BRONCHITE INFECTIEUSE AVIAIRE
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1. une PCR ou RT PCR suivie d une RFLP analyse du polymorphisme des fragments de restriction sont utilis es fr quemment pour identifier un isolat de VBI D autres techniques peuvent aussi tre utilis es les cellules pr sentes dans le liquide allanto dien des ufs infect s peuvent tre test es en immunofluorescence pour la recherche de l antig ne du VBI 12 et l examen direct en microscopie lectronique en contraste n gatif permet de r v ler les particules virales ayant l aspect caract ristique des coronavirus dans les liquides allanto diens ou le milieu de culture des CAT Manuel terrestre de l OIE 2008 d e Chapitre 2 3 2 Bronchite infectieuse aviaire apr s concentration La pr sence du VBI dans le liquide allantoidien peut tre d tect e par amplification avec la RT PCR et l emploi d une sonde ADN dans un test dot hybridation 32 Le marquage direct par immunofluorescence des CAT permet une d tection rapide du VBI 3 L immunohistochimie avec l emploi d anticorps monoclonaux AcM sp cifiques de groupe peut aussi permettre d identifier le VBI sur les membranes chorioallantoidiennes infect es 43 Identification des s rotypes La variation antig nique entre les souches du VBI sont tr s fr quentes 11 16 23 28 31 mais il n existe pas actuellement de classification d finitive sur laquelle tout le monde s accorde N anmoins les relations et les diff rences antig niques entre les2. bronchitis virus J Clin Microbiol 30 79 84 Manuel terrestre de VOIE 2008 495
3. moins une dilution pr s viii Les s rums sont habituellement consid r s comme positifs s ils pr sentent un titre gal ou sup rieur 2 Cependant il faut noter que parfois dans les levages EAPS une tr s faible proportion d oiseaux peut pr senter un titre non sp cifique de 2f mais habituellement ces oiseaux sont ag s de plus de 1 an M thode immuno enzymatique La technique ELISA est une m thode s rologique sensible pr coce et donnant les taux d anticorps les plus lev s par comparaison avec les autres preuves 42 Elle n est pas sp cifique d une souche ou d un type mais elle est appropri e pour le contr le de la r ponse vaccinale sur le terrain Des kits de diagnostic ELISA existent dans le commerce ils sont bas s sur diff rentes strat gies de d tection des anticorps dirig s contre le VBI Habituellement de tels kits ont t valu s et valid s par le fabricant et il importe de suivre scrupuleusement les instructions du mode d emploi Le test ELISA est largement utilis pour identifier les levages de poulets infect s par le virus BI et pr sentant un titre important Si la BI r appara t dans un autre levage de cette ferme il faut tenter d isoler le virus pour ensuite le g notyper par RFLP ou par s quen age S1 Immunodiffusion en g lose IDG L IDG peut tre utilis e pour le diagnostic de la BI 48 L antig ne est pr par a partir d un homog nat de membranes chorioallantoiqu
4. 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 494 Chapitre 2 3 2 Bronchite infectieuse aviaire COUNCIL OF EUROPE 1997 European Pharmacopoeia Third Edition Vaccinum bronchitidis infectivae aviariae inactivatum Council of Europe Strasbourg France 1745 1746 Cook J K A 1984 The classification of new serotypes of infectious bronchitis virus isolated from poultry flocks in Britain between 1981 and 1983 Avian Pathol 13 733 741 Cook J K A DARBYSHIRE J H amp PETERS R W 1976 The use of chicken tracheal organ cultures for the isolation and assay of avian infectious bronchitis virus Arch Virol 50 109 118 Cook J K A ORBELL S J Woops M A amp HUGGINS M B 1999 Breadth of protection of the respiratory tract provided by different live attenuated infectious bronchitis vaccines against challenge with infectious bronchitis viruses of heterologous serotypes Avian Pathol 28 477 485 CSERMELYI M THIJSSEN R ORTHEL F BURGER A G KOUWENHOVEN B amp LUTTICKEN D 1988 Serological classification of recent infectious bronchitis virus isolates by the neutralisation of immunofluorescent foci Avian Pathol 17 139 148 DARBYSHIRE J H 1985 A clearance test to assess protection in chickens vaccinated against avian infectious bronchitis virus Avian Pathol 14 497 508 DARBYSHIRE J H COOK J K A amp PETERS R W 1978 Gro
5. 50 des poussins de virus virulent tu s 4 7 jours plus tard et les sections de trach e sont examin es pour leur motilit ciliaire Au moins 80 des t moins non vaccin s doivent pr senter une ciliostase compl te alors qu un m me pourcentage d oiseaux vaccin s doit montrer qu il n a pas t affect Des vaccins virus vivant comme virus inactiv contenant les valences maladie de Newcastle bursite infectieuse r ovirose et syndrome chute de ponte 76 RDS76 sont disponibles dans certains pays L efficacit de ces diff rentes valences vaccinales doit tre tablie ind pendamment puis sur l association au cas o il existerait une ventuelle interf rence entre ces diff rents antig nes 2 M thodes de fabrication Toutes les souches virales destin es aux vaccins virus vivants sont cultiv es dans le sac allanto dien d ufs embryonn s de poulets EAPS ou sur cultures cellulaires appropri es Pour les vaccins virus inactiv s les ufs de poules issues d levages non EAPS peuvent tre utilis s Le m lange r colt est clarifi puis titr pour son infectiosit Pour les vaccins virus vivants ce liquide est lyophilis dans des ampoules alors que pour les vaccins virus inactiv s il est m lang une huile min rale de haute qualit pour former une mulsion laquelle un conservateur est ajout 3 Contr le en cours de fabrication Le contr le du titre en antig ne requis est bas su
6. conditions d emploi des antibiotiques des agents de conservation ou des agents r siduels utilis s pour l inactivation g Pr cautions et mise en garde 492 Le virus BI n est pas connu pour pr senter un danger quelconque pour le personnel pr parant les vaccins ou les testant Cependant certains agents trangers peuvent tre nocifs et les premi res tapes dans l emploi du lot de semence doivent tre r alis es dans un local s curis Il s agit de prendre la plus grande pr caution dans toutes les productions de vaccins pour diminuer le risque d exposition du personnel des Manuel terrestre de l OIE 2008 a b 10 11 12 13 14 Chapitre 2 3 2 Bronchite infectieuse aviaire a rosols de prot ines trang res Les personnes allergiques aux ufs ne doivent pas tre employ es pour ce travail Contr les du produit fini Innocuit Un test d innocuit doit tre r alis sur chaque lot du produit fini comme indiqu dans la Section C 4 b Activit Un test d activit doit tre r alis sur chaque lot du produit fini comme indiqu dans la Section C 4 c chez le fabricant et la fin de la p riode de conservation R F RENCES BIBLIOGRAPHIQUES ALEXANDER D J ALLAN W H Bices P M BRACEWELL C D DARBYSHIRE J H DAWSON P S HARRIS A H JORDAN F T MACPHERSON l MCFERRAN J B RANDALL C J STUART J C SWARBRICK O amp WILDING G P 1983 A standard technique for hae
7. e pour extraire ARN du VBI partir de tissus ou d couvillons Tous les ARN extraits doivent tre conserv s entre 20 C et 80 C jusqu au moment de l analyse Pour de longues dur es la conservation de l ARN a 80 C est recommand e ii Oligonucl otides personnalis s Des oligonucl otides personnalis s peuvent tre achet s aupr s de tous les fournisseurs La soci t Operon www operon com produit depuis des ann es des oligonucl otides de qualit Le g ne cible pour la caract risation du VBI est la sous unit S1 du g ne de la glycoprot ine des spicules Une paire d amorces fr quemment utilis e pour l amplification de diverses souches de VBI est S15 mod sens 5 TGA AAA CTG AAC AAA AGA 3 et CK2 anti sens 5 CNG TRT TRT AYT GRC A 3 26 Le produit de amplification avec S15 mod CK2 a une longueur d environ 700 pb commen ant au d but du g ne S1 et s tendant aux deux r gions hypervariables utilis es pour le g notypage iii Technique de la transcription inverse coupl e une r action d amplification en cha ne par polym rase De nombreux kits de RT PCR un ou deux temps sont disponibles dans le commerce chez des fournisseurs qui garantissent sensibilit et fiabilit Le kit recommand est le kit en deux temps de Applied Biosystems http www appliedbiosystems com La transcription inverse est effectu e selon les instructions du fournisseur L amor age pour la RT est
8. et peuvent d tecter une r ponse humorale dirig e contre tous les s rotypes L IHA quand elle est r alis e sur des s rums de jeunes poulets poulettes ou poulet de chair peut donner des indications sur les 486 Manuel terrestre de l OIE 2008 Chapitre 2 3 2 Bronchite infectieuse aviaire anticorps sp cifiques de s rotype de l levage Une surveillance s rologique r guli re des levages avec la recherche des anticorps BI repr sente une aide pour v rifier le niveau de r ponse au vaccin ou a une preuve virulente Du fait que de nombreux s rums de poulet en particulier d oiseaux plus g s contiennent des anticorps pouvant montrer une r action crois e importante avec des souches diff rentes antig niquement on ne peut retenir comme certainement fiable le diagnostic s rologique d une suspicion clinique de BI a Test de s roneutralisation Pour les tests de SN tous les s rums doivent tre pr alablement chauff s a la temp rature de 56 C pendant 30 min Le virus est m lang avec du s rum et plac en incubation pendant 30 a 60 min a 37 C ou la temp rature du laboratoire On utilise le plus souvent des ufs embryonn s de poule mais on peut aussi employer des cultures d anneaux de trach e ou des cultures cellulaires Deux m thodes ont t utilis es pour estimer le taux d anticorps neutralisants L une emploie une concentration s rique constante r agissant avec des dilutions croissantes de virus m t
9. fois par passage 4 Contr les des lots a St rilit Chaque lot de vaccin a virus vivant doit tre contr l pour l absence de contamination comme pour le virus de semence voir le Chapitre 1 1 9 Contr le de la st rilit ou de l absence de contamination des mat riels biologiques b Innocuit Pour les vaccins virus vivants Utiliser au moins 10 poulets EAPS ayant l ge minimal requis pour la vaccination comme indiqu sur la notice du vaccin Administrer par instillation oculaire chaque poulet 10 doses de vaccin reconstitu de mani re obtenir une concentration adapt e ce test Observer les poulets pendant 21 jours Pour les vaccins indiqu s pour les poulets g s de 2 semaines ou plus utiliser les poulets inocul s dans le test pour les agents trangers utilisant les poulets voir Section C 1 c 4 Si pendant la p riode d observation plus de 2 poulets meurent d une cause non attribuable au vaccin r p ter le test Le vaccin est satisfaisant pour ce test si les poulets ne pr sentent pas de signes cliniques graves en particulier des signes respiratoires et qu aucun poulet ne meure d une cause attribuable au vaccin e Pour les vaccins virus inactiv s Injecter une double dose de vaccin par la voie recommand e par le fabricant chacun des 10 poulets EAPS g s de 14 28 jours Observer les poulets pendant 21 jours Il faut v rifier qu il ny a aucune r action anormale locale ou
10. la plus r cente ou avec la maladie clinique L isolement du VBI peut tre facilit par l emploi de poulets exempts d agents pathog nes sp cifiques EAPS ou SPF pour specific pathogen free utilis s comme sentinelles a plusieurs reprises dans des levages industriels 25 Culture Des suspensions de pr l vements tissulaires dilu es 10 20 100 ml soit 10 20 sont pr par es avec une solution physiologique tamponn e au phosphate PBS ou un milieu nutritif pour inoculation l uf ou un milieu de culture utilis pour les cultures d anneaux trach aux CAT 17 Les suspensions sont clarifi es par centrifugation lente et filtration sur des filtres bact riens 0 2 u avant inoculation sur uf ou sur CAT Les ufs embryonn s de poulet et les CAT sont largement utilis s pour effectuer les isolements primaires du virus Les cultures cellulaires ne sont pas recommand es pour l isolement primaire car il est souvent n cessaire d adapter les isolats du VBI sur les ufs embryonn s avant d observer un effet cytopathog ne ECP de l infection virale sur des cellules embryonnaires de rein de poulet Les ufs embryonn s utilis s pour isolement du virus doivent provenir de pr f rence de poulets EAPS ou de reproducteurs n ayant jamais t infect s ou vaccin s Le plus souvent 0 1 0 2 ml du surnageant de l chantillon est inocul dans la cavit allantoidienne d embryons g s de 9 a 11 jours Les ufs sont ensu
11. origine et doit tre exempt de toute contamination par d autres souches de virus BI ou par tout agent contaminant Les souches de virus destin es aux vaccins ou aux preuves infectieuses doivent tre entrepos es s par ment Pour les vaccins virus vivants plusieurs pays n acceptent que les souches de type Massachusetts Quelques pays autorisent d autres souches g n ralement celles d j pr sentes dans les levages du pays L incorporation d un type antig nique dans les vaccins virus la fois vivants et inactiv s doit tre justifi e si l on doute de son existence dans le pays b M thodes de culture Toutes les souches virales de semence sont cultiv es dans le sac allanto dien d embryons de poulets ou sur cultures cellulaires appropri es Les ufs doivent provenir d un levage EAPS Manuel terrestre de VOIE 2008 489 c 490 Chapitre 2 3 2 Bronchite infectieuse aviaire Validation de la semence candidate comme semence vaccinale e Puret Chaque lot de semence doit tre exempt de toute contamination bact rienne fongique mycoplasmique ou virale Pour la d tection des virus trangers la souche de semence est d abord trait e avec un antis rum monosp cifique de titre lev contre la souche en cause ou contre un type connu Le m lange est mis en culture de plusieurs mani res pour confirmer l absence de tout virus connu comme contaminant potentiel L antis rum ne doit pas comprend
12. r alis en utilisant des hexam res fournis avec le kit ou l amorce de la PCR inverse dans ce cas il s agit de l amorce CK2 35 Les param tres d un cycle d amplification sont les suivants 25 C pendant 10 min 42 C pendant 25 min 95 C pendant 5 min et maintien 4 C Le volume total pour la r action de transcription inverse est ajout au m lange d chantillon Les param tres de la PCR sont 95 C pendant 2 min 45 cycles 95 C pendant 30 s 52 C pendant 30 s 68 C pendant 30 s extension finale 68 C pendant 12 min et maintien 4 C Les chantillons sont concentr s dans un dessicateur une nuit ou avec une centrifugeuse sous vide Les chantillons dess ch s sont remis en suspension dans 12 ul d eau trait e au DEPC et 6 ul au tampon d lectrophor se avant lectrophor se sur un gel a 1 8 d agarose contenant du bromure d thidium Les gels sont visualis s sous lumi re ultra violette Les bandes sont compar es une chelle commercialis e degr s de 100 pb et un t moin positif VBI iv S quengage du g ne S1 Les bandes visualis es sur le gel d agarose qui ont la m me taille que celles du t moin positif sont d coup es Le produit de PCR est s par du gel gr ce au kit Qiagen Gel Extraction kit www qiagen com ou tout autre kit d extraction du commerce Les produits de PCR purifi s sont d pos s sur un nouveau gel 1 8 d agarose et bromure d thidium pour d termin
13. souches sont importantes car les vaccins bas s sur un s rotype particulier peuvent n offrir qu une faible protection voire pas de protection du tout vis a vis d un groupe antig niquement diff rent Du fait de l mergence r guli re de variants antig niques les virus et par cons quent les aspects de la maladie et les vaccins utilis s peuvent tre tout a fait diff rents selon la r gion g ographique Un contr le permanent des virus sur le terrain est n cessaire pour la production de vaccins efficaces face a la survenue de variants antig niques Le s rotypage des isolats de VBI et des souches a t effectu avec les tests d inhibition de Il h magglutination IHA 1 36 et de s roneutralisation SN sur embryons de poulet 23 sur CAT 22 et sur cultures cellulaires 29 La neutralisation des foyers immunofluorescents a t aussi utilis e pour diff rentier les souches 19 Des anticorps monoclonaux AcM utilis s habituellement avec la m thode immuno enzymatique ELISA sont utiles pour diff rencier les souches et les groupes du VBI 30 38 Les limites dans leur utilisation pour d finir le s rotype du VBI sont li es au manque d AcMs ou d hybridomes et a la n cessit de produire de nouveaux AcMs avec une bonne sp cificit permettant de suivre le nombre toujours en augmentation des s rotypes variants mergents de la BI 34 Identification du g notype Le g notypage par RT PCR a largement remp
14. 107 DiEso La dose l tale est calcul e selon la m thode de K rber ou celle de Reed et Muench comme pr c demment mais les dilutions sont exprim es en logarithme de base 2 log2 Cette m thode b ta virus constant s rum variable est aussi employ e dans les tests de neutralisation sur cultures de trach es avec l emploi de 5 tubes par dilution de s rum selon les m thodes classiques de virologie 22 Les r sultats sont calcul s selon la m thode Reed et Muench et le titre du virus est exprim en doses ciliostatiques moyennes par unit de volume logio DCx Les titres s riques sont aussi exprim s r ciproquement en logarithme de base 2 log2b Ce test est plus sensible que les autres mais les difficult s techniques rencontr es pour sa mise en ceuvre ne permettent pas son utilisation en pratique courante b L inhibition de l h magglutination Un protocole standard pour le test d IHA pour le VBI a t d crit 1 et la m thode d crite ci dessous est bas e sur ce test standard Des souches ou des isolats du VBI peuvent agglutiner les h maties de poulets HP apr s un traitement enzymatique neuraminidase 44 45 La souche utilis e pour produire l antig ne peut varier selon le diagnostic souhait L antig ne pour le test IHA est pr par partir de liquides allanto ques infect s par le VBI Les tests d h magglutination et d inhibition de h magglutination sont r alis s 4 C e Test d h mag
15. CHAPITRE 2 3 2 BRONCHITE INFECTIEUSE AVIAIRE RESUME La bronchite infectieuse aviaire BI est due un coronavirus le virus de bronchite infectieuse VBI Ce virus provoque des infections surtout chez les poulets et est un agent pathog ne important des oiseaux de production viande ou ufs La BI est une maladie contagieuse aigu caract ris e principalement par de sympt mes respiratoires chez les jeunes oiseaux Chez les poules on observe souvent une baisse de la production et de la qualit des ufs Certaines souches de virus peuvent provoquer des n phrites interstitielles et de la mortalit La s v rit des infections respiratoires dues au virus de la bronchite infectieuse VBI est augment e lors de la pr sence d autres agents pathog nes bact riens entra nant une infection des sacs a riens L isolement du virus ou la d tection de I acide nucl ique viral partir des levages affect s sont indispensables au diagnostic de la BI La mise en vidence d une augmentation du taux d anticorps s riques peut aussi se r v ler utile L utilisation g n ralis e de vaccins a virus vivants et inactiv s peut compliquer la fois l isolement du virus et le diagnostic s rologique de la BI L apparition de souches antig niques variantes peut expliquer l inefficacit de l immunit induite par la vaccination Le recours au laboratoire est indispensable au diagnostic L isolement et l identification du virus sont l
16. a pr paration d auto vaccins a virus inactiv s pour le contr le de la BI dans les levages de poules pondeuses ou de reproducteurs Les vaccins virus vivants conf rent une meilleure immunit locale au niveau du tractus respiratoire et permettent une protection contre un large spectre de souches du terrain 18 Cependant les vaccins virus vivants ne peuvent prot ger les levages de pondeuses pendant toute leur vie conomique en raison de risque important de survenue de s rotypes variants dans des levages d ages variables et les baisses du taux de ponte d s l ge de 40 semaines n est pas rare 27 Certains vaccins virus vivants pr sentent un effet pathog ne r siduel provoquant une r action vaccinale dans l levage Cependant les recommandations concernant le mode d administration de masse du vaccin par a rosol ou eau de boisson l levage en vitant l emploi de doses vaccinales insuffisantes doivent tre suivies scrupuleusement si l on veut prot ger de fa on satisfaisante tout l levage et pour viter les retours la virulence Par ailleurs l emploi des vaccins en suivant scrupuleusement les doses recommand es par le fabricant est aussi une pr caution pour viter la r version qui peut tre caus e par des doses fractionn es Il existe des perspectives de production pour des vaccins g n tiquement modifi s 4 et pour une vaccination in ovo 47 Les lignes directrices pour la fabrication de vac
17. amelles couvre objet apr s deux passages 3 des cultures de cellules r nales de poulets EAPS sont utilis es pour la recherche d un effet cytopathog ne d inclusions cellulaires ou d agents h madsorbants apr s des passages correspondant un temps d incubation total jamais inf rieur 5 jours et jusqu 20 jours 4 des poussins EAPS dont l ge correspond l ge minimal recommand pour la vaccination sont inocul s par la voie intramusculaire avec 100 doses vaccinales et par la voie conjonctivale avec 10 doses vaccinales Ce test est r p t 3 semaines plus tard les poulets sont inocul s dans la vo te plantaire et par la voie intranasale avec 10 doses vaccinales Ces poussins sont observ s pendant au moins 6 semaines et leur s rum est test pour la recherche de l enc phalomy lite aviaire de la bursite infectieuse de la maladie de Marek de la maladie de Newcastle et d une infection par Salmonella pullorum e Activit Les vaccins indiqu s pour une protection contre les chutes du taux de ponte doivent tre test s pour la dur e de la r ponse humorale Les titres IHA doivent tre en moyenne gt 6log2 jusqu l ge de 60 semaines Les preuves s rologiques doivent tre r alis es a des intervalles suffisamment fr quents pour d montrer qu il n y a pas eu un effet de rappel provoqu par un VBI ext rieur Les vaccins indiqu s pour la protection des poulets de chair et des poulets d levage c
18. cins v t rinaires sont fournies dans le Chapitre 1 1 8 Principes de fabrication des vaccins usage v t rinaire Les lignes directrices expos es ici et dans le Chapitre 1 1 8 sont de nature g n rale Dans chaque pays o ces vaccins BI sont fabriqu s les normes nationales et internationales doivent tre respect es L autorit qui d livre les autorisations doit apporter des informations et un avis sur les crit res requis De nos jours ceux ci sont souvent pr sent s en termes g n raux pour toute demande que ce soit pour des vaccins aviaires et mammaliens virus vivants ou a virus inactiv s et pour des antiviraux ou antibact riens Ils doivent aussi satisfaire tous les crit res applicables aux vaccins BI Pour exemple se reporter aux r glementations europ enne et am ricaine 13 15 46 Les listes des agents trangers qui doivent tre absents continuent a s allonger Les producteurs doivent tre familiers avec celles qui sont appliqu es dans leur pays R cemment le virus de la n phrite aviaire et le pneumovirus aviaire ont t ajout s Pour les vaccins BI on peut rencontrer des diff rences importantes concernant les preuves infectieuses pour les tests d activit et leur validation Traditionnellement on utilise la souche virulente M 41 du type Massachusetts Mass 41 pour ces preuves infectieuses la fois pour les vaccins virus vivants et virus inactiv s Bien que ce type soit encor
19. e commun il n est plus le seul utilis ni le principal dans plusieurs pays et il peut tre recommand de pr parer des vaccins avec les autres types Il est logique de r aliser les preuves infectieuses avec le type de virus pr sent dans le vaccin Il est plus difficile d tablir des crit res pour la validation d preuves infectieuses avec les types non Massachusetts en raison de leur plus faible virulence en g n ral Les vaccins virus inactiv s sont destin s prot ger contre les chutes du taux de ponte L preuve classique avec la souche M 41 d crite dans ce chapitre doit provoquer une chute d au moins 67 chez les t moins non vaccin s mais des taux de chute beaucoup plus bas observ s avec d autres types doivent tre consid r s comme satisfaisants en fonction des effets connus et publi s de ces souches sur le terrain On observe une tendance assouplir les crit res des preuves infectieuses avec le type Massachusetts et la Pharmacop e europ enne d finit maintenant une chute de ponte d au moins 35 pour les types Massachusetts et dau moins 15 pour les types non Massachusetts lorsque la chute correspond des donn es reposant sur des preuves document es 15 1 Gestion des semences virales a Caract ristiques de la semence virale Le lot de semence semence primaire doit tre utilis pour tous les types de vaccins produits et pour les souches d preuve Chaque virus est d nomm selon la souche son
20. er la quantit de produit disponible Environ 20 ul 10 ng l de produit de PCR sont n cessaires pour le s quen age Le s quen age peut tre effectu au Centre de s quen age de l Universit du Delaware University of Delaware Sequencing amp Genotyping Center Newark DE http www udel edu dnasequence ou dans tout autre tablissement Les chromatogrammes des s quences sont analys s en utilisant le logiciel DNAStar analysis ou en ligne http Awww mekentosj com 4peaks ou http www technelysium com au chromas_lite html Les s quences dit es des isolats de VBI sont caract ris es l aide de BLASTn pour l analyse des nucl otides ou BLASTp pour celle des prot ines http www ncbi nim nih gov BLAST 2 preuves s rologiques De nombreuses preuves ont t d crites Les preuves consid r es dans cette partie comprennent la s roneutralisation SN 23 l immunodiffusion en g lose IDG 48 l inhibition de I h magglutination IHA 1 et la technique ELISA 42 Chaque preuve pr sente des avantages et des inconv nients dans les domaines de la pratique de la sp cificit de la sensibilit et du co t En g n ral pour les preuves s rologiques de routine les tests de SN sont trop co teux et peu pratiques et l preuve d IDG manque de sensibilit Les tests d IHA et ELISA conviennent le mieux aux recherches s rologiques de routine Les tests ELISA sont utiles pour les suivis des expositions au VBI
21. es d embryons de poulets infect s La souche Beaudette l tale pour l embryon est souvent utilis e pour produire l antig ne Le test manque de sensibilit et risque de donner des r sultats in gaux car la pr sence et la persistance des anticorps pr cipitant chez les oiseaux varient selon les individus C SP CIFICATIONS APPLICABLES AUX VACCINS ET AUX PRODUITS BIOLOGIQUES USAGE DIAGNOSTIQUE Tous les virus des vaccins virus vivants ou inactiv s doivent tre autoris s Les souches utilis es dans les vaccins virus vivants n cessitent g n ralement une att nuation Actuellement de nombreux pays n autorisent que des vaccins virus vivants pr par s partir du type Massachusetts comme la souche H 120 Certains pays peuvent aussi autoriser des vaccins virus vivants avec d autres souches comme les souches Connecticut Arkansas ou Delaware 072 Etats Unis d Am rique ou la souche 4 91 Royaume Uni Les vaccins virus vivants peuvent tre utilis s en a rosols dans l eau de boisson ou par administration oculaire 488 Manuel terrestre de l OIE 2008 Chapitre 2 3 2 Bronchite infectieuse aviaire L efficacit d un vaccin inactiv d pends en grande partie d une primovaccination avec un ou des vaccin s a virus vivant Les vaccins a virus inactiv s sont administr s individuellement aux oiseaux par une injection intramusculaire ou sous cutan e Les souches variantes doivent tre utilis es dans l
22. es m thodes de choix Les techniques de transcription inverse suivie d une amplification en cha ne par polym rase RT PCR sont couramment utilis es pour identifier le g notype du VBI Les tests d inhibition de l h magglutination IHA et les m thodes immuno enzymatique ELISA sont souvent utilis es pour les suivis s rologiques des levages On peut aussi associer d autres tests comme la microscopie lectronique les anticorps monoclonaux la s roneutralisation virale SN les tests immuno histochimiques ou de fluorescence et les preuves virulentes apr s vaccination sur poulets Identification de l agent pathog ne pour la forme respiratoire classique le VBI est le plus souvent isol avec succ s de la muqueuse trach ale et du poumon dans les jours ou la semaine qui suivent l infection Pour les autres formes de la BI les meilleures sources de virus sont constitu es par les reins l oviducte les amygdales caecales ou le proventricule selon la pathog nie de la maladie Les embryons de poulets provenant d levages exempts d agents pathog nes sp cifiques ou des anneaux de trach e d embryons sont utilis s pour l isolement viral L inoculation de la cavit allanto dienne avec le VBI entra ne des embryons ch tifs rabougris avec une dystrophie des plumes et des d p ts durate dans le m son phros r nal g n ralement en moins de trois passages L isolement sur anneaux de trach aux pr sente l avantage de perm
23. est utilis pour le diagnostic et pour les programmes de surveillance de la r ponse vaccinale des levages i Distribuer 0 025 ml de PBS dans chaque cupule d une plaque fond en U ou en V ii Placer 0 025 ml de s rum dans la premi re cupule de la plaque iii Effectuer des dilutions de 2 en 2 de 0 025 ml de volume de s rum dans la microplaque iv Ajouter 0 025 ml contenant 4 unit s h magglutinantes d antig ne viral dans chaque cupule et attendre 30 min v Ajouter 0 025 ml d une suspension d h maties de poulet 1 v v dans chaque cupule et apr s avoir m langer doucement laisser les h maties se d poser pendant environ 40 min alors que les h maties temoins se d posent en pr sentant un bouton rond tr s net vi Le titre du test d IHA correspond la plus haute dilution de s rum provoquant une compl te inhibition de 4 unit s h magglutinantes de l antig ne viral L agglutination est appr ci e plus exactement en inclinant les plaques Seules les cupules o les h maties se d posent de fa on identique que dans les cupules t moins contenant seulement 0 025 ml de la suspension d h maties et 0 05 ml de PBS doivent tre consid r es comme ayant montr une inhibition vii La validit des r sultats doit tre appr ci e l aide d un s rum t moin n gatif qui ne devra pas pr senter un titre gt 2 et un s rum t moin positif dont le titre devra tre gal au titre connu plus ou
24. ettre l observation d une stase des cils trach aux d s la premi re inoculation La RT PCR est de plus en plus utilis e pour l identification du g notype de la glycoprot ine des spicules S des souches isol es sur le terrain Le typage g n tique sur la base d amorces sp cifiques de la sous unit S1 du g ne S ou le s quen age du m me g ne donnent g n ralement mais pas toujours les m mes r sultats que le s rotypage par IHA ou la SN Les techniques s rologiques IHA ou SN utilisant des anticorps sp cifiques peut s av rer utile pour d finir les s rotypes preuves s rologiques des kits ELISA commercialis es peuvent tre utilis es pour le suivi de la r ponse humorale Les antig nes de ces kits donnent des r actions crois es entre les s rotypes et permettent des suivis des r ponses s rologiques apr s vaccination et apr s preuves virulentes de terrain notamment chez les jeunes poulets Du fait des infections multiples et des vaccinations les s rums des reproducteurs et des pondeuses contiennent des anticorps non sp cifiques et le diagnostic s rologique sur la base de l IHA ne peut tre utilis avec un degr lev de confiance 482 Manuel terrestre de l OIE 2008 Chapitre 2 3 2 Bronchite infectieuse aviaire Sp cifications applicables aux vaccins et aux produits biologiques a usage diagnostique on peut utiliser des vaccins virus vivants att nu s et des vaccins virus inactiv s adjuv s h
25. glutination i Distribuer 0 025 ml d un tampon PBS isotonique pH 7 0 a 7 4 dans chaque puits d une microplaque a fond en U ou en V en mati re plastique ii Placer 0 025 ml de l antig ne viral dans le premier puits Pour une d limitation plus pr cise du contenu h magglutinant il faut faire des s ries de dilutions initiales rapproch es comme au 1 3 1 4 1 5 1 6 etc iii Pr parer des dilutions de l antig ne viral de 2 en 2 d un volume de 0 025 ml dans toute la plaque iv Distribuer de nouveau 0 025 ml du tampon PBS dans chaque puits v Distribuer 0 025 ml de la suspension d h maties de poulet 1 v v dans chaque puits vi M langer en remuant doucement la microplaque et laisser les h maties se d poser pendant 40 min a 4 C lorsque le t moin h maties de poulet est stabilis en pr sentant une pastille distincte ronde Manuel terrestre de VOIE 2008 487 c d Chapitre 2 3 2 Bronchite infectieuse aviaire vii L HA est d termin e en inclinant la plaque et en observant la pr sence ou l absence de l h magglutination aspect en larme des h maties qui coulent Le titrage doit tre lu la plus haute dilution pour laquelle se produit une h magglutination compl te soit une HA 100 repr sentant l unit h magglutinante UHA Cela peut tre calcul avec pr cision partir des s ries initiales de dilution e Test d inhibition de l h magglutination Le test d IHA
26. hitis virus isolates with the haemagglutination inhibition test Avian Dis 28 727 733 KINGHAM B F KEELER C L JR NIX W A LADMAN B S amp GELB J JR 2000 Identification of avian infectious bronchitis virus by direct automated cycle sequencing of the S 1 gene Avian Dis 44 325 335 KOCH G HARTOG L KANT A VAN ROOZELAAR D amp DE BOER G F 1986 Antigenic differentiation of avian bronchitis virus variant strains employing monoclonal antibodies srael J Vet Med 42 80 97 KOCH G KANT A COOK J K A amp CAVANAGH D 1992 Location of antigenic sites defined by neutralising monoclonal antibodies on the S1 avian infectious bronchitis virus glycopolypeptide J Gen Virol 73 591 596 KUSTERS J G NIESTERS H G M LENSTRA J A HORZINEK M C amp VAN DER ZEWST B A M 1989 Phylogeny of antigenic variants of avian coronavirus IBV Virology 169 217 221 KWON H M JackwooD M W amp GELB J JR 1993 Differentiation of infectious bronchitis virus serotypes using polymerase chain reaction and restriction fragment length polymorphism analysis Avian Dis 37 194 202 MOCKETT A P A amp DARBYSHIRE J H 1981 Comparative studies with an enzyme linked immunosorbent assay ELISA for antibodies to avian infectious bronchitis virus Avian Pathol 10 1 10 NAQI S A 1990 A monoclonal antibody based immunoperoxidase procedure for rapid detection of infectious bronchitis virus in infected tissues Av
27. hode alpha et l autre emploie un titre constant de virus et des dilutions croissantes de s rum m thode b ta Dans la m thode alpha des dilutions croissantes au 1 10 du virus adapt l uf sont ajout es une dilution fixe d antis rum habituellement au1 5 et chaque m lange est inocul un groupe de 5 10 ufs embryonn s Le virus est titr parall lement La dose l tale est calcul e selon la m thode de K rber ou celle de Reed et Muench Les r sultats sont exprim s en index de neutralisation repr sentant la diff rence logarithmique log entre le titre du virus et celui des m langes virus antis rum La valeur de l index de neutralisation peut atteindre 4 5 7 0 dans le cas d un m lange homologue virus antis rum une valeur inf rieure 1 5 n est pas sp cifique mais un index de 1 5 peut tre rencontr avec un virus h t rologue La m thode b ta est la plus utilis e pour le test de s roneutralisation sur ufs embryonn s Des dilutions croissantes d antis rum au 1 2 ou au 1 4 sont ajout es un m me volume de virus dilution constante g n ralement titrant 100 ou 200 DIEso dose de virus infectant 50 des embryons par 0 05 ml et 0 1 ml de chaque m lange est inocul dans la cavit allanto que de chacun des 5 10 ufs embryonn s utilis s Un contr le du titre du virus est pratiqu simultan ment pour v rifier que le titre de la dilution de la solution virale reste compris entre 10 et
28. iable de S1 des fins diagnostiques pour identifier les isolats ou les variants sauvages reconnus auparavant comme VBI 37 L analyse et la comparaison des s quences de variants et d isolats sauvages inconnus avec les souches de r f rence pour v rifier leur degr de parent sont des avantages importants du s quen age R cemment il a t montr que les coronavirus isol s de dindons et de faisans taient g n tiquement similaires au VBI avec approximativement 90 d homologie pour les nucl otides situ s dans la r gion Il Manuel terrestre de VOIE 2008 485 Chapitre 2 3 2 Bronchite infectieuse aviaire hautement conserv e de la r gion 3 non traduites du g nome du VBI 9 10 Le r le possible de ces coronavirus dans les infections VBI n a pas t d termin L emploi essentiel des tests de RT PCR est l identification du virus et les tudes pid miologiques lors de foyers de BI Cependant les tests actuels de RT PCR ne donnent pas d informations sur le pouvoir pathog ne des virus Protocole de la RT PCR i Extraction de PARN viral Toute m thode d extraction de PARN peut tre utilis e De nombreux protocoles sont publi s dans des revues des livres et sur le web Cependant pour extraire de grandes quantit s d ARN partir du liquide allantoidien il est recommand d employer le kit Qiagen Viral RNA Mini Kit www qiagen com De son c t le kit Qiagen RNeasy Mini Kit est recommand
29. ian Dis 34 893 898 RUANO M EL ATTRACHE J amp VILLEGAS P 2000 A rapid plate hemagglutination assay for the detection of infectious bronchitis virus Avian Dis 44 99 104 SCHULTZE B CAVANAGH D amp HERRLER G 1992 Neuraminidase treatment of avian infectious bronchitis coronavirus reveals a haemagglutinating activity that is dependent on sialic acid containing receptors on erythrocytes Virology 189 792 794 UNITED STATES DEPARTMENT OF AGRICULTURE USDA Animal and Plant Health Inspection Service APHIS 1 January 1994 Code of Federal Regulations 113 327 Bronchitis Vaccine US Government Printing Office Washington D C USA http a257 g akamaitech net 7 257 2422 14mar20010800 edocket access gpo gov cfr_2003 9cfr113 327 htm WAKENELL P S SHARMA J M amp SLOCOMBE R F 1995 Embryo vaccination of chickens with infectious bronchitis virus histologic and ultrastructural lesion response and immunologic response to vaccination Avian Dis 39 752 765 WITTER R L 1962 The diagnosis of infectious bronchitis of chickens by the agar gel precipitin test Avian Dis 6 478 492 YU L JIANG Y Low S WANG Z Nam S J Liu W amp KWANG J 2001 Characterization of three infectious bronchitis virus isolates from China associated with proventriculus in vaccinated chickens Avian Dis 45 416 424 ZWAAGSTRA K A VAN DER ZENST B A M amp KUSTERS J G 1992 Rapid detection and identification of avian
30. ique de S1 apr s amplification du g ne par RT PCR 33 41 La m thode RT PCR RFLP peut tre utilis e en association avec une sonde marqu e la biotine pour d tecter au pr alable le VBI dans les liquides r colt s partir d ufs inocul s avec des chantillons cliniques 32 La RT PCR RFLP peut identifier tous les s rotypes connus de VBI ainsi que les variants La RT PCR sp cifique de g notype S1 peut identifier tous les s rotypes du VBI 35 Les amorces du g ne S1 sp cifiques pour les s rotypes Massachusetts Mass Connecticut Arkansas et JMK sont utilis es en association avec une paire d amorces universelles qui amplifie tous les s rotypes de VBI Les amorces pour les s rotypes DE 072 92 et Californie ont aussi t mises au point Les autres s rotypes variants peuvent tre reconnus comme tant des VBI en employant les amorces classiques mais le s rotype ne peut pas tre d termin Les infections multiples dues plusieurs s rotypes de VBI peuvent tre diagnostiqu es Le s quen age des nucl otides d un fragment significatif au plan diagnostic du g ne S1 repr sente la technique la plus utile pour diff rencier les souches du VBI et est devenue la m thode de choix dans de nombreux laboratoires Le s quen age a aussi permis d observer qu il se produisait souvent une recombinaison entre les souches de VBI 7 50 Il est possible d utiliser le s quen age du produit de la RT PCR partie terminale hypervar
31. ite mir s tous les jours pendant 7 jours et toute mortalit survenant dans les 24 h doit tre consid r e comme non sp cifique et les ufs sont limin s Habituellement l inoculum initial n a pas d effets macroscopiques visibles sur l embryon sauf s il s agit dune souche vaccinale d j adapt e l uf Normalement les liquides allanto diens de tous les ufs r colt s 3 jours apr s l inoculation sont m lang s Ce m lange est dilu au 1 5 ou au 1 10 dans un milieu additionn d antibiotiques en vue d un nouveau passage sur d autres ufs jusqu un maximum de 3 4 passages En r gle g n rale une souche sauvage induit des l sions visibles sur l embryon embryons ch tifs rabougris avec dystrophie des plumes et des d p ts d urate dans le m son phros r nal du deuxi me au quatri me passage Aux passages suivants on peut observer une mortalit embryonnaire au fur et mesure que la souche s adapte a la culture sur uf D autres virus notamment des ad novirus qui sont souvent retrouv s dans les tractus respiratoire peuvent aussi provoquer des l sions similaires au VBI Le liquide allanto dien ne doit pas agglutiner les h maties et l isolement du VBI doit tre confirm par typages s rologique et g notypique Les liquide allanto diens infectieux sont conserv s 20 C ou moins pour une courte dur e de conservation ou 60 C pour une conservation longue ou enfin 4 C apr s ly
32. lac le s rotypage par IHA et SN pour d terminer l identit des souches sauvages Les bases mol culaires de la variation antig nique ont t examin es g n ralement par le s quengage du nucl otide du g ne codant la prot ine des spicules S ou plus sp cifiquement le g ne codant la sous unit S1 de la prot ine S 5 40 o le plus grand nombre d pitopes identifi s par des anticorps neutralisants est observ 39 On n observe pas une corr lation exacte avec les r sultats de l IHA ou de la SN dans la mesure ou si d un c t les diff rents g notypes pr sentent g n ralement de grandes diff rences 20 50 dans les s quences d acides amin s de la sous unit S1 40 des virus autres qui sont clairement diff renciables par s roneutralisation ne pr sentent seulement quant eux que 2 3 de diff rences dans les s quences d acides amin s 5 Cependant les r sultats obtenus avec la s quence S1 en comparaison avec le s rotype identifi par s roneutralisation permettent de s lectionner les souches vaccinales sur la base des donn es fournies par le s quen age Le premier avantage des techniques mol culaires est leur rapidit et leur capacit d tecter une grande vari t de g notypes selon les tests employ s La RT PCR RFLP distingue les diff rents s rotypes de VBI sur la base des profils de bandes uniques obtenus par lectrophor se des fragments de restriction obtenus par digestion enzymat
33. magglutination inhibition tests for antibodies to avian infectious bronchitis virus Vet Rec 113 64 ALEXANDER D J GOUGH R E amp PATTISON M 1978 A long term study of the pathogenesis of infection of fowls with three strains of avian infectious bronchitis virus Res Vet Sci 24 228 233 BHATTACHARJEE P S NAYLOR C J amp Jones R C 1994 A simple method for immunofluorescence staining of tracheal organ cultures for the rapid identification of infectious bronchitis virus Avian Pathol 23 471 480 Casalis R Dove B CAVANAGH D amp BRITTON P 2003 A recombinant avian infectious bronchitis virus expressing a heterologous spike gene demonstrates that the spike protein is a determinant of cell tropism J Virol 77 9084 9089 CAVANAGH D 1991 Sequencing approach to IBV antigenicity and epizootiology n Proceedings of the Second International Symposium on Infectious Bronchitis Rauischholzhausen Germany June 1991 147 160 CAVANAGH D 2003 Severe acute respiratory syndrome vaccine development experiences of vaccination against avian infectious bronchitis coronavirus Avian Pathol 32 567 582 CAVANAGH D DAVIS P J amp COOK J K A 1992 Infectious bronchitis virus evidence for recombination within the Massachusetts serotype Avian Pathol 21 401 408 CAVANAGH D MAWDITT K BRITTON P amp NAYLOR C J 1999 Longitudinal field studies of infectious bronchitis virus and avian pneumoviru
34. ontre la forme respiratoire de la maladie doivent tre test s de la m me mani re pour la dur e de la r ponse immunitaire Cette r ponse est test e jusqu l ge de l abattage pour les poulets de chair et jusqu l ge du rappel vaccinal le plus souvent l ge de 16 18 semaines dans le cas des poulets d levage e Innocuit Les tests pratiqu s sur la souche virale de semence doivent inclure un test sur le risque de retour vers la virulence La souche de semence des vaccins virus vivants et inactiv s doit tre test e pour son innocuit selon les recommandations de la Section C 4 b e Efficacit Pour d montrer l efficacit un essai doit tre r alis avec des vaccins obtenus a partir du lot de semence primaire et du lot de travail apr s 5 passages a partir du lot de semence primaire Ils sont soumis a des tests d montrant leurs effets protecteurs Pour les vaccins a virus vivants au moins 10 poussins EAPS ag s de 3 a 4 semaines sont vaccin s par voie intranasale ou oculaire avec la dose recommand e Dix poussins t moins non vaccin s du m me age sont gard s s par ment Tous les oiseaux des deux groupes sont prouv s 3 a 4 semaines plus tard par Manuel terrestre de l OIE 2008 Chapitre 2 3 2 Bronchite infectieuse aviaire les voies intranasale ou oculaire chacun recevant 10 _103 DIEso de la souche virulente Massachusetts M 41 Un pr l vement par couvillonnage de la trach e e
35. ophilisation Les CAT pr par s partir d embryons g s de 20 jours peuvent tre utilis s directement pour isoler le VBI partir d chantillons du terrain 17 Un syst me de coupe automatique est n cessaire pour obtenir des sections transversales ad quates pour cette technique 21 Les anneaux doivent avoir 0 5 1 mm d paisseur et doivent tre maintenus dans un milieu d Eagle s N 2 hydroxyethylpiperazine N 2 ethanesulphonic acid HEPES sur tubes tournants 15 tours mn 37 C L infection de ces cultures de trach es se traduit par une ciliostase en 24 48 h La ciliostase peur tre produite par d autres virus et la suspicion d un cas de BI doit tre confirm e par des tests s rologiques ou g notypiques M thodes d identification Les premiers tests effectu s sur les isolats de VBI ont pour but d liminer les autres virus Les membranes chorio allantoiques des ufs infect s sont r colt es homog n is es et test es pour les ad novirus aviaires du groupe 1 par immunodiffusion ou par amplification en cha ne par polym rase PCR Les infections des levages industriels par les ad novirus aviaires du groupe 1 sont fr quentes et les l sions produites sur les embryons ne sont pas distinguables de celles dues au VBI En outre les liquides allanto diens r colt s n entrainent pas l h magglutination des globules rouges de poulet Les m thodes mol culaires RT PCR transcription inverse coupl e
36. pes sont h berg s s par ment jusqu 4 semaines avant le pic de la production des ufs puis ils sont r unis dans le m me b timent La production individuelle en ufs est surveill e et lorsqu elle devient r guli re tous les oiseaux sont prouv s la surveillance de la production d ufs tant pr vue encore pendant 4 semaines L preuve doit tre suffisante pour assurer une baisse du taux de ponte pendant les 3 semaines suivant l intervention La baisse du taux de ponte du groupe t moin doit tre au moins de 67 Le groupe recevant le vaccin virus vivant en primovaccination suivi d un rappel avec le vaccin virus inactiv doit rester au taux pr c dent et le groupe ne recevant que la primovaccination doit montrer un taux interm diaire de baisse de la production Les s rums collect s chez tous les oiseaux au moment de la vaccination 4 semaines plus tard et au moment de l preuve doivent tre n gatifs chez les oiseaux t moins Pour valuer un vaccin virus inactiv destin prot ger des oiseaux contre la maladie respiratoire 20 poulets EAPS g s de 4 semaines sont vaccin s selon les recommandations du fabricant Un autre groupe de 20 oiseaux du m me ge et de m me origine est h berg avec ce premier groupe La r ponse humorale est d termin e 4 semaines plus tard il ne doit pas y avoir de r ponse immunitaire chez les oiseaux t moins Tous les oiseaux sont prouv s avec 10 DIP50 Dose de virus infectant
37. r les tests initiaux pratiqu s sur les lots de vaccins prouvant leur efficacit dans des essais au laboratoire et sur le terrain Les titres infectieux sont valu s sur des embryons de poulet Les vaccins virus vivants ne doivent pas contenir moins de 10 DIEso par dose pour un oiseau jusqu a la date d expiration indiqu e et pas moins de 10 DIEso par dose pour un oiseau apr s une incubation a 37 C pendant 7 jours a la fin de l observation Pour les vaccins virus inactiv s le fabricant doit d montrer l efficacit de l inactivation de l agent et du proc d d inactivation a la fois pour le virus BI et les contaminants potentiels Avec l utilisation de la b ta propiolactone ou du formol tous les virus leucosiques vivants et toutes les esp ces de Salmonella doivent tre limin s et avec les autres agents utilis s pour l inactivation tous les contaminants potentiels doivent tre inactiv s Avant les proc d s d inactivation il est important de v rifier l homog n it des suspensions et le test d inactivation doit tre r alis sur chaque lot r colt en vrac apr s inactivation et sur le produit fini Manuel terrestre de VOIE 2008 491 Chapitre 2 3 2 Bronchite infectieuse aviaire Les tests d inactivation doivent tre appropri s au vaccin concern et consistent effectuer deux passages sur cultures cellulaires sur ceufs embryonn s ou sur poussins en inoculant 0 2 ml et en renouvelant 10
38. ratoire aigu des couvillons du tractus respiratoire sup rieur des oiseaux vivants ou des pr l vements de trach e et de poumons des oiseaux malades doivent tre r colt s et conserv s dans un milieu de transport comportant de la p nicilline 10 000 unit s internationales UI ml et de la streptomycine 10 mg ml et maintenus sous glace ou congel s Chez des oiseaux atteints de n phrite ou Manuel terrestre de VOIE 2008 483 b c 484 Chapitre 2 3 2 Bronchite infectieuse aviaire de troubles de la ponte les pr l vements doivent concerner les reins ou loviducte en plus des pr l vements de l appareil respiratoire Dans certains cas on peut souhaiter r aliser l identification du VBI sans isolement du virus Dans ce cas des couvillons du tractus respiratoire ou du cloaque peuvent tre envoy s directement sans tre conserv s dans un milieu de transport 8 Lors de suspicion de n phrite due la BI des chantillons de reins doivent tre effectu s sur des carcasses de poulets r cemment euthanasi s pour l examen histopathologique ou isolement du virus Les pr l vements sanguins d oiseaux atteints d une forme aigu ou d oiseaux convalescents doivent aussi faire l objet d un examen s rologique Un pourcentage lev d isolements r ussis du virus a t rapport des amygdales caecales ou des f ces 2 Cependant les isolats a partir du tractus intestinal peuvent ne pas tre en relation avec l infection
39. re d anticorps dirig s contre les ad novirus le virus de l enc phalomy lite aviaire le rotavirus aviaire le virus de an mie infectieuse du poulet le virus de la variole aviaire le virus de la laryngotrach ite infectieuse aviaire le virus influenza A le virus de la maladie de Newcastle le virus de la bursite infectieuse les virus des leucoses aviaires le r ovirus le virus de la maladie de Marek herpesvirus du dindon les virus associ s aux ad novirus le virus du syndrome chute de ponte 76 EDS76 le virus de la n phrite aviaire le pneumovirus aviaire ou le virus de la r ticulo endoth liose L inoculum ajout dans chaque syst me de culture utilis doit contenir une quantit de virus BI neutralis dont l infectiosit initiale doit tre quivalente au moins 10 fois la dose minimale du terrain Ces syst mes sont 1 des embryons de poulet EAPS g s de 9 11 jours inocul s la fois dans le sac allanto dien et sur la membrane chorioallanto dienne deux passages 2 des cultures de fibroblastes d embryon de poulet pour les virus leucosiques des sous groupes A et B Le test de fixation du compl ment pour la leucose aviaire test COFAL ou le test ELISA en double sandwich pour les antig nes leucosiques sp cifiques de groupe est r alis sur des extraits cellulaires r colt s 14jours Un test d immunofluorescence pour le virus de la r ticuloendoth liose est r alis sur un tapis cellulaire sur l
40. ronavirus aviaires du dindon et du faisan sont class s dans le groupe 3 des coronavirus avec les coronavirus des mammif res qui comprennent les groupes 1 2 et 4 le groupe 4 est le coronavirus le plus r cemment identifi comme responsable du syndrome respiratoire aigu s v re SRAS 6 Les coronavirus sont non segment s de sens positif avec un g nome comprenant un simple brin d ARN Le VBI affecte les poulets de tous ges qui part les faisans 10 sont les seules esp ces connues affect es naturellement La maladie se transmet par voie a rienne directement par contact entre poulets ou indirectement par transmission m canique mat riel de poulailler ou de conditionnement des ufs contamin fumier utilis comme engrais visites de fermes etc La BI est rencontr e dans le monde entier sous diff rentes formes cliniques la principale tant une maladie respiratoire qui se d veloppe lors d une infection du tractus respiratoire apr s inhalation ou ingestion L infection de l oviducte peut provoquer des l sions irr versibles chez les jeunes poulettes Chez les oiseaux plus g s on observe un arr t de la ponte ou la production d ufs coquille mince ou d form e et d color e La BI peut provoquer des troubles r naux avec une n phrite aigu une urolithiase et une mortalit 11 Apr s une am lioration apparente une n phrite chronique peut provoquer une mort subite un peu plus tard Une maladie du proventric
41. s in broilers using type specific polymerase chain reactions Avian Pathol 28 593 605 CAVANAGH D MAWDITT K SHARMA M DRURY S E AINSWORTH H L BRITTON P amp GOUGH R E 2001 Detection of a coronavirus from turkey poults in Europe genetically related to infectious bronchitis virus of chickens Avian Pathol 30 355 368 CAVANAGH D MAWDITT K WELCHMAN D DE B BRITTON P amp GOUGH R E 2002 Coronaviruses from pheasants Phasianus colchicus are genetically closely related to coronaviruses of domestic fowl infectious bronchitis virus and turkeys Avian Pathol 31 81 93 CAVANAGH D amp Naal S 2003 Infectious bronchitis In Diseases of Poultry 11th Edition Saif Y M Barnes H J Glisson J R Fadly A M McDougald L R amp Swayne D E eds Ames lowa USA lowa State Press 101 119 CLARKE J K MCFERRAN J B amp GAY F W 1972 Use of allantoic cells for the detection of avian infectious bronchitis virus Arch Gesamte Virusforsch 36 62 70 COMMISSION OF THE EUROPEAN COMMUNITIES Interim Publication Nov 1993 The Rules Governing Medicinal Products in the European Community Volume VII Guidelines for the Testing of Veterinary Medicinal Products COUNCIL OF EUROPE 1997 European Pharmacopoeia Third Edition Vaccinum bronchitidis infectivae aviariae vivum cryodesiccatum Editions of the Council of Europe Strasbourg France 1795 1796 Manuel terrestre de VOIE 2008 493 15 16 17
42. sing plaque purified isolates Avian Dis 18 231 239 IGNJATOVIC J MCWATERS P amp GALLI L 1991 Antigenic relationship of Australian infectious bronchitis viruses analysis using polyclonal and monoclonal antibodies In Proceedings of the Second International Symposium on Infectious Bronchitis Rauischholzhausen Germany June 1991 161 167 IGNJATOVIC J amp SAPATS S 2000 Avian infectious bronchitis virus Rev sci tech Off int Epiz 19 2 493 508 JACKWOOD M W Kwon H M amp HILT D A 1992 Infectious bronchitis virus detection in allantoic fluid using the polymerase chain reaction and a DNA probe Avian Dis 36 403 409 JACKWOOD M W YOUSEF N M amp HILT D A 1997 Further development and use of a molecular serotype identification test for infectious bronchitis virus Avian Dis 41 105 110 KARACA K NAQI S A amp GELB J JR 1992 Production and characterisation of monoclonal antibodies to three infectious bronchitis virus serotypes Avian Dis 36 903 915 KEELER C L REED K L Nix W A amp GELB J 1998 Serotype identification of avian infectious bronchitis virus IBV by RT PCR of the peplomer S 1 gene Avian Dis 42 275 284 Manuel terrestre de l OIE 2008 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 Chapitre 2 3 2 Bronchite infectieuse aviaire KING D J amp HOPKINS S R 1984 Rapid serotyping of infectious bronc
43. st pratiqu sur chaque oiseau 4 5 jours apr s l preuve et plac dans 3 ml d un milieu de culture liquide avec antibiotiques Chaque milieu est test pour la recherche du VBI par inoculation 0 2 ml de 5 ufs embryonn s g s de 9 11 jours Un autre test alternatif ces couvillonnages consiste tuer les oiseaux 4 6 jours apr s l preuve et examiner au microscope l activit ciliaire des anneaux de trach e 20 Les oiseaux n ayant pas r sist l preuve pr sentent une perte importante de la motilit ciliaire Les vaccins virus vivants sont satisfaisants si au moins 90 des poussins vaccin s et prouv s ne montrent pas la pr sence du VBI dans leur trach e alors que 90 ou plus des poussins t moins montrent la pr sence du virus Pour valuer un vaccin virus inactiv destin prot ger des poules pondeuses au moins 30 poussins EAPS sont vaccin s la dose pr conis e l ge le plus jeune recommand pour cette vaccination Si une primovaccination avec un vaccin virus vivant est d abord effectu e un groupe suppl mentaire d oiseaux re oit seulement le vaccin virus vivant Dans les deux cas ces primovaccinations ne doivent pas tre faites au del de l ge de 3 semaines Le vaccin virus inactiv est administr 4 6 semaines apr s la primovaccination avec le vaccin virus vivant Un autre groupe de 30 oiseaux t moins non vaccin s est pr vu parall lement Tous les grou
44. syst mique c Activit Le test d activit est tabli a partir des r sultats des tests d efficacit r alis s sur le lot de semence primaire Les tests d activit des vaccins virus vivants sont r alis s par le titrage de l infectiosit et pour les vaccins virus inactiv s ces tests consistent mesurer la production d anticorps Le test d activit du lot de vaccin virus inactiv consiste vacciner 20 poulets EAPS g s de 4 semaines et montrer que leur titre moyen par le test d IHA n est pas inf rieur 6 log2 4 semaines plus tard d Dur e de l immunit Le vaccin doit montrer qu il pr sente l activit requise pour atteindre la dur e d immunit revendiqu e la fin de la dur e de conservation e Stabilit Au moins 3 lots doivent tre test s pour leur stabilit et doivent donner des r sultats satisfaisants 3 mois au del de la dur e de conservation mentionn e La stabilit du vaccin virus vivant doit tre mesur e par le maintien d un titre infectieux satisfaisant La stabilit du vaccin virus inactiv est mesur e des intervalles r guliers lors des tests d efficacit des lots La concentration du conservateur et la persistance de la dur e de conservation doivent tre v rifi es II ne doit pas exister de modifications physiques du vaccin et l mulsion initiale doit tre retrouv e apr s une rapide secousse f Agents de conservation Il y a un taux maximal dans les
45. uileux Les vaccins virus vivants att nu s par passage en s rie sur ufs embryonn s ou par traitement thermique conf rent une meilleure immunit locale au niveau du tractus respiratoire que les vaccins inactiv s Certains vaccins virus vivants pr sentent le risque d un pouvoir pathog ne r siduel associ une r versibilit de l att nuation vaccinale dans les levages Cependant la vaccination de masse avec des vaccins virus vivants ne pr sente g n ralement pas de danger Les vaccins virus inactiv s doivent tre administr s individuellement et une simple inoculation n est pas protectrice si elle n est pas pr c d e par l administration d un ou de plusieurs vaccins virus vivant Ces deux types de vaccins sont disponibles en association avec le vaccin contre la maladie de Newcastle Dans certains pays des vaccins multivalents virus inactiv s comprenant les valences maladie de Newcastle maladie de Gumboro r ovirose et syndrome chute de ponte 76 sont disponibles A INTRODUCTION La bronchite infectieuse aviaire BI a t d crite pour la premi re fois aux Etats Unis d Am rique USA dans les ann es trente en tant que maladie respiratoire aigu touchant surtout les jeunes poulets Le virus d couvert par la suite fut appel virus de la bronchite infectieuse aviaire VBI Le VBI est un membre du genre Coronavirus famille des Coronaviridae de l ordre des Nidovirales Le VBI et d autres co
46. ule due au VBI a aussi t d crite 49 Les souches sauvages et vaccinales peuvent persister dans les amygdales caecales du tractus intestinal et peuvent tre excr t es dans les fientes pendant des semaines voire plus longtemps encore chez les oiseaux apparemment sains 2 Pour une synth se approfondie de la bronchite infectieuse voir Cavanagh amp Naqi 11 Une tude d taill e de l antig ne du VBI du g nome et des tests de d tection par De Witt 24 est aussi disponible Il n a jamais t observ une infection humaine avec le VBI B TECHNIQUES DE DIAGNOSTIC La confirmation du diagnostic est obtenue par la mise en vidence de l antig ne viral parfois associ e l examen s rologique L emploi g n ralis de vaccins att nu s ou inactiv s peut compliquer le diagnostic utilisant des m thodes s rologiques car les anticorps d origines vaccinale et sauvage ne peuvent pas tre toujours distingu s La persistance d un vaccin virus vivant peut aussi compliquer les essais d isolement de l agent causal 1 Identification de l agent pathog ne a Pr l vements Les pr l vements sur les oiseaux doivent se rapporter la maladie suspect e et tre effectu s d s l apparition des sympt mes Les chantillons doivent tre conditionn s dans des milieux de transport sous froid et congel s d s que possible La cha ne du froid de l levage au laboratoire doit tre maintenue Dans le cas d une maladie respi
47. wth comparisons of avian infectious bronchitis virus strains in organ cultures of chicken tissues Arch Virol 56 317 325 DARBYSHIRE J H ROWELL R G Cook J K A amp PETERS R W 1979 Taxonomic studies on strains of avian infectious bronchitis virus using neutralisation tests in tracheal organ cultures Arch Virol 61 227 238 DAWSON P S amp GOUGH R E 1971 Antigenic variation in strains of avian infectious bronchitis virus Arch Gesamte Virusforsch 34 32 39 DE WITT J J 2000 Technical review Detection of infectious bronchitis virus Avian Pathol 29 71 93 GELB J JR ROSENBERGER J K FRIES P A CLOUD S S ODOR E M DoHms J D amp JAEGER J S 1989 Protection afforded infectious bronchitis virus vaccinated sentinel chickens raised in a commercial environment Avian Dis 33 764 769 GELB J JR WEISMAN Y LADMAN B S amp MEIR R 2005 S1 gene characteristics and efficacy of Vaccination against infectious bronchitis virus field isolates from the United States and Israel 1996 2000 Avian Pathol 34 194 203 GELB J JR WOLFF J B amp MORAN C A 1991 Variant serotypes of infectious bronchitis virus isolated from commercial layer and broiler chickens Avian Dis 35 82 87 HOFSTAD M S 1958 Antigenic differences among isolates of avian infectious bronchitis virus Am J Vet Res 19 740 743 HOPKINS S R 1974 Serological comparisons of strains of infectious bronchitis virus u
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