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QuanTtest Red Total Protein Assay System

1. mg dl mg dl UrinLevel1 15 2 04 26 15 5 1 3 75 Urin Level 263 3 3 0 48 62 8 1 9 3 1 Liquor Level 1 36 7 26 7 2 35 9 3 4 9 5 Liquor Level 2 69 6 26 37 68 0 2 6 3 9 Beispielgraph 1 000 0 900 0 800 g 0 700 E 0 600 Do S 0 500 o 50 uL Sample LE 0 400 0 300 20 uL Sample 0 200 AE 0 100 AA 0 50 100 50 200 250 300 350 400 450 500 Total Protein Concentration mg dL Korrelation Vergleich der quanTtest red Methode mit einer Coomassie Blue Methode Quantimetrix zur Proteinbestimmung ergibt beim Testen von 29 Patientenproben die folgende Korrelation n 29 Mittelwert Korrelations koeffizient r Neigung Intercept Coomassie Blue 43 04 0 9923 1 05 0 18 QuanTtest red 45 20 Bibliographie 1 Pesce AJ Kaplan LA Methods in Clinical Chemistry CV Mosby Co 1987 2 Fujita Y Mori I Kitano S Bunseki Kagaku 1983 32 379 3 Lievens MM Celis PJ Drug interference in turbidimetry and colorimetry of proteins in urine Clin Chem 1982 28 2328 4 Muir A Hensley WJ Pseudoproteinuria due to penicillins in the turbidimetric measurement of proteins with trichloroacetic acid Clin Chem 1979 25 1662 1663 5 Young GS et al Effect of drugs on clinical laboratory tests Clin Chem 1975 21 1D 6 Martin EW Hazard of Medication Alexander SF Farage DJ Hassan WE Jr eds Philadelphia PA and Toronto Canada JB Lippincott Co 1971 1
2. 150 200 250 300 350 400 450 500 Total Protein Concentration mg dL Correlation Comparison of the quanTtest red method with a Coomassie Blue method Quantimetrix for protein determination gives the following correlation when tested using 29 patient urine samples n 29 Mean Correlation Coefficient r Slope Intercept Coomassie Blue 43 04 0 9923 1 05 0 18 QuanTtest red 45 20 References 1 Pesce AJ Kaplan LA Methods in Clinical Chemistry CV Mosby Co 1987 2 Fujita Y Mori I Kitano S Bunseki Kagaku 1983 32 379 3 Lievens MM Celis PJ Drug interference in turbidimetry and colorimetry of proteins in urine Clin Chem 1982 28 2328 4 Muir A Hensley WJ Pseudoproteinuria due to penicillins in the turbidimetric measurement of proteins with trichloroacetic acid Clin Chem 1979 25 1662 1663 5 Young GS et al Effect of drugs on clinical laboratory tests Clin Chem 1975 21 1D 6 Martin EW Hazard of Medication Alexander SF Farage DJ Hassan WE Jr eds Philadelphia PA and Toronto Canada JB Lippincott Co 1971 169 189 7 Constantino NV Kabat HF Drug induced modification for laboratory test values revised 1973 Am J Hosp Pharm 1973 30 24 8 Watanabe N Makino K Kamei S Okubo A Yamanaka M Osawa S The Japanese Journal of Clinical Pathology 1984 32 suppl 227 9 Yoshizaki H Osawa S Furuya S The Japanese Journal of Clinical Pathology 1984 32 suppl 227 10 Bradford MM A rapid and sensitive me
3. Calculation of 24 Hour Urinary Protein Within Run n 10 Between Run n 18 1 M the 24 h i L Mean SD CV Mean SD CV Measure the our urine volume mL mg dL mg dL 2 Divide this volume by 100 to determine the volume expressed in deciliters dL Urine Level 1 15 3 23 14 9 14 9 13 87 3 Multiply the 24 hour urine volume in dL by the protein concentration in mg dL as determined by Urine Level 2 62 5 2 5 4 0 61 8 2 5 4 1 quanTtest red procedure CSF Level 1 36 3 2 9 7 9 35 3 3 3 9 4 4 The resulting number is the amount of protein expressed as mg per 24 hours CSF Level 2 66 7 21 3 2 65 2 3 3 5 1 The following is an example for illustrative purposes only When read after 15 minutes Patient Urine Volume 1 550 mL Within Run n 10 Between Run n 18 a Mean SD CV Mean SD CV Patient Urinary Protein 18 2 mg dL mg dL mg dL 1550 mL 100 mL dL X 18 2 mg dL 282 1 mg 24 hours Urine Level 1 15 2 0 4 2 6 15 5 1 3 7 5 Quality Control Urine Level 2 63 3 3 0 4 8 62 8 1 9 3 1 4 DE e CSF Level 1 36 7 2 6 7 2 35 9 3 4 9 5 A quality control program is recommended for all clinical laboratories The analysis of control material TAN CSF Level 2 69 6 2 6 3 7 68 0 2 6 3 9 with assayed values in both the normal and abnormal ranges is recommended for monitoring the performance of the procedure The values recovered for the controls should fall within the laboratory s acceptable range A Quality Control Program quantrol is available from Quan
4. Redondo Beach CA 90278 1205 USA phone 310 536 0006 fax 310 536 9977 www quantimetrix com page 11 QuanTtest Red Total Protein Assay System Tabla de sustancias interferentes Aditivo Conc a adida Conc medida Cantidad Nombre mg dl de prote nas totales normalmente mg dl presente en la orina Ninguna 29 Nitr geno de urea 2 300 29 10 5 g dia cido rico 300 30 5 250 750 mg d a Creatinina 300 28 5 hombre 1000 1700 mg d a mujer 1175 1468 mg d a Amon aco 250 30 0 41 0 82 g dia Glucosa 5 000 28 30 130 mg d a cido asc rbico 200 28 5 0 1 0 4 mg kg d a Glutationa 50 29 cido c trico 200 29 5 0 3 0 9 mg d a cido ox lico 100 26 15 30 mg d a cido tart rico 200 28 Na 600 30 6 8 4 g dia K 250 28 1 8 2 g dia Cl 1 000 30 11 1 18 2 g dia Ca 100 30 240 320 mg d a Mg 30 29 70 155 mg d a P 200 33 Cu 10 39 250 ug dia Fe 10 36 5 60 100 pg dia Bilirrubina 20 30 5 3 08 0 28 mg d a Precisi n La precisi n del sistema quanTtest red se estableci analizando una serie de controles de orina de controles de orina de Quantimetrix y de controles fluidos espinales El ensayo se calibr con est ndares de Quantimetrix incluidos en el kit La reacci n se ley a los 3 minutos y tras 15 minutos en un espectrofot metro Gilford Stasar Il Cuando se lee a los 3 minutos En un mismo ensayo n 10 Entre ensayos n 18 Media DT CV Media DT CV mg dl mg dl Conc
5. Urina Livello 1 15 2 0 4 2 6 15 5 1 3 15 Urina Livello 2 63 3 3 0 4 8 62 8 1 9 3 1 FCS Livello 1 36 7 2 6 7 2 35 9 3 4 9 5 FCS Livello 2 69 6 2 6 3 7 68 0 2 6 3 9 Interanalisi n 18 CV CV Interanalisi n 18 CV CV Quantimetrix 2005 Manhattan Beach Blvd Redondo Beach CA 90278 1205 USA phone 310 536 0006 fax 310 536 9977 www quantimetrix com page 9 QuanTtest Red Total Protein Assay System Grafico di esempio 1 000 0 900 0 800 0 700 0 600 0 500 50 uL Sample Absorbance 600 nm 0 400 0 300 HE 20 uL Sample ai 50 100 150 200 250 300 350 400 450 500 0 200 0 100 Total Protein Concentration mg dL Correlazione Il confronto tra il metodo quanTtest red e il metodo con blu Coomassie Quantimetrix per la determinazione della proteina da la seguente correlazione quando l analisi viene eseguita usando 29 campioni di urina di paziente n 29 Media Coefficiente di correlazione r Discesa Blu Coomassie 43 04 0 9923 1 05 quanTtest red 45 20 Intersezione 0 18 Letteratura di riferimento 1 Pesce AJ Kaplan LA Methods in Clinical Chemistry CV Mosby Co 1987 2 Fujita Y Mori I Kitano S Bunseki Kagaku 1983 32 379 3 Lievens MM Celis PJ Drug interference in turbidimet
6. assorbanza del campione X Concentrazione dello std mg dl assorbanza dello standard I seguenti esempi sono solo a scopo illustrativo Fluido cerebrospinale Campione di FCS del paziente Agog 0 200 50 mg dl Standard Agog 0 310 0 200 0 310 X 50 mg dl 32 3 mg dl Urina Campione di urina del paziente Agoo 0 120 25 mg dl Standard Agog 0 165 0 120 0 165 X 25 mg dl 18 2 mg dl Calcolo della proteinuria delle 24 ore 1 Misurare il volume dell urina delle 24 ore ml 2 Dividere questo volume per 100 per determinare il volume espresso in decilitri dl 3 Moltiplicare il volume dell urina delle 24 ore in dl per la concentrazione proteica in mg dl determinata con la procedura quanTtest red 4 Il numero ottenuto la quantit di proteina espressa in mg per 24 ore Il seguente esempio solo a scopo illustrativo Volume dell urina del paziente 1 550 ml Proteinuria del paziente 18 2 mg dl 1550 ml 100 ml dl X 18 2 mg dl 282 1 mg 24 ore Controllo qualit Si raccomanda che tutti i laboratori clinici dispongano di un programma di controllo qualit Si raccomanda di analizzare il materiale di controllo con i valori dei test sia nei range normali che in quelli anomali per monitorare l esecuzione della procedura valori recuperati per i controlli devono rientrare nel range accettabile del laboratorio disponibile un programma di controllo qualit Quantimetrix quantrolTM Sono disponibili informazion
7. 1 en orina 15 3 2 3 14 9 149 1 3 8 7 Conc 2 en orina 62 5 2 5 4 0 618 2 5 4 1 LCR Conc 1 36 3 2 9 7 9 353 3 9 9 4 LCR Conc 2 66 7 2 1 32 65 2 3 3 5 1 Cuando leido despues de 15 minutos En un mismo ensayo n 10 Entre ensayos n 18 Media DT CV Media DT CV mg dl mg dl Conc 1 en orina 15 2 0 4 2 6 155 1 3 7 5 Conc 2 en orina 63 3 3 0 4 8 628 1 9 3 1 LCR Conc 1 36 7 2 6 7 2 35 9 3 4 9 5 LCR Conc 2 69 6 2 6 3 7 68 0 26 3 9 Grafica de ejemplo 1 000 0 900 0 800 g 0 700 E s 0 600 o 3 0 500 o 50 uL Sample A 0 400 t H mH 0 300 Hi H H t 20 ul Sample FE 0 200 0 100 as 50 100 50 200 250 300 350 400 450 500 Total Protein Concentration mg dL Correlaci n La comparaci n del m todo quanTtest red con el m todo de Azul de Coomassie Quantimetrix para la determinaci n prote nica proporciona la siguiente correlaci n cuando se analiza utilizando 29 muestras de orina del paciente n 29 Media Coeficiente de correlaci n r Pendiente Intercepci n Azul de Coomassie 43 04 0 9923 1 05 0 18 quanTtest red 45 20 Bibliograf a 1 Pesce AJ Kaplan LA Methods in Clinical Chemistry CV Mosby Co 1987 2 Fujita Y Mori I Kitano S Bunseki Kagaku 1983 32 379 3 Lievens MM Celis PJ Drug interfer
8. 30 5 250 750 mg Tag Kreatinin 300 28 5 M nner 1000 1700 mg Tag Frauen 1175 1468 mg Tag Ammoniak 250 30 0 41 0 82 g Tag Glucose 5 000 28 30 130 mg Tag Ascorbins ure 200 28 5 0 1 0 4 mg kg Tag Glutathion 50 29 Zitronens ure 200 29 5 0 3 0 9 mg Tag Oxals ure 100 26 15 30 mg Tag Weins ure 200 28 Na 600 30 6 8 4 g Tag K 250 28 1 8 2 g Tag Cl 1 000 30 11 1 18 2 g Tag Ca 100 30 240 320 mg Tag Mg 30 29 70 155 mg Tag P 200 33 Cu 10 39 250 ug Tag Fe 10 36 5 60 100 ug Tag Bilirubin 20 30 5 3 08 0 28 mg Tag Prazision Die Pr zision des quanTtest red Systems wurde durch Analyse einer Reihe von Quantimetrix Urin und Liquor Kontrollen ermittelt Der Assay wurde mit Quantimetrix Standards die auch in diesem Kit enthalten sind kalibriert Die Reaktion wurde nach 3 Minuten und nach 15 Minuten auf einem Gilford Stasar Il Spektrophotometer abgelesen Bei Ablesen nach 3 Minuten Innerhalb eines Durchlaufs n 10 Zwischen verschiedenen Durchl ufen n 18 Mittelwert SA CV Mittelwert SA CV mg dl mg dl UrinLevel1 15 3 23 14 9 14 9 1 8 8 7 Urin Level2 62 55 25 40 61 8 2 5 4 1 Liquor Level 1 36 3 29 79 35 3 3 3 9 4 Liquor Level 2 66 7 2 1 3 2 65 2 3 3 5 1 Bei Ablesen nach 15 Minuten Innerhalb eines Durchlaufs n 10 Zwischen verschiedenen Durchl ufen n 18 Mittelwert SA CV Mittelwert SA CV
9. Bei niedrigem pH Wert ist der Farbstoff rot und schl gt bei Bindung mit Protein nach blau um Je nach verwendetem Ger t und verwendeter Probengr Be wird eine lineare Reaktion bei bis zu 350 mg dl erzielt Die Pyrogallolrot Farbstoffbindung kann nach drei Minuten abgelesen werden und ist somit f r Laborautomaten geeignet Durch die Empfindlichkeit des Pyrogallolrotverfahrens eignet sich der Test zur Verwendung mit K rperfl ssigkeiten wie Liquor und Urin deren Proteinkonzentrationen f r andere Proteinnachweisverfahren zu gering sind Die Biuret Methode ist zur Bestimmung von Protein im Urin nicht empfindlich genug Durch turbidimetrische Verfahren ermittelte Ergebnisse k nnen je nach Art und Konzentration des Pr zipitats Eiwei typ Temperatur und verstrichener Zeit vor dem Ablesen unterschiedlich ausfallen Einige Medikamente k nnen turbidimetrische Verfahren erwiesenerma en verfalschen 84 Das quanTtest red Verfahren bietet einen gr eren Linearit tsbereich als das Coomassie Blue Verfahren Globulin sowie Albumin k nnen mit der quanTtest red Reagenzfl ssigkeit gemessen werden Tenside sowie Kupfer und Eisenionen verf lschen die Testergebnisse Urinproben mit Blutgehalt H maturie f hren zu f lschlich erh hten Werten Dieses Verfahren verringert die K vetteneinf rbung und kann f r Analyseautomaten angepasst werden Verfahrensprinzip Der Assay basiert auf der Reaktion zwischen dem Protein und dem Pyrogallolrot M
10. Pseudoproteinuria due to penicillins in the turbidimetric measurement of proteins with trichloroacetic acid Clin Chem 1979 25 1662 1663 5 Young GS et al Effect of drugs on clinical laboratory tests Clin Chem 1975 21 1D 6 Martin EW Hazard of Medication Alexander SF Farage DJ Hassan WE Jr eds Philadelphia PA and Toronto Canada JB Lippincott Co 1971 169 189 7 Constantino NV Kabat HF Drug induced modification for laboratory test values revised 1973 Am J Hosp Pharm 1973 30 24 8 Watanabe N Makino K Kamei S Okubo A Yamanaka M Osawa S The Japanese Journal of Clinical Pathology 1984 32 suppl 227 9 Yoshizaki H Osawa S Furuya S The Japanese Journal of Clinical Pathology 1984 32 suppl 227 Bradford MM A rapid and sensitive method for the quantization of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein dye binding Anal Biochem 1976 72 248 11 Kingsbury FB Clark CP Williams G Post AL J Lab Clin Med 1926 11 981 12 Meulemans O Clin Chem Acta 1960 5 757 13 Saito M Kitamura M Niwa M Rinsho kagaku bunseki Il Tokyo Kagakudojin 1979 21 care o Quantimetrix 2005 Manhattan Beach Blvd Redondo Beach CA 90278 1205 USA phone 310 536 0006 fax 310 536 9977 www quantimetrix com page 7 QuanTtest Red Total Protein Assay System Italian Finalit d uso Il sistema di analisi della proteina totale quanTtest red previsto per la determinazione quantitativa della proteina nel f
11. Reconstitution of Reagents Reagent The quanTtest red Reagent needs no reconstitution or dilution Remove the Reagent from the refrigerator and aliquot a sufficient quantity of Reagent for the number of tests to be performed Allow the aliquot to come to room temperature 18 25 C before use Standards and Controls Remove the Standards and Controls from the refrigerator and allow to come to room temperature 18 25 C approximately 30 minutes before use The Standards and Controls need no reconstitution Gently invert the Standards and Controls to assure homogeneity of the contents Avoid foaming Storage and Stability Reagent 1 Store the quanTtest red Reagent at 2 8 C tightly capped Protect from light 2 When stored properly the Reagent is stable until the expiration date stated on the label Do not use the Reagents past the expiration date stated on each Reagent container label 3 Discard the Reagent if signs of precipitation or cloudiness develop Standards and Controls 1 The Standards and Controls should be stored at 2 8 C 2 When stored at 2 8 C between uses the Standards and Controls are stable until the expiration date stated on the label Do not use the Standards and Controls past the expiration date stated on each label 3 Discard the standards or controls if turbid or any evidence of microbial contamination is present Specimen Handling 1 Remove the samples to be tested from the refrigerator and allow to come to room empera
12. Spinal Fluid Control Level 1 and 2 Dropper Urine Chemistry Contol Level 1 and 2 Material necesario pero no suministrado 1 Pipetas capaces de administrar 20 pl o 50 ul y 2 5 ml 2 Tubos de reacci n se recomiendan tubos de cultivo de 13 x 100 mm 3 Espectrofot metro capaz de leer la absorbancia a 600 nm 4 Cubeta vidrio o pl stico desechable 5 Agua destilada o desionizada Instrumental El sistema de an lisis de prote nas totales quanTtest red requiere el uso de un espectrofot metro manual o automatizado capaz de medir la absorbancia a 600 nm Consulte el manual del fabricante del instrumento para obtener instrucciones espec ficas sobre su funcionamiento y uso Pueden obtenerse las aplicaciones automatizadas del analizador poni ndose en contacto con el departamento de servicio t cnico de Quantimetrix S lo para uso en diagn stico in vitro Advertencias y precauciones El reactivo quanTtest red est formulado con metanol ac dico No ingerir Evitar el contacto con los ojos la piel o la ropa En caso de contacto lavarse inmediatamente los ojos con agua y obtener atenci n m dica Lavarse la piel con jab n y agua No pipetear con la boca Los est ndares y controles est n formulados con material de origen humano Se han estudiado todas las unidades de donantes de sangre que forman el material de origen de los sueros y no se ha encontrado reacci n frente al virus de la hepatitis C el ant geno de superficie de la
13. analisi 1 Attendere che il reagente quanTtest red gli standard i controlli e i campioni raggiungano la temperatura ambiente 18 25 C 2 Etichettare le provette di analisi per ciascun campione bianco reagente standard controlli e campioni paziente da analizzare 3 Pipettare 50 ul 20 ul di ciascun campione nella provetta appropriata Usare acqua distillata o deionizzata per la provetta del bianco reagente 4 Pipettare accuratamente 2 5 ml di reagente in ciascuna provetta Miscelare bene su vortex o agitando le provette 5 Lasciare che la miscela di reazione rimanga a temperatura ambiente per almeno 15 minuti prima di leggere A600 Il colore della miscela di reazione rimane stabile per 60 minuti 6 Trasferire il bianco reagente in una cuvetta pulita e regolare lo spettrofotometro in modo che legga zero a 600 nm NOTA se la cuvetta si colora nel punto 6 il colorante ha adsorbito sul vetro e deve essere pulito per evitare di ottenere risultati erroneamente elevati Dopo la pulizia sciacquare accuratamente con acqua distillata o deionizzata e asciugare Ripetere il punto 6 7 Leggere ciascun campione a fronte del bianco reagente e annotare i valori di assorbanza ottenuti Quantimetrix 2005 Manhattan Beach Blvd Redondo Beach CA 90278 1205 USA MO21024 4 13 phone 310 536 0006 fax 310 536 9977 www quantimetrix com page 8 QuanTtest Red Total Protein Assay System 8 Se si utilizza la curva standard traccia
14. le cuvette le provette per coltura e le apparecchiature si colorino Tuttavia quando si analizzano numerosi campioni contemporaneamente e se si analizza un campione contenente un elevata concentrazione di proteina una parte di colorante pu rimanere In tal caso pulire bene i contenitori di vetro e l apparecchiatura Aggiornamenti tecnici sono ottenibili dal nostro sito web Valori attesi range normali possono variare in base alla popolazione dei pazienti e delle condizioni del laboratorio opportuno che ogni laboratorio determini il proprio range normale Usando il metodo con rosso pirogallollo su campioni ottenuti da soggetti clinicamente sani si possono prevedere livelli proteici nel fluido cerebrospinale compresi in un range che varia da 15 a 45 mg dl e che raggiunge 60 mg dl in soggetti anziani sani L escrezione urinaria di proteina normalmente inferiore a 200 mg 24 ore in volumi di 1 000 1 500 ml 24 ore campioni di urina normali casuali possono variare da 0 a 20 mg dl di proteina Caratteristiche di esecuzione specifiche Specificit La specificit del metodo di analisi quanTtest red stata determinata mediante l analisi di campioni di urina ai quali sono state aggiunte sostanze potenzialmente interferenti E stato rilevato chel emoglobina e gli ioni di rame o di ferro creano interferenza Fare riferimento alla tabella delle sostanze interferenti qui sotto Tabella delle sostanze interferenti
15. lumi re Le kit quanTtest red peut sous estimer les prot ines de faible poids mol culaire et les cha nes l g res d immunoglobuline prot ines de Bence Jones Lors des proc dures de routine les cuvettes les tubes de culture et l quipement sont rarement color s Cependant lorsque plusieurs chantillons sont analys s en m me temps ou si un chantillon contient une concentration lev e en prot ines une partie du colorant peut se d poser Dans ce cas nettoyer avec soin le mat riel et la verrerie Les mises jour techniques sont disponibles sur notre site Web Valeurs attendues Les plages normales peuvent varier en fonction de la population de patients et des conditions d analyse Il incombe chaque laboratoire de d terminer sa propre plage normale Lorsque la m thode utilisant le rouge de pyrogallol est employ e sur des chantillons pr lev s chez des sujets sains les niveaux de prot ines dans le LCR doivent tre compris entre 15 et 45 mg dl et jusqu 60 mg dl chez des personnes g es L excr tion urinaire des prot ines est g n ralement inf rieure 200 mg 24 heures dans un volume compris entre 1000 et 1500 ml 24 heures Les chantillons d urine normaux contiennent entre 0 et 20 mg dl de prot ines Caract ristiques de performance sp cifiques Sp cificit La sp cificit de la m thode quanTtest red a t d termin e par analyse d chantillons d urine apr s ajout de substances potentiellement
16. ndar contra su concentraci n prote nica en el papel para gr ficas suministrado Trace la l nea recta de mejor ajuste por los puntos Determine la concentraci n prote nica de las muestras de paciente desconocidas hallando las absorbancias en la curva est ndar y leyendo las concentraciones prote nicas correspondientes Para calcular los resultados siga el ejemplo de la secci n C lculo de resultados m s abajo M todos para instrumental automatizado Se ha evaluado la eficacia del quanTtest red Total Protein Assay System al leer cada reacci n a intervalos precisos de 3 minutos habi ndose determinado que el m todo es adecuado para instrumental automatizado Consulte las aplicaciones del instrumento correspondiente en relaci n con el m todo de rojo pirogallol para obtener instrucciones sobre el uso de este producto Pueden obtenerse estas aplicaciones poni ndose en contacto con el departamento de servicio t cnico de Quantimetrix o con el fabricante del instrumento C lculo de resultados Las concentraciones de prote na en orina o en el l quido cefalorraqu deo est n expresadas en mg dl La concentraci n prote nica de las muestras desconocidas puede determinarse hallando la absorbancia de la muestra en la curva est ndar y leyendo las concentraciones prote nicas correspondientes O BIEN puede calcularse de la siguiente forma C lculo de las prote nas totales Utilice la siguiente f rmula para calcul
17. pl erweitert werden Die Gesamtproteinkonzentration wird dann auf 350 mg dl linear Durch Verd nnung von Proben mit h heren Proteinkonzentrationen auf ungef hr 100 mg dl mit destilliertem oder deionisiertem Wasser kann eine h here Genauigkeit erreicht werden dabei muss der Verd nnungsfaktor beim erneuten Testen und der Berechnung der Gesamtproteinkonzentration ber cksichtigt werden Einige Tenside k nnen die F rbung beeintr chtigen Kationische Tenside ergeben im Allgemeinen die gleiche F rbung wie Protein Da durch Anionen die F rbereaktion vermindert wird muss die gesamte Ausr stung mit destilliertem Wasser gr ndlich abgewaschen werden bis keine Tensidreste mehr brig sind Vor der Verwendung die Ausr stung gr ndlich trocknen H moglobin ergibt ungef hr die H lfte der F rbereaktion von Albumin Urinproben mit Blutgehalt H maturie ergeben einen f lschlich erh hten Wert Kupfer und Eisenionen k nnen Messfehler verursachen Es ist besonders darauf zu achten Verschmutzungen der verwendeten Ger te zu vermeiden Das Reagenz enth lt lichtempfindliche Komponenten Vor Lichteinwirkung sch tzen Das quanTtest red System kann Protein mit geringem Molekulargewicht sowie Immunglobulin L Ketten Bence Jones Proteine zu niedrig bewerten Bei normalem Gebrauch werden K vetten Kulturr hrchen und Ger te selten eingef rbt Werden jedoch viele Proben gleichzeitig verarbeitet oder liegt in einer Probe eine besonders hohe Proteinkonzentrati
18. proteina totale nel campione pu essere misurata leggendo l assorbanza del campione a 600 nm La risposta del colore lineare e permette determinazioni accurate della proteina Reagenti 1 Il reagente quanTtest red disponibile in forma liquida pronto per l uso in flaconi da 250 ml contenenti rosso pirogallolo molibdato di sodio acido succinico sodio benzoato sodio ossalato metanolo e surfattante 2 Il set di soluzione standard di proteina confezionato in flaconi contagocce da 30 ml disponibile in quattro concentrazioni di proteina 25 50 100 e 200 mg dl sotto forma di soluzione acquosa costituita da albumina di siero umano al 70 e da globulina di siero umano al 30 in soluzione fisiologica tamponata con borati Consultare il foglio illustrativo degli Standard della proteina umana fornito nella confezione stata aggiunta sodio azide come conservante 3 Controlli del fluido spinale Livelli 1 e 2 forniti 3 ml per flacone Consultare il foglio illustrativo degli Standard della proteina umana fornito nella confezione E stata aggiunta sodio azide come conservante 4 Controlli dell urina umana Livelli 1 e 2 forniti 10 ml per flacone Consultare il foglietto illustrativo del Controllo dell urina fornito nella confezione E stata aggiunta sodio azide come conservante 5 Carta millimetrata per impieghi grafici 6 Foglio con le istruzioni prodotti pertinenti riportati qui sotto Prodotto Catalo
19. test adatto all uso con fluidi corporei come il fluido cerebrospinale e l urina che contengono concentrazioni proteiche troppo basse per la misurazione precisa con altri metodi di quantificazione della proteina Il metodo biuret non sufficientemente sensibile per la determinazione della proteinuria risultati con i metodi turbidimetrici possono variare a seconda del tipo e della concentrazione del precipitante del tipo di proteina della temperatura e del tempo trascorso prima della lettura stato dimostrato che alcune sostanze interferiscono con i metodi turbidimetrici 34 Il metodo quanTtest red presenta un range di linearit superiore rispetto al metodo con blu Coomassie La globulina come anche l albumina pu essere misurata con il reagente quanTtest red surfattanti e gli ioni di rame o di ferro interferiscono con i risultati del test campioni che manifestano ematuria daranno risultati elevati falsi Questo metodo riduce la colorazione delle cuvette e pu essere adattato agli analizzatori automatici Principio della procedura L analisi si basa sull interazione della proteina con il complesso rosso pirogallolo molibdato Il rosso pirogallollo si combina con l acido molibdico nel reagente e forma un complesso rosso con un assorbanza massima di 470 nm Nelle condizioni del test in presenza della proteina si forma un colore blu viola e l assorbimento massimo del colorante cambia da 470 nm a 604 nm La concentrazione della
20. urine specimens may range from 0 to 20 mg dL of protein Specific Performance Characteristics Specificity The specificity of the quanTtest red test method was determined by analysis of urine samples following the addition of potential interfering substances Hemoglobin iron and copper ions were found to interfere See the table of interfering substances following Table of Interfering Substances Determine the protein concentration of unknown patient specimens by finding the absorbances Additive Added Conc Measured Conc Amount on the standard curve and reading the corresponding protein concentrations If calculating the Name mg dL of Total Protein Normally results follow the example in the Calculation of Results section below mg dL Present in Urine Automated Instrumentation Methods None 29 The quanTtest red Total Protein Assay System has been evaluated for efficacy when each reaction is Urea Nitrogen 2 300 29 10 5 g day read at precisely timed 3 minute intervals making the method suitable for automated instrumentation Uric Acid 300 30 5 250 750 mg day Refer to the specific instrument applications for the Pyrogallol Red method for direction of use of this Creatinine 300 28 5 male 1000 1700 mg day product Contact Quantimetrix Technical Service Department or your instrument manufacturer for female 1175 1468 mg day hese applications Ammonia 250 30 0 41 0 82 g day Glucose 5 000 28 30 130 mg day Calculation of Results A
21. uso rutinario raras veces se ti en las cubetas los tubos de cultivo y el equipo Si la concentraci n prote nica de la muestra es superior o inferior a estas concentraciones utilice el est ndar que se aproxime m s a la misma En este caso limpie bien los utensilios de cristal y el equipo Encontrar la informaci n t cnica actualizada en nuestro sitio web Valores esperados Los intervalos normales pueden variar seg n la poblaci n de pacientes y las condiciones del laboratorio Cada laboratorio deber establecer su propio intervalo normal Utilizando el m todo de rojo pirogallol en muestras de sujetos cl nicamente sanos cabe esperar un intervalo de concentraciones prote nicas en el l quido cefalorraqu deo entre 15 y 45 mg dl y hasta 60 mg dl en sujetos sanos de avanzada edad La excreci n urinaria de las prote nas normalmente es inferior a 200 mg 24 horas en vol menes de 1 000 a 1 500 ml 24 horas Las muestras de orina normales aleatorias pueden oscilar entre 0 y 20 mg dl de prote nas Caracter sticas espec ficas de rendimiento Especificidad La especificidad del m todo de ensayo quanTtest red se determin mediante el an lisis de muestras de orina tras la adici n de posibles sustancias interferentes La hemoglobina y los iones de cobre y hierro son interferentes V ase la siguiente tabla de sustancias interferentes on gt 1 550 ml 18 2 mg dl 282 1 mg 24 horas Quantimetrix 2005 Manhattan Beach Blvd
22. 0006 fax 310 536 9977 www quantimetrix com page 3 QuanTtest Red Total Protein Assay System Lagerung und Stabilit t Reagenz 1 Das quanTtest red Reagenz bei 2 bis 8 C fest verschlossen aufbewahren Vor Lichteinwirkung sch tzen 2 Bei korrekter Aufbewahrung ist das Reagenz bis zum auf dem Etikett angegebenen Verfallsdatum stabil Bei korrekter Aufbewahrung sind die Reagenzien bis zum auf dem Etikett angegebenen Verfallsdatum stabil 3 Das Reagenz bei Anzeichen von Tr bung oder Pr zipitation verwerfen Standards und Kontrollen 1 Die Standards und Kontrollen m ssen bei 2 bis 8 C aufbewahrt werden 2 Bei Lagerung bei 2 bis 8 C sind die Standards und Kontrollen bis zum auf dem Etikett angegebenen Verfallsdatum stabil Standards und Kontrollen nach dem auf dem Etikett angegebenen Verfallsdatum nicht mehr verwenden 3 Falls die Standards oder Kontrollen tr b werden oder Anzeichen auf eine mikrobielle Verunreinigung vorliegen m ssen sie entsorgt werden Handhabung der Proben 1 Die Proben aus dem K hlschrank nehmen und vor dem Testen auf Raumtemperatur 18 bis 25 C bringen 2 Urin oder Liquorproben sind ohne zus tzliche Verarbeitung testbereit Besondere Konservierungsmittel sind nicht erforderlich 3 Sollten im Urin oder Liquor Blutzellen oder Zellreste vorhanden sein muss die Probe vor dem Test zentrifugiert werden 4 Protein im Urin kann an einer 24 Stunden Probenentnahme oder an einer Stichprobe bestimmt
23. 69 189 7 Constantino NV Kabat HF Drug induced modification for laboratory test values revised 1973 Am J Hosp Pharm 1973 30 24 8 Watanabe N Makino K Kamei S Okubo A Yamanaka M Osawa S The Japanese Journal of Clinical Pathology 1984 32 suppl 227 9 Yoshizaki H Osawa S Furuya S The Japanese Journal of Clinical Pathology 1984 32 suppl 227 10 Bradford MM A rapid and sensitive method for the quantization of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein dye binding Anal Biochem 1976 72 248 11 Kingsbury FB Clark CP Williams G Post AL J Lab Clin Med 1926 11 981 12 Meulemans 0 Clin Chem Acta 1960 5 757 13 Saito M Kitamura M Niwa M Rinsho kagaku bunseki Il Tokyo Kagakudojin 1979 21 French Utilisation pr vue Le kit de dosage des prot ines totales quanTtest red est congu pour la d termination quantitative des prot ines dans le liquide c phalorachidien LCR et l urine pour les kits manuels et automatis s R sum et explication La d termination des prot ines totales dans l urine et le liquide c phalorachidien permet le diagnostic des troubles r naux et du syst me nerveux central respectivement Une hausse des taux de prot ines dans l urine est souvent d tect e dans les cas suivants activit physique intense fi vre et hypothermie gammapathies monoclonales n phrite n phrose et n phropathie diab tique et infections des voies urinaires La d terminati
24. Additivo Conc aggiunta Conc misurata Quantit Nome mg dl di proteina totale normalmente mg dl presente nell urina Nessuno 29 Azoto ureico 2 300 29 10 5 g giorno Acido urico 300 30 5 250 750 mg giorno Creatinina 300 28 5 uomo 1000 1700 mg giorno donna 1175 1468 mg giorno Ammoniaca 250 30 0 41 0 82 g giorno Glucosio 5 000 28 30 130 mg giorno Acido ascorbico 200 28 5 0 1 0 4 mg kg giorno Glutatione 50 29 Acido citrico 200 29 5 0 3 0 9 mg giorno Acido ossalico 100 26 15 30 mg giorno Acido tartarico 200 28 Na 600 30 6 8 4 g giorno K 250 28 1 8 2 g giorno Cl 1 000 30 11 1 18 2 g giorno Ca 100 30 240 320 mg giorno Mg 30 29 70 155 mg giorno P 200 33 Cu 10 39 250 ug giorno Fe 10 36 5 60 100 ug giorno Bilirubina 20 30 5 3 08 0 28 mg giorno Precisione La precisione del sistema quanTtest red stata determinata analizzando una serie di Controlli dell urina e del fluido spinale Quantimetrix Il test stato calibrato con standard Quantimetrix includere kit La reazione stata letta a 3 minuti e dopo 15 minuti su uno spettrofotometro Gilford Stasar Il Quando stata letta a 3 minuti Intranalisi n 10 Media DS Media DS mg dl mg dl Urina Livello 1 15 3 2 3 14 9 14 9 1 3 8 7 Urina Livello 2 62 5 25 4 0 61 8 2 5 4 1 FCS Livello 1 36 3 2 9 7 9 35 3 3 3 9 4 FCS Livello 2 66 7 2 1 3 2 65 2 3 3 5 1 Quando stata letta dopo 15 minuti Intranalisi n 10 Media DS Media DS mg dl mg dl
25. NOTICE Insert format has changed AVVISO il formato dell inserto informativo stato cambiato gt HINWEIS Das Format der Packungsbeilage wurde ge ndert e AVISO El formato del prospecto ha cambiado e AVIS Le format de la notice d utilisation a change QuanTtest Red Total Protein Assay System Lor 124 5210 12 z 2016 03 C European Conformity Lot Number Manufactured by For in vitro diagnostic use Biological Risk Contents of kit Catalog No See Product Insert Authorized Representative Store at Use by last day of month CE Konformit tskennzeichnung Bezeichnung Hergestellt von In vitro Diagnosticum Biogef hrdung Inhalt der Packung Bestellnr Siehe Packungsbeilage Bevollm chtigter Aufbewahrung bei Verwendbar bis letzter Tag des Monats Conformit aux normes europ ennes D signation du lot Fabriqu par Pour diagnostic in vitro Risque biologique Contenu du coffret N de catalogue Voir notice d utilisation Repr sentant agr Conservation Utilisable jusqu dernier jour du mois indiqu Conformit europea Numero di lotto Fabbricato da Per uso diagnostico in vitro Rischio biologico Contenuto della confezione Catalogo n Vedere il foglietto illustrativo del prodotto Rappresentante autorizzato Conservar a Da utilizzare prima del ultimo giorno del mese Conformidad europea Denominaci n de lote Fabricado por De uso diagn stico in vitro Peligro biol gico Contenido del estuche N de cat logo Consulte el folleto del produc
26. OLOGIQUE Aucun test connu n est en mesure de garantir qu un produit d riv de sang humain ne contient pas le virus de l h patite ou le VIH Lors de la manipulation de ces chantillons il est vivement conseill de suivre les recommandations de bios curit de niveau 2 nonc es par les Centers for Disease Control Eliminer les d chets conform ment au r glement en vigueur Reconstitution des r actifs R actif Le r actif quanTtest red ne n cessite aucune reconstitution ni dilution Sortir le r actif du r frig rateur et pr parer suffisamment d aliquotes pour le nombre de tests effectuer Laisser l aliquote atteindre la temp rature ambiante 18 25 C avant utilisation talons et contr les Sortir les talons et les contr les du r frig rateur et patienter environ 30 minutes pour qu ils soient temp rature ambiante 18 25 C avant de les utiliser Les talons et les contr les ne n cessitent aucune reconstitution Retourner doucement les flacons pour assurer l homog n it de leur contenu viter de faire mousser Conservation et stabilit R actif 1 Conserver le r acti la lumi re 2 Lorsqu il est conserv correctement le r actif est stable jusqu la date de p remption indiqu e sur l tiquette Ne pas utiliser les r actifs apr s la date de p remption figurant sur chaque tiquette de r actif 3 Jeter tout r actif pr sentant un signe de pr cipitation ou de turbidit tal
27. Ttest red a 2 8 C sigillato Proteggerlo dalla luce 2 Se conservato correttamente il reagente stabile fino alla data di scadenza indicata sull etichetta Non usare il reagente dopo la data di scadenza indicata sull etichetta del contenitore di ogni reagente 3 Eliminare il reagente se si notano segni di precipitazione o torbidit Standard e controlli 1 Gli standard e i controlli devono essere conservati a 2 8 C 2 Se conservati a 2 8 C tra un utilizzo e l altro gli standard e i controlli sono stabili fino alla data di scadenza indicata sull etichetta Non usare gli standard e i controlli dopo la data di scadenza indicata sull etichetta 3 Eliminare gli standard o i controlli se torbidi o se vi sono segni di contaminazione microbica Trattamento dei campioni 1 Rimuovere dal frigorifero i campioni da analizzare e attendere che raggiungano la temperatura ambiente 18 25 C prima di analizzarli 2 campioni di urina o di fluido cerebrospinale possono essere usati senza ulteriore preparazione Non sono necessari conservanti speciali 3 Qualora nel campione di urina o fluido spinale dovessero essere presenti cellule ematiche o detriti cellulari centrifugare il campione prima dell analisi 4 La proteinuria pu essere determinata su un campione prelevato nel corso delle 24 ore o su un campione casuale 5 Icampioni di urina possono essere conservati a 2 8 C per un massimo di 24 ore o congelati per 3 mesi fino al mo
28. alon A600 0 310 0 200 0 310 X 50 mg dl 32 3 mg dl Urine chantillon d urine du patient A600 0 120 25 mg dl Etalon A600 0 120 0 165 X 25 mg dl 18 2 mg dl Calcul de la prot inurie sur 24 heures 1 Mesurer le volume d urine sur 24 heures ml 2 Diviser ce volume par 100 pour obtenir la mesure en d cilitres dl 3 Multiplier le volume sur 24 heures en dl par la concentration en prot ines en mg dl d termin e par la proc dure quanTtest red 4 Le chiffre ainsi obtenu correspond la quantit de prot ines en mg par 24 heures Les chiffres suivants sont donn s titre d exemple uniquement Volume d urine du patient 1 550 ml Prot inurie du patient 18 2 mg dl 1550 ml 100 mi dl X 18 2 mg dl 282 1 mg 24 heures Contr le qualit Un programme de contr l qualit est recommand dans tous les laboratoires cliniques L analyse du mat riel de contr le avec les valeurs obtenues dans les plages normales et anormales est recommand e pour surveiller les performances de la proc dure Les valeurs obtenues pour Quantimetrix 2005 Manhattan Beach Blvd Redondo Beach CA 90278 1205 USA phone 310 536 0006 fax 310 536 9977 www quantimetrix com page 6 QuanTtest Red Total Protein Assay System les contr les doivent s inscrire dans la plage acceptable du laboratoire Quantimetrix met la disposition des utilisateurs un programme de contr le qualit appel quantrolTM Demander tous les renseignement
29. ar las concentraciones prote nicas de las muestras de paciente Concentraci n proteinica mg dl absorbancia de la muestra X Concentraci n del est ndar mg dl absorbancia del est ndar He aqu algunos ejemplos ilustrativos L quido cefalorraqu deo Muestra de paciente Agog del l quido cefalorraqu deo 0 200 50 mg dl Est ndar Agog 0 310 0 200 0 310 X 50 mg dl 32 3 mg dl Orina Muestra de paciente Agog de orina 0 120 25 mg dl Est ndar Agog 0 165 0 120 0 165 X 25 mg dl 18 2 mg dl Calculo de las proteinas en orina de 24 horas Mida el volumen de la orina de 24 horas ml Divida este volumen por 100 para determinar el volumen expresado en decilitros dl Multiplique el volumen de la orina de 24 horas en dl por la concentraci n prote nica en mg dl seg n el procedimiento quanTtest red 4 El n mero resultante es la cantidad de prote nas expresada en mg por 24 horas He aqu un ejemplo ilustrativo Volumen de orina del paciente Prote nas en orina del paciente 1550 ml 100 mi dl X 18 2 mg dl Control de calidad Se recomienda un programa de control de calidad para todos los laboratorios cl nicos Se recomienda el an lisis del material de control con los valores analizados en los intervalos normal y anormal para monitorizar el rendimiento del procedimiento Los valores recuperados de los controles deben estar dentro del intervalo aceptable del laboratorio Quantimetrix dispone del programa de contr
30. ccinique du sodium benzoate de l oxalate de sodium du m thanol et un surfactant 2 Kit de solution prot inique talonn e en flacons compte gouttes de 30 ml quatre concentrations prot iniques de 25 50 100 et 200 mg dl sous forme de solution aqueuse 70 d albumine s rique humaine et 30 de globuline s rique humaine dans une solution saline tamponn e de borate Voir la notice des talons de prot ine humaine fournie De l azide de sodium a t ajout comme conservateur Quantimetrix 2005 Manhattan Beach Blvd Redondo Beach CA 90278 1205 USA phone 310 536 0006 fax 310 536 9977 www quantimetrix com page 5 QuanTtest Red Total Protein Assay System 3 Contr les liquides de LCR niveaux 1 et 2 fournis 3 ml par flacon Voir la notice du contr le de LCR galement fourni De l azide de sodium a t ajout comme conservateur 4 Contr les liquides d urine humaine niveaux 1 et 2 fournis 10 ml par flacon Voir la notice du contr le d urine fournie De l azide de sodium a t ajout comme conservateur 5 Papier millim tr 6 Mode d emploi produits concern s r pertori s ci apr s Produit R f n Contenu R actif quanTtest red 5210 12 1x 250 ml quanTtest red 2210 02 200 kits R actif 2x250 ml talons 25 50 100 200 mg dl Dropper Spinal Fluid Control Level 1 and 2 Dropper Urine Chemistry Contol Level 1 and 2 Mat riels requis mais non fournis Pi
31. centration of the specimen Quantimetrix 2005 Manhattan Beach Blvd Redondo Beach CA 90278 1205 USA phone 310 536 0006 fax 310 536 9977 www quantimetrix com MO21024 4 13 page 1 QuanTtest Red Total Protein Assay System Protein can be measured using either a 20 or a 50 uL sample size The 50 yL sample will give a linear range to 150 mg dL of protein To extend the range of linearity of the test method to 350 mg dL of protein use a 20 uL sample size see Limitations section below Test Procedure 1 Allow quanTtest red Reagent Standards Controls and Specimens to come to room emperature 18 25 C 2 Label test tubes for each sample Reagent Blank Standards Controls and Patient Specimens to be tested 3 Pipet 50 uL 20 uL of each sample into the appropriate tube Use distilled or deionized water for he Reagent Blank tube 4 Accurately pipet 2 5 mL of the Reagent to each of the tubes Mix well by vortexing or agitating he tubes 5 Allow reaction mixture to stand at room temperature for at least 15 minutes before reading the A600 The color of the reaction mixture is stable for up to 60 minutes 6 Transfer the Reagent blank to a clean cuvette and adjust the spectrophotometer to read zero at 600 nm NOTE If the cuvette becomes stained in step 6 dye has adsorbed onto the glass and must be cleaned or erroneously high results will occur After cleaning thoroughly rinse with distilled or deionized
32. cogida de 24 horas o en una muestra aleatoria 5 Las muestras de orina pueden almacenarse a 2 8 C hasta 24 horas o congeladas hasta 3 meses hasta el momento de la prueba Las muestras de l quido cefalorraqu deo pueden almacenarse a 2 8 C durante varios d as o congeladas hasta el momento de a prueba Procedimiento La concentraci n prote nica de las muestras desconocidas puede determinarse hallando la absorbancia de las mismas en una curva est ndar y leyendo la concentraci n prote nica correspondiente o bien puede calcularse mediante una calibraci n de un punto v ase C lculo de los resultados m s abajo Para preparar la curva est ndar trace la absorbancia obtenida para cada est ndar contra su concentraci n prote nica respectiva en mg dl Si utiliza el m todo de c lculo para determinar la concentraci n prote nica de las muestras desconocidas tome el est ndar que m s se aproxime a la concentraci n de la muestra objeto de an lisis es decir cuando analice muestras de l quido cefalorraqu deo normales mida el est ndar de 50 mg dl y cuando analice muestras de orina normales el de 25 mg dl Si la concentraci n prote nica de la muestra es superior o inferior a estas concentraciones utilice el est ndar que se aproxime m s a la concentraci n prote nica de la muestra Las prote nas pueden medirse utilizando una muestra de 20 o 50 ul La muestra de 50 ul dar un intervalo lineal para 150 mg dl de pr
33. e prot ine de la temp rature et du d lai coul avant lecture Certains m dicament interferent avec les m thodes turbidim triques La m thode quanTtest red pr sente une plus grande plage de lin arit que la m thode utilisant le bleu de Coomassie La globuline et l albumine peuvent tre mesur es l aide du r actif quanTtest red Les surfactants les ions cuivre ou fer interf rent avec les r sultats Les chantillons pr sentant une h maturie g n rent des valeurs faussement lev es Cette m thode r duit la coloration en cuvette et peut tre adapt e aux analyseurs automatiques Principe de la proc dure Le dosage repose sur l interaction des prot ines avec le complexe rouge de pyrogallol molybdene Le rouge de pyrogallol s associe a l acide molybdique dans le r actif pour former un complexe rouge dont l absorbance maximale se situe 470 nm Lorsque toutes les conditions sont r unies en pr sence de prot ines une coloration bleu violet se forme et l absorption maximale du colorant passe de 470 nm 604 nm La concentration en prot ines totales de l chantillon peut tre mesur e en lisant l absorbance 600 nm La r ponse de coloration est lin aire et permet des d terminations pr cises du taux de prot ines R actifs 1 Le r actif quanTtest red est fourni sous forme de liquide pr t l emploi dans des flacons de 250 ml contenant du rouge de pyrogallol du sodium molybdate de l acide su
34. ed method makes the test appropriate for use with body fluids such as cerebrospinal fluid and urine which have protein concentrations too low or precise measurement by other protein methods The biuret method is not sensitive enough for protein determinations in urine Results with turbidimetric methods may vary depending on the type and concentration of the precipitant the type of protein he temperature and the time before reading Some drugs have been shown to interfere with urbidimetric methods 4 The quanTtest red method has a greater range of linearity than the Coomassie Blue method Globulin as well as albumin can be measured with the quanTtest red Reagent Surfactants copper or iron ions interfere with test results Samples exhibiting hematuria will give falsely elevated values This method lessens cuvette staining and can be adapted to automated analyzers Principle of the Procedure The assay is based upon the interaction of protein with the Pyrogallol Red molybdate complex Pyrogallol Red is combined with molybdenum acid in the Reagent forming a red complex with a maximum absorbance at 470 nm Under the conditions of the test in the presence of protein a blue purple color is formed and the maximum absorption of the dye changes from 470 nm to 604 nm The concentration of the total protein in the sample can be measured by reading the absorbance of the sample at 600 nm The color response is linear and permits accurate protein determinati
35. en Nicht mundpipettieren Standards und Kontrollen wurden aus menschlichem Quellenmaterial hergestellt Alle Spendereinheiten des Serumpools wurden getestet und unter Anwendung von FDA zugelassenen Methoden als nicht reaktiv auf HCV Antik rper und HBs Antigen befunden POTENZIELL INGEKTIOS Es gibt jedoch keine bekannten Testmethoden die gew hrleisten k nnen dass ein aus Humanblut hergestelltes Produkt keine Hepatitis bzw HIV Viren enth lt Es wird empfohlen solche Proben gem den Biosicherheitsempfehlungen der Stufe 2 der US amerikanischen Gesundheitsbeh rde Center for Disease Control zu handhaben Die Entsorgung aller Abf lle ist nach den geltenden lokalen Abfallbestimmungen vorzunehmen Rekonstitution der Reagenzien Reagenz Das quanTtest red Reagenz erfordert keine Rekonstitution oder Verd nnung Das Reagenz aus dem K hlschrank nehmen und eine ausreichende Menge des Reagenzstoffes f r die erforderlichen Tests bereitstellen Die bereitgestellte Menge vor Gebrauch auf Raumtemperatur 18 bis 25 C bringen Standards und Kontrollen Die Standards und Kontrollen aus dem K hlschrank nehmen und ca 30 Minuten lang auf Raumtemperatur 18 bis 25 C aufw rmen lassen Die Standards und Kontrollen brauchen nicht rekonstituiert zu werden Standards und Kontrollen vorsichtig umdrehen damit der Inhalt homogen wird Nicht sch umen lassen Quantimetrix 2005 Manhattan Beach Blvd Redondo Beach CA 90278 1205 USA phone 310 536
36. ence in turbidimetry and colorimetry of proteins in urine Clin Chem 1982 28 2328 4 Muir A Hensley WJ Pseudoproteinuria due to penicillins in the turbidimetric measurement of proteins with trichloroacetic acid Clin Chem 1979 25 1662 1663 5 Young GS et al Effect of drugs on clinical laboratory tests Clin Chem 1975 21 1D 6 Martin EW Hazard of Medication Alexander SF Farage DJ Hassan WE Jr eds Philadelphia PA and Toronto Canada JB Lippincott Co 1971 169 189 7 Constantino NV Kabat HF Drug induced modification for laboratory test values revised 1973 Am J Hosp Pharm 1973 30 24 8 Watanabe N Makino K Kamei S Okubo A Yamanaka M Osawa S The Japanese Journal of Clinical Pathology 1984 32 suppl 227 9 Yoshizaki H Osawa S Furuya S The Japanese Journal of Clinical Pathology 1984 32 suppl 227 10 Bradford MM A rapid and sensitive method for the quantization of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein dye binding Anal Biochem 1976 72 248 11 Kingsbury FB Clark CP Williams G Post AL J Lab Clin Med 1926 11 981 12 Meulemans O Clin Chem Acta 1960 5 757 13 Saito M Kitamura M Niwa M Rinsho kagaku bunseki Il Tokyo Kagakudojin 1979 21 Quantimetrix 2005 Manhattan Beach Blvd Redondo Beach CA 90278 1205 USA phone 310 536 0006 fax 310 536 9977 www quantimetrix com page 12
37. eurs jours ou congel s pendant plusieurs mois jusqu a ce qu ils soient analys s Proc dure La concentration en prot ines d chantillons inconnus peut tre d termin e en tablissant l absorbance d un chantillon sur une courbe talon et en lisant la concentration correspondante elle peut aussi tre calcul e par une proc dure d talonnage un point voir Calcul des r sultats ci apr s Pour pr parer la courbe talon noter l absorbance obtenue pour chaque talon et la concentration en prot ines correspondante en mg dl Si la m thode de calcul est utilis e pour d terminer la concentration en prot ines dans des chantillons inconnus utiliser l talon qui correspond peu pr s la concentration de l chantillon test ex lorsque de l analyse d chantillons normaux de LCR mesurer l talon 50 mg dl et pour des chantillons d urine normaux l talon 25 mg dl Si la concentration en prot ines de l chantillon est sup rieure ou inf rieure ces concentrations utiliser l talon qui s en rapproche le plus Les prot ines peuvent tre mesur e dans des chantillons de 20 ou de 50 jul Un chantillon de 50 ul donne une plage lin aire allant jusqu 150 mg dl de prot ines Pour tendre la plage de lin arit de la m thode de test 350 mg dl de prot ines utiliser un chantillon de 20 yl voir le point Limites ci apr s Proc dure de test 1 Laisser les r actifs talons et contr les
38. formaci n de espuma Almacenamiento y estabilidad Reactivo 1 Almacenar el reactivo quanTtest red a 2 8 C herm ticamente cerrado Protegerlo de la luz 2 Cuando se almacena correctamente el reactivo permanece estable hasta la fecha de caducidad que figura en la etiqueta No utilizar los reactivos una vez transcurrida la fecha de caducidad indicada en la etiqueta de cada reactivo 3 Desechar el reactivo si se han formado precipitados o est turbio Est ndares y controles 1 Los est ndares y controles deben almacenarse a 2 8 C 2 Cuando se almacenan a 2 8 C entre usos los est ndares y controles permanecen estables hasta la fecha de caducidad que figura en la etiqueta No utilizar los est ndares y controles una vez transcurrida la fecha de caducidad indicada en la etiqueta 3 Desechar los est ndares y controles si tienen un aspecto turbio o si presentan signos de contaminaci n microbiana Manejo de las muestras 1 Extraer las muestras del frigor fico y dejarlas estabilizar a temperatura ambiente 18 25 C antes de la prueba 2 Las muestras de orina o l quido cefalorraqu deo pueden ser adecuadas para su uso sin preparaci n adicional previa No se requieren conservantes especiales 3 En caso de observarse c lulas sangu neas o restos celulares en la muestra de orina o de fquido raqu deo stas deben centrifugarse antes de la prueba 4 Las prote nas en orina pueden determinarse en una muestra de re
39. go N Contenuto Reagente quanTtest red 5210 12 1x 250 ml quanTtest red Sistema della proteina totale 2210 02 200 test Reagente 2x 250 ml Standard 25 50 100 200 mg dl 1x30 ml cad Dropper Spinal Fluid Control Level 1 and 2 1x3mlcad Dropper Urine Chemistry Contol Level 1 and 2 1x10 ml cad Materiali necessari ma non forniti 1 Pipette in grado di erogare 20 pl o 50 pl e 2 5 ml 2 Provette per reazione si raccomandano 13 provette per coltura da 100 mm 3 Spettrofotometro in grado di leggere l assorbanza a 600 nm 4 Cuvetta di vetro o plastica monouso 5 Acqua distillata o deionizzata Strumentazione Il sistema di analisi della proteina totale quanTtest red richiede l utilizzo di uno spettrofotometro manuale o automatico in grado di misurare l assorbanza a 600 nm Fare riferimento al manuale del produttore dello strumento per istruzioni specifiche relative al funzionamento e all uso Applicazioni per analizzatori automatici possono essere fornite su richiesta dal dipartimento di assistenza tecnica di Quantimetrix Solo per uso diagnostico n Vitro Avvertenze e pracauzioni Il reagente quanTtest red formulato con metanolo acido Non ingerire Evitare il contatto con gli occhi la cute e gli indumenti In caso di contatto sciacquare immediatamente con acqua abbondante e rivolgersi a un medico Lavare la cute con acqua e sapone Non pipettare con la bocca Gli standard e i controlli sono formulati da materiale di origi
40. hepatitis B ni a los anticuerpos del VIH cuando se utilizaron m todos aceptados por la FDA MATERIAL BIOL GICO POTENCIALMENTE PELIGROSO Ning n m todo de an lisis conocido puede garantizar que un producto derivado de la sangre humana no contenga el virus de hepatitis o VIH Se recomienda manejar estas muestras de acuerdo con las recomendaciones de seguridad biol gica de nivel 2 de los Centers for Disease Control Elimine todo material desechable de acuerdo con las normativas locales vigentes sobre la gesti n de residuos Reconstituci n de los reactivos Reactivo El reactivo quanTtest red no necesita reconstituci n ni diluci n Saque el reactivo del frigor fico y separe la cantidad suficiente para el n mero de pruebas que deban realizarse Deje que la cantidad separada se estabilice a temperatura ambiente 18 25 C antes del uso 1 x 30 ml cada uno 1x3 ml cada uno 1x 10 ml cada uno Quantimetrix 2005 Manhattan Beach Blvd Redondo Beach CA 90278 1205 USA phone 310 536 0006 fax 310 536 9977 www quantimetrix com MO21024 4 13 page 10 QuanTtest Red Total Protein Assay System Est ndares y controles Extraiga los est ndares y controles del frigor fico y d jelos estabilizar a temperatura ambiente 18 25 C durante aproximadamente 30 minutos antes de su uso Los est ndares y controles no necesitan reconstituci n Invierta suavemente los est ndares y controles para garantizar la homogeneidad del contenido Evite la
41. hotometer capable of reading absorbance at 600 nm Cuvette glass or disposable plastic Distilled or deionized water a 8 w D Instrumentation The quanTtest red Total Protein Assay System requires the use of a manual or automated spectrophotometer capable of measuring absorbance at 600 nm Refer to the instrument manufacturer s manual for specific instruction regarding its operation and use Automated analyzer applications are available upon request from Quantimetrix Technical Service Department For In Vitro Diagnostic Use Only Warnings and Precautions The quanTtest red Reagent is formulated with acidic methanol Do not take internally Do not get in eyes on skin or on clothing In case of contact immediately flush eyes with water and get medical attention Wash skin with soap and water Do not pipet by mouth The Standards and Controls are formulated from human source material All blood donor units comprising the serum source material have been tested and found non reactive for HCV Hepatitis B surface antigen and HIV antibody when tested by FDA accepted methods POTENTIAL BIOHAZARDOUS MATERIAL No known test method can assure that a product derived from human blood does not contain Hepatitis or HIV virus It is recommended such samples be handled according to the Centers for Disease Control s Bio Safety Level 2 recommendations Dispose of any discarded materials in accordance with the requirements of your local waste management authorities
42. i su richiesta Limiti La linearit del metodo di analisi 150 mg dl di proteina totale quando si usa un campione di 50 pl La linearit pu essere estesa riducendo il volume del campione a 20 ul La concentrazione proteica totale quindi diventa lineare a 350 mg dl Si pu ottenere una maggiore accuratezza diluendo i campioni di livelli proteici pi elevati a circa 100 mg dl con acqua distillata o deionizzata ripetendo l analisi e compensando il fattore di diluizione quando si calcola la concentrazione proteica totale Alcuni tipi di agenti di superficie possono alterare il colore surfattanti cationici in genere danno lo stesso colore delle proteine Poich gli anioni inibiscono la reazione del colore lavare accuratamente le apparecchiature con acqua distillata in modo da eliminare del tutto gli agenti di superficie Asciugare bene le apparecchiature prima dell uso L emoglobina genera una reazione di colore dimezzata rispetto all albumina campioni che manifestano ematuria daranno un risultato elevato falso Gli ioni di rame e di ferro possono causare errori nella misurazione Occorre prestare particolare attenzione a evitare la contaminazione dell apparecchiatura Il reagente contiene componenti sensibili alla luce Proteggerlo dalla luce Il sistema quanTtest red pu sottovalutare le proteine a basso peso molecolare e le catene immunoglobuliniche leggere proteine di Bence Jones Nell uso di routine accade raramente che
43. inaci n de prote nas totales en orina y l quido cefalorraqu deo es til para el diagn stico de trastornos renales y del sistema nervioso central respectivamente Los aumentos de las prote nas en orina pueden observarse normalmente en las siguientes condiciones ejercicio extenuante fiebre e hipotermia gammopat as monoclonales nefritis nefrosis y nefropat a diab tica e infecciones del tracto urinario La determinaci n de prote nas totales en el l quido cefalorraqu deo es til para el diagn stico de condiciones como meningitis encefalitis poliomielitis neuros filis tumores del sistema nervioso central y hemorragias cerebrales El sistema de an lisis prote nas totales quanTtest red es un m todo simple de cuantificaci n de prote nas utilizando muestras en microlitros de orina o l quido cefalorraqu deo Las prote nas totales se miden con el m todo de tinci n utilizando un complejo de rojo pirogallol y cido molibd nico Mo descrito por Fujita y cols Con un pH bajo el tinte es rojo y cambia a azul cuando se le mezclan prote nas Seg n el equipo y tama o de muestra utilizados se alcanza una respuesta lineal de hasta 350 mg dl El m todo de tinci n con rojo pirogallol puede leerse a los tres minutos lo que hace que la prueba sea adecuada para el instrumental autom tico La sensibilidad del m todo de tinci n con rojo pirogallol hace que la prueba sea adecuada para uso con fluidos corporales como el l quid
44. interf rentes Il s est av r que l h moglobine les ions fer et cuivre provoquent des interf rences Voir le tableau des substances interf rentes ci apr s Tableau des substances interf rentes Additif Conc ajout e Conc mesur e Quantit Nom mg dl de prot ines totales normalement mg dl pr sentes dans l urinee Aucun 29 Nitrog ne d ur e 2 300 29 10 5 g jour Acide urique 300 30 5 250 750 mg jour Cr atinine 300 28 5 homme 1000 1700 mg jour femme 1175 1468 mg jour Ammoniaque 250 30 0 41 0 82 g jour Glucose 5 000 28 30 130 mg jour Acide ascorbique 200 28 5 0 1 0 4 mg kg jour Glutathion 50 29 Acide citrique 200 29 5 0 3 0 9 mg jour Acide oxalique 00 26 15 30 mg jour Acide tartrique 200 28 Na 600 30 6 8 4 g jour K 250 28 1 8 2 g jour Cl 000 30 11 1 18 2 g jour Ca 00 30 240 320 mg jour Mg 30 29 70 155 mg jour p 200 33 Cu 0 39 250 pug jour Fe 0 36 5 60 100 ug jour Bilirubine 20 30 5 3 08 0 28 mg jour Pr cision La pr cision du kit quanTtest red a t tablie en analysant une s rie de contr les de LCR et d urine Quantimetrix Le dosage a t talonn l aide des talons Quantimetrix inclus dans le kit La r action a t lue 3 minutes et 15 minutes sur un spectrophotom tre Gilford Stasar Il Lecture 3 minutes Intracycle n 10 Inter cycles n 18 Moyenne ET CV Moyenne ET CV mg dl mg dl Urine niveau 1 15 3 2 3 14 9 14 9 1 3 8 7 Urine ni
45. la muestra a 600 nm La respuesta del color es lineal y permite determinaciones precisas de prote na Reactivos 1 El reactivo quanTtest red se suministra como l quido listo para su uso en frascos de 250 ml con rojo de pirogallol molibdato s dico cido succinico benzoato s dico oxalato s dico metanol y surfactante 2 Un Juego de solucion de estandar de Proteina envasado en frascos cuentagotas de 30 ml se suministra en cuatro concentraciones prote nicas de 25 50 100 y 200 mg dl como soluci n acuosa de alb mina s rica humana al 70 y globulina s rica humana al 30 en soluci n salina tamponada con borato V ase el prospecto adjunto Est ndares de prote nas humanas Se ha a adido azida s dica como conservante 3 Controles de l quido cefalorraqu deo concentraciones 1 y 2 suministrado en frascos de 3 ml V ase el prospecto adjunto Control del l quido cefalorraqu deo Se ha a adido azida s dica como conservante 4 Controles de orina humana concentraciones 1 y 2 suministrado en frascos de 10 ml V ase el prospecto adjunto Control de orina Se ha a adido azida s dica como conservante 5 Papel para gr ficas 6 Prospecto de instrucciones aplicable a los productos enumerados a continuaci n Producto N de cat logo Contenido Reactivo quanTtest red 5210 12 1 x 250 mL Sistema de prote nas totales quanTtest red 2210 02 200 Prueba Reactivo 2 x 250 ml Est ndar 25 50 100 200 mg dl Dropper
46. luido cerebrospinale e nell urina per sistemi sia manuali che automatici Sommario e spiegazione La determinazione della proteina totale nell urina e nel fluido cerebrospinale utile nella diagnosi di malattie renali e del sistema nervoso centrale rispettivamente Valori elevati della proteina nell urina si osservano comunemente nelle seguenti condizioni esercizio fisico intenso febbre e ipotermia gammopatie monoclonali nefrite nefrosi e nefropatia diabetica e infezioni del tratto urinario La determinazione della proteina totale nel fluido cerebrospinale di ausilio nella diagnosi di condizioni quali meningite encefalite poliomielite neurosifilide tumori dell SNC ed emorragia cerebrale Il sistema di analisi della proteina totale quanTtest red offre un metodo semplice per la quantificazione della proteina usando campioni di urina o fluido cerebrospinale nell ordine dei microlitri La proteina totale viene misurata con il metodo colorimetrico usando un complesso di rosso pirogallollo e acido molibdico Mo descritto da Fujita et al A un pH basso il colorante rosso e diventa blu quando il complesso interagisce con la proteina A seconda dell apparecchiatura e della quantit di campione utilizzati si ottiene una risposta di 350 mg dl Il metodo colorimetrico con rosso pirogallollo pu essere letto dopo tre minuti rendendo il test idoneo per gli strumenti automatici La sensibilit del metodo con rosso pirogallollo rende il
47. mento dell analisi campioni di FCS possono essere conservati a 2 8 C per diversi giorni o congelati per mesi fino al momento dell analisi Procedura La concentrazione proteica di campioni sconosciuti pu essere determinata individuando l assorbanza del campione su una curva standard e leggendo la corrispondente concentrazione proteica oppure pu essere calcolata usando la calibrazione a un punto consultare Calcolo dei risultati di seguito Per preparare la curva standard tracciare su un grafico l assorbanza ottenuta per ogni standard a fronte della rispettiva concentrazione proteica in mg dl Se si usa il metodo del calcolo per determinare la concentrazione proteica dei campioni sconosciuti utilizzare lo standard che si avvicina alla concentrazione del campione che si sta analizzando ad es quando si analizzano campioni di FCS normali misurare lo standard da 50 mg dl e quando si analizzano campioni di urina normali misurare lo standard da 25 mg dl Se la concentrazione proteica del campione superiore o inferiore a queste concentrazioni utilizzare lo standard che si avvicina di pi alla concentrazione proteica del campione La proteina pu essere misurata usando campioni di 20 o 50 ul Il campione di 50 pl d un range lineare a 150 mg dl di proteina Per estendere il range di linearit del metodo di analisi a 350 mg dl di proteina utilizzare un campione di 20 pl consultare la sezione Limiti di seguito Procedura di
48. n Millimeterpapier verzeichnet werden Dann eine gerade Ideallinie durch die Punkte ziehen Die Proteinkonzentration unbekannter Proben durch Feststellung der Extinktionen auf der Standardkurve und Ablesen der entsprechenden Proteinkonzentration bestimmen Zur Berechnung der Ergebnisse nach dem Beispiel im Abschnitt Berechnung der Ergebnisse vorgehen Verfahren mit Analyseautomaten Das quanTtest red Gesamtprotein Assaysystem kann genaue Ergebnisse liefern wenn jede Reaktion in genau eingehaltenen 3 Minuten Intervallen abgelesen wird damit eignet sich das Verfahren f r Analyseautomaten Anweisungen zur Verwendung dieses Produkts sind den entsprechenden Anleitungen f r das Pyrogallolrot Verfahren jedes Ger tes zu entnehmen Diese Anleitungen sind vom technischen Kundendienst von Quantimetrix oder vom Hersteller des jeweiligen Ger tes erh ltlich Berechnung der Ergebnisse Die Proteinkonzentrationen in Urin oder Liquor werden in mg dl angegeben Die Proteinkonzentration unbekannter Proben kann durch Feststellung der Probenextinktion auf der Standardkurve und Ablesen der entsprechenden Proteinkonzentration ODER durch die folgende Berechnung bestimmt werden Berechnung der Gesamtproteinkonzentration Zur Berechnung der Proteinkonzentrationen der Patientenproben die folgende Formel verwenden Proteinkonzentration mg dl Extinktion der Probe X Konzentration des Standards mg dl Extinktion des Standards Die folgenden Beispiele die
49. ne umana Tutte le unit di donatori di sangue compreso il materiale di origine del siero sono state analizzate mediante metodi approvati dalla FDA e sono risultate non reattive per l HCV per l antigene di superficie del virus dell epatite B e per l anticorpo anti HIV MATERIALE POTENZIALMENTE FONTE DI RISCHIO BIOLOGICO Nessun metodo di analisi noto pu garantire che un prodotto derivato da sangue umano non contenga il virus dell epatite o dell HIV Si raccomanda che tali campioni siano trattati in conformit al Livello di sicurezza biologica 2 previsto dai Centers for Disease Control Eliminare eventuali materiali residui nel rispetto delle norme locali sullo smaltimento dei rifiuti Ricostituzione dei reagenti Reagente Il reagente quanTtest red non necessita di ricostituzione o diluizione Rimuovere il reagente dal frigorifero e aliquotare una quantit sufficiente di reagente per il numero di test da eseguire Attendere che l aliquota raggiunga la temperatura ambiente 18 25 C prima dell uso Standard e controlli Rimuovere gli standard e i controlli dal frigorifero e prima di usarli attendere circa 30 minuti che raggiungano la temperatura ambiente 18 25 C Gli standard e i controlli non necessitano di ricostituzione Capovolgere delicatamente gli standard e i controlli per garantire l omogeneit del contenuto Evitare la formazione di schiuma Conservazione e stabilit Reagente 1 Conservare il reagente quan
50. nen nur zu Anschauungszwecken Liquor Liquor Patientenprobe Agoo 0 200 50 mg dL Standard Agog 0 310 0 200 0 310 X 50 mg dl 32 3 mg dl Urin Urin Patientenprobe Agog 0 120 25 mg dL Standard Agog 0 165 0 120 0 165 X 25 mg dl 18 2 mg dl Berechnung der 24 Stunden Urinproteinkonzentration 1 Das 24 Stunden Urinvolumen abmessen ml 2 Dieses Volumen durch 100 teilen um das Volumen in Dezilitern dl auszudr cken 3 Das 24 Stunden Urinvolumen in dl mit der Proteinkonzentration in mg dl gem quanTtest red Verfahren multiplizieren 4 Das Ergebnis ist die Proteinmenge in mg pro 24 Stunden Das folgende Beispiel dient nur zu Anschauungszwecken Patienten Urinvolumen 1550 ml Patienten Urinproteinkonzentration 18 2 mg dl 1550 ml 100 ml di X 18 2 mg dl 282 1 mg 24 Stunden Qualit tskontrolle F r alle klinischen Labore wird ein Qualit tskontrollprogramm empfohlen Zur berwachung der Verfahrensleistung wird die Analyse des Kontrollmaterials mit festgelegten Werten im normalen und abnormalen Bereich empfohlen Die erhaltenen Werte der Kontrollen sollten im f r das Labor akzeptablen Bereich liegen Ein Qualit tskontrollprogramm quantrol ist von Quantimetrix erh ltlich Weitere Informationen sind auf Anfrage erh ltlich Einschr nkungen Die Linearit t der Testmethode betr gt 150 mg dl Gesamtprotein bei Verwendung einer 50 ul gro en Probe Die Linearit t kann durch Verringerung des Probenvolumens auf 20
51. o cefalorraqu deo y la orina que tienen concentraciones prote nicas demasiado bajas para poder realizar una medici n precisa con otros m todos prote nicos El m todo Biuret no es lo suficientemente sensible para la determinaci n de prote nas en orina Los resultados con los m todos turbidim tricos pueden variar seg n el tipo y la concentraci n del precipitante el tipo de prote na la temperatura y el tiempo antes de la lectura Se ha demostrado que algunos f rmacos interfieren con los m todos turbidim tricos 34 El m todo quanTtest red tiene una gama m s amplia de linealidad que el m todo Azul de Coomassie La globulina y la alb mina pueden medirse con el reactivo quanTtest red Los surfactantes y los iones de cobre o hierro interfieren con los resultados de las pruebas Las muestras con hematuria dar n resultados falsamente altos Este m todo reduce la tinci n de la cubeta y puede adaptarse a los analizadores autom ticos Principio del procedimiento El ensayo est basado en la interacci n de la prote na con el complejo rojo pirogallol molibdato El rojo pirogallol se combina con el cido molibd nico en el reactivo formando un complejo rojo con una absorbancia m xima a 470 nm Bajo las condiciones de la prueba en presencia de prote na se forma un color azul p rpura y la absorci n m xima del tinte cambia de 470 a 604 nm La concentraci n de la prote na total de la muestra puede medirse leyendo la absorbancia de
52. ol de calidad quantrol Solicite informaci n Limitaciones La linealidad del m todo de ensayo es de 150 mg dl de las prote nas totales utilizando una muestra de 50 ul La linealidad debe ampliarse disminuyendo el volumen de la muestra a 20 pl La concentraci n de prote nas totales ser lineal a 350 mg dl Puede obtenerse una mayor precisi n diluyendo las muestras con concentraciones m s altas de prote nas a aproximadamente 100 mg dl con agua destilada o desionizada volviendo a realizar el an lisis y corrigiendo el factor de diluci n al calcular la concentraci n de prote nas totales Algunos tipos de agentes de superficie activos pueden afectar al color Los surfactantes cati nicos en general dan el mismo color que las prote nas Dado que los aniones inhiben la reacci n del color lave bien el equipo con agua destilada hasta que no quede ning n agente de superficie activo Seque bien el equipo antes de su uso La hemoglobina da aproximadamente la mitad de reacci n del color que la alb mina Las muestras con hematuria dar n resultados falsamente altos Los iones de cobre y hierro pueden provocar errores en la medici n Debe tenerse especial cuidado en evitar la contaminaci n del aparato El reactivo contiene componentes fotosensibles por lo que debe protegerse de la luz El sistema quanTtest red puede subestimar las prote nas de bajo peso molecular y las cadenas ligeras de inmunoglobulina prote nas de Bence Jones En un
53. olybdat Komplex Pyrogallolrot wird in der Reagenzfl ssigkeit mit Molybd ns ure kombiniert und bildet einen roten Komplex mit einer maximalen Extinktion von 470 nm Unter Testbedingungen schl gt die Farbe bei Anwesenheit von Protein nach blauviolett um Dabei erh ht sich die maximale Extinktion von 470 nm auf 604 nm Die Gesamtproteinkonzentration der Probe kann durch Ablesen der Extinktion der Probe bei 600 nm ermittelt werden Die Farbreaktion ist linear und erm glicht genaue Bestimmungen des Proteingehalts Reagenzien 1 QuanTtest red Reagenz ist als gebrauchsfertige Fl ssigkeit in 250 ml Flaschchen erh ltlich und besteht aus Pyrogallolrot Natriummolybdan Succins ure Natriumbenzoat Natriumoxalat Methanol und Tensid 2 Eiwei Standardl sungsset abgepackt in 30 ml Pipettenflaschchen ist in vier Eiwei konzentrationen erh ltlich 25 50 100 and 200 mg dl als w ssrige L sung von 70 igem Humanserum Albumin und 30 igem Humanserum Globulin in boratgepufferter Kochsalzl sung siehe Packungsbeilage der Human Proteinstandards Natriumazid wurde als Konservierungsmittel hinzugef gt 3 Liquor Fl ssigkontrolle Level 1 und 2 im Lieferumfang enthalten 3 ml pro Fl schchen siehe Packungsbeilage der Liquor Kontrolle Natriumazid wurde als Konservierungsmittel hinzugef gt 4 Humanurin Fl ssigkontrolle Level 1 und 2 10 ml pro Fl schchen im Lieferumfang enthalten siehe Packungsbeilage der Urin Kontrolle Natriumazid w
54. on vor kann etwas Farbstoff zur ckbleiben In diesem Fall die Glasbeh lter und Ger te gr ndlich reinigen Technische Updates sind auf unserer Website erh ltlich Erwartete Werte Normalwerte k nnen je nach Patientenpopulation und Laborbedingungen unterschiedlich ausfallen Jedes Labor sollte seinen eigenen Normalbereich bestimmen Bei Verwendung der Pyrogallolrot Methode mit Proben von klinisch gesunden Patienten k nnen Proteinwerte in Liquor zwischen 15 und 45 mg dl und bei lteren Personen bis zu 60 mg dl betragen Urinausscheidung von Protein betr gt normalerweise weniger als 200 mg 24 Stunden bei Volumen von 1000 bis 1500 ml 24 Stunden Normale Urin Stichproben liegen bei O bis 20 mg dl Protein Spezifische Leistungsmerkmale Spezifit t Die Spezifit t des quanTtest red Testverfahrens wurde durch Analyse von Urinproben nach Zugabe von m glichen St rsubstanzen ermittelt H moglobin Eisen und Kupferionen haben sich als st rend erwiesen Die folgende Tabelle enth lt eine Liste der st renden Substanzen Quantimetrix 2005 Manhattan Beach Blvd Redondo Beach CA 90278 1205 USA phone 310 536 0006 fax 310 536 9977 www quantimetrix com page 4 QuanTtest Red Total Protein Assay System Tabelle von St rsubstanzen Zusatzstoff Zugefiigte Konz Gemessene Konz Menge Name mg dl des normalerweise im Urin enthaltenen mg dl Gesamtproteins Keine 29 Harnstoffstickstoff 2300 29 10 5 g Tag Harns ure 300
55. on des prot ines totales dans le liquide c phalorachidien permet le diagnostic des pathologies suivantes m ningite enc phalite poliomy lite neurosyphilis umeurs du SNC et h morragie c r brale Le kit de dosage des prot ines totales quanTtest red offre une m thode simple de quantification des prot ines utilisant des chantillons de quelques microlitres d urine ou de LCR Les prot ines totales sont mesur es par la m thode de liaison du colorant l aide d un complexe rouge de pyrogallol acide molybdique Mo d crite par Fujita et al 2 un pH faible le colorant est rouge et vire au bleu lorsqu il forme un complexe avec les prot ines En fonction de l quipement et de la taille de l chantillon une r ponse lin aire est obtenue jusqu 350 mg dl La m thode de liaison au colorant rouge de pyrogallol peut tre lue au bout de trois minutes ce qui fait que le test peut tre utilis sur des instruments automatiques La sensibilit de la m thode employant le rouge de pyrogallol permet d utiliser le test avec des fluides corporels tels urine et le LCR dont les concentrations en prot ines trop faibles pour tre mesur es avec pr cision par d autres m thodes de dosage des prot ines La m thode du biuret n est pas assez sensible pour permettre une d termination de la prot inurie Les r sultats des m thodes turbidim triques peuvent varier en fonction du type et de la concentration du pr cipitant du type d
56. ons Reagents 1 QuanTtest red Reagent is a ready to use liquid in 250 mL bottles containing Pyrogallol Red Sodium Molybdate Succinic Acid Sodium Benzoate Sodium Oxalate Methanol and Surfactant 2 Protein Standard Solution Set packaged in 30 mL dropper bottles is supplied in four protein concentrations of 25 50 100 and 200 mg dL as an aqueous solution of 70 human serum albumin and 30 human serum globulin in borate buffered saline See accompanying Human Protein Standards package insert Sodium azide has been added as a preservative 3 Liquid Spinal Fluid Controls Levels 1 and 2 supplied 3 mL per bottle See accompanying Spinal Fluid Control package insert Sodium azide has been added as a preservative 4 Liquid Human Urine Controls Levels 1 and 2 supplied 10 mL per bottle See accompanying Urine Control package insert Sodium azide has been added as a preservative 5 Graph Paper 6 Direction Insert applicable products listed below Product Catalog No Contents QuanTtest Red Reagent 5210 12 1x 250 mL QuanTtest Red Total Protein System 2210 02 200 Test Reagen 2 x 250 mL Standards 25 50 100 200 mg dL 1x30 mL each Dropper Spinal Fluid Control Level 1 and 2 1x3 mL each Dropper Urine Chemistry Contol Level 1 and 2 1x10 mL each Materials Required but Not Provided Pipets capable of delivering 20 uL or 50 uL and 2 5 mL Reaction tubes 13 x 100 mm culture tubes are recommended Spectrop
57. ons et contr les 1 Conserver les talons et les contr les entre 2 et 8 C 2 Lorsqu ils sont conserv s entre 2 et 8 C entre deux utilisations les talons et les contr les sont stables jusqu la date de p remption figurant sur l tiquette Ne pas utiliser les talons et les contr les apr s la date de p remption figurant sur chaque tiquette 3 Tout talon ou contr le pr sentant des traces de turbidit ou de contamination microbienne doit tre jet Manipulation des chantillons 1 Sortir les chantillons tester du r frig rateur et attendre qu ils soient temp rature ambiante 18 25 C avant de les analyser 2 Les chantillons d urine ou de LCR peuvent tre utilis s sans autre pr paration Aucun conservateur particulier n est n cessaire 3 Si l chantillon d urine ou de LCR comporte des globules rouges ou des d bris cellulaires centrifuger l chantillon avant de l analyser 4 La prot inurie peut tre d termin e sur des chantillons pr lev s sur 24 heures ou sur un chantillon al atoire 5 Les chantillons d urine peuvent tre conserv s entre 2 et 8 C pendant 24 heures maximum ou congel s pendant 3 mois jusqu ce qu ils soient analys s Les chantillons de LCR peuvent tre 1x30 ml chacun 1x3 ml chacun 1x10 ml chacun Oo BR quanTtest red entre 2 et 8 C et bien ferm Conserver l abri de E conserv s entre 2 et 8 C pendant plusi
58. ote nas Para aumentar el intervalo de linealidad del m todo de an lisis a 350 mg dl de prote nas utilice una muestra de 20 ul v ase la secci n Limitaciones m s abajo Procedimiento de la prueba 1 Deje que el reactivo quanTtest red los est ndares controles y muestras se estabilicen a temperatura ambiente 18 25 C 2 Etiquete los tubos de prueba de cada muestra blanco de reactivo est ndares controles y muestras de paciente objeto de la prueba 3 Pipetee 50 pl 20 pl de cada muestra en el tubo correspondiente Utilice agua destilada o desionizada para el tubo de blanco de reactivo 4 Pipetee con precisi n 2 5 ml del reactivo a cada uno de los tubos Mezcle bien con vortex o agitando los tubos 5 Deje estabilizar la mezcla de reacci n a temperatura ambiente durante por lo menos 15 minutos antes de leer el A600 El color de la mezcla de reacci n es estable hasta 60 minutos 6 Transfiera el blanco de reactivo a una cubeta limpia y ajuste el espectrofot metro para una ectura de cero a 600 nm NOTA Si la cubeta se ti e en el paso 6 el tinte se habr absorbido en el vidrio y deber limpiarse para no obtener resultados err neamente altos Despu s de limpiarlo enju guelo bien con agua destilada o desionizada y s quelo Repita el paso 6 7 Lea cada muestra contra el blanco de reactivo y registre los valores de absorbancia obtenidos 8 Para preparar una curva est ndar trace la absorbancia de cada est
59. pettes de 20 yl ou 50 pl et 2 5 ml Tubes essai il est recommand d utiliser des tubes de culture de 13 x 100 mm Spectrophotom tre pouvant lire l absorbance 600 nm Cuvette verre ou plastique jetable Eau distill e ou d ionis e Instrument Le kit de dosage des prot ines totales quanTtest red requiert l utilisation d un spectrophotom tre manuel ou automatique pouvant mesurer l absorbance 600 nm Consulter le manuel du fabricant pour des instructions sp cifiques sur le fonctionnement et l utilisation de l instrument Les applications de l analyseur automatique sont disponibles sur demande aupr s du Service technique de Quantimetrix Pour utilisation diagnostique in vitro uniquement Avertissements et pr cautions Le r actif quanTtest red est formul avec du m thanol acide Ne pas avaler viter tout contact avec les yeux la peau ou les v tements En cas de contact avec les yeux rincer imm diatement grande eau et consulter un m decin Laver la peau l eau savonneuse Ne pas pipeter la bouche Les talons et les contr les sont formul s partir de produits d origine humaine Toutes les unit s de donneurs de sang utilis es dans le mat riel d origine s rique ont t test es en utilisant des m thodes approuv es par la FDA Elles se sont r v l es non r actives l antig ne de surface de l h patite B ainsi qu aux anticorps de l h patite C et du VIH MAT RIEL PRESENTANT UN RISQUE BI
60. quanTtest red ainsi que les chantillons atteindre la temp rature ambiante 18 25 C 2 tiqueter les tubes essai pour chaque chantillon r actif talons contr les et chantillons de patient tester 3 Pipeter 50 pl 20 pl de chaque chantillon dans d ionis e pour le tube du r actif 4 Pipeter exactement 2 5 ml de r actif dans chaque tube M langer au vortex ou en agitant es tubes 5 Laisser le m lange reposer temp rature ambiante pendant au moins 15 minutes avant de lire la valeur A600 La couleur du m lange est stable pendant 60 minutes maximum 6 Transf rer le r actif dans une cuvette propre et r gler le spectrophotom tre pour lire le zero a 600 nm REMARQUE Si la cuvette se colore l tape 6 le colorant a t adsorb sur le verre et doit tre nettoy sous peine d obtenir des r sultats faussement lev s Apr s nettoyage rincer abondamment l eau distill e ou d ionis e et s cher R p ter l tape 6 7 Lire chaque chantillon par rapport au r actif et noter les valeurs d absorbance obtenues 8 En cas de pr paration d une courbe talon noter l absorbance de chaque talon et la concentration en prot ines correspondante sur le papier millim tr fourni Tracer la droite reliant le maximum de points possible D terminer la concentration en prot ines de l chantillon inconnu de patient en rep rant l absorbance sur la courbe talon et en lisant la concentration en prot ine
61. re in un grafico l assorbanza di ciascuno standard a fronte della concentrazione proteica sulla carta millimetrata fornita Tracciare una linea retta tra i punti Determinare la concentrazione proteica dei campioni paziente sconosciuti individuando i valori di assorbanza sulla curva standard e leggendo le corrispondenti concentrazioni proteiche Se si calcolano i risultati seguire l esempio nella sezione Calcolo dei risultati di seguito Metodi con gli strumenti automatici sistema di analisi della proteina totale quanTtest red stato valutato per l efficacia quando ogni reazione viene letta a intervalli di 3 minuti precisi il che rende il metodo adatto all uso su strumenti automatici Fare riferimento alle applicazioni specifiche dello strumento per il metodo con rosso pirogallolo per istruzioni sull uso del prodotto Per informazioni su queste applicazioni rivolgersi al dipartimento di assistenza ecnica di Quantimetrix o al produttore dello strumento Calcolo dei risultati Le concentrazioni di proteina dell urina o nell FCS sono espresse in mg dl La concentrazione proteica di campioni sconosciuti pu essere determinata individuando assorbanza del campione sulla curva standard e leggendo la concentrazione proteica corrispondente OPPURE pu essere calcolata come segue Calcolo della proteina totale Usare la seguente formula per calcolare le concentrazioni proteiche dei campioni dei pazienti Concentrazione proteica mg dl
62. ry and colorimetry of proteins in urine Clin Chem 1982 28 2328 4 Muir A Hensley WJ Pseudoproteinuria due to penicillins in the turbidimetric measurement of proteins with trichloroacetic acid Clin Chem 1979 25 1662 1663 5 Young GS et al Effect of drugs on clinical laboratory tests Clin Chem 1975 21 1D 6 Martin EW Hazard of Medication Alexander SF Farage DJ Hassan WE Jr eds Philadelphia PA and Toronto Canada JB Lippincott Co 1971 169 189 7 Constantino NV Kabat HF Drug induced modification for laboratory test values revised 1973 Am J Hosp Pharm 1973 30 24 8 Watanabe N Makino K Kamei S Okubo A Yamanaka M Osawa S The Japanese Journal of Clinical Pathology 1984 32 suppl 227 9 Yoshizaki H Osawa S Furuya S The Japanese Journal of Clinical Pathology 1984 32 suppl 227 10 Bradford MM A rapid and sensitive method for the quantization of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein dye binding Anal Biochem 1976 72 248 11 Kingsbury FB Clark CP Williams G Post AL J Lab Clin Med 1926 11 981 12 Meulemans 0 Clin Chem Acta 1960 5 757 13 Saito M Kitamura M Niwa M Rinsho kagaku bunseki Il Tokyo Kagakudojin 1979 21 Spanish Uso previsto El sistema de an lisis de prote nas totales quanTtest red se utiliza para la determinaci n cuantitativa de prote nas en el l quido cefalorraqu deo y en orina para los sistemas manual y autom tico Resumen y explicaci n La determ
63. s ce sujet Limites La lin arit de la m thode de test est tablie jusqu 150 mg dl de prot ines totales sur un chantillon de 50 ul Elle peut tre tendue en r duisant la quantit d chantillon 20 ul La concentration en prot ines totales devient alors lin aire jusqu 350 mg dl La pr cision peut tre accrue en diluant les chantillons dont la concentration en prot ines est plus lev e environ 100 mg dl dans de l eau distill e ou d ionis e en recommen ant le dosage et en corrigeant le r sultat en fonction du facteur de dilution pour le calcul de la concentration en prot ines totales Certains types d agents de surface tensioactifs peuvent affecter la couleur En g n ral les surfactants cationiques donnent la m me couleur que les prot ines tant donn que les anions inhibent la r action de coloration il convient de laver avec soin l quipement en utilisant de l eau distill e jusqu limination totale des agents de surface Bien s cher l quipement avant utilisation L h moglobine g n re environ la moiti de la r action de coloration qu entraine l albumine Les chantillons pr sentant une h maturie donne un r sultat faussement lev Les ions cuivre et fer peuvent provoquer des erreurs de mesure Il convient de prendre toutes les pr cautions pour viter la contamination de l appareil Le r actif contient des composants sensibles la lumi re Conserver l abri de la
64. s correspondante En calculant les r sultats suivre l exemple donn au point Calcul des r sultats ci apr s M thodes utilisant des instruments automatiques L efficacit du kit de dosage des prot ines totales quanTtest red a t valu e lorsque chaque r action est lue des intervalles pr cis de 3 minutes ce qui rend la m thode adapt e une utilisation sur des instruments automatiques Consulter les applications sp cifiques l instrument pour la m thode au rouge de pyrogallol afin de savoir comment utiliser ce produit Contacter le Service technique de Quantimetrix ou le fabricant de l instrument pour conna tre ces applications Calcul des r sultats Les concentrations en prot ines dans l urine ou le LCR sont exprim es en mg dl La concentration en prot ines des chantillons inconnus peut tre d termin e en tablissant l absorbance d un chantillon sur une courbe talon et en lisant la concentration correspondante O peut tre calcul e comme suit Calcul des prot ines totales Utiliser la formule suivante pour calculer les concentrations en prot ines des chantillons de patient Concentration en prot ines mg dl absorbance de l chantillon X concentration de l talon mg dl absorbance de l talon Les chiffres suivants sont donn s titre d exemple uniquement Liquide c phalorachidien e tube ad quat Utiliser de l eau distill e ou chantillon de LCR du patient A600 0 200 50 mg dl Et
65. scorbic Acid 200 28 5 0 1 0 4 mg kg day he concentrations of urine or CSF proteins are expressed in mg dL The protein concentration of Glutathione 50 29 BER unknown samples can be determined by finding the absorbance of the sample on the standard curve Citric Acid 200 29 5 0 3 0 9 mg day and reading the corresponding protein concentration OR can be calculated as follows Oxalic Acid 100 26 15 30 mg day Calculation of Total Protein Tartaric Acid 200 28 Use the following formula to calculate protein concentrations of the patient samples Na 600 30 6 8 4 g day Protein Concentration mg dL absorbance of sample X Concentration of std mg dL K ay a Aik e y d absorbance of standard x le 19 Cay 4 x Ca 100 30 240 320 mg day The following are examples for illustrative purposes only Mg 30 29 70 155 mg day Cerebrospinal Fluid p 200 33 CSF Patient Specimen Agoo 0 200 er o gt a Ir N es 100 g day 50 mg dL Standard Aggg 0 310 Bilirubin 20 30 5 3 08 0 28 mg day 0 200 0 310 X 50 mg dL 32 3 mg dL Precision Urine The precision of the quanTtest red System was established by analyzing a series of Quantimetrix Urine Urine Patient Specimen Agoo 0 120 and Spinal Fluid Controls The assay was calibrated with Quantimetrix standards as included in the kit 25 mg dL Standard Agog 0 165 The reaction was read at 3 minutes and after 15 minutes on a Gilford Stasar Il spectrophotometer 0 120 0 165 X 25 mg dL 18 2 mg dL a 3 minutes
66. thod for the quantization of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein dye binding Anal Biochem 1976 72 248 11 Kingsbury FB Clark CP Williams G Post AL J Lab Clin Med 1926 11 981 12 Meulemans O Clin Chem Acta 1960 5 757 13 Saito M Kitamura M Niwa M Rinsho kagaku bunseki Il Tokyo Kagakudojin 1979 21 German Verwendungszweck Das quanTtest red Gesamtprotein Assaysystem ist zum quantitativen Nachweis von Protein im Liquor cerebrospinalis und Urin f r handbetriebene und automatische Nachweissysteme vorgesehen Zusammenfassung und Erkl rung Die Bestimmung des Gesamtproteingehalts in Urin und Liquor ist ein wertvolles Hilfsmittel bei der Diagnose von Nieren und Zentralnervensystemerkrankungen Erh hte Proteinwerte im Urin treten h ufig bei den folgenden Zust nden auf anstrengende sportliche Bet tigung Fieber und Unterk hlung monoklonale Gammopathien Nephritis und diabetische Nephropathie sowie Harnwegsinfektionen Die Bestimmung des Gesamtproteingehalts in Liquor unterst tzt die Diagnose von Erkrankungen wie Meningitis Enzephalitis Poliomyelitis Neurosyphilis Liquortumoren und Gehirnblutungen Das quanTtest red Gesamtprotein Assaysystem erm glicht den quantitativen Nachweis von Protein in Mikroliter Proben von Urin oder Liquor Der Gesamtproteingehalt wird durch Farbstoffbindung anhand eines Pyrogallolrot Molybd ns ure Komplexes Mo ermittelt der von Fujita et al beschrieben wurde
67. timetrix Please inquire Limitations Linearity of the test method is 150 mg dL of total protein when using a 50 yL sample size Linearity may be extended by decreasing the specimen volume to 20 uL The total protein concentration then becomes linear to 350 mg dL Greater accuracy may be obtained by diluting specimens of higher protein levels to approximately 100 mg dL with distilled or deionized water reassaying and correcting or the dilution factor when calculating the total protein concentration Some types of surface active agents may affect the color Cationic surfactants in general give the same color as proteins Because anions inhibit the color reaction wash the equipment thoroughly using distilled water until no surface active agent remains Dry equipment thoroughly before using Hemoglobin gives about one half the color reaction of albumin Samples exhibiting hematuria will give a falsely elevated value Quantimetrix 2005 Manhattan Beach Blvd Redondo Beach CA 90278 1205 USA phone 310 536 0006 fax 310 536 9977 www quantimetrix com page 2 QuanTtest Red Total Protein Assay System Example Graph 1 000 0 900 0 800 0 700 0 600 0 500 50 uL Sample Absorbance 600 nm 0 400 0 300 HEHH 20 uL Sample 50 100 0 200 0 100
68. to Representante autorizado Estable hasta ultimo d a del mes English Intended Use The quanTtest red Total Protein Assay System is intended for the quantitative determination of protein in cerebrospinal fluid and urine for both manual and automated systems Summary and Explanation Determination of total protein in urine and cerebrospinal fluid is valuable in the diagnosis of renal and central nervous system disorders respectively Urinary protein elevations are commonly seen in the following conditions strenuous exercise fever and hypothermia monoclonal gammopathies nephritis nephrosis and diabetic nephropathy and urinary tract infections Determination of total protein in cerebrospinal fluid aids in the diagnosis of such conditions as meningitis encephalitis poliomyelitis neurosyphilis CNS tumors and cerebral hemorrhage The quanTtest red Total Protein Assay System provides a simple method of protein quantitation using microliter samples of urine or cerebrospinal fluid Total Protein is measured by the dye binding method using a complex of pyrogallol red and molybdenum acid Mo described by Fujita et al At low pH he dye is red and changes to blue when complexed with protein Depending on the equipment and sample size used a linear response is attained up to 350 mg dL The Pyrogallol Red dye binding method can be read at three minutes making the test suitable for automated instrumentation The sensitivity of the Pyrogallol R
69. ture 18 25 C before testing 2 Urine or cerebrospinal fluid samples may be suitable for use without additional sample preparation No special preservatives are required 3 Should any blood cells or cellular debris be present in either the urine or spinal fluid specimen centrifuge the specimen prior to testing 4 Urinary protein may be determined on a 24 hour collection or on a random specimen 5 Urine specimens may be stored at 2 8 C for up to 24 hours or frozen up to 3 months until assayed CSF specimens may be stored at 2 8 C for several days or frozen for months until assayed Procedure The protein concentration of unknown specimens can be determined by finding the absorbance of the specimen on a standard curve and reading the corresponding protein concentration or can be calculated using a one point calibration see Calculation of Results below To prepare the standard curve plot the absorbance obtained for each standard against its respective protein concentration in mg dL If using the calculation method to determine the protein concentration of unknown specimens use the standard that approximates the concentration of the specimen being tested e g when testing normal CSF specimens measure the 50 mg dL standard and when testing normal urine specimens measure the 25 mg dL standard If the protein concentration of the specimen is higher or lower than these concentrations use the standard which most closely approximates the protein con
70. urde als Konservierungsmittel hinzugef gt 5 Millimeterpapier 6 Anweisungsbeilage zutreffende Produkte siehe unten Produkt Katalog Nr Inhalt QuanTtest red Reagenz 5210 12 1 x 250 ml QuanTtest red Gesamtprotein Assaysystem 2210 02 200 Test Reagenz 2x 250 ml Standards 25 50 100 200 mg dl je1x30ml Dropper Spinal Fluid Control Level 1 and 2 je1x3ml Dropper Urine Chemistry Contol Level 1 and 2 je1x10ml Erforderliche Materialien nicht im Lieferumfang enthalten 1 Pipetten zur Abgabe von 20 pl oder 50 pl und 2 5 ml 2 Reagenzgl ser 13 x 100 mm Kulturr hrchen werden empfohlen 3 Spektrophotometer zum Ablesen der Extinktion bei 600 nm 4 K vette Glas oder Plastik Einmalprodukt 5 Destilliertes oder deionisiertes Wasser Instrumente Das quanTtest red Gesamtprotein Assaysystem ben tigt ein handbetriebenes oder automatisches Spektrophotometer das Extinktionen bei 600 nm ermitteln kann Die jeweiligen Herstelleranweisungen zu Betrieb und Anwendung beachten Anweisungen f r Analyseautomaten sind auf Anfrage vom technischen Kundendienst von Quantimetrix erh ltlich Nur zur n vitro Diagnostik Warnhinweise und Vorsichtsma nahmen Das quanTtest red Reagenz ist mit anges uertem Methanol angesetzt Nicht schlucken oder einnehmen Augen und Hautkontakt sowie Kontakt mit der Kleidung vermeiden Bei Kontakt sofort Augen mit Wasser aussp len und rztliche Hilfe einholen Haut mit Wasser und Seife wasch
71. veau 2 62 5 2 5 4 0 61 8 2 5 4 1 LCR niveau 1 36 3 2 9 7 9 35 3 3 3 9 4 LCR niveau 2 66 7 2 1 3 2 65 2 3 3 5 1 Lecture 15 minutes Intracycle n 10 Inter cycles n 18 Moyenne ET CV Moyenne ET CV mg dl mg dl Urine niveau 1 15 2 0 4 2 6 15 5 1 3 7 5 Urine niveau 2 63 3 3 0 48 62 8 1 9 3 1 LCR niveau 1 36 7 2 6 7 2 35 9 3 4 9 5 LCR niveau 2 69 6 2 6 3 7 68 0 2 6 3 9 Exemple de courbe 1 000 0 900 0 800 g 0 700 E s 0 600 o 3 0 500 2 2 Tr lt 0400 0 300 q 20 uL Sample 0 200 0 100 50 100 150 200 250 300 350 400 450 500 Total Protein Concentration mg dL Corr lation La comparaison d une m thode quanTtest red avec une m thode utilisant le bleu de Coomassie Quantimetrix pour la d termination prot inique donne les valeurs de corr lation suivantes sur 29 chantillons d urine de patients n 29 Moyenne Coefficient de corr lation r Pente Intercept Bleu de Coomassie 43 04 0 9923 1 05 0 18 quanTtest red 45 20 R f rences 1 Pesce AJ Kaplan LA Methods in Clinical Chemistry CV Mosby Co 1987 2 Fujita Y Mori I Kitano S Bunseki Kagaku 1983 32 379 3 Lievens MM Celis PJ Drug interference in turbidimetry and colorimetry of proteins in urine Clin Chem 1982 28 2328 4 Muir A Hensley WJ
72. water and dry Repeat Step 6 7 Read each sample against the Reagent blank and record the absorbance values obtained 8 If preparing a standard curve plot the absorbance of each standard against its protein concentration on the graph paper provided Draw the best fit straight line through the points Copper and iron ions can cause errors in measurement Special care should be taken to avoid contamination of the apparatus The Reagent contains light sensitive components Protect from light The quanTtest red system may underestimate low molecular weight proteins and immunoglobulin lightchains Bence Jones Proteins In routine use cuvettes culture tubes and equipment are rarely stained However when many specimens are run at the same time or if a specimen containing a high concentration of protein is tested some of the dye may remain If this occurs clean glassware and equipment thoroughly Technical updates can be found on our website Expected Values Normal ranges may vary according to patient population and laboratory conditions Each laboratory should establish its own normal range Using the Pyrogallol Red method on specimens from clinically healthy subjects protein levels in cerebrospinal fluid can be expected to range from 15 to 45 mg dL and up to 60 mg dL in healthy elderly subjects Urinary excretion of protein is normally less than 200 mg 24 hours in volumes of 1 000 to 1 500 mL 24 hours Random normal
73. werden 5 Urinproben k nnen bei 2 bis 8 C bis zu 24 Stunden oder gefroren bis zu 3 Monate vor dem Test aufbewahrt werden Liquorproben k nnen bei 2 bis 8 C mehrere Tage oder gefroren mehrere Monate lang vor dem Test aufbewahrt werden Verfahren Die Proteinkonzentration unbekannter Proben kann durch Feststellung der Probenextinktion auf einer Standardkurve und Ablesen der entsprechenden Proteinkonzentration oder durch Ein Punkt Kalibrierung bestimmt werden siehe Berechnung der Ergebnisse unten Eine Standardkurve kann durch Aufzeichnen der Extinktion jedes Standards gegen ber der entsprechenden Proteinkonzentration in mg dl erstellt werden Wird die Proteinkonzentration unbekannter Proben durch die Berechnungsmethode bestimmt sollte der Standard verwendet werden der der Konzentration der zu testenden Probe am ehesten entspricht d h beim Testen normaler Liquorproben sollte der 50 mg dl Standard und beim Testen normaler Urinproben der 25 mg dl Standard verwendet werden Wenn die Proteinkonzentration der Probe h her oder niedriger als diese Konzentrationen ist solite der Standard verwendet werden der der Konzentration der zu testenden Probe am ehesten entspricht Der Proteingehalt kann entweder mit einer 20 pl oder 50 pl groBen Probe gemessen werden Die 50 ul Probe ergibt einen Linearbereich bis zu 150 ml dl Protein Um den Linearit tsbereich der Testmethode auf 350 mg dl zu erweitern sollte eine 20 uL Probengr e verwendet
74. werden siehe Abschnitt Einschr nkungen unten Testverfahren 1 QuanTtest red Reagenz Standards Kontrollen und Proben aus dem K hlschrank nehmen und auf Raumtemperatur 18 bis 25 C bringen 2 Testrdhrchen f r jede Probe beschriften Reagenzienleerwert Standards Kontrollen und Ur den Test vorgesehene Patientenproben 3 50 uL 20 uL jeder Probe in das entsprechende R hrchen pipettieren F r den Reagenzienleerwert destilliertes oder deionisiertes Wasser verwenden 4 Exakt 2 5 ml Reagenz in jedes R hrchen pipettieren Den R hrcheninhalt durch Vortexieren oder Sch tteln gut mischen 5 Vor dem Ablesen der Extinktion A600 die Reaktionsmischung mindestens 15 Minuten lang bei Raumtemperatur stehen lassen Die Farbe der Reaktionsmischung ist bis zu 60 Minuten stabil 6 Den Inhalt des Reagenzienleerwerts in eine saubere K vette berf hren und das Spektrophotometer bei 600 nm auf Null justieren HINWEIS Falls sich die K vette in Schritt 6 einf rbt wurde Farbstoff an das Glas adsorbiert und muss zur Vermeidung von verf lscht hohen Ergebnissen gereinigt werden Nach der Reinigung gr ndlich mit destilliertem oder deionisiertem Wasser aussp len und trocknen Schritt 6 Wiederholen 7 Jede Probe gegen den Reagenzienleerwert lesen und die erhaltenen Extinktionswerte notieren 8 Beim Erstellen einer Standardkurve muss die Extinktion jedes Standards gegen ber der entsprechenden Proteinkonzentration auf dem mitgelieferte

QuanTtest Red Total Protein Assay System

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