ACE - BIO 2000
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1. G n ralit s L antig ne carcino embryonnaire ou ACE est une glycoprot ine monom re d un poids mol culaire d environ 180 KD compos e pour 45 60 d hydrates de carbone Comme l AFP alpha f toprot ine ACE appartient au groupe des antig nes carcino embryonnaires produits durant la p riode embryonnaire et f tale Le g ne de l ACE appartient une famille de 17 g nes actifs compos s de deux sous groupes le groupe des Non specific Cross reacting Antigens NCA dans lequel se trouve le g ne de l ACE et le groupe des Pregnancy Specific Glycoproteins PSG L ACE est pr sent essentiellement dans le tractus gastro intestinal et le s rum du f tus On peut en d tecter de faibles quantit s dans les tissus intestinaux pancr atiques et h patiques de l adulte sain La synth se de l ACE est r prim e apr s la naissance dans le s rum d adultes sains l ACE est de ce dait peine d tectable Des concentrations lev es d ACE sont fr quemment observ es lors de carcinomes colo rectaux Des concentrations moyennement lev es rarement sup rieures 10 ng ml sont trouv es chez 20 50 des patients pr sentant des affections de l intestin du pancr as du foie et du poumon cirrhose du foie h patite chronique pancr atite colite ulc reuse maladie de Crohn emphys me par ex Les fumeurs pr sentent galement une l vation du taux d ACE L indication principale du dosage de l AC2. Une diff rence de potentiel appliqu e l lectrode d clenche la production de luminescence qui est mesur e par un photomultiplicateur e Les r sultats sont obtenus l aide d une courbe de calibration Une courbe de r f rence est m moris e dans le code barres du r actif et est r ajust e pour l analyseur utilis par une calibration en deux points Ru bpy Tris 2 2 bipyridyl ruth nium il R actifs Contenu du coffret et concentrations Coffret CEA Elecsys R f 11731629 100 tests M Microparticules tapiss es de streptavidine 1 flacon contenant 6 5 mI bouchon transparent microparticules tapiss es de streptavidine 0 72 mg ml capacit de liaison 470 ng de biotine mg de microparticules conservateur R1 Anticorps anti ACE biotine 1 flacon contenant 10 mI bouchon gris anticorps anti ACE monoclonal homme souris marqu la biotine 3 0 mg l tampon phosphate 100 mmol l pH 6 0 conservateur R2 Anticorps anti ACE Ru bpy 1 flacon contenant 8 ml bouchon noir anticorps anti ACE monoclonal de souris marqu au ruth nium 4 0 mg l tampon phosphate 100 mmol l pH 6 5 conservateur Pr cautions d emploi et mises en garde Pour diagnostic in vitro Observer les pr cautions habituelles de manipulation en laboratoire L limination de tous les d chets doit tre effectu e conform ment aux dispositions l gales 919 Elecsys 1010 2010 MODULAR ANALYTICS E170 Pr paration des r
3. actifs Les r actifs contenus dans le coffret sont pr ts l emploi et ne peuvent tre utilis s s par ment Toutes les informations n cessaires au d roulement du test sont m moris es sur les codes barres des flacons r actifs et doivent saisies Conservation et stabilit Conservation 2 8 C Ranger le coffret CEA Elecsys en position verticale de mani re ce que toutes les microparticules soient rassembl es lors de l homog n isation qui pr c de l analyse Stabilit Avant ouverture entre 2 et 8 C jusqu la date de p remption indiqu e Apr s ouverture entre 2 et 8 C douze semaines Sur E170 et Elecsys 2010 six semaines Sur Elecsys 1010 quatre semaines conservation altern e au r frig rateur et dans l appareil 20 25 flacons ouverts au maximum 20 heures Pr l vement et pr paration des chantillons Seuls les chantillons suivants ont t test s S rum recueilli sur tube standard ou contenant un gel s parateur Plasma recueilli sur h parinate de sodium EDTA tripotassique ou citrate de sodium En cas d utilisation de plasma recueilli sur h parinate de sodium ou sur citrate de sodium les r sultats obtenus doivent tre corrig s de 10 Crit re d acceptabilit recouvrement 90 110 de la valeur du s rum ou pente 0 9 1 1 coefficient de corr lation gt 0 95 ordonn e l origine lt 2 x limite de d tection analytique Stabilit sept jours entre 2 et 8 C
4. dans Samples From the Patient to the Laboratory GIT Verlag Darmstadt 1996 10 ISBN 3 928865 22 6 Pour de plus amples informations se r f rer au manuel d utilisation des analyseurs MODULAR ANALYTICS E170 Elecsys 1010 et Elecsys 2010 ainsi qu aux notices d utilisation CEA CalSet PreciControl Universal PreciControl Tumor Marker et Diluent Universal Q Modification importante Les modifications concernant les donn es contenues dans le code barres doivent tre entr es manuellement o 1 CE 2002 02 il Roche Diagnostics GmbH D 68298 Mannheim
5. rapport la premi re pr paration internationale de l O MSS 1st IRP WHO Reference Standard 73 6011 Le code barres du flacon r actif contient toutes les informations sp cifiques de la calibration du lot la courbe de r f rence y est m moris e Le r ajustement de la courbe pour l appareil utilis est effectu l aide des 2 solutions CEA CalSet Elecsys Fr quence de calibration Effectuer une calibration par lot en utilisant un r actif frais ayant t enregistr au maximum 24 heures par l appareil Une nouvelle calibration est recommand e pour E170 Elecsys 2010 e apr s un mois 28 jours pour un m me lot de r actifs e apr s sept jours pour un m me flacon de r actif rest sur l appareil Elecsys 1010 e chaque nouveau coffret e apr s sept jours une temp rature ambiante entre 20 et 25 C e apr s sept jours une temp rature ambiante entre 25 et 32 C E170 Elecsys 1010 et Elecsys 2010 e quand elle s av re n cessaire par ex si les r sultats des s rums de contr le se situent en dehors des limites de confiance Validation de la calibration Le logiciel de l appareil v rifie la validit de la courbe et affiche les anomalies Contr le de qualit Utiliser PreciControl Universal 1 et 2 ou PreciControl Tumor Marker 1 et 2 ou d autres s rums de contr le appropri s ll est recommand de doser les s rums de contr le en simple au moins une fois par 24 heures pendant une
6. routine pour chaque nouveau coffret et lors d une calibration Cette fr quence peut varier selon les exigences du laboratoire Les r sultats doivent se situer dans les limites de confiance Chaque laboratoire tablira la proc dure suivre si les r sultats sont situ s en dehors des limites de confiance Expression des r sultats E170 Elecsys 1010 et Elecsys 2010 calculent automatiquement le taux d ACE de chaque chantillon Les r sultats sont exprim s au choix en ng ml ou en pg l 1 ng ml d ACE correspond 16 9 mUl mi Limites d utilisation Interf rences La bilirubine lt 660 mg l ou 66 mg dl l h molyse Hb lt 2 2 g dl la lip mie lt 15 g l ou 1500 mg dl la biotine lt 120 ng ml n influencent pas le r sultat crit re d acceptabilit recouvrement 10 par rapport la valeur initiale Chez les patients trait s par de fortes doses de biotine gt 5 mgpjour il est recommand d effectuer le pr l vement de l chantillon au moins 8 heures apr s la derni re administration Le r sultat n est pas influenc par le facteur rhumato de jusqu 1 500 U ml Il n a pas t observ d effet crochet pour des concentrations lt 200 000 ng ml L influence de 26 m dicaments fr quemment administr s a t recherch e in vitro aucune interf rence n a t observ e Comme pour tous les tests contenant des anticorps monoclonaux de souris on peut obtenir des r sultats erron s avec des
7. six mois 20 C Pour la stabilit du s rum pr lev sur tubes gel s parateur se conformer aux indications donn es par le fabricant des tubes Les chantillons qui contiennent un pr cipit doivent tre centrifug s avant l analyse Ne pas utiliser d chantillons inactiv s par la chaleur Ne pas utiliser d chantillons ou solutions de contr les stabilis s par de l azide S assurer avant l analyse que la temp rature des chantillons des calibrate urs et des contr les se situe 20 25 C En raison des risques d vaporation il est recommand de doser les chantillons les contr les et les calibrateurs dans les deux heures qui suivent leur mise en place sur les analyseurs CEA Elecsys R actifs et mat riel n cessaires Contenu du coffret R f 11731629 Coffret CEA Elecsys pour 100 tests eM Microparticules tapiss es de streptavidine e R1 Anticorps anti ACE biotine e R2 Anticorps anti ACE Ru bpy 3 R actifs et mat riel auxiliaires n cessaires e R f 11731645 CEA CalSet Elecsys 4 x 1 ml e R f 11776452 PreciControl Tumor Marker Elecsys PreciControl Tumor Marker 1 2 x 3 ml et PreciControl Tumor Marker 2 2 x 3 ml e R f 11731416 PreciControl Universal Elecsys PreciControl Universal 1 pour 2 x 3 ml et PreciControl Universal 2 pour 2 x 3 ml e R f 11732277 Diluent Universal Elecsys 2 x 18 ml milieu de dilution de l chantillon ou R f 03183971 Diluent Universal Elecsys 2 x
8. 10 0 LOOEZZEZ6L 20 2002 SEUL CEA ACE Antig ne carcino embryonnaire 11731629 Avertissement Le taux d ACE dans un chantillon de patient peut tre plus ou moins lev selon le test pratiqu Le compte rendu du laboratoire doit donc toujours pr ciser la m thode de dosage de l ACE utilis e Les taux d ACE d un patient obtenus partir de diff rentes m thodes ne peuvent tre compar s ceci pouvant conduire des erreurs d interpr tation m dicale En cas de changement de m thode au cours du suivi th rapeutique les taux d ACE doivent tre confirm s pendant une p riode transitoire en effectuant des dosages en parall le par les deux m thodes Pour les Etats Unis conform ment la l gislation des Etats Unis ce produit ne peut tre vendu ou distribu qu des laboratoires d analyses m dicales et ce uniquement sur ordre d un m decin Son utilisation est exclusivement r serv e aux m decins ou aux laboratoires d analyses sur prescription m dicale 100 tests Domaine d utilisation Test immunologique pour la d termination quantitative in vitro de l antig ne carcino embryonnaire dans le s rum et le plasma humains Le test CEA Elecsys est utilis pour le suivi th rapeutique de patients atteints de cancer Ce test par lectrochimiluminescence ECLIA est adapt aux dosages immunologiques sur les analyseurs Elecsys 1010 2010 et MODULAR ANALYTICS E170 module Elecsys de Roche
9. 40 ml milieu de dilution de l chantillon e Equipement habituel de laboratoire e Elecsys 1010 2010 ou MODULAR ANALYTICS E170 Mat riel auxiliaire pour Elecsys 1010 et Elecsys 2010 e R f 11662988 ProCell Elecsys 6 x 380 ml tampon syst me R f 11662970 CleanCell Elecsys 6 x 380 ml solution de lavage pour la cellule de mesure R f 11930346 SysWash Elecsys 1 x 500 ml additif la solution de lavage R f 11933159 Adaptateur pour SysClean R f 11706829 Assay Cup Elecsys 1010 12 x 32 cuvettes r actionnelles ou R f 11706802 Assay Cup Elecsys 2010 60 x 60 cuvettes r actionnelles e R f 11706799 Assay Tip Elecsys 2010 30 x 120 embouts de pipette Mat riel auxiliaire pour MODULAR ANALYTICS E170 e R f 12135019 ProCell M 1 x 2 l tampon syst me e R f 12135027 CleanCell M 1 x 2 I solution de lavage pour la cellule de mesure e R f 03023141 PC CC Cups 50 godets pour la thermor gulation de ProCell M et CleanCell M e R f 03005712 ProbeWash M 12 x 70 ml solution de lavage pour la fin de la s rie et pour le rin age en cas de changement de r actif e R f 12102137 AssayCups AssayTips Combimagazin M 48 blocs de 84 tubes essai embouts de pipettes sacs pour d chets e R f 03023150 WasteLiner sacs pour d chets e R f 03027651 SysClean Adapter M adaptateur pour SysClean M Pour les trois appareils e R f 11298500 SysClean Elecsys 5 x 100 ml solution de lavage pour la cellule de mesur
10. 52 11 6 4 6 S rum humain 3 626 11 8 1 9 699 34 8 5 0 PreciControl TM 1 4 38 0 10 2 5 4 74 0 24 5 1 PreciControl TM 2 33 8 0 73 2 0 34 9 1 71 4 9 Sensibilit limite de d tection analytique 0 20 ng ml La limite de d tection correspond au taux le plus faible d ACE mesurable qui puisse tre diff renci de z ro Elle repr sente la concentration du standard le plus faible de la courbe de r f rence 2s calibrateur de r f rence standard 1 2s pr cision intra s rie n 21 Sp cificit analytique L anticorps monoclonal utilis pr sente les r actions crois es suivantes NCA1 lt 0 7 NCA2 72 On n a pas observ de r actions crois es avec l a glycoprot ine acide ni avec l AFP Les r actions crois es avec les glycoprot ines du foie et des poumons n ont pas t tudi es Comparaison de m thodes Une comparaison du test CEA Elecsys y avec le test Enzymun Test CEA x effectu e sur des s rums de patients hospitalis s a permis d obtenir les corr lations suivantes Nombre d chantillons analys s 108 Passing Bablok R gression lin aire y 0 06 0 91x y 0 04 0 90x r 0 99 r 0 99 s md68 0 556 Sy x 1 236 Les concentrations des chantillons taient situ es entre env 0 7 et 52 ng ml Bibliographie 1 Gold P Freedman SO Demonstration of tumorspecific antigen in human colonic carcinomata J Exp Med 1965 121 3 439 2 Thompson JA Molecular cloning and e
11. E est le suivi th rapeutique des carcinomes colo rectaux Le dosage de l ACE n est pas recommand pour le d pistage syst matique de cancers au sein de la population Des concentrations en ACE situ es dans le domaine de r f rence n excluent pas la pr sence d une affection maligne Les anticorps du coffret r agissent avec l ACE et comme la plupart des tests de d termination de l ACE avec l antig ne m conium NCA2 5 La r action crois e avec le NCA1 est de 0 7 Les pitopes de l ACE ont t caract ris s et les anticorps monoclonaux disponibles reconnaissent 6 groupes d pitopes Les anticorps du coffret CEA Elecsys r agissent avec les groupes 2 et 5 Principe du dosage M thode sandwich Dur e totale du cycle analytique 18 minutes e e incubation Une prise d essai de 10 pl d chantillon est mise en pr sence de l anticorps monoclonal anti ACE sp cifique marqu la biotine et d un anticorps monoclonal anti ACE marqu au ruth nium II se forme un sandwich e 2 incubation Les microparticules tapiss es de streptavidine sont ajout es dans la cuvette r actionnelle Le complexe immunologique est fix la phase solide par une liaison Streptavidine biotine e Le m lange r actionnel est transf r dans la cellule de mesure les microparticules sont maintenues au niveau de l lectrode par un aimant L limination de la fraction libre est effectu e par le passage de ProCell
12. e Disponible uniquement aux Etats Unis e R f 11776754 CEA CalCheck Elecsys trois niveaux de concentration Mode op ratoire Pour garantir le bon fonctionnement du test se conformer au mode d emploi de l appareil utilis et v rifier que les r actifs les solutions auxiliaires et les consommables n cessaires la r alisation du test sont disponibles en quantit suffisante L analyseur effectue automatiquement l homog n isation des microparticules Les informations sp cifiques du test m moris es sur l tiquette code barres doivent tre saisies Si exceptionnellement le code barres ne peut tre lu par l appareil saisir manuellement la s rie des 15 chiffres inscrits sur l tiquette E170 Elecsys 2010 porter les r actifs r frig r s env 20 C avant le chargement et les placer dans le plateau r actifs de l appareil thermostat 20 C Eviter la formation de mousse L analyseur g re le contr le de la temp rature l ouverture et la fermeture des flacons seuel CEA ACE Antig ne carcino embryonnaire Elecsys 1010 porter les r actifs r frig r s env 20 25 C et les placer dans le plateau r actifs chantillons de l appareil temp rature ambiante 20 25 C Eviter la formation de mousse Ouvrir les flacons avant la mise en route de l analyseur puis les refermer et les replacer au r frig rateur apr s la s rie de dosage Calibration Le test CEA Elecsys a t calibr par
13. s rums de patients ayant re u des anticorps monoclonaux de souris dans un but th rapeutique ou de diagnostic Dans de rares cas des titres d anticorps anti streptavidine et anti ruth nium tr s lev s peuvent conduire des interf rences Ces risques sont toutefois minimis s dans le test CEA Elecsys Pour le diagnostic les r sultats du test CEA Elecsys doivent toujours tre confront s aux donn es de l anamn se du patient au tableau clinique et aux r sultats des autres examens Domaine de mesure 0 200 1000 ng ml d fini par la limite de d tection et le maximum de la courbe de r f rence Les taux situ s au dessous de la limite de d tection sont exprim s de la mani re suivante lt 0 200 ng ml et les taux situ s au dessus du domaine de mesure de la mani re suivante gt 1000 ng ml ou gt 50 000 ng ml pour les chantillons dilu s 1 50 Dilution des chantillons Les chantillons pr sentant une concentration gt 1000 ng ml peuvent tre dilu s au 1 50 dans le milieu de dilution Diluent Universal manuellement ou automatiquement sur l appareil La concentration obtenue avec l chantillon dilu doit tre gt 20 ng ml Les analyseurs E170 Elecsys 1010 et Elecsys 2010 g rent la dilution et le calcul du r sultat Si la dilution est effectu e manuellement multiplier le r sultat obtenu par le facteur de dilution Domaines de r f rence Lors d une tude effectu e avec le test CEA Elecsys sur une popula
14. tion de 314 sujets sains 95 des valeurs taient lt 3 4 ng l Pour les 132 sujets fumeurs de l tude le seuil de normalit a t calcul s par ment et se situait 4 3 ng ml Chaque laboratoire devra v rifier la validit de ces valeurs de r f rence et tablir ses propres valeurs selon la population examin e Performances analytiques Pr cision Les r sultats indiqu s ci dessous ont t obtenus avec des analyseurs Elecsys Les r sultats obtenus au laboratoire peuvent diff rer de ceux ci La pr cision a t d termin e l aide de pools de s rums humains et de s rums de contr le chaque chantillon a t analys 6 fois par jour pendant 10 jours n 60 selon un protocole modifi EP5 A du N C C L S National Committee for Clinical Laboratory Standards pr cision intra s rie sur E170 n 21 616 1973223001 06 07 Elecsys 1010 2010 MODULAR ANALYTICS E170 Elecsys 1010 2010 Pr cision intra s rie Pr cision inter s rie Echantillon x s CV s CV ng ml ng ml ng ml S rum humain 1 2 2 0 11 5 0 0 12 5 4 S rum humain 2 19 6 0 32 1 6 0 44 2 3 S rum humain 3 528 6 82 1 3 10 6 2 0 PreciControl TM 1 4 9 0 12 2 5 0 18 3 6 PreciControl TM 2 34 1 0 58 1 7 1 02 3 0 E170 Pr cision intra s rie Pr cision inter s rie Echantillon x s CV x s CV ng ml ng ml ng ml ng m S rum humain 1 3 32 0 05 1 3 3 90 0 18 4 7 S rum humain 2 225 2 53 1 0 2
15. xpression of carcinoembryonic antigen gene family mem bers Tumor Biol 1995 16 10 16 3 Hammarstr m S et al Antigenic sites in carcinoembryonic antigen Cancer Research 1989 49 4852 4858 4 Bormer OP Thrane Steen K Epitope group specific of six immunoassays for carcinoembryonic antigen Tumor Biol 1991 12 9 15 5 Kuroki M et al Reaction profiles of seven enzyme immunoassay kits for carcinoembryonic antigen CEA analyzed with purified preparations of CEA and related normal antigens Clin Biochem 1992 25 29 35 6 Fateh Moghadam A Stieber P Sensible use of tumor markers Boehringer Mannheim 1994 Cat No 1536869 7 Sell SS Serological Cancer Markers Humana Press 1992 ISBN 0 89603 209 4 8 Ballesta AM Molina R Filella X Jo J Gimenez N Carcinoembryonic Antigen in Staging and Follow up of Patients with Solid Tumors Tumor Biol 1995 16 32 41 9 Documentation de Roche 10 Passing H Bablok W A New Biometrical Procedure for Testing the Equality of Measurements from Two Different Analytical Methods J Clin Chem Clin Biochem 1983 21 709 720 Passing H Bablok W Comparison of Several Regression Procedures for Method Comparison Studies and Determination of Sample Sizes J Clin Chem Clin Biochem 1984 22 431 445 12 Bablok W et al A General Regression Procedure for Method Transformation J Clin Chem Clin Biochem 1988 26 783 790 13 Guder WG Narayanan S Wisser H Zawta B List of Analytes Pre analytical Variables Bro chure
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