Gram Safranin - Thermo Scientific
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1. Dispositif m dical de diagnostic in vitro Pour usage de laboratoire Lire les instructions avant utilisation IFU mode d emploi Limites de temp rature stockage Code de lot num ro utiliser avant le date de p remption Repr sentant autoris pour l UE Fabricant 12076 Santa Fe Drive Lenexa KS 66215 USA www remel com 800 255 6730 International 913 888 0939 Remel Europe Ltd Clipper Boulevard West Crossways Dartford Kent DA2 6PT UK Pour tout support technique contacter le distributeur local CAS num ro de registre CAS Fabriqu pour Remel Inc CE IFU 40058 r vis e le 2014 01 03 Imprim aux tats Unis remel GRAM SAFRANIN USO PREVISTO La safranina Gram Remel un reagente consigliato per l uso nelle procedure qualitative allo scopo di differenziare gli organismi gram negativi da quelli gram positivi Italiano DESCRIZIONE DEL PRODOTTO Il metodo di colorazione di Gram fu sviluppato nel 1884 dal batteriologo danese Christian Gram allo scopo di differenziare le cellule batteriche dal tessuto infetto Successivamente fu scoperto che la composizione della parete cellulare batterica era la chiave per la colorazione di Gram e che avrebbe differenziato i batteri in due gruppi in base al colore delle cellule dopo la colorazione Da allora sono state eseguite molte modifiche alla tecnica originale PRINCIPIO La colorazione primaria i2. flamme d un bec Bunsen ou recouvrir jusqu d bordement le frottis de m thanol et laisser vaporer 2 Placer la lame sur un portoir coloration et recouvrir de violet de gentiane pour coloration de Gram pendant 1 minute 3 Rincer soigneusement l eau et recouvrir de mordant iode pour coloration de Gram pendant 1 minute 4 Recouvrir jusqu d bordement avec le d colorant pour coloration de Gram jusqu ce que le solvant s coule en un filet clair de la lame 10 80 secondes 5 Rincer l eau et recouvrir de safranine pour coloration de Gram pendant 30 secondes 6 Rincer l eau et laisser s cher INTERPR TATION Les organismes Gram positif sont color s en violet Les organismes Gram n gatif sont color s en rouge CONTR LE DE QUALIT Tous les num ros de lot de safranine de Gram ont t test s et reconnus comme offrant des r sultats de coloration acceptables comme l indique la section Interpr tation Les lames de contr le positive et n gative doivent tre test es avant l utilisation de nouveaux num ros de lots de colorants et de r actif d colorant puis au moins chaque semaine En cas de r sultats de contr le de qualit aberrants ne pas fournir les r sultats des patients LIMITES 1 Tester les contr les positifs et n gatifs avec chaque nouveau num ro de lot de colorants et une fois par semaine par la suite pour v rifier l efficacit des r actifs et s assurer q
3. 17 5 Demineralized Water CAS 7732 18 5 900 0 ml Adjusted as required to meet performance standards PRECAUTIONS Warning Flammable liquid and vapor May cause eye skin and respiratory tract irritation May cause central nervous system depression May cause liver and kidney damage May cause reproductive and fetal effects This product is for n Vitro diagnostic use and should be used by properly trained individuals Precautions should be taken against the dangers of microbiological hazards by properly sterilizing specimens containers and media after use Directions should be read and followed carefully Refer to Material Safety Data Sheet for additional information STORAGE This product is ready for use and no further preparation is necessary Store product in its original container at 20 25 C until used PRODUCT DETERIORATION This product should not be used if 1 the color has changed from red 2 the expiration date has passed or 3 there are other signs of deterioration SPECIMEN COLLECTION STORAGE AND TRANSPORT Specimens should be collected and handled following recommended guidelines MATERIALS REQUIRED BUT NOT SUPPLIED 1 Loop sterilization device 2 Inoculating loop swabs collection containers 3 Incubators alternative environmental systems 4 Supplemental media 5 Quality control organisms 6 Gram Crystal Violet R40052 7 Gram lodine R40056 8 Gram Decolorizer R4005
4. 255 6730 International 913 888 0939 Remel Europe Ltd Clipper Boulevard West Crossways Dartford Kent DA2 6PT UK CE For technical information contact your local distributor CAS Chemical Abstracts Service Registry No Manufactured for Remel Inc IFU 40058 Revised January 03 2014 Printed in the U S A remel GRAM SAFRANIN ANWENDUNGSBEREICH Remel Gram Safranin ist ein Reagens f r qualitative Verfahren zur Unterscheidung gram negativer von gram positiven Organismen Deutsch ZUSAMMENFASSUNG UND ERKL RUNG Die Gram F rbung wurde 1884 von dem d nischen Bakteriologen Christian Gram entwickelt um verschiedene Bakterienzellen von infiziertem Gewebe unterscheiden zu k nnen Sp ter wurde dann festgestellt dass die Gram F rbung durch die Zusammensetzung der bakteriellen Zellwand zustande kommt und die Bakterien entsprechend der Anf rbung in zwei Gruppen eingeteilt werden k nnen Seitdem ist das urspr ngliche Verfahren mehrfach abgewandelt worden TESTPRINZIP Das prim re F rbemittel ist Kristallviolett ein basischer Farbstoff der sehr schnell die Zellwand durchdringt und dadurch von allen Bakterien aufgenommen wird Kristallviolett f rbt die Protoplasten von Bakterien purpurrot Als Beizmittel wird eine Kalium Jod Mischung verwendet die mit dem prim ren Farbstoff in den Zellen einen Komplex bildet In gram positiven Zellen kommt es aufgrund von Alkoholdehydrierung zu einer Verminderung der Zellwandper
5. dei Simboli Codice numero Dispositivo per uso diagnostico in vitro Per uso in laboratorio Consultare le istruzioni per l uso IFU Limitazioni per temperatura Temp di conservazione Codice lotto Numero Lotto Da utilizzare entro data di scadenza Rappresentante autorizzato per l Europa Fabbricante 12076 Santa Fe Drive Lenexa KS 66215 USA www remel com 800 255 6730 International 913 888 0939 Remel Europe Ltd EC REP Clipper Boulevard West Crossways Dartford Kent DA2 6PT UK Per l assistenza tecnica rivolgersi al distributore di zona CAS Numero del registro del Chemical Abstract Service Prodotto per Remel Inc CE IFU 40088 data ultima revisione 2014 01 03 Stampato in U S A remel GRAM SAFRANIN USO PREVISTO La safranina de Gram de Remel es un reactivo de uso indicado en procedimientos cualitativos para diferenciar entre microorganismos gram negativos y grampositivos Espa ol RESUMEN Y EXPLICACI N El m todo de tinci n de Gram fue desarrollado en 1884 por el bacteri logo dan s Christian Gram para diferenciar c lulas bacterianas de tejido infectado Posteriormente se descubri que la clave de la tinci n de Gram estaba en la composici n de la pared de las c lulas bacterianas y que era posible diferenciar las bacterias en dos grupos seg n el color de las c lulas despu s de la tinci n Desde entonces se han realizado numerosas mo
6. mero de cat logo Producto sanitario para diagn stico in vitro Para uso en laboratorio Consultar las instrucciones de uso IFU L mite de temperatura de almacenamiento C digo de lote n mero de lote Fecha de caducidad Representante autorizado en Europa Fabricante 12076 Santa Fe Drive Lenexa KS 66215 USA www remel com 800 255 6730 International 913 888 0939 Remel Europe Ltd Clipper Boulevard West Crossways Dartford Kent DA2 6PT UK CE Para obtener asistencia t cnica p ngase en contacto con su distribuidor local CAS N del Chemical Abstracts Service Registry Fabricado para Remel Inc E Elias IFU 40058 Revisado el 2014 01 03 Impreso en los EE UU
7. 4 9 Glass slides 10 Bunsen burner or slide warmer 11 Microscope immersion oil 12 Staining rack 13 Methanol optional PROCEDURE 1 Make a thin smear of the material for study on a glass slide Allow the slide to air dry completely or use a slide warmer Fix the slide by passing 3 or 4 times through the flame of a Bunsen burner or flood the smear with methanol and allow it to evaporate 2 Place the slide on a staining rack and overlay with Gram Crystal Violet for 1 minute 3 Wash thoroughly with water and overlay with Gram lodine mordant for 1 minute 4 Flood with Gram Decolorizer until the solvent flows colorless from the slide 10 30 seconds 5 Rinse with water and overlay with Gram Safranin for 30 seconds 6 Rinse with water and allow to air dry INTERPRETATION Gram positive organisms stain purple Gram negative organisms stain red QUALITY CONTROL All lot numbers of Gram Safranin have been tested and found to yield acceptable stain results as listed in the Interpretation section Positive and negative control slides should be tested prior to use of new lot numbers of stains and decolorizing reagent and at least weekly thereafter If aberrant quality control results are noted patient results should not be reported LIMITATIONS 1 Test positive and negative controls with each new lot number of stains and weekly thereafter to verify reagent efficacy and ensure that decolorization procedure is performed co
8. a paroi cellulaire provoqu e par une d shydratation produite par de l alcool Les cellules Gram positif sont color es en violet Dans les cellules Gram n gatif le complexe est limin gr ce un d colorant en raison de l augmentation de la perm abilit provoqu e par la solubilit des lipides dans l alcool Le contre colorant utilis doit tre d une couleur contrastante par rapport au colorant principal dans ce cas pr cis il s agit de la safranine qui colore les cellules Gram n gatif en rouge R ACTIFS FORMULE CLASSIQUE Safranine CAS 477 73 6 Alcool thylique 95 CAS 67 17 5 100 0 ml Eau d min ralis e CAS 7732 18 5 900 0 ml Avec compensations ventuelles pour satisfaire les normes de performance 25 g PRECAUTIONS Avertissement Liquide et vapeurs inflammables Risque d irritation de la peau des yeux et des voies respiratoires Possibilit de d pression du systeme nerveux central Atteintes possibles du foie et des reins Effets ventuels sur la reproduction et le foetus Ce produit exclusivement destin a un usage diagnostique in vitro ne doit tre utilis que par des personnes d ment form es Il faut prendre toutes les pr cautions contre les risques microbiologiques et il est indispensable de bien st riliser les pr l vements les r cipients et les milieux apr s usage Il faut lire attentivement les instructions et les respecter scrupuleusement Pour de pl
9. am Crystal Violet eintauchen 3 Gr ndlich mit Wasser auswaschen und eine Minute in Beizmittel Gram lodine eintauchen 4 Gram Decolorizer hinzugeben bis die Farbe vom Objekttr ger abgel st ist 10 30 Sekunden 5 Gr ndlich mit Wasser sp len und 30 Sekunden in Gram Safranin eintauchen 6 Mit Wasser absp len und trocknen lassen INTERPRETATION Gram positive Organismen werden purpurrot angef rbt Gram negative Organismen werden rot angef rbt QUALIT TSKONTROLLE Alle Chargen des Gram Safranin wurden gepr ft und f r tauglich befunden akzeptable F rbeergebnisse zu erzeugen wie sie in Abschnitt Interpretation aufgef hrt sind Positive und negative Kontroll Objekttr ger sollten vor der Verwendung neuer Chargen von Farbstoffen und Entf rbereagenz sowie anschlie end mindestens w chentlich getestet werden Treten im Rahmen der Qualit tskontrolle abweichende Ergebnisse auf d rfen die Patientenergebnisse nicht verwendet werden BESCHR NKUNGEN 1 Positive und negative Kontrollen bei jeder neuen Charge des F rbemittels und eine Woche danach testen um die Wirksamkeit des Reagens zu best tigen und um zu gew hrleisten dass das Entf rbeverfahren ordnungsgem durchgef hrt wird 2 Die zuverl ssigsten Ergebnisse werden erreicht wenn Isolate aus klinischen Proben einer 18 24 Stunden alten Kultur auf einem nicht selektiven Medium wachsen 3 Beim Fixieren die Objekttrager nicht berhitzen UbermaBige Erw rm
10. bstracts Service Hergestellt f r Remel Inc IFU 40058 berarbeitete Fassung vom 2014 01 03 Printed in the USA remel GRAM SAFRANIN APPLICATION La safranine pour coloration de Gram de Remel est un r actif recommand dans le cadre des proc dures qualitatives pour dift rencier les organismes Gram n gatif des organismes Gram positif Francais R SUM ET EXPLICATION La coloration de Gram doit son nom au bact riologiste danois Christian Gram qui mit au point le protocole en 1884 pour diff rencier les cellules bact riennes des tissus infect s Par la suite on a d couvert que la composition de la paroi des cellules bact riennes expliquait la coloration de Gram et permettait de diff rencier les bact ries en deux groupes selon la couleur de la cellule apr s coloration Depuis cette technique a connu de nombreuses modifications PRINCIPE Le violet de gentiane ou cristal violet sert de colorant principal il s agit d un colorant basique absorb par toutes les bact ries en raison de son aptitude p n trer rapidement travers la paroi cellulaire Il colore le cytoplasme des bact ries en violet Le mordan age s effectue grace un m lange d iode et de potassium qui forme un complexe avec le colorant principal pr sent dans la cellule Dans les cellules Gram positif le complexe violet de gentiane iode est pi g l int rieur de la cellule en raison d une diminution de la perm abilit de l
11. colorazioni e settimanalmente verificare l efficacia e controllare che la procedura di decolorazione venga eseguita correttamente 2 Per ottenere risultati pi affidabili rimuovere gli isolati di campione clinico da una coltura di 18 24 ore in crescita su un terreno non selettivo 3 Durante il fissaggio dei vetrini non surriscaldare gli strisci Un riscaldamento eccessivo dar luogo ad una colorazione atipica 4 Gli organismi gram positivi contenuti in un campione possono apparire gram negativi se il paziente sta seguendo una terapia antimicrobica 5 Il cristalvioletto precipitato pu apparire come forme coccoidi o elementi fungini nonch come artefatti o materiale di sfondo di altra natura BIBLIOGRAFIA 1 Bartholomew J W and T Mittwer 1952 Bacteriol Rev 16 1 29 2 Mittwer T J W Bartholomew and B J Kallman 1950 Stain Technol 25 169 179 3 Bartholomew J W and T Mittwer 1951 Stain Technol 26 231 240 4 Forbes B A D F Sahm and A S Weissfeld 2007 Bailey and Scott s Diagnostic Microbiology 12 ed Mosby Elsevier St Louis MO 5 Isenberg H D 2004 Clinical Microbiology Procedures Handbook 2 ed Vol 1 ASM Washington D C 6 Mangels J l M E Cox and L H Lindberg 1984 Diagn Microbiol Infect Dis 2 129 137 CONFEZIONE REF R40058 Gram Safranin REF R40059 Gram Safranin REF R40079 Gram Safranin flacone da 250 mL mL 5 per confezione 3 8 L ca Legenda
12. dificaciones en la t cnica original 2 PRINCIPIO DEL ENSAYO La tinci n principal es violeta cristal un colorante b sico absorbido por todas las bacterias debido a su capacidad de permear r pidamente en la pared celular Ti e el protoplasto de la bacteria de color morado La mezcla de potasio y yodo es el mordiente que se combina con la tinci n principal en la c lula En las c lulas grampositivas el complejo violeta cristal yodo queda atrapado en ellas debido a una reducci n en la permeabilidad de la pared celular causada por la deshidrataci n con alcohol Las c lulas grampositivas se ti en de color morado En las c lulas gramnegativas el complejo es eliminado por el decolorante debido a un aumento en la permeabilidad causado por la solubilidad de los l pidos en alcohol La contratinci n utilizada debe ser un color que contraste con la tinci n principal En este caso se utiliza safranina que ti e las c lulas gramnegativas de color rojo REACTIVOS F RMULA CL SICA Saitanitia CAS47 738 0222 mr ey Alcohol etilico al 95 CAS 67 17 5 ie Agua desmineralizada CAS 7732 18 5 Ajustado seg n necesidades para cumplir los est ndares de ai PRECAUCIONES Advertencia Liquido y vapor inflamables Puede irritar los ojos la piel y las v as respiratorias Puede producir depresi n del sistema nervioso central Puede producir da o hep tico y renal Puede tener efectos nocivos en la reproducci n y el feto E
13. gado del material de estudio sobre un portaobjetos de vidrio Deje que el portaobjetos se seque al aire completamente o utilice un calentador de portaobjetos Fije el portaobjetos pas ndolo 3 6 4 veces por la llama de un mechero de Bunsen o empape el frotis con metanol y deje que se evapore 2 Coloque el portaobjetos sobre una gradilla de tinci n y cubra con violeta cristal de Gram durante 1 minuto 3 Lave bien con agua y cubra con mordiente de yodo de Gram durante 1 minuto 4 Cubra con decolorante de Gram hasta que el disolvente fluya incoloro del portaobjetos de 10 a 30 segundos 5 Aclare con agua y cubra con safranina de Gram durante 30 segundos 6 Aclare con agua y deje secar INTERPRETACI N Los microorganismos grampositivos se ti en de color morado Los microorganismos gramnegativos se ti en de color rojo CONTROL DE CALIDAD Todos los n meros de lote de safranina Gram se han analizado y se ha determinado que ofrec an resultados de tinci n aceptables seg n se indica en la secci n Interpretaci n Los portaobjetos de control positivo y negativo deben analizarse antes de usar los nuevos n meros de lote de tinciones y de reactivo decolorante y al menos una vez a la semana en lo sucesivo Si se observan resultados an malos en el control de calidad no deben comunicarse los resultados del paciente LIMITACIONES 1 Pruebe el control positivo y el control negativo cada vez que reciba un lote nuevo de tinci n y po
14. itung gebrauchsfertig Es sollte in seinem Originalbeh lter bei 20 25 C bis zum Gebrauch aufbewahrt werden BEEINTR CHTIGUNG DER PRODUKTQUALIT T Dieses Produkt darf 1 bei Ver nderung der roten Farbe 2 beim berschreiten des Verfallsdatums und 3 beim Auftreten anderer Anzeichen eines Qualit tsverlusts nicht mehr verwendet werden PROBENENTNAHME LAGERUNG UND TRANSPORT Die Probenentnahme und handhabung sollte unter Ber cksichtigung der folgenden empfohlenen Richtlinien durchgef hrt werden BEN TIGTE MATERIALIEN NICHT IM LIEFERUMFANG ENTHALTEN 1 Ger t zur Sterilisation der Inokulationsschlinge 2 Inokulation sschlinge Abstrichbesteck Probenbeh lter 3 Inkubatoren andere Klimasysteme 4 zus tzliche Transportmedien 5 Qualit tskontroll organismen 6 Crystal Violet R40052 7 Gram lodine R40056 8 Gram Decolorizer R40054 9 Glas Objekttr ger 10 Bunsen brenner oder Objekttr gerheizger t 11 Mikroskop Immersions l 12 F rbegestell 13 Methanol optional VERFAHREN 1 Das zu untersuchende Material auf einem Glas Objekttr ger d nn ausstreichen Die Objekttr ger an der Luft vollst ndig trocknen lassen bzw ein Objekttr gerheizger t verwenden Objekttr ger fixieren Dazu 3 oder 4 Mal durch die Flamme eines Bunsen brenners ziehen oder den Ausstrich mit Methanol tr nken und anschlie end verdunsten lassen 2 Objekttr ger in ein F rbegestell einsetzen und eine Minute lang in Gr
15. l cristal violetto un colorante basico assorbito da tutti i batteri a causa della sua capacit di penetrare rapidamente nella parete cellulare Esso colora di porpora il protoplasto dei batteri La miscela di potassio iodio il mordente che forma un complesso con la colorazione primaria nelle cellule Nelle cellule gram positive il complesso viola cristallo iodio viene catturato nelle cellula a causa di una diminuzione di permeabilit della parete cellulare provocata dalla disidratazione dell alcol Pertanto le cellule gram positive si colorano di porpora Nelle cellule gram negative il complesso viene rimosso dal decolorante a causa di un aumento di permeabilit provocato dalla solubilit dei lipidi nell alcol Il colorante di contrasto utilizzato deve essere di un colore contrastante la colorazione primaria e in questo caso si tratta di safranina che colora di rosso le cellule gram negative REAGENTI FORMULA CLASSICA SAO AAA oe ee said Alcol etilico al 95 CAS 67 17 5 ss Acqua demineralizzata CAS 7732 18 5 PRECAUZIONI Avvertenza Liquido e vapore infiammabili Pu causare irritazione a occhi cute e vie respiratorie Pu causare depressione del sistema nervoso centrale Pu causare danni al fegato e ai reni Pu causare effetti riproduttivi e avere ripercussioni sul feto Il prodotto indicato esclusivamente per uso diagnostico in vitro e deve essere utilizzato solo da personale competente ed esperto Si racco
16. manda di adottare le dovute precauzioni contro eventuali rischi microbiologici sterilizzando opportunamente dopo l uso campioni contenitori e terreni di coltura Leggere con attenzione le istruzioni contenute in questo documento e attenervisi scrupolosamente Per ulteriori informazioni consultare la Scheda di Sicurezza del prodotto CONDIZIONI DI CONSERVAZIONE Questo prodotto pronto per l uso e non necessita di ulteriore preparazione Conservare il prodotto nel contenitore originale ad una temperatura pari a 20 25 C fino al momento dell utilizzo DETERIORAMENTO DEL PRODOTTO Questo prodotto non deve essere usato se 1 il colore non pi rosso 2 trascorsa la data di scadenza o 3 sono presenti altri segni di deterioramento PRELIEVO CONSERVAZIONE E TRASPORTO DEI CAMPIONI Prelevare e trattare i campioni seguendo le linee guida raccomandate MATERIALE NECESSARIO MA NON FORNITO 1 Dispositivo di sterilizzazione per anse 2 ansa per inoculo tamponi contenitori di prelievo 3 termostato o sistemi per la formazione di atmosfere modificate 4 terreni di coltura supplementari 5 organismi per il controllo qualit 6 Cristal violetto di Gram R40052 7 iodio Gram R40056 8 decolorante Gram R40054 9 vetrini 10 becco di Bunsen o riscaldatore per vetrini 11 microscopio olio di immersione 12 rack per colorazione 13 metanolo opzionale PROCEDIMENTO 1 Eseguire uno striscio sottile del materiale
17. meabilit t wodurch der Kristallviolett Jod Komplex in der Zelle verbleibt Gram positive Zellen werden purpurrot angef rbt In gram negativen Zellen kommt es aufgrund der L slichkeit von Lipiden in Alkohol zu einem Anstieg der Zellwandpermeabilit t wodurch der Komplex von dem Entf rbemittel entfernt wird Die verwendete Gegenf rbung muss eine Kontrastfarbe zur prim ren F rbung hervorbringen In diesem Fall ist Safranin der Farbstoff der die gram negativen Zellen rot f rbt REAGENZIEN KLASSISCHE REZEPTUR Safranin CAS 477 73 6 g Ethanol 95 CAS 67 17 5 100 0 ml Vollentsalztes Wasser CAS 7732 18 5 900 0 ml An die Erf llung der jeweiligen Leistungsstandards angepasst VORSICHTSMASSNAHMEN Achtung Fl ssigkeit und D mpfe sind entflammbar Kann Reizungen von Augen Haut und Atemwegen ausl sen Kann das Zentralnervensystem beeintr chtigen Kann Leber und Nieren sch digen Kann die Fortpflanzungsf higkeit beeintr chtigen und F ten sch digen Dieses Produkt ist f r die Verwendung in der In vitro Diagnostik bestimmt und darf nur von entsprechend geschulten Personen verwendet werden Mikrobiologischen Gefahren sollte vorgebeugt werden indem Proben Beh lter und Transportmedien nach Gebrauch sterilisiert werden Die Gebrauchsanweisung muss sorgf ltig gelesen und genau befolgt werden Zus tzliche Informationen finden Sie im Sicherheitsdatenblatt LAGERUNG Dieses Produkt ist ohne weitere Vorbere
18. per lo studio sul vetrino Lasciare asciugare completamente all aria il vetrino oppure utilizzare un riscaldatore per vetrini Fissare il vetrino passando 3 o 4 volte attraverso la fiamma di un becco di Bunsen oppure irrigare lo striscio con metanolo e lasciarlo evaporare 2 Posizionare il vetrino su un rack per colorazione e coprirlo con Cristal violetto di Gram per 1 minuto 3 Lavarlo completamente con acqua e coprirlo con il mordente di iodio Gram per 1 minuto 4 irrigare con il decolorante Gram finch il solvente non scorre privo di colorazione dal vetrino 10 30 secondi 5 Sciacquare con acqua e coprire con safranina Gram per 30 secondi 6 Sciacquare con acqua e lasciare asciugare INTERPRETAZIONE Gli organismi gram positivi si colorano di porpora Gli organismi gram negativi si colorano di rosso CONTROLLO QUALIT Tutti i numeri di lotto di safranina Gram sono stati esaminati ed stato riscontrato che forniscono risultati di colorazione accettabili come quelli elencati nella sezione Interpretazione vetrini di controllo positivo e negativo devono essere esaminati prima di utilizzare nuovi numeri di lotto di colorante e di reagente decolorante e almeno una volta a settimana dopo l utilizzo Se i test di controllo qualit forniscono risultati aberranti i risultati ottenuti con i campioni in esame non devono essere refertati LIMITAZIONI 1 Esaminare i controlli positivi e negativi con ogni nuovo numero di lotto di
19. remel GRAM SAFRANIN INTENDED USE Remel Gram Safranin is a reagent recommended for use in qualitative procedures to differentiate gram negative from gram positive organisms English SUMMARY AND EXPLANATION The Gram stain method was developed in 1884 by the Danish bacteriologist Christian Gram to differentiate bacterial cells from infected tissue Later it was discovered that the bacterial cell wall composition was the key to the Gram stain and would differentiate bacteria into two groups based on cell color after staining Since that time there have been many modifications of the original technique PRINCIPLE The primary stain is crystal violet a basic dye taken up by all bacteria due to its ability to rapidly permeate the cell wall It stains the protoplast of bacteria purple The potassium iodine mixture is the mordant which complexes with the primary stain in the cell In gram positive cells the crystal violet iodine complex is trapped in the cell due to a decrease in cell wall permeability caused by alcohol dehydration Gram positive cells are stained purple In gram negative cells the complex is removed by the decolorizer due to an increase in permeability caused by solubility of the lipids in alcohol The counterstain used must be a contrasting color to the primary stain and in this case it is safranin which stains gram negative cells red REAGENTS CLASSICAL FORMULA Safranin CAS 477 73 6 Ethyl Alcohol 95 CAS 67
20. rrectly 2 Remove clinical specimen isolates from an 18 24 hour culture growing on nonselective medium to obtain the most reliable results 3 Do not overheat smears when fixing slides Excessive heating will cause atypical staining 4 Gram positive organisms contained in a specimen may appear gram negative if the patient is on antimicrobial therapy 5 Precipitated crystal violet can appear as coccoid shapes or fungal elements as well as other artifacts or background material BIBLIOGRAPHY 1 Bartholomew J W and T Mittwer 1952 Bacteriol Rev 16 1 29 2 Mittwer T J W Bartholomew and B J Kallman 1950 Stain Technol 25 169 179 3 Bartholomew J W and T Mittwer 1951 Stain Technol 26 231 240 4 Forbes B A D F Sahm and A S Weissfeld 2007 Bailey and Scott s Diagnostic Microbiology 12 ed Mosby Elsevier St Louis MO 5 Garcia L S 2010 Clinical Microbiology Procedures Handbook 3 ed American Society for Microbiology Washington D C 6 Mangels J I M E Cox and L H Lindberg 1984 Diagn Microbiol Infect Dis 2 129 137 PACKAGING REF R40058 Gram Safranin REF R40059 Gram Safranin REF R40079 Gram Safranin 250 ml Btl 250 ml Btl 5 Pk Gallon Symbol Legend Temperature Limitation Storage Temp Batch Code Lot Number Use By Expiration Date Authorized European Representative Manufacturer 12076 Santa Fe Drive Lenexa KS 66215 USA www remel com 800
21. ste producto es para uso diagn stico in vitro y debe ser utilizado por personal con la formaci n adecuada Deben tomarse precauciones frente a los riesgos microbiol gicos esterilizando correctamente las muestras envases y medios despu s de su uso Se deben leer y seguir atentamente las instrucciones Consultar m s informaci n en la Hoja de Datos de Seguridad del Material ALMACENAMIENTO Este producto se presenta listo para su uso y no requiere m s preparaci n Almacene el producto en su envase original a una temperatura de 20 a 25 C hasta el momento de su uso DETERIORO DEL PRODUCTO Este producto no se debe usar si 1 el color ha cambiado y ya no es rojo 2 se ha sobrepasado la fecha de caducidad o 3 hay otros signos de deterioro OBTENCI N ALMACENAMIENTO Y TRANSPORTE DE MUESTRAS Las muestras se deben usar y manipular de acuerdo con las siguientes recomendaciones MATERIALES NECESARIOS PERO NO SUMINISTRADOS 1 Asa para esterilizaci n 2 asa de inoculaci n torundas y envases para recogidas 3 incubadoras sistemas ambientales alternativos 4 medios complementarios 5 microorganismos de control de calidad 6 violeta cristal de Gram R40052 7 yodo de Gram R40056 8 decolorante de Gram R40054 9 portaobjetos de vidrio 10 mechero de Bunsen o calentador de portaobjetos 11 microscopio aceite de inmersi n 12 gradilla de tinci n 13 metanol opcional PROCEDIMIENTO 1 Prepare un frotis del
22. steriormente de forma semanal para comprobar la eficacia del reactivo y asegurarse de realizar correctamente el procedimiento de decoloraci n 2 Para obtener los resultados m s fiables retire los in culos de muestras cl nicas de un cultivo de 18 a 24 horas en un medio no selectivo 3 No caliente los frotis de forma excesiva cuando fije los portaobjetos El calor excesivo producir una tinci n at pica 9 6 4 Los microorganismos grampositivos contenidos en una muestra pueden parecer gramnegativos si el paciente est recibiendo terapia antimicrobiana 5 Puede aparecer violeta de metilo precipitado con forma de coco o elementos f ngicos as como otros artefactos o material de fondo BIBLIOGRAF A 1 Bartholomew J W and T Mittwer 1952 Bacteriol Rev 16 1 29 2 Mittwer T J W Bartholomew and B J Kallman 1950 Stain Technol 25 169 179 3 Bartholomew J W and T Mittwer 1951 Stain Technol 26 231 240 4 Forbes B A D F Sahm and A S Weissfeld 2007 Bailey and Scott s Diagnostic Microbiology toi ed Mosby Elsevier St Louis MO 5 Isenberg H D 2004 Clinical Microbiology Procedures Handbook 2nd ed Vol 1 ASM Washington D C 6 Mangels J I M E Cox and L H Lindberg 1984 Diagn Microbiol Infect Dis 2 129 137 PRESENTACI N REF R40058 Gram Safranin REF R40059 Gram Safranin REF R40079 Gram Safranin 250 ml frasco 250 ml frasco 5 unidades envase S mbolos N
23. ue la proc dure de d coloration est r alis e ad quatement 2 Pour obtenir les r sultats les plus fiables retirer les isolats des pr l vements d une culture de 18 24 h poussant sur un milieu non s lectif 3 Ne pas surchauffer les frottis au moment de les fixer sur les lames Une chaleur excessive provoque une coloration atypique 4 Les organismes Gram positif contenus dans un pr l vement risquent de se r v ler n gatifs si le patient suit un traitement antimicrobien 5 5 Le cristal violet pr cipit peut prendre une forme coccoide ou l apparence d lements fongiques mais aussi d autres art facts ou mat riaux d arri re plan BIBLIOGRAPHIE Le Bartholomew J W and T Mittwer 1952 Bacteriol Rev 16 1 29 2 Mittwer T JW Bartholomew and B J Kallman 1950 Stain Technol 25 169 179 3 Bartholomew J W and T Mittwer 1951 Stain Technol 26 231 240 4 Forbes B A D F Sahm and A S Weissfeld 2007 Bailey and Scott s Diagnostic Microbiology 12 ed Mosby Elsevier St Louis MO Isenberg H D 2004 Clinical Microbiology Procedures Handbook 2 ed Vol 1 ASM Washington D C 6 Mangels J l M E Cox and L H Lindberg 1984 Diagn Microbiol Infect Dis 2 129 137 a CONDITIONNEMENT REF R40058 Gram Safranin REF R40059 Gram Safranin REF R40079 Gram Safranin 250 ml flacon 250 ml flacon 5 paquet Gallon 3 8 I L gende des Symboles Num ro de r f rence
24. ung f hrt zu atypischen Farbeergebnissen 4 In einer Probe enthaltene gram positive Organismen k nnen als gram negativ erscheinen wenn der Patient Antibiotika einnimmt 5 Pr zipitiertes Kristallviolett kann als kokkoide Formen oder Pilzelemente aber auch als andere Artefakte oder Backgroundmaterial erscheinen LITERATURANGABEN 1 Bartholomew J W and T Mittwer 1952 Bacteriol Rev 16 1 29 2 Mittwer T J W Bartholomew and B J Kallman 1950 Stain Technol 25 169 179 3 Bartholomew J W and T Mittwer 1951 Stain Technol 26 231 240 4 Forbes B A D F Sahm and A S Weissfeld 2007 Bailey and Scott s Diagnostic Microbiology 12 ed Mosby Elsevier St Louis MO 5 Isenberg H D 2004 Clinical Microbiology Procedures Handbook 2 ed Vol 1 ASM Washington D C 6 Mangels J I M E Cox and L H Lindberg 1984 Diagn Microbiol Infect Dis 2 129 137 PACKUNGSGR SSE REF R40058 Gram Safranin 250 ml Fl schchen REF R40059 Gram Safranin 250 ml Fl schchen 5 Packg REF R40079 Gram Safranin 1 Gallone 3 8 I Symbollegende ne ese E peus o Cal ju 12076 Santa Fe Drive sal Lenexa KS 66215 USA www remel com 800 255 6730 International 913 888 0939 Remel Europe Ltd EC REP Clipper Boulevard West Crossways Dartford Kent DA2 6PT UK CE Bei technischen Fragen wenden Sie sich bitte an Ihren zust ndigen Vertriebspartner CAS Chemical A
25. us amples renseignements consulter la fiche de donn es de s curit CONSERVATION Ce produit est pr t l emploi aucune pr paration suppl mentaire n est n cessaire Conserver ce produit dans son flacon d origine entre 20 et 25 C jusqu son utilisation D T RIORATION DU PRODUIT Ce produit ne doit pas tre utilis si 1 la couleur rouge a chang 2 la date de p remption est d pass e ou 3 d autres signes de d t rioration sont pr sents RECUEIL CONSERVATION ET TRANSPORT DES PR L VEMENTS Les pr l vements doivent tre recueillis et manipul s conform ment aux recommandations en vigueur MATERIEL REQUIS MAIS NON FOURNI 1 Dispositif de st rilisation pour anses 2 Anse amp inoculation anse de platine couvillons r cipients de pr l vement 3 Incubateurs autres systemes environnementaux 4 Milieux suppl ment s 5 organismes de contr le de qualit 6 Violet de gentiane pour coloration de Gram R40052 7 lode pour coloration de Gram R40056 8 D colorant pour coloration de Gram R40054 9 Lames de verre 10 Bec Bunsen ou platine chauffante 11 Microscope huile immersion 12 Portoir coloration 13 M thanol optionnel PROC DURE 1 R aliser un talement fin frottis du mat riau tudier sur une lame de verre Laisser la lame s cher compl tement a l air libre ou utiliser une platine chauffante Fixer la lame en la passant 3 ou 4 fois au dessus de la
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