ricostituire ogni fiala con 2 0 mL di acqua purificata mescolare e lasciare riposare per 15 20 minuti fino a quando il contenuto completamente disciolto mescolare accuratamente prima dell uso Questo kit standardizzato con VIP sintetico Il calibratore dimostra commutabilit con i campioni del paziente quando usati con reagenti e con la procedura operativa di questo test diagnostico in vitro come consigliato 4 4 Antisiero VIP reagente liofilizzato Il siero coniglio anti VIP diluito in un tampone BSA borato contenente timerosal Ricostituire la fiala con 12 5 mL di acqua purificata mescolare e lasciare riposare per 15 20 minuti fino a quando il contenuto completamente disciolto mescolare accuratamente prima dell uso 4 5 1251 VIP reagente liofilizzato Il VIP etichettato
67. eposer pendant 15 20 minutes jusqu dissolution compl te du contenu bien m langer avant utilisation 4 3 talons VIP r actif lyophilis Les talons VIP une concentration nominale allant de 25 400 pg ml sont pr dilu s dans du plasma sans VIP et du tampon BSA citrate Les valeurs exactes des concentrations sont attribu es selon chaque lot Reconstituer chaque tube avec 2 0 ml d eau purifi e m langer et laisser reposer entre 15 et 20 minutes jusqu dissolution compl te du contenu bien m langer avant utilisation Cette trousse est talonn e avec du VIP synth tique L talon d montre sa commutabilit avec les chantillons des patients lorsqu il est utilis avec les r actifs et selon le mode d emploi de ce dosage diagnostique in vitro comme recommand 4 4 Antis rum VIP r actif lyophilis Le s rum anti VIP de lapin est dilu dans un tampon BSA borate contenant du thim rosal Reconstituer le flacon avec 12 5 ml d eau purifi e m langer et laisser reposer pendant 15 20 minutes jusqu dissolution compl te du contenu bien m langer avant utilisation 4 5 21 VIP r actif lyophilis Le VIP est marqu l iode 125 et dilu dans un tampon BSA citrate EDTA contenant du thim rosal et d autres stabilisants Reconstituer le flacon avec 12 5 ml d eau purifi e m langer et laisser reposer pendant 15 20 minutes jusqu dissolution compl te du contenu bien m langer avant utilisation 14
68. ervative Reconstitute each vial with 2 0 mL of purified water mix and allow them to stand for 15 20 minutes until the contents are completely dissolved 5 WARNINGS AND PRECAUTIONS FOR IN VITRO DIAGNOSTIC USE ONLY Not for internal or external use in humans or animals REAGENTS CONTAINING HUMAN SOURCE MATERIAL Treat as potentially infectious Each serum plasma donor unit used in the preparation of this product has been tested by a U S FDA approved method and found non reactive for the presence of HBsAg antibody to HCV and antibody to HIV 1 2 While these methods are highly accurate they do not guarantee that all infected units will be detected This product may also contain other human source material for which there is no approved test Because no known test method can offer complete assurance that hepatitis B virus HBV hepatitis C virus HCV Human Immunodeficiency Virus HIV or other infectious agents are absent all products containing human source material should be handled in accordance with good laboratory practices using appropriate precautions as described in the U S Centers for Disease Control and Prevention National Institutes of Health Manual Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories 4 ed May 1999 or current edition REAGENTS CONTAINING SODIUM AZIDE CAUTION Some reagents in this kit contain sodium azide Sodium azide may react with lead or copper plumbing to form highly explosive metal azides
69. etr gt sie 1 0 pg R hrchen 5 pg ml 15 4 Analytische Spezifit t Der Vergleich der Kreuzreaktivit t des VIP Antik rpers wurde mit den folgenden Peptiden durchgef hrt Peptide Kreuzreaktivit t Somatostatin lt 0 1 pMotilin lt 0 1 pGastrisches inhibitorisches Polypeptid GIP lt 0 1 Glukagon lt 0 1 pGastrin freisetzendes Peptid GRP lt 0 1 Gastrin 7 lt 0 1 Gastrin lt 0 1 pSekretin lt 0 1 hPankreatisches Polypeptid PPP lt 0 1 hProinsulin lt 0 1 pInsulin lt 0 1 Cholecystokinin CCK8 lt 0 1 Substanz P lt 0 1 Neurotensin lt 0 1 Methionin Enkephalin lt 0 1 Leucin Enkephalin lt 0 1 Bombesin lt 0 1 LITERATURANGABEN FINDEN SIE AUF DER LETZTEN SEITE 36 TESTSCHEMA 1 VORSICHT Den Test auf Crash Eis ansetzen VIP ist in bei Raumtemperatur aufbewahrtem Plasma stabil daher ist diese VorsichtsmaBnahme erforderlich um g ltige Ergebnisse zu erhalten 2 Lyophilisierte Reagenzien rekonstituieren und gefrorene Proben vollst ndig auftauen lassen Die Reagenzien d rfen nicht auf mehr als 25 C erw rmt werden R hrchen in doppelter Anordnung kennzeichnen 3 Reagenzien wie folgt dispensieren Totala NSB Kal Kontrollen und R hrchen Reagenzien ktivit t 0 5 unbekannte Proben VIP Citratpuffer S 100 pl 200 pl S Kalibratoren 0 5 200 ul 200 pl gt Kontrollen 3 200 ul Unbekannte Proben E 200 ul Antiserum 100 ul 100 ul Die R hrchen mit Parafilm abdecken und vorsi
70. hnlichkeiten zwischen dem Aminos ure Endbereich von VIP und den Aminos ure Endbereichen von Sekretin Glukagon und dem gastrischen inhibitorischen Polypeptid GIP Der carboxyterminale Bereich d h die Reste 15 28 ist jedoch v llig unterschiedlich VIP ist im gesamten Gastrointestinaltrakt sehr verbreitet f r den Bloom und Polak herausgefunden haben dass die Gewebekonzentrationen von VIP h her sind als bei anderen Darmpeptiden Zu den peripheren Auswirkungen von VIP im Darm z hlen ein erh hter alkalischer Sekretfluss aus dem Pankreas die Hemmung der Magens ureproduktion die Stimulation der Insulinfreisetzung Hyperglykamie infolge von Glykogenolyse die Stimulation des D nndarmsekretflusses sowie ein erh hter Gehalt von zyklischem Adenosinmonophosphat CAMP im Darm 89 Au erdem wird VIP in hoher Konzentration im gesamten zentralen Nervensystem gefunden wo es eine starke vasolidatorische und hypotone Wirkung auf das kardiovaskul re System hat sowie im respiratorischen System wo es die Bronchodilatation beeinflusst und die Beatmung verbessert VIP befindet sich sowohl in Neuronen als auch in endokrinen Zellen jedoch berwiegend in Ersteren und scheint durch neuronale Stimulation freigesetzt zu werden 14 Die VIP Messung dient zur Erforschung bestimmter Arten von Tumoren der Langerhansschen Inseln der Bauchspeicheldr se die berm ig hohe Mengen des Peptids sekretieren Dieser Zustand wurde als Verner Morr
71. icamente da personale medico veterinari abilitati alla pratica di medicina veterinaria 40 laboratori clinici o ospedali e unicamente per test in vitro clinici o di laboratorio che non prevedano la somministrazione interna o esterna del materiale o di radiazioni da esso derivanti su persone o animali L acquisto il possesso la conservazione I uso e il trasferimento sono soggetti alle norme e alla licenza generale della Nuclear Regulatory Commission statunitense dello stato con cui la Commissione ha stipulato un accordo per l esercizio dell autorit normativa 1 La conservazione del materiale radioattivo deve essere limitata ad un area specificatamente designata 2 L accesso ai materiali radioattivi deve essere limitato esclusivamente al personale autorizzato 3 Non usare la bocca per versare con la pipetta materiale radioattivo Non mangiare o bere nelle aree di lavoro designate per materiale radioattivo 5 Le zone dove possono verificarsi perdite devono essere pulite quindi lavate con detergente alcalino o soluzione per la decontaminazione radiologica Tutti gli oggetti in vetro usati devono essere accuratamente risciacquati con acqua prima di lavarli con altri oggetti in vetro del laboratorio Per i professionisti o gli istituti che utilizzano radioisotopi con una licenza specifica L acquisto l uso il trasferimento e lo smaltimento di materiali radioattivi sono soggetti alle norme e alle condizioni della licenza specifica A
72. ilatatori e ipotensivi sul sistema cardiovascolare e nell apparato respiratorio dove condiziona la broncodilatazione e aumenta la ventilazione Il VIP si trova sia nei neuroni sia nelle cellule endocrine sebbene sia predominante nei neuroni e sembra essere rilasciato dalla stimolazione neuronale 4 La misurazione di VIP serve per individuare certi tipi di tumori degli isolotti pancreatici che secernono quantit eccessive del peptide Questa condizione stata definita come sindrome di Verner Morrison 5ed caratterizzata da diarrea acquosa refrattaria ipocaliemia ed acloridria sindrome di WDHA soggetti affetti da questa sindrome presentano livelli molto elevati di VIP nel plasma spesso migliaia di volte la concentrazione normale Un altra forma di diarrea che si manifesta con sintomi molto simili a quelli della sindrome di Verner Morrison il risultato di iperplasia degli isolotti A differenza della sindrome di Verner Morrison tuttavia questa condizione caratterizzata da livelli normali di VIP questi casi sono stati definiti da Bloom e Polak come pseudo sindrome di Verner Morrison Tumori diversi da quelli dell isolotto che producono livelli elevati di VIP comprendono neuroblastoma del ganglio carcinoma broncogenico feocromocitoma carcinoma tiroideo midollare ed istiocitoma retroperitoneale 1521 23 38 3 PRINCIPIO DELL ANALISI Il VIP viene misurato mediante analisi radioimmunologica che utilizza l aggiunta rit
73. ilizzati e lasciar scongelare completamente eventuali reagenti congelati Evitare che i reagenti raggiungano temperature superiori a 25 C Mescolare delicatamente tutti i reagenti prima dell uso Preparare ed etichettare due serie di 12 provette monouso da 75 mm in base allo Schema di analisi sul retro della copertina Aggiungere i reagenti come indicato di seguito a Provette per il conteggio totale Lasciare da parte fino al punto 5 b Provette per legame non specifico NSB 200 uL di Calibratore 0 100 uL di tampone citrato VIP c Calibratore 0 200 uL di Calibratore 0 100 uL di antisiero VIP d Calibratori VIP A E 200 pL di calibratore VIP 100 uL di antisiero VIP e Controlli e campioni non noti 200 uL di plasma 100 uL di antisiero VIP Agitare lentamente le provette nel Vortex senza formare schiuma e lasciare in incubazione per 24 ore 2 ore a 2 8 C Aggiungere 100 uL di 1251 VIP in tutte le provette Agitare lentamente le provette nel Vortex senza formare schiuma e lasciare in incubazione per 24 ore 2 ore a 2 8 C Aggiungere 1 mL di soluzione salina all 0 85 in tutte le provette eccetto le provette per il conteggio totale Agitare energicamente il complesso GAR PPT aggiungere 500 uL in tutte le provette eccetto le provette per il conteggio totale Agitare lentamente le provette nel Vortex senza formare schiuma e lasciare in incubazione per 2 ore 15 minuti a 2 8 C Centrifugare le provette a 1600 x g per 20
74. in lt 0 1 pSecretin lt 0 1 hPancreatic Polypeptide PPP lt 0 1 hProinsulin lt 0 1 pInsulin lt 0 1 Cholecystokinin CCK8 lt 0 1 Substance P lt 0 1 Neurotensin lt 0 1 Methionine Enkephalin lt 0 1 Leucine Enkephalin lt 0 1 Bombesin lt 0 1 REFER TO LAST PAGE FOR REFERENCES 11 SCHEME OF THE ASSAY CAUTION Set up assay on crushed ice VIP is labile in plasma stored at room temperature therefore this precaution is necessary to obtain valid results 2 Reconstitute the lyophilized reagents and allow any frozen specimens to thaw completely Do not allow reagents to reach above 25 C Identify tubes in duplicate 3 Dispense reagents according to the following scheme Total NSB Cal Controls and Tubes Reagents Counts 0 5 unknown samples VIP Citrate Buffer 100 ul 200 uL Calibrators 0 5 200 uL 200 uL E Controls 200 uL Unknown Samples E E 200 uL Antiserumr 100 uL 100 uL 4 Cover the tubes with parafilm and vortex gently 5 Incubate for 24 hours 2 hours at 2 8 C 6 Dispense 100 uL of the tracer into all wells 7 Cover and vortex gently 8 Incubate for 24 hours 2 hours at 2 8 C 9 Dispense 1mL of 0 85 saline into all wells except the total count tubes 10 Dispense 500 uL of the GAR PPT into all wells except the total count tubes 11 Cover the tubes and vortex gently 12 Incubate for 2 hours 15 minutes at 2 8 C 13 Centrifuge using 760 x g for 20 mi
75. ison Syndrom bezeichnet und ist durch hartn ckige w ssrige Diarrh Hypokali mie und Achlorhydrie WDHA Syndrom charakterisiert Personen mit diesem Syndrom weisen stark erh hte VIP Konzentrationen im Plasma auf die h ufig gegen ber der normalen Konzentration um einige tausend Mal erh ht sind Eine andere Form der Diarrh bei der sich sehr hnliche Symptome wie beim Verner Morrison Syndrom manifestieren ist die Folge von Inselhyperplasie Im Gegensatz zum Verner Morrison Syndrom ist dieser Zustand jedoch durch normale VIP Konzentrationen charakterisiert diese F lle wurden von Bloom und Polak als Pseudo Verner Morrison Syndrom bezeichnet Zu anderen Tumoren als Inseltumoren die erh hte VIP Konzentrationen produzieren z hlen Ganglioneuroblastome bronchiogene Karzinome Ph ochromozytome medull re Schilddr senkarzinome und retroperitoneale Histiozytome 1521 23 25 3 TESTPRINZIP VIP wird durch einen Radioimmunoassay gemessen bei dem durch verz gerte Tracer Zugabe die Empfindlichkeit erh ht wird Probe und Kaninchen anti VIP werden hinzugegeben gefolgt von einer 24 st ndigen Inkubation bei 2 8 C Anschlie end wird 125 VIP hinzugegeben gefolgt von einer zweiten 24 st ndigen Inkubation bei 2 8 C Ein zuvor pr zipitierter Tr ger ein zweiter Antik rper und Polyethylenglykol werden in einem einzigen Schritt hinzugegeben Der Test kann nach mindestens 2 Stunden Inkubation bei 2 8 C zentrifugiert
76. jout s en une seule tape Le dosage peut tre centrifug et d cant apr s deux heures d incubation minimum entre 2 et 8 C 4 R ACTIFS FOURNIS DANS LA TROUSSE Tampon citrate VIP 1 tube 2 ml Etalon 0 VIP 1 tube 5 ml Etalons VIP 0 5 5 tubes 2 ml Antis rum VIP 1 tube 12 5 ml 125 VIP 1 tube 12 5 ml Complexe pr cipitant GAR PPT 1 tube 35 ml Contr les VIP niveaux 1 et 2 2 tubes 2 ml Nombre de dosages CONSERVATION D s r ception et avant reconstitution tous les r actifs doivent tre stock s entre 2 et 8 C Apr s reconstitution stocker tous les r actifs une temp rature inf rieure ou gale 15 C jusqu la date de p remption sur l tiquette Les r actifs ne doivent pas tre utilis s au del de la date de p remption Pendant la reconstitution du contenu des tubes agiter d licatement pour viter la formation de mousse Les r actifs de lots diff rents ne doivent pas tre m lang s 4 1 Tampon citrate VIP r actif lyophilis Le tampon BSA citrate contient du thim rosal comme conservateur Reconstituer le flacon avec 2 ml d eau purifi e m langer et laisser reposer pendant 15 20 minutes jusqu dissolution compl te du contenu bien m langer avant utilisation 4 2 talonOVIP r actif lyophilis Du plasma citrat est dilu dans le tampon BSA citrate contenant du thim rosal et d autres conservateurs Reconstituer le flacon avec 5 ml d eau purifi e m langer et laisser r
77. lastoma Archieves of Disease in Childhood 55 929 1980 Sagor G R M G Bryant M A Ghatei R M Kirk and S R Bloom Release of Vasoactive Intestinal Peptide in the Dumping Syndrome British Medical Journal 282 507 1981 SYMBOLS USED WITH DEVICES English Fran ais Deutsch Italiano Conformit aux ae European CE Konformitats sa CE Conformity normes kennzeichnung Conformit europea europ ennes de Date limite Mindesthaltbar F 2 Expiration Date d utilisation keitsdatum Data di scadenza ud Manufacturer Fabricant Hersteller Fabbricante Br qu Gebrauchsanwei Consultare le ENTRER sung beachten istruzioni per l uso for Use d utilisation Maximum Temp rature x Temperatura y temperature maximale H chsttemperatur massima IVD In vitro diagnostic Diagnostic in vitro Invitro Diagnostica in vitro Z Diagnostikum E Lot No No de lot Chargen Nr Lotto n Antiserum Antis rum Antiserum Antisiero Precipitating FERITO ty bi Reagente reagent R actif pr cipitant F llungsreagenz precipitante Tracer Traceur Tracer Tracciatore antigen labelled antig ne marqu 125 markiertes antigene etichettato with 251 liode 5 Antigen con 21 Buffer Tampon Puffer Tampone Calibrator talon Kalibrator Calibratore Control serum S rum de contr le Kontrollserum Siero di controllo Radioactive Radioactif Radioaktiv Radioattivo A Gesundheits g Harmful Nocif sch dlich Nocivo
78. lyophilisiertes Reagenz VIP Kalibratoren mit Nominalkonzentrationen zwischen 25 und 400 pg ml werden in VIP freiem Plasma und BSA Citratpuffer vorverd nnt Exakte Konzentrationswerte sind auf jeder Charge angegeben Das Fl schchen mit 2 0 ml destilliertem Wasser rekonstituieren mischen und 15 20 Minuten bis zur vollst ndigen L sung des Inhalts stehen lassen vor dem Gebrauch gr ndlich mischen Das Kit wird mit synthetischem VIP standardisiert Die Kalibratoren des Kits sind mit Patientenproben austauschbar wenn sie mit Reagenzien verwendet werden und dieser diagnostische in vitro Test wie empfohlen durchgef hrt wird 4 4 VIP Antiserum lyophilisiertes Reagenz Kaninchen anti VIP Serum wird in thimerosalhaltigem BSA Boratpuffer verd nnt Das Fl schchen mit 12 5 ml destilliertem Wasser rekonstituieren mischen und 15 20 Minuten bis zur vollst ndigen L sung des Inhalts stehen lassen vor dem Gebrauch gr ndlich mischen 4 5 12 VIP lyophilisiertes Reagenz VIP wird mit Jod 125 markiert und in BSA Citrat EDTA Puffer verd nnt der Thimerosal und andere Stabilisatoren enth lt Das Fl schchen mit 12 5 ml destilliertem Wasser rekonstituieren mischen und 15 20 Minuten bis zur vollst ndigen L sung des Inhalts stehen lassen vor dem Gebrauch gr ndlich mischen 26 4 6 Pr zipitierender Komplex GAR PPT lyophilisiertes Reagenz Normales Kaninchenserum vorpr zipitiert mit Ziege anti Kaninchenserum und Polyethylenglykol PEG wird in ei
79. m dicos ou institui es que recebem radiois topos ao abrigo de uma licen a espec fica A recep o uso transfer ncia e elimina o de materiais radioactivos est o sujeitos aos regulamentos e condi es da sua licen a espec fica ADVERT NCIA Este produto cont m um elemento qu mico que provoca cancro segundo o Estado da Calif rnia ATEN O O s mbolo de radioactividade impresso no folheto informativo da embalagem pode ser ligeiramente diferente do s mbolo impresso no r tulo da caixa e no r tulo do frasco do tra ador O r tulo da caixa e do frasco do tra ador indica a quantidade real de radioactividade na data de calibragem enquanto o folheto informativo da embalagem indica a radioactividade te rica do kit INDICA ES DE POSS VEL DETERIORA O DOS REAGENTES DO KIT 6 1 A presen a de part culas anormais em qualquer dos reagentes 6 2 Um desvio na inclina o ou posi o da curva de calibragem em rela o que normalmente obtida 6 3 Uma diminui o na liga o m xima 6 4 Uma liga o n o espec fica alta COLHEITA E PREPARA O DAS AMOSTRAS S o necess rios duzentos microlitros em duplicado de plasma EDTA com Aprotinina para o ensaio VIP As amostras de soro podem ser directamente analisadas sem que seja necess ria qualquer extrac o A utiliza o de plasma com EDTA e Aprotinina necess ria na recolha inicial das amostras para o ensaio de VIP Recolha uma amostra de sangue num tub
80. minuti a 20 25 C Far decantare immediatamente i liquidi superficiali da tutte le provette eccetto le provette per il conteggio totale capovolgendole per un periodo minimo di due minuti Asciugare le provette con carta assorbente per eliminare eventuali gocce di liquidi superficiali prima di riportare le provette in posizione verticale In un contatore ad emissione di scintille gamma contare il precipitato di ogni provetta e le provette per il conteggio totale per 60 secondi o pi vedere Limiti della procedura g 1118 x 10 raggio in cm rpm 42 10 COMMENTI ALLA PROCEDURA 10 1 Analizzare tutti i campioni in duplice serie per garantire l affidabilit dei valori ottenuti 10 2 Aggiungere ogni aliquota di reagente al terzo inferiore della provetta di analisi al fine di garantire una miscela completa di reagenti 10 3 Alcune provette monouso determinano legami non specifici elevati 10 4 Se si decide di aspirare il liquido superficiale dal precipitato fare attenzione a non smuovere quest ultimo 10 5 Se un campione d una lettura maggiore rispetto al calibratore superiore il campione dovr essere diluito con il calibratore 0 e analizzato nuovamente Correggere il risultato con il fattore di diluizione idoneo 10 6 Durante la centrifugazione controllare la temperatura in modo che non ecceda i 25 C 10 7 Per un monitoraggio completo della costanza di performance di un analisi RIA si possono controllare altri fattori
81. n CPM des Kalibrators oder der unbekannten Probe CPM der NSB B Bo x 100 CPM des Nullkalibrators CPM der NSB 12 4Auf halblogarithmischem Millimeterpapier 2 Zyklen oder doppeltlog arithmischem Millimeterpapier prozentuale Bindungen B Bo f r die VIP Kalibratoren vertikale Achse gegen die Konzentration horizontale Achse auftragen 12 5 Durch die Punkte eine Ausgleichsgerade legen 12 6 Die VIP Konzentrationen in den unbekannten Proben aus der Auftragung interpolieren 12 7 Wenn eine unbekannte Probe verd nnt wurde muss der Wert mit dem entsprechenden Verd nnungsfaktor korrigiert werden 12 8 Die maximale Bindung wird berechnet indem die CPM des Nullkalibrators durch die in den Totalaktivit t R hrchen erhaltenen Gesamtz hlungen dividiert wird 31 TABELLE III DiaSorin VIP RIA Probendaten Prozent Doppelter Durchschn Korrigierter Gebunden Prozent Konz R hrchen I M I M I M B T B Bo pg ml Gesamtz hlung 10 928 10 930 10 931 NSB 808 932 8 5 1 055 Nullkalibrator 4 603 4 709 3 777 43 1 100 0 4 834 Kalibratoren pg ml A 19 4 034 4 046 3 114 82 5 4 058 B 30 3 542 3 558 2 626 69 5 3 573 C 54 2 768 2 767 1 835 48 8 2 766 D 140 1 948 1 988 1 056 28 0 2 028 E 290 1 297 1 352 420 11 1 1 408 Unbekannte Proben 1 2 051 2 060 1 128 29 9 126 2 070 2 3 210 3 209 2 277 60 3 40 3 207 Typische Probendaten und eine Kalibratorkurve sind in TABELLE Ill und in ABBILDUNG 1 dargestellt diese I
82. n o devem ser usados ap s o prazo de validade Ao reconstituir o conte do dos frascos agite delicadamente para evitar a forma o de espuma N o misture reagentes de lotes diferentes 4 1 Tamp o Citrato VIP reagente liofilizado O tamp o citrato BSA cont m timerosal como conservante Reconstitua o frasco com 2 mL de gua purificada agite e deixe assentar durante 15 20 minutos at que o conte do se dissolva completamente agite devidamente antes da utiliza o 4 2 Calibrador 0 VIP reagente liofilizado O plasma citratado dilu do em tamp o citrato BSA o qual cont m timerosal e outros estabilizadores Reconstitua o frasco com 5 mL de gua purificada agite e deixe assentar durante 15 20 minutos at que o conte do se dissolva completamente agite devidamente antes da utiliza o 4 3 Calibradores VIP reagente liofilizado Os calibradores VIP s o pr dilu dos em plasma sem VIP e em tamp o citrato BSA com concentra es nominais compreendidas entre 25 e 400 pg mL Os valores exactos das concentra es s o atribu dos consoante cada lote Reconstitua cada frasco com 2 0 mL de gua purificada agite e deixe assentar durante 15 20 minutos at que o conte do se dissolva completamente agite devidamente antes da utiliza o Este kit foi estandardizado com VIP Sint tico O calibrador demonstra permutabilidade com amostras do paciente quando usado com reagentes e um procedimento operacional deste teste de diagn stico in
83. n by Vasoactive Intestinal Peptide American Journal of Physiology 232 197 1977 Schwartz C J D V Kimberg H E Sheerin M Field and S l Said Vasoactive Intestinal Peptide Stimulation of Adenylate Cyclase and Active Electrolyte Secretion in Intestinal Mucosa Journal of Clinical Investigation 54 536 1974 Krejs G J J S Fordtran S R Bloom J Fahrenkrug and O B Schaffalitzky De Muckadell Effect of VIP Infusion on Water and lon Transport in the Human Jejunum Gastroenterology 78 722 1980 Said S l Vasoactive Intestinal Polypeptide VIP Current Status In Gastrointestinal Hormones Ed J C Thompson Texas University Press pp 591 597 1975 Bryant M G S R Bloom J M Polak R H Albuquerque Modlin and A G E Pearse Possible Dual Role for Vasoactive Intestinal Peptide as Gastrointestinal Hormone and Neurotransmitter Substance Lancet 1 991 1976 Domschke S W Domschke S R Bloom P Mitznegg S J Mitchell G Lux and U Strunz Vasoactive Intestinal Peptide in Man Pharmacokinetics Metabolic and Circulatory Effects Gut 19 1049 1978 Fahrenkrug J Vasoactive Intestinal Polypeptide Measurement Distribution and Putative Neurotransmitter Function Digestion 19 149 1979 Uddman R J Fahrenkrug L Malm J Alumets R Hakanson and F Sundler Neuronal VIP in Salivary Glands Distribution and Release Acta Physiol Scand 110 31 1980
84. ndardized with Synthetic VIP The calibrator demonstrates commutability with patient samples when used with reagents and operating procedure of this in vitro diagnostic test as recommended 4 4 VIP Antiserum lyophilized reagent Rabbit anti VIP serum is diluted in BSA borate buffer containing thimerosal Reconstitute the vial with 12 5 mL of purified water mix and allow it to stand for 15 20 minutes until the contents are completely dissolved mix thoroughly before using 4 5 1351 VIP lyophilized reagent VIP is labeled with iodine 125 and diluted in BSA citrate EDTA buffer containing thimerosal and other stabilizers Reconstitute the vial with 12 5 mL of purified water mix and allow it to stand for 15 20 minutes until the contents are completely dissolved mix thoroughly before using 4 6 Precipitating Complex GAR PPT lyophilized reagent Normal rabbit serum pre precipitated with goat anti rabbit serum and polyethylene glycol PEG is diluted in BSA borate buffer containing thimerosal and other preservatives Reconstitute each vial with 35 mL of purified water mix thoroughly until the suspension appears homogeneous and then allow it to stand for a minimum of 30 minutes at room temperature with occasional mixing 4 7 VIP Control level 1 and level 2 lyophilized reagent Defibrinated human plasma is spiked if necessary with the appropriate amount of VIP to obtain a concentration within a specified range Sodium azide is added as a pres
85. nem BSA Boratpuffer verd nnt der Thimerosal und andere Konservierungsmittel enth lt Jedes Fl schchen mit 35 ml destilliertem Wasser rekonstituieren gr ndlich mischen bis die Suspension ganz homogen ist und dann f r mindestens 30 Minuten bei Raumtemperatur stehen lassen und gelegentlich umr hren 4 7 VIP Kontrolle Stufe 1 und Stufe 2 Iyophilisiertes Reagenz Falls notwendig wird defibriniertes Humanplasma mit der entsprechenden VIP Menge versetzt um eine Konzentration innerhalb des angegebenen Bereichs zu erzielen Zugabe von Natriumazid als Konservierungsmittel Jedes Fl schchen mit 2 0 ml destilliertem Wasser verd nnen mischen und 15 20 Minuten bis zur vollst ndigen L sung des Inhalts stehen lassen 5 WARNHINWEISE UND VORSICHTSMASSNAHMEN NUR ZUR N VITRO DIAGNOSTIK Nicht f r internen oder externen Gebrauch bei Menschen oder Tieren REAGENZIEN MIT MATERIAL HUMANEN URSPRUNGS Dieses Produkt ist als potenziell infekti s zu behandeln Alle in der Herstellung dieses Produktes verwendeten Serum bzw Plasma spendeeinheiten wurden nach einer FDA genehmigten Methode getestet und f r nicht reaktiv auf Hepatitis B Oberfl chenantigen HBsAg Hepatitis C Antik rper HCV und Antik rper f r HIV 1 2 befunden Obwohl diese Methode uBerst genau ist bietet sie keine Gew hr daf r dass alle infizierten Einheiten identifiziert werden k nnen Dieses Produkt kann auch Material humanen Ursprungs enthalten f r welches es noch kein
86. nerallizenz der US Nuclear Regulatory Commission bzw des Staates mit dem diese Beh rde ein Abkommen zur Aus bung ihrer Uberwachungsfunktion abgeschlossen hat 1 Die Lagerung des radioaktiven Materials ist auf einen speziell daf r bestimmten Bereich zu beschr nken Der Zugang zu radioaktivem Material ist nur befugten Personen zu gestatten Radioaktives Material nicht mit dem Mund pipettieren Im vorgesehenen radioaktiven Arbeitsbereich nicht essen oder trinken Versch ttetes Material aufwischen und Bereich anschlie end mit alkalischem Reinigungsmittel oder radiologischer Dekontaminationsl sung waschen Alle benutzten Glasbeh lter gr ndlichst mit Wasser sp len bevor sie zusammen mit anderen Laborbeh ltern aus Glas ausgewaschen werden F r rzte oder Einrichtungen die im Rahmen einer Sondergenehmigung Radioisotope erhalten gilt Folgendes Entgegennahme Gebrauch Weitergabe und Entsorgung radioaktiven Materials unterliegen den Vorschriften und Bedingungen der jeweiligen Sondergenehmigung VORSICHT Dieses Produkt enth lt eine Chemikalie die nach Angaben des US Bundesstaates Kalifornien krebserregend ist WICHTIGER HINWEIS Die auf der Packungsbeilage angegebene Radioaktivit t kann von der auf dem Etikett des Kartons und des Tracer Fl schchens angegebenen etwas abweichen Sowohl das Etikett des Kartons als auch das Etikett des Tracer Fl schchens geben den tats chlichen Wert der Radioaktivit t am Kalibrationsdatum an w
87. nformationen dienen nur als Referenz und d rfen nicht zur Berechnung von Werten verwendet werden VIP BEISPIELKALIBRATORKURVE ABBILDUNG 1 Das Qualit tskontrolllabor von DiaSorin verwendet eine gegl ttete Spline Kurvenanpassung 32 13 GRENZEN DES VERFAHRENS 13 1 Wenn die urspr ngliche Konzentration der unbekannten Probe gr Ber ist als der gr te Kalibratorwert ist diese Probe nur mit Nullkalibrator zu verd nnen 13 2 Proben d rfen nicht wiederholt eingefroren und aufgetaut werden 13 3 Die Z hlzeiten sollten ausreichend lang sein um statistische Fehler zu vermeiden 2 000 CPM ergeben z B 5 Fehler 10 000 CPM ergeben 1 Fehler 14 ERWARTETE WERTE KLINISCHE INTERPRETATION VON WERTEN Zur Plasma VIP Bestimmung wurden 45 normale n chterne Personen Durchschnittsalter 28 Jahre getestet Bei den 21 m nnlichen Personen lag der Wert bei 42 8 11 9 pg ml VIP Mittelwert Standardabweichung und bei den 24 weiblichen Personen bei 42 6 7 2 pg ml Da zwischen den Werten f r m nnliche und weibliche Personen kein bedeutender Unterschied besteht betr gt der Gesamtdurchschnitt 42 7 9 5 pg ml bei n chternen Erwachsenen Ein vorl ufiger Bereich mit zwei Standardabweichungen w re 23 63 pg ml Dieser Normalbereich ist m glicherweise gr er wenn Personen aus einer Krankenhauspopulation mit Magen Darm Erkrankungen als Kontrollgruppe dienen Bei anderen Tests wird der Normalbereich mit bis zu 200 pg ml angegeben
88. ntrollo usati nel laboratorio Ohio State sono stati misurati con il kit DiaSorin Il loro controllo inferiore range dell Ohio State lt 50 100 pg mL presentava un valore medio di 53 pg mL 45 mentre il controllo superiore range dell Ohio State 450 1014 pg mL stato notato essere 1077 pg mL in 3 analisi separate con il kit DiaSorin Diversi campioni dell Ohio State prelevati da individui normali presentavano valori variabili fra 65 e 176 pg mL con l analisi DiaSorin L ampio range di campioni patologici nella sindrome WDHA tipico nella letteratura medica e molto simile ai livelli di gastrina nel gastrinoma Questi campioni sono stati conservati per un tempo non noto nel laboratorio del Dott O Dorisio Il numero di congelamento e scongelamento fra le loro analisi e le nostre analisi non noto TABELLA IV Risultati di campioni divisi a doppio cieco con i valori del Dr Thomas O Dorisio della Ohio State University picogrammi mL Caso VIP DiaSorin VIP Ohio State Commenti I Neuroblastoma del ganglio 1 1888 1700 WDHA sintomatico 1A 248 135 asintomatico 1B 464 430 WDHA sintomatico 2 3776 gt 2000 2A 4672 1700 2B 352 225 post resezione con diarrea ll VIPoma 1 368 960 1A 184 290 post resezione 2 1152 1200 metastatico 3 304 290 metastatico dopo resezione 4 208 230 post resezione III Diarrea acquosa senza diagnosi documentata 1 11250 gt 14500 2 368 185 3 928 880 esplorazione neg IV Diarrea acquosa con altri tumori 1
89. nutes 14 Decantthe supernatants 15 Count each tube in a gamma counter for 60 seconds or longer g 1118 x 10 radius in cm rpm 12 DOSAGE RADIO IMMUNOLOGIQUE DU PEPTIDE INTESTINAL VASO ACTIF VIP 1 INDICATION POUR USAGE DIAGNOSTIQUE N VITRO Cette trousse permet la d termination quantitative du peptide intestinal vaso actif VIP dans le plasma par dosage radio immunologique RIA 2 R SUM ET COMMENTAIRE Le VIP est compos de 28 amino acides et est initialement extrait de l intestin gr le du cochon Sa s quence des amino acides par comparaison plusieurs peptides apparent s est la suivante VIP His Ser Asp Ala Val Phe Thr Asp Asn Tyr Tyr Arg Leu Arg Secretine His Ser Asp Gly Thr Phe Thr Ser Glu Leu Ser Arg Leu Arg Glucagon His Ser Gin Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu GIP Tyr Ala Gin Gly Thr Phe lle Ser Asp Tyr Ser Lys Ala Met 15 16 17 18 19 20 2 22 23 24 25 26 27 28 VIP Lys Gin Met Ala Val Lys Lys Tyr Leu Asn Ser lle Leu Asn NH2 S cr tine Asp Ser Ala Arg Leu Gin Asp Leu Leu Gin Gly Leu Val NH2 Glucagon Asp Ser Arg Arg Ala Gin Asp Phe Val Gin Trp Leu Met Asn Thr GIP Asp Lys lle Arg Gin Gin Asp Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala etc Il existe des similarit s entre le groupement amino
90. o de vidro vazio de 5 mL ou 10 mL utilizando EDTA como anticoagulante A aprotinina deve ser imediatamente adicionada ao tubo de recolha para prevenir a degrada o do VIP na amostra numa concentra o de 2 500 KIU 5 mL de sangue completo Centrifugue imediatamente as amostras durante 15 minutos a 760 x g para obter plasma sem hem lise Separe o soro das c lulas e coloque o em tubos de conserva o Se n o utilizar a amostra imediatamente conserve a a 15 C ou a uma temperatura inferior N o congele e descongele repetidamente as amostras Qualquer pl stico vidro ou outro material que entrar em contacto com a amostra deve estar completamente descontaminado CRON g 1118x10 raio em cm rpm 53 8 EQUIPAMENTOS E MATERIAIS NECESS RIOS MAS N O FORNECIDOS 8 1 8 2 8 3 8 4 8 5 8 6 8 7 Tubos de vidro descart veis de borosilicato 12 x 75 mm Centrifugadora com controlo da temperatura para tubos de 12 x 75 mm Contador de cintila o gama capaz de contar iodo 125 Misturador tipo Vortex Dispositivos de pipetagem recomendados a Micropipetadores calibrados para a administra o de 100 uL e 200 uL b Distribuidores de repeti o calibrados para a administra o de 100 uL 500 uLe 1 mL Solu o salina 0 85 gua purificada 9 PROCEDIMENTO DO ENSAIO CUIDADO PREPARE O ENSAIO SOBRE GELO PICADO O VIP L BIL NO PLASMA ARMAZENADO TEMPERATURA AMBIENTE PELO QUE NECESS RIO ADOPTAR ESTA P
91. on d ingestion et de contact avec la peau R32 Un contact avec les acides d gage un gaz tr s toxique S28 Apr s un contact avec la peau laver imm diatement grande eau R ACTIFS CONTENANT DU THIM ROSAL Certains r actifs de cette trousse contiennent du thim rosal contenant un composant de mercure La mise au rebut du mercure l mentaire du mercure inorganique des oxydes de mercure et des composants de mercure doit tre effectu e en respectant scrupuleusement les r glementations locales nationales et f d rales AVERTISSEMENT Ce produit contient un produit chimique connu dans l Etat de Californie comme provoquant des malformations la naissance et des troubles de la reproduction 15 R ACTIFS CONTENANT DE L IODE 125 Cette trousse contient un produit radioactif qui ne d passe pas 2 uCi 74 kBq d iode 125 Les pr cautions appropri es et les bonnes pratiques de laboratoire doivent tre utilis es pour la conservation la manipulation et la mise au rebut de ce produit Pour les praticiens ou les tablissements recevant des radio isotopes dans le cadre d une licence g n rale Ce produit radioactif peut tre recu r ceptionn d tenu et utilis uniquement par des m decins des laboratoires cliniques des h pitaux des v t rinaires et des centres de recherche dans le cadre de la pratique de m decine v t rinaire de laboratoires cliniques ou des h pitaux et uniquement pour des analyses cliniques ou de
92. ono essere pi adatte per un particolare metodo rispetto ad un altro Il metodo di calcolo del Laboratorio di controllo qualit di DiaSorin di B Bo rispetto alla concentrazione di log 12 1 Calcolare il CPM medio per ogni calibratore controllo e campione non noto 12 2 Sottrarre il CPM medio delle provette NSB da tutti i conteggi 12 3 Dividere il CPM corretto di ogni calibratore controllo o campione per il CPM corretto del calibratore 0 CPM del calibratore o campione non noto CPM di NSB B Bo x 100 CPM del calibratore 0 CPM di NSB 12 4Utilizzando carta millimetrata per modello log logit o semi logaritmica a due cicli tracciare la percentuale di B Bo per i calibratori VIP asse verticale rispetto alla concentrazione asse orizzontale 12 5 Tracciare una linea di miglior interpolazione fra i punti 43 12 6 Interpolare i livelli di VIP nei campioni non noti 12 7 Se un campione non noto stato diluito correggere con il fattore di diluizione idoneo 12 8 Calcolare il legame massimo dividendo il CPM del calibratore 0 per la media dei conteggi totali ottenuta nelle provette dei conteggi totali Tabella III Dati campione DiaSorin VIP RIA Percentuale CPM CPM CPM Legato Percent Conc Provetta in duplicato medio corretto B T B Bo pg mL Conteggio totale 10 928 10 930 10 931 NSB 808 932 8 5 1 055 Calibratore 0 4 603 4 709 3 777 43 1 100 0 4 834 Calibratori pg mL A 19 4 034 4 046 3 114
93. opulation without gastro intestinal disease are used as a control group Others report the normal range to go up to 200 pg mL The normal range in the assay at Ohio State University is undetectable to 170 pg mL with an average of 62 44 pg mL Since the Ohio State assay report values below 50 as undetectable their assay is not quite as sensitive as the DiaSorin procedure A series of doubled blinded clinical specimens including several VIPomas and gan glioneuroblastomas were obtained from Dr Thomas O Dorisio at Ohio State University Later he revealed his results on these same samples these are shown in TABLE IV The data demonstrate many extremely elevated VIP values which are characteristic of VIP producing tumors and show that the DiaSorin VIP kit does indeed measure elevated values in humans and compares well with an established research laboratory The regression equation for the first 22 specimens excluding the 4 normals with undetectable levels reported by Ohio State is y 0 78x 32 where y is the DiaSorin value and x is the Ohio State value The correlation coefficient is 0 94 The control samples used in the Ohio State laboratory were also measured with the DiaSorin kit Their low control Ohio State range lt 50 100 pg mL had a mean value of 53 pg mL and the high control Ohio State range 450 1014 pg mL was found to be 1077 pg mL in 3 separate analyses with the DiaSorin kit Several of these Ohio State samples from normal person
94. otto stata testata con una metodica approvata dalla FDA statunitense e trovata non reattiva per la presenza di HBsAg anticorpi a HCV e anticorpi ad HIV 1 2 Anche se questi metodi sono estremamente accurati non garantita la localizzazione di tutte le unit infette Questo prodotto pu inoltre contenere altro materiale di provenienza umana per il quale non esiste un test approvato Poich nessuna metodologia di test approvata pu offrire garanzia completa sull assenza del virus dell epatite B HBV dell epatite C HCV del virus di immunodeficienza umana HIV o di altri agenti infettivi tutto il materiale di provenienza umana deve essere trattato in conformit con le buone pratiche di laboratorio adottando le precauzioni appropriate come descritto nei manuali dei Centers for Disease Control and Prevention National Institutes of Health Manual Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories quarta edizione Maggio 1999 o edizione corrente REAGENTI CONTENENTI SODIO AZIDE ATTENZIONE Alcuni reagenti di questo kit contengono sodio azide La sodio azide pu reagire con componenti in piombo o rame e formare quindi azidi metalliche altamente esplosive AI momento dello smaltimento lavare con abbondante acqua al fine di evitare la formazione di azide Per ulteriori informazioni consultare Decontamination of Laboratory Sink Drains to Remove Azide Salts nel manuale Guide Safety Management No CDC 22 pubblicato dai Centri per il
95. peut tre l g rement diff rente de celle qui est imprim e sur l tiquette de la bo te et sur l tiquette du flacon du traceur Les tiquettes de la bo te et du flacon du traceur indiquent la dose r elle de radioactivit la date de calibrage alors que la notice d utilisation indique la radioactivit th orique de la trousse 6 INDICATIONS D UNE DETERIORATION POSSIBLE DES R ACTIFS DE LA TROUSSE 6 1 Pr sence de particules anormales dans l un quelconque des r actifs 6 2 cart de pente ou de position de la courbe d talonnage par rapport la normale obtenue 6 3 Diminution de la liaison maximale 6 4 Haute liaison non sp cifique 7 PR L VEMENT ET PR PARATION DES CHANTILLONS Deux cent microlitres de plasma sur EDTA contenant de l aprotinine en doublet sont n cessaires pour le dosage du VIP Les chantillons de plasma peuvent tre dos s directement sans extraction pr alable L utilisation de plasma contenant de l EDTA et de l aprotinine est n cessaire lors du pr l vement initial du VIP Pr lever le sang dans un tube en verre sous vide de 5 ml ou 10 ml en utilisant l EDTA comme anticoagulant Ajouter imm diatement de l aprotinine une concentration de 2 500 KIU 5 ml de sang entier dans le tube de pr l vement pour emp cher la d gradation du VIP dans l chantillon Centrifuger imm diatement les chantillons pendant 15 minutes 760 x g pour obtenir du plasma non h molys S parer le s rum des
96. s had values ranging from 65 176 pg mL on the DiaSorin assay The broad range of pathological samples in WDHA syndrome is typical of the literature and quite similar to the situation of gastrin levels in gastrinoma These specimens had been stored for an unknown amount of time in Dr O Dorisio s laboratory The number of freeze and thaws between their analysis and our analysis is unknown TABLE IV Results of Double Blind Split Samples With Dr Thomas O Dorisio at Ohio State University values picograms mL Case VIP DiaSorin VIP Ohio State Comments I Ganglioneuroblastoma 1 1888 1700 symptomatic WDHA 1A 248 135 asymptomatic 1B 464 430 symptomatic WDHA 2 3776 gt 2000 2A 4672 1700 2B 352 225 post resection with diarrhea ll VIPoma 1 368 960 1A 184 290 post resection 2 1152 1200 metastatic 3 304 290 metastatic after resection 4 208 230 post resection III Watery diarrhea with no documented diagnosis 1 11250 gt 14500 2 368 185 3 928 880 neg exploration IV Watery diarrhea with other tumors 1 192 390 hypernephroma 2 2360 1500 smallcell carcinoma 3 208 330 hypernephroma with vasodilation 4 272 360 pheochromocytoma V Normal patients 1 64 lt 50 2 96 lt 50 3 104 lt 50 4 96 lt 50 5 176 110 VI Unknown 1 720 1150 2 512 1200 3 320 170 DiaSorin assay was done after several freeze and thaws Regression analysis excluding lt 50 pairs y 0 79x 335 r 0 94 y DiaSorin VIP x Ohio State VI
97. s precau es apropriadas e adoptadas boas pr ticas laboratoriais no armazenamento manuseamento e elimina o deste material 52 Para m dicos ou institui es que recebem radiois topos ao abrigo de uma licen a geral Este material radioactivo pode ser recebido adquirido possu do e usado apenas por m dicos veterin rios na pr tica da medicina veterin ria laborat rios cl nicos e hospitais e apenas para testes laboratoriais ou testes cl nicos in vitro que n o envolvam uma administra o interna ou externa do material ou da radia o resultante em seres humanos ou animais A sua recep o aquisi o posse uso e transfer ncia est o sujeitos aos regulamentos e licen a geral da Comiss o Reguladora Nuclear dos Estados Unidos ou do estado com o qual a Comiss o tenha celebrado um acordo para o exerc cio da autoridade reguladora 1 O armazenamento de qualquer material radioactivo deve limitar se a uma rea especificamente designada O acesso a materiais radioactivos deve limitar se apenas a pessoal autorizado N o pipete material radioactivo com a boca N o coma nem beba nas reas designadas para trabalho radioactivo As reas onde possam ocorrer derrames devem ser limpas e lavadas com um detergente alcalino ou uma solu o de descontamina o radiol gica Qualquer material de vidro usado deve ser completamente enxaguado com gua antes da lavagem com qualquer outro material de vidro do laborat rio Para
98. t den Proben haben m ssen frei von jeglichen Verunreinigungen sein ZUS TZLICH BEN TIGTE GER TE UND MATERIALIEN 8 1 Einweg Borosilikatglasr hrchen 12 x 75 mm 8 2 Temperaturgesteuerte Zentrifuge f r 12 x 75 mm R hrchen 8 3 Gammaszintillationsz hler zur Z hlung von Jod 125 8 4 Vortexer 8 5 Empfohlene Pipettierger te a Auf die Abgabe von 100 pl und 200 ul kalibrierte Mikropipetten b Auf die Abgabe von 100 ul 500 ul und 1 ml kalibrierte Multipipetten 8 6 0 85 Kochsalzl sung 8 7 Destilliertes Wasser TESTVERFAHREN ACHTUNG DEN TEST AUF CRASH EIS ANSETZEN VIP IST IN BEI RAUMTEMPERATUR AUFBEWAHRTEM PLASMA LABIL DAHER IST DIESE VORSICHTSMASSNAHME ERFORDERLICH UM G LTIGE ERGEBNISSE ZU ERHALTEN 9 1 Lyophilisierte Reagenzien rekonstituieren und gefrorene Reagenzien vollst ndig auftauen lassen Die Reagenzien d rfen nicht auf mehr als 25 C erw rmt werden Alle Reagenzien vor dem Gebrauch leicht mischen 9 2 Markierte 12 x 75 mm Einweg Glasr hrchen in Zweierreihen aufstellen siehe Testplan auf der R ckseite 9 3 Reagenzien wie folgt zugeben a R hrchen f r die Gesamtz hlung Bis Schritt 5 beiseite legen b NSB R hrchen 200 ul Nullkalibrator 100 ul VIP Citratpuffer c Nullkalibrator 200 ul Nullkalibrator 100 ul VIP Antiserum d VIP Kalibratoren A E 200 ul VIP Kalibrator 100 ul VIP Antiserum e Kontrollen und unbekannte Proben 200 ul Plasma 100 ul VIP Antiserum 9 4 Vorsichtig die R hrchen ohne Schaumbildung
99. terminal du VIP et les groupements amino terminal de la s cr tine du glucagon et du peptide inhibiteur gastrique GIP Le groupement carboxy terminal c est dire les r sidus 15 28 est cependant bien diff rent On trouve le VIP dans tout le tube digestif o Bloom et Polak ont remarqu que les concentrations tissulaires de VIP taient sup rieures toutes les autres concentrations de peptide intestinal Les effets p riph riques du VIP dans l intestin sont augmentation du d bit de suc alcalin en provenance du pancr as inhibition de la production d acide gastrique stimulation de la lib ration d insuline hyperglyc mie provoqu e par la glycog nolyse stimulation de la production du suc de l intestin gr le et augmentation de la teneur en ad nosine monophosphate cyclique AMP cyclique de l intestin 8 On trouve aussi des concentrations lev es de VIP dans tout le syst me nerveux central o ses effets vasodilatateurs et hypotensifs sur le syst me cardiovasculaire sont importants et dans le syst me respiratoire o il facilite la bronchodilatation et augmente la ventilation On trouve le VIP en grande partie dans les neurones et un peu dans les cellules endocrines et il semble tre lib r par l interm diaire de la stimulation des neurones 4 La mesure de VIP permet de d tecter la pr sence de certaines tumeurs des lots pancr atiques qui s cr tent des quantit s excessives de ce peptide Cette condition
100. tes casos foram designados por Bloom e Polak como pseudo s ndrome de Verner Morrison Os tumores para al m dos tumores das ilhotas que produzem n veis elevados de VIP incluem ganglioneuroblastoma carcinoma bronquiog nico feocromocitoma carcinoma medular da tir ide e histiocitoma retroperitoneal 152128 50 3 PRINC PIO DO ENSAIO O VIP medido atrav s de um radioimunoensaio mediante a adi o retardada de tra ador para aumentar a sensibilidade Adiciona se a amostra e um anticorpo de coelho anti VIP ap s o que se efectua uma incuba o de 24 horas a 2 8 C Adiciona se ent o o VIP 51 ap s o que se segue uma segunda incuba o durante 24 horas a 2 8 C Num nico passo adicionam se um transportador pr precipitado um segundo anticorpo e polietileno glicol O ensaio pode ser centrifugado e decantado no m nimo ap s 2 horas de incuba o a 2 8 C 4 REAGENTES FORNECIDOS NO KIT Tamp o Citrato VIP 1 frasco 2 mL Calibrador O VIP 1 frasco 5 mL Calibradores VIP 0 5 5 frascos 2 mL Anti soro VIP 1 frasco 12 5 mL veraj 1 frasco 12 5 mL Complexo de precipita o GAR PPT 1 frasco 35 mL Controlos do VIP N vel 1 e 2 2 frascos 2 mL N mero de testes ARMAZENAMENTO Aquando da recep o e antes da reconstitui o conserve todos os reagentes a 2 8 C Ap s a reconstitui o conserve todos os reagentes a 15 ou a uma temperatura inferior at ao prazo de validade indicado no r tulo Os reagentes
101. the Verner Morrison syndrome Sand is characterized by refractory watery diarrhea hypokalemia and achlorhydria WDHA syndrome Individuals with this syndrome have greatly elevated plasma VIP levels often thousands of times the normal concentration 8 Another form of diarrhea which manifests symptoms very similar to those of the Verner Morrison syndrome is the result of islet hyperplasia Unlike the Verner Morrison syndrome however this condition is characterized by normal VIP levels these cases have been designated by Bloom and Polak as the pseudo Verner Morrison syndrome Tumors other than those of the islet which produce elevated VIP levels include ganglioneuroblastoma bronchiogenic carcinoma pheochromocytoma medullary thyroid carcinoma and retroperitoneal histiocytoma 5212 PRINCIPLE OF THE ASSAY VIP is measured by a radioimmunoassay using delayed tracer addition to increase sensitivity Sample and rabbit anti VIP are added followed by a 24 hour incubation at 2 8 C 131 VIP is then added followed by a second incubation for 24 hours at 2 8 C Pre precipitated carrier second antibody and polyethylene glycol are added in a single step The assay can be centrifuged and decanted after a minimum of 2 hours incubation at 2 8 C 4 REAGENTS PROVIDED IN THE KIT VIP Citrate Buffer 1 vial 2 mL VIP Calibrator O 1 vial 5 mL VIP Calibrators 0 5 5 vials 2 mL VIP Antiserum 1 vial 12 5 mL 5 VIP 1 vial 12 5 mL
102. tico inibi o da produ o de cido g strico 5 estimula o da liberta o de insulina hiperglic mia como resultado da glicogenolise estimula o do fluxo do suco do intestino delgado e aumento do conte do de monofosfato de adenosina c clico CAMP nos intestinos 5 Encontram se tamb m concentra es elevadas de VIP no sistema nervoso central sobre o qual tem fortes efeitos vasodilatadores e hipotensivos no sistema cardiovascular e no sistema respirat rio onde influencia a bronquiodilata o e aumenta a ventila o O VIP est localizado nos neur nios e nas c lulas end crinas embora de forma mais predominante nos primeiros e parece ser libertado atrav s da estimula o neuronal 4 A medi o do VIP utilizada para pesquisar determinados tipos de tumores das ilhotas pancre ticas que segregam quantidades excessivas do pept deo Esta patologia designada por s ndrome de Verner Morrison 5 caracteriza se por diarreia aquosa refract ria hipocalemia e acloridria s ndrome de WDHA Os indiv duos com esta s ndrome apresentam n veis muito elevados de VIP no plasma frequentemente milhares de vezes acima da concentra o normal zg Outra forma de diarreia que se manifesta atrav s de sintomas muito semelhantes aos da s ndrome de Verner Morrison o resultado da hiperplasia das ilhotas No entanto contrariamente s ndrome de Verner Morrison esta patologia caracteriza se por n veis normais de VIP es
103. trifuga o para que ela n o ultrapasse os 25 C 10 7 Para monitorizar completamente o desempenho consistente de um ensaio RIA devem verificar se factores adicionais A DiaSorin sugere a verifica o dos par metros seguintes para assegurar um desempenho consistente do kit a Contagens totais b Liga o m xima M dia das contagens por minuto CPM dos Tubos do Calibrador 0 M dia das CPM dos Tubos de Contagens Totais c Liga o n o espec fica M dia das CPM dos Tubos NSB M dia das CPM dos Tubos de Contagens Totais d Inclina o da curva do calibrador Por exemplo monitorize os pontos de supress o 80 50 e 20 da linha do calibrador 11 CONTROLO DE QUALIDADE Cada laborat rio deve incluir pelo menos dois controlos do kit em todos os ensaios para garantir a validade dos resultados de cada ensaio Deve ent o determinar se o desvio m dio e o desvio padr o para cada controlo utilizando no m nimo dez ensaios Pode ent o obter se um intervalo aceit vel de valores para esses controlos utilizando 2 desvios padr o dos valores previamente determinados O Laborat rio de Controlo de Qualidade da DiaSorin determinou um intervalo para os controlos inclu dos neste kit Estes intervalos est o impressos nos frascos de controlo de qualidade 12 C LCULO DE RESULTADOS Existem v rios m todos para calcular resultados de ensaios RIA Cada um baseia se na obten o de uma curva de calibragem desenhando a extens o da liga
104. trouv es chez les hommes et les femmes la moyenne globale est de 42 7 9 5 pg ml chez les adultes jeun On sugg re un intervalle deux carts types allant de 23 63 pg ml Cet intervalle normal peut tre plus large si des patients hospitalis s qui ne souffrent pas de maladie gastro intestinale sont utilis s comme groupe de contr le D autres personnes ont observ que l intervalle normal peut atteindre 200 pg ml L intervalle normal lors du dosage l universit de l Etat de I Ohio n est pas d tectable jusqu 170 pg ml avec une moyenne de 62 44 pg ml Comme l Etat de l Ohio signale que les valeurs inf rieures 50 ne sont pas d tectables leur dosage n est pas aussi sensible que la proc dure de DiaSorin Une s rie d chantillons cliniques en double aveugle comprenant plusieurs VIPomes et ganglioneuroblastomes tait obtenue du Dr Thomas O Dorisio de l universit de l tat de l Ohio Les r sultats qu il a obtenus sur ces m mes chantillons sont rassembl s dans le TABLEAU IV Les donn es montrent des valeurs de VIP extr mement lev es qui caract risent les tumeurs productrices de VIP et montrent que la trousse VIP DiaSorin mesure vraiment les valeurs lev es chez l homme et est aussi fiable qu un laboratoire de recherche tabli L quation de r gression pour les 22 premiers chantillons l exclusion des 4 chantillons normaux avec des taux non d tectables rapport s par l Etat de l Ohio est y 0 78x 32
105. und dekantiert werden 4 _REAGENZIEN DES KITS VIP Citratpuffer 1 Fl schchen 2 ml VIP Nullkalibrator 1 Fl schchen 5 ml VIP Kalibratoren 0 5 5 Fl schchen 2 ml VIP Antiserum 1 Fl schchen 12 5 ml 125 VIP 1 Fl schchen 12 5 ml Prazipitierender Komplex GAR PPT 1 Fl schchen 35 ml VIP Kontrollen Stufe 1 und 2 2 Fl schchen 2 ml Anzahl der Tests LAGERUNG Nach Empfang und vor der Rekonstitution alle Reagenzien bei 2 8 C aufbewahren Nach der Rekonstitution sind dagegen alle Reagenzien bis zum Verfallsdatum bei h chstens 15 zu lagern Die Reagenzien d rfen nach dem Verfallsdatum nicht verwendet werden Bei der Rekonstitution den Inhalt der Fl schchen vorsichtig mischen um Schaumbildung zu vermeiden Reagenzien aus verschiedenen Chargen d rfen nicht vermischt werden 4 1 VIP Citratpuffer lyophilisiertes Reagenz BSA Citratpuffer enth lt Thimerosal als Konservierungsmittel Das Fl schchen mit 2 ml destilliertem Wasser rekonstituieren mischen und 15 20 Minuten bis zur vollst ndigen L sung des Inhalts stehen lassen vor dem Gebrauch gr ndlich mischen 4 2 VIP Nullkalibrator lyophilisiertes Reagenz Citratplasma wird in BSA Citratpuffer verd nnt der Thimerosal und andere Stabilisatoren enth lt Das Fl schchen mit 5 ml destilliertem Wasser rekonstituieren mischen und 15 20 Minuten bis zur vollst ndigen L sung des Inhalts stehen lassen vor dem Gebrauch gr ndlich mischen 4 3 VIP Kalibratoren

VIP - KC SOLID spol. s ro

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