Géloses de confirmation pour Legionella BT007 (BM072 + BM073)
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1. 0 3 44 14 33 34 www biokar diagnostics fr 33 0 33 0 www biokar diagnostics fr2. d crites dans ce document et susceptibles d tre modifi es tout moment sans pr avis LA Code document BM072 F 2012 05 1 6 Date de cr ation 05 2012 3 sm Page 2 sur 4 Biokar Diagnostics Rue des Quarante Mines ZAC de Ther Allonne B P 10245 60002 Beauvais Cedex France LA T l 33 0 3 44 14 33 33 Fax 33 0 3 44 14 33 34 www biokar diagnostics fr ANNEXE 1 SUPPORT PHOTO GELOSES POUR CONFIRMATION DES LEGIONELLA BCY Ea ET BCYEa SANS CYSTEINE M thodologie e Repiquage de 3 colonies caract ristiques de Legionella du milieu GVPC sur les milieux BCYEa BM072 et BCYEa cys BM073 e Incubation 36 1 C pendant 2 jours Lecture Croissance obtenue sur les g loses BCYE et BCYEa cys apr s 2 jours d incubations 36 C Legionella pneumophila sur g lose BCYEa 7 7 Colonies caract ristiques sur Colonies caract ristiques sur Microorganismes g lose BCYEa g lose BCYEa cys Blanches grises avec une surface lisse Legionella pouvant pr senter un aspect de verre pil la Absence de colonie loupe binoculaire Codes produit BM07208 G lose BCYE coffret de 20 bo tes BM07308 G lose BCYEa sans cys coffret de 20 bo tes Page 3 sur 4 Biokar Diagnostics Rue des Quarante Mines ZAC de Ther Allonne B P 10245 60002 Beauvais Cedex France T l 33 0 3 44 14 33 33 Fax 33
3. BMO71 Repiquer chaque colonie sur une bo te de milieu BCYEa cys BM073 et une bo te de milieu BCYEa BM072 Incuber 36 1 C pendant au moins 2 jours Consid rer comme Legionella toutes les colonies qui se d veloppent sur le milieu BCYEa mais ne cultivent pas sur le milieu BCYE cys Identifier les esp ces de Legionella par s rologie Page 1 sur 4 Biokar Diagnostics Rue des Quarante Mines ZAC de Ther Allonne B P 10245 60002 Beauvais Cedex France a T l 33 0 3 44 14 33 33 Fax 33 0 3 44 14 33 34 www biokar diagnostics fr 5 LECTURE La pr sence de colonies sur le milieu BCYEa avec cyst ine BM072 et l absence de colonies sur le milieu BCYEa sans cyst ine BM073 permet de conclure la pr sence de Legionella Les colonies de Legionella sp ont une coloration blanche grise sur le milieu BCYEa avec cyst ine BM072 Elles peuvent galement tre bleues roses pourpres marrons vert jaune ou rouge fonc et devenir blanch tres et ou filamenteuses en vieillissant Leur surface est lisse et leur bord est bien net Elles peuvent pr senter un aspect de verre pil la loupe binoculaire Certaines colonies pr sentent une fluorescence d un blanc brillant sous lampe de Wood cf ANNEXE 1 SUPPORT PHOTO 6 FORMULE TYPE Formule type pouvant tre ajust e de fa on obtenir des performances optimales e G lose BCYEa Pour 1 litre de milieu Extrait autol
4. FICHE TECHNIQUE GELOSES POUR CONFIRMATION DES LEGIONELLA BCYEa ET BCYEa SANS CYSTEINE CONFIRMATION DES ISOLEMENT ET DENOMBREMENT DES LEGIONELLA BM07208 BM07308 DOMAINE D UTILISATION Les deux g loses pour confirmation des Legionella BCYEa et BCYEa sans cyst ine sont destin es la confirmation des colonies obtenues sur la g lose GVPC elle m me utilis e pour les d nombrement et isolement des esp ces de Legionella dans les eaux et les autres pr l vements susceptibles d en contenir 2 HISTORIQUE En 1977 MacDade et al furent les premiers isoler l agent responsable de la maladie des l gionnaires une bact rie maintenant appel e Legionella pneumophila Apr s cette d couverte de nombreuses Legionella ont t trouv es dans des environnements aquatiques d eau douce circuits de distribution d eau syst mes de climatisation tours de refroidissement eaux thermales On d nombre actuellement 48 esp ces de Legionella En 1978 Weaver r ussit cultiver des Legionella sur une g lose Mueller Hinton chocolat Feeley et al en d duisirent que la cyst ine et le pyrophosphate ferrique pouvaient remplacer les suppl ments vitamin s et l h moglobine pr sents dans la g lose Mueller Hinton chocolat Leurs travaux aboutirent la formulation d un milieu appel F G Agar lls d termin rent galement qu une atmosph re enrichie 2 5 en CO tait n cessaire la culture des Legionella En 1979 Feele
5. an G W Langford N C Rasheed J K Mackel D C and Baine W B 1979 Charcoal yeast extract agar primary isolation medium for Legionella pneumophila J Clin Microbiol 10 437 441 Pasculle A W Feeley J C Gibson R J Cordes L G Myerowitz R L Patton C M Gorman G W Carmack C L Ezzell J W and Dowling J N 1980 Pittsburgh pneumonia agent direct isolation from human lung tissue J Infect Dis 141 727 732 Edelstein P H 1981 Improved semiselective medium for isolation of Legionella pneumophila from contaminated clinical and environmental specimens J Clin Microbio 14 298 303 Wadowsky R W and Yee R B 1981 Glycine containing selective medium for isolation of Legionellaceae from environmental specimens Appl and Environ Microbiol 42 768 772 Dennis P J L Bartlett C L R and Wright A E 1984 Comparison of isolation methods for Legionella spp In Thornsbury C et al ed Legionella Proceedings of the 2 International symposium Washington D C Am Soc Micriobiol p 294 296 ISO 11731 1998 Qualit de l eau Recherche et d nombrement des Legionella NF EN ISO 11731 2 T 90 430 Juillet 2008 Qualit de l eau Recherche et d nombrement des Legionella Partie 2 M thode par filtration directe sur membrane pour les eaux faible teneur en bact ries 11 AUTRES INFORMATIONS Les mentions port es sur l tiquette sont pr dominantes sur les formules ou les instructions
6. s 3 jours d incubation 36 C ETE Ooo y Owe G lose BCYEo G lose BCYEa cys Legionella pneumophila WDCM 00107 positive n gative Escherichia coli WDCM 00179 positive positive 8 CONSERVATION Milieux pr coul s en bo tes de Petri BM072 et BM073 Stocker entre 2 et 8 C l abri de la lumi re Les dates de p remption sont mentionn es sur les tiquettes Biokar Diagnostics Rue des Quarante Mines ZAC de Ther Allonne B P 10245 60002 Beauvais Cedex France a T l 33 0 3 44 14 33 33 Fax 33 0 3 44 14 33 34 www biokar diagnostics fr Page 2 sur 4 9 PRESENTATION Milieux pr coul s en bo tes de Petri 90 mm G lose BCYEa coffret de 20 bo tes iii BM07208 G lose BCYEa sans cys coffret de 20 bo tes BM07308 10 REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES McDade J E Shepard C C Fraser D W et al 1977 Legionnaires disease Isolation of a bacterium and demonstration of its role in other respiratory disease N Engl J Med 297 1197 1203 Feeley J C Gorman G W Weaver R E Mackel D C and Smith H W 1978 Primary isolation media for the Legionnaires disease bacterium J Clin Microbiol 8 320 325 Weaver R E and Feeley J C 1979 Cultural and biochemical characterisation of legionnaires disease bacterium Legionnaires the bacterium and methodology Center for Disease Control Atlanta GA p 19 25 Feeley J C Gibson R J Gorm
7. y et al modifi rent le milieu F G en rempla ant l hydrolysat de cas ine par de l extrait autolytique de levure en ajoutant du charbon actif et en y supprimant l amidon Le milieu CYE obtenu permettait une meilleure croissance des Legionella En 1980 Pasculle et al ont suppl ment le milieu CYE avec un tampon ACES Ils d montr rent que ce milieu d nomm BCYE pr sentait une meilleure r cup ration des Legionella et pouvait tre incub en a robiose Et en 1981 Edelstein a augment la sensibilit du milieu en y ajoutant de l a c toglutarate milieu BCYEa On consid re comme Legionella toutes les colonies qui se d veloppent sur le milieu BCYEa mais ne cultivent pas sur le milieu BCYEa sans cyst ine BCYEa cys PRINCIPES L extrait autolytique de levure constitue le substrat nutritif permettant la croissance des Legionella Le charbon actif d compose le peroxyde d hydrog ne production toxique du m tabolisme capture le dioxyde de carbone et modifie la tension superficielle Le maintien du pH est assur par le tampon ACES KOH Sa pr sence permet d incuber les milieux en a robiose La cyst ine et le pyrophosphate ferrique repr sentent des l ments nutritifs indispensables pour la culture des Legionella L a c toglutarate est un activateur de la croissance des Legionella MODE D EMPLOI S lectionner au moins trois colonies caract ristiques de Legionella sur chacune des bo tes de milieu GVPC
8. ytique de levure ss 10 0 g Charbon ACT sceau cnnrsrasnnussetenasarsaanaucssnenareranausrasetedasoutaseauctenenatesdhscdtesadedareuenseaues 2 0g a c toglutarate sel MONOpOtAaSS qUE sseesseeese esket ne tenete tt tenten ntn netr nest nnnr nsn nnennnn 1 0g ACES 2 2 amino oxo thyl amino thanesulfonique seeeeeeeeeeeeeeen 10 0 g Hydroxyde de potassium sise 2 8 g Pyrophosphate ferriguUe skosat adsa aaan aaa aa SANEA RA 0 25g Agar agar bact riologique us 12 0 g L cyst ine chlorhydrate issu 0 4g pH du milieu pr t l emploi 25 C 6 9 0 1 e G lose BCYEa cys Pour 1 litre de milieu Extrait autolytique de levure ss 10 0 g Charbon ACtit aswe nn AR nent rm nl te era ario a este el tes dot nero 2 0g a c toglutarate sel MONOpOtASS QUE sssssseeeee eseteket ettette en rnn netn nesr nesnnnnnnnnnnnnnnenn 1 0g ACES 2 2 amino oxo thyl amino thanesulfonique ssesseeseeeeeeeseeeseeeseen 10 0 g Hydroxyde de potassium 2 8 g Pyrophosphate ferrique 52 125800 mur f nus tenant fhane rien 0 25 g Agar agar bact riologique eeseeeseeese eee eesn eeen resr nesr neer nsr nstnnnennnstnnsenssrnnsrensnensnnne 12 0 g pH du milieu pr t l emploi 25 C 6 9 0 2 7 CONTROLE QUALITE G lose BCY Ea BM072 G lose BCYEa cys BM073 e Milieu pr par en bo tes g lose noire avec particules de charbon actif e R ponse culturale typique apr
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