DCM056-7 CA 19
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1. Dispositif m dical de diagnostic in vitro In vitro Diagnostic Medical Device Dispositivo medico diagnostico in vitro Dispositivos medicos de diagnostico in vitro DE ES FR GB IT PT Hergestellt von Elaborado por Fabriqu par Manufacturer Produttore Produzido por REF DE ES FR GB IT PT Bestellnummer N mero de cat logo R f rences du catalogue Catalogue number Numero di Catalogo N mero do cat logo yyyy mm DE ES FR GB IT PT Herstellungs datum Fecha de fabricacion Date de fabrication Date of manufacture Data di produzione Data de produ o yyyy mm dd DE ES FR GB IT PT Verwendbar bis Establa hasta usar antes de ltimo d a del mes Utiliser avant dernier jour du mois indiqu Use by last day of the month Utilizzare prima del ultimo giorno del mese Utilizar antes ultimo dia do m s DE ES FR GB IT PT Biogef hrdung Riesco biol gico Risque biologique Biological risk Rischio biologico Risco biol gico DE ES FR GB IT PT Gebrauchsanweisung beachten Consultar las instrucciones Consulter le mode d emploi Consult instructions for use Consultare le istruzioni per l uso Consultar instru es para uso DE ES FR GB IT PT Chargenbezeichnung Codigo de lote Num ro de lot Batch code Codice del lotto Codigo do lote xx DE ES FR GB IT PT Ausreichend f r n Tests Contenido suficiente para n tests Contenu suffisan2. bon pronostic et une bonne r ponse au traitement Des valeurs lev es sont en tous les cas relev es galement dans d autres maladies sans tumeurs 2 PRINCIPE DE LA M THODE Le test ELISA pour la CA 19 9 repose sur la capture simultan e du CA 19 9 humain par deux anticorps monoclonaux un immobilis dans la microplaque l autre conjugu de la peroxydase HRP Apr s une p riode donn e d incubation la s paration libre li est obtenue par simple lavage de la phase solide L enzyme pr sent dans la fraction li e catalyse la r action entre le substrat H2O2 et le substrat TMB TMB en d veloppant une coloration bleue qui vire au jaune apr s ajout de la solution d arr t H2SO4 L intensit de la couleur se d veloppant est proportionnelle la concentration de CA 19 9 dans l chantillon La concentration de CA 19 9 dans l chantillon est calcul e sur la base d une courbe d talonnage 3 REACTIFS MATERIAUX ET INSTRUMENTS 3 1 R actifs et mat riaux fournis dans le coffret 1 talon de CA 19 9 6 flacons STD0 3 mL R F DCE002 5606 0 STD1 1 mL R F DCE002 5607 0 STD2 1 mL R F DCE002 5608 0 STD3 1 mL R F DCE002 5609 0 STD4 1 mL R F DCE002 5610 0 STD5 1 mL R F DCE002 5611 0 2 Contr le de CA 19 9 1 flacon 1 mL La concentration du contr le est indiqu sur le certificat de contr le REF DCE045 5603 0 3 Conjugu 1 flacon 12 mL Anticorps anti CA 19 9 conjugu avec de
3. la peroxydase de raifort HRP R F DCE002 5602 0 4 Microplaque coat e 1 microplaque s cable Anticorps anti CA 19 9 adsorb monoclonal dans la microplaque R F DCE002 5603 0 5 Substrat TMB 1 flacon 15 mL H2O2 TMB 0 26 g L viter tout contact avec la peau R F DCE004 0 6 Solution d arr t 1 flacon 15 mL Acide sulfurique 0 15 mol L viter le contact avec la peau R F DCE005 0 7 Solution de lavage conc 10X 1 flacon 50 mL NaCl 160 g L Tween 20 10 g L Tampon phosphat 0 2M pH 7 4 R F DCE054 0 3 2 R actifs n cessaires non fournis dans le coffret Eau distill e 3 3 Mat riaux et instruments auxiliaires Distributeurs automatiques Lecteur pour microplaques 450 nm Remarques Conserver tous les r actifs 2 8 C l abri de la lumi re N ouvrir le sachet du R actif 4 Microplaque Coat e qu apr s l avoir ramen temp rature ambiante et refermez le tout de suite apr s avoir pr lev les bandes utiliser une fois ouvert il est stable jusqu la date d ch ance du coffret viter de d tacher la feuille adh sive des bandes qui ne sont pas utilis es pendant l analyse en cours IVD LOT 4 PR CAUTIONS D USAGE Les r actifs contiennent du Proclin 300R comme conservateur viter l exposition du r actif TMB H2O2 la lumi re directe du soleil aux m taux et aux substances oxydantes Observer la plus grande pr cision dans la reconstitution et la distrib
4. minutes afin d viter tout r sultat incorrect Si vous devez utiliser plus d une microplaque il est conseill de r p ter la courbe d talonnage L ajout de la solution de substrat donne lieu une r action cin tique qui est interrompue par l ajout de la solution de blocage Par cons quent il est n cessaire d ajouter le substrat et la solution bloquante dans la s quence m me afin d liminer toute variation temporelle pendant la r action R actif talon chantillon Contr le Blanc chantillon Contr le 100 L talons S0 S5 100 L Laisser incuber 37 C pendant 1 heure Retirer le contenu de chaque puits laver les puits trois fois avec 300 L de solution de lavage dilu e Conjugu 100 L 100 L Laisser incuber 37 C pendant 1 heure Retirer le contenu de chaque puits laver les puits trois fois avec 300 L de solution de lavage dilu e Substrat TMB 100 L 100 L 100 L Laisser incuber 15 minutes temp rature ambiante 22 28 C l abri de la lumi re Solution d arr t 100 L 100 L 100 L Agiter doucement la microplaque Lire l absorbance E 450 nm par rapport au blanc Les lecteurs de microplaques mesurent dans le sens vertical Ne pas toucher le fond des puits La suppression incompl te de la solution d incubation et de lavage pendant les phases d aspiration ou de d cantation risque de donner des r sultats impurs ou se caract risant par une pauvre
5. reproductibilit des r plicats Utiliser les composants provenant du m me lot Ne pas m langer des r actifs provenant de lots diff rents 7 2 Interpr tation des r sultats Si les r sultats sont labor s automatiquement en utilisant un algorithme de calcul il est utile que les concentrations assign es aux calibrateurs rentrent dans les 10 des concentrations effectives 8 R SULTATS 8 1 Extinction moyenne Calculer l extinction moyenne Em de chaque point de la courbe d talonnage S0 S5 et de chaque chantillon 8 2 Courbe d talonnage Sur un graphique des valeurs d absorbance tracer les valeurs calcul es des extinctions moyennes Em de chaque talon S0 S5 en fonction des concentrations Tracer la meilleur courbe passant par les points d talonnage par ex logistique quatre param tres 8 3 Calcul des r sultats Sur le graphique faire une interpolation des valeurs d absorbance relatives chaque chantillon et en lire la concentration correspondante en U mL 9 VALEURS DE R F RENCE Hommes sains et femmes saines non enceintes 35 U mL 10 PARAM TRES CARACT RISTIQUES 10 1 Pr cision 10 1 1 Intra essai La variabilit l int rieur du m me coffret a t d termin e en r pliquant 10x la mesure de trois chantillons s riques diff rents La variabilit intra essai est 3 4 10 1 2 Inter essai La variabilit entre coffrets diff rents a t d termin e en r pliquant 1
6. 0x la mesure de trois chantillons s riques diff rents appartenant des lots diff rents La variabilit inter essai est 6 6 10 2 Sensibilit La concentration minimale de CA 19 9 mesurable avec le calcul d absorbance d rivant de la moyenne des D O de 20 r plicats de l talon z ro plus 2 d viations standards a t tablie 0 18 U mL 10 3 Sp cificit La sp cificit du pr sent coffret CA 19 9 a t v rifi e en dosant les substances suivantes Antig ne Concentration r activit crois e CA19 9 100 0 CA 15 3 1000 U mL 3 0 CA125 400 U mL Non d tect PSA 100 ng mL Non d tect PAP 1000 ng mL Non d tect AFP 10000 ng mL Non d tect CEA 250 ng mL Non d tect 10 4 Dilution 3 chantillons de s rum avec des taux de CA 19 9 sup rieur 100 U mL ont t dilu s en s rie avec l talon z ro jusqu un taux de dilution de 1 8 La r cup ration en concentration moyenne s est r v l e gale 112 S D 3 1 10 5 R cup ration 3 chantillons s riques avec faibles taux de CA 19 9 ont t charg s avec des concentrations de 200 100 50 25 et 0 U mL de CA 19 9 puis dos s La r cup ration moyenne est de le CA 19 9 ajout a t gal 92 4 S D 8 8 10 6 Corr lation avec autres m thodes La m thode DiaMetra CA 19 9 a t compar e au syst me automatique Roche Modular 22 chantillons de s rum a t dos e et une r gression
7. CA19 9 pour analyses de routine D termination immunoenzymatique du CA 19 9 dans le s rum ou le plasma humain Voir l tiquette externe 96 tests R F DKO056 USAGE PR VU M thode immunoenzymatique colorim trique pour la d termination quantitative de la concentration de CA 19 9 dans le s rum ou le plasma humain Le kit CA 19 9 est destin exclusivement un usage en laboratoire 1 SIGNIFICATION CLINIQUE Le CA 19 9 est le marqueur tumoral du groupe de glycoprot ines de type mucine associ es aux troubles tumoraux gastro intestinaux Les concentrations du CA 19 9 sont plus lev es dans les tumeurs que dans les tissus normaux ou enflamm Des travaux r cents indiquent que le CA 19 9 pr sente fr quemment des valeurs lev es dans les s rums de sujets souffrant de maladies malignes gastro intestinales comme troubles pancr atiques colorectaux ou gastriques et carcinomes h patiques Avec le CEA des valeurs lev es sont relev es dans les n oplasies de la v sicule biliaire Des valeurs lev es persistantes du CA 19 9 pendant les traitements th rapeutiques peuvent indiquer la pr sence de m tastases occultes ou de maladies r siduelles Certaines tudes d montrent que cet antig ne est utile pour le suivi de cette maladie Une hausse des taux de CA 19 9 est associ e un d veloppement progressif de la tumeur et une faible r ponse th rapeutique Une diminution des taux de CA 19 9 laisse envisager un
8. es pr cautions habituelles dans le recueil des chantillons provenant d un pr l vement par voie veineuse Pour une analyse approfondie permettant d tablir des valeurs dans la norme recueillir les chantillons de s rum le matin et jeun Pour obtenir le s rum le sang doit tre recueilli dans un tube de pr l vement par voie veineuse sans additifs ou anticoagulants Attendre que le sang coagule Mettre l chantillon centrifuger pour s parer le s rum des cellules Les chantillons peuvent tre r frig r s 2 8 C pendant une p riode maximale de 5 jours S il n est pas possible de tester les chantillons dans cette p riode ceux ci peuvent tre conserv s des temp ratures allant jusqu 20 C et sur une p riode allant jusqu 30 jours viter les cycles r p t s de cong lation d cong lation Des chantillons microbiologiquement contamin s hautement lip miques ou h molys s ne doivent pas tre utilis s aux fins de cette d termination Les chantillons avec des concentrations sup rieures 240 U mL peuvent tre dilu s avec l talon z ro 5 4 Proc dure Puisqu il faut op rer en double pr parer deux puits pour chaque point de la courbe d talonnage S0 S5 deux pour chaque s rum de contr le ou chantillon un pour le blanc 6 CONTR LE DE QUALIT Chaque laboratoire devrait analyser les chantillons dans la gamme des niveaux lev s normaux et bas d stradiol pour v r
9. ifier les prestations de l analyse Ces chantillons devraient tre trait s comme inconnus et les valeurs d termin es devraient tre dans chaque test effectu Les tableaux de contr le de la qualit devraient tre observ s afin de suivre les prestations des r actifs fournis Des m thodes statistiques appropri es devraient tre employ es pour v rifier la tendance Le laboratoire devrait d finir des limites d acceptabilit des prestations d analyse Les autres param tres qui devraient tre contr l s incluent les interceptions de 80 50 et 20 de la courbe d talonnage pour valuer la reproductibilit De plus la capacit d absorption maximale devrait tre constante avec l exp rience pr c dente La d viation significative par rapport aux prestations tablies peut indiquer un changement non observ des conditions exp rimentales ou une d gradation des r actifs du coffret Des r actifs frais doivent tre utilis s pour d terminer le motif des variations 7 LIMITATIONS DE LA PROC DURE 7 1 Prestations de l analyse viter la contamination microbienne des r actifs Les prestations rapport es ici ont t obtenues en employant les r actifs sp cifiques r pertori s dans ces instructions pour l emploi Il est important de maintenir constants les temps de r action dans chaque puits afin d obtenir les r sultats susceptibles d tre r p t s Le pipetage des chantillons ne doit pas durer plus de 10
10. lin aire de leur concentration a t effectu e avec les r sultats suivants CA 19 9 DiaMetra 1 33 CA 19 9 Roche 18 62 R2 0 808 11 DISPOSITIONS RELATIVES L LIMINATION DES D CHETS Les r actifs doivent tre jet s conform ment aux lois en vigueur BIBLIOGRAPHIE 1 Glenn J et al J Clin Oncol 6 462 8 1988 2 Hayakawa T et al Cancer 61 1827 31 1988 3 Koprowski H et al Science 212 53 5 1981 4 Malesci A et al Gastroenteroglogy 92 60 7 1987 5 Safi F et al Pancreas 2 398 403 1987 6 Steinberg W Am J of Gastroenterology 85 350 355 1990 7 Steinberg W M et al Gastroenterology 90 343 9 1986 8 Takasaki H et al Cancer Res 48 1435 8 1988 9 Tatsuta M et al Cancer 56 2669 73 1985 10 Wang T H et al Pancreas 1 219 23 1986 11 Strom BL et al Int J Cancer 45 821 1990 d 05 2011 DCM056 7 DiaMetra S r l Si ge social Via Garibaldi 18 20090 SEGRATE MI Italie T l 0039 02 2139184 02 26921595 Fax 0039 02 2133354 Fabricant Via Giustozzi 35 35a Z I Paciana 06034 FOLIGNO PG Italie T l 0039 0742 24851 Fax 0039 0742 316197 Courriel info diametra com DIA METRA SRL Mod PIS NOTICE D INFORMATION Spiegazione dei simboli Explanation of symbols Explication des symboles Significado de los simbolos Verwendete Symbole Explica ao dos simbolos DE ES FR GB IT PT In vitro Diagnostikum Producto sanitario para diagn stico In vitro
11. nt aspir Valeurs inexplicablement hors plage contamination des pipettes pointes ou r cipients lavages insuffisants conjugu non enti rement aspir CV intra essai lev les r actifs et ou les bandes n ont pas atteints la temp rature ambiante avant usage le dispositif de lavage pour microplaques ne lave pas correctement suggestion nettoyer la t te du dispositif de lavage CV inter essai lev conditions d incubation non constantes temps ou temp rature contr les et chantillons non distribu s en m me temps avec les m mes intervalles contr ler l ordre de distribution variabilit intrins que des op rateurs
12. t pour n tests Contains sufficient for n tests Contenuto sufficiente per n saggi Cont m o suficiente para n testes DE ES FR GB IT PT Inhalt Contenido del estuche Contenu du coffret Contents of kit Contenuto del kit Conte do do kit Max Min DE ES FR GB IT PT Temperaturbereich L mitaci n de temperatura Limites de temp rature de conservation Temperature limitation Limiti di temperatura Temperaturas limites de conserva o Cont IT GB FR PT ES DE DIA METRA SRL Mod PIS NOTICE D INFORMATION SUGGESTIONS POUR LA R SOLUTION DES PROBL MES D PANNAGE ERREUR CAUSES POSSIBLES SUGGESTIONS Aucune r action colorim trique du dosage non distribution du conjugu contamination du conjugu et ou du substrat erreurs dans l ex cution du dosage par ex distribution accidentelle des r actifs dans le mauvais ordre ou en provenance des mauvais flacons etc R action trop faible DO trop basse conjugu non appropri par ex ne provenant pas du coffret original temps d incubation trop court temp rature d incubation trop basse R action trop intense DO trop lev e conjugu non appropri par ex ne provenant pas du coffret original temps d incubation trop long temp rature d incubation trop lev e mauvaise qualit de l eau utilis e pour la solution de lavage bas degr de d ionisation lavages insuffisants conjugu non enti reme
13. ution des r actifs Ne pas utiliser les r actifs appartenant des lots diff rents Ne pas utiliser des chantillons hautement h molys s Cette m thode permet d tablir les concentrations de CA 19 9 de 0 2 240 0 U mL Si vous utilisez des quipements automatis s est de la responsabilit de l utilisateur de s assurer que le kit a t correctement valid es 5 PROC DURE 5 1 Pr paration des talons S0 S5 Les talons sont pr ts l emploi et pr sentent les concentrations suivantes S0 S1 S2 S3 S4 S5 U mL 0 15 30 60 120 240 Une fois ouvert il est stable 6 mois 2 8 C 5 2 Pr paration de la solution de lavage Avant l usage diluer le contenu du flacon de solution de lavage concentr e 10X avec de l eau distill e jusqu un volume de 500 mL Pour pr parer des volumes moindres respecter le rapport de dilution de 1 10 La solution de lavage dilu e est stable 2 8 C pendant au moins 30 jours Il est possible d observer la pr sence de cristaux dans la solution de lavage concentr e dans ce cas agiter temp rature ambiante jusqu la dissolution compl te des cristaux Pour une plus grande pr cision diluer tout le flacon de la solution de lavage concentr e 500 mL en ayant soin de transf rer galement les cristaux puis agiter jusqu dissolution compl te 5 3 Pr paration de l chantillon Utiliser des chantillons de s rum ou plasma humain et observer l
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