SeroCPה - IgG - Savyon Diagnostics
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1. 20 ll est fortement conseill de tester des chantillons s riques limpides et non h molys s car ils sont susceptibles de donner des r sultats moins reproductibles Technique de Dosage Remarques a Les composants de cette trousse ont t test s comme formant une unit indissociable Ne pas m langer les composants issus de diff rents lots de trousses ou de trousses provenant d autres fabricants b La temp rature de tous les r actifs doit tre quilibr e avec la temp rature ambiante avant leur utilisation Le Diluant pour S rum et le Diluant pour Conjugu deviennent g latineux lorsqu ils sont r frig r s Si cela s av re n cessaire il est possible d acc l rer la liqu faction en chauffant ces composants 37 C pendant plusieurs minutes Des cristaux de sel peuvent se former dans le Tampon de Lavage Concentr lorsque celui ci est conserv entre 2 et 8 C Il faut dissoudre de nouveau compl tement ces cristaux en les chauffant 37 C avant la dilution c Ne pas r aliser le test en pr sence de vapeurs r actives par exemple des vapeurs se M111 01F 04 10 13 d gageant de substances acides alcalines ou ald hydiques ou de poussi re dans la mesure o l activit enzymatique des IgG Anti Humain conjugu es la PR peut tre affect e d Ne pas toucher la surface des barrettes Ne pas toucher les bords des puits avec les embouts de la pipette au moment de distribuer le2. and Treatment of Chlamydial Infections in Pregnant Women and Infants Review of Infectious Diseases 4 8747 6 Saikku P Mattila K Nieminen M S Huttunen J K Leinonen M Ekman M R Makela P H and Valtonen V 1988 Serological evidence of an association of a novel Chlamydia TWAR with chronic coronary heart disease and acute myocardial infection Lancet Il 983 986 7 Sarov l Kleinman D Cevenini R Holcber G Potashnik G Sarov B and Insler V 1986 Specific IgG and IgA Antibodies to Chlamydia trachomatis in Infertile Women Int J Fertil 31 193 197 8 Csango P A Sarov B Schiotz H Sarov I 1988 Comparison Between Cell Culture and Serology for Detecting Chlamydia trachomatis in women seeking abortion J Clin Pathol 41 89 92 9 Tsunekawa t and Kumamoto Y 1989 A Study of IgA and IgG Titers of C trachomatis in Serum and Prostatic Secretion in Chronic Prostatitis J J A Inf Dis 63 130 137 10 Kletter Y Caspi D Yarom M Sarov B Sarov I And Tanay A 1988 Serum IgA and IgG Antibodies Specific to Chlamydia in Patients with Reiters Syndrome RS In Proceedings of the European Society for Chlamydia Research Societa Editrice Esculapio Bologna p 170 Obelis s a European Authorized Representative Center Boulevard G n ral Wahis 53 1030 Brussels Belgium Tel 32 2 732 59 54 Fax 32 2 732 60 03 e mail mail obelis net EC REP M111 01
3. syndrome de Guillain Barre 6 C psittaci affecte une grande vari t d esp ces h tes allant des mollusques aux oiseaux et aux mammif res et provoque aussi des pneumonies s v res Des tests de s rodiagnostic qui reposent sur des marqueurs immunologiques sp cifiques servent d outil de diagnostic non invasif pour identifier la fois les infections distales et les infections profondes 7 On a mis en vidence que des titres lev s d anticorps IgG anti Chlamydia taient le signe d une infection active chlamydiae 3 8 Des taux lev s d anticorps IgG anti Chlamydia ont une valeur diagnostique dans les infections chroniques ou syst miques telles que les salpingites l infertilit m canique la p rih patite l pididymite le syndrome de Fiessinger Leroy Reiter et la pneumopathie 3 9 10 Les Laboratoires Savyon Diagnostics ont mis au point un dosage par la m thode ELISA qui permet de d tecter des anticorps IgG sp cifiques dirig s contre Chlamydia Le test SeroELISA permettant de d celer Chlamydia est fond sur le s rotype L de C trachomatis large r activit antig nique ll permettra de d tecter les anticorps de C trachomatis C psittaci et C pneumoniae TWAR Principe du Test Le s rum humain a analyser est mis en contact avec la substance antig nique dont sont rev tus les puits de microtitration L anticorps sp cifique lorsqu il est pr sent dans le s rum du patie
4. 20 au vingti me avec de l eau distill e Par Exemple Pour une barrette pr parer 100ml de Tampon de Lavage 5ml de Tampon de Lavage Concentr avec 95ml d eau distill e Agiter doucement pendant 20 minutes Il faut pr parer une solution de travail base de tampon de lavage avant l emploi et jeter l exc dent 3 Apr s incubation remplir chaque puits jusqu la moiti avec de la solution de Tampon de Lavage 4 Laisser tremper pendant 2 minutes puis jeter le contenu des puits R p ter ces tapes cinq fois 5 Egoutter la surface des barrettes et du cadre en les tapotant doucement au dessus de papier absorbant Le lavage complet des puits apr s l incubation est une tape essentielle pour obtenir des r sultats optimum Il ne faut pas laisser de traces de Tampon de Lavage dans les puits B C 10 11 12 D 13 14 15 16 Incubation des Echantillons de S rum et des T moins Diluer chaque s rum de patient au 1 256 avec du Diluant pour S rum comme suit 1 16 Ajouter 10ul de s rum de patient 150 de Diluant pour S rum 1 256 Ajouter 10ul de la dilution au1 16 150ul de Diluant pour S rum Les T moins sont fournis sous forme de r actifs pr ts l emploi et il est inutile de les diluer D poser la pipette 50ul de T moin Positif de T moin Faiblement Positif et de T moin N gatif pr ts l emploi et de la dilution au 1 256 du s rum de patient dans
5. C 0483 SeroELISA Chlamydia IgG Dosage par la M thode ELISA ELISA destin a d tecter les anticorps IgG sp cifiques dirig s contre les Chlamydiae pr sents dans le s rum humain Mode d Emploi Trousse de test pr vue pour 96 d terminations N 111 01 du Catalogue Destin au Diagnostic in Vitro Pour usage professionnel uniquement A conserver entre 2 et 8 C Ne pas congeler Savyon Diagnostics Ltd 3 Habosem St Ashdod 77610 ISRAEL Tel 972 8 8562920 Fax 972 8 8523176 E Mail support savyondiagnostics com Usage Pr vu La trousse du test SeroELISA des IgG anti Chlamydia est congue pour la d termination des anticorps IgG sp cifiques dirig s contre les Chlamydiae pr sents dans un seul chantillon de s rum humain o pour valuer des s rums appari s l aide d un dosage par la m thode ELISA Destin au Diagnostic n Vitro Introduction Chlamydia est une bact rie intracellulaire obligatoire gram n gatif responsable de pathologies aigu s et chroniques chez les mammif res et les esp ces aviaires Le genre Chlamydia est compos de quatre esp ces C trachomatis C pneumoniae C psittaci et C pecorum C trachomatis se divise en 15 s rotypes 1 Les s rotypes A B Ba et C sont les agents du trachome 2 le facteur responsable de la c cit end mique qui peut tre pr venue et qui s vit dans les pays du tiers monde Les s rotypes L1 Ls sont le
6. F 04 10 13 6
7. des puits distincts correspondants des barrettes de test D poser la pipette 50ul de Diluant pour S rum dans un puits pour avoir la valeur du blanc La distribution la pipette des t moins et des chantillons de s rum dans les puits ne doit pas durer plus de 10 minutes Couvrir les barrettes avec un couvercle de plaque et mettre incuber pendant 30 minutes 37 C dans une chambre humide Jeter le liquide contenu dans les puits Laver les puits cinq fois et goutter les comme dans les tapes A 3 5 Incubation en pr sence de Conjugu D poser la pipette de 50ul de solution de travail d lgG Anti Humaines conjugu es la PR dans chaque puits Couvrir les barrettes avec un couvercle de plaque et mettre incuber pendant 30 minutes 37 C dans une chambre humide Jeter le liquide contenu dans les puits laver les cinq fois et goutter les comme dans les tapes A 3 5 Incubation en pr sence de Substrat TMB D poser la pipette 100ul de Substrat TMB dans chaque puits Couvrir les barrettes avec un couvercle de plaque et mettre a incuber a temp rature ambiante pendant 15 minutes Arr ter la r action en ajoutant 100 ul d une solution d arr t pour chromog ne dans chaque puits D poser la solution d arr t pour chromog ne selon la m me s quence et en respectant les m mes intervalles de temps que pour le Substrat TMB dans l tape D15 Etalonner le spectrophotom tre sur le puits cont
8. enant le blanc D terminer l absorption 450nm et enregistrer les r sultats Il est recommand de d terminer l absorption imm diatement mais ce n est pas obligatoire La d termination de l absorption ne doit pas durer plus de 30 minutes apr s l arr t de la r action du chromog ne M111 01F 04 10 13 Crit res d acceptabilit du Test Le test est valide si L absorption du T moin Positif est gt 0 8 a 450nm L absorption du T moin Faiblement Positif est gt 0 4 450nm L absorption du T moin N gatif est lt 0 15 450nm Si ces conditions ne sont pas remplies le test n est pas valide et doit tre r alis de nouveau Calcul de la Valeur Seuil CVS La valeur seuil se calcule selon la formule suivante CVS 0 154 x Pc Nc Nc Pc Absorption du T moin Positif a 450 nm Nc Absorption du T moin N gatif a 450 nm Interpr tation des R sultats du Test Absorption a Interpr tatio Titre d lgG 450nm n des anti R sultats Chlamydia estim Inf rieur au CVS N gatif lt 256 0 03 CVS 0 03 Equivoque 256 Au dessus du CVS Faiblement 256 512 0 03 Jusqu au Positif T moin Faiblement Positif Au dessus du Positif 1024 2048 T moin Faiblement Positif jusqu au T moin Positif Au dessus du Hautement gt 2048 T moin Positif Positif Tester de nouveau les chantillons de s rum qualifi s d quivoque
9. m langeur Vortex 9 Un bain marie a 37 C quip d un couvercle ou une chambre humide plac e dans un incubateur 37 1 C 10 Lecteur de test ELISA quip d un filtre de 450 nm 11 Eau distill e ou d sionis e pour la dilution du Tampon de Lavage Concentr Conservation et Dur e de Conservation des R actifs Tous les produits fournis doivent tre conserv s entre 2 et 8 C S ils sont conserv s entre 2 et 8 C les r actifs du test sont stables jusqu la date d expiration figurant sur l emballage de la trousse Une exposition des composants qui au d part taient scell s ou dot s d un bouchon la temp rature ambiante pendant quelques heures n endommagera pas les r actifs NE PAS CONGELER Lorsqu une trousse est entam e la dur e de conservation du produit d origine est de 60 jours partir du premier jour d ouverture Une fois ouvert le sachet en papier d aluminium contenant les barrettes doit tre scell avec une bande adh sive Il ne faut pas retirer le petit paquet de produit d shydratant Collecte des Echantillons Il faut pr lever les chantillons de s rum de fa on aseptique et les conserver entre 2 et 8 C en pr sence d azoture de sodium 0 05 NaN3 comme conservateur au cas o ils devraient tre analys s quelques jours plus tard Pour des p riodes plus longues il faut conserver des fractions aliquotes des chantillons de s rum a
10. nt se lie l antig ne fix un complexe se forme et tous les composants s riques non sp cifiques sont limin s par lavage dans la phase de lavage De la peroxydase de raifort PR conjugu e des IgG anti humaines sp cifiques de la cha ne y est ajout e dans les puits Si au cours de l tape pr c dente un complexe antig ne anticorps s est form l anticorps conjugu la peroxydase se liera la portion de l anticorps du complexe Si au cours de l tape pr c dente il ne s est pas form de complexe antig ne anticorps le conjugu est limin par lavage dans la phase de lavage Du substrat TMB est ajout Une r action positive est signal e par une couleur allant du bleu au bleu profond qui se d veloppe dans les puits du test a la suite de la r action enzymatique de la portion de la peroxydase avec le peroxyde et le r actif du chromog ne Ensuite la r action enzymatique est arr t e par adjonction d une solution acide L absorption des puits du test est d termin e 450 nm l aide d un spectrophotom tre L absorption 450 nm donne des indications sur le titre des IgG anti Chlamydia pr sentes dans les chantillons s riques des patients technique ne peux garantir linnocuit absolue des mat riels test s ceux ci doivent donc tre manipul s comme potentiellement infectieux selon les recommandations publi es dans le manuel S curit biologique dans les lab
11. ontre Chlamydia psittaci Chlamydia pneumoniae TWAR et Acinetobacter calcoaceticus peuvent tre d tect s par ce test ELISA La valeur significative des titres des chantillons doit tre consid r e en regard des caract ristiques de la population qui est analys e Ces caract ristiques engloberont entre autres facteurs l ge la situation g ographique et le comportement sexuel Ce test ne fournira pas d indications sur le site de s l infection s par chlamydia s Il n est pas suppos remplacer l isolement sur culture cellulaire si celui ci est disponible L absence d anticorps s riques mesurables n exclut pas de mani re d finitive le risque d une infection chlamydiae Un s rum contamin par des bact ries ou un s rum hyperlip mique peut donner lieu des r sultats erron s R actions crois es Des patients hospitalis s infect s par des agents pathog nes Neisseria gonorrhea Staphylococcus aureus et 3 ainsi que par Adenovirus et Peptostreptococcus anaerobiius diagnostiqu s par des tests s rologiques commercialis s ont t aussi tudi s avec la SeroELISA Chlamydia La plupart des s rums ont t trouv s n gatifs il n a pas t d tect de r actions crois es significatives Bibliographie Caract ristiques des Performances On a compar le test SeroELISA pour IgG anti Chlamydia au test IPAzyme pour IgG IgA anti Chlamydia Prod
12. oratoires de microbiologie et de biologie m dicale 1988 de CDC NIH National Institute of Health Institut National de la Sant am ricain La Solution de Substrat Chromog ne est un produit irritant pour la peau et les muqueuses Eviter tout contact direct Destin au Diagnostic In vitro Contenu de la Trousse Technique de Dosage 1 Antig ne de S rum r agissant Chlamydia positivement aux Fix ala Phase IgG Anti Chlamydia Solide Ag Ab v Complexe AgAb 2 Complexe AgAb IgG Abe anti humaines conjugu es ala PR Complexe AgAb Ab2 3 Complexe Substrat TMB AgAb Ab Y Solution Bleue Solution d Arr t du Chromog ne Solution Jaune D termination de l Absorption 450 nm Avertissement et Pr cautions Avertissement LA SUBSTANCE ANTIGENIQUE DE CHLAMYDIA A ETE INACTIVEE ET NE CONTIENT PAS D ORGANISMES VIVANTS DETECTABLES TOUTEFOIS IL FAUT MANIPULER ET ELIMINER LES BARRETTES COMME S IL S AGISSAIT D UN MATERIEL DE LABORATOIRE POTENTIELLEMENT DANGEREUX SUR LE PLAN BIOLOGIQUE Pr cautions Ce kit contient des s rums humains qui ont t test s par des techniques approuv es par la FDA Food and Drug Administration lls ont t trouv s d pourvus d antig ne HBs d ac VIH 1 et 2 et anti HCV comme aucune M111 01F 04 10 13 8 9 10 11 Plaque pour microtitration pr alablement enduite 96 puits par unit Cha
13. que sachet contient une plaque de microtitration comprenant 12 barrettes amovibles dans un cadre en plastique Chaque barrette est enduite d antig nes de Chlamydia 1 Unit T moin Positif s rum humain positif vis vis des anticorps IgG anti Chlamydia Pr t l emploi 1 Fiole 2 0ml T moin Faiblement Positif s rum humain faiblement positif vis vis des anticorps IgG anti Chlamydia Pr t l emploi 1 Fiole 2 0ml T moin n gatif S rum humain n gatif vis vis des anticorps IgG anti Chlamydia Pr t l emploi 1 Fiole 2 0ml IgG Anti Humaines Conjugu es de la PR sp cifiques de la cha ne y Pr t l emploi 1 Fiole 10ml Diluant pour S rum Pr t l emploi 1 Flacon 40ml Tampon de Lavage Concentr x20 1 Flacon 100ml Substrat TMB Pr t l emploi 1 Fiole 14ml Solution d arr t 1M H2804 Pr te l emploi 1 Flacon 15ml Couvercle de Plaque 1 Unit Mode d Emploi 1 Mat riel N cessaire mais Non Fourni 1 2 oOo Tubes a essais et portoirs pour effectuer les dilutions des s rums de patients Micropipettes r glables ou pipettes multicanaux gammes de 5 50 50 200 et 200 1000ul et embouts jetables Pipettes en plastique jetables tailles assorties et dispositifs de s curit pour pipeter Une fiole jaug e d un litre Une prouvette gradu e de 50ml Un laveur ou un flacon de lavage pour les plaques ELISA Serviettes en papier ou papier absorbant Un
14. s Si le r sultat est de nouveau quivoque il est recommand de tester un autre chantillon de ce s rum Valeur Significative des R sultats L exp rience clinique et des tudes r centes indiquent que des taux lev s d anticorps IgG dirig s contre Chlamydia peuvent servir de marqueur pour une infection active ou chronique par Chlamydia D termination du Titre Final Pour le suivi du profil immunitaire d un patient il faut comparer les chantillons de s rum pr lev s pendant la phase aigu et pendant la convalescence Un titrage de s rums appari s doit tre r alis avec les deux chantillons de s rum test s dans la m me s rie La dilution la plus lev e de s rum ayant l absorption au dessus de la valeur seuil du test est le titre final Comparaison du test SeroELISA et du test IPAzyme SeroELISA Positif N gatif Total IPAzyme Positif 116 8 124 N gatif 10 194 204 Total 126 202 328 Limites du Dosage Concordance globale 310 328 x 100 94 5 Un test s rologique unique ne peut tre utilis comme seul crit re de diagnostic Toutes les donn es cliniques et biologiques doivent tre prises en compte Le test est un test ELISA un seul s rotype L2 L comprend des d terminants antig niques qui existent dans les s rotypes de Chlamydia trachomatis ainsi que l antig ne du groupe Des anticorps dirig s c
15. s agents du lymphogranuloma venereum Les s rotypes D K sont la cause la plus fr quente de l infection g nitale sexuellement transmissible a travers le monde cervicite endom trite salpingite 3 chez la femme et ur thrite 4 chez l homme et chez la femme Les endom trites salpingites peuvent induire une occlusion tubaire associ e un risque sup rieur de M111 01F 04 10 13 grossesse extra ut rine et d infertilit L infection g nitale peut tre responsable d une infection aigu et persistante ventuellement sans aucun sympt me clinique G n ralement ces infections peuvent tre trait es d s qu elles sont diagnostiqu es Toutefois en absence de tout traitement l infection peut voluer vers une inflammation chronique s v re conduisant une infertilit une grossesse ectopique des avortements r p tition et des naissances pr matur es De plus les nourrissons de m res infect es peuvent contracter l infection lors de la naissance ce qui peut conduire des conjonctivites ou des pneumonies 5 C pneumoniae est chez l homme un agent pathog ne des voies respiratoires important qui est responsable de plus de 10 des cas de pneumonies communautaires On a montr que cette bact rie tait associ e des maladies respiratoires aigu s la pneumonie l asthme aux bronchites aux pharyngites au syndrome pulmonaire aigu de la dr panocytose a l insuffisance coronarienne et au
16. s r actifs e Utiliser des pipettes embouts jetables Eviter la contamination crois e entre les r actifs f Tapoter sur la surface du flacon pour lib rer le liquide qui pourrait tre retenu dans le bouchon g Eviter de pi ger des bulles d air dans les puits h R partir les liquides lentement afin d viter toute projection i Les s rums du T moin Positif du T moin Faiblement Positif et du T moin N gatif doivent tre trait s avec les chantillons de s rums chaque fois que le test est r alis j A chaque test il faut consacrer un puits par test pour disposer d une valeur de blanc k Toutes les tapes de la technique doivent tre r alis es s quentiellement sans interruption Technique du Test Manuelle Proc dure sur automate disponible sur demande A Lavage des Barrettes Il est recommand de proc der un pr lavage des barrettes mais celui ci n est pas obligatoire Dans tous les cas il faut humidifier les barrettes l aide d une solution de Tampon de Lavage avant d appliquer les chantillons tester et les goutter en les tapotant au dessus de papier absorbant avant de proc der au test Si le laveur automatique pour les plaques ELISA est inutilisable il convient de r aliser la technique comme suit 1 Retirer le nombre requis de barrettes de leurs sachets en papier d aluminium et ins rez les dans le cadre de la plaque 2 Diluer le tampon de Lavage Concentr 1
17. uit de la Soci t Savyon Diagnostics N de Cat 011 01 qui est test s rologique reconnu pour d celer la pr sence des anticorps IgG dirig s contre Chlamydia La population ayant fait l objet de l tude comprenait des patients chez lesquels des infections dues a Chlamydia taient suspect es ainsi que des individus sains n 328 Les r sultats sont r sum s de la mani re suivante M111 01F 04 10 13 1 Yuan Y Zhang Y X Watkins N G and Caldwell H D 1989 Nucleotide and Deduced Amino Acid Sequences for the Four Variable Domains of the Major Outer Membrane Proteins of the 15 Chlamydia trachomatis Serovars Infection and Immunity 57 1040 1049 Copyright 1989 American Society for Microbiology 2 Treharne J D 1985 The community epidemiology of trachoma Rev Infect Dis 7 760 763 3 Piura B Sarov l Sarov B Kleinman D Chaim W and Insler V 1985 Serum IgG and IgA antibodies specific for Chlamydia trachomatis in salpingitis patients as determined by the immunoperoxidase assay Eur d Epidemiol 1 110 116 4 Wang S P Grayston J T Kuo C C Alexander E R and Holmes K K 1977 SeroDiagnosis of Chlamydia trachomatis infection with the microimmunofluorescence test In Nongonoccolcal urethritis and related infection D Hobson and K K Holmes Eds P American Society for Microbiology Washington DC p 237 248 5 Thompson Ill S E and Dretler R H 1982 Epidemiology
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