xxx- 490500 490501 75 005-11000-12 005-11000-13 1
Contents
1.2. 7 6 7 7
3. SurePath 75 ui 7 la co 2 8 C 1b
4. 8 2 1 8 2 2 0 05 Tween 20 TBST 8 2 2 1 8 2 2 2 20 0 05 8 2 3 5 8 2 3 1 1
5. TOU KIT KIT SurePath with ProEx
6. 8 2 1 8 2 2 Tpig Tween 20 0 05 TBST 8 2 2 1 TBS 8 2 2 2 Av TBS Tween 20 0 05 8 2 3 DAB 5 8 2 3 1 1mL
7. 9 1 1 9 1 2 20 25 C 9 1 3 9 1 4 He
8. pe SurePath pe ProEx HE TriPath Imaging MSDS SurePath ProEx SurePath
9. Ol 9 2 1 coplin SureDetect 1 72 9 2 2 15 950 9 2 3 coplin TO
10. 9 2 1 SureDetect 1 72 9 2 2 15 95 C 9 2 3 um 20 9 2 4 H20 TBST 9 3 1 9 3 2
11. 3 3 DAB B SiHa SurePath ProEx IgG SurePath ProEx 12 3 4 1 Bethesda System TBS for Reporting Cervical Cytology 2 5000
12. 8 2 TIG
13. Clinical and Laboratory Standards Institute Quality Assurance for Immunocytochemistry O SureDetect SiHa TriPath Imaging Inc IgG va Ta 12 1
14. To DAB va KIT NaNs To
15. EVWHEVOU TO TTE
16. YAPTOTTETOETEG ENTTOTIOUEVEG 9 6 8 200uL 30 va 9 6 9 20 1 9 6 10 TBST 2 9 6 11 9 6 12 ENTTOTIOUEVEG 9 6 13 200uL DAB va 9 6 14 5 1 9 6 15 5 H20
17. 2 va 3 4
18. 3 Step 4 gt ASC AGC B The Bethesda System for Reporting Cervical Cytology 2nd Ed gt ASC 2ASC 2AGC ASC US LSIL HSIL gt AGC
19. 2 TRIS Tween 2 8 20 pH 7 4 TTPWTEIVEG 2 80 3b 2 80 18 y hou DAB 48 2 8 DAB DAB 3 3 2 890 Mayer 15 300 6 pH 7 4 Tween 20 0 09 15 30 0 NaN 4b ANTIAPAZTHPIA
20. SurePath ProEx no 2
21. 9 6 8 200 un of 3b 9 6 9 o 1 20 1 9 6 10 TBST 2 B 9 6 11 9 6 12 9 6 13 200un DAB 9 6 14 5 1 9 6 15 5 H20 9 7 9 7 1 TBST B 1 2 9 7 2
22. HITWTIKWV ProExTM 2 TOP2A 0 09 SurePath ProEx TTOVTIKOU
23. 9 5 4 30 9 5 5 TBST 9 5 6 TBST B 2 41 2013 TriPath Imaging Inc All rights reserved 779 05848 10 08 2013 12 10 11 9 6 9 6 2 9 6 3 200un 9 6 4 20 1 9 6 5 TBST 2 9 6 6 9 6 7
24. DNA GO G1 S l TOP2A TOP2A
25. 20 9 2 4 H20 coplin TBST 9 3 1 9 3 2 YAPTOTTETOETEG ENTTOTIOUEVEG 9 3 3 200 1a 9 3 4 5 1 9 3 5 TBST 2 31 2013 TriPath Imaging Inc All rights reserved 779 05848 10 08 2013 12 9 4 9 5 9 6 9 7 9 4 1 9 4 2 9 4 9 9 4 4 9 4 5
26. 9 7 3 200un 5 9 7 4 1 10 9 7 5 H20 9 7 6 9 7 7 200un 6 1 10 ji 13 9 7 8 1 9 8 9 8 1 95 1 25 9 8 2 4 1 25 9 8 3 1 25
27. SurePath 8 1 8 1 1 SurePath PrepStain System SurePath 8mL SurePath SurePath 2 mL BD PrepMate PrepStain Ol SurePath SureDetect 9 3 SureDetect 10X
28. 2 8 C 2 20 pH 7 4 2 8 2 8 C 3b 2 8 C DAB 4 2 8 C DAB 4b DAB 3 3 2 8 C xpomoreHa 5 15 30 C 6 15 30 C PH 7 4 20 0 09
29. 75 En gt 42 2013 TriPath Imaging Inc All rights reserved 779 05848 10 08 2013 12 Technical Service amp Support BD Diagnostics Diagnostic Systems www bd com ds technical_services bd com 1 800 638 8663 TriPath Imaging Inc 780 Plantation Drive Burlington NC 27215 USA Benex Limited Rineanna House Shannon Free Zone Shannon County Clare Ireland CE Millennium Pharmaceuticals Inc INN MILLENNIUM ANA MILLENNIUM Millennium Pharmaceuticals Inc Millennium Pharmaceuticals Inc 40 Landsdowne Street Cambridge MA 02139 USA www millennium com BioCare Medical 2940 Camino Diablo Suite 300 Walnut Creek CA 94596 SurePath TriPath Imaging Inc ProE
30. Mia SurePath with ProEx 75 2 2 8 C 10 2 8 PBS
31. SurePath ProEx 12 3 4 1 Bethesda System TBS for Reporting Cervical Cytology 2nd Ed Eva va 5000 SurePath ProEx
32. 36 45 60 Xn 3 3 22 40 23 36 37 60 Xn 7 1 in vitro 7 2 SurePath
33. Wipes SureDetect SiHa REF 005 11012 10 TriPath Imaging Inc 95 100 10 20x 40x 20 un 200 un 1000 un SureDetect 10 REF 090 11008 10 TriPath Imaging Inc 1 60 TBS Tween 20 IgG 22 23 25
34. AIS NILM Wright Schiffman Solomn Cox JT Garcia Goldie Hatch Noller KL Roach N Runowicz C and Saslow D Interim Guidance for the Use of Human Papillomavirus DNA Testing as an Adjunct to Cervical Cytology for Screening Obstet Gynecol 2004 102 304 309 Ishimi Y Okayasu Kato Kwon H Kimura H Yamada and Song 5 Enhanced expression of MCM proteins in cancer cells derived from uterine cervix Eur J Biochem 2003 270 1089 1101 Lei M and Tye BK Initiating DNA synthesis from recruiting to activating the MCM Complex J Cell Science 2001 Vol 114 8 1447 1454 Solomon D Nayar R The Bethesda System for Reporting Cervical Cytology Definitions Criteria and Explanatory Notes 2 Edition 2004 Clinical and Laboratory Standards Institute Timothy J O Leary M D Ph D Quality Assurance for Immunocytochemistry Approved Guideline 1999 MM4 A REF
35. Ol 1 72 9 2 TWV SureDetect 1 95 C Ol 95 C 15 20
36. 23 25 36 45 60 Tn Xn 3 3 22 40 23 36 37 60 Tn Xn 7 1 n vitro 7 2 Ol Sur
37. 4 8 2 3 2 1 20 30un of DAB xpomoreHa 4b 8 2 3 3 8 2 3 4 9 20 25 7 8 9 1 7 9 7 10 B 7 11
38. TOU 200 1b 5 1 10 KOKTEIA 9 5 1 9 5 2 YAPTOTTETOETEG ENTTOTIOUEVEG 11 9 5 3 200 ProEx Ab 2 va 9 5 4 30 9 5 5
39. SurePath ProEx B SurePath 0 G1 S Il TOP2A
40. He 7 12 He SurePath ProEx 9 2 7 13 He SurePath ProEx TriPath Imaging
41. SureDetect Sida Control OT TriPath Imaging IgG 12 1 12 2
42. 9 3 3 200 un 1a 9 3 4 5 1 9 3 5 TBST B 2 9 4 1 9 4 2 9 4 3 200un 10 9 4 4 5 1 9 4 5 HE 9 5 1 9 5 2 9 5 3 200un ProEx Ab 2
43. 1 hour 72 7 3 7 4 3 3 DAB DAB 40 2013 TriPath Imaging Inc All rights reserved 779 05848 10 08 2013 12 7 5 NaN3 8 2
44. DAB 4a 8 2 3 2 20 30uL DAB 4b 8 2 9 9 8 2 3 4 dev 9 20 25 C 9 1 9 1 1 9 1 2 va 20 25 9 1 8 9 1 4
45. TOP2A TOP2A 6 ProEx MCM2 TOP2A 0 09 SurePath ProEx
46. The Bethesda System for Reporting Cervical Cytology 2nd Ed va av gt Av ZASC ZAGC ASC US ASC H LSIL HSIL TBS gt AGC AGC AIS Av NILM negative for intraepithelial lesion or malignancy 32 2013 TriPath Imaging Inc All rights reserved 779 05848 10 08 2013 12 13 14 Wright TC Schiffman M Solomn D Cox JT Garcia F Goldie Hatch Noller KL Roach Runowicz and Saslow Inter
47. Ol XPWHATIOH VES 12 2 Avtikeiuevop pol Ol 3 3 DAB SiHa SurePath ProEx IgG
48. TBST 8 3 1 TBST 3 2 9 6 1 12 9 6 2 9 6 3 200 9 6 4 20 1 9 6 5 TBST 3 2 9 6 6 9 6 7
49. 9 7 1 TBST 1 2 9 7 2 ENTTOTIOUEVEG 9 7 3 200uL 5 9 7 4 1 10 9 7 5 H20 9 7 6 ENTTOTIOUEVEG 9 7 7 200uL L 6 1 10 9 7 8 1 9 8
50. 9 8 1 95 1 25 9 8 2 4 1 25 9 8 3 1 25 9 8 4 10 1 10 2 30 11 1
51. JINN MILLENNIUM ANA og MILLENNIUM er varem rker tilh rende Millennium Pharmaceuticals Inc Millennium Pharmaceuticals Inc 40 Landsdowne Street Cambridge MA 02139 USA www millennium com P visningsreagenser leveret af Medical 2940 Camino Diablo Suite 300 Walnut Creek CA 94596 USA SurePath er et produkt og registreret varemeerke tilhorende TriPath Imaging Inc ProEx SureDetect PrepStain PrepMate er produkter og varem rker tilh rende TriPath Imaging Inc 25 2013 TriPath Imaging Inc All rights reserved 779 05848 10 08 2013 12 SUREPATH with ProEx C Immunocytochemical Test 490500 REE 490501 75 005 11000 12 005 11000 13 1 FINALIDADE an lise imuno citoquimica SurePath with ProEx Immunocytochemical Test destina se a ser utilizada para avalia o qualitativa da indu o aberrante de fase em amostras de citologia do colo do tero colhidas em SurePath Preservative Fluid Os resultados da an lise fornecem informa es adicionais para o diagn stico citol gico do colo do tero 2 RESUMO E A proteina de manuten o de minicromossomas MCM desempenha um papel essencial na replicag o de ADN eucari tico Cada uma das prote nas MCM possui motivos ATPase dependentes do ADN no seu dominio central altamente conservado Os n veis de proteinas MCM aumentam geralmente de forma vari vel medida que as c lulas normais passam da fa
52. Kloralhydrat Risikosztninger 22 Farlig ved indtagelse Sikkerhedss tninger 23 Undg ind nding af gas rog dampe aerosolt ger 25 Undg kontakt med jne 36 Brug seerligt arbejdstoj 45 Ved ulykkestilf lde eller ved ildebefindende er omg ende leegebehandling nodvendig 60 Dette materiale og dets beholder skal bortskaffes som farligt affald Xn Skadelig 3 3 diaminobenzidin Risikos tninger 22 Farlig ved indtagelse 40 Mulighed for kreeftfremkaldende effekt Sikkerhedss tninger 23 Undg ind nding af gas rag dampe aerosoltager 36 37 Brug s rligt arbejdstoj egnede beskyttelseshandsker under arbejdet 60 Dette materiale og dets beholder skal bortskaffes som farligt affald Xn Skadelig 7 FORSIGTIGHEDSREGLER 7 1 7 2 7 3 7 4 7 5 7 6 7 7 7 8 Til in vitro diagnostisk brug Klargjorte SurePath objektglas skal placeres i forbehandlingsbufferen s snart de er klargjort Objektglassene skal blive i forbehandlingsbufferen i mindst 1 time men ikke i leengere end 72 timer inden immuncytokemi Lad ikke objektglassene torre ud p noget tidspunkt under proceduren Objektglas der har veeret torret ud under proceduren kan udvise foraget baggrundsfarvning 3 3 diaminobenzidin DAB er klassificeret som et muligt karcinogent stof med risiko for frembringelse af irreversible virkninger Undg fysisk kontakt og leengerevarende eller gentagen eksponering Det an
53. TriPath Imaging Inc 780 Plantation Drive Burlington NC 27215 USA Benex Limited Rineanna House Shannon Free Zone Shannon County Clare Ireland CE Millennium Pharmaceuticals Inc JINN MILLENNIUM INA MILLENNIUM Millennium Pharmaceuticals Inc Millennium Pharmaceuticals Inc 40 Landsdowne Street Cambridge MA 02139 USA www millennium com Lu SA BioCare Medical 2940 Camino Diablo Suite 300 Walnut Creek CA 94596 To SurePath TriPath Imaging Inc Ta ProEx SureDetect PrepStain PrepMate EMTTOPIK TriPath Imaging Inc 33 2013 TriPath Imaging Inc All rights reserved 779 05848 10 08 2013 12 SUREPATH REF 490500 REF with ProEx C Immunocytochemical Test s 490501 005 11000 12 005 11000 13 1 5 KULLANIM AMACI SurePath ve ProEx Immunocytochemical Test mm nositokimyasal Test SurePath Preservative Fluid Koruyucu Sivilari iginde toplanan sitoloji numunelerinde anormal S Faz ind ksiyonunun kalitatif degerlendirilmesinde kullanilmak zere tasarlanmistir Test sonuglari servikal sitoloji tan s i in yard mc
54. 12 2 Controleglaasjes De objectglaasjes voor de positieve en negatieve controle moeten voorafgaand aan het bekijken van de pati ntmonsters worden onderzocht om er zeker van te zijn dat alle reagentia correct hebben gefunctioneerd De aanwezigheid van een bruin reactieproduct 3 3 diaminobenzidine tetrahydrochloride DAB in de nucleus van het SiHa celcontroleglaasje gekleurd met de SurePath met ProEx C test duidt op een positieve reactiviteit Het objectglaasje voor negatieve controle met universele muis IgG gekleurd met de SurePath met ProEx C test mag geen bruin gekleurde nucleus hebben en alleen kleuring uit de hematoxyline achtergrondkleuring vertonen 12 3 Het bepalen van de score van de objectglaasjes is een proces in 4 stappen Stap 1 Is het monster adequaat The Bethesda System TBS for Reporting Cervical Cytology 2de uitgave vermeldt Een adequaat preparaat op vloeistofbasis dient een geschat minimum van ten minste 5000 goed gevisualiseerde goed geconserveerde plaveiselcellen bevatten Dezelfde criteria dienen te worden toegepast op de SurePath met ProEx C objectglaasjes Echter net als bij elke gebruikelijke Pap bereiding is elk monster met abnormale cellen dat een positieve moleculaire reactie vertoont per definitie geschikt voor evaluatie Indien het antwoord op deze stap Ja is gaat u naar de volgende stap indien het antwoord is dan is het resultaat Ongeschikt voor evaluatie Stap 2 Is er
55. 9 6 7 9 6 8 9 6 9 9 6 10 9 6 11 9 6 12 9 6 13 9 6 14 9 6 15 Knacka bort all kvarvarande buffert Ladda objektglasen i en preparerad fuktkammare fylld med pappershanddukar eller kompresser fuktade med vatten Applicera 200 uL musprobreagens 3a s att det t cker cellavlagringsytan helt Inkubera i 20 minuter 1 minut Sk lj objektglasen i TBST 3 byten 2 minuter vardera Knacka bort all kvarvarande buffert Ladda objektglasen i en preparerad fuktkammare fylld med pappershanddukar eller kompresser fuktade med vatten Applicera 200 uL polymerreagens vial 3b s att det t cker cellavlagringsytan Inkubera i 20 minuter 1 minut Sk lj objektglasen i TBST badet 3 byten 2 minuter vardera Knacka bort all kvarvarande buffert Ladda objektglasen i preparerad fuktkammare fylld med pappershanddukar eller kompresser fuktade med vatten Applicera 200 substratkromogen l sning DAB s att det t cker cellavlagringsytan helt Inkubera i 5 minuter 1 minut Sk lj objektglasen i 5 minuter i avjoniserat vatten Kontrollf rg 9 7 1 9 7 2 9 7 3 9 7 4 9 7 5 9 7 6 Sk lj objektglasen i TBST 1 byte i 2 minuter Ladda objektglasen i en preparerad fuktkammare fylld med pappershanddukar eller kompresser fuktade med vatten Applicera 200 uL hematoxylinkontrollf rg vial 5 s att det t cker cellavlagringsytan helt Inkubera i 1 minut 10 s
56. Hematoxyline en blauwkleurend agens deze reagentia zijn schadelijk als ze worden ingeslikt Hematoxyline en blauwkleurend agens zijn irriterend voor ogen huid en luchtwegen 20 2013 TriPath Imaging Inc All rights reserved 779 05848 10 08 2013 12 7 7 7 8 7 9 7 10 7 11 7 12 7 13 7 14 7 15 Monsters alle aan monsters blootgestelde materialen dienen te worden 9 1 behandeld als potenti le overdragers van infecties en met inachtneming van de juiste voorzorgsmaatregelen te worden verwijderd Reagentia nooit met de mond pipetteren en contact van reagentia en monsters met de huid en slijmvliezen vermijden Indien reagentia in contact komen met gevoelige plekken dient u deze met een ruime hoeveelheid water te wassen Beperk microbi le verontreiniging van reagentia tot een minimum om niet specifieke kleuring te vermijden Andere incubatietijden temperaturen of methoden dan vermeld kunnen leiden tot onjuiste resultaten Reagentia zijn verdund voor een optimale werking Verdere verdunning kan resulteren in verminderde antigeenkleuring 9 2 Kitonderdelen zijn specifiek voor de partij Vervang geen kitonderdelen door onderdelen met andere partijnummers Partijnummers staan op de verpakkingsetiketten vermeld Gebruik de SurePath met ProEx C testkit niet na de uiterste gebruiksdatum op de verpakking Als reagentia bewaard worden onder andere omstandigheden dan vermeld in de productbij
57. Soluzione tamponata di Tris TBS Tween 20 Controllo negativo universale per IgG di topo Vortexer Xilene o sostitutivi dello xilene Pentola elettrica per cottura a vapore delle verdure bagnomaria 6 AVVERTENZE Idrato di cloro Frasi di rischio 22 Nocivo se ingerito Frasi di sicurezza 23 Non respirare gas esalazioni vapori aerosol 25 Evitare il contatto con gli occhi 36 Indossare indumenti protettivi adeguati Xn Nocivo 45 In caso di incidente o di malessere consultare immediatamente un medico 60 Questo materiale e il recipiente devono essere smaltiti come rifiuti pericolosi 3 3 diaminobenzidine DAB Frasi di rischio 22 Nocivo se ingerito 40 Possibilit di effetti cancerogeni prove insufficienti Frasi di sicurezza 23 Non respirare gas esalazioni vapori aerosol 36 37 Indossare indumenti e guanti protettivi adatti 60 Questo materiale e il recipiente devono essere smaltiti come rifiuti pericolosi Xn Nocivo 7 PRECAUZIONI 7 1 7 2 7 3 7 4 7 5 Per uso diagnostico in vitro Appena pronti i vetrini SurePath devono essere posti nel tampone di pretrattamento dove dovranno rimanere per almeno 1 ora ma non pi di 72 ore prima del test immunocitochimico Evitare l essiccazione dei vetrini in qualunque fase della procedura vetrini che abbiano subito essiccazione durante la preparazione possono presentare un aumento nella colorazione di fondo La
58. incuba es devem ser efectuadas temperatura ambiente salvo indica o em contr rio 9 1 4 Durante o procedimento de colora o n o permitir a secagem das l minas As prepara es celulares secas poder o apresentar um aumento da colora o n o espec fica Proteger as l minas que possam ser expostas a correntes de ar As l minas devem ser colocadas numa c mara h mida para incuba es prolongadas Recupera o do ep topo 9 2 1 Colocar as l minas preparadas num frasco Coplin contendo uma solu o de trabalho de tamp o de prepara o de l minas SureDetect durante um per odo m nimo de 1 hora at um m ximo de 72 horas 9 2 2 Incubar num banho de gua ou estufa de vapor durante 15 minutos a uma temperatura de 95 9 2 3 Retirar o frasco Coplin com as l minas do banho de gua ou da estufa de vapor e deixar as l minas arrefecerem no tamp o durante 20 minutos 9 2 4 Lavar as l minas desionizada e transferir para um frasco Coplin limpo que contenha TBST Reagente de bloqueio 9 3 1 Remover o tamp o em excesso com pequenas pancadas 9 3 2 Colocar as l minas numa c mara h mida preparada cheia de gazes ou folhas de papel absorvente embebidas em gua 9 3 3 Aplicar 200 ul de reagente de bloqueio de peroxidase frasco 1 de modo a cobrir a rea de deposi o de c lulas 9 3 4 Incubar durante 5 minutos 1 minuto 9 3 5 Lavar as l minas em TBST 3 banhos 2 minutos c
59. 20 fino ad una concentrazione finale dello 0 05 8 2 3 Soluzione substrato cromogeno DAB volume sufficiente per 5 vetrini 8 2 3 1 Trasferire 1 mL di tampone substrato DAB flacone 4a una provetta 8 2 3 2 Aggiungere una goccia 20 30 uL di cromogeno DAB flacone 4b Miscelare bene ed applicare sui vetrini tramite una pipetta 8 2 3 3 Preparare quotidianamente la soluzione substrato cromogeno 8 2 3 4 La qualit di colorazione non viene condizionata dal precipitato che pu svilupparsi nella soluzione 9 PROTOCOLLO DI COLORAZIONE eseguito a temperatura ambiente 20 25 C 9 3 9 4 9 5 Note sulla procedura di colorazione 9 1 1 Leggere attentamente queste istruzioni ed acquisire familiarit con tutti i componenti prima dell uso vedere Precauzioni 9 1 2 Tutti i reagenti devono essere equilibrati a temperatura ambiente 20 25 prima dell immunocolorazione 9 1 3 Tutte le incubazioni devono essere eseguite a temperatura ambiente se non diversamente specificato 9 1 4 Evitare l essiccamento dei vetrini durante la procedura di colorazione Preparazioni cellulari essiccate possono presentare una maggiore colorazione aspecifica Proteggere i vetrini che possano essere esposti a correnti d aria Per incubazioni prolungate porre i vetrini in una camera umida Smascheramento degli epitopi 9 2 1 Porre i vetrini allestiti in una coplin jar contenente una soluzione di tampone per preparazione vetrini
60. 7 14 9 3 MSDS 7 15 SurePath ProEx SurePath SurePath 8 1 8 1 1 no SurePath PrepStain System SurePath 8 SurePath 9 4 SurePath 2 BD PrepMate
61. 7 14 7 15 8 1 8 2 Ematossilina e agente di colorazione blu questi reagenti sono dannosi se ingeriti 9 1 L ematossilina e gli agenti di colorazione blu sono irritanti per occhi cute tratto respiratorio campioni e tutti i materiali che entrano in contatto con essi devono essere trattati come materiali potenzialmente infetti e pertanto devono essere smaltiti assumendo tutte le precauzioni necessarie Non pipettare mai i reagenti con la bocca ed evitare che reagenti e campioni entrino in contatto con la pelle e le mucose In caso di contatto dei reagenti con zone sensibili lavare la zona con abbondante acqua Evitare la contaminazione batterica dei reagenti altrimenti potrebbe verificarsi una colorazione aspecifica Tempi temperature e modalit di incubazione diversi da quelli specificati possono generare risultati erronei 9 2 reagenti sono stati diluiti per assicurare una prestazione ottimale Ulteriori diluizioni potrebbero causare la perdita di colorazione antigenica componenti del kit sono lotto specifici Non scambiare i componenti del kit con reagenti aventi altri numeri di lotto numeri di lotto appaiono sulle etichette della confezione Non utilizzare il kit SurePath con ProEx dopo la data di scadenza indicata sulla confezione Nel caso in cui i reagenti vengano conservati in condizioni diverse da quelle specificate nel foglietto illustrativo l utente dovr convalidarne lo stato Non
62. AEN SureDetect SiHa Cell Line REF 005 11012 10 TriPath Imaging Inc ATTIOVIOH VO 95 100 HIKPOOK TTIO 10x 20x 40x va 20uL 200 1000 SureDetect 10X ANA 090 11008 10 TriPath Imaging Inc 1 60 TBS Tween 20 IgG 22
63. No deje que los portaobjetos se sequen durante el procedimiento de tinci n Las preparaciones celulares secas pueden producir un aumento de la tinci n no espec fica Proteja los portaobjetos que puedan estar expuestos a corrientes de aire Hay que colocar los portaobjetos en una c mara h meda durante incubaciones prolongadas Recuperaci n de epitopos 9 2 1 Coloque los portaobjetos preparados en una jarra de Coplin que contenga una soluci n de trabajo de tamp n de preparaci n de portaobjetos SureDetect durante un m nimo de 1 hora hasta un m ximo de 72 horas 9 2 2 Inc belos en un ba o de agua o una vaporera durante 15 minutos a 95 C 9 2 3 Retire toda la jarra de Coplin con los portaobjetos del ba o de agua o la vaporera y deje que se entr en en el tamp n durante 20 minutos 5 9 2 4 Enjuague los portaobjetos con desionizada transfi ralos una jarra de Coplin limpia que contenga TBST Reactivo inhibidor 9 3 1 Golpee suavemente varias veces para eliminar el tamp n sobrante 9 3 2 Cargue los portaobjetos en una c mara de humedad preparada llena de toallas de papel o gasas humedecidas en agua 9 3 3 Aplique 200 ul de reactivo inhibidor de peroxidasa vial 1a para cubrir el rea de deposici n del pocillo 9 3 4 Inc belo durante 5 minutos 1 minuto 9 3 5 Enjuague los portaobjetos en TBST con cambios de 2 minutos cada uno Inhibidor de prote nas 9 4 1 Golpee suavemente var
64. and Song 5 Enhanced expression of MCM proteins in cancer cells derived from uterine cervix Eur J Biochem 2003 270 1089 1101 Lei and Tye Initiating DNA synthesis from recruiting to activating the MCM Complex J Cell Science 2001 Vol 114 8 1447 1454 Solomon D Nayar R The Bethesda System for Reporting Cervical Cytology Definitions Criteria and Explanatory Notes El sistema Bethesda para informar la citolog a cervical Definiciones criterios y notas aclaratorias 2 2 edici n 2004 Clinical and Laboratory Standards Institute Timothy J O Leary M D Ph D Quality Assurance for Immunocytochemistry Approved Guideline 1999 MM4 A GLOSARIO DE S MBOLOS REF N mero de cat logo Para uso diagn stico in vitro Consultar instrucciones de uso Contiene 75 pruebas Atenci n consultar documentaci n incluida gt lt BE E no Limites de temperatura de almacenamiento C digo de lote Utilizar antes de AAAA MM DD AAAA MM Fabricante SERVICIO DE ASISTENCIA T CNICA EE UU Technical Service amp Support BD Diagnostics Diagnostic Systems www bd com ds technical_services bd com 1 800 638 8663 TriPath Imaging Inc 780 Plantation Drive Burlington NC 27215 USA 14 2013 TriPath Imaging Inc All rights reserved 779 05848 10 08 2013 12 Benex Limited Rineanna House Shannon Free Zone Shannon County Clare Ireland CE Desarrollado con tecnolo
65. bilgiler sa lar ZET VE A IKLAMA Minikromozom idame proteinleri karyotik DNA replikasyonunda nemli bir rol oynar MCM proteinlerinin her biri son derece korunumlu merkez alanlar nda DNA ya ba ml ATPaz motiflerine sahiptir Normal h creler h cre d ng s n n G0 faz ndan G1 S faz na ge erken MCM proteinlerinin d zeyleri genel olarak de i ken bir bi imde artar Topoizomeraz Il alfa TOP2A DNA replikasyonunda rol oynayan nemli bir n kleer enzimdir ve kanser tedavisinde kullan lan o u anti kanser ilac n n hedefidir D k TOP2A ekspresyonu baz kemoterap tik ajanlara kar bask n bir diren mekanizmas d r Bir ok farkl t m rde bu proteinin ekspresyon aral nda belirgin bir varyasyon kaydedilmi tir TOP2A o almakta olan h crelerde bask nd r ve faz nda belirli b lgelerde fosforilasyon ile de i ime u rar bu da mitotik kromozom yo unla mas ve segregasyonu a s ndan kritik neme sahiptir ProEx C Antibody Cocktail Antikor Kokteyli doku k lt r st fazindan safla t r lm ve protein stabilizat rleri ile 60 09 sodyum azid i eren tamponlu salin zeltisinde seyreltilmi fare monoklonal anti MCM2 ve anti TOP2A i erir PROSED R LKELER SurePath ve ProEx Immunocytochemical Test mm nositokimyasal Test kiti bir antikor kokteyli rutin olarak haz rlanan ince katmanl servikal numunelere y nelik ad ml manuel veya otomatik im
66. chromogen reagents are harmful if inhaled These reagents are hazardous solids Causes 4b a diaminobenzidine chromogen 2 8 C irritation to skin eyes and respiratory tract Affects central nervous system kidneys souo and cardiovascular system Although not classified as hazardous at product Hematoxylin Aqueous based Mayer s 15 30 C i A 5 Hematoxylin a concentrations build ups of sodium azide may react with lead and copper plumbing Bluing Agent Tris buffered saline pH E to form highly explosive metal azides Upon disposal flush with large volumes of 6 7 4 with Tween 20 and 0 09 15 30 C water to prevent azide build up in plumbing 7 6 Hematoxylin and Bluing agent These regents are harmful if swallowed MATERIALS AND REAGENTS REQUIRED BUT NOT SUPPLIED Hematoxylin and Bluing agents are eye skin and respiratory irritants Absorbent Wipes 7 7 Specimens and all materials exposed to specimens should be handled as if capable SureDetect SiHa Cell Line REF 005 11012 10 TriPath Imaging Inc Deionized or Distilled Water of transmitting infection and disposed of with proper precautions Never pipette reagents by mouth and avoid contacting the skin and mucous membranes with reagents and specimens lf reagents come in contact with sensitive areas wash with copious amounts of water 2013 TriPath Imaging Inc All rights reserved 779 05848 10 08 2013 12 7 8 Minimize microbial contamination of
67. place Les r sultats sont interpr t s l aide d un microscope optique Un r sultat positif indicatif d une l sion cervicale de grade lev est mis en vidence par la coloration en marron du noyau des cellules consid r es Une galerie de r f rence comportant des lames potentiellement positives peut tre cr e l aide d un appareil d imagerie automatique La galerie peut tre examin e afin de d terminer si un r sultat est positif ou n gatif Le test immunocytochimique SurePath avec ProEx est utilisable avec les appareils de coloration manuels et automatiques 4 REACTIFS FOURNIS Les mat riels suivants sont inclus dans le kit et permettent de r aliser 75 pr parations sur couche mince Flacon n Description Blocage de la peroxydase peroxyde ta d hydrog ne tamponn plus des agents de 2 8 C stabilisation et des compos s propri taires Blocage des prot ines cas ine purifi e plus une combinaison propri taire de 2 8 prot ines dans du PBS modifi avec agent de conservation et surfactant M lange d anticorps m lange d anticorps monoclonaux pr t l emploi dans une solution 2 tamponn e de TRIS avec du Tween 20 7 4 2 8 C de pH Contient des prot ines stabilisantes et un agent antimicrobien Sonde de souris se lie des anticorps monoclonaux de souris R actif polym rique polym re conjugu 3b avec de la peroxydase de raifort qui se lie au 2 8 C r actif sonde d
68. 1 Minute oder 25mal in jeweils frischen absoluten Alkohol eintauchen 9 8 3 Viermal 1 Minute oder 25mal in jeweils frisches Xylol eintauchen 9 8 4 Objekttr ger mit einem nicht w ssrigen permanenten Fixiermittel und Deckgl sern bedecken STABILIT T 10 1 Ungedffnete Reagenziengef e sind bei Raumtemperatur bis zu dem auf dem Gef f aufgedruckten Verfalldatum stabil 10 2 Nach dem ffnen sind die Reagenzien f r die Dauer von 30 Tagen stabil sofern sie bei der jeweils empfohlenen Temperatur aufbewahrt werden QUALIT TSKONTROLLE 11 1 Abweichende Ergebnisse treten zumeist aufgrund einer Probenbehandlung auf die von den empfohlenen Testverfahren abweicht Weitere Angaben bitte den Empfehlungen zur Qualit tskontrolle des Clinical and Laboratory Standards Institute Quality Assurance for Immunocytochemistry entnehmen 11 2 SureDetect SiHa Kontrollzelllinien sind als Positivkontrolle ber TriPath Imaging Inc erh ltlich Jedes Gef B enth lt eine Zervixkarzinom Zelllinie die analog zu den klinischen Proben verarbeitet wird Als Negativkontrolle eignet sich eine universelle Maus IgG Negativkontrolle Bei jedem F rbeverfahren sollte je ein Objekttrager mit einer Positiv und Negativkontrolle mitgef hrt werden Die F rbungsergebnisse sollten benutzt werden um die Qualitaet des F rbedurchlauf anzuzeigen AUSWERTUNG DER F RBUNG 12 1 Patienten und Kontrollproben Die gef rbten Objekttr ger sind durch einen Zytotech
69. 9 8 4 10 1 10 2 14 12 9 6 1 11 1
70. Blockerande reagens 9 3 1 9 3 2 9 3 3 9 3 4 9 3 5 Knacka bort all kvarvarande buffert Ladda objektglasen i en preparerad fuktkammare fylld med pappershanddukar eller kompresser fuktade med vatten Applicera 200 uL peroxidasblockeringsreagens vial 1a s att det t cker cellavlagringsytan Inkubera i 5 minuter 1 minut Sk lj objektglasen i TBST 3 byten 2 minuter vardera Proteinblock 9 4 1 9 4 2 9 4 3 9 4 4 9 4 5 Knacka bort all kvarvarande buffert Ladda objektglasen i en preparerad fuktkammare fylld med pappershanddukar eller kompresser fuktade med vatten Applicera 200 uL proteinblock vial 1b s att det t cker cellavlagringsytan helt Inkubera i 5 minuter 1 minut SK LJ INTE Prim r antikroppscocktail 9 5 1 9 5 2 9 5 3 9 5 4 9 5 5 9 5 6 Knacka all kvarvarande proteinblock Ladda objektglasen i en preparerad fuktkammare fylld med pappershanddukar eller kompresser fuktade med vatten Applicera 200 uL ProEx Ab cocktail vial 2 s att det tacker cellavlagringsytan helt Inkubera 30 minuter vid rumstemperatur Sk lj varje objektglas individuellt med TBST genom att anv nda en diskborste rikta inte fl det direkt mot cellavlagringsytan Ladda objektglasen i ett objektglasst ll Sk lj objektglasen i TBST 3 byten 2 minuter vardera Detekteringskemi 9 6 1 9 6 2 9 6 3 9 6 4 9 6 5 9 6 6
71. Cada frasco cont m uma linha celular do cancro do colo do tero que processada da mesma forma que as amostras cl nicas Como controlo negativo pode utilizar se o controlo universal negativo de IgG de ratinho Em cada procedimento de colora o dever ser inclu da uma l mina de controlo positivo e negativo Os resultados da colora o dever o ser utilizados como indica o da validade do processo de colora o INTERPRETA O DA COLORA O 12 1 Amostras de doentes e de controlo Um t cnico de citologia ou um patologista dever avaliar as l minas coradas utilizando um microsc pio ptico As c lulas podem ser revistas manualmente ou memorizadas numa galeria de imagens electr nicas obtidas a partir de um microsc pio ptico 12 2 L minas de controlo As l minas de controlo positivo e negativo dever o ser examinadas antes da respectiva revis o das amostras das doentes de modo a assegurar que todos os reagentes funcionaram devidamente A presen a de um produto de reac o castanha 3 3 diaminobenzidina tetrahidrocloreto DAB no n cleo de uma l mina de controlo celular SiHa corada por meio da an lise SurePath with ProEx indicadora de reactividade positiva A l mina de controlo negativo universal de IgG de ratinho corada por meio da an lise SurePath with ProEx n o deve apresentar quaisquer n cleos de colora o castanha e s dever apresentar colora o com a aplica o do contrastante hemat
72. D Interim Guidance for the Use of Human Papillomavirus DNA Testing as an Adjunct to Cervical Cytology for Screening Obstet Gynecol 2004 102 304 309 Ishimi Y Okayasu I Kato Kwon H Kimura H Yamada and Song 5 Enhanced expression of MCM proteins in cancer cells derived from uterine cervix Eur J Biochem 2003 270 1089 1101 Lei and Tye BK Initiating DNA synthesis from recruiting to activating the MCM Complex J Cell Science 2001 Vol 114 8 1447 1454 Solomon D Nayar R The Bethesda System for Reporting Cervical Cytology Definitions Criteria and Explanatory Notes 2 Edition 2004 Clinical and Laboratory Standards Institute Timothy J O Leary M D Ph D Quality Assurance for Immunocytochemistry Approved Guideline 1999 MM4 A 14 SYMBOLFORKLARING Katalognummer Til in vitro diagnostisk brug Se brugsanvisningen Indeholder 75 test Forsigtig lees den medfglgende dokumentation Temperaturbegr nsninger under opbevaring Batchnummer Anvendes inden AAAA MM DD eller AAAA MM 5 gt 188 Producent TEKNISK SUPPORT USA Technical Service amp Support BD Diagnostics Diagnostic Systems www bd com ds technical_services bd com 1 800 638 8663 TriPath Imaging Inc 780 Plantation Drive Burlington NC 27215 USA Benex Limited Rineanna House Shannon Free Zone Shannon County Clare Ireland CE Udviklet med teknologi fra Millennium Pharmaceuticals Inc
73. Gebrauchsanleitung beachten Enth lt 75 Tests Vorsicht Begleitpapiere beachten Zul ssiger Temperaturbereich f r die Aufbewahrung Chargenbezeichnung Bis JJJJ MM TT oder JJJJ MM verbrauchen nE gt lt HEE Hersteller TECHNISCHER KUNDENDIENST USA Technical Service amp Support BD Diagnostics Diagnostic Systems www bd com ds technical_services bd com 1 800 638 8663 TriPath Imaging Inc 780 Plantation Drive Burlington NC 27215 USA Limited Rineanna House Shannon Free Zone Shannon County Clare Ireland CE Mit Technologie von Millennium Pharmaceuticals Inc entwickelt INN MILLENNIUM JNA und MILLENNIUM sind Warenzeichen der Millennium Pharmaceuticals Inc Millennium Pharmaceuticals Inc 40 Landsdowne Street Cambridge MA 02139 USA www millennium com 2013 TriPath Imaging Inc All rights reserved 779 05848 10 08 2013 12 Nachweisreagenzien von BioCare Medical 2940 Camino Diablo Suite 300 Walnut Creek CA 94596 SurePath ist ein Erzeugnis und ein eingetragenes Warenzeichen der TriPath Imaging Inc ProEx SureDetect PrepStain PrepMate sind Erzeugnisse und Warenzeichen der TriPath Imaging Inc 7 2013 TriPath Imaging Inc All rights reserved 779 05848 10 08 2013 12 SUREPATH with ProEx C Immunocytochemical Test REF 490500 SET 490501 75 005 11000 12 005 11000 13 1 DOMAINE D UTILISATION Le test immunocytochimi
74. Inc 10 2013 TriPath Imaging Inc All rights reserved 779 05848 10 08 2013 12 Millennium Pharmaceuticals Inc 40 Landsdowne Street Cambridge MA 02139 USA www millennium com R actifs de d tection fournis par A BioCare Medical 2940 Camino Diablo Suite 300 Walnut Creek CA 94596 SurePath est un produit et une marque commerciale de TriPath Imaging Inc ProEx SureDetect PrepStain PrepMate sont des produits et des marques commerciales de TriPath Imaging Inc 11 2013 TriPath Imaging Inc All rights reserved 779 05848 10 08 2013 12 SUREPATH with ProEx C Immunocytochemical Test 490500 REE 490501 V 005 11000 12 005 11000 13 1 USO PREVISTO La prueba inmunocitoqu mica SurePath con ProEx est indicada para la evaluaci n cualitativa de las inducciones aberrantes de la fase S en las muestras citol gicas cervicales recogidas en el l quido conservante SurePath Los resultados de la prueba proporcionan informaci n complementaria para el diagn stico citol gico cervical 2 RESUMEN Y EXPLICACI N Las prote nas de mantenimiento de minicromosomas MCM desempe an un papel esencial en la replicaci n del ADN eucari tico Cada una de las prote nas MCM tiene secuencias de ATPasa dependientes del ADN en su dominio central altamente conservado Los niveles de prote nas MCM aumentan generalmente de una forma variable a medida que las c lulas normales prog
75. Plaats de voorbereide objectglaasjes een Coplin jar met een werkoplossing van SureDetect preparaatvoorbereidingsbuffer gedurende minimaal 1 uur en maximaal 72 uur 9 2 2 Incubeer een waterbad of stomer gedurende 15 minuten bij 95 C 9 2 3 Haal de gehele Coplin jar met de objectglaasjes uit het waterbad of stomer en laat de objectglaasjes gedurende 20 minuten afkoelen in de buffer 9 2 4 Spoel de objectglaasjes af met gedemineraliseerd en breng ze over naar een schone Coplin jar met Blokkeerreagens 9 3 1 overmatige buffer af 9 3 2 Laad de objectglaasjes in een voorbereide bevochtigingskamer gevuld met met water bevochtigde keukenrol of gaas 9 3 3 Gebruik 200 ul peroxidase blokkeerreagens flacon 1a om het celafzettingsgebied te bedekken 9 3 4 Incubeer gedurende 5 minuten 1 minuut 9 3 5 Spoel de objectglaasjes in TBST in 3 wisselbeurten van elk 2 minuten Prote neblok 9 4 1 Tik overmatige buffer af 9 4 2 Laad de objectglaasjes in de voorbereide bevochtigingskamer gevuld met met water bevochtigde keukenrol of gaas 9 4 3 Gebruik 200 ul prote neblok flacon 1b om het celafzettingsgebied volledig te bedekken 9 4 4 Incubeer gedurende 5 minuten 1 minuut 9 4 5 NIET SPOELEN Primaire antilichaamcocktail 9 5 1 overmatig prote neblok af 9 5 2 Laad de objectglaasjes in de voorbereide bevochtigingskamer gevuld met met water bevochtigde keukenrol of gaa
76. PrepStain 8 1 2 SurePath SureDetect SureDetect Slide Preparation Buffer 10X 1 hour 72 9 5 SureDetect Ha 1 95 95 15 20
77. SurePath ve ProEx kitiyle ilgili bir problem phesi do arsa TriPath Imaging teknik destek birimine ba vurun 7 14 Reaktifin g zler ve deriyle temas ndan ka nmak i in uygun Ki isel Koruyucu Donan m giyin Daha fazla bilgi i in Malzeme G venlik Veri Dosyas na MSDS ba vurun 7 15 SurePath ve ProEx Test SurePath Preservative Fluid Koruyucu S v i inde toplanan servikal sitoloji numuneleriyle kullan lmak zere tasarlanm t r SurePath d nda geleneksel ve tek katmanl preparatlar ile uyumlulu u de erlendirilmemi tir 8 KULLANIM TAL MATLARI 8 1 Numune Haz rlama 8 1 1 Kal nt SurePath servikal sitoloji numunelerinden al nan slaytlar n haz rlanmas yla ilgili talimatlar i in SurePath amp PrepStain System Kullan c K lavuzu na bak n 8 1 2 SurePath flakonundaki kal nt numuneye yakla k 2 mL 8 mL SurePath Preservative Fluid Koruyucu S v ekleyin Seyreltilmi numune standart teknik kullan larak BD PrepMate ve PrepStain zerinde i lemden ge irilmelidir 8 1 3 Haz rlanan SurePath slaytlar haz rland ktan sonra en k sa s rede SureDetect Slide Preparation Buffer Slayt Haz rlama Tamponu zerine yerle tirilmelidir al ma slayt zeltisinin haz rlanmas hakk nda talimatlar i in bkz SureDetect Slide Preparation Buffer 10X Slaytlar tampon i inde en az 1 saat kalmal ancak imm nositokimya i lemi n
78. anticorpi coniugati ad un enzima ed un cromogeno pronto all uso Il reagente enzimatico un anticorpo secondario anti topo da capra coniugato con perossidasi estratta da radice di rafano legato ad una catena primaria di destrano L aggiunta di uno specifico cromogeno provoca la formazione di un precipitato colorato visibile localizzato in corrispondenza dei siti di legame antigene anticorpo Il campione viene sottoposto a colorazione di contrasto con ematossilina viene applicato un agente di colorazione blu e su di esso viene montato il vetrino coprioggetti risultati vengono interpretati tramite microscopio ottico Il risultato positivo indice di patologia cervicale di alto grado si ottiene quando il nucleo delle cellule in questione si colora di marrone possibile creare una galleria di riferimento di vetrini potenzialmente positivi utilizzando apparecchiature di imaging automatiche quindi possibile consultare la galleria per determinare un risultato positivo o negativo Il test immunocitochimico SurePath con ProEx applicabile a procedure di colorazione sia manuali che automatiche 4 REAGENTI FORNITI Vengono forniti i seguenti materiali sufficienti per 75 preparazioni a strato sottile Fiala nr Descrizione Bloccante della perossidasi perossido di 15 idrogeno tamponato pi stabilizzatore 2 8 C componenti proprietari Blocco proteina caseina purificata pi una 1b combinazione proprietari
79. cells derived from uterine cervix Eur J Biochem 2008 270 1089 1101 Lei and Tye BK Initiating DNA synthesis from recruiting to activating the MCM Complex J Cell Science 2001 Vol 114 8 1447 1454 Solomon The Bethesda System for Reporting Cervical Cytology Definitions Criteria and Explanatory Notes 2 Edition 2004 Clinical and Laboratory Standards Institute Timothy J O Leary M D Ph D Quality Assurance for Immunocytochemistry Approved Guideline 1999 GLOSS RIO DE S MBOLOS REF N mero de cat logo Para utiliza o em diagn stico in vitro Consultar as instru es de utiliza o Cont m 75 testes Cuidado consultar a documenta o fornecida Limita es da temperatura de conserva o C digo do lote Utilizar at AAAA MM DD ou AAAA MM Fabricante Vv A E SUPORTE T CNICO EUA Technical Service 8 Support BD Diagnostics Diagnostic Systems www bd com ds technical_services bd com 1 800 638 8663 TriPath Imaging Inc 780 Plantation Drive Burlington NC 27215 USA Benex Limited Rineanna House Shannon Free Zone Shannon County Clare Ireland CE Desenvolvido com tecnologia da Millennium Pharmaceuticals Inc INN MILLENNIUM ANA e MILLENNIUM marcas comerciais da Millennium Pharmaceuticals Inc 28 2013 TriPath Imaging Inc All rights reserved 779 05848 10 08 2013 12 Millenni
80. chambre humide pr par e remplie de serviettes en papier ou de tampons de gaze impr gn s d eau 9 7 7 Bleuir les lames en appliquant 200 ul d agent bleuissant flacon 6 pendant 1 minute 10 secondes 9 7 8 R p ter le rin age l eau courante pendant 1 minute 9 8 Montage 9 8 1 Immerger les lames dans de l thanol 95 pendant 1 minute ou 25 reprises 9 8 2 Immerger les lames dans l alcool absolu 4 reprises de 1 minute ou 25 fois chacune 9 8 3 Nettoyer avec du xyl ne 3 reprises de 1 minute ou 25 fois chacune 9 8 4 Recouvrir les lames d une lamelle avec un milieu de montage non aqueux STABILIT 10 1 Quand ils sont conserv s a la temp rature recommand e les flacons de r actifs non ouverts sont stables jusqu la date de p remption indiqu e sur le flacon 10 2 Une fois ouverts les r actifs sont stables pendant trente jours s ils sont conserv s la temp rature recommand e CONTR LE QUALIT 11 1 La variabilit des r sultats provient souvent de diff rences de manipulations des chantillons qui s cartent des proc dures de test recommand es Pour plus d informations consulter les directives de contr le qualit du Clinical and Laboratory Standards Institute Quality Assurance for Immunocytochemistry 11 2 Les cellules de contr le SureDetect SiHa sont disponibles en tant que contr le positif aupr s de TriPath Imaging Inc Chaque flacon contient une lign e cellulaire de ca
81. componentes pertenecientes a otros lotes de fabricaci n Los n meros de lote aparecen en las etiquetas del envase 9 2 No utilice el kit de pruebas SurePath con ProEx despu s de la fecha de caducidad impresa en la caja El usuario debe revisar las condiciones de almacenamiento de los reactivos si stas no son las que se especifican en el folleto de la caja No hay signos obvios que indiquen la degradaci n de este producto Por lo tanto se deben llevar a cabo controles negativos y positivos de forma simult nea con las muestras de las pacientes Si se observa una tinci n inesperada que no se puede explicar por variaciones en los procedimientos de laboratorio o se sospecha de un problema con el kit de pruebas SurePath con ProEx p ngase en contacto con el servicio de asistencia t cnica de TriPath Imaging 9 3 Lleve el equipo de protecci n personal adecuado para evitar el contacto de los reactivos con los ojos y la piel Consulte las hojas de datos de seguridad de materiales MSDS para obtener informaci n adicional La prueba SurePath con ProEx est indicada para su uso con muestras de citolog a cervical recogidas en l quido conservante SurePath La compatibilidad con preparaciones de monocapa y convencionales distintas SurePath no se han evaluado INSTRUCCIONES DE USO 8 1 8 2 Preparaci n de la muestra 8 1 1 Consulte en el Manual del operario de SurePath PrepStain System las 9 4
82. ekirde inde kahverengi boyanma olan h cre bir skuam z h cre mi yoksa gland ler h cre mi Yan t evet ise sonraki ad ma ge in Yan t hay r ise bu Negatif bir test sonucudur 4 Ad m H cre gt ASC atipik skuam z h cre mi yoksa AGC atipik gland ler h cre mi Kahverengi ekirde i i eren skuam z h crenin gt atipik skuam z h cre olup olmad n belirlemek i in Servikal Sitoloji Raporlamas 2nci Bs i in Bethesda Sistemi TBS i inde zetlenen morfolojik kriterlerin ayn lar n kullan n H crenin ZASC veya 2AGC oldu u de erlendirilirse bu bir Pozitif test sonucu olur Bu da ASC US ASC H LSIL HSIL ve kanseri kapsar H cre g r n m olarak gland ler ise h crenin gt AGC atipik gland ler h cre olup olmad n belirlemeye y nelik TBS kriterleri ge erli olur Bu da endoservikal AGC endometriyal AGC AIS ve adenokarsinomu kapsar S z konusu h cre NILM intraepitelyal lezyon veya malignansi i in negatif ile tutarl ysa bu Negatif test sonucudur REFERANSLAR Wright TC Schiffman Solomn D Cox JT Garcia Goldie Hatch Noller KL Roach N Runowicz C and Saslow D Interim Guidance for the Use of Human Papillomavirus DNA Testing as an Adjunct to Cervical Cytology for Screening Obstet Gynecol 2004 102 304 309 Ishimi Y Okayasu Kato Kwon H Kimura H Yamada and Song 5 Enhanced expression of MCM proteins in cancer cells derived from uterine c
83. en ASC US ASC H LSIL HSIL und Krebs ein Weist die Zelle ein eher glandul res Erscheinungsbild auf sind die TBS Kriterien f r die Definition von gt atypischen Dr senzellen anzuwenden Diese umfassen endozervikales AGC endometranes und Adenokarzinom Ein negatives Testergebnis liegt auch dann vor wenn das Kriterium NILM negative for intraepithelial lesion or malignancy keine intraepitheliale L sion oder Malignit t auf die fragliche Zelle zutrifft LITERATURANGABEN Wright TC Schiffman M Solomn D Cox JT Garcia F Goldie S Hatch K Noller KL Roach N Runowicz C and Saslow D Interim Guidance for the Use of Human Papillomavirus DNA Testing as an Adjunct to Cervical Cytology for Screening Obstet Gynecol 2004 102 304 309 Ishimi Y Okayasu Kato Kwon H Kimura H Yamada and Song 5 Enhanced expression of MCM proteins in cancer cells derived from uterine cervix Eur J Biochem 2003 270 1089 1101 Lei M and Tye BK Initiating DNA synthesis from recruiting to activating the MCM Complex J Cell Science 2001 Vol 114 8 1447 1454 Solomon D Nayar R The Bethesda System for Reporting Cervical Cytology Definitions Criteria and Explanatory Notes 2 Edition 2004 Clinical and Laboratory Standards Institute Timothy J O Leary M D Ph D Quality Assurance for Immunocytochemistry Approved Guideline 1999 MM4 A LEGENDE DER SYMBOLE Katalognummer Zur In vitro Diagnostik
84. entnehmen 8 1 2 Zu der im SurePath Gef B verbliebenen Probe etwa 2 ml 8 ml SurePath Konservierungsl sung geben Die verd nnte Probe mit der Standardtechnik auf dem BD PrepMate sowie auf dem PrepStain Pr parierte SurePath Objekttr ger unmittelbar nach dem Pr parieren in den SureDetect Puffer zur Objekttragerpraparation einlegen Hinweise zum Ansetzen einer Objekttr ger Arbeitsl sung der Packungsbeilage des SureDetect Puffers zur Objekttr gerpr paration 10X entnehmen Vor immunzytochemischen Verfahren m ssen die Objekttr ger mindestens eine Stunde aber h chstens 72 Stunden im Puffer verbleiben 8 1 4 Fir eine optimale Kitleistung ist eine Epitopdemaskierung zwingend erforderlich Dieses Verfahren umfasst das mindestens 1st ndige Eintauchen der pr parierten Objekttr ger in eine Arbeitsl sung aus SureDetect Puffer zur Objekttragerpraparation bei Raumtemperatur gefolgt von einer Erhitzung der Objekttrager in Vorbehandlungspuffer auf 95 C Die Temperatur der Objekttrager wird 15 Minuten auf 95 C gehalten dann folgt eine 20min tige Abk hlung bei Raumtemperatur Empfohlen wird die Verwendung eines kalibrierten Wasserbads oder Dampfkochers um die geforderte Temperatur beizubehalten Labors in gr eren H henlagen sollten die beste Methode die geforderte Temperatur beizubehalten selbst ermitteln Das F rbeverfahren sollte unmittelbar im 9 6 Anschluss an die Demaskierung und Abk hlung erfolge
85. es dans la notice Il n existe aucun signe vident susceptible de signaler une d gradation de ce produit Par cons quent des contr les n gatif et positif doivent tre trait s de facon simultan e avec les chantillons de patient Si une coloration inattendue est observ e qui peut pas s expliquer par des variations dans les proc dures du laboratoire ou si un probl me avec le test SurePath avec ProEx Test est suspect contacter l assistance technique TriPath Imaging Porter des v tements de protection appropri s pour viter le contact avec les yeux et la peau Pour plus d informations se r f rer aux Fiches de donn es de s curit MSDS Le test SurePath avec ProEx est destin a tre utilis avec des chantillons cytologiques cervicaux recueillis dans du liquide conservateur SurePath La compatibilit avec les pr parations conventionnelles et monocouches autre que le SurePath pas t valu e MODE D EMPLOI 8 1 8 2 Pr paration des chantillons 8 1 1 Consulter le Manuel de l op rateur du SurePath PrepStain System pour obtenir des instructions relatives la pr paration des lames partir des 9 4 chantillons cytologiques cervicaux SurePath r siduels Ajouter 8 ml de liquide conservateur SurePath l chantillon r siduel dans le flacon SurePath environ 2 ml L chantillon dilu doit tre trait sur le BD PrepMate a l aide de la techniqu
86. esistono segni univoci che possano indicare il degrado del prodotto Pertanto i controlli positivi e negativi devono essere eseguiti contemporaneamente ai campioni del paziente Se si osserva una colorazione imprevista non derivante da variazioni nelle procedure di laboratorio o si sospetta un problema nel kit per il test SurePath con ProEx contattare l assistenza tecnica TriPath Imaging Indossare idonei presidi di protezione personale atti ad evitare il contatto dei reagenti con occhi e cute Per ulteriori informazioni consultare la scheda di sicurezza del materiale MSDS Il test SurePath con ProEx stato sviluppato per l impiego su campioni citologici cervicali raccolti in conservante SurePath Non stata valutata la compatibilit con strisci tradizionali e preparazioni a strato sottile diverse dalle SurePath ISTRUZIONI PER L USO Preparazione dei campioni 8 1 1 Consultare il Manuale per l operatore del SurePath PrepStain System per istruzioni inerenti alla preparazione dei vetrini da campioni citologici cervicali residui SurePath 8 1 2 Aggiungere 8 mL di conservante SurePath al campione residuo nel contenitore SurePath circa 2 mL Il campione diluito deve essere elaborato su BD PrepMate secondo la tecnica standard e su PrepStain Appena allestiti i vetrini SurePath devono essere posti nel tampone di preparazione SureDetect fare riferimento a Tampone di preparazione dei vetrini 10
87. gibi i lem yap lmal ve bu malzemeler uygun nlemler al narak at lmal d r Reaktifleri pipetle aktar rken asla a z n z kullanmay n ve cildin ve mukoz membranlar n reaktifler ve numuneler ile temas etmesinden ka n n Reaktifler duyarl alanlarla temas ederse bol miktarda suyla y kay n Spesifik olmayan boyamadan ka nmak i in reaktiflerin mikrobiyal kontaminasyonunu en aza indirin 34 2013 TriPath Imaging Inc All rights reserved 779 05848 10 08 2013 12 7 9 Belirtilenlerin disinda enk basyon s releri sicakliklar veya y ntemler hatali sonuclar verebilir 7 10 Reaktifler optimum performans i in seyreltilmistir Daha fazla seyreltme antijen boyama kayb na neden olabilir 7 11 Kit bile enleri lota zg d r Kit bile enlerini retilmi farkl lot numaralar n n yerine kullanmay n Lot numaralar ambalaj etiketlerinde g r lebilir 7 12 SurePath ve ProEx Test kitini ambalaj n zerine bas lm son kullanma tarihinden sonra kullanmay n Reaktifler prospekt ste belirtilenin d nda herhangi bir ko ul alt nda saklan rsa kullan c bu ko ullar n ge erlili ini denetlemelidir 7 13 r n n bozunmasini g steren belirgin bir i aret yoktur Bu nedenle hasta numuneleriyle birlikte e zamanl olarak pozitif ve negatif kontroller al t r lmal d r Laboratuvar prosed rlerindeki varyasyonlar ile a klanamayan beklenmedik bir boyanma g zlemlenirse veya
88. instrucciones para la preparaci n de portaobjetos a partir de muestras citol gicas cervicales SurePath residuales 8 1 2 A ada 8 mL de l quido conservante SurePath a la muestra residual en el vial SurePath 2 mL aproximadamente La muestra diluida se debe procesar en BD PrepMate mediante la t cnica est ndar y en PrepStain 8 1 3 Los portaobjetos SurePath preparados se deben colocar en un tamp n de preparaci n de portaobjetos SureDetect tan pronto como est n preparados consulte en el Tamp n de preparaci n de portaobjetos SureDetect 10X las indicaciones para la preparaci n de una soluci n de portaobjetos de trabajo Los portaobjetos deben permanecer en el tamp n 9 5 durante al menos 1 hora pero no m s de 72 horas antes de la inmunocitoqu mica 8 1 4 Se debe utilizar un procedimiento de recuperaci n de epitopos para un rendimiento ptimo del kit Este procedimiento implica poner en remojo los portaobjetos preparados en una soluci n de trabajo de tamp n de preparaci n de portaobjetos SureDetect durante un m nimo de 1 hora a temperatura ambiente seguido del calentamiento de los portaobjetos en el tamp n de tratamiento previo a 95 C Los portaobjetos deben mantenerse a 95 C durante 15 minutos y dejarse enfriar a temperatura ambiente durante 20 minutos Se recomienda el uso de un ba o de agua calibrado o de una vaporera de verduras que pueda mantener la temperatura necesaria Los laboratorios ubic
89. kvar i bufferten i minst 1 timme men inte l ngre 72 timmar f re immunocytokemianalys En epitop tervinningsprocedur m ste anv ndas f r optimal prestanda f r kitet Denna procedur innefattar bl tl ggning av preparerade objektglas i en arbetsl sning med SureDetect buffert f r preparering av objektglas i minst 1 timme i rumstemperatur f ljt av uppv rmning av objektglasen i f rbehandlingsbufferten till 95 C Objektglasen halls vid 95 C i 15 minuter och till ts svalna till rumstemperatur i 20 minuter Anv ndning av ett kalibrerat vattenbad eller ngkokare som klarar att bibehalla den nskade temperaturen rekommenderas Laboratorier som r placerade p h gre h jder b r fastst lla basta metod f r att bibeh lla nskad temperatur F rgningsproceduren ska initieras omedelbart efter epitop tervinningen och nedkylningen Avvikelser fran den tergivna proceduren kan p verka resultaten negativt Reagenspreparering 8 2 1 8 2 2 8 2 3 Preparera f ljande reagenser f re f rgning Tris buffrad koksaltl sning med 0 05 Tween 20 TBST 8 2 2 1 Preparera TBS enligt tillverkarens specifikationer 8 2 2 2 Tills tt Tween 20 till en slutgiltig koncentration p 0 05 om det inte redan finns i TBS Substrat kromogen l sning DAB volymen r cker till 5 objektglas 8 2 3 1 verf r 1 mL DAB substratbuffert vial 48 till ett provr r 8 2 3 2 Tills tt en droppe 20 30 uL DAB kromogen vial 4b Bl
90. na odaklamay n Slaytlar slayt raf na y kleyin 9 5 6 Slaytlar TBST i inde durulay n 3 de i im 2 er dakika Saptama Kimyas 9 6 1 Fazlal k tamponu hafif e vurarak giderin 9 6 2 Slaytlar haz rlanm bir nem haznesine suyla slat lm ka t havlular veya bezler ile dolu y kleyin 9 6 3 H cre birikim alan n tamamen rtmek i in 200 uL Fare Prob Reaktifi flakon uygulay n 9 6 4 20 dakika 1 dakika enk be edin 9 6 5 Slaytlar TBST i inde durulay n 3 de i im 2 er dakika 9 6 6 Fazlal k tamponu hafif e vurarak giderin 9 6 7 Slaytlar haz rlanm bir nem haznesine suyla slat lm ka t havlular veya bezler ile dolu y kleyin 9 6 8 H cre birikim alan n tamamen rtmek i in 200 uL Polimer Reaktifi flakon 3b uygulay n 9 6 9 20 dakika 1 dakika enk be edin 9 6 10 Slaytlar TBST banyosunda durulay n 3 de i im 2 er dakika 9 6 11 Fazlal k tamponu hafif e vurarak giderin 9 6 12 Slaytlar haz rlanm nem haznesine suyla slat lm ka t havlular veya bezler ile dolu y kleyin 9 6 13 H cre birikim alan n tamamen rtmek i in 200 uL Substrat Kromojen zeltisi DAB uygulay n 9 6 14 5 dakika 1 dakika enk be edin 9 6 15 Slaytlar deiyonize H20 i inde 5 dakika durulay n Kar Boyama 9 7 1 Slaytlar TBST i inde durulay n 2 dakika i in 1 de i im 9 7 2 Slaytlar haz rlanm
91. portaobjetos SureDetect 10X REF 090 11008 10 TriPath Imaging Inc Tampon de tratamiento previo Jarras o ba os de tinci n Reloj con capacidad para intervalos de 1 60 minutos Soluci n salina tamponada de Tris TBS Tween 20 Control negativo universal de IgG de rat n Agitador v rtex Xileno o sustitutos de xileno Vaporera ba o de agua 6 ADVERTENCIAS Hidrato de cloral Frases de riesgo 22 Nocivo si se ingiere Frases de seguridad 23 No inhalar gases humos vapores o pulverizaciones 25 Evitar el contacto con la piel y los ojos 36 Llevar ropa de protecci n adecuada 45 En caso de accidente o si no se encuentra bien acuda al m dico inmediatamente 60 Este material y su recipiente deber n desecharse como residuos peligrosos Xn Nocivo 3 3 diaminobencidina Frases de riesgo 22 Nocivo si se ingiere 40 Pruebas limitadas de un efecto carcin geno Frases de seguridad 23 No inhalar gases humos vapores o pulverizaciones 36 37 Llevar ropa y guantes de protecci n adecuados 60 Este material y su recipiente deber n desecharse como residuos peligrosos Xn Nocivo 7 PRECAUCIONES 7 1 7 2 7 3 7 4 7 5 Para uso diagn stico in vitro Los portaobjetos SurePath preparados se deben colocar en el tamp n de ratamiento previo tan pronto como est n preparados Los portaobjetos deben permanecer en el tamp n de tratamiento previo durante al men
92. proteiner stiger generelt p forskellig made i takt med at normale celler forts tter fra GO til G1 S fasen i cellecyklen Topoisomerase Il alpha TOP2A er et vigtigt nukle rt enzym der er involveret i DNA replikation og er et for mange preeparater der anvendes til cancerbehandling Formindsket udtryk af TOP2A er en dominerende modstandsmekanisme over for adskillige kemoterapeutiske preeparater Der er observeret en signifikant variation i udtrykket af dette protein i mange forskellige tumorer TOP2A er dominerende i prolifererende celler og modificeres i M fase ved phosphorylering p forskellige steder hvilket er afg rende for mitotisk kromosomkondensation og adskillelse ProEx antistofcocktail indeholder monoklonalt anti MCM2 og anti TOP2A fra mus som er oprenset fra veevskultursupernatant og fortyndet i en bufferet saltvandsoplesning som indeholder proteinstabilisatorer og 0 09 natriumazid PROCEDUREPRINCIPPER SurePath med ProEx immuncytokemisk testkit indeholder en antistofcocktail p visnings og kontrastfarvningsreagenser der er n dvendige for at fuldf re en tre trins manuel eller automatisk immuncytokemisk farvningsprocedure for rutinemeessigt forberedte tynde lag af cervikale preeparater Efter inkubation af preeparatet med en navnebeskyttet muse antistofcocktail visualiseres selektiv monoklonal antistofbinding der er tegn p en positiv test med et unikt enzymbundet antistof kromogensystem der er klar
93. reagents to avoid nonspecific staining 9 2 7 9 Incubation times temperatures or methods other than those specified may give erroneous results 7 10 Reagents have been diluted for optimal performance Further dilution may result in loss of antigen staining 7 11 Kit components are lot specific Do not substitute kit components with different manufactured lot numbers Lot numbers appear on packaging labels 7 12 not use the SurePath with ProEx Test kit after the expiration date stamped on the package The user must validate conditions if reagents are stored under any conditions other than those specified in the package insert 9 3 7 13 There are no obvious signs to indicate degradation of this product Therefore positive and negative controls should be run simultaneously with patient specimens If unexpected staining is observed which cannot be explained by variations in laboratory procedures or a problem with the SurePath with ProEx Test kit is suspected contact TriPath Imaging technical support 7 14 Wear appropriate Personal Protective Equipment to avoid reagent contact with eyes and skin Refer to the Material Safety Data Sheet MSDS for additional information 7 15 The SurePath with ProEx Test is intended for use with cervical cytology specimens collected in SurePath Preservative Fluid Compatibility with conventional and monolayer preparations other than SurePath has not been 9 4 evaluated 8
94. rs mrats D rf r b r positiva och negativa kontroller k ras samtidigt med patientproverna Om ov ntad f rgning iakttas som inte kan f rklaras med variationer i laboratorieprocedurerna eller om ett problem med SurePath med ProEx testkit misst nks kontaktar du teknisk support f r TriPath Imaging Anv nd till mplig personlig skyddsutrustning f r att undvika att reagenset kommer i kontakt med gonen eller huden Se databladet f r materials kerhet f r ytterligare information SurePath med ProEx test r avsett f r anv ndning med cervikala cytologiprover som samlats in i SurePath konserveringsv tska Kompatibilitet med andra konventionella preparat och enkelskiktspreparat SurePath har inte utv rderats 8 BRUKSANVISNING Provberedning 8 1 8 2 8 1 1 8 1 2 bruksanvisningen till SurePath PrepStain System finns instruktioner f r preparering av objektglas fran SurePath cervikala verskottcytologiprover Tills tt 8 mL SurePath konserveringsv tska till verskottprovet i SurePath vialen cirka 2 mL Det sp dda provet ska bearbetas p BD PrepMate med hj lp av standardteknik och p PrepStain Preparerade SurePath objektglas m ste placeras i SureDetect prepareringsbuffert f r objektglas s snart som de preparerats anvisningar preparering av en arbetsl sning f r objektglas finns i SureDetect prepareringsbuffert 10X f r objektglas Objektglasen m ste vara
95. s cher les lames au cours de la proc dure de coloration Les pr parations cellulaires dess ch es peuvent pr senter une coloration non sp cifique accrue Prot ger les lames susceptibles d tre expos es aux courants d air Les lames doivent tre plac es dans une chambre humide pour des incubations prolong es Restauration de l pitope 9 2 1 Placer les lames pr par es dans une cuve de Coplin contenant la solution de travail de tampon de pr paration des lames porte objet SureDetect pendant un minimum de 1 heure jusqu un maximum de 72 heures 9 2 2 Incuber au bain marie ou l tuve pendant 15 minutes 95 9 2 3 Retirer la cuve de Coplin avec les lames du bain marie ou de l tuve et laisser les lames refroidir dans le tampon pendant 20 minutes 9 2 4 Rincer les lames avec de d sionis e et les transf rer dans une cuve de Coplin propre contenant du TBST R actif de blocage 9 3 1 Tapoter pour liminer le tampon en exc s 9 3 2 Charger les lames dans une chambre humide pr par e remplie de serviettes en papier ou de tampons de gaze impr gn s d eau 9 3 3 Appliquer 200 ul de r actif de blocage de la peroxydase flacon 1a pour couvrir la zone de d p t des cellules 9 3 4 Incuber pendant 5 minutes 1 minute 9 3 5 Rincer les lames dans du TBST 3 reprises de 2 minutes chacune Blocage des prot ines 9 4 1 Tapoter pour liminer le tampon en exc s 9 4 2 Charger l
96. should have an estimated minimum of at least 5000 well visualized well preserved squamous cells The same criteria should be applied to SurePath with ProEx slides However as with a routine Pap preparation any specimen with abnormal cells which is exhibiting a positive molecular reaction is by definition satisfactory for evaluation If the answer at this step is yes proceed to the next step if the answer is no the result is Unsatisfactory for Evaluation Step 2 Is there moderate to intense brown nuclear staining in epithelial cells To answer yes to this step look for brown staining that is easily visualized If just a faint amount or blush of brown is seen this is not enough to warrant a rendering of positive If no brown nuclear stain is seen the result is reported as Negative If adequate brown stain is visualized proceed to the next step Step 3 Is the cell with nuclear brown staining a squamous or glandular cell If the answer is yes proceed to the next step If the answer is no this is a Negative test result Step 4 Is the cell gt ASC atypical squamous cell or AGC atypical glandular cell Use the same morphological criteria outlined in The Bethesda System for Reporting Cervical Cytology 2nd Ed to determine if the squamous cell containing the brown nucleus is gt ASC atypical squamous cells If the cell is considered 2ASC or 2AGC then this is a Positive test result This include
97. stabiliserende proteiner og antimikrobielt middel Museprobe Binder til muse monoklonale antistoffer Polymerreagens Polymer konjugeret 3b med peberrodsperoxidase der binder til museprobereagens DAB buffersubstrat Substratbuffer 4a anvendes ved klarg ring af DAB kromogenet DAB 3 3 diaminobenzidin kromogenoplasning Hematoxylin Vandbaseret Mayers h matoxylin Blafarvningsmiddel Tris bufferet 6 saltvand pH v rdi 7 4 med Tween 20 og 0 09 2 8 C 2 8 C 2 8 C 2 8 2 8 2 8 46 2 8 15 30 15 30 NODVENDIGE MATERIALER OG REAGENSER DER IKKE MEDFOLGER Absorberende engangsklude SureDetect SiHa cellelinje katalognummer 005 11012 10 TriPath Imaging Inc Demineraliseret eller destilleret vand Ethanol 95 og 100 Deekglas Handsker Fugtkammer Lysmikroskop 10x 20x valgfrit 40 objektiver Monteringsmedie Pipetter og pipettespidser som kan levere volumenmeengder p 20 200 og 1000 ul SureDetect buffer til klarg ring af objektglas 10X katalognummer 090 11008 10 TriPath Imaging Inc forbehandlingsbuffer Krukker eller baljer til farvning Minutur skal kunne indstilles til intervaller p 1 60 minutter Tris bufferet saltvand TBS Tween 20 Universal muse IgG negativ kontrol Omryster Xylen eller xylenerstatninger Dampkoger vandbad 6 ADVARSLER
98. 0 minutos 1 minuto 9 6 5 Lavar as l minas em TBST 3 banhos 2 minutos cada 9 6 6 Remover o tamp o em excesso com pequenas pancadas 9 6 7 Colocar as l minas na c mara h mida preparada cheia de gazes ou folhas de papel absorvente embebidas em gua 9 6 8 Aplicar 200 uL de reagente polim rico frasco 3b de modo a cobrir completamente a rea de deposig o de c lulas 9 6 9 Incubar durante 20 minutos 1 minuto 27 2013 TriPath Imaging Inc All rights reserved 779 05848 10 08 2013 12 10 11 12 9 6 10 Lavar as l minas num banho de TBST 3 banhos 2 minutos cada 9 6 11 Remover em excesso com pequenas pancadas 9 6 12 Colocar as l minas na c mara h mida preparada cheia de gazes ou folhas de papel absorvente embebidas em gua 9 6 13 Aplicar 200 ul de solu o de substrato cromog nio DAB de modo cobrir completamente a rea de deposi o de c lulas 9 6 14 Incubar durante 5 minutos 1 minuto 9 6 15 Lavar as laminas com H20 desionizada durante 5 minutos 9 7 Contrastante 9 7 1 Lavar as l minas em TBST 1 banho durante 2 minutos 9 7 2 Colocar as l minas na c mara h mida preparada cheia de gazes ou folhas de papel absorvente embebidas em gua 9 7 3 Aplicar 200 ul de contrastante Hematoxilina frasco 5 de modo a cobrir completamente a rea de deposig o de c lulas 9 7 4 Incubar durante 1 minuto 10 segundos 9 7 5 Lavar as l minas co
99. 0 ul 200 ul e 1000 ul Tamp o de prepara o de l minas SureDetect 10X REF 090 11008 10 TriPath Imaging Inc Tamp o de pr tratamento Frascos ou banhos de Cron metro com intervalos de 1 a 60 minutos Soro fisiol gico tamponado Tris TBS Tween 20 Controlo negativo de IgG de ratinho universal Dispositivo de v rtex Xilol ou substitutos de xilol Estufa de vapor banho de gua ADVERT NCIAS Hidrato de cloral Frases de risco 22 Nocivo por ingest o Frases de seguranca 23 N o respirar os gases fumos vapores aeross is 25 Evitar o contacto com os olhos 36 Usar vestu rio de protec o adequado 45 Em caso de acidente ou indisposi o consultar imediatamente o m dico 60 Este produto e seu recipiente devem ser eliminados como res duos perigosos Xn Nocivo 3 3 diaminobenzidina Frases de risco 22 Nocivo por ingest o 40 Possibilidade de efeitos cancer genos Frases de seguranca 23 N o respirar os gases fumos vapores aeross is Xn Nocivo 36 37 Usar vestu rio de protecc o e luvas adequadas 60 Este produto e seu recipiente devem ser eliminados como res duos perigosos 7 1 Para utiliza o em diagn stico in vitro 7 2 As l minas SurePath preparadas devem ser colocadas no tamp o de pr tratamento assim que acabarem de ser preparadas As l minas devem permanecer no tamp o de pr trata
100. 3 3 Diaminobenzidina DAB classificata come sostanza a sospetta azione cancerogena in grado di indurre potenziali effetti irreversibili Evitare il contatto isico ed esposizioni prolungate o ripetute vivamente consigliato l uso del reagente all interno di una cappa chimica Evitare il contatto con occhi cute o indumenti Lavarsi le mani con cura dopo la manipolazione La soluzione di lavoro DAB deve essere preparata conformemente a quanto indicato sul foglietto illustrativo Alcuni reagenti del kit contengono sodio azide NaNs una sostanza chimica ortemente tossica in forma pura Tale sostanza pu avere effetti letali se ingerita assorbita attraverso la cute Questi reagenti sono nocivi se inalati Essi sono pericolosi allo stato solido Provocano irritazioni alla cute agli occhi e al tratto respiratorio Colpiscono il sistema nervoso centrale i reni ed il sistema cardiovascolare Sebbene questi reagenti alle concentrazioni impiegate nel kit non siano classificati come prodotti pericolosi il contenuto di sodio azide alle concentrazioni indicate pu reagire con il rame o il piombo delle tubature formando azidi metalliche altamente esplosive Durante lo smaltimento sciacquare con abbondante acqua in modo di prevenire l eventuale formazione ed accumulo di azidi nelle tubature 16 2013 TriPath Imaging Inc All rights reserved 779 05848 10 08 2013 12 7 6 7 7 7 8 7 9 7 10 7 11 7 12 7 13
101. 4 Inc belo durante 20 minutos 1 minuto 9 6 5 Enjuague los portaobjetos en TBST con 3 cambios de 2 minutos cada uno 9 6 6 Golpee suavemente varias veces para eliminar el tamp n sobrante 9 6 7 Cargue los portaobjetos en una c mara de humedad preparada llena de toallas de papel o gasas humedecidas en agua 9 6 8 Aplique 200 uL de reactivo polim rico vial 3b para cubrir el rea de deposici n del pocillo 13 2013 TriPath Imaging Inc All rights reserved 779 05848 10 08 2013 12 10 11 12 9 6 9 Inc belo durante 20 minutos 1 minuto 9 6 10 Enjuague los portaobjetos en un ba o de TBST con 3 cambios de 2 minutos cada uno 9 6 11 Golpee suavemente varias veces para eliminar el tamp n sobrante 9 6 12 Cargue los portaobjetos en una c mara de humedad preparada llena de toallas de papel o gasas humedecidas en agua 9 6 13 Aplique 200 uL de soluci n sustrato crom geno DAB para cubrir completamente el rea de deposici n del pocillo 9 6 14 Inc belo durante 5 minutos 1 minuto 9 6 15 Enjuague los portaobjetos durante 5 minutos en desionizada 9 7 Contratincion 9 7 1 Enjuague los portaobjetos en TBST con 1 cambio de 2 minutos cada uno 9 7 2 Cargue los portaobjetos en una c mara de humedad preparada llena de toallas de papel o gasas humedecidas en agua 9 7 3 Aplique 200 ul de colorante de contraste hematoxilina vial 5 para cubrir complet
102. 4 4 5 Minuten 1 Minute inkubieren 9 4 5 NICHT SP LEN Prim r Antik rper Cocktail 9 5 1 bersch ssigen Proteinhemmer abklopfen 9 5 2 Objekttrager in eine vorbereitete Feuchtigkeitskammer stellen die mit Wasser angefeuchtete Papiert cher oder Gaze enth lt 9 5 3 200 ul ProEx Antik rper Cocktail Gef 2 zugeben den Zellablagerungsbereich vollst ndig zu bedecken 9 5 4 30 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren 9 5 5 Jeden Objekttr ger einzeln mit TBST aus einer Waschflasche sp len den Strahl nicht direkt auf den Zellablagerungsbereich richten Objekttrager auf ein Objekttr gergestell stellen 9 5 6 Objekttrager viermal 2 Minuten in jeweils frischem TBST sp len Chemischer Nachweis 9 6 1 Uberschiissigen Puffer abklopfen 9 6 2 Objekttrager in eine vorbereitete Feuchtigkeitskammer stellen die mit Wasser angefeuchtete Papiert cher oder Gaze enthalt 9 6 3 200 ul Maus Sondenreagenz Gef zugeben um den Zellablagerungsbereich vollstandig zu bedecken 9 6 4 20 Minuten 1 Minute inkubieren 9 6 5 Objekttr ger viermal 2 Minuten in jeweils frischem TBST sp len 9 6 6 Uberschiissigen Puffer abklopfen 9 6 7 Objekttrager in eine vorbereitete Feuchtigkeitskammer stellen die mit Wasser angefeuchtete Papiert cher oder Gaze enthalt 9 6 8 200 ul Polymerreagenz Gef 3b zugeben um den Zellablagerungsbereich zu bedecken 9 6 9 20 Minuten 1 Minute inkub
103. 6 Tapoter pour liminer le tampon en exc s 9 6 7 Charger les lames dans une chambre humide pr par e remplie de serviettes en papier ou de tampons de gaze impr gn s d eau 9 6 8 Appliquer 200 ul de r actif Polym re flacon 3b pour couvrir la zone de d p t des cellules 9 6 9 Incuber pendant 20 minutes 1 minute 2013 TriPath Imaging Inc All rights reserved 779 05848 10 08 2013 12 10 11 12 9 6 10 Rincer les lames dans un de TBST 3 reprises de 2 minutes chacune 9 6 11 Tapoter pour liminer le tampon en exc s 9 6 12 Charger les lames dans la chambre humide pr par e remplie de serviettes en papier ou de tampons de gaze impr gn s d eau 9 6 13 Appliquer 200 ul de solution substrat chromog ne DAB pour couvrir compl tement la zone de d p t des cellules 9 6 14 Incuber pendant 5 minutes 1 minute 9 6 15 Rincer les lames pendant 5 minutes dans d sionis e 9 7 Coloration de contraste 9 7 1 Rincer les lames dans du TBST pendant 2 minutes 9 7 2 Charger les lames dans une chambre humide pr par e remplie de serviettes en papier ou de tampons de gaze impr gn s d eau 9 7 3 Appliquer 200 ul d h matoxyline le colorant de contraste flacon 5 pour couvrir compl tement la zone de d p t des cellules 9 7 4 Incuber pendant 1 minute 10 secondes 9 7 5 Rincer les lames pendant minutes sous H O courante 9 7 6 Charger les lames dans une
104. 9 7 3 Apply 200uL of Hematoxylin counterstain vial 5 to completely cover cell deposition area 9 7 4 Incubate for 1 minute 10 seconds 2013 TriPath Imaging Inc All rights reserved 779 05848 10 08 2013 12 10 11 12 13 9 7 5 Rinse slides for 3 minutes in running H20 9 7 6 Load slides into prepared humidity chamber filled with water moistened paper towels or gauze 9 7 7 Blue slides by applying 200uL Bluing Agent vial 6 for 1 minute 10 seconds 9 7 8 Repeat running water rinse for 1 minute 9 8 Mounting 9 8 1 Immerse slides in 95 ethanol 1 minute or 25 dips 9 8 2 Immerse slides in absolute alcohol 4 changes 1 minute each or 25 dips 9 8 3 Clear with xylene 3 changes 1 minute each or 25 dips 9 8 4 Coverslip slides with non aqueous permanent mounting media using glass coverslips STABILITY 10 1 When stored at recommended temperatures unopened reagent vials are stable until the expiration date indicated on the vial 10 2 Once opened reagents are stable for thirty days when stored at recommended temperatures QUALITY CONTROL 11 1 Variability in results is often derived from differences in specimen handling which deviates from recommended test procedures Consult the proposed quality control guidelines of the Clinical and Laboratory Standards Institute Quality Assurance for Immunocytochemistry for additional information 11 2 SureDetect SiHa Cell Control is availa
105. ERIAL OCH REAGENSER SOM KR VS MEN SOM INTE MEDF LJER Absorberande servetter SureDetect SiHa Cell Line REF 005 11012 10 TriPath Imaging Inc Avjoniserat eller destillerat vatten Etanol 95 och 100 T ckglas av glas Handskar Fuktkammare Ljusmikroskop 10x 20x tillval 40x objektiv Monteringsmedel Pipetter och pipettspetsar klarar att avge volymer p 20pl 200 och 1000 SureDetect Buffert 10X f r preparering av objektglas 090 11008 10 TriPath Imaging Inc F rprepareringsbuffert Fargningsbeh llare eller bad Timer klarar intervaller p 1 60 minuter Tris buffrad koksaltl sning TBS Tween 20 Universell IgG negativ kontroll fran mus Skakapparat Xylen eller Xyleners ttningar ngkokare vattenbad VARNINGAR Kloralhydrat Riskfraser 22 Farligt vid f rt ring S kerhetsfraser 23 Undvik inandning av gas r k nga dimma 25 Undvik kontakt med gon 36 Anv nd l mpliga skyddskl der 45 Vid olycksfall eller illam ende kontakta omedelbart l kare 60 Detta material och dess beh llare skall tas om hand som farligt avfall Xn Farligt 3 3 diaminobenzidin Riskfraser 22 Farligt vid f rt ring 40 Misst nks kunna ge cancer S kerhetsfraser 23 Undvik inandning av gas r k nga dimma 36 37 Anv nd l mpliga skyddskl der och handskar 60 Detta material och dess beh llare skall tas om hand som farligt avfall Xn
106. EVERDE REAGENTIA Het volgende materiaal wordt geleverd en is voldoende voor 75 dunne laag preparaten Beschrijving 4 Peroxidaseblok Gebufferde la hydrogeenperoxide plus stabilisator 2 8 Proteineblok Gezuiverde case ne plus merkcombinatie van prote nen in gemodificeerd PBS met conserveringsmiddel en surfactans Antilichaamcocktail Gebruiksklare monoklonale antilichaamcocktail geleverd in Tris gebufferde oplossing met Tween 20 pH 7 4 Bevat stabiliserende prote nen en antimicrobieel agens Muisprobe Bindt aan muis monoklonale antilichamen Polymeer reagens Polymeer geconjugeerd met horseradish 2 peroxidase dat bindt aan 2 8 C muisprobe reagens DAB buffersubstraat 4a substraatbuffer gebruikt bij de 2 8 C bereiding van het DAB chromogeen DAB 3 3 diaminobenzidine Flacon nr 16 2 8 lt 2 8 lt 2 8 C chromogeenoplossing ER Hematoxyline Mayer s 5 hematoxyline op waterbasis 15 806 Blauwkleurend agens Tris 6 gebufferde zoutoplossing pH 7 4 15 30 C met Tween 20 en 0 09 VEREISTE MAAR BIJGELEVERDE MATERIALEN EN REAGENTIA Absorberende doekjes SureDetect SiHa Cell Line REF 005 11012 10 TriPath Imaging Inc Gemineraliseerd of gedistilleerd water Ethanol 95 en 100 Glazen dekglaasjes Handschoenen Bevochtigingskamer Lichtmicroscoop 10x 20x optioneel 40x objectieven Pre
107. Farligt FORSIKTIGHETSATGARDER 7 1 F r in vitro diagnostik 7 2 Preparerade SurePath objektglas m ste placeras i f rbehandlingsbufferten direkt nar de preparerats Objektglasen m ste vara kvar i forbehandlingsbufferten i minst 1 timme men inte l ngre 72 timmar f re immunocytokemianalys 7 3 Lat inte objektglasen torka n gon gang under proceduren Objektglas som har torkat ut under proceduren kan ka bakgrunden 7 4 3 3 diaminobenzidin DAB klassificeras som en misst nkt karcinogen med potentiell risk f r att producera irreversibla effekter Undvik fysisk kontakt och l ngvarig eller upprepad exponering En kemisk r kk pa rekommenderas Undvik kontakt med gonen huden eller kl dsel Tv tta h nderna noga efter hantering DAB arbetsl sning ska prepareras enligt bipacksedeln 7 5 Vissa reagenser i detta kit inneh ller natriumazid NaN3 en mycket toxisk kemikalie i ren form Natriumazin kan vara d dligt om det sv ljs eller absorberas genom huden Dessa reagenser r skadliga om de inhaleras Dessa reagenser r farliga fasta mnen De orsakar irritation av huden gon och andningsv garna Paverkar centrala nervsystemet njurar samt hj rt och karlsystemet Trots att det inte klassificerats som farligt vid produktkoncentration kan natriumazidansamlingar reagera med bly och kopparledningar och bilda h gexplosiva metallazider Vid bortskaffning skall man spola med stora m ngder vatten f r att f
108. INSTRUCTIONS FOR USE 8 1 Specimen Preparation 8 1 1 Consult the Operator Manual for the SurePath PrepStain System for instructions regarding the preparation of slides from residual SurePath cervical cytology specimens 8 1 2 Add 8mL of SurePath Preservative Fluid to the residual sample in the SurePath vial approx 2 mLs The diluted sample should be processed on the BD PrepMate using the standard technique and on the PrepStain 9 5 8 1 3 Prepared SurePath slides must be placed into the SureDetect Slide Preparation Buffer as soon as they are prepared Refer to the SureDetect Slide Preparation Buffer 10X for directions on preparation of a working slide solution The slides must remain in the buffer for at least 1 hour but not longer than 72 hours prior to immunocytochemistry 8 1 4 An epitope retrieval procedure must be used for optimal kit performance This procedure involves soaking prepared slides in a working solution of SureDetect Slide Preparation Buffer for a minimum of 1 hour at room temperature followed by heating slides in the pretreatment buffer to 95 C Slides are held at 95 C for 15 minutes and are allowed to cool at room temperature for 20 minutes The use of a calibrated waterbath or vegetable steamer capable of maintaining the required temperature is recommended Laboratories located at higher elevations should determine the best method of maintaining the required temperature The staining procedure s
109. Induktion in zervikalen in SurePath Konservierungsl sung gesammelten Zytologieproben zu verwenden Die Testergebnisse liefern begleitende Daten f r die zytologische Zervixdiagnostik 2 ZUSAMMENFASSUNG UND ERKL RUNG Bei der eukaryoten DNA Replikation spielen die MCM Proteine minichromosome maintenance proteins eine wichtige Rolle Jedes MCM Protein weist in seiner hoch konservierten zentralen Dom ne DNA abh ngige ATPase Motive auf Normalerweise steigen die Konzentrationen des MCM Proteins beim bergang normaler Zellen aus der GO in die G1 S Phase des Zellzyklus unterschiedlich stark an Topoisomerase alpha TOP2A ist ein wichtiges an der DNA Replikation beteiligtes nukle res Enzym und das Zielprotein vieler g ngiger Krebstherapeutika Bei Resistenz gegen diverse chemotherapeutische Wirkstoffe ist die Expression von TOP2A zumeist vermindert Signifikante Unterschiede in der Expression dieses Proteins wurden bei vielen verschiedenen Tumoren beobachtet TOP2A ist in proliferativen Zellen vorherrschend und in der M Phase durch Phosphorylierung an bestimmten Stellen modifiziert diese Modifikationen sind wesentlich f r die mitotische Chromosomenkondensation und segregation Der ProEx C Antik rper Cocktail enth lt gereinigtes mit gepufferter Kochsalzl sung verd nntes monoklonales Anti MCM2 und Anti TOP2A Maus aus Gewebekultur berstand sowie Proteinstabilisatoren und 0 09 Natriumazid 3 VERFAHRENSPRINZIP Der SurePa
110. P2A ar framtr dande vid celldelning och ndras i M fasen genom fosforylering p specifika platser vilket r avg rande f r mitotisk kromosomkondensation och segregation ProEx antikroppscocktail inneh ller musmonoklonalt anti MCM2 och anti TOP2A som renats fr n v vnadskultursupernatant och sp tts med buffrad koksaltl sning som inneh ller proteinstabilisatorer och 0 09 natriumazid PROCEDURPRINCIPER SurePath med ProEx immunocytokemiskt testkit inneh ller en antikroppscocktail detekterings och kontrollfargningsreagenser som beh vs f r att genomf ra en automatisk eller manuell immunocytokemisk f rgningsprocedur i tre steg av rutinm ssigt beredda cervikala prover i tunna skikt Efter inkubationen av provet med en egen musantikroppscocktail visualiseras selektiv monoklonal antikroppsbindning som anger ett positivt test med hj lp av ett unikt enzyml nkat antikroppskromogensystem f rdigt att anv ndas Enzymreagenset r ett sekund rt anti muspepparrotsperoxidaskonjugat fr n get som r l nkat till en dextranpolymerstomme Tillsats av en specifik kromogen resulterar bildning av en synlig kromogen produkt som r lokaliserad till bindningsst llena f r antigener antikroppar Provet motfargas d refter med hematoxylin Ett blafargande medel appliceras och objektglaset f rses med ett t ckglas Resultaten tolkas med hj lp av ett Ijusmikroskop Ett positivt resultat som anger h ggradig cervikal sjukdom erh
111. SUREPATH Ethanol 95 and100 with ProEx C Glass Coverslips Immunocytochemical Test 490500 490501 V7 75 e Humid Chamber 005 11000 12 Light Microscope 10x 20x optional 40x objectives 005 11000 13 Mounting Media Pipettes and Pipette Tips capable of delivering 20 2004 and 1000 volumes INTENDED USE The SurePath with ProEx Immunocytochemical Test is intended for the qualitative evaluation of aberrant S Phase induction in cervical cytology specimens collected in SurePath Preservative Fluid The test results provide adjunctive information for cervical cytology diagnosis SUMMARY AND EXPLANATION Minichromosome maintenance MCM proteins play an essential role in eukaryotic DNA replication Each of the MCM proteins has DNA dependent ATPase motifs in their highly conserved central domain Levels of MCM proteins generally increase in a variable manner as normal cells progress from GO into the G1 S phase of the cell cycle Topoisomerase Il SureDetect Slide Preparation Buffer 10X REF 090 11008 10 TriPath Imaging Inc Pretreatment Buffer Staining Jars or Baths Timer capable of 1 60 minute intervals Tris Buffered Saline TBS Tween 20 Universal Mouse IgG Negative Control Vortexer Xylene or Xylene Substitutes h alpha 2 is an essential nuclear enzyme involved in DNA and is a target Steamer Waterbal for many anti ca
112. Si se visualiza una tinci n marr n adecuada contin e con el siguiente paso Paso 3 Es la c lula con tinci n marr n nuclear una c lula glandular o escamosa Si la respuesta es s contin e con el siguiente paso Si la respuesta es no el resultado de la prueba es Negativo Paso 4 Es la c lula gt ASC c lula escamosa at pica c lula glandular at pica Utilice los mismos criterios morfol gicos descritos en el Sistema Bethesda de informaci n de citolog a cervical 2 2 edici n para determinar si la c lula escamosa que contiene el n cleo marr n es gt ASC c lulas escamosas at picas Si la c lula se considera 2ASC o 2AGC el resultado de la prueba es Positivo Esto incluye ASC US ASC H LSIL HSIL y c ncer Si la c lula tiene un aspecto glandular se aplican los criterios TBS para determinar si una c lula es gt AGC c lulas glandulares at picas Esto incluye endocervicales AGC endometriales AIS y adenocarcinoma Si la c lula en cuesti n concuerda con NILM negativo para lesi n intraepitelial o tumor maligno el resultado de la prueba es Negativo REFERENCIAS Wright TC Schiffman M Solomn D Cox JT Garcia Goldie 5 Hatch Noller KL Roach N Runowicz C and Saslow D Interim Guidance for the Use of Human Papillomavirus DNA Testing as an Adjunct to Cervical Cytology for Screening Obstet Gynecol 2004 102 304 309 Ishimi Y Okayasu Kato Kwon H Kimura H Yamada
113. SureDetect diluita per almeno 1 ora fino ad un massimo di 72 ore 9 2 2 Incubare in un bagnomaria o in una pentola per cottura a vapore delle verdure per 15 minuti 95 9 2 3 Rimuovere la coplin jar contenente i vetrini dal bagnomaria o dalla pentola e lasciare raffreddare i vetrini nel tampone per 20 minuti 9 2 4 Sciacquare i vetrini con acqua deionizzata e trasferire in una coplin jar pulita contenente TBST Reagente bloccante 9 3 1 Scuotere il vetrino per eliminare il tampone in eccesso 9 3 2 vetrini in una camera umida precedentemente preparata riempita con salviette o garze inumidite con acqua 9 3 3 Applicare 200 uL di reagente bloccante la perossidasi flacone 1a coprendo l area di deposito delle cellule 9 3 4 Incubare per 5 minuti 1 minuto 9 3 5 Sciacquare i vetrini in TBST 3 cambi 2 minuti ciascuno Blocco proteico 9 4 1 Scuotere il vetrino per eliminare il tampone in eccesso 9 4 2 i vetrini in una camera umida precedentemente preparata riempita con salviette o garze inumidite con acqua 9 4 3 Applicare 200 uL di bloccante proteico flacone 1b coprendo completamente l area di deposito delle cellule 9 4 4 Incubare per 5 minuti 1 minuto 9 4 5 SCIACQUARE Cocktail di anticorpi primarii 9 5 1 Scuotere il vetrino per eliminare il bloccante delle proteine in eccesso 9 5 2 Porre i vetrini in una camera umida precedentemente preparata riempita c
114. T 8 2 2 1 Bereid de TBS voor overeenkomstig de specificaties van de fabrikant 8 2 2 2 Voeg Tween 20 toe indien nog niet aanwezig in de TBS tot een eindconcentratie van 0 05 8 2 3 Substraat chromogeenoplossing DAB volume voldoende voor 5 objectglaasjes 8 2 3 1 Doe 1 mL DAB substraatbuffer flacon 4a in een testbuisje 8 2 3 2 Voeg n druppel 20 30 uL DAB chromogeen flacon 4b toe Meng zorgvuldig en breng aan op de objectglaasjes met behulp van een pipet 8 2 3 3 Bereid dagelijks vers substraat chromogeen 8 2 3 4 De kleuringkwaliteit wordt niet be nvloed door precipitaat dat zich in de oplossing kan ontwikkelen 9 KLEURINGSPROTOCOL uitgevoerd bij kamertemperatuur 20 25 C 9 3 9 4 9 5 9 6 Opmerkingen kleuringsprocedure 9 1 1 Lees deze instructies zorgvuldig door en stel uzelf voorafgaand aan gebruik op de hoogte van alle bestanddelen zie Voorzorgsmaatregelen 9 1 2 Alle reagentia dienen voorafgaand aan immunokleuring op kamertemperatuur 20 25 te worden gebracht 9 1 3 Alle incubaties moeten bij kamertemperatuur worden uitgevoerd tenzij anders vermeld 9 1 4 Laat de objectglaasjes tijdens de kleuringsprocedure niet uitdrogen Uitgedroogde celpreparaten kunnen een verhoogde niet specifieke kleuring vertonen Bescherm de objectglaasjes tegen tocht Objectglaasjes dienen in een bevochtigingskamer te worden geplaatst voor langdurige incubaties Epitoopversterkingl 9 2 1
115. X SureDetect per istruzioni sulla preparazione della soluzione di lavoro vetrini devono rimanere nel tampone per almeno 1 ora ma non pi di 72 ore prima del test immunocitochimico 8 1 4 Per ottenere prestazioni ottimali dal kit eseguire la procedura di smascheramento degli epitopi Questa procedura prevede l immersione dei vetrini allestiti nella soluzione tamponata SureDetect per almeno 1 ora a temperatura ambiente e successivo riscaldamento dei vetrini nel tampone di pretrattamento a 95 vetrini vengono mantenuti a 95 per 15 minuti e lasciati raffreddare a temperatura ambiente per 20 minuti consigliato l uso di un bagnomaria adeguatamente calibrato o di una pentola elettrica per cottura a vapore delle verdure in grado di mantenere la temperatura richiesta laboratori situati ad altitudini particolarmente elevate devono determinare il 9 6 metodo migliore per il mantenimento della temperatura richiesta La procedura di colorazione deve essere avviata immediatamente dopo la procedura di smascheramento degli epitopi e il raffreddamento La mancata osservanza della procedura descritta pu influenzare negativamente i risultati Preparazione dei reagenti 8 2 1 Preparare i seguenti reagenti prima della colorazione 8 2 2 Soluzione tamponata di Tris con 0 05 Tween 20 TBST 8 2 2 1 Preparare la soluzione di TBS secondo le specifiche del produttore 8 2 2 2 Se non ancora presente nel TBS aggiungere
116. a anticuerpos monoclonales selectivos indicativa de una prueba positiva mediante un sistema cromog nico de anticuerpos unidos a enzimas nico listo para su uso El reactivo enzim tico es un anticuerpo de chivo anti rat n secundario conjugado con peroxidasa de r bano unido a una espina dorsal de pol mero de dextrano La adici n de un crom geno espec fico produce la formaci n de un producto cromog nico visible localizado en los puntos de uni n de ant genos y anticuerpos A continuaci n se realiza la contratinci n de la muestra con hematoxilina se aplica un agente de coloraci n azul y se cubre el portaobjetos Los resultados se interpretan mediante un microscopio ptico Se consigue un resultado positivo indicativo de un alto grado de enfermedad cervical cuando el n cleo de las c lulas de inter s se ti e de marr n Se puede crear una galer a de referencia de portaobjetos potencialmente positivos utilizando un equipo de formaci n de im genes autom tico A continuaci n se puede analizar la galer a para determinar si el resultado es positivo o negativo La prueba inmunocitoquimica SurePath con ProEx se puede utilizar tanto con tinci n manual como autom tica 4 REACTIVOS PROPORCIONADOS Se incluyen los siguientes materiales que son suficientes para 75 preparaciones de capa fina de vial Descripci n 4 Inhibidor de peroxidasa Per xido de 1 hidr geno tamponado estabilizado
117. a di proteine in PBS 2 8 C modificata con conservante e tensioattivo Cocktail di anticorpi cocktail di anticorpi monoclonali pronto all uso fornito in soluzione 2 tamponata TRIS con Tween 20 pH 7 4 2 8 C Contiene proteine stabilizzanti e agente anti microbico Reagente probe per topo si lega agli anticorpi monoclonali di topo Reagente polimero polimero coniugato con 3b perossidasi di rafano che si lega al reagente 2 8 probe per topo Substrato tamponato DAB substrato 4 tamponato usato per la preparazione del 2 8 C cromogeno DAB DAB soluzione cromogeno 3 3 2 8 C gt diaminobenzidina Ematossilina ematossilina di Mayer su base y 5 acquosa 15 30 C Agente di colorazione blu soluzione salina 6 tamponata Tris pH 7 4 con Tween 20 e 0 09 15 30 C NaN 5 MATERIALI E REAGENTI NECESSARI MA NON FORNITI Carta assorbente SureDetect SiHa Cell Control RIF 005 11012 10 TriPath Imaging Inc Linea cellulare di controllo Acqua deionizzata o distillata Etanolo 95 e 100 Vetrini coprioggetti Guanti Camera umida Microscopio ottico obiettivi 10x 20x opzionale 40x Mezzo di montaggio Pipette e puntali in grado di erogare volumi da 20 200ul e 1000ul SureDetect Slide Preparation Buffer 10X REF 090 11008 10 TriPath Imaging Inc Tampone di pretrattamento Vaschette o bagni di colorazione Timer con intervalli di 1 60 minuti
118. a uma liga o de anticorpo monoclonal selectiva indicadora de uma an lise positiva utilizando um sistema exclusivo e pronto a utilizar de cromog nio de anticorpos ligados enzima O reagente enzim tico consiste num conjugado de peroxidase de r bano e de anticorpo de cabra anti ratinho secund rio ligado cadeia principal do pol mero dextrano A adi o de uma cromog nio espec fico resulta na forma o de um produto cromog nico visivel localizado nos locais de ligac o antig nio anticorpo A amostra em seguida sujeita a contrasta o com hematoxilina aplicado um agente de Bluing e a l mina protegida com uma lamela Os resultados s o interpretados utilizando um microsc pio ptico Obt m se um resultado positivo indicador de uma doenga no colo do tero de alto grau sempre que o n cleo das c lulas em causa apresenta uma colora o castanha Pode criar se uma galeria de refer ncia de l minas potencialmente positivas utilizando equipamento de imagiologia autom tico A galeria pode ser revista para determinar um resultado positivo ou negativo A an lise imuno citoquimica SurePath with ProEx Immunocytochemical Test aplic vel tanto para a colora o manual como para a autom tica 4 REAGENTES FORNECIDOS Os seguintes materiais est o inclu dos e s o suficientes para 75 prepara es de camada fina Frasco ali 1 N Descri o 4 Bloqueio de peroxidase Per xido de 1 hidrog nio tampo
119. ada Bloqueio de prote nas 9 4 1 Remover tamp o em excesso com pequenas pancadas 9 4 2 Colocar as l minas na c mara h mida preparada cheia de gazes ou folhas de papel absorvente embebidas em gua 9 4 3 Aplicar 200 uL de bloqueio de prote nas frasco 1b de modo a cobrir completamente a rea de deposi o de c lulas 9 4 4 Incubar durante 5 minutos 1 minuto 9 4 5 LAVAR Cocktail de anticorpos prim rio 9 5 1 Remover o bloqueio de prote nas em excesso com pequenas pancadas 9 5 2 Colocar as l minas na c mara h mida preparada cheia de gazes ou folhas de papel absorvente embebidas em gua 9 5 3 Aplicar 200 uL de ProEx Ab Cocktail frasco 2 de modo a cobrir completamente a rea de deposi o de c lulas 9 5 4 Incubar durante 30 minutos temperatura ambiente 9 5 5 Lavar cada l mina individualmente com TBST utilizando um frasco de lavagem n o incidir o fluxo directamente sobre a rea de deposi o de c lulas Colocar as l minas num suporte de l minas 9 5 6 Lavar as l minas em TBST 3 banhos 2 minutos cada Qu mica de detec o 9 6 1 Remover o tamp o em excesso com pequenas pancadas 9 6 2 Colocar as l minas na c mara h mida preparada cheia de gazes ou folhas de papel absorvente embebidas em gua 9 6 3 Aplicar 200 uL de reagente de sonda de ratinho frasco 3a de modo a cobrir completamente a rea de deposi o de c lulas 9 6 4 Incubar durante 2
120. ados en alturas superiores deben determinar el mejor m todo para mantener la temperatura necesaria El procedimiento de tinci n se debe iniciar inmediatamente despu s de la recuperaci n de epitopos y del enfriamiento Las desviaciones del procedimiento descrito podr an afectar de forma adversa a los resultados 9 6 Preparaci n del reactivo 8 2 1 Prepare los siguientes reactivos antes de la tinci n 8 2 2 Soluci n salina tamponada de Tris con Tween 20 al 0 05 TBST 8 2 2 1 Prepare la soluci n TBS de acuerdo con las especificaciones del fabricante 8 2 2 2 Si a n no est presente en la soluci n TBS a ada Tween 20 a una concentraci n final de 0 05 8 2 3 Soluci n sustrato crom geno DAB volumen suficiente para 5 portaobjetos 8 2 3 1 Transfiera 1 mL de tamp n sustrato DAB vial 4a a un tubo de ensayo 8 2 3 2 A ada una gota de 20 a 30uL de crom geno DAB vial 4b M zclelo bien y apl quelo a los portaobjetos con una pipeta 8 2 3 3 Prepare la soluci n sustrato crom geno a diario Notas acerca del procedimiento de tinci n 9 1 1 Lea todas las instrucciones atentamente y familiaricese con todos los componentes antes de utilizarlos consulte la secci n Precauciones 9 1 2 Hay que equilibrar todos los reactivos a la temperatura ambiente 20 25 C antes de la inmunotinci n 9 1 3 Todas las incubaciones se deben realizar a temperatura ambiente a menos que se indique lo contrario 9 1 4
121. amente el rea de deposici n del pocillo 9 7 4 Inc belo durante 1 minuto 10 segundos 9 7 5 Enjuague los portaobjetos durante minutos en H20 corriente 9 7 6 Cargue los portaobjetos en una c mara de humedad preparada llena de toallas de papel o gasas humedecidas en agua 9 7 7 Ti a los portaobjetos de azul mediante la aplicaci n de 200 uL de agente de coloraci n azul vial 6 durante un minuto 10 segundos 9 7 8 Repita el enjuague con agua corriente durante 1 minuto 9 8 Montaje 9 8 1 Sumerja los portaobjetos en 95 de etanol durante 1 minuto o realice 25 inmersiones 9 8 2 Sumerja los portaobjetos en alcohol absoluto con 4 cambios durante 1 minuto cada uno o realice 25 inmersiones 9 8 3 Limpie con xileno con cambios durante 1 minuto cada uno o realice 25 inmersiones 9 8 4 Cubra los portaobjetos con medios de montaje permanentes no acuosos utilizando tapas de vidrio ESTABILIDAD 10 1 Si se almacenan a las temperaturas recomendadas los viales de los reactivos no abiertos son estables hasta la fecha de caducidad que se indica en el vial 10 2 Una vez abiertos los reactivos son estables durante treinta d as si se almacenan a las temperaturas recomendadas CONTROL DE CALIDAD 11 1 Las variaciones en los resultados se suelen deber a diferencias en el tratamiento de las muestras con respecto a los procedimientos de prueba recomendados Para obtener informaci n adicional consu
122. anda noggrant och applicera p objektglasen med en pipett 8 2 3 3 Preparera f rsk substrat kromogenl sning varje dag 8 2 3 4 F rgningens kvalitet p verkas inte av utf llningar som kan bildas i l sningen 9 F RGNINGSPROTOKOLL genomf rs i rumstemperatur 20 25 C Anm rkningar om f rgningsprocedurer 9 1 9 2 9 1 1 L s alla dessa instruktioner noga och bekanta dig med alla komponenter anv ndning se F rsiktighets tg rder Alla reagenser ska ekvilibreras till rumstemperatur 20 25 C f re immunf rgning Alla inkubationer ska genomf ras i rumstemperatur om inget annat anges Lat inte objektglasen torka nagon gang under fargningsproceduren Torkade cellprepareringar kan uppvisa kad ospecificerad fargning Skydda objektglasen mot drag Objektglasen ska placeras i en fuktkammare vid l ngre inkubationer Epitopatervinning 9 2 1 9 2 2 Placera de preparerade objektglasen i ett coplinkarl som innehaller en arbetsl sning av SureDetect buffert f r preparering av objektglas i minst 1 timme upp till maximalt 72 timmar Inkubera i vattenbad eller Angkokare i 15 minuter vid 95 C 9 3 9 4 9 5 9 6 9 7 9 2 3 9 2 4 Avl gsna hela coplink rlet med objektglas fran vattenbadet eller ngkokaren och l t objektglasen svalna i bufferten i 20 minuter Sk lj objektglasen med avjoniserat vatten och verf r till ett rent coplink rl som innehaller TBST
123. argennummern ausgetauscht werden Die Chargen nummern befinden sich auf den Verpackungsetiketten Das SurePath mit ProEx Testkit nach Ablauf des auf der Verpackung aufgedruckten Verfalldatums nicht mehr verwenden Werden die Reagenzien unter anderen als den in der Packungsbeilage angegebenen Bedingungen aufbewahrt sind diese Bedingungen vom Anwender zu validieren Es gibt keine sichtbaren Anzeichen f r eine eventuelle Produktinstabilit t Daher sollten parallel zu den Patientenproben jeweils Positiv und Negativkontrollen getestet werden Falls es zu einer unerwarteten F rbung kommt die sich nicht durch Unterschiede bei Laborverfahren erkl ren l sst und auf ein Problem mit dem SurePath mit ProEx Testkit hindeutet ist der technische Kundendienst von TriPath Imaging zu verst ndigen Entsprechende Schutzkleidung tragen um Augen und Hautkontakt zu vermeiden Zus tzliche Informationen dem Material Sicherheitsdatenblatt MSDS entnehmen Der SurePath mit ProEx C Test sollte mit zervikalen Zytologieproben verwendet werden die in SurePath Konservierungsl sung aufbewahrt wurden Die Kompatibilit t mit anderen konventionellen oder Einschicht Pr paraten wurde nicht untersucht 9 4 GEBRAUCHSANLEITUNG 8 1 8 2 Vorbereitung der Probe 8 1 1 Anweisungen zum Pr parieren von Objekttr gern mit verbliebenem SurePath Zervix Zytologieprobenmaterial dem Benutzerhandbuch f r das SurePath PrepStain System
124. ation et la s gr gation des chromosomes mitotiques Le m lange d anticorps ProEx contient des anticorps monoclonaux de souris anti MCM2 et anti TOP2A purifi s partir d un surnageant de culture tissulaire et dilu s dans une solution saline tamponn e contenant des agents de stabilisation prot iques et de l azide de sodium 0 09 3 PRINCIPES DE LA PROCEDURE Le kit de test immunocytochimique SurePath avec ProEx contient un m lange d anticorps les r actifs de d tection et de coloration de contraste n cessaires la r alisation d une proc dure de coloration immunocytochimique manuelle ou automatique d chantillons cervicaux sur couche mince pr par s en routine Apr s incubation de l chantillon avec un m lange propri taire d anticorps de souris une liaison s lective avec un anticorps monoclonal indicative d un test positif est visualis e l aide d un syst me chromog ne d anticorps pr t l emploi li une enzyme Le r actif enzymatique est constitu d un anticorps de ch vre anti souris secondaire conjugu la peroxydase de raifort fix sur un squelette en polym re de dextran L addition d un chromog ne sp cifique se traduit par la formation d un produit chromog ne visible localis au niveau des sites de liaison antig ne anticorps L chantillon fait alors l objet d une coloration de contraste par l h matoxyline un agent bleuissant est appliqu sur la lame puis une lamelle est mise en
125. az fum es vapeurs pulv risations 25 Eviter tout contact avec les yeux Xn Dangereux 36 Porter des v tements de protection appropri s 45 En cas d accident ou de sensation de malaise consulter imm diatement un m decin 60 Cette substance et son r cipient doivent tre mis au rebut comme les d chets risque biologique 3 3 diaminobenzidine Avertissements relatifs aux risques 22 Nocif en cas d ingestion 40 Effet canc rog ne suspect preuves insuffisantes Avertissements relatifs la s curit 23 Ne pas respirer les gaz fum es vapeurs pulv risations 36 37 Porter des v tements et des gants de protection appropri s 60 Cette substance et son r cipient doivent tre mis au rebut comme les d chets risque biologique Xn Dangereux PRECAUTIONS 7 1 Utilisation diagnostique in vitro 7 2 Les lames SurePath pr par es doivent tre plac es dans le tampon de pr traitement d s qu elles ont t pr par es Les lames doivent demeurer dans le tampon de pr traitement pendant au moins 1 heure mais pas plus de 72 heures avant la proc dure immunocytochimique 7 3 Ne laisser les lames s cher aucun moment au cours de la proc dure Les lames qui ont pu s cher pendant la proc dure sont susceptibles de faire augmenter le bruit de fond 7 4 La 3 3 diaminobenzidine DAB est class e parmi les produits suspect s d tre canc rig nes qui pr sentent le danger potentiel de provoqu
126. befales kraftigt at anvende et kemisk aftr ksskab Ma ikke komme i kontakt med gjne hud eller taj Vask h nderne grundigt efter h ndtering DAB arbejdsoplasning skal tilberedes i henhold til indleegssedlen reagenser i dette kit indeholder natriumazid NaN et kemikalium der er meget giftigt i ren form Natriumazid kan v re d dbringende hvis det sluges eller absorberes gennem huden Disse reagenser er skadelige ved ind nding Disse reagenser er farlige faststoffer Medf rer irritation for jne hud og luftveje P virker centralnervesystemet nyrerne hjertekarsystemet Selvom koncentrationen i produktet ikke er klassificeret som farlig kan ophobning af natriumazid reagere med bly og kobber danne meget eksplosive metalazider Efter bortskaffelse skylles med rigelige meengder vand for at hindre ophobning af azid i aflob Haematoxylin og bl farvningsmiddel Disse reagenser er skadelige ved indtagelse H matoxylin og blafarvningsmidler er irriterende for gjne hud og luftveje Pr parater og alle materialer der kommer i kontakt med preeparaterne skal behandles som potentielt infektigst og bortskaffes med anvendelse af passende forholdsregler Afpipetter aldrig reagenser med munden og undg at hud og slimhinder kommer i kontakt med reagenser og preeparater Hvis reagenser kommer i kontakt med falsomme omr der skal disse afvaskes med rigelige meengder vand Forebyg mikrobiel kontaminering af reagenserne for at und
127. bir nem haznesine suyla slat lm ka t havlular veya bezler ile dolu y kleyin 9 7 3 H cre birikim alan n tamamen rtmek i in 200 uL Hematoksilin kar boyama flakon 5 uygulay n 9 7 4 1 dakika 10 saniye enk be edin 9 7 5 Slaytlar akan H20 alt nda 3 dakika durulay n 9 7 6 Slaytlar haz rlanm bir nem haznesine suyla slat lm ka t havlular veya bezler ile dolu y kleyin 35 2013 TriPath Imaging Inc All rights reserved 779 05848 10 08 2013 12 10 11 12 13 9 8 10 1 10 2 KAL TE KONTROL 11 1 9 7 7 1 dakika 10 saniye s reyle 200 uL Mavilestirici Ajan flakon 6 uygulayarak slaytlari mavilestirin 9 7 8 Akan su durulamasini 1 dakika s reyle yenileyin Sabitleme 9 8 1 1 dakika veya 25 dald rma olarak slaytlar 95 etanola dald r n 9 8 2 Slaytlari mutlak alkole dald r n 4 de i im 1 er dakika veya 25 dald rma 9 8 3 Ksilenile temizleyin 3 de i im 1 er dakika veya 25 dald rma 9 8 4 Cam lameller kullanarak susuz kal c sabitleme ortam yla slaytlar lamele yerle tirin A lmam reaktif flakonlar nerilen s cakl klarda sakland nda flakonun zerinde belirtilen son kullanma tarihine kadar stabildir Reaktifler a ld ktan sonra nerilen s cakl klarda sakland takdirde otuz g n stabildir Sonu lardaki de i kenlik o u zaman nerilen test prosed
128. ble as a positive control from TriPath Imaging Inc Each vial contains a cervical cancer cell line which is processed in a similar manner as the clinical specimens A universal mouse IgG negative control can be used as a negative control A positive and negative control slide should be included in each staining procedure The staining results should be used as an indication of the validity of the staining run INTERPRETATION OF STAINING 12 1 Patient and Control Specimens A cytotechnologist or pathologist should evaluate the stained slides using a light microscope Cells can be reviewed manually or stored in an electronic image gallery derived from a light microscope 12 2 Control Slides The positive and negative control slides should be examined prior to the review of patient specimens to ascertain that all reagents functioned properly The presence of a brown reaction product 3 3 diaminobenzidine tetrahydrochloride DAB in the nuclei of the SiHa Cell Control slide stained with the SurePath with ProEx Test is indicative of positive reactivity The universal mouse IgG negative control slide stained with the SurePath with ProEx Test should have no brown staining nuclei and should show staining only from the hematoxylin counterstain 12 3 Scoring of slides is a 4 step process Step 1 Is the specimen adequate The Bethesda System TBS for Reporting Cervical Cytology 2nd Ed states An adequate liquid based preparation
129. cesinde bu s re 72 saati a mamal d r 8 1 4 Optimum kit performans i in bir epitop geri getirme prosed r kullan lmal d r Bu prosed r haz rlanan slaytlar n SureDetect Slide Preparation Buffer Slayt Haz rlama Tamponu al ma zeltisi i inde oda s cakl nda en az 1 saat s reyle slat lmas n ve ard ndan slaytlar n n i lem tamponunda 95 s cakl a kadar s t lmas n kapsar Slaytlar 15 dakika s reyle 95 C de tutulur ve sonra oda s cakl nda 20 dakika s reyle so umaya b rak l r Gerekli s cakl muhafaza edebilecek kapasitede kalibre edilmi bir su banyosu veya buharl sebze ha lay c nerilir Y ksek rak mlarda bulunan laboratuvarlar gerekli s cakl muhafaza etmek i in en iyi y ntemi belirlemelidir Boyama prosed r epitop geri getirme ve so utma i leminin hemen ard ndan ba lat lmal d r A klanan prosed rden sap lmas sonu lar olumsuz etkileyebilir 8 2 Reaktif Haz rlama 8 2 1 o Boyama i in a a daki reaktifleri haz rlay n 8 2 2 0 05 Tween 20 i eren Tris Tamponlu Salin TBST 8 2 2 1 TBS yi reticinin spesifikasyonlar na g re haz rlay n 8 2 2 2 TBS de hen z yoksa nihai konsantrasyon 560 05 olana dek Tween 20 ekleyin 8 2 3 Substrat Kromojen zeltisi DAB 5 slayt i in yeterli hacim 8 2 3 1 1mL DAB Substrat Tamponunu flakon 4a test t p ne aktar n 8 2 3 2 Bir damla 20 30 uL DAB Kromojen ekle
130. cess ria O procedimento de colora o dever ser iniciado imediatamente ap s a recupera o do ep topo e per odo de arrefecimento Os desvios ao procedimento descrito podem afectar adversamente os resultados 9 6 Prepara o dos reagentes 8 2 1 Preparar os seguintes reagentes antes de proceder colora o 8 2 2 Soro fisiol gico tamponado Tris com 0 05 de Tween 20 TBST 8 2 2 1 Preparar o TBS de acordo com as especifica es do fabricante 8 2 2 2 Caso ainda n o esteja inclu do no TBS adicionar Tween 20 para obter uma concentra o final de 0 05 8 2 3 Solu o substrato cromog nio DAB volume suficiente para 5 l minas 8 2 3 1 Transferir 1 mL de tamp o substrato de DAB frasco 4a para um tubo de ensaio 8 2 3 2 Adicionar uma gota 20 30 uL de cromog nio DAB frasco 4b Homogeneizar bem e aplicar nas l minas com uma pipeta 8 2 3 3 Preparar diariamente uma nova solu o de substrato cromog nio 8 2 3 4 qualidade da colora o n o afectada pelo precipitado que pode desenvolver se na solu o 9 PROTOCOLO DE COLORA O Efectuado temperatura ambiente a 20 25 9 1 Notas ao procedimento de colora o 9 1 1 Ler atentamente todas as instru es e familiarizar se com todos os componentes antes da respectiva utiliza o ver Precau es 9 1 2 Antes da imunocolora o todos os reagentes devem estar temperatura ambiente entre 20 e 25 C 9 1 3 Todas
131. dan kar n ve slaytlar tampon i inde 20 dakika s reyle so umaya b rak n Slaytlar deiyonize H20 ile durulay n ve TBST i eren temiz bir coplin jar kab na aktar n Bloke Edici Reaktif 9 3 1 Fazlal k tamponu hafif e vurarak giderin 9 3 2 Slaytlar haz rlanm bir nem haznesine suyla slat lm ka t havlular veya bezler ile dolu y kleyin 9 3 3 H cre birikim alan n rtmek i in 200 uL Peroksidaz Blok reaktifi flakon 1a uygulay n 9 3 4 5 dakika 1 dakika enk be edin 9 3 5 Slaytlar TBST i inde durulay n 3 de i im 2 er dakika Protein Blok 9 4 1 Fazlal k tamponu hafif e vurarak giderin 9 4 2 Slaytlar haz rlanm nem haznesine suyla slat lm ka t havlular veya bezler ile dolu y kleyin 9 4 3 H cre birikim alan n tamamen rtmek i in 200 uL Protein Blok flakon 1b uygulay n 9 4 4 5 dakika 1 dakika enk be edin 9 4 5 DURULAMAYIN Primer Antikor Kokteyli 9 5 1 o Fazlal k Protein Blokunu hafif e vurarak giderin 9 5 2 Slaytlar haz rlanm nem haznesine suyla slat lm ka t havlular veya bezler ile dolu y kleyin 9 5 3 H cre birikim alan n tamamen rtmek i in 200 uL ProEx Ab Cocktail Ab Kokteyli flakon 2 uygulay n 9 5 4 s cakl nda 30 dakika enk be edin 9 5 5 Y kama i esi kullanarak tek tek her slayd TBST ile durulay n ak do rudan h cre birikim alan
132. direct na voorbereiding in de SureDetect preparaatvoorbereidingsbuffer te worden geplaatst zie de SureDetect preparaatvoorbereidingsbuffer 10x voor richtlijnen voor de voorbereiding van een werkoplossing voor objectglaasjes De objectglaasjes moeten ten minste 1 uur maar niet langer dan 72 uur voorafgaand aan immunocytochemie in de buffer blijven 8 1 4 Er dient een epitoopversterkingsprocedure te worden gebruikt voor een optimale werking van de kit Deze procedure bestaat uit het onderdompelen van voorbereide objectglaasjes in een werkoplossing van SureDetect preparaatvoorbereidingsbuffer gedurende minimaal 1 uur bij kamertemperatuur gevolgd door verhitting van de objectglaasjes in de voorbehandelingbuffer tot 95 C De objectglaasjes worden gedurende 15 minuten op 95 C gehouden en dienen vervolgens gedurende 20 minuten af te koelen bij kamertemperatuur Het gebruik van een gekalibreerd waterbad of groentestomer wordt aanbevolen om de vereiste temperatuur te behouden Laboratoria die zich op grotere hoogten bevinden dienen de beste methode vast te stellen voor het behouden van de vereiste temperatuur De kleuringsprocedure dient onmiddellijk na de epitoopversterking en de afkoeling te worden opgestart Afwijking van de omschreven procedure kan de resultaten nadelig be nvloeden Reagensvoorbereiding 8 2 1 Bereid de volgende reagentia voor voorafgaand aan de kleuring 8 2 2 Tris gebufferde zoutoplossing met Tween 0 05 TBS
133. e placed in a humid chamber for prolonged incubations Epitope Retrieval 9 2 1 Place prepared slides in a coplin jar containing a working solution of SureDetect Slide Preparation buffer for a minimum of 1 hour up to a maximum of 72 hours 9 2 2 Incubate in a waterbath or steamer for 15 minutes at 95 C 9 2 3 Remove the entire coplin jar with slides from the waterbath or steamer and allow slides to cool in the buffer for 20 minutes 9 2 4 Rinse the slides with deionized H20 and transfer to a clean coplin jar containing TBST Blocking Reagent 9 3 1 Tap off excess buffer 9 3 2 Load slides into a prepared humidity chamber filled with water moistened paper towels or gauze 9 3 3 Apply 200uL Peroxidase Block reagent vial 1a to cover the cell deposition area 9 3 4 Incubate 5 minutes 1 minute 9 3 5 Rinse slides in TBST 3 changes 2 minutes each Protein Block 9 4 1 Tap off excess buffer 9 4 2 Load the slides into the prepared humidity chamber filled with water moistened paper towels or gauze 9 4 3 Apply 200uL of Protein Block vial 1b to completely cover cell deposition area 9 4 4 Incubate 5 minutes 1 minute 9 4 5 DO NOT RINSE Primary Antibody Cocktail 9 5 1 Tap off excess Protein Block 9 5 2 Load the slides into the prepared humidity chamber filled with water moistened paper towels or gauze 9 5 3 Apply 200uL ProEx Ab Cocktail vial 2 to completely cover cell depositio
134. e plus stabilizer and proprietary 2 8 7 1 For In vitro Diagnostic Use components Protein Block Purified casein plus 7 2 Prepared SurePath slides must be placed into the pretreatment buffer as soon as 1b proprietary combination of proteins in 2 8 they are prepared The slides must remain in the pretreatment buffer for at least e with preservative and 1 hour but not longer than 72 hours prior to immunocytochemistry din 7 3 Do not allow the slides to dry out at any time during the procedure Slides that have 2 TRIS buffered solution with Tween 20 pH 2 8 C been allowed to dry out during the procedure may increase background e proteins and 7 4 3 3 Diaminobenzidine DAB is classified as suspected carcinogen with the Mouse Probe Binds to mouse oc potential risk of producing irreversible effects Avoid physical contact and prolonged 3a monoclonal antibodies 2 8 or repeated exposure A chemical fume hood is highly recommended Do not get in Polymer Reagent Polymer conjugated eyes on skin or on clothing Wash hands thoroughly after handling DAB working 3b with horseradish peroxidase that binds to 2 8 solution should be prepared according to the package insert Mouse Probe Reagent DAB Buffer Substrate Substrate buffer 7 5 Some reagents in this kit contain sodium azide NaNs a highly toxic chemical in 4a used in the preparation of the DAB 2 8 C pure form Sodium azide may be fatal if swallowed or absorbed through skin These
135. e souris Tampon substrat DAB tampon substrat 4a utilis au cours de la pr paration du 2 8 chromog ne DAB DAB solution chromog ne de 3 3 1b 3a 2 8 C 4b diaminobenzidine Ens 5 H matoxyline h matoxyline de Mayer 15 30 C aqueuse Agent bleuissant solution saline 6 tamponn e de Tris 7 4 de pH avec du 15 30 Tween 20 et du NaN 0 09 96 MAT RIELS ET R ACTIFS REQUIS MAIS NON FOURNIS Tampons absorbants Lign e cellulaire SureDetect SiHa REF 005 11012 10 TriPath Imaging Inc Eau d sionis e ou distill e thanol 95 et 100 Lamelles de verre Gants Chambre humide Microscope optique objectifs 10x 20x en option 40x Milieu de montage Pipettes et embouts de pipettes capables de d livrer des volumes de 20 ul 200 ul et 1000 ul Tampon de pr paration pour lame porte objet SureDetect 10X REF 090 11008 10 TriPath Imaging Inc Tampon de pr traitement Bains ou cuves de coloration Horloge capable de mesurer des dur es de 1 60 minutes Solution saline tamponn e de Tris TBS Tween 20 Contr le universel anti IgG de souris Agitateur vortex Xyl ne ou substituts du xyl ne tuve bain marie AVERTISSEMENTS Hydrate de Avertissements relatifs aux risques 22 Nocif en cas d ingestion Avertissements relatifs la s curit 28 Ne pas respirer les g
136. e standard et sur le PrepStain Les lames SurePath pr par es doivent tre plac es dans le tampon de pr paration pour lame porte objet SureDetect d s qu elles ont t pr par es se r f rer la notice du tampon de pr paration des lames porte objet SureDetect 10X pour obtenir des indications sur le pr paration d une solution de travail Les lames doivent demeurer dans le tampon pendant au moins 1 heure mais pas plus de 72 heures avant la proc dure immunocytochimique 8 1 4 Une proc dure de restauration de l pitope doit tre utilis e pour obtenir des performances optimales du kit Cette proc dure comporte le trempage des lames pr par es dans une solution de travail de tampon de pr paration des lames porte objet SureDetect pendant un minimum de 1 heure temp rature ambiante d un chauffage des lames dans le tampon de pr traitement jusqu 95 C Les lames sont laiss es 95 C pendant 15 minutes puis elles refroidissent temp rature ambiante pendant 20 minutes L emploi d un bain marie calibr ou d une tuveuse a l gumes capables de maintenir la temp rature n cessaire est recommand Les laboratoires situ s en altitude doivent d terminer la meilleure m thode permettant de maintenir la temp rature n cessaire La proc dure de coloration doit tre lanc e imm diatement apr s la restauration de l pitope et le refroidissement Les d viations par rapport la proc dure d crite s
137. ePath 1 72 7 3 Ol Ol 30 2013 TriPath Imaging Inc All rights reserved 779 05848 10 08 2013 12 7 4 7 5 7 6 7 7 7 8 7 9 7 10 7 11 7 12 7 13 7 14 7 15 8 3 DAB
138. ekunder Sk lj objektglasen i 3 minuter i rinnande vatten Ladda objektglasen i en preparerad fuktkammare fylld med pappershanddukar eller kompresser fuktade med vatten 2013 TriPath Imaging Inc All rights reserved 779 05848 10 08 2013 12 10 11 12 13 9 7 7 Blafarga objektglasen genom att applicera 200 uL bl f rgningsmedel vial 6 i 1 minut 10 sekunder 9 7 8 Upprepa sk ljningen i rinnande vatten i 1 minut 9 8 Montering 9 8 1 S nk ned objektglasen i 95 etanol 1 minut eller 25 doppningar 9 8 2 S nk ned objektglasen i absolut alkohol 4 byten 1 minut vardera eller 25 doppningar 9 8 3 Klarg r med xylen byten 1 minut vardera eller 25 doppningar 9 8 4 Tack objektglasen med permanent vattenl sligt monteringsmedel med hj lp av t ckglas av glas STABILITET 10 1 Vid f rvaring vid de rekommenderade temperaturerna ar o ppnade reagensvialer stabila till det utg ngsdatum som anges p vialen 10 2 N r de ppnats r reagenserna stabila i trettio dagar de f rvarats vid de rekommenderade temperaturerna KVALITETSKONTROLL 11 1 Variabiliteti resultaten h rleds ofta fran skillnader i provhantering som avviker fran de rekommenderade testprocedurerna Ytterligare information finns i de f reslagna riktlinjerna f r kvalitetskontroll fr n Clinical and Laboratory Standards Institute Quality Assurance for Immunocytochemistry 11 2 SureDetect SiHa cellkontr
139. en dampkoger der kan fastholde den p kreevede temperatur Laboratorier der er hgjt beliggende over havets overflade skal fastl gge den bedste metode til opretholdelse af den p kreevede temperatur Farvningsproceduren skal p begyndes umiddelbart efter epitop retrieval og afk ling Afvigelser fra 9 6 den angivne procedure have en negativ indflydelse resultaterne 8 2 Klargoring af reagenserne 8 2 1 Klargor f lgende reagenser inden farvning 8 2 2 Tris bufferet fysiologisk saltvand med 0 05 Tween 20 TBST 8 2 2 1 Klargar TBS overensstemmelse med producentens specifikationer 8 2 2 2 Tilseet Tween 20 til en endelig koncentration p 0 05 hvis det ikke allerede er i TBS 8 2 3 Substrat kromogenoplgsning DAB m ngde der r kker til 5 objektglas 8 2 3 1 Overfgr 1 ml DAB substratbuffer heetteglas 4a til et reagensglas 8 2 3 2 Tilseet n dr be 20 30 ul DAB kromogen heetteglas 4b Bland grundigt og overfor til objektglassene med en pipette 8 2 3 3 Klargor en ny substrat kromogenoplesning dagligt 8 2 3 4 Farvningskvaliteten p virkes ikke af bundfald der kan dannes i oplgsningen 9 FARVNINGSPROTOKOL udfores ved stuetemperatur 20 25 C 9 1 Noterom farvningsproceduren 9 1 1 L s omhyggeligt alle disse anvisninger og f kendskab til alle komponenter inden brug se Forsigtighedsregler 9 1 2 Alle reagenser skal have stuetemperatur 20 25 C inden immunfarvning 9 1 3 Alle inkubationer skal
140. ens med 3 hold xylen 1 minut hver eller 25 dyp 9 8 4 D k objektglassene med ikke vandholdig permanent monteringsmedie ved hj lp af d kglas STABILITET 10 1 Ved opbevaring ved de anbefalede temperaturer er u bnede reagensheetteglas stabile indtil den udl bsdato der er angivet pa h tteglasset 10 2 Efter bning er reagenserne stabile i tredive dage hvis de opbevares ved de anbefalede temperaturer KVALITETSKONTROL 11 1 Varians resultaterne skyldes ofte forskelle i preeparathandteringen som afviger fra de anbefalede testprocedurer Yderligere oplysninger findes i de foresl ede retningslinjer for kvalitetskontrol fra Clinical and Laboratory Standards Institute Quality Assurance for Immunocytochemistry 11 2 SureDetect SiHa cellekontrol kan fas som en positiv kontrol fra TriPath Imaging Inc Hvert heetteglas indeholder en cellelinje med cervikal cancer som behandles pa samme made som kliniske preeparater En universal muse IgG negativ kontrol kan anvendes som en negativ kontrol Et positivt og negativt kontrolobjektglas bar inkluderes i hver farvningsprocedure Farvningsresultaterne bor bruges som en indikation af validiteten af farvningskgrslen FORTOLKNING AF FARVNINGEN 12 1 12 2 12 3 Patient og kontrolpraver En cytotekniker eller patolog skal evaluere de farvede objektglas med et lysmikroskop Celler kan undersages manuelt eller opbevares i et elektronisk billedgalleri der er oprettet med anvendelse af et ly
141. eparata riempita con salviette o garze inumidite con acqua 9 6 13 Applicare 200 uL di soluzione substrato cromogeno DAB coprendo completamente l area di deposito delle cellule 17 2013 TriPath Imaging Inc All rights reserved 779 05848 10 08 2013 12 10 11 12 9 6 14 Incubare per 5 minuti 1 minuto 9 6 15 Sciacquare per 5 minuti in acqua deionizzata 9 7 Colorazione di contrasto 9 7 1 Sciacquare i vetrini in TBST 1 cambio per 2 minuti 9 7 2 vetrini in una camera umida precedentemente preparata riempita con salviette o garze inumidite con acqua 9 7 3 Applicare 200 ul di colorazione di contrasto a base di ematossilina flacone 5 coprendo completamente l area di deposito delle cellule 9 7 4 Incubare per 1 minuto 10 secondi 9 7 5 Sciacquare i vetrini per 3 minuti in acqua corrente 9 7 6 vetrini in una camera umida precedentemente preparata riempita con salviette o garze inumidite con acqua 9 7 7 Colorare di blu i vetrini applicando 200 di agente di colorazione flacone 6 per 1 minuto 10 secondi 9 7 8 Ripetere il risciacquo in acqua corrente per 1 minuto 9 8 Montaggio 9 8 1 Immergere i vetrini in etanolo 95 1 minuto o 25 immersioni 9 8 2 Immergere i vetrini in alcol assoluto 4 cambi 1 minuto ciascuno 25 immersioni 9 8 3 Chiarificare con xilene 3 cambi 1 minuto ciascuno o 25 immersioni 9 8 4 Applicare il coprioggetti in vetro
142. er des effets irr versibles viter tout contact physique ou exposition prolong e ou r p t e L emploi d une hotte aspirante est fortement recommand Ne pas projeter dans les yeux sur la peau ou sur les v tements Se laver les mains soigneusement apr s manipulation La solution de DAB de travail doit tre pr par e conform ment aux indications de sa notice 7 5 Certains r actifs de ce kit contiennent de l azide de sodium un produit chimique extr mement toxique l tat pur L azide de sodium peut tre mortel en cas d ingestion ou d absorption travers la peau Ces r actifs sont nocifs en cas d inhalation Ces r actifs sont des solides pr sentant des dangers Ils provoquent des irritations de la peau des yeux et de l appareil respiratoire Ils affectent le syst me nerveux central les reins et le syst me cardiovasculaire Bien que non rang parmi les compos s pr sentant un danger aux concentrations du produit les accumulations d azide de sodium sont susceptibles de r agir avec le cuivre et le plomb des canalisations pour donner des azides m talliques hautement explosifs Lors de l limination rincer avec de grandes quantit s d eau pour viter l accumulation d azides dans les canalisations 2013 TriPath Imaging Inc All rights reserved 779 05848 10 08 2013 12 7 6 7 7 7 8 7 9 7 10 7 11 7 12 7 13 7 14 7 15 H matoxyline et agent bleuissant Ces r acti
143. ervix Eur J Biochem 2003 270 1089 1101 Lei and Tye BK Initiating DNA synthesis from recruiting to activating the MCM Complex J Cell Science 2001 Vol 114 8 1447 1454 14 Solomon D Nayar R The Bethesda System for Reporting Cervical Cytology Definitions Criteria and Explanatory Notes 2nd Edition 2004 Clinical and Laboratory Standards Institute Timothy J O Leary M D Ph D Quality Assurance or Immunocytochemistry Approved Guideline 1999 MM4 A SEMBOL SOZLUGU Katalog numarasi n vitro diyagnostik kullan m i indir Kullan m talimatlar na bak n 75 test i erir Dikkat ilgili belgeye bak n Saklama S cakl S n rlar Seri Kodu Son kullanma YYYY AA GG veya YYYY AA gt 48 8 retici DESTEK ABD Technical Service amp Support BD Diagnostics Diagnostic Systems www bd com ds technical_services bd com 1 800 638 8663 TriPath Imaging Inc 780 Plantation Drive Burlington NC 27215 ABD Benex Limited Rineanna House Shannon Free Zone Shannon County Clare Irlanda CE Millennium Pharmaceuticals Inc teknolojisiyle gelistirilmistir ANN MILLENNIUM INA ve MILLENNIUM Millennium Pharmaceuticals Inc irketinin ticari markalar d r Millennium Pharmaceuticals Inc 40 Landsdowne Street Cambridge MA 02139 ABD www millennium com Saptama Reaktifleri tedarikgisi Medical 2940 Camino Diablo Su
144. es lames dans la chambre humide pr par e remplie de serviettes en papier ou de tampons de gaze impr gn s d eau 9 4 3 Appliquer 200 ul de r actif de blocage des prot ines flacon 1b pour couvrir la zone de d p t des cellules 9 4 4 Incuber pendant 5 minutes 1minute 9 4 5 NE PAS RINCER M lange d anticorps primaires 9 5 1 Tapoter pour liminer le r actif de blocage des prot ines en exc s 9 5 2 Charger les lames dans la chambre humide pr par e remplie de serviettes en papier ou de tampons de gaze impr gn s d eau 9 5 3 Appliquer 200 ul de m lange d anticorps ProEx flacon 2 pour couvrir la zone de d p t des cellules 9 5 4 Incuber pendant 30 minutes temp rature ambiante 9 5 5 Rincer chaque lame individuellement dans le TBST l aide d un flacon pissette ne pas diriger le jet directement sur la zone de d p t des cellules Charger les lames sur un portoir de lames 9 5 6 Rincer les lames dans du TBST 3 reprises de 2 minutes chacune Chimie de d tection 9 6 1 Tapoter pour liminer le tampon en exc s 9 6 2 Charger les lames dans une chambre humide pr par e remplie de serviettes en papier ou de tampons de gaze impr gn s d eau 9 6 3 Appliquer 200 ul de r actif Sonde de souris flacon pour couvrir la zone de d p t des cellules 9 6 4 Incuber pendant 20 minutes 1 minute 9 6 5 Rincer les lames dans du TBST 3 reprises de 2 minutes chacune 9 6
145. es oder destilliertes Wasser Ethanol 95 und 100 Deckgl ser Handschuhe Feuchtigkeitskammer Lichtmikroskop Objektive mit 10facher 20facher optional und 40facher Vergr Berung Eindeckmittel Pipetten und Pipettenspitzen geeignet f r die Abgabe von Volumina von 20 ul 200 uL und 1000 pL SureDetect Puffer zur Objekttr gerpr paration 10X Ref Nr 090 11008 10 TriPath Imaging Inc Vorbehandlungspuffer F rbeschalen oder wannen Zeitmesser muss Intervalle von 1 60 Minuten anzeigen k nnen Tris gepufferte Kochsalzl sung TBS Tris Buffered Saline Tween 20 Universelle Maus IgG Negativkontrolle Vortexer Xylol oder Xylolersatz Dampfkocher Wasserbad WARNHINWEISE Gesundheitssch dlich 45 Bei Unfall oder Unwohlsein sofort den Arzt Chloralhydrat Risikos tze 22 Gesundheitssch dlich bei Verschlucken Sicherheitss tze 23 Gas Rauch Dampf Aerosol nicht einatmen 25 Ber hrung mit den Augen vermeiden Xn 36 Geeignete Schutzkleidung tragen hinzuziehen 60 Dieser Stoff und sein Beh lter sind als gef hrlicher Abfall zu entsorgen 3 3 Diaminobenzidin Risikos tze 22 Gesundheitssch dlich bei Verschlucken 40 Verdacht auf krebserzeugende Wirkung Sicherheitss tze 23 Gas Rauch Dampf Aerosol nicht einatmen 36 37 Geeignete Schutzhandschuhe und Schutzkleidung tragen 60 Dieser Stoff und sein Beh lter sind als gef hrlicher Abfall zu entsorgen Xn Gesundheit
146. fs sont nocifs en cas d ingestion L h matoxyline et les agents bleuissants sont des irritants des yeux de la peau et des voies respiratoires Les chantillons et tous les mat riels expos s aux chantillons doivent tre manipul s comme s ils pouvaient transmettre des infections et limin s conform ment aux pr cautions en vigueur Ne jamais pipeter les r actifs avec la bouche et viter de mettre en contact les r actifs et les chantillons avec la peau et les muqueuses Laver grande eau en cas de contact des r actifs avec des r gions sensibles Minimiser la contamination microbienne de r actifs pour viter les colorations non sp cifiques Des dur es d incubation des temp ratures ou des m thodes autres que celles qui sont sp cifi es peuvent conduire des r sultats erron s Les r actifs ont t dilu s pour donner des performances optimales Une dilution suppl mentaire est susceptible de se traduire par une perte de coloration des antig nes Les l ments du kit sont sp cifiques d un lot Ne pas remplacer les l ments d un kit par d autres provenant de lots dont les num ros sont diff rents Les num ros de lot figurent sur les tiquettes du conditionnement Ne pas utiliser le test SurePath avec ProEx apr s la date de p remption igurant sur le conditionnement L utilisateur doit valider les conditions si les r actifs sont conserv s dans des conditions autres que celles qui sont sp cifi
147. g uspecifik farvning 23 2013 TriPath Imaging Inc All rights reserved 779 05848 10 08 2013 12 7 9 Andre inkubationstider temperaturer eller metoder end de angivne kan give 9 2 fejlagtige resultater 7 10 Reagenserne er fortyndede for at optimal ydeevne Yderligere fortynding kan resultere i tab af antigenfarvning 7 11 Kitkomponenter er lotspecifikke Kitkomponenter ma ikke erstattes med andre lotnumre Lotnumre er angivet emballagens meerkning 7 12 Anvend ikke SurePath med ProEx testkittet efter den udl bsdato der er trykt p emballagen Brugeren skal validere betingelserne hvis reagenserne opbevares under andre betingelser end dem der er angivet i indleegssedlen 7 13 Der findes ingen umiddelbare tegn der viser en eventuel forringelse af dette 9 3 produkt Der bar derfor k res positive og negative kontroller samtidigt med patientprover Kontakt TriPath Imaging teknisk support hvis der observeres uventet farvning som ikke kan forklares med variationer i laboratorieprocedurerne eller hvis der opst r mistanke om et problem med SurePath med ProEx testkittet 7 14 Brug egnet personligt beskyttelsesudstyr for at undg at reagenserne kommer i kontakt med gjne og hud Se sikkerhedsdatabladet for yderligere oplysninger 7 15 SurePath med ProEx testen er beregnet til anvendelse med cervikale cytologiske preeparater der opsamles i SurePath konserveringsveeske Kompatibilitet med k
148. g som nemt kan visualiseres for at kunne svare ja til dette trin Hvis der kun ses en ubetydelig meengde eller et svagt anstrog af brunt er det ikke nok til at erkleere et resultat for positivt Hvis der ikke ses nogen brun kernefarvning indberettes resultatet som Negativt Forts t til n ste trin hvis der ses en tilstreekkelig meengde brun farvning Trin 3 Er cellen med brun kernefarvning en pladecelle eller en glandulzer celle Fortseet til neeste trin hvis svaret er ja Hvis svaret er nej er testresultatet Negativt 4 Er cellen gt ASC atypisk pladecelle eller AGC atypisk glandulzer celle Anvend de samme morfologiske kriterier der beskrevet i Bethesda systemet til indberetning af cervikal cytologi Reporting Cervical Cytology 2nd Ed for at afg re om pladecellen med den brune kerne er gt ASC atypisk pladecelle Hvis cellen betragtes som 2ASC eller ZAGC er testresultatet Positivt Dette inkluderer ASC US ASC H LSIL HSIL og cancer Hvis cellens udseende er glanduleert geelder TBS kriterierne for bestemmelse af om en celle er gt AGC atypisk glanduleer celle Dette inkluderer endocervikal AGC endometriel AGC AIS og adenocarcinom Hvis den p g ldende celle er i overensstemmelse med NILM negativ for intraepitelial leesion eller malignitet er testresultatet Negativt LITTERATUR Wright TC Schiffman M Solomn D Cox JT Garcia F Goldie S Hatch K Noller KL Roach N Runowicz C and Saslow
149. ge Temperature Limitations Batch Code Use by YYYY MM DD or YYYY MM En f gt lt HER Manufacturer TECHNICAL SUPPORT USA Technical Service amp Support BD Diagnostics Diagnostic Systems www bd com ds technical services bd com 1 800 638 8663 TriPath Imaging Inc 780 Plantation Drive Burlington NC 27215 USA Benex Limited Rineanna House Shannon Free Zone Shannon County Clare Ireland CE Australian Representative Becton Dickinson Pty Ltd 4 Research Park Drive Macquarie University Research Park North Ryde NSW 2113 Australia Developed with technology from Millennium Pharmaceuticals Inc JINN MILLENNIUM JNA and MILLENNIUM are trademarks of Millennium Pharmaceuticals Inc Millennium Pharmaceuticals Inc 40 Landsdowne Street Cambridge MA 02139 USA www millennium com Detection Reagents supplied by Medical 2940 Camino Diablo Suite 300 Walnut Creek CA 94596 SurePath is a product and registered trademark of TriPath Imaging Inc ProEx SureDetect PrepStain PrepMate are products and trademarks of TriPath Imaging Inc 2013 TriPath Imaging Inc All rights reserved 779 05848 10 08 2013 12 SUREPATH with ProEy C Immunocytochemical Test 490500 REF 490501 005 11000 12 005 11000 13 1 VERWENDUNGSZWECK Der SurePath mit ProEx immunzytochemische Test ist f r den qualitativen Nachweis einer abweichenden S Phasen
150. gebied volledig te bedekken 9 6 14 Incubeer gedurende 5 minuten 1 minuut 9 6 15 Spoel de objectglaasjes gedurende 5 minuten af in gedemineraliseerd HO 21 2013 TriPath Imaging Inc All rights reserved 779 05848 10 08 2013 12 10 11 12 9 7 Achtergrondkleuring 9 7 1 Spoel de objectglaasjes in TBST in 1 wisselbeurt van 2 minuten 9 7 2 Laad de objectglaasjes in een voorbereide bevochtigingskamer gevuld met met water bevochtigde keukenrol of gaas 9 7 3 Gebruik 200 uL hematoxyline achtergrondkleuring flacon 5 om het celafzettingsgebied volledig te bedekken 9 7 4 Incubeer gedurende 1 minuut 10 seconden 9 7 5 Spoel de objectglaasjes gedurende 3 minuten af in stromend H20 9 7 6 Laad de objectglaasjes in een voorbereide bevochtigingskamer gevuld met met water bevochtigde keukenrol of gaas 9 7 7 Kleur de objectglaasjes blauw met behulp van 200 uL blauwkleurend agens flacon 6 gedurende 1 minuut 10 seconden 9 7 8 Herhaal het spoelen onder stromend water gedurende 1 minuut 9 8 Preparatie 9 8 1 Dompel de objectglaasjes onder 95 ethanol gedurende 1 minuut of 25 onderdompelingen 9 8 2 Dompel de objectglaasjes onder in absolute alcohol in 4 wisselbeurten van elk 1 minuut of 25 onderdompelingen 9 8 3 Reinig met xyleen in 3 wisselbeurten van elk 1 minuut of 25 onderdompelingen 9 8 4 Bedek de objectglaasjes met glazen dekglaasjes met een niet waterig permanent prepara
151. gia de Millennium Pharmaceuticals Inc JINN MILLENNIUM INA y MILLENNIUM son marcas comerciales de Millennium Pharmaceuticals Inc Millennium Pharmaceuticals Inc 40 Landsdowne Street Cambridge MA 02139 EE UU www millennium com Reactivos de detecci n suministrados por BioCare Medical 2940 Camino Diablo Suite 300 Walnut Creek CA 94596 SurePath es un producto y una marca registrada de TriPath Imaging Inc ProEx SureDetect PrepStain y PrepMate son productos y marcas comerciales de TriPath Imaging Inc 15 2013 TriPath Imaging Inc All rights reserved 779 05848 10 08 2013 12 SUREPATH with ProEy Immunocytochemical Test REF 490500 REF 490501 75 005 11000 12 005 11000 13 1 USO PREVISTO Il test immunocitochimico SurePath con ProEx previsto per la valutazione qualitativa dell induzione della fase S aberrante in campioni citologici cervicali raccolti nel conservante SurePath risultati del test forniscono informazioni addizionali per la diagnosi citologica cervicale 2 RIEPILOGO E INFORMAZIONI DI BASE Le proteine di mantenimento del minicromosoma rivestono un ruolo importante nella replicazione del DNA eucariotico Ciascuna proteina MCM presenta nel proprio dominio centrale altamente conservativo sequenze di ATPasi DNA dipendente livelli di proteine MCM generalmente aumentano in modo variabile quando le cellule normali progrediscono dalla fase GO alla fa
152. horseradish peroxidase conjugate linked to a dextran polymer backbone Addition of a specific chromogen results in formation of a visible chromogenic product localized at the antigen antibody binding sites The specimen is then counterstained with hematoxylin a bluing agent is applied and the slide is coverslipped Results are interpreted using a light microscope A positive result indicative of high grade cervical disease is achieved when the nucleus in cells of interest stain brown A reference gallery of potentially positive slides may be created using automated imaging equipment The gallery then can be reviewed to determine a positive result or negative result The SurePath with ProEx Immunocytochemical Test is applicable for both manual and automated staining REAGENTS PROVIDED medical advice immediately 60 This material and its container must be disposed of as hazardous waste 3 3 diaminobenzidine Risk phrases 22 Harmiul if swallowed 40 Limited evidence of a carcinogenic effect Safety phrases 28 Do not breathe gas fumes vapour spray 36 37 Wear suitable protective clothing and gloves 60 This material and its container must be disposed of as hazardous waste Xn Harmful The following materials are included which are sufficient for 75 thinlayer preparations Vial No Description 4 Peroxidase Block Buffered hydrogen PRECAUTIONS la peroxid
153. hould be 9 6 initiated immediately following epitope retrieval and cool down Deviations from the described procedure may adversely affect results 8 2 Reagent Preparation 8 2 1 Prepare the following reagents prior to staining 8 2 2 Tris Buffered Saline with 0 05 Tween 20 TBST 8 2 2 1 Prepare TBS according to manufacturer s specifications 8 2 2 2 If not already present in TBS add Tween 20 to a final concentration of 0 05 8 2 3 Substrate Chromogen Solution DAB volume sufficient for 5 slides 8 2 3 1 Transfer 1mL of DAB Substrate Buffer vial 4a to a test tube 8 2 3 2 Add one drop 20 30uL of DAB Chromogen vial 4b Mix thoroughly and apply to slides with a pipette 8 2 3 3 Prepare Substrate Chromogen solution fresh daily 8 2 3 4 Staining quality is not affected by precipitate that may develop in the solution 9 STAINING PROTOCOL Performed at Room Temperature 20 25 C 9 1 Staining Procedural notes 9 1 1 Read all these instructions carefully and become familiar with all components prior to use see Precautions 9 1 2 All reagents should be equilibrated to room temperature 20 25 C prior to immunostaining 9 1 3 All incubations should be performed at room temperature unless noted 9 7 9 1 4 not allow slides to dry out during the staining procedure Dried cellular preparations may display increased non specific staining Protect slides that may be exposed to drafts Slides should b
154. ias veces para eliminar el tamp n sobrante 9 4 2 Cargue los portaobjetos en una c mara de humedad preparada llena de toallas de papel o gasas humedecidas en agua 9 4 3 Aplique 200 ul de inhibidor de prote nas vial 1a para cubrir completamente el rea de deposici n del pocillo 9 4 4 IncUbelo durante 5 minutos 1 minuto 9 4 5 NO LO ENJUAGUE C ctel de anticuerpos principales 9 5 1 Golpee suavemente varias veces para eliminar el inhibidor de prote nas sobrante 9 5 2 Cargue los portaobjetos en una c mara de humedad preparada llena de toallas de papel o gasas humedecidas en agua 9 5 3 Aplique 200 ul de c ctel de anticuerpos ProEx vial 2 para cubrir completamente el rea de deposici n del pocillo 9 5 4 Inc belos durante 30 minutos a temperatura ambiente 9 5 5 Enjuague cada portaobjetos de forma individual con TBST utilizando una botella de lavado no dirija el flujo directamente al rea de deposici n del pocillo Cargue los portaobjetos en una gradilla 3 9 5 6 Enjuague los portaobjetos en TBST con 3 cambios de 2 minutos cada uno Qu mica de detecci n 9 6 1 Golpee suavemente varias veces para eliminar el tamp n sobrante 9 6 2 Cargue los portaobjetos en una c mara de humedad preparada llena de toallas de papel o gasas humedecidas en agua 9 6 3 Aplique 200 ul de reactivo sonda de rat n vial 3a para cubrir completamente el rea de deposici n del pocillo 9 6
155. icionar 8 mL de SurePath Preservative Fluid amostra residual no frasco SurePath aprox 2 mL A amostra diluida dever ser processada no BD PrepMate utilizando a t cnica padr o e no PrepStain 8 1 2 As amostras SurePath preparadas devem ser colocadas no tamp o de prepara o de l minas SureDetect assim que acabarem de ser preparadas consultar a sec o Tamp o de prepara o de l minas 10X SureDetect para obter instru es sobre a prepara o de uma solu o de trabalho para as l minas As l minas devem permanecer no tamp o durante no m nimo 1 hora mas n o mais de 72 horas antes do 9 5 procedimento de imuno citoqu mica 8 1 4 um desempenho ideal do kit deve utilizar se um procedimento de recupera o do ep topo Este procedimento envolve submergir as l minas preparadas numa solu o de trabalho do tamp o de prepara o de l minas SureDetect durante um per odo m nimo de 1 hora temperatura ambiente ap s o qual se aquecem as l minas no tamp o de pr tratamento a uma temperatura de 95 As l minas s o mantidas a uma temperatura de 95 durante 15 minutos e devem ser deixadas arrefecer temperatura ambiente durante 20 minutos Recomenda se a utiliza o de um banho de gua calibrado ou de uma estufa de vapor capaz de manter a temperatura necess ria Os laborat rios situados em locais mais elevados dever o determinar o melhor m todo de manter a temperatura ne
156. ieren 9 6 10 Objekttr ger viermal 2 Minuten in einem jeweils frischen TBST Bad sp len 9 6 11 bersch ssigen Puffer abklopfen 2013 TriPath Imaging Inc All rights reserved 779 05848 10 08 2013 12 10 11 12 9 6 12 Objekttr ger eine vorbereitete Feuchtigkeitskammer stellen die mit Wasser angefeuchtete Papiert cher oder Gaze enth lt 9 6 13 200 ul Substratchromogenl sung zugeben um den Zellablagerungsbereich vollst ndig zu bedecken 9 6 14 5 Minuten 1 Minute inkubieren 9 6 15 Objekttr ger 5 Minuten in entionisiertem sp len 9 7 Gegenf rbung 9 7 1 Objekttrager zweimal 2 Minuten in jeweils frischem TBST sp len 9 7 2 Objekttr ger in eine vorbereitete Feuchtigkeitskammer stellen die mit Wasser angefeuchtete Papiert cher oder Gaze enth lt 9 7 3 200 ul H matoxylin Gegenf rbung Gef 5 zugeben um den Zellablagerungsbereich vollst ndig zu bedecken 9 7 4 1 Minute 10 Sekunden inkubieren 9 7 5 Objekttr ger 3 Minuten unter flieBendem Wasser sp len 9 7 6 Objekttrager in eine vorbereitete Feuchtigkeitskammer stellen die mit Wasser angefeuchtete Papiert cher oder Gaze enth lt 9 7 7 Objekttrager durch Zusatz von 200 ul Bl uungsmittel Gef 6 1 Minute 10 Sekunden bl uen 9 7 8 Erneut 1 Minute unter flieBendem Wasser sp len 9 8 Fixieren 9 8 1 Objekttrager 1 Minute oder 25mal in 95 iges Ethanol eintauchen 9 8 2 Objekttrager f nfmal
157. im Guidance for the Use of Human Papillomavirus DNA Testing as an Adjunct to Cervical Cytology for Screening Obstet Gynecol 2004 102 304 309 Ishimi Y Okayasu Kato Kwon H Kimura H Yamada and Song 5 Enhanced expression of MCM proteins in cancer cells derived from uterine cervix Eur J Biochem 2003 270 1089 1101 Lei and Tye BK Initiating DNA synthesis from recruiting to activating the MCM Complex J Cell Science 2001 Vol 114 8 1447 1454 Solomon D Nayar R The Bethesda System for Reporting Cervical Cytology Definitions Criteria and Explanatory Notes 2 Edition 2004 Clinical and Laboratory Standards Institute Timothy J O Leary M D Ph D Quality Assurance for Immunocytochemistry Approved Guideline 1999 MM4 A in vitro 75 EEEE MM HH EEEE MM E gt lt E 2 Technical Service amp Support BD Diagnostics Diagnostic Systems www bd com ds technical services bd com 1 800 638 8663
158. impiegando un mezzo di montaggio permanente non acquoso STABILIT 10 1 Se conservati alle temperature consigliate i flaconi di reagente chiusi rimangono stabili fino alla data di scadenza indicata sul contenitore 10 2 Una volta aperti i reagenti sono stabili per trenta giorni se conservati alle temperature consigliate CONTROLLO DI QUALIT 11 1 La variabilit dei risultati dipende spesso da una procedura di preparazione dei campioni diversa da quella descritta nelle procedure di test Per ulteriori informazioni consultare le linee guida di controllo di qualit proposte dal Clinical and Laboratory Standards Institute Quality Assurance for Immunocytochemistry 11 2 Il SureDetect SiHa Cell Control disponibile come controllo positivo presso TriPath Imaging Inc Ciascun flacone contiene una linea cellulare di cancro cervicale che viene impiegata in modo simile ai campioni clinici Come controllo negativo possibile utilizzare un controllo negativo universale di IgG di topo A ciascuna procedura di colorazione allegato un vetrino per il controllo positivo e negativo risultati di colorazione devono essere usati come indicazione della validit della fase di colorazione INTERPRETAZIONE DELLA COLORAZIONE 12 1 Campioni di paziente e di controllo il citologo il patologo dovranno valutare i vetrini colorati tramite microscopio ottico Le cellule possono essere visionate manualmente o conservate in una galleria di immag
159. inar o produto adicionar gua abundante para evitar a acumula o de azidas na canaliza o 2013 TriPath Imaging Inc All rights reserved 779 05848 10 08 2013 12 7 6 7 7 7 8 7 9 7 10 7 11 7 12 7 13 7 14 7 15 Hematoxilina e agente de Bluing estes reagentes nocivos quando ingeridos hematoxilina e os agentes de Bluing s o irritantes oculares cut neos e respirat rios As amostras e todos os materiais expostos s amostras dever o ser manuseados como materiais pass veis de transmitir infec o e devem ser eliminados com as devidas precau es Nunca pipetar os reagentes com a boca e evitar o contacto da pele e membranas mucosas com os reagentes e as amostras Se os reagentes entrarem em contacto com reas sensiveis lavar com gua abundante Minimizar a contamina o microbiana dos reagentes para evitar uma colorac o nao espec fica Tempos e temperaturas de incubac o ou m todos diferentes dos especificados podem originar resultados err neos Os reagentes foram dilu dos para um desempenho ideal Uma diluig o adicional pode resultar na perda de colora o do antig nio Os componentes do kit s o espec ficos do lote N o substituir os componentes do kit por n meros de lotes de diferentes fabricantes Os n meros dos lotes s o apresentados nas etiquetas das embalagens 9 2 N o utilizar o kit de an lise SurePath with ProEx depois de expirado o praz
160. ini elettroniche ottenute tramite il microscopio ottico 12 2 Vetrinidi controllo i vetrini di controllo positivo e negativo devono essere esaminati prima della valutazione dei campioni dei pazienti per verificare che tutti i reagenti abbiano funzionato correttamente La presenza di un prodotto di reazione marrone 3 3 diaminobenzidina tetraidrocloruro DAB nei nuclei del vetrino di controllo cellulare SiHa colorato con test SurePath con ProEx Test indica una reattivit positiva Il vetrino di controllo negativo di IgG di topo universale colorato con SurePath con ProEx Test deve mostrare alcun nucleo colorato di marrone e deve mostrare colorazione solo per ematossilina 12 3 La valutazione dei vetrini una procedura a 4 fasi Fase 1 Il campione adeguato Il Bethesda System TBS per la Refertazione della Citologia Cervicale seconda edizione dichiara che An adequate liquid based preparation should have an estimated minimum of at least 5000 well visualized well preserved squamous cells una corretta preparazione a base liquida deve contenere un minimo previsto di 5000 cellule squamose ben visualizzabili e ben conservate Lo stesso criterio deve essere applicato ai vetrini SurePath con ProEx Tuttavia analogamente ad una preparazione Pap convenzionale qualunque campione con cellule anomale che mostri una reazione molecolare positiva viene automaticamente considerato soddisfacente per la valutazione Se a
161. ion Drive Burlington NC 27215 VS Benex Limited Rineanna House Shannon Free Zone Shannon County Clare Ireland CE Ontwikkeld met technologie van Millennium Pharmaceuticals Inc INN MILLENNIUM INA en MILLENNIUM zijn handelsmerken van Millennium Pharmaceuticals Inc Millennium Pharmaceuticals Inc 40 Landsdowne Street Cambridge MA 02139 VS www millennium com Detectiereagentia geleverd door g He Medical 2940 Camino Diablo Suite 300 Walnut Creek CA 94596 SurePath is een product en geregistreerd handelsmerk van TriPath Imaging Inc ProEx SureDetect PrepStain PrepMate zijn producten en handelsmerken van TriPath Imaging Inc 22 2013 TriPath Imaging Inc All rights reserved 779 05848 10 08 2013 12 SUREPATH REF 490500 with ProEx C Immunocytochemical Test 490501 005 11000 12 005 11000 13 5 TILSIGTET ANVENDELSE SurePath med ProEx immuncytokemisk test er beregnet til kvalitativ evaluering af afvigende S faseinduktion i cervikale cytologiske preeparater der er opsamlet i SurePath Preservative Fluid Testresultaterne giver supplerende oplysninger til den cervikale cytologiske diagnose RESUM OG FORKLARING Minikromosomvedligeholdelse MCM proteiner spiller en vigtig rolle ved eukaryotisk DNA replikation Hvert af MCM proteinerne har DNA afheengige ATPase motiver i deres seerdeles velbevarede centrale dom ne Niveauet af MCM
162. ite 300 Walnut Creek CA 94596 SurePath TriPath Imaging Inc sirketinin bir r n ve tescilli ticari markasidir ProEx SureDetect PrepStain ve PrepMate TriPath Imaging Inc sirketinin r nleri ve ticari markalaridir 36 2013 TriPath Imaging Inc All rights reserved 779 05848 10 08 2013 12 SUREPATH with ProEx C Immunocytochemical Test 490500 REF 490501 005 11000 12 005 11000 13 Va AVSEDD ANV NDNING SurePath med ProEx immunocytokemiskt test r avsett f r kvalitativ utv rdering av avvikande S fasinduktion i cervixprover som samlats in i SurePath konserveringsv tska Testresultaten ger ytterligare information f r cervikal cytologisk diagnos SAMMANFATTNING OCH F RKLARING MCM proteiner minichromosome maintanance spelar en viktig roll vid eukaryotisk DNA replikation Var och en av MCM proteinerna har DNA beroende ATPase motiv i sin mycket konserverade centrala dom n Niv erna av MCM proteiner kar i allm nhet p ett varierat s tt eftersom normala celler utvecklas fran GO till G1 S fasen i cellcykeln Topoisomeras alfa TOP2A ar ett viktigt k rnenzym som deltar i DNA replikationen och ar ett mal f r m nga l kemedel mot cancer som anv nds vid cancerbehandling Ett minskat uttryck av TOP2A ar en framtr dande f rsvarsmekanism mot kemoterapeutiska medel En betydande variation uttrycksintervallet av detta protein har noterats i manga olika tum rer TO
163. iteit is het testresultaat Negatief 13 REFERENTIES Wright Schiffman Solomn Cox JT Garcia Goldie Hatch Noller KL Roach N Runowicz C and Saslow D Interim Guidance for the Use of Human Papillomavirus DNA Testing as an Adjunct to Cervical Cytology for Screening Obstet Gynecol 2004 102 304 309 Ishimi Y Okayasu Kato Kwon H Kimura H Yamada and Song Enhanced expression of MCM proteins in cancer cells derived from uterine cervix Eur J Biochem 2003 270 1089 1101 Lei M and Tye BK Initiating DNA synthesis from recruiting to activating the MCM Complex J Cell Science 2001 Vol 114 8 1447 1454 Solomon D Nayar R The Bethesda System for Reporting Cervical Cytology Definitions Criteria and Explanatory Notes 2 Edition 2004 Clinical and Laboratory Standards Institute Timothy J O Leary M D Ph D Quality Assurance or Immunocytochemistry Approved Guideline 1999 MM4 A 14 VERKLARING SYMBOLEN REF Catalogusnummer Voor in vitro diagnostiek Raadpleeg de gebruiksaanwijzing Voldoende voor 75 tests Voorzichtig raadpleeg bijgevoegd document Temperatuurgrenzen voor opslag Partijnummer pa 8 Bak 5 Houdbaar tot JJJJ MM DD of JJJJ MM al Fabrikant TECHNISCHE ONDERSTEUNING Verenigde Staten Technical Service amp Support BD Diagnostics Diagnostic Systems www bd com ds technical_services bd com 1 800 638 8663 TriPath Imaging Inc 780 Plantat
164. ivo de una reactividad positiva El control negativo universal de IgG de rat n te ido con la prueba SurePath con ProEx no debe tener n cleos de tinci n marrones y debe mostrar tinci n s lo a partir del colorante de contraste hematoxilina 13 14 12 3 La puntuaci n de los portaobjetos es un proceso de 4 pasos Paso 1 Es adecuada la muestra El Sistema Bethesda TBS de informaci n de citolog a cervical 2 2 edici n establece lo siguiente Una preparaci n adecuada basada en l quidos debe tener un m nimo estimado de al menos 5000 c lulas escamosas debidamente conservadas y visualizadas Los mismos criterios se deben aplicar a los portaobjetos SurePath con ProEx Sin embargo al igual que con la preparaci n de Papanicolaou rutinaria cualquier muestra con c lulas an malas que presentan una reacci n molecular positiva es por definici n satisfactoria para su evaluaci n Si la respuesta a este paso es s contin e con el siguiente paso si la respuesta es no el resultado es No satisfactorio para la evaluaci n Paso 2 Existe tinci n marr n de intensa a moderada en las c lulas epiteliales Para contestar s a este paso busque tinci n marr n que se vea f cilmente Si s lo se ve una cantidad apenas perceptible o de tono ros ceo no es suficiente para garantizar una interpretaci n positiva Si no se ve ninguna tinci n nuclear marr n el resultado se notifica como Negativo
165. lear castanha uma c lula escamosa ou glandular Se a resposta for sim prosseguir para o pr ximo passo Se a resposta for n o tal constitui um resultado de an lise Negativo Passo 4 A c lula gt c lula escamosa at pica ou c lula glandular at pica Utilizar os mesmos crit rios morfol gicos descritos em The Bethesda System for Reporting Cervical Cytology 2 Ed para determinar se a c lula escamosa que cont m o n cleo castanho gt ASC c lulas escamosas at picas Se a c lula for considerada gt ou gt isso significa que o resultado da an lise Positivo Isto inclui c lulas ASC US ASC H LSIL HSIL e cancer genas Se a c lula for glandular em termos de aspecto aplicam se os crit rios TBS para determinar se a c lula gt c lulas glandulares at picas Isto inclui AGC endocervical AGC endometrial AIS e adenocarcinoma Se a c lula em quest o for consistente com um caso de NILM negativo quanto a les o ou malignidade intraepitelial o resultado da an lise Negativo BIBLIOGRAFIA Wright TC Schiffman M Solomn D Cox JT Garcia F Goldie S Hatch K Noller KL Roach N Runowicz and Saslow D Interim Guidance for the Use of Human Papillomavirus DNA Testing as an Adjunct to Cervical Cytology for Screening Obstet Gynecol 2004 102 304 309 Ishimi Y Okayasu Kato Kwon H Kimura H Yamada and Song 5 Enhanced expression of MCM proteins in cancer
166. lls n r k rnorna i de unders kta cellerna f rgas bruna Ett referensgalleri av potentiellt positiva objektglas kan skapas med hj lp av automatisk avbildningsutrustning Galleriet kan d refter granskas f r att fastst lla ett positivt eller negativt resultat SurePath med ProEx immunocytokemiskt test r tillampligt f r b de manuell och automatiskt f rgning REAGENSER SOM TILLHANDAH LLS F ljande material ing r och r cker till 75 tunnskiktspreparat Vial nr Beskrivning 4 Peroxidasblock Buffrad v tesuperoxid ta plus stabiliseringsmedel och egna 2 8 komponenter Proteinblock Renat kasein plus egen kombination av proteiner i modifierat PBS med konserveringsmedel och ytaktivt mne Antikroppscocktail Monoklonal antikroppscocktail som levereras i en TRIS buffrad l sning med Tween 20 pH 7 4 klar att anv ndas Inneh ller stabiliserande proteiner och antimikrobiellt medel Musprob Binder till musmonoklonala 2 8 antikroppar Polymerreagens Polymer konjugerat 3b med pepparrotsperoxidas som binder till 2 8 musprobreagens DAB buffertsubstrat Substratbuffert 4a som anv nds vid preparation av DAB 2 8 kromogen 4b DAB 3 3 diaminobezidinkromogenl sning 2 8 Hematoxylin Vattenbaserad Mayers hematoxylin 1355308 Bl f rgande medel Trisbuffrad 6 koksaltl sning pH 7 4 med Tween 20 och 0 09 NaN 1b 2 8 C 2 8 C 3a 15 30 MAT
167. lte las directrices de control de calidad Quality Assurance for Immunocytochemistry del Clinical and Laboratory Standards Institute Instituto de Normas Cl nicas y de Laboratorio 11 2 El control celular SureDetect est disponible como control positivo a trav s de TriPath Imaging Inc Cada vial contiene una l nea celular de c ncer cervical que se procesa de forma similar a las muestras cl nicas Se puede utilizar un control negativo universal de IgG de rat n como control negativo Se debe incluir un portaobjetos de control negativo y positivo en cada procedimiento de tinci n Los resultados de tinci n se deben utilizar como una indicaci n de la validez del proceso de la tinci n INTERPRETACI N DE LA TINCI N 12 1 Muestras de control y de la paciente Los portaobjetos con tinci n deber n ser evaluados por un citot cnico o un pat logo con un microscopio ptico Las c lulas se pueden analizar de forma manual o se pueden almacenar en una galer a de im genes electr nica procedente del microscopio ptico 12 2 Portaobjetos de control Los portaobjetos de control negativo y positivo se deben examinar antes de revisar las muestras de la paciente para determinar que todos los reactivos han funcionado correctamente La presencia de un producto de reacci n marr n 3 3 diaminobencidina tetraclorhidrato DAB en los n cleos del portaobjetos de control de c lulas SiHa te ido con la prueba SurePath con ProEx es indicat
168. m nositokimyasal boyama prosed r n tamamlamak i in gerekli saptama ve kar boyama reaktifleri i erir Numunenin tescilli bir fare antikor kokteyli ile enk basyonunun ard ndan benzersiz kullan ma haz r enzime ba l bir antikor kromojen sistemi kullan larak bir pozitif test g stergesi olan se ici monoklonal antikor ba lama g r nt lenir Enzim reaktifi dekstran polimer omurgas na ba l sekonder bir ke i anti fare karaturp peroksidaz konjugat d r Spesifik bir kromojen eklenmesi antijen antikor ba lanma b lgelerinde lokalize edilen g r n r bir kromojenik r n n olu umuna yol a ar Numuneye daha sonra hematoksilin ile kar boyama yap l r mavilestirici bir ajan uygulan r ve slayt lamele yerle tirilir Sonu lar k mikroskobu alt nda yorumlan r lgilenilen h crelerin ekirde i kahverengi boyand nda y ksek dereceli servikal hastal g steren pozitif bir sonu elde edilmi olur Otomatik g r nt leme ekipman n n kullan m yla potansiyel olarak pozitif slaytlar n bir referans galerisi olu turulabilir Daha sonra bu galeri g zden ge irilerek pozitif veya negatif bir sonu belirlenebilir SurePath ve Immunocytochemical Test mm nositokimyasal Test hem manuel hem de otomatik boyama i lemlerine uygundur SA LANAN REAKT FLER 75 ince katmanl preparat i in yeterli olan u malzemeler bulunur Flakon No Aciklama 4 Peroksidaz Blok Ta
169. m H 0 corrente durante minutos 9 7 6 Colocar as l minas na c mara h mida preparada cheia de gazes ou folhas de papel absorvente embebidas em gua 9 7 7 Submeter as l minas ao procedimento de Bluing aplicando nas mesmas 200 uL de agente de Bluing frasco 6 durante 1 minuto 10 segundos 9 7 8 Repetir a lavagem em agua corrente durante 1 minuto 9 8 Montagem 9 8 1 Imergir as l minas em etanol a 95 durante 1 minuto ou 25 vezes 9 8 2 Imergir as l minas em lcool absoluto 4 banhos 1 minuto cada ou 25 vezes 9 8 3 Limpar com xilol 3 banhos 1 minuto cada ou 25 imers es 9 8 4 Cobrir com meios de montagem permanentes n o aquosos utilizando lamelas de vidro ESTABILIDADE 10 1 Quando conservados s temperaturas recomendadas os frascos de reagente fechados permanecem est veis at data indicada no frasco 10 2 Uma vez aberto o frasco os reagentes permanecem est veis durante trinta dias quando conservados s temperaturas recomendadas CONTROLO DE QUALIDADE 11 1 A variabilidade nos resultados deriva frequentemente de diferen as no manuseamento das amostras que se desviam dos procedimentos de teste recomendados Consultar as directrizes de controlo de qualidade do Clinical and Laboratory Standards Institute Quality Assurance for Immunocytochemistry para obter mais informa es O controlo celular SureDetect SiHa encontra se dispon vel como um controlo positivo da TriPath Imaging Inc
170. maar niet langer dan 72 uur voorafgaand aan immunocytochemie in de voorbehandelingsbuffer blijven Laat de objectglaasjes tijdens de procedure niet uitdrogen Objectglaasjes die tijdens de procedure hebben kunnen uitdrogen kunnen meer achtergrondkleuring vertonen 3 3 diaminobenzidine DAB is geclassificeerd als een verdacht carcinogeen met het potenti le risico dat onomkeerbare effecten worden geproduceerd Vermijd lichamelijk contact en langdurige of herhaalde blootstelling Een beschermkap tegen chemische gassen wordt ten zeerste aanbevolen Laat het niet in de ogen op de huid of op kleding komen Handen grondig wassen na hanteren van de materialen DAB werkoplossing dient te worden bereid volgens de bijsluiter in de verpakking Sommige reagentia in deze kit bevatten natriumazide een chemische stof die in zuivere vorm uiterst giftig is Natriumazide kan dodelijk zijn als het wordt ingeslikt of geabsorbeerd via de huid Deze reagentia zijn schadelijk bij inademing Deze reagentia zijn gevaarlijke vaste stoffen Veroorzaakt irritatie aan huid ogen en luchtwegen Tast het centrale zenuwstelsel nieren en cardiovasculaire systeem aan Hoewel natriumazide in productconcentraties niet wordt geclassificeerd als gevaarlijk kan het toch reageren met loden en koperen leidingen waarbij uiterst explosieve metaalaziden worden gevormd Bij het afvoeren naspoelen met ruime hoeveelheden water om ophoping van aziden in de leidingen te voorkomen
171. matige tot intense bruine nucleaire kleuring in de epitheelcellen Om deze stap met Ja te kunnen beantwoorden kijkt u naar bruine kleuring die gemakkelijk gevisualiseerd wordt Als slechts een kleine hoeveelheid of glimpje bruin te zien is dan is dit niet voldoende om een positieve uitslag te garanderen Als er geen bruine nucleaire kleuring is te zien is het resultaat Negatief Als er duidelijke bruine kleuring wordt gevisualiseerd gaat u verder naar de volgende stap Stap 3 Is de cel met nucleaire bruine kleuring een plaveiselcel of glandulaire cel Als het antwoord Ja is gaat u verder naar de volgende stap Als het antwoord Nee is is het testresultaat Negatief Stap 4 Is de cel een 2 ASC atypische plaveiselcel of AGC atypische glandulaire cel Gebruik dezelfde morfologische criteria als omschreven in The Bethesda System for Reporting Cervical Cytology 2 uitgave om te bepalen of de plaveiselcel met de bruine nucleus een gt ASC atypische plaveiselcel is Als de cel wordt beschouwd als gt ASC of gt AGC dan is het testresultaat Positief Dit is met inbegrip van ASC US ASC H LSIL HSIL en kanker Als de cel een glandulaire cel is zijn de TBS criteria voor de bepaling of een gt AGC atypische glandulaire cel is van toepassing Dit is met inbegrip van endocervicale AGC endometrium AGC AIS en adenocarcinoom Als de cel in kwestie consistent is met NILM negatief voor intra epitheliale laesie of malign
172. matoxyline 12 3 Score des lames l aide d un processus 4 tapes tape 1 L chantillon est il ad quat Le Syst me Bethesda TBS de rapport cytologique cervical 2nd Ed pr cise Une pr paration liquide ad quate doit pr senter un minimum d au moins 5000 cellules pith liales pavimenteuses bien visualis es bien conserv es Le m me crit re doit s appliquer aux lames SurePath avec ProEx Cependant comme dans le cas des pr parations Pap de routine tout chantillon pr sentant des cellules anormales c est dire qui montre une r action mol culaire positive est par d finition satisfaisant pour l valuation Si la r ponse lors de cette tape est oui passer l tape suivante si la r ponse est non le r sultat est Non satisfaisant pour l valuation tape 2 Est ce qu il existe une coloration nucl aire marron mod r e intense dans les cellules pith liales Pour r pondre oui cette tape rechercher une coloration marron facilement observ e Si la coloration marron n est pr sente qu l tat de trace ou d ombre cela n est pas suffisant pour rendre un r sultat positif Si aucune coloration nucl aire marron n est observ e le r sultat du test est N gatif Si une coloration marron ad quate est observ e passer l tape suivante 13 14 tape 3 Est ce que la cellule qui pr sente une coloration nucl aire marron est une cellule
173. mazid mit Blei oder Kupferrohren reagieren und hochexplosive Metallazide bilden Beim Entsorgen stets mit viel Wasser nachsp len um Ansammlungen von Aziden in den Leitungsrohren zu verhindern 2013 TriPath Imaging Inc All rights reserved 779 05848 10 08 2013 12 7 6 7 7 7 8 7 9 7 10 7 11 7 12 7 13 7 14 7 15 H matoxylin und Bl uungsmittel Das Verschlucken dieser Reagenzien ist gesundheitssch dlich H matoxylin und Bl uungsmittel reizen Augen Haut und Atmungsorgane Mit Proben und allen Materialien die damit in Ber hrung gekommen sind ist so umzugehen als k nnten sie Krankheiten bertragen Bei der Entsorgung sind angemessene VorsichtsmaBnahmen zu beachten Reagenzien niemals mit dem Mund pipettieren und Kontakt der Reagenzien und Proben mit Haut und Schleimhaut vermeiden Falls es zu einem Kontakt der Reagenzien mit empfindlichen Bereichen gekommen ist mit reichlich Wasser absp len Die mikrobielle Kontamination der Reagenzien muss so gering wie m glich gehalten werden um unspezifische F rbungen zu verhindern Andere als die angegebenen Inkubationszeiten temperaturen bzw verfahren k nnen zu fehlerhaften Ergebnissen f hren Die Reagenzien wurden f r eine optimale Leistung verd nnt Eine weitere 92 Verd nnung kann den Verlust der Antigenf rbung zur Folge haben Kitkomponenten sind chargenspezifisch und d rfen nicht durch Kitkomponenten mit anderen Herstellungsch
174. mento durante no minimo 1 hora mas mais de 72 horas antes do procedimento de imuno citoquimica 7 3 permitir que as l minas nenhum momento durante procedimento Caso se permita que as l minas sequem durante o procedimento tal resultar num aumento da colorac o de fundo 7 4 A 3 3 diaminobenzidina DAB classificada como um suposto carcinog nico que apresenta o potencial risco de provocar efeitos irrevers veis Evitar o contacto f sico e exposi o repetida ou prolongada mesma altamente recomendada utiliza o de uma c mpanula de fumos qu micos N o permitir que entre em contacto com os olhos pele ou vestu rio Lavar bem as m os ap s o manuseamento A solu o de trabalho de DAB dever ser preparada de acordo com o folheto informativo 7 5 Alguns reagentes deste kit cont m de s dio NaNs um produto qu mico altamente t xico na forma pura A azida de s dio pode ser fatal quando ingerida ou absorvida por via cut nea Estes reagentes s o nocivos quando inalados Estes reagentes s o s lidos perigosos Provoca irritag o na pele nos olhos e no tracto respirat rio Afecta o sistema nervoso central rins e sistema cardiovascular Embora n o seja classificada como perigosa em situa es de concentra o do produto as acumula es de azida de s dio podem reagir com as canaliza es de chumbo e de cobre formando azidas met licas altamente explosivas Ao elim
175. mmer F r in vitro diagnostik Se bruksanvisningen Inneh ller 75 tester F rsiktigt Se medf ljande dokumentation Begr nsningar f r f rvaringstemperaturen Batchkod Anv nd senast AAA A MM DD eller Tillverkare E ch gt 48 8 TEKNISK INFORMATION USA Technical Service amp Support BD Diagnostics Diagnostic Systems www bd com ds technical_services bd com 1 800 638 8663 TriPath Imaging Inc 780 Plantation Drive Burlington NC 27215 USA Benex Limited Rineanna House Shannon Free Zone Shannon County Clare Ireland CE Utvecklat med teknik fran Millennium Pharmaceuticals Inc JINN MILLENNIUM INA och MILLENNIUM r varum rken som tillh r Millennium Pharmaceuticals Inc Millennium Pharmaceuticals Inc 40 Landsdowne Street Cambridge MA 02139 USA www millennium com Detekteringsreagenser levereras av g pr a BioCare Medical 2940 Camino Diablo Suite 300 Walnut Creek CA 94596 SurePath r en produkt och ett registrerat varum rke som tillh r TriPath Imaging Inc ProEx SureDetect PrepStain PrepMate r produkter och varum rken som tillh r TriPath Imaging Inc 39 2013 TriPath Imaging Inc All rights reserved 779 05848 10 08 2013 12 SUREPATH 5 490500 with ProEx C Immunocytochemical Test 490501 V7 75 005 11000 12 005 11000 13
176. mponlu hidrojen la peroksit arti stabilizat r ve tescilli bilesenler Protein Blok Saflastirilmis kazein arti 1b tescilli protein kombinasyonu koruyucu ve y zey aktif madde i eren degistirilmis PBS i inde Antikor Kokteyli Tween 20 pH 7 4 igeren TRIS tamponlu zelti iginde 2 saglanan kullanima hazir monoklonal antikor kokteyli Stabilize edici proteinler ve antimikrobiyal ajan igerir Fare Probu Fare monoklonal antikorlarina ba lanir 278 0 Polimer Reaktifi Fare Prob Reaktifine 3b baglanan karaturp peroksidaz ile konj ge 2 8 polimer DAB Tampon Substrati DAB 4a kromojeninin preparatinda kullanilan 2 8 C substrat tamponu DAB 3 3 diaminobenzidin kromojen a zeltisi SERE 5 Hematoksilin Su bazli Mayer 15 Hematoksilini 30 C 6 Mavilestirici Ajan Tween 20 ve 0 09 15 NaN ile Tris tamponlu salin pH 7 4 30 C GEREKL FAKAT SA LANMAMI MALZEMELER Emici Bezler SureDetect SiHa Cell Line H cre Dizisi REF 005 11012 10 TriPath Imaging Inc Deiyonize veya Distile Su Etanol 95 ve 100 Cam Lameller Eldiven Nem Haznesi I k Mikroskobu 10x 20x iste e ba l 40x objektif Sabitleme Ortam Pipetler ve Pipet U lar 201 200 ve 1000 hacim uygulayabilen SureDetect Slide Preparation Buffer Slayt Haz rlama Tamponu 10X REF 090 11008 10 TriPath Imaging Inc n lem Tamponu Boyama Kavanozlar veya Banyola
177. n Abweichungen vom beschriebenen Vorgehen k nnen die Ergebnisse beeintr chtigen Ansetzen der Reagenzien 8 2 1 Folgende Reagenzien vor der F rbung ansetzen 8 2 2 Tris gepufferte Kochsalzl sung mit 0 05 Tween 20 TBST 8 2 2 1 TBS gem den Anweisungen des Herstellers ansetzen 8 2 2 2 Falls im TBS noch nicht vorhanden Tween 20 bis zu einer Endkonzentration von 0 05 zusetzen 8 2 3 Substratchromogenl sung DAB Volumen ausreichend f r 5 Objekttr ger 8 2 3 1 1 ml DAB Substratpuffer Gef 4a in ein Testr hrchen geben 8 2 3 2 Einen Tropfen 20 30 ul DAB Chromogen Gef 4b zugeben Gr ndlich mischen und mit einer Pipette auf die Objekttr ger aufbringen 8 2 3 3 Substratchromogenl sung t glich frisch ansetzen 8 2 3 4 Ein in der L sung eventuell auftretendes Pr zipitat beeintr chtigt die F rbung nicht 9 3 9 5 9 F RBEPROTOKOLL bei Raumtemperatur durchf hren 20 25 C 9 1 Verfahrenshinweise zu F rbung 9 1 1 Vor der Verwendung diese Anweisungen sorgf ltig lesen und sich mit allen Komponenten vertraut machen siehe VorsichtsmaBnahmen 9 1 2 Alle Reagenzien vor der Immunf rbung Raumtemperatur 20 25 C annehmen lassen 9 1 3 Sofern nicht anders angegeben alle Inkubationen ebenfalls bei Raumtemperatur durchf hren 9 1 4 Die Objekttr ger w hrend des F rbeverfahrens nicht austrocknen lassen Eingetrocknete Zellpr parate k nnen eine erh hte unspezifische F rb
178. n area 9 5 4 Incubate 30 minutes at room temperature 9 5 5 Rinse each slide individually with TBST using a wash bottle do not focus the flow directly on the cell deposition area Load slides into a slide rack 9 5 6 Rinse slides in TBST 3 changes 2 minutes each Detection Chemistry 9 6 1 Tap off excess buffer 9 6 2 Load slides into prepared humidity chamber filled with water moistened paper towels or gauze 9 6 3 Apply 200uL Mouse Probe Reagent to completely cover cell deposition area 9 6 4 Incubate 20 minutes 1 minute 9 6 5 Rinse slides in TBST 3 changes 2 minutes each 9 6 6 off excess buffer 9 6 7 Load slides into prepared humidity chamber filled with water moistened paper towels or gauze 9 6 8 Apply 200 uL of Polymer Reagent vial 3b to cover cell deposition area 9 6 9 Incubate for 20 minutes 1 minute 9 6 10 Rinse slides in TBST bath 3 changes 2 minutes each 9 6 11 Tap off excess buffer 9 6 12 Load the slides into the prepared humidity chamber filled with water moistened paper towels or gauze 9 6 13 Apply 200uL of Substrate Chromogen solution DAB completely cover cell deposition area 9 6 14 Incubate for 5 minutes 1 minute 9 6 15 Rinse slides for 5 minutes in deionized H20 Counterstain 9 7 1 Rinse slides in TBST 1 change for 2 minutes 9 7 2 Load slides into prepared humidity chamber filled with water moistened paper towels or gauze
179. nado acrescido de 2 8 C estabilizador e de componentes patenteados Bloqueio de proteinas Caseina purificada acrescida de combinac o patenteada de prote nas no PBS modificado com conservante e surfactante Cocktail de anticorpos Cocktail de anticorpos monoclonais pronto a utilizar 2 fornecido na solug o tamp o TRIS com 2 8 Tween 20 pH 7 4 Cont m prote nas estabilizadoras e agente antimicrobiano Sonda de ratinho Liga se a anticorpos monoclonais de ratinho Reagente polim rico Polimero conjugado 3b com peroxidase de r bano que se liga ao 2 8 reagente de de ratinho Substrato de DAB 4 substrato utilizado preparag o do 2 8 cromog nio DAB DAB Solu o de cromog nio de 3 3 1b 2 8 C 3a 2 8 C diaminobenzidina 28T Hematoxilina Hematoxilina de Mayer de ano 5 base aquosa 128056 Agente de Bluing Soro fisiol gico 6 tamponado Tris pH 7 4 com Tween 20 e 15 30 0 09 MATERIAIS REAGENTES NECESS RIOS MAS FORNECIDOS Toalhetes absorventes Linha celular SureDetect SiHa REF 005 11012 10 TriPath Imaging Inc gua desionizada ou destilada Etanol 95 e 100 Lamelas de vidro Luvas C mara h mida Microsc pio ptico objectivas de 10x 20x opcional 40x Meio de montagem Pipetas e pontas de pipeta com capacidade para administrar volumes de 2
180. ncer cervical qui est trait de la m me mani re que les chantillons cliniques Un contr le n gatif universel constitu d IgG de souris peut tre utilis en tant que contr le n gatif Une lame de contr le positive et n gative doit tre incluse dans toutes les proc dures de coloration Les r sultats de la coloration doivent tre utilis s en tant qu indication de la validit de la proc dure de coloration INTERPR TATION DE LA COLORATION 12 1 chantillons de patient et de contr le Un cytologiste ou un pathologiste doit valuer les lames color es l aide d un microscope optique Les cellules peuvent tre examin es manuellement ou conserv es dans une galerie d images lectroniques provenant d un microscope optique 12 2 Lames de contr le Les lames de contr le positive et n gative doivent tre examin es avant les chantillons de patient pour s assurer que tous les r actifs ont fonctionn correctement La pr sence d un produit de r action marron t trahydrochlorure de 3 3 diaminobenzidine DAB dans les noyaux des lames de cellules de contr le SiHa color es avec le test SurePath avec ProEx est indicative d une r activit positive La lame de contr le n gatif universel constitu d IgG de souris color e avec le test SurePath avec ProEx ne doit pas pr senter de noyaux color s en marron et ne doit pr senter comme coloration que celle provenant de la coloration de contraste par l h
181. ncer drugs used for cancer therapy Decreased expression of TOP2A is a predominant mechanism of resistance to several chemotherapeutic agents A significant WARNINGS variation in the range of expression of this protein has been noted in many different tumors TOP2A is predominant in proliferating cells and is modified M phase by phosphorylation at specific sites which is critical for mitotic chromosome condensation and segregation Chloral hydrate ProEx Antibody Cocktail contains mouse monoclonal anti MCM2 and anti TOP2A Risk phrases purified from tissue culture supernatant and diluted in buffered saline solution containing 22 Harmiul if swallowed protein stabilizers and 0 09 sodium azide Safety phrases 23 Do not breathe gas fumes vapour spray PRINCIPLES OF PROCEDURE A 25 Avoid contact with eyes The SurePath with ProEx Immunocytochemical Test kit contains an antibody cocktail 36 Wear suitable e clothing detection and counterstain reagents necessary to complete a three step manual or Xn Harmful 45 In case of accident or if you feel unwell seek automated immunocytochemical staining procedure for routinely prepared thinlayer cervical specimens Following incubation of the sample with a proprietary mouse antibody cocktail selective monoclonal antibody binding indicative of a positive test is visualized using a unique ready to use enzyme linked antibody chromogen system The enzyme reagent isa secondary goat anti mouse
182. niker oder Pathologen mit einem Lichtmikroskop auszuwerten Die Zellen k nnen manuell berpr ft oder in einer mit einem Lichtmikroskop generierten elektronischen Referenz Bildkatalog abgespeichert werden 12 2 Kontrollobjekttr ger Zur Best tigung des korrekten Funktionierens aller Reagenzien die Positiv bzw Negativkontrollen vor den Patientenproben auswerten Ein braunes Reaktionsendprodukt 3 3 Diaminobenzidin Tetrahydrochlorid DAB in den Zellkernen der mit dem SurePath mit ProEx Test gefarbten SiHa Kontrollzelllinien zeigt die positive Reaktivitat an Der mit SurePath mit ProEx C Test gef rbte Objekttrager mit der universellen Maus lgG Negativkontrolle darf keine Braunf rbung der Zellkerne sondern nur eine F rbung durch die H matoxylin Gegenf rbung aufweisen 12 3 Die Auswertung der Objekttr ger ist ein Prozess in vier Schritten Schritt 1 Ist die Probe geeignet Laut dem The Bethesda System TBS for Reporting Cervical Cytology 2nd Ed sollte ein geeignetes Fl ssigkeitszytologie Pr parat mindestens etwa 5000 gut dargestellte gut erhaltene Plattenepithelzellen aufweisen Dieses Kriterium ist auch auf die Objekttr ger beim SurePath mit ProEx C Verfahren anzuwenden Allerdings eignet sich wie bei routinem igen Pap Abstrichen f r die Auswertung definitionem jede abnormale Zellen aufweisende Probe bei der eine positive molekulare Reaktion auftritt Kann die Frage bei diesem Schritt mi
183. o de validade impresso na embalagem O utilizador dever validar as condig es reais caso os reagentes sejam conservados noutras condi es que nao as especificadas no folheto informativo inclu do na embalagem N o existem quaisquer sinais vis veis que indiquem a degradac o deste produto Por conseguinte devem processar se simultaneamente controlos positivos e negativos conjuntamente com as amostras das doentes Se se observar uma colora o imprevista que nao possa ser explicada pelas varia es dos procedimentos laboratoriais ou houver suspeita de uma anomalia no kit de an lise SurePath with ProEx contactar a Assist ncia T cnica da TriPath Imaging 9 3 Usar equipamento de protec o pessoal adequado para evitar o contacto do reagente com a pele e os olhos Consultar a Ficha de Dados de do Material MSDS para obter informa es adicionais A an lise SurePath with ProEx destina se a ser utilizada em amostras de citologia do colo do tero colhidas em SurePath Preservative Fluid A compatibilidade com prepara es convencionais e de uma nica camada que nao as da SurePath ainda n o foi avaliada INSTRUGOES DE UTILIZA O 8 1 8 2 Prepara o das amostras 8 1 1 Consultar o Manual do Utilizador do SurePath PrepStain System para obter as instru es para a prepara o de l minas provenientes de 9 4 amostras residuais de citologia do colo do tero SurePath Ad
184. oll finns tillg nglig som en positiv kontroll fran TriPath Imaging Inc Varje inneh ller en cervikal cancercellinje som bearbetas p samma s tt som de kliniska proverna En universell IgG negativ kontroll fran mus kan anv ndas som negativ kontroll Ett positivt och ett negativt kontrollobjektglas ska ing i varje f rgningsprocedur F rgningsresultaten ska anv nds som en indikation validiteten f r f rgningsk rningen TOLKNING AV F RGNINGEN 12 1 Patient och kontrollprover En cytoanalystekniker eller patolog b r utv rdera de f rgade objektglasen med ett ljusmikroskop Cellerna kan granskas manuellt eller sparas ett elektroniskt bildgalleri som h rletts fran ett Ijusmikroskop 12 2 Kontrollobjektglas De positiva och negativa kontrollobjektglasen ska unders kas f re granskningen av patientproverna f r att s kerst lla att alla reagenser fungerade korrekt F rekomst av en brun reaktionsprodukt 3 3 diaminobenzidintetrahydroklorid DAB i k rnan av SiHa cellkontrollobjektglas som f rgats med SurePath med ProEx C test anger positiv reaktivitet Den universella IgG negativa muskontrollobjektglaset som f rgats med SurePath with ProEx C test ska inte ha brunf rgad k rna och ska endast ha fargning fran hematoxylinkontrollf rgen 12 3 Po ngbed mningen av objektglas ar en process 4 steg Steg 1 provet tillr ckligt Bethesda System TBS for Reporting Cervical Cytology 2nd Ed fast
185. on salviette o garze inumidite con acqua 9 5 3 Applicare 200 uL di Cocktail Ab ProEx flacone 2 coprendo completamente l area di deposito delle cellule 9 5 4 Incubare per 30 minuti a temperatura ambiente 9 5 5 Sciacquare ciascun vetrino singolarmente con TBST usando una spruzzetta non indirizzare il flusso direttamente sull area di deposito delle cellule Caricare i vetrini in un rack porta vetrini 9 5 6 Sciacquare i vetrini TBST 3 cambi 2 minuti ciascuno Soluzioni di rilevamento 9 6 1 Scuotere il vetrino per eliminare il tampone in eccesso 9 6 2 Porre i vetrini in una camera umida precedentemente preparata riempita con salviette o garze inumidite con acqua 9 6 3 Applicare 200 uL di reagente probe di topo flacone 3a coprendo completamente l area di deposito delle cellule 9 6 4 Incubare per 20 minuti 1 minuto 9 6 5 Sciacquare i vetrini in TBST 3 cambi 2 minuti ciascuno 9 6 6 Scuotere il vetrino per eliminare il tampone in eccesso 9 6 7 Porre i vetrini in una camera umida precedentemente preparata riempita con salviette o garze inumidite con acqua 9 6 8 Applicare 200 uL di reagente polimero flacone 3b coprendo l area di deposito delle cellule 9 6 9 Incubare per 20 minuti 1 minuto 9 6 10 Sciacquare i vetrini in bagno TBST 3 cambi 2 minuti ciascuno 9 6 11 Scuotere il vetrino per eliminare il tampone in eccesso 9 6 12 i vetrini in una camera umida precedentemente pr
186. ont 9 6 susceptibles d affecter d favorablement les r sultats Pr paration des r actifs 8 2 1 Pr parer les r actifs suivants avant la coloration 8 2 2 Solution saline tamponn e de Tris avec du Tween 20 0 05 TBST 8 2 2 1 Pr parer le TBS conform ment aux sp cifications du fabricant 8 2 2 2 S il n est pas d j pr sent dans le TBS ajouter du Tween 20 pour obtenir une concentration finale de 0 05 8 2 3 Solution substrat chromog ne DAB volume suffisant pour cinq lames 8 2 3 1 Transf rer 1 ml de tampon substrat DAB flacon 4a dans un tube analyse 9 2 9 3 9 5 8 2 3 2 Ajouter une goutte 20 30 ul de chromog ne DAB flacon 4b M langer soigneusement et appliquer sur les lames avec une pipette 8 2 3 3 Pr parer la solution substrat chromog ne quotidiennement 8 2 3 4 La qualit de la coloration n est pas affect e par le pr cipit qui est susceptible de se d velopper dans la solution 9 PROTOCOLE DE COLORATION r alis temp rature ambiante 20 25 9 1 Remarques concernant la proc dure de coloration 9 1 1 Lire soigneusement toutes les instructions et se familiariser avec tous les l ments avant emploi voir Pr cautions 9 1 2 Tous les r actifs doivent s quilibrer temp rature ambiante 20 25 C avant immunocoloration 9 1 3 Toutes les incubations doivent se d rouler temp rature ambiante sauf mention contraire 9 1 4 Ne pas laisser
187. onventionelle og enkeltlagspreeparater af andre typer end SurePath er ikke blevet vurderet 9 4 8 BRUGSANVISNING Di 8 1 Klarg ring af pr parater 8 1 1 Der henvises til brugervejledningen til SurePath PrepStain System for anvisninger vedrgrende klargoring af objektglas fra overskydende SurePath cervikale cytologiske preeparater 8 1 2 Tilsaet 8 ml SurePath konserveringsveeske til den resterende prove i SurePath heetteglasset 2 ml Den fortyndede prove skal behandles i BD PrepMate med anvendelse af standardteknikken og i PrepStain 8 1 3 Pr parerede SurePath objektglas skal v re placeret i SureDetect buffer til preeparering af objektglas s snart de er preepareret der henvises til SureDetect buffer til preeparering af objektglas 10X for anvisninger ti 9 5 preeparering af en objektglas arbejdsoplosning Objektglassene skal blive i bufferen i mindst 1 time men ikke i l ngere end 72 timer inden immuncytokemi 8 1 4 En procedure for epitop retrieval skal anvendes for at opn en optima ydeevne for kittet Denne procedure involverer iblodszetning af preeparerede objektglas i en arbejdsoplgsning med SureDetect buffer til preeparering af objektglas i mindst 1 time ved stuetemperatur efterfulgt af opvarmning af objektglassene i forbehandlingsbuffer til 95 C Objektglassene holdes ved 95 C i 15 minutter hvorefter de kales af ved stuetemperatur i 20 minutter Det anbefales at anvende et kalibreret vandbad eller
188. ooien van een driestaps handmatige of geautomatiseerde immunocytochemische kleuringsprocedure voor op gebruikelijke wijze bereide dunne laag cervicaal materiaal Na incubatie van het monster met een muisantilichaamcocktail met beschermde merknaam wordt een selectieve monoklonale antilichaambinding duidend op een positieve test gevisualiseerd met behulp van een uniek gebruiksklaar enzym gekoppeld antilichaam chromogeensysteem Het enzymreagens is een secundair geit anti muis horseradish peroxidaseconjugaat gekoppeld aan een dextraanpolymeer backbone Toevoeging van een specifiek chromogeen resulteert in de vorming van een zichtbaar chromogeen product in de antigeen antilichaam bindende gebieden Op het monster wordt vervolgens achtergrondkleuring toegepast met hematoxyline er wordt een blauwkleurend agens gebruikt en op het objectglaasje wordt een dekglaasje geplaatst De resultaten worden ge nterpreteerd met behulp van een lichtmicroscoop Een positief resultaat duidt op een hoge graad cervicale aandoening en wordt bereikt wanneer de nucleus in belangrijke cellen bruin kleurt Een referentiegalerij van potentieel positieve objectglaasjes kan worden aangemaakt met behulp van geautomatiseerde beeldvormingsapparatuur De galerij kan vervolgens worden bekeken om een positief of negatief resultaat vast te stellen De SurePath met ProEx immunocytochemische test kan zowel worden gebruikt voor handmatige als voor geautomatiseerde kleuring GEL
189. os 1 hora pero no m s de 72 horas antes de la inmunocitoquimica No deje que los portaobjetos se sequen durante ning n momento del procedimiento Los portaobjetos que se hayan secado durante el procedimiento podrian hacer aumentar el ruido de fondo La 3 3 diaminobencidina DAB est clasificada como una sustancia sospechada de ser cancer gena con el posible riesgo de producir efectos irreversibles Evite el contacto f sico y la exposici n prolongada o repetida a esta sustancia Se recomienda utilizar una campana extractora qu mica Evitar el contacto con los ojos la piel o la ropa L vese bien las manos tras la manipulaci n La soluci n de trabajo DAB se debe preparar de acuerdo con el folleto de la caja Algunos reactivos en este kit contienen azida de sodio NaN un producto qu mico altamente t xico en estado puro La azida de sodio puede ser mortal si se ingiere o es absorbida a trav s de la piel Estos reactivos son nocivos si se inhalan Estos reactivos son s lidos peligrosos Causa irritaci n en la piel ojos y las v as respiratorias Afecta al sistema nervioso central a los ri ones y al sistema cardiovascular Aunque no est n clasificados como peligrosos a las concentraciones del producto las acumulaciones de azida de sodio pueden reaccionar con las tuber as de plomo y cobre y formar azidas de metal altamente explosivas Despu s de desecharla lave con grandes vol menes de agua para evitar la acumulaci n de a
190. oxilina 12 3 classifica o das l minas um processo composto por 4 passos Passo 1 A amostra adequada O Bethesda System TBS for Reporting Cervical Cytology Relat rios de diagn stico citol gico do colo do tero 23 Ed refere Uma adequada prepara o de base l quida dever evidenciar um valor m nimo previsto de pelo menos 5000 c lulas escamosas bem visualizadas bem conservadas O mesmo crit rio dever ser aplicado s l minas SurePath with ProEx Todavia tal como sucede uma prepara o citol gica de rotina qualquer amostra com c lulas anormais que evidencie uma reac o molecular positiva por defini o satisfat ria para avalia o Se a resposta a este passo for sim prosseguir para pr ximo passo se a resposta for n o o resultado Insatisfat rio para avalia o 13 14 Passo 2 Verifica se uma colora o nuclear castanha moderada a intensa nas c lulas epiteliais Para responder sim a este passo necess rio verificar se existe alguma colora o castanha que seja facilmente visualizada Se for detectado apenas um ligeiro vest gio de castanho isto n o suficiente para garantir uma classifica o de positivo Se n o se detectar nenhuma colora o nuclear castanha o resultado relatado como Negativo Se for visualizada uma colora o castanha adequada prosseguir para o pr ximo passo Passo 3 A c lula com uma colora o nuc
191. papirh ndklaeder eller gaze Tils t 200 ul proteinblokering h tteglas 1b s det d kker celledeponeringsarealet Inkuber i 5 minutter 1 minut M IKKE SKYLLES antistofcocktail 9 5 1 9 5 2 9 5 3 9 5 4 9 5 5 9 5 6 Bank overskydende proteinblokering af Placer objektglassene i et forberedt fugtkammer fyldt med vandfugtede papirh ndklaeder eller gaze Tils t 200 ul ProEx Ab Cocktail h tteglas 2 s det d kker celledeponeringsarealet Inkuber i 30 minutter ved stuetemperatur Skyl hvert enkelt objektglas med TBST vha en vaskeflaske ret ikke flowet direkte mod celledeponeringsarealet Seet objektglassene i et objektglasstativ Skyl objektglassene i 3 hold TBST 2 minutter for hvert hold Pavisningskemi 9 6 1 9 6 2 9 6 3 9 6 4 9 6 5 9 6 6 9 6 7 9 6 8 9 6 9 9 6 10 9 6 11 9 6 12 9 6 13 9 6 14 9 6 15 Bank overskydende buffer af Placer objektglassene i et forberedt fugtkammer fyldt med vandfugtede papirhandklzeder eller gaze Tilseet 200 ul museprobereagens heetteglas 3a s det d kker celledeponeringsarealet helt Inkuber i 20 minutter 1 minut Skyl objektglassene i 3 hold TBST 2 minutter for hvert hold Bank overskydende buffer af Placer objektglassene i et forberedt fugtkammer fyldt med vandfugtede papirh ndklaeder eller gaze Tilseet 200 ul polymerreagens heetteglas 3b s det d kke
192. paratiemedia Pipetten en pipettips voor volumeafgifte van 20 ul 200 uL en 1000 ul SureDetect preparaatvoorbereidingsbuffer 10X REF 090 11008 10 TriPath Imaging Inc voorbehandelingbuffer Kleuringflessen of baden Timer met mogelijkheid voor intervallen van 1 60 minuten Tris gebufferde zoutoplossing TBS Tween 20 Universele muis IgG negatieve controle Vortexer Xyleen of xyleenvervangers Stomer waterbad WAARSCHUWINGEN Chloraalhydraat R zinnen 22 Schadelijk bij opname door de mond S zinnen 23 Gas rook damp spuitnevel niet inademen 25 Aanraking met ogen vermijden 36 Geschikte beschermende kleding dragen 45 Bij ongeval of indien men zich onwel voelt onmiddellijk een arts raadplegen indien mogelijk dit etiket tonen 60 Deze stof en of de verpakking als gevaarlijk afval afvoeren Xn Schadelijk 3 3 diaminobenzidine R zinnen 22 Schadelijk bij opname door de mond 40 Carcinogene effecten zijn niet uitgesloten S zinnen 23 Gas rook damp spuitnevel niet inademen 36 37 Geschikte handschoenen en beschermende kleding dragen 60 Deze stof en of de verpakking als gevaarlijk afval afvoeren Xn Schadelijk VOORZORGSMAATREGELEN 7 1 7 2 7 3 7 4 7 5 7 6 Voor in vitrodiagnostiek Voorbereide SurePath objectglaasjes moeten na voorbereiding direct in de voorbehandelingsbuffer worden geplaatst De objectglaasjes moeten ten minste 1 uur
193. pith liale pavimenteuse ou une cellule glandulaire Si la r ponse est oui passer l tape suivante Si la r ponse est non le r sultat du test est N gatif tape 4 Est ce que la cellule gt ASC cellule pith liale pavimenteuse atypique ou AGC cellule glandulaire atypique Utiliser les m mes crit res morphologiques que ceux du Syst me Bethesda TBS de rapport cytologique cervical 2nd Ed pour d terminer si la cellule pith liale pavimenteuse contenant le noyau marron est gt ASC cellule pith liale pavimenteuse atypique Si la cellule est consid r e comme gt ASC ou gt AGC le r sultat du test est alors Positif Ceci inclut les cellules ASC US ASC H LSIL HSIL et les cas de cancer Si la cellule est d apparence glandulaire les crit res du TBS permettant de d terminer qu une cellule est gt cellule glandulaire atypique s appliquent Ceci inclut les cellules AGC endocervicales AGC endom triales AIS et les ad nocarcinomes Si la cellule en question est coh rente avec le NILM n gative pour les l sions intra pith liales ou les atteintes malignes le r sultat du test est N gatif R F RENCES Wright TC Schiffman Solomn D Cox JT Garcia Goldie Hatch Noller KL Roach N Runowicz C and Saslow D Interim Guidance for the Use of Human Papillomavirus DNA Testing as an Adjunct to Cervical Cytology for Screening Obstet Gynecol 2004 102 304 309 Ishimi Y Oka
194. que SurePath avec ProEx est destin l valuation qualitative de l induction aberrante de la phase dans les chantillons cytologiques cervicaux recueillis dans le liquide conservateur SurePath Les r sultats du test apportent des informations compl mentaires aux diagnostics de cytologie cervicale 2 R SUME ET EXPLICATION Les prot ines MCM mini chromosome maintenance jouent r le essentiel dans la r plication de l ADN eucaryote Toutes les prot ines poss dent des motifs ATPase ADN d pendants dans leurs domaines centraux hautement conserv s Les concentrations des prot ines MCM augmentent en g n ral de fagon variable tandis que les cellules normales passent de la phase GO la phase G1 S du cycle cellulaire La topoisom rase alpha TOP2A est une enzyme nucl aire essentielle impliqu e dans la r plication de l ADN et elle constitue la cible de nombreux m dicaments anticanc reux utilis s dans le cadre des th rapeutiques anticanc reuses Une expression diminu e de la TOP2A constitue un m canisme pr dominant de la r sistance de plusieurs agents chimioth rapeutiques Une variation significative de la gamme d expression de cette prot ine a t remarqu e au niveau de nombreuses tumeurs Le TOP2A est pr dominante dans les cellules en cours de prolif ration et elle est modifi e au cours de la phase M par phosphorylation au niveau de sites sp cifiques qui jouent un r le critique dans la condens
195. questo punto la risposta fase successiva se invece la risposta no il risultato Non soddisfacente per la valutazione Fase 2 Appare una colorazione nucleare da moderata a intensa nelle cellule epiteliali Per rispondere s a questa domanda cercare una colorazione marrone ben definita Una colorazione marrone debole o sfumata non sufficiente a garantire un risultato positivo Se non appare alcuna colorazione nucleare marrone il risultato viene considerato Negativo Se appare una corretta colorazione marrone procedere alla fase successiva Fase 3 La cellula con colorazione nucleare marrone una cellula squamosa ghiandolare 13 14 Se la risposta affermativa procedere alla fase successiva Se la risposta negativa si tratta di un risultato Negativo Fase 4 La cellula gt cellula squamosa atipica o AGC cellula ghiandolare atipica Adottare lo stesso criterio morfologico indicato nel Bethesda System for Reporting Cervical Cytology seconda edizione per determinare se la cellula squamosa contenente il nucleo marrone ASC cellula squamosa atipica Se la cellula considerata gt gt AGC si sar ottenuto un risultato Positivo Ci comprende ASC US ASC H LSIL HSIL e cancro Se la cellula ha un aspetto ghiandolare viene applicato il criterio del TBS per determinare se la cellula gt AGC cellula ghiandolare atipica Questo comprende AGC endocervicale AGC endome
196. r Kronometre 1 60 dakika aral klar l ebilen Tris Tamponlu Salin TBS Tween 20 Evrensel Fare IgG Negatif Kontrol Vorteks Kar t r c Ksilen veya Ksilen kameleri Buharlay c su banyosu 6 UYARILAR Kloral hidrat Risk ifadeleri 22 Yutulmas tehlikelidir G venlik ifadeleri 23 Gaz duman buhar spreyi solumay n 25 G zle temas ndan ka n n 36 Uygun koruyucu giysi kullan n 45 Kaza halinde veya kendinizi k t hissetti inizde derhal t bbi yard m isteyin 60 Bu madde ve madde kab tehlikeli madde olarak at lmal d r Xn Tehlikeli 3 3 diaminobenzidin Risk ifadeleri 22 Yutulmas tehlikelidir 40 Karsinojenik etkiye dair k s tl kan t bulunmaktad r G venlik ifadeleri 23 Gaz duman buhar spreyi solumay n 36 37 Uygun koruyucu giysi ve eldivenler kullan n 60 Bu madde ve madde kab tehlikeli madde olarak at lmal d r Xn Harmful 7 NLEMLER 7 1 7 2 7 3 7 4 7 5 7 6 7 7 7 8 n vitro Diyagnostik Kullan m i indir Haz rlanan SurePath slaytlar haz rland ktan sonra en k sa s rede n i lem tamponuna yerle tirilmelidir Slaytlar n i lem tamponunda en az 1 saat kalmal ancak imm nositokimya i lemi ncesinde bu s re 72 saati a mamal d r Prosed r s resince hi bir zaman slaytlar n tamamen kurumas na izin vermeyin Prosed r s ras nda kurumas na izin verilmi sla
197. r celledeponeringsarealet Inkuber i 20 minutter 1 minut Skyl objektglassene i 3 hold TBST bad 2 minutter for hvert hold Bank overskydende buffer af Placer objektglassene i et forberedt fugtkammer fyldt med vandfugtede papirh ndklaeder eller gaze Tils t 200 ul substrat kromogenoplasning DAB s det d kker celledeponeringsarealet helt Inkuber i 5 minutter 1 minut Skyl objektglassene i 5 minutter i demineraliseret H O Kontrastfarvning 9 7 1 9 7 2 9 7 3 Skyl objektglassene i 1 hold TBST 2 minutter for hvert hold Placer objektglassene i et forberedt fugtkammer fyldt med vandfugtede papirh ndklaeder eller gaze Tilseet 200 ul heematoxylinkontrastfarvning h tteglas 5 s det d kker celledeponeringsarealet helt 24 2013 TriPath Imaging Inc All rights reserved 779 05848 10 08 2013 12 10 11 12 13 9 7 4 Inkuberi 1 minut 10 sekunder 9 7 5 Skyl objektglassene i 3 minutter i rindende H20 9 7 6 Placer objektglassene i et forberedt fugtkammer fyldt med vandfugtede papirhandklzeder eller gaze 9 7 7 Foretag blafarvning af objektglassene ved at tils tte 200 ul blafarvningsmiddel heetteglas 6 i 1 minut 10 sekunder 9 7 8 Skyl med rindende vand igen i 1 minut 9 8 Montering 9 8 1 objektglassene i 95 ethanol i 1 minut eller 25 9 8 2 Nedszenk objektglassene i 4 hold ren alkohol 1 minut hver eller 25 9 8 3 R
198. r y componentes propios Inhibidor de proteinas purificada m s combinaci n propia de prote nas en soluci n PBS modificada con conservante y surfactante C ctel de anticuerpos C ctel de anticuerpos monoclonales listo para usar 2 suministrado en soluci n tamponada de TRIS con Tween 20 pH 7 4 Contiene prote nas estabilizantes y un agente antimicrobiano Sonda de rat n Se une a los anticuerpos monoclonales de rat n Reactivo polim rico Pol mero 3b conjugado con peroxidasa de r bano que se une al reactivo sonda de rat n Sustrato de tamp n DAB Tamp n 4a sustrato utilizado en la preparaci n del crom geno DAB DAB 3 3 soluci n cromog nica de 3 3 diaminobencidina Hematoxilina Hematoxilina de Mayer acuosa Agente de coloraci n azul Soluci n 6 salina tamponada de Tris pH 7 4 con Tween 20 y NaN al 0 09 2 8 1b 2a8 C 2a8 C 3a 2a8 C 2a8 C 2a8 C 4b 2a8 C 15 a 30 C 15 a 30 C 5 MATERIALES Y REACTIVOS NECESARIOS PERO NO SUMINISTRADOS Toallitas absorbentes L nea celular SiHa SureDetect REF 005 11012 10 TriPath Imaging Inc Agua desionizada o destilada Etanol 95 100 Tapas de vidrio Guantes C mara h meda Microscopio ptico objetivos 10x 20x opcional 40x Medios de montaje Pipetas y puntas de pipetas capaces de suministrar vol menes de 20uL 200uL 1000uL Tampon de preparaci n de
199. re SUPPORTO TECNICO USA Techni Service amp Support BD Diagnostics Diagnostic Systems www b d com ds technical_services bd com 1 800 638 8663 TriPath Imaging Inc 780 Plantation Drive Burlington NC 27215 USA Limited Rineanna House Shannon Free Zone Shannon County Clare Ireland CE Sviluppato con tecnologia fornita da Millennium Pharmaceuticals Inc INN INR e MILLENNIUM MILLENNIUM sono marchi di fabbrica di Millennium Pharmaceuticals Inc 18 2013 TriPath Imaging Inc All rights reserved 779 05848 10 08 2013 12 Millennium Pharmaceuticals Inc 40 Landsdowne Street Cambridge MA 02139 USA www millennium com Reagenti di rilevamento forniti da BioCare Medical 2940 Camino Diablo Suite 300 Walnut Creek CA 94596 SurePath un prodotto e marchio registrato di TriPath Imaging Inc ProEx SureDetect PrepStain PrepMate sono prodotti e marchi di fabbrica di TriPath Imaging Inc 19 2013 TriPath Imaging Inc All rights reserved 779 05848 10 08 2013 12 SUREPATH with ProEx C Immunocytochemical Test 490500 490501 005 11000 12 005 11000 13 75 BEOOGD GEBRUIK De SurePath met ProEx immunocytochemische test is bedoeld voor de kwalitatieve evaluatie van afwijkende S fase inductie in cervicale cytologiemonsters verzameld in SurePath Preservative Fluid De testresultaten leveren aan
200. resan de la fase GO a la fase G1 S del ciclo celular La topoisomerasa Il alfa TOP2A es una enzima nuclear esencial utilizada en la replicaci n del ADN y es un objetivo para muchos medicamentos que se utilizan en la terapia contra el c ncer La expresi n disminuida de TOP2A es un mecanismo predominante de resistencia a varios agentes quimioterap uticos Se ha observado una variaci n significativa en el intervalo de expresi n de esta prote na en muchos tumores diferentes La TOP2A es predominante en c lulas en proliferaci n y se modifica en la fase por fosforilaci n en puntos espec ficos lo que es de vital importancia para la condensaci n y segregaci n de cromosomas mit ticos El c ctel de anticuerpos ProExTM contiene anticuerpos monoclonales de rat n anti MCM2 y anti TOP2A purificados a partir de sobrenadante de cultivo tisular y diluidos en una soluci n salina tamponada que contiene estabilizadores proteicos y azida de sodio al 0 09 3 PRINCIPIOS DEL PROCEDIMIENTO El kit de pruebas inmunocitoqu micas SurePath con ProEx contiene un c ctel de anticuerpos los reactivos de detecci n y contratinci n necesarios para la realizaci n de un procedimiento de tinci n inmunocitoqu mica autom tico o manual de tres pasos de muestras del cuello uterino de capa fina preparadas de forma rutinaria Despu s de la incubaci n de la muestra con un c ctel de anticuerpos de rat n propio se visualiza la uni n
201. rhindra azidansamling i ledningarna 7 6 Hematoxylin och blafargningsmedel Dessa reagenser r skadliga om de sv ljs Hematoxylin och blafargande medel r irriterande f r gon hud och andningsorgan 7 7 Proverna och alla material som uts tts f r proverna ska hanteras som om de kan verf ra infektion och kasseras med till mpliga f rsiktighets tg rder Pipettera aldrig reagenser med munnen och undvik kontakt med huden och slemhinnor Tv tta rikligt med vatten om reagenserna kommer i kontakt med k nsliga omr den 7 8 Minimera den mikrobiella kontaminationen av reagenser f r att undvika ej specifik f rgning 7 9 Andra inkubationstider temperaturer eller metoder vad som anges ge felaktiga resultat 37 2013 TriPath Imaging Inc All rights reserved 779 05848 10 08 2013 12 7 10 7 11 7 12 7 13 7 14 7 15 Reagenserna har sp tts f r optimal prestanda Ytterligare sp dning kan resultera i utebliven antigenf rgning Kitets komponenter r lotspecifika Byt inte ut mot komponenter med andra lotnummer Lotnumren sitter p f rpackningens etiketter Anv nd inte SurePath med ProEx testkit efter det utg ngsdatum som r st mplat p f rpackningen Anv ndaren m ste validera tillst ndet om reagensen f rvaras under andra f rvaringsvillkor n de som anges p f rpackningsinlagan Det finns inga tydliga tecken som anger att denna produkt har f
202. rlerine g re sapma g steren numune i lemedeki farkl l klardan kaynaklan r Daha fazla bilgi i in Klinik ve Laboratuvar Standartlar Enstit s mm nositokimya i in Kalite G vencesi kalite kontrol standartlar na ba vurun SureDetect SiHa Cell Control H cre Kontrol TriPath Imaging Inc den bir pozitif kontrol olarak temin edilebilir Her flakon klinik numuneler ile benzer ekilde i lemden ge irilen bir servikal kanser h cre dizisi i erir Evrensel fare IgG negatif kontrol negatif kontrol olarak kullan labilir Her boyama prosed r nde bir pozitif ve bir de negatif kontrol slayd na yer verilmelidir Boyama sonu lar boyama al mas n n ge erlili inin bir g stergesi olarak kullan lmal d r BOYAMAYI YORUMLAMA 12 1 12 2 12 3 Hasta ve Kontrol rnekleri Bir sitoteknolog veya patolog boyanm slaytlar k mikroskobu kullanarak de erlendirmelidir H creler manuel olarak g zden ge irilebilir veya k mikroskobundan elde edilmi bir elektronik g r nt galerisinde saklanabilir Kontrol Slaytlar T m reaktiflerin i levini d zg n ekilde yerine getirdi inden emin olmak i in hasta numunelerinin g zden ge irilmesinden nce pozitif ve negatif kontrol slaytlar incelenmelidir SurePath ve ProEx Test ile boyanm SiHA H cre Kontrol slayd n n ekirdeklerinde kahverengi bir reaksiyon r n n n 3 3 diaminobenzidin tetrahidroklor r DAB bulunmas pozi
203. s 9 5 3 Gebruik 200 uL ProEx C antilichaamcocktail flacon 2 om het celafzettingsgebied volledig te bedekken 9 5 4 Incubeer gedurende 30 minuten bij kamertemperatuur 9 5 5 Spoel elke objectglaasje afzonderlijk af met TBST met behulp van een wasfles richt de stroom niet rechtstreeks op het celafzettingsgebied Laad de objectglaasjes in een objectglaasjesrek 9 5 6 Spoel de objectglaasjes in TBST in 3 wisselbeurten van elk 2 minuten Detectiechemie 9 6 1 Tik overmatige buffer af 9 6 2 Laad de objectglaasjes in een voorbereide bevochtigingskamer gevuld met met water bevochtigde keukenrol of gaas 9 6 3 Gebruik 200 uL muisprobe reagens flacon om het celafzettingsgebied volledig te bedekken 9 6 4 Incubeer 20 minuten 1 minuut 9 6 5 Spoel de objectglaasjes in TBST in 3 wisselbeurten van elk 2 minuten 9 6 6 Tik overmatige buffer af 9 6 7 Laad de objectglaasjes in een voorbereide bevochtigingskamer gevuld met met water bevochtigde keukenrol of gaas 9 6 8 Gebruik 200 uL polymeerreagens flacon 3b om het celafzettingsgebied te bedekken 9 6 9 Incubeer gedurende 20 minuten 1 minuut 9 6 10 Spoel de objectglaasjes in TBST in 3 wisselbeurten van elk 2 minuten 9 6 11 Tik overmatige buffer af 9 6 12 Laad de objectglaasjes in de voorbereide bevochtigingskamer gevuld met met water bevochtigde keukenrol of gaas 9 6 13 Gebruik 200 uL substraat chromogeenoplossing DAB om het celafzettings
204. s ASC US ASC H LSIL HSIL and cancer If the is glandular in appearance the TBS criteria for determining if a is gt AGC atypical glandular cells applies This includes endocervical AGC endometrial AGC AIS and adenocarcinoma If the cell in question is consistent with NILM negative for intraepithelial lesion or malignancy this is a Negative test result REFERENCES Wright TC Schiffman Solomn Cox JT Garcia Goldie Hatch Noller KL Roach N Runowicz C and Saslow D Interim Guidance for the Use of Human Papillomavirus DNA Testing as an Adjunct to Cervical Cytology for Screening Obstet Gynecol 2004 102 304 309 Ishimi Y Okayasu Kato Kwon H Kimura H Yamada and Song 5 Enhanced expression of MCM proteins in cancer cells derived from uterine cervix Eur J Biochem 2003 270 1089 1101 Lei M and Tye BK Initiating DNA synthesis from recruiting to activating the MCM Complex J Cell Science 2001 Vol 114 8 1447 1454 Solomon D Nayar R The Bethesda System for Reporting Cervical Cytology Definitions Criteria and Explanatory Notes 2 Edition 2004 Clinical and Laboratory Standards Institute Timothy J O Leary M D Ph D Quality Assurance for Immunocytochemistry Approved Guideline 1999 14 GLOSSARY OF SYMBOLS Catalog number For in vitro diagnostic use Consult instructions for use Contains 75 tests Caution consult accompanying document Stora
205. se G1 S del ciclo cellulare La topoisomerasi Il alpha TOP2A un enzima nucleare strutturale coinvolto nella replicazione del DNA e rappresenta il bersaglio di numerosi farmaci utilizzati nelle terapie anti cancro La diminuzione di espressione di TOP2A indica l induzione di un meccanismo di resistenza a numerosi agenti chemioterapici Una variazione significativa nella gamma di espressione di questa proteina stata osservata in diversi tumori La TOP2A espressa essenzialmente nelle cellule proliferanti e viene modificata nella fase M tramite fosforilazione di siti specifici importante per la condensazione e la segregazione dei cromosomi mitotici Il cocktail di anticorpi ProEx contiene anti MCM2 e anti TOP2A monoclonali di topo purificati da sovranatante di coltura tissutale e diluiti in soluzione salina tamponata contenente stabilizzanti delle proteine e sodio azide allo 0 09 3 PRINCIPI DELLA PROCEDURA Il kit per test immunocitochimico SurePath con ProEx contiene un cocktail di anticorpi reagenti di rilevazione e colorazione di contrasto necessari per l esecuzione di una procedura di colorazione immunocitochimica a tre fasi manuale o automatica di campioni cervicali di routine allestiti con la tecnica dello strato sottile Dopo l incubazione del campione con un cocktail proprietario di anticorpi di topo il legame specifico dell anticorpo monoclonale che indica un test positivo viene visualizzato tramite un sistema di
206. se GO para a fase G1 S do ciclo celular A alfa topoisomerase Il TOP2A uma enzima nuclear essencial envolvida na do ADN sendo um alvo para in meros medicamentos anti cancerigenos utilizados na terap utica contra cancro A express o reduzida da TOP2A constitui um mecanismo predominante de resist ncia a diversos agentes quimioterap uticos Foi observada uma varia o significativa no intervalo de express o desta proteina em diversos tipos de tumores A TOP2A expressa se predominantemente nas c lulas proliferativas e modificada na fase M atrav s de fosforila o em locais espec ficos um processo que fundamental para a condensa o e segrega o do cromossoma mit tico O cocktail de anticorpos ProEx cont m anti MCM2 monoclonal de ratinho e anti TOP2A purificado de sobrenadante de cultura de tecidos e foi dilu do numa solug o salina tamponada que cont m estabilizadores de prote nas e 0 09 de azida de s dio 3 PRINC PIOS DO PROCEDIMENTO O kit da an lise imuno citoqu mica SurePath with ProEx Immunocytochemical Test cont m um cocktail de anticorpos reagentes de detec o e contrastante necess rios para concluir um procedimento de colorag o imuno citoqu mico manual ou autom tico composto de tr s passos destinado a amostras do colo do tero de camada fina preparadas de forma rotineira Ap s a incuba o da amostra com o cocktail de anticorpos de ratinho patenteado visualizad
207. sl r En tillr cklig v tskebaserad beredning ska ha en uppskattad minsta m ngd p minst 5 000 v l visualiserade v l konserverade skivepitelceller Samma kriterier b r galla f r SurePath med ProEx C objektglas Men som vid rutinm ssig cellpreparering ar alla prover med onormala celler som uppvisar en positiv molekyl r reaktion per definition tillfredsstallande f r utvardering Om svaret vid detta steg r ja fortsatter du till steg Om svaret r nej r resultatet Otillfredsst llande f r utv rdering Steg 2 Finns det m ttlig till intensiv brun f rgning av k rnan i epitelcellerna F r att svara ja i detta steg letar du efter brun f rgning som l tt kan visualiseras Om det bara r en blek m ngd eller brun antydan r detta inte tillr ckligt f r att garantera ett positivt svar Om ingen brun f rg syns i k rnan rapporteras resultatet som Negativt Om tillr cklig brun f rgning visualiseras forts tter du till n sta steg Steg 3 r cellen med brun k rnf rning en skivepitelcell eller en glandul r cell Om svaret r ja forts tter du till n sta steg Om svaret r nej r detta ett Negativt testresultat Steg 4 cellen gt ASC atypical squamous cell atypisk skivepitelcell eller AGC atypical glandular cell atypisk glandul rcell Anv nd samma morfologiska kriterier som anges i The Bethesda System for Reporting Cervical Cytology 2nd Ed f r att fasts
208. sluiter moeten de omstandigheden door de gebruiker worden gecontroleerd Er zijn geen duidelijke aanwijzingen voor degradatie van dit product U dient daarom tegelijk met de pati ntmonsters positieve en negatieve controles uit te voeren Als er onverwachte kleuring wordt vastgesteld die niet verklaard kan worden door variaties in de laboratoriumprocedures of als er een probleem met de SurePath met ProEx C testkit wordt vermoed neemt u contact op met de technische ondersteuning van TriPath Imaging Draag de juiste beschermende uitrusting om contact van reagentia met ogen en huid te vermijden Zie het veiligheidsinformatieblad voor verdere informatie De SurePath met ProEx C test is bedoeld voor gebruik met cervicale cytologiemonsters verzameld in SurePath Preservative Fluid Compatibiliteit met andere conventionele en monolayer preparaten dan SurePath is niet vastgesteld 8 INSTRUCTIES VOOR GEBRUIK 8 1 8 2 Voorbereiding van het monster 8 1 1 Raadpleeg de Bedieningshandleiding voor het SurePath PrepStain System voor instructies met betrekking tot de voorbereiding van objectglaasjes van residuale SurePath cervicale cytologiemonsters Voeg 8 mL SurePath Preservative Fluid toe aan het residuale monster in de SurePath flacon ongeveer 2 mL Het verdunde monster dient op de BD PrepMate te worden verwerkt met gebruik van de standaardtechniek en op de PrepStain Voorbereide SurePath objectglaasjes dienen
209. smikroskop Kontrolobjektglas De positive og negative kontrolobjektglas skal unders ges inden gennemgang af patientpraverne for at sikre at alle reagenser fungerede korrekt Forekomst af et brunt reaktionsprodukt 3 3 diaminobenzidintetrahydroklorid DAB i kernerne af SiHa cellekontrol objektglas der er farvet med SurePath med ProEx test tyder pa positiv reaktivitet Objektglasset med universal muse IgG negativ kontrol der er farvet med SurePath med ProEx C test bor ikke have kerner der er farvet brune men ma kun veere farvet af heematoxylinkontrastfarven Bed mmelse af objektglas er en 4 trins proces Trin 1 Er pr paratet fyldestg rende Bethesda systemet TBS til indberetning af cervikal cytologi Reporting Cervical Cytology 2nd Ed oplyser Et fyldestg rende veeskebaseret pr parat skal have en anslaet minimumsmeengde pa mindst 5000 pladeceller der er velbevarede og tydeligt kan De samme kriterier bar gares geeldende for SurePath med ProEx objektglas Men som det er tifeeldet med rutinemaessige pap preeparater er alle preeparater med unormale celler som udviser en positiv molekyleer reaktion pr definition tilfredsstillende til evaluering Fortseet til neeste trin hvis svaret pa dette trin er ja Hvis svaret er nej er resultatet Utilfredsstillende til evaluering Trin 2 Er der moderat til intens brun kernefarvning i epitelcellerne Se efter den brune farvnin
210. ssch dlich VORSICHTSMASSNAHMEN 7 1 7 2 7 3 7 4 7 5 Zur In vitro Diagnostik Pr parierte SurePath Objekttr ger sofort nach dem Pr parieren in den Vorbehandlungspuffer einlegen Die Objekttr ger vor immunzytochemischen F rbungen mindestens eine Stunde aber h chstens 72 Stunden im Vorbehandlungspuffer belassen Objekttr ger w hrend der Verarbeitung nicht austrocknen lassen Bei Objekttr gern die w hrend des Verfahrens ausgetrocknet sind kann eine erh hte Hintergrundf rbung auftreten 3 3 Diaminobenzidin DAB wurde als potenziell karzinogen mit Risiko irreversibler Sch den eingestuft Ber hrung und l nger andauernde oder wiederholte Exposition vermeiden Ein chemischer Dunstabzug wird dringend empfohlen Ber hrung mit Augen Haut und Kleidung vermeiden Nach Verwendung die H nde gr ndlich waschen Die DAB Arbeitsl sung gem den Angaben in der Packungsbeilage ansetzen Einige Reagenzien dieses Kits enthalten Natriumazid NaNs eine in reiner Form u erst giftige Chemikalie Das Verschlucken von Natriumazid oder die Aufnahme durch die Haut kann zum Tode f hren Das Einatmen dieser Reagenzien ist gesundheitssch dlich Es handelt sich dabei um gesundheitssch dliche Feststoffe Sie reizen Haut Augen und Atmungsorgane Sch digen das zentrale Nervensystem die Nieren und das Herz Kreislauf System Auch in den nicht als gef hrlich eingestuften Konzentrationen in diesem Produkt kann Natriu
211. t Ja beantwortet werden mit dem n chsten Schritt fortfahren bei Nein ist das Ergebnis nicht f r eine Auswertung geeignet Schritt 2 Weisen die Epithelzellen eine m ige bis intensive Braunf rbung im Nukleus auf Um diese Frage mit Ja beantworten zu k nnen nach einer deutlich sichtbaren Braunf rbung Ausschau halten Nur eine leichte T nung also ein Hauch von Braun reicht nicht aus um das Ergebnis als positiv zu bewerten Tritt keine nukle re Braunf rbung auf ist das Ergebnis negativ Falls eine angemessene Braunf rbung sichtbar ist mit dem n chsten Schritt fortfahren Schritt 3 Handelt es sich bei der Zelle die die nukle re Braunf rbung aufweist um entweder eine Zelle des Plattenepithels oder eine Dr senzelle 13 14 Kann diese Frage bejaht werden mit dem n chsten Schritt fortfahren Bei Nein ist das Testergebnis negativ Schritt 4 Handelt es sich bei der Zelle um eine 2 ASC atypical squamous cell atypische Plattenepithelzelle oder eine AGC atypical glandular cell atypische Dr senzelle Die im Bethesda System for Reporting Cervical Cytology 2nd Ed angegebenen morphologischen Kriterien zugrundelegen um zu ermitteln ob es sich bei der den einen braunen Zellkern aufweisenden Plattenepithelzellen um gt ASC atypische Plattenepithelzellen handelt Kann die Zelle als gt oder gt klassifiziert werden ist das Testergebnis positiv Diese Zelltypen schlie
212. t lla om skivepitelcellen som innehaller den bruna k rnan r gt ASC Om cellen betraktas som 2ASC eller 2AGC r detta ett Positivt testresultat Denna innefattar ASC US ASC H LSIL HSIL och cancer Om cellen r glandul r till utseendet g ller TBS kriterierna f r best mning av om en cell ar gt AGC Detta innefattar endocervikal AGC endometrial AGC AIS och adenokarcinom Om cellen i r f renlig med NILM negativ f r intraepitelial lesion eller malignitet r detta ett Negativt testresultat REFERENSER Wright TC Schiffman M Solomn D Cox JT Garcia Goldie Hatch Noller KL Roach N Runowicz C and Saslow D Interim Guidance for the Use of Human Papillomavirus DNA Testing as an Adjunct to Cervical Cytology for Screening Obstet Gynecol 2004 102 304 309 Ishimi Y Okayasu Kato Kwon H Kimura H Yamada and Song 5 Enhanced expression of MCM proteins in cancer cells derived from uterine cervix Eur J Biochem 2003 270 1089 1101 Lei M and Tye BK Initiating DNA synthesis from recruiting to activating the MCM Complex J Cell Science 2001 Vol 114 8 1447 1454 Solomon D Nayar R The Bethesda System for Reporting Cervical Cytology Definitions Criteria and Explanatory Notes 2 Edition 2004 Clinical and Laboratory Standards Institute Timothy J O Leary M D Ph D Quality Assurance for Immunocytochemistry Approved Guideline 1999 14 SYMBOLF RTECKNING Katalognu
213. t til brug Enzymreagenset er et sekundeert gede anti mus peberrodsperoxidase konjugat der er keedet til en dextranpolymer rygrad Tils ttelsen af et specifikt kromogen resulterer i dannelsen af et synligt kromogenprodukt som findes ved antigen antistoffets bindingssteder Preeparatet kontrastfarves herefter med h matoxylin der tilf res et blafarvningsmiddel og der s ttes deekglas p objektglasset Resultaterne fortolkes ved hjeelp af lysmikroskopi Et positivt resultat der er tegn p high grade cervikal sygdom er opn pet kernerne i de relevante cellerne farves brune Der kan oprettes et referencegalleri med potentielle positive objektglas med anvendelse af automatisk billedbehandlingsudstyr Galleriet kan derefter gennemgas for at finde et positivt eller negativt resultat SurePath med ProEx immuncytokemisk test er egnet til bade manuel og automatisk farvning LEVEREDE REAGENSER Folgende materialer er inkluderet og reekker til 75 preeparater i tynde lag Heetteglas Beskrivelse 4 nr Peroxidaseblokering Bufferet 1a hydrogenperoxid samt stabilisator og navnebeskyttede komponenter Proteinblokering Oprenset casein samt en navnebeskyttet kombination af 1b proteiner i modificeret PBS phosphatbufferet saltvand med konserveringsmiddel og overfladeaktivt stof Antistofcocktail Monoklonal antistofcocktail klar til brug leveret i 2 TRIS bufferet oplosning med Tween 20 pH veerdi 7 4 Indeholder
214. th mit ProEx immunzytochemische Testkit enth lt neben einem Antik rper Cocktail alle f r manuelle oder automatische immunzytochemische Drei Schritt F rbeverfahren an routinemaBig verarbeiteten D nnschicht Zervixproben erforderlichen Nachweis und Gegenf rbungsreagenzien Nach Inkubation der Probe mit einem propriet ren Antik rper Cocktail Maus wird die ein positives Testergebnis anzeigende selektive Bindung an den monoklonalen Antik rper durch ein einzigartiges gebrauchsfertiges enzymgebundenes Antik rper Chromogen System dargestellt Bei dem Enzymreagenz handelt es sich um ein sekund res an einen Dextranpolymer Backbone gekoppeltes Anti Maus Meerrettichperoxidase Konjugat Ziege Der Zusatz eines spezifischen Chromogens f hrt zur Bildung eines sichtbaren chromogenen Reaktionsprodukts an den Antigen Antik rper Bindungsstellen AnschlieBend wird die Probe mit Hamatoxylin gegengefarbt ein Bl uungsmittel zugesetzt und der Objekttr ger mit einem Deckglas versehen Die Ergebnisse werden mit einem Lichtmikroskop ausgewertet Ein positives Ergebnis liegt bei einer Braunf rbung des Kerns der ausgewaehlten Zellen vor und zeigt eine hochgradige Zervixerkrankung an Mittels automatischer bildgebender Ger te kann eine Katalog mit Referenzbildern potenziell positiver Objekttr ger erstellt werden Dieser Katalog kann bei der Entscheidung ob ein positives oder negatives Ergebnis vorliegt herangezogen werden Der SurePath mit ProE
215. tiemedium STABILITEIT 10 1 Ongeopende reagentiaflacons zijn stabiel tot de op de flacon vermelde uiterste gebruiksdatum mits bewaard bij de aanbevolen temperaturen 10 2 Na opening zijn de reagentia stabiel gedurende dertig dagen mits bewaard bij de aanbevolen temperaturen KWALITEITSCONTROLE 11 1 Variabiliteit in de resultaten is vaak te wijten aan verschillen in monsterbehandeling die afwijkt van de aanbevolen testprocedures Raadpleeg de door het Clinical and Laboratory Standards Institute voorgestelde richtlijnen voor kwaliteitscontrole Quality Assurance for Immunocytochemistry voor aanvullende informatie 11 2 SureDetect SiHa celcontrole is bij TriPath Imaging Inc beschikbaar als positieve controle Elke flacon bevat een baarmoederhalskankerlijn die op dezelfde wijze wordt verwerkt als de klinische monsters Een universele muis IgG negatieve controle kan als negatieve controle worden gebruikt Een objectglaasje voor positieve en negatieve controle dient in elke kleuringsprocedure te worden opgenomen De kleuringsresultaten dienen te worden gebruikt als een indicatie voor de geldigheid van de kleuringsrun INTERPRETATIE VAN DE KLEURING 12 1 Pati nt en controlemonsters De gekleurde objectglaasjes dienen door een cytotechnoloog of patholoog te worden beoordeeld met behulp van een lichtmicroscoop Cellen kunnen handmatig worden bekeken of opgeslagen in een elektronische beeldgalerij verkregen met een lichtmicroscoop
216. tif reaktiviteyi g sterir SurePath ve ProEx Test ile boyanm evrensel fare IgG negatif kontrol slayd nda kahverengiye boyanan hi bir ekirdek bulunmamal ve yaln zca hematoksilin kar boyama kaynakl boyama sergilemelidir Slaytlara skor verilmesi 4 ad ml bir prosestir 1 Ad m Numune yeterli mi Servikal Sitoloji Raporlamas 2nci Bs i in Bethesda Sistemi TBS Yeterli bir s v bazl preparatta tahmini olarak en az 5000 iyi g r nt lenen iyi korunan skuam z h cre olmas gerekti ini belirtir Ayn kriterler SurePath ve ProEx slaytlar i in de ge erli olmal d r Bununla birlikte rutin bir Pap preparat nda oldu u gibi pozitif molek ler reaksiyon sergileyen anormal h creler i eren her numune tan m itibariyle de erlendirme i in tatmin edicidir Bu ad mda yan t evet ise sonraki ad ma ge in yan t hay r ise sonu De erlendirme i in Tatmin Edici De il olmal d r 2 Ad m Epitelyal h crelerde orta ila yo un derecede kahverengi ekirdek boyanmas var m Bu ad mda evet yan t n verebilmek i in kolayca g r nt lenebilen kahverengi boyama aray n Yaln zca soluk veya k zar k eklinde kahverengi g r l yorsa pozitif i lemi garanti etmek i in bu yeterli de ildir Hi bir kahverengi ekirdek boyanmas g r nm yorsa sonu Negatif olarak rapor edilir Yeterli kahverengi boyama g r n yorsa sonraki ad ma ge in 3 Ad m
217. triale AIS e adenocarcinoma Se la cellula in questione morfologicamente definibile NILM negativa per lesioni intraepiteliali o patologie maligne il risultato del test Negativo BIBLIOGRAFIA Wright TC Schiffman Solomn D Cox JT Garcia Goldie Hatch Noller KL Roach N Runowicz C and Saslow D Interim Guidance for the Use of Human Papillomavirus DNA Testing as an Adjunct to Cervical Cytology for Screening Obstet Gynecol 2004 102 304 309 Ishimi Y Okayasu Kato Kwon H Kimura H Yamada and Song 5 Enhanced expression of MCM proteins in cancer cells derived from uterine cervix Eur J Biochem 2003 270 1089 1101 Lei and Tye BK Initiating DNA synthesis from recruiting to activating the MCM Complex J Cell Science 2001 Vol 114 8 1447 1454 Solomon D Nayar R Il sistema Bethesda per refertare la citologia cervicale Definizioni criteri morfologici e note esplicative Seconda Edizione CIC Edizioni Internazionali Roma 2004 Clinical and Laboratory Standards Institute Timothy J O Leary M D Ph D Quality Assurance for Immunocytochemistry Approved Guideline 1999 GLOSSARIO DEI SIMBOLI Codice Per uso diagnostico in vitro Consultare le istruzioni per l uso Contiene 75 test Attenzione consultare la documentazione allegata Limiti delle temperature di conservazione Codice lotto Utilizzare entro AAAA MM GG En E gt lt apg 2 Produtto
218. udfores ved stuetemperatur medmindre andet er angivet 9 1 4 Lad ikke objektglassene torre ud under farvningsproceduren Udtorrede 57 cellepr parater kan udvise for get uspecifik farvning Beskyt objektglas der kan veere udsat for treek Objektglas skal anbringes i et fugtkammer ved leengerevarende inkubationer Epitop retrieval 9 2 1 9 2 2 9 2 3 9 2 4 Anbring preeparerede objektglas i en Coplin sk l der indeholder en arbejdsoplesning best ende af SureDetect buffer til preeparering af objektglas i mindst 1 time og op til h jst 72 timer Inkuber i et vandbad eller en dampkoger i 15 minutter ved 95 C Tag hele Coplins sk len med objektglassene op af vandbadet eller dampkogeren og lad objektglassene k le af i bufferen i 20 minutter Skyl objektglassene med demineraliseret og leeg dem i en ren Coplin skal med TBST Blokeringsreagens 9 3 1 9 3 2 9 3 3 9 3 4 9 3 5 Bank overskydende buffer af Placer objektglassene i et forberedt fugtkammer fyldt med vandfugtede papirh ndklaeder eller gaze Tilseet 200 ul peroxidaseblokeringsreagens h tteglas 1a s det d kker celledeponeringsarealet Inkuber i 5 minutter 1 minut Skyl objektglassene i 3 hold TBST 2 minutter for hvert hold Proteinblokering 9 4 1 9 4 2 9 4 3 9 4 4 9 4 5 Bank overskydende buffer af Placer objektglassene i et forberedt fugtkammer fyldt med vandfugtede
219. um Pharmaceuticals Inc 40 Landsdowne Street Cambridge MA 02139 USA www millennium com Reagentes de Detec o fornecidos por BioCare Medical 2940 Camino Diablo Suite 300 Walnut Creek CA 94596 SurePath um produto e marca comercial registada da TriPath Imaging Inc ProEx SureDetect PrepStain PrepMate s o produtos e marcas comerciais da TriPath Imaging Inc 29 2013 TriPath Imaging Inc All rights reserved 779 05848 10 08 2013 12 SUREPATH with ProEx C Immunocytochemical Test REF 490500 490501 75 005 11000 12 005 11000 13 MPOOPIZOMENH XPHZH SurePath ProEx SurePath Ol MCM Tou DNA
220. ung aufweisen Objekttr ger vor Zugluft sch tzen Bei l ngeren Inkubationen die Objekttr ger in eine Feuchtigkeitskammer stellen Epitopdemaskierung 9 2 1 Die pr parierten Objekttr ger f r mindestens eine Stunde aber h chstens 72 Stunden in eine Coplin K vette stellen die eine Arbeitsl sung aus SureDetect Puffer zur Objekttragerpraparation enth lt 9 2 2 In einem Wasserbad oder Dampfkocher mindestens 15 Minuten bei 95 C inkubieren 9 2 3 Die Coplin K vette mit den Objekttr gern aus dem Wasserbad bzw Dampfkocher nehmen und Objekttrager 20 Minuten in Puffer abk hlen lassen 9 2 4 Objekttrager mit entionisiertem sp len und in eine saubere Coplin K vette mit TBST geben Blockierungsreagenz 9 3 1 o Uberschissigen Puffer abklopfen 9 3 2 Objekttrager in eine vorbereitete Feuchtigkeitskammer stellen die mit Wasser angefeuchtete Papiert cher oder Gaze enthalt 9 3 3 200 ul Peroxidase Blockierungsreagenz Gef B 1a zugeben um den Zellablagerungsbereich zu bedecken 9 3 4 5 Minuten 1 Minute inkubieren 9 3 5 Objekttr ger viermal jeweils 2 Minuten in frischem TBST sp len Proteinhemmer 9 4 1 Ubersch ssigen Puffer abklopfen 9 4 2 Objekttrager in eine vorbereitete Feuchtigkeitskammer stellen die mit Wasser angefeuchtete Papiert cher oder Gaze enthalt 9 4 3 200 ul Protein Blockierungsreagenz Gef 1b zugeben um den Zellablagerungsbereich vollst ndig zu bedecken 9
221. vullende informatie voor cervicale cytologiediagnose SAMENVATTING EN UITLEG Minichromosome maintenance MCM prote nen spelen een essenti le rol in replicatie van eukaryotisch DNA Elke MCM prote ne heeft DNA afhankelijke ATP ase motieven in zijn zeer goed geconserveerde centrale domein Het MCM prote negehalte neemt gewoonlijk op variabele wijze toe omdat normale cellen zich ontwikkelen van GO tot de G1 S fase van de celcyclus Topo isomerase Il alfa TOP2A is een essentieel nucleair enzym dat betrokken is bij DNA replicatie en het doel is voor talrijke antikanker geneesmiddelen die worden gebruikt bij de behandeling van kanker Verminderde expressie van TOP2A is een belangrijk mechanisme van resistentie tegen diverse chemotherapeutische agentia Een significante variatie in het expressiebereik van deze prote ne wordt waargenomen bij vele verschillende tumoren TOP2A is predominant in prolifererende cellen en wordt gewijzigd in M fase door fosforylatie op specifieke locaties hetgeen cruciaal is voor mitotische chromosoomcondensatie en segregatie ProEx C antilichaamcocktail bevat muis monoklonale anti MCM2 en anti TOP2A gezuiverd uit weefselcultuursupernatans en verdund in gebufferde zoutoplossing met prote nestabilisatoren en 0 09 natriumazide PRINCIPES VAN DE PROCEDURE De SurePath met ProEx immunocytochemische testkit bevat een antilichaamcocktail detectie en achtergrondkleuringreagentia die vereist zijn voor het volt
222. x immunzytochemische Test eignet sich f r manuelle und automatische F rbeverfahren 4 MITGELIEFERTE REAGENZIEN Im Lieferumfang enthalten sind folgende f r 75 D nnschicht Pr parate ausreichende Materialien Gef B Nr Beschreibung 4 Peroxidasehemmer Gepuffertes la Wasserstoffperoxid enth lt einen Stabilisator 2 8 C und gesch tzte Komponenten Proteinhemmer Gereinigtes Kasein enth lt 1b eine gesch tzte Proteinkombination in 2 8 modifizierter PBS mit Konservierungsmittel und oberfl chenaktiver Substanz Antik rper Cocktail Gebrauchsfertiger Cocktail aus monoklonalen Antik rpern in 2 TRIS gepufferter L sung mit Tween 20 pH 2 8 C 7 4 Enth lt Stabilisierungsproteine und einen antimikrobiellen Wirkstoff Sonde Maus Bindet sich an monoklonale Mausantik rper Polymerreagenz Mit Meerrettichperoxidase 3b konjugiertes Polymer bindet sich an 2 8 C Sondenreagenz Maus DAB Puffersubstrat Substratpuffer zum 3a 2 8 C 4 Ansetzen des DAB Chromogens 23 DAB 3 3 Diaminobenzidin 4b Chromogenl sung 2 8 5 Hematoxylin H matoxylin nach Mayer auf 15 30 C wassriger Basis Bl uungsmittel Tris gepufferte 6 Kochsalzl sung pH 7 4 mit Tween 20 und 15 30 C 0 09 NaN ERFORDERLICHE ABER NICHT MITGELIEFERTE REAGENZIEN UND MATERIALIEN Absorbierende T cher SureDetect SiHa Zelllinie Ref Nr 005 11012 10 TriPath Imaging Inc Entionisiert
223. x SureDetect PrepStain PrepMate TriPath Imaging Inc 43 2013 TriPath Imaging Inc All rights reserved 779 05848 10 08 2013 12
224. yasu Kato Kwon H Kimura H Yamada and Song 5 Enhanced expression of MCM proteins in cancer cells derived from uterine cervix Eur J Biochem 2003 270 1089 1101 Lei and Tye BK Initiating DNA synthesis from recruiting to activating the MCM Complex J Cell Science 2001 Vol 114 8 1447 1454 Solomon D Nayar R The Bethesda System for Reporting Cervical Cytology Definitions Criteria and Explanatory Notes 2 Edition 2004 Clinical and Laboratory Standards Institute Timothy J O Leary M D Ph D Quality Assurance for Immunocytochemistry Approved Guideline 1999 MM4 A GLOSSAIRE DES SYMBOLES Num ro de r f rence Utilisation diagnostique in vitro R Consulter les instructions d utilisation Contient 75 tests A Attention consulter les documents joints Limites de la temp rature de conservation EF IVD Vv 4 Code du lot z Utiliser avant AAAA MM JJ ou AAAA MM Fabricant ASSISTANCE TECHNIQUE Etats Unis Technical Service amp Support BD Diagnostics Diagnostic Systems www bd com ds technical_services bd com 1 800 638 8663 TriPath Imaging Inc 780 Plantation Drive Burlington NC 27215 USA Benex Limited Rineanna House Shannon Free Zone Shannon County Clare Ireland CE D velopp avec la technologie de Millennium Pharmaceuticals Inc INN MILLENNIUM INA et MILLENNIUM sont des marques commerciales de Millennium Pharmaceuticals
225. yin flakon 4b yice kar t r n ve bir pipet yard m yla slaytlara uygulay n 8 2 3 3 Substrat Kromojen zeltisini g nl k olarak taze haz rlay n 8 2 3 4 zelti i inde olu abilecek kelti boyama kalitesini etkilemez 9 BOYAMA PROTOKOL Oda s cakl nda 20 25 ger ekle tirilir 9 1 Boyama Prosed r yle ilgili notlar 9 1 1 Kullan m ncesinde t m bu talimatlar dikkatle okuyun ve t m bile enleri iyice renin bkz nlemler 9 1 2 Imm no boyama ncesinde t m reaktiflerin oda s cakl na 20 25 C dengelenmesi gerekir 9 1 3 Aksi belirtilmedik e t m enk basyonlar oda s cakl nda yap lmal d r 9 1 4 Boyama prosed r s resince slaytlar n tamamen kurumas na izin vermeyin Kurumu h cre preparatlar nda spesifik olmayan boyaman n artt g r lebilir Hava ak mlar na maruz kalabilecek slaytlar koruyun Uzun s reli enk basyonlar i in slaytlar n nem haznesine yerle tirilmesi gerekir 9 2 Epitop Geri Getirme 9 2 1 Haz rlanan slaytlar en az 1 saat ve en fazla 72 saat s reyle SureDetect Slide Preparation Slayt Haz rlama tamponu al ma zeltisi i eren bir coplin jar kab na koyun 9 3 9 4 9 5 9 6 9 7 9 2 2 9 2 3 9 2 4 95 C de 15 dakika boyunca bir su banyosu veya buharlay c i inde enk be edin Slaytlarla birlikte t m coplin jar kab n su banyosundan veya buharlayici
226. ytlar arka plan art rabilir 3 3 Diaminobenzidin DAB tersine evrilemez etkiler olu turma potansiyel riskini a yan pheli bir karsinojen olarak s n fland r l r Fiziksel temastan ve uzun s reli veya tekrarl olarak maruz kalmaktan ka n n Kimyasal bir davlumbaz nemle avsiye edilir G zlere cilde veya giysilere gelmemesine dikkat edin lem yapt ktan sonra ellerinizi iyice y kay n DAB al ma zeltisi prospekt se g re haz rlanmal d r Bu kitteki baz reaktifler saf formunda son derece toksik bir kimyasal olan sodyum azidi NaN i erir Sodyum azid yutulmas veya cilt yoluyla absorbe edilmesi halinde l mc l olabilir Bu reaktifler solunmalar halinde zararl d r Bu reaktifler tehlikeli kat lard r Ciltte g zlerde ve solunum yolunda tahri e neden olur Merkezi sinir sistemini b brekleri ve kardiyovask ler sistemi etkiler r n konsantrasyonlar nda ehlikeli olarak s n fland r lmasa da sodyum azid birikimleri kur un ve bak r tesisat ile reaksiyona girerek son derece patlay c metal azidlerini olu turabilir Att ktan sonra tesisatta azid birikimini nlemek i in bol miktarda suyla y kay n Hematoksilin ve Mavile tirici ajan Bu reaktifler yutulmalar halinde zararl d r Hematoksilin ve Mavile tirici ajanlar g zlerde ciltte ve solunum yolunda tahri yapan maddelerdir Numuneler ve numunelere maruz kalan t m malzemelerle enfeksiyon bula t rma g c varm
227. zida en las tuber as 12 2013 TriPath Imaging Inc All rights reserved 779 05848 10 08 2013 12 7 6 7 7 7 8 7 9 7 10 7 11 7 12 7 13 7 14 7 15 Hematoxilina y agente de coloraci n azul Estos reactivos son nocivos si se ingieren La hematoxilina y los agentes de coloraci n azul causan irritaci n en los ojos la piel y las v as respiratorias 8 2 3 4 La calidad de la tinci n no se ve afectada por el precipitado que se puede producir en la soluci n Las muestras y todos los materiales que se expongan a ellas se deben tratar como si 9 PROTOCOLO DE TINCI N realizado a temperatura ambiente de 20 a 25 tuvieran la capacidad de transmitir infecciones y se deben desechar con las 9 1 precauciones adecuadas abra las pipetas de los reactivos con la boca evite el contacto de los reactivos y muestras con la piel y las membranas mucosas Si los reactivos entran en contacto con zonas sensibles l velas con abundante agua Reduzca al m nimo la contaminaci n microbiana de los reactivos para evitar tinciones no especificas Cualquier tiempo temperatura m todo de incubaci n que no sean los especificados puede producir resultados err neos Los reactivos se han diluido para un rendimiento ptimo Una mayor diluci n podria resultar en la p rdida de la tinci n del antigeno Los componentes del kit son especificos a cada lote No sustituya los componentes del kit con
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