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Aquarius® Tissue Pretreatment Kit

1. la chaleur 3 Digestion enzymatique une tape importante pour une performance optimale des temps d incubation diff rents 5 15 min seront peut tre n cessaires en fonction du type de tissu et de la m thode de fixation Pour la plupart des tissus mammaires une digestion enzymatique de 10 min temp rature ambiante TA donnera de meilleurs r sultats Ne pas oublier de pr chauffer le r actif de pr traitement enzymatique TA avant d ajouter la section de tissu Le pr traitement enzymatique du sp cimen doit tre valu d s que le protocole est termin Si les noyaux ne manifestent pas de coloration de contraste et qu il n y a pas de signal ou que ce dernier est tr s faible cela peut tre d une perte nucl aire suite une digestion excessive Si les noyaux manifestent une forte coloration de contraste mais qu il n y a pas de signal dans les noyaux c est peut tre d une digestion insuffisante lors du pr traitement la pepsine Une alternative serait d effectuer le pr traitement enzymatique 37 C pendant 3 10 minutes si des r sultats optimaux n ont pas t obtenus 4 Une d naturation de la sonde une temp rature inf rieure celle que recommande le protocole risque d avoir pour r sultat un signal faible ou une absence de signal 5 Une hybridation effectu e pendant des p riodes plus courtes que celles recommand es par le protocole ou des lavages rigoureux effectu
2. References Bibliographie Bibliografia Literatur Bibliografia 1 Wilkinson D G n Situ Hybridization a Practical Approach 2nd ed Oxford university Press Oxford 1998 2 Polak J M and McGee J In Situ Hybridization Principles and Practice Oxford University Press Oxford UK 1998 3 Verma R S and Babu A Human Chromosomes Principles and Techniques 2nd ed Health Professions Division New York 1995 4 Leitch A R et al In Situ Hybridization A Practical Guide Royal Microscopy Society Microscopy Handbooks Vol 27 Bios Scientific Publishers Oxford UK 1994 Catalogue number Bestellnummer R f rence du catalogue Riferimento di Catalogo N mero de cat logo In vitro diagnostic device In vitro Diagnostikum Dispositif m dical de diagnostic in vitro Dispositivo medico diagnostico in vitro Producto sanitario para diagn stico in vitro Batch code Loscode Code du lot Codice di lotto C digo Consult instructions for use Gebrauchsanweisung beachten Consulter la notice d utilisation Consultare le istruzioni per l uso Cons ltense las instrucciones de uso Manufacturer Hersteller Fabricant Fabbricante Fabricante Use by Verwendbar bis Utiliser jusqu au Utilizzare entro Fecha de caducidad Temperature limitation Temperaturbegrenzung Limites de temp rature Limiti di temperatura Limitaci n de temperatura Sufficient for
3. di conservazione diversa da quelle specificate deve essere convalidata dall utente Preparazione Dei Tessuti Prima del fissaggio delle sezioni tissutali trattare i vetrini con un adesivo Sparaffinare i vetrini e disidratare le sezioni tissutali Eseguire il pretrattamento termico e la digestione enzimatica come da istruzioni allegate alla sonda ISH In loro mancanza si potr seguire la procedura riportata qui di seguito Trattamento Preliminare Termico 1 Riscaldare 500 ml della soluzione per il pretrattamento dei tessuti Reagente 1 in un becher su una piastra riscaldante fino alla bollitura o al raggiungimento di 98 100 C Bollire i vetrini per 15 minuti nota i tempi di incubazione necessari potrebbero variare a seconda del metodo di fissaggio dei tessuti impiegato Si raccomanda un tempo di incubazione di 15 minuti quale punto di partenza 2 Lavare in PBS o dH 0 a temperatura ambiente TA 2 volte per 3 minuti Digestione Enzimatica Ricoprire il tessuto con 100 200 pi di reagente enzimatico Reagente 2 per 10 minuti a temperatura ambiente 2 Nota i tempi di incubazione necessari potrebbero variare a seconda del fissativo per tessuti impiegato Una digestione eccessiva comporter la perdita di nuclei e struttura cromosomica Per ulteriori informazioni consultare la sezione Risoluzione dei problemi 3 Lavare in PBS o dH20 a temperatura ambiente 3 volte per 2 minuti 4 Disidratare i vetrini in etanolo al 70 85
4. lt n gt tests Ausreichend f r Suffisant pour Sufficiente per V lido para Contents Inhalt Contenu Contenuto Contenido Patents and Trademarks Aquarius and Cytocell are registered trademarks of Cytocell Ltd Cytocell Ltd 3 4 Technopark Newmarket Road Cambridge CB5 8PB UK T 44 0 1223 294048 F 44 0 1223 294986 E probes cytocell com W www cytocell com LABEL LICENSE Purchase of this product conveys to the buyer the non transferable right to use the purchased amount of the product only for life science research or human diagnostics as set forth in the accompanying product literature The sale of this product is expressly conditioned on the buyer not using the product or its components 1 in manufacturing 2 to provide a service information or data to an unaffiliated third party for payment other than human diagnostics testing services 3 for therapeutic or prophylactic purposes 4 to resell sell or otherwise transfer this product or its components to any third party or use for any use other than use in life science research whether or not such product or its components are resold for use in research or human diagnostics LPS 100 v002 00 2014 03 27 Page 3 of 3
5. 95 e 100 per 2 minuti ciascuno a temperatura ambiente lasciare asciugare spontaneamente e quindi eseguire la denaturazione e l ibridazione Risoluzione Dei Problemi Ta Salvo indicazione contraria importante prevenire l essiccamento della sezione tissutale nel corso dell intera procedura 2 Pretrattamento termico trattasi della fase pi importante ai fini di una performance soddisfacente bollire o riscaldare i provini a una temperatura superiore a 98 C per 15 minuti nella soluzione per pretrattamento termico 3 Digestione enzimatica fase importante ai fini di una performance soddisfacente i tempi di incubazione 5 15 minuti enzimatica necessari potrebbero variare a seconda del tipo di tessuto e del metodo di fissaggio impiegati Per gran parte dei tessuti mammari una digestione enzimatica di 10 minuti a temperatura ambiente consente di ottenere i migliori risultati Accertarsi di preriscaldare il reagente enzimatico per il pretrattamento a temperatura ambiente prima di applicarlo sulla sezione tissutale Valutare tempestivamente il pretrattamento enzimatico del provino a completamento avvenuto del protocollo La mancata controcolorazione dei nuclei e l assenza oppure l intensit particolarmente debole del segnale CISH potrebbero essere riconducibili a una perdita di nuclei causata da una digestione eccessiva Una forte controcolorazione dei nuclei in cui non pero rilevabile alcun segnale CISH potrebbe essere riconduc
6. Cytocell an OGT company z aguarius Instructions For Use REF LPS 100 Aquarius Tissue Pretreatment Kit ce C PROFESSIONAL USE ONLY ENGLISH FRAN AIS ITALIANO DEUTSCH ESPANOL Further information available at www cytocell com For use in heat pretreatment and enzyme digestion of Formalin Fixed Paraffin Embedded FFPE tissue prior to Fluorescence In Situ Hybridization FISH or Chromogenic In Situ Hybridization CISH detection Intended Use For In Vitro Diagnostic Use CAUTION Not for human or animal therapeutic use Uses other than the labeled intended use may be a violation of local law Materials Provided Reagent 1 One Litre of Heat Pretreatment Solution pH 7 0 Ready to Use Reagent 2 One 10ml bottle of Enzyme Reagent Ready to Use Storage Store at 2 8 C Stability There are no obvious signs to indicate instability of these reagents They have been quality controlled to assure consistent and reliable performance Do not use after the expiration date stamped on container With proper storage there is no significant loss of performance If the reagents are stored under any conditions other than those specified conditions must be validated by the user Tissue Preparation Slides should be treated with an adhesive before mounting tissue section Deparaffinize slides and rehydrate tissue sections Perform heat pretreatment and enzyme digestion as recommended in the instructions that come with the ISH probe The fo
7. aque chauffante jusqu bullition ou jusqu 98 100 C Faire bouillir les lames pendant 15 minutes remarque diff rents temps d incubation seront n cessaires en fonction de la fixation du tissu Une incubation de 15 minutes est recommand e comme point de d part 2 Laver dans un solut tampon de phosphate ou du dH 0 temp rature ambiante TA pendant 2 x 3 minutes Digestion enzymatique 1 Couvrir le tissu avec 100 200 pl de r actif enzymatique R actif 2 pendant 10 minutes temp rature ambiante 2 Remarque diff rents temps d incubation seront peut tre n cessaires en fonction du produit fixateur de tissu utilis Une digestion excessive entra nera une perte de noyaux et de structure chromosomique Veuillez vous reporter la section D pannage pour plus de d tails Laver dans un solut tampon de phosphate ou du dH20 temp rature ambiante pendant 3 x 2 minutes 4 D shydrater les lames dans de l thanol 70 85 95 et 100 pendant 2 minutes chacune temp rature ambiante s cher l air et passer la d naturation et l hybridation D pannage 1 Tout au long de cette proc dure sauf indication contraire il est important que la section de tissu ne se dess che pas 2 Pr traitement la chaleur tape la plus importante pour une performance optimale Le sp cimen doit tre bouilli ou chauff plus de 98 C pendant 15 min dans une solution de pr traitement
8. breast tissues 10 minutes enzyme digestion at RT will produce the best results Be sure to pre warm the Enzyme Pretreatment Reagent to RT prior to adding to the tissue section Enzyme pretreatment of the specimen should be evaluated immediately at the completion of the protocol If nuclei are not counterstained and there is an absent or very weak signal this may be due to nuclear loss as the result of excessive digestion If nuclei are strongly counterstained but a signal is absent in the nuclei this may be due to under digestion during the pepsin pretreatment As an alternative enzyme pretreatment may also be performed at 37 C for 3 10 minutes if optimal results are not attained 4 Probe denaturation at a temperature lower than recommended by the protocol may result in a weak or absent signal 5 Hybridization performed for shorter time periods or stringent washes performed at higher temperatures than recommended by the protocol may produce a decrease in or complete loss of the signal Additional Information For additional product information please contact the Cytocell Technical Support Department T 44 0 1223 294048 E techsupport cytocell com W www cytocell com FRAN AIS utiliser pour le pr traitement thermique et la digestion enzymatique de tissus fix s dans du formol et incorpor s dans de la paraffine FFIP avant la d tection de l hybridation in situ par fluorescence FISH ou l hybridatio
9. ctivo 1 Un litro de soluci n para pretratamiento t rmico a pH 7 0 listo para usar Reactivo 2 Un frasco de 10 ml de reactivo enzim tico listo para usar Almacenamiento Conservar a 2 8 C Estabilidad Estos reactivos no muestran signos obvios que indiquen inestabilidad Han sido sometidos a un control de calidad para garantizar unos resultados uniformes y fiables No utilizar una vez pasada la fecha de caducidad estampada en el envase Si se conserva adecuadamente no se producen p rdidas significativas en el rendimiento Si los reactivos se conservan en condiciones distintas a las especificadas estas deben ser validadas por el usuario Preparaci n del tejido Antes de montar el corte histol gico los portas se deben tratar con un adhesivo Desparafinizar los portas y rehidratar los cortes histol gicos Realizar el pretratamiento t rmico y la digesti n enzim tica seg n lo recomendado en las instrucciones incluidas en la sonda para la ISH Si no se dispone de las instrucciones de la sonda se puede utilizar el siguiente procedimiento Pretratamiento T rmico T Calentar 500 ml de la soluci n para pretratamiento tisular reactivo 1 en un vaso de precipitados sobre una placa calefactora hasta que hierva o su temperatura llegue a 98 100 C Hervir los portas durante 15 minutos Nota puede ser necesario emplear distintos tiempos de incubaci n en funci n de la fijaci n del tejido Se recomienda empezar por una incubaci n de 15
10. ibile a una digestione insufficiente durante il pretrattamento con la pepsina Quale alternativa in caso di mancato ottenimento dei risultati ottimali si potr procedere anche al pretrattamento enzimatico a 37 C per 3 10 minuti 4 Una denaturazione della sonda a una temperatura inferiore a quella di cui al protocollo potrebbe comportare la perdita o l indebolimento del segnale 5 L esecuzione dell ibridazione per lassi di tempo inferiori a quello di cui al protocollo o l esecuzione di lavaggi stringenti a temperature superiori a quella di cui al protocollo potrebbe comportare la perdita o l indebolimento del segnale Informazioni aggiuntive Per informazioni aggiuntive sul prodotto con tattare il Reparto di Assistenza Tecnica Cytocell T 44 0 1223 294048 E techsupport cytocell com W www cytocell com DEUTSCH F r den Gebrauch zur W rmevorbehandlung und zum Enzymverdauung von formalinfixiertem in Paraffin eingebettetem FFPE Gewebe vor der Untersuchung mittels Fluoreszenz in situ Hybridisierung FISH oder chromogener In situ Hybridisierung CISH Verwendungszweck F r die In vitro Diagnose VORSICHT Nicht f r die therapeutische Verwendung bei Menschen oder Tieren geeignet Die nicht bestimmungsgem e Verwendung kann einen Versto gegen geltendes Recht darstellen Bestandteile Reagenz 1 Ein Liter W rmevorbehandlungsl sung pH 7 0 gebrauchsfertig Reagenz 2 Eine 10 ml Flasche Enzymreagenz gebra
11. llowing procedure may be used if probe instructions are unavailable Heat Pretreatment 1 Heat 500ml Tissue Pretreatment Solution Reagent 1 in a beaker on a hot plate until it is either boiling or 98 100 C Boil slides for 15 minutes Note different incubation times may be required depending on tissue fixation A 15 minute incubation is a recommended starting point 2 Wash in PBS or dH 0 at room temperature RT for 2 x 3 minutes Enzyme Digestion Cover tissue with 100 200ul of Enzyme Reagent Reagent 2 for 10 minutes at RT 2 Note depending on tissue fixative used different incubation times may be required Excessive digestion will cause loss of nuclei and chromosome structure Please refer to Troubleshooting section for details 3 Wash in PBS or dH 0 at RT for 3 x 2 minutes 4 Dehydrate slides in a series of 70 85 95 and 100 ethanol for 2 minutes each at room temperature air dry and proceed to denaturation and hybridization Troubleshooting 1 Throughout the entire procedure unless otherwise indicated it is important that the tissue section does not dehydrate 2 Heat Pretreatment The most critical step for successful performance The specimen must be boiled or heated above 98 C for 15 minutes in Heat Pretreatment Solution 3 Enzyme Digestion A critical step for successful performance Different enzyme incubation times 5 15 minutes may be required depending on tissue type and fixation method For most
12. m Gewebefixierungsmittel k nnen verschiedene Inkubationszeiten erforderlich sein berm ige Verdauung bewirkt einen Verlust an Kernen und Chromosomenstruktur Weitere Einzelheiten sind dem Abschnitt zur Fehlerbehebung zu entnehmen 3 x 2 min bei RT in PBS oder dH 0 waschen 4 Objekttr ger in einer Serie mit 70 85 95 und 100 Ethanol jeweils 2 Min lang bei Raumtemperatur entw ssern an der Luft trocknen und dann die Denaturierung und Hybridisierung durchf hren w Fehlerbehebung 1 Wenn nicht anders angegeben muss w hrend des gesamten Verfahrens darauf geachtet werden dass der Gewebeschnitt nicht austrocknet 2 W rmevorbehandlung der wichtigste Schritt f r die erfolgreiche Durchf hrung Die Probe muss in der W rmevorbehandlungsl sung 15 Min lang gekocht oder auf ber 98 C erhitzt werden 3 Enzymverdauung ein wichtiger Schritt f r die erfolgreiche Durchf hrung Je nach Gewebetyp und Fixierungsmethode k nnen verschiedene Enzyminkubationszeiten 5 15 Min erforderlich sein Bei den meisten Brustgeweben werden bei 10 min tiger Enzymverdauung bei RT die besten Ergebnisse erzielt Sicherstellen dass das Enzymvorbehandlungsreagenz vor der Zugabe an den Gewebeschnitt auf RT erw rmt ist Die Enzymvorbehandlung der Probe sollte unmittelbar nach Abschluss des Protokolls beurteilt werden Falls die Zellkerne nicht gegengef rbt sind und das Signal fehlt bzw sehr schwach ist kann dies auf Zellkernverlus
13. minutos 2 Lavar en PBS o dH 0 a temperatura ambiente 2 veces durante 3 minutos Digesti n Enzim tica 1 Cubrir el tejido con entre 100 y 200 pl de reactivo enzim tico reactivo 2 durante 10 minutos a temperatura ambiente LPS 100 v002 00 2014 03 27 Page 2 of 3 2 Observaci n dependiendo del fijador histol gico utilizado puede ser necesario emplear distintos tiempos de incubaci n Una digesti n excesiva provocar la p rdida de la estructura de los n cleos y cromosomas Para m s informaci n v ase la secci n Resoluci n de problemas 3 Lavar en PBS o dH 0 a temperatura ambiente 3 veces durante 2 minutos 4 Deshidratar los portas con un gradiente de etanol de 70 85 95 y 100 durante 2 minutos cada diluci n a temperatura ambiente secar al aire y proseguir con la desnaturalizaci n e hibridaci n Resoluci n de problemas T Excepto cuando se indique lo contrario es importante que no se seque el corte histol gico durante todo el proceso 2 Pretratamiento t rmico Es el paso m s importante para un buen resultado La muestra debe hervirse o calentarse a m s de 98 C durante 15 minutos en soluci n de pretratamiento t rmico 3 Digesti n enzim tica Un paso importante para un buen resultado Puede ser necesario emplear distintos tiempos de incubaci n enzim tica 5 15 minutos dependiendo del tipo de tejido y del m todo de fijaci n Para la mayor a de los tejidos de mama los mejores
14. n chromog ne in situ CISH Usage pr vu Pour diagnostic in vitro ATTENTION ne convient pas un usage th rapeutique chez l homme ou l animal Toute utilisation autre que celles pr vues dans la notice peut constituer une violation de la l gislation locale Conditionnement R actif 1 un litre de solution de pr traitement thermique pH 7 0 pr t l emploi R actif 1 un flacon de 10 ml de r actif enzymatique pr t l emploi Stockage Conserver entre 2 et 8 C Stabilit Il n existe aucun signe vident d instabilit de ces r actifs Leur qualit a t contr l e afin de garantir des performances homog nes et fiables Ne pas utiliser apr s la date de p remption estampill e sur le carton Il n y aura pas de perte de performance importante si les conditions de stockage sont ad quates Toute condition de stockage autre que celle sp cifi e doit tre valid e par l utilisateur Pr paration du tissu Les lames doivent tre trait es avec un adh sif avant d y attacher la section du tissu D paraffiner les lames et d shydrater les sections de tissu Effectuer le pr traitement thermique et la digestion enzymatique tel que recommand dans le mode d emploi fourni avec la sonde ISH La proc dure suivante peut tre utilis e si le mode d emploi pour la sonde n est pas disponible Pr traitement thermique 1 Chauffer 500ml de la solution de pr traitement du tissu R actif 1 dans un b cher sur une pl
15. resultados se conseguir n con 10 minutos de digesti n enzim tica a temperatura ambiente Precalentar el reactivo de pretratamiento enzim tico a temperatura ambiente antes de agregarlo al corte histol gico El pretratamiento enzim tico de la muestra deber a evaluarse inmediatamente despu s de finalizar el protocolo Si los n cleos no presentan tinci n de contraste y no aparece se al o sta es muy d bil puede deberse a la p rdida de los n cleos debido a una digesti n excesiva Si los n cleos presentan una fuerte tinci n de contraste pero no aparece se al en los n cleos puede deberse a una digesti n insuficiente durante el pretratamiento con pepsina Como alternativa el pretratamiento enzim tico tambi n puede realizarse a 37 C en un intervalo de 3a 10 minutos si no se obtienen resultados ptimos 4 La desnaturalizaci n de la sonda a una temperatura inferior a la recomendada por el protocolo puede producir una se al d bil o ausente 5 La hibridaci n realizada durante per odos de tiempo m s cortos o los lavados en condiciones restrictivas realizados a temperaturas superiores a las recomendadas por el protocolo pueden producir una disminuci n o la p rdida total de la se al Informaci n adicional Si desea obtener informaci n adicional sobre el producto p ngase en contacto con el Departamento de soporte t cnico de Cytocell T 44 0 1223 294048 E techsupport cytocell com W www cytocell com
16. s des temp ratures sup rieures celles recommand es risquent d entra ner une r duction ou une perte totale du signal Informations suppl mentaires Pour plus d informations sur le produit veuillez contacter l Assistance technique Cytocell T 44 0 1223 294048 E techsupport cytocell com W www cytocell com LPS 100 v002 00 2014 03 27 Page 1 of 3 ITALIANO Da usarsi per il pretrattamento termico e la digestione enzimatica di tessuti fissati in formalina e inclusi in paraffina FFPE prima della rilevazione tramite ibridazione in situ in fluorescenza FISH o ibridazione in situ cromogenica CISH Solo per uso diagnostico in vitro PRECAUZIONI Non per uso terapeutico su persone o animali Usi diversi da quelli riportati sull etichetta potrebbero comportare una violazione della normativa locale Materiali forniti Reagente 1 un litro di soluzione per il pretrattamento termico pH 7 0 pronta all uso Reagente 1 una boccetta da 10 ml di reagente enzimatico pronto all uso Conservazione Conservare a 2 8 C Stabilit Non si osservano segni evidenti che indichino l instabilit di questi reagenti medesimi sono stati sottoposti a un controllo della qualit per garantire l affidabilit e la costanza delle loro performance Non usare dopo la data di scadenza riportata sul contenitore Se si osservano le debite modalit di conservazione non si verifica alcuna perdita di performance significativa Qualsiasi condizione
17. t aufgrund berm iger Verdauung zur ckzuf hren sein Falls die Zellkerne stark gegengef rbt sind aber in den Zellkernen kein Signal vorhanden ist ist eine m gliche Ursache eine unzureichende Verdauung w hrend der Pepsinvorbehandlung Bei unzureichenden Ergebnissen kann die Enzymvorbehandlung alternativ auch 3 10 Min lang bei 37 C durchgef hrt werden 4 Eine Sondendenaturierung bei einer niedrigeren Temperatur als protokollsgem empfohlen kann zu einem schwachen bzw fehlenden Signal f hren 5 Hybridisierungen die k rzer als protokollsgem sind oder Stringenz W schen die bei h heren Temperaturen als protokollsgem R durchgef hrt werden k nnen eine Abnahme oder einen vollst ndigen Verlust des Signals verursachen Weitere Informationen Weitere Produktinformationen erhalten Sie vom Technischen Kundendienst von Cytocell T 44 0 1223 294048 E techsupport cytocell com W www cytocell com ESPA OL Para utilizaci n en el pretratamiento t rmico y digesti n enzim tica de tejidos incluidos en parafina y fijados con formol FFPE antes de la detecci n de la hibridaci n in situ con sondas fluorescentes FISH o de la hibridaci n cromog nica in situ CISH Uso previsto Para el diagn stico in vitro PRECAUCI N no debe emplearse con fines terap uticos en seres humanos ni en animales Un uso distinto del previsto autorizado puede infringir la legislaci n local Material incluido Rea
18. uchsfertig Aufbewahrung Bei 2 8 C aufzubewahren Stabilit t Es gibt keine offensichtlichen Anzeichen f r einen Stabilit tsverlust dieser Reagenzien Ihre umfassende Qualit tskontrolle sichert eine gleichbleibende zuverl ssige Leistung Nicht nach dem auf dem Beh lter aufgedruckten Verfallsdatum verwenden Bei ordnungsgem er Lagerung treten keine wesentlichen Leistungsverluste auf Von den Spezifikationen abweichende Lagerungsbedingungen m ssen vom Benutzer validiert werden Gewebevorbereitung Objekttr ger sollten vor dem Aufbringen von Gewebeschnitten mit Haftmittel behandelt werden Objekttr ger entparaffinisieren und Gewebeschnitte rehydrieren Warmevorbehandlung und Enzymverdauung gem den Empfehlungen der Anleitung die der ISH Sonde beiliegt durchf hren Wenn die Anleitung nicht zur Verf gung steht kann das folgende Verfahren angewendet werden W rmevorbehandlung 1 500 ml Gewebevorbehandlungsl sung Reagenz 1 in einem Becherglas auf einer Kochplatte erhitzen bis sie entweder kocht oder 98 100 C erreicht Objekttr ger 15 min lang kochen Hinweis Je nach verwendetem Gewebefixierungsmittel k nnen verschiedene Inkubationszeiten erforderlich sein Eine Inkubation von 15 Min ist ein empfohlener Ausgangspunkt 2 3 x 2 Min bei Raumtemperatur RT in PBS oder dH20 waschen Enzymverdauung 1 Gewebe f r 10 Min bei RT mit 100 200 ul Enzymreagenz Reagenz 2 bedecken 2 Hinweis Je nach verwendete

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