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BD GeneOhm™ StrepB

1. All positive specimens have varying amounts of GBS R Specimen initially unresolved but upon retesting gave the expected result All replicates we tested as a single run instead of three separate runs of 10 specimens and 2 controls P0001 02 Specimen ID Site 1 Site 2 Site 3 RA e Negative 9 9 9 9 9 9 27 27 100 Negative 9 9 9 9 9 9 27 27 100 Weak positive 3 9 7 9 8 9 18 27 66 Weak positive 8 9 9 9 9 9 26 27 96 Positive 8 9 9 9 9 9 26 27 96 Positive 9 9 9 9 9 9 27 27 100 Positive 9 9 9 9 9 9 27 27 100 Strong positive 9 9 9 9 9 9 27 27 100 Strong positive 9 9 9 9 9 9 27 27 100 Strong positive 9 9 9 9 9 9 27 27 100 Pos Control 3 3 9 9 9 9 21 21 100 Neg Control 3 3 9 9 9 9 21 21 100 Total agreement 88 96 106 108 107 108 301 312 96 5 agreement 91 6 98 1 99 1 96 5 BD Diagnostics BD GeneOhm StrepB Francais Indication Le test BD GeneOhm StrepB est un test qualitatif de diagnostic in vitro pour la d tection rapide de l ADN de streptocoques du groupe B SGB dans des chantillons vagino rectaux pr lev s chez des femmes au stade prepartum ou intrapartum Le test r alis sur le SmartCycler exploite la r action de polym risation en cha ne PCR Polymerase Chain Reaction pour amplifier une s quence du gene cfb pr sent chez les streptocoques du groupe B retrouv s dans les pr l vements cliniques et l hybridation de sondes fluorog niques sp cifiques la cible afin de
2. Avvertenza e L utilizzo di BD GeneOhm StrepB per lo screening intrapartum non dovrebbe precludere l utilizzo di altre strategie ad es test antepartum risultati intrapartum di BD GeneOhm StrepB sono utili per identificare le candidate alla profilassi antibiotica intrapartum quando i risultati possono essere disponibili in tempo per somministrare antibiotici per via endovenosa almeno 4 ore prima del parto e Il saggio BD GeneOhm StrepB non fornisce risultati di suscettibilit necessario altro tempo per coltivare ed eseguire test di suscettibilit che sarebbero consigliati per donne allergiche alla penicillina Principio della procedura Il target genetico del saggio BD GeneOhm StrepB il gene cfb Questo gene codifica il fattore CAMP una proteina diffusibile extra cellulare che presente in quasi tutti gli isolati di GBS Il rilevamento del fattore CAMP utilizzato per l identificazione presuntiva di GBS con metodi biochimici Le caratterizzazioni fenotipica e molecolare hanno mostrato che il gene cfb ben conservato all interno di questa specie Sono stati sviluppati primer complementari a regioni conservate e specifiche del gene per amplificare un frammento 154 bp del gene cfb P0001 02 55 BD Diagnostics BD GeneOhm StrepB Un tampone vaginale rettale prelevato e trasportato al laboratorio utilizzando il tampone consigliato con mezzo liquido di Stuart fare riferimento a Materiali necessari m
3. El software asigna autom ticamente la posici n de los controles en el instrumento consulte el Manual del operador del Software Dx de SmartCycler Controles de procesamiento de las muestras Se pueden analizar cepas de control de acuerdo con las pautas o requisitos del reglamento local estatal y o federal o de organizaciones acreditadoras Pueden utilizarse un cultivo de Streptococcus grupo B p ej S agalactiae American Type Culture Collection ATTC 12973 o una cepa aislada bien caracterizada de S agalactiae como control de procesamiento de muestras mientras que pueden usarse un cultivo de Streptococcus bovis p ej ATCC 33317 o de cualquier otro Streptococcus que no sea del grupo B como control negativo externo Transfiera 3 colonias de 1 2 mm de tama o de una placa de agar sangre de carnero a 3 mL de caldo tripticasa soja y d jelas crecer hasta un di metro exterior de 0 6 mm a 600 nm Prepare diluciones seriadas en soluci n salina para obtener una suspensi n bacteriana de aproximadamente 10 UFC mL Sumerja la torunda recomendada con medio Stuart l quido consulte la secci n Material necesario pero no suministrado en la suspensi n bacteriana vuelva a colocar la torunda en su recipiente para permitir el contacto con el medio de transporte d jelo reposar a temperatura ambiente durante 5 minutos y luego proc selo y anal celo como una muestra cl nica Consulte las secciones tituladas Preparaci n de muestras y Procedimien
4. StrepB se determin en un estudio experimental prospectivo en m ltiples establecimientos cinco instituciones con servicios de maternidad 2 en Canad y 3 en los EE UU Cada instituci n ten a implantado un programa de detecci n sistem tica mediante cultivo Las pruebas se realizaron en laboratorios cl nicos asociados a cada instituci n Para participar en el estudio las mujeres ten an que dar su consentimiento por escrito estar de parto y no tener ninguna contraindicaci n para el examen vaginal p ej hemorragia Tampoco pod a haber indicios de placenta previa ni indicaci n urgente para efectuar el parto ni haber tomado antibi ticos la semana anterior al ingreso hospitalario El estudio no tuvo en cuenta la duraci n de parto de las pacientes El m todo de referencia utilizado fue la t cnica de cultivo recomendada por los Centros para el Control y la Prevenci n de Enfermedades es decir cultivo microbiol gico en medio selectivo medio Todd Hewitt enriquecido con 15 ug mL de cido nalid xico y 10 ug mL de colistina o con 8 ug mL de gentamicina y 15 ug mL de cido nalidixico otros medios de cultivo ofrecidos en el mercado incluyen el medio SBM o el medio Lim seguido de incubaci n durante la noche y subcultivo en medio s lido de agar sangre Se realiz la identificaci n espec fica de colonias que parecen indicar SGB con pruebas de aglutinaci n en portaobjetos Ochocientas ochenta y un 881 mujeres dieron su consentimie
5. faible vitesse e Bloc chauffant sec pour des tubes de 1 5 mL ou bain marie e Glace ou bloc r frig rant pour tubes de 1 5 mL e Chronometre ou minuterie e Systeme SmartCycler de d marrage starter system avec logiciel Dx Diagnostic bloc analyseur manuel d utilisation trousse d accessoires et ordinateur Cepheid Sunnyvale CA USA P0001 02 20 BD Diagnostics BD GeneOhm StrepB Mode d emploi Pr levement des chantillons Afin d obtenir des chantillons convenables les instructions de pr l vement ci dessous doivent tre suivies avec soin En se servant de l couvillon recommand avec milieu Stuart liquide voir la section Mat riel n cessaire mais non fourni proc der au pr l vement d chantillon vagino rectal comme suit 1 Essuyer tout surplus de s cr tion ou tout coulement vaginal 2 Ins rer soigneusement l couvillon dans le premier tiers du vagin et pr lever un chantillon des s cr tions de la muqueuse 3 Ins rer soigneusement ce m me couvillon a environ 2 5 cm au dela du sphincter anal puis le faire pivoter d licatement Replacer l couvillon dans sa gaine protectrice Identifier chantillon Acheminer au laboratoire suivant les m thodes d op rations normalis es de l h pital prot ger de la chaleur excessive les chantillons devant tre envoy s un laboratoire externe 7 Au laboratoire conserver les chantillons a temp rature ambian
6. Y BD BD GeneOhm StrepB REF 441240 IVD P0001 02 Date Datum Fecha Data 2014 05 BD Diagnostics BD GeneOhm StrepB Table of Contents Tables des Matieres Inhaltstabelle Indice Indice Engis EE 5 18 Intended Usein i a pe Sei ee Lai 5 Summary and explanation of the test 5 Warning BEE 5 Principle of the procedure ss 5 Reagents tocino vi een RIN a ee ee E one ann at De in ed ii 6 Pr cautions ariani es eae a A a edt 7 Materials provided nan nn coran n nr aran nn rana n nara r anna rara n nn rre nera rann nn r anne 8 Storage handling and stability 8 Collected specimen 8 Reagents 8 Materials required but not provided 8 Instructions for USC sec seca tees tae eee A ay ead ete a eda ee 9 Specimen collection 9 Specimen preparation 9 BD GeneOhm StrepB assay procedure 10 Quality Control ss sacs aces aht seats ila RE eats eke i ea A 10 Positive and negative controls 10 Specimen processing controls 11 Antimicrobial susceptibility testing for penicillin allergic patients Rn 11 Interpret tion f results u u unter nn ne de te OS ar eh eae eet ea uen 11 Invalid assay Run 11 Unresolved specimens 11 Specimen not determined due to I CORE module failure 12 Limitations of the procedure sr 12 iIntertering SUBSTANCES gege ra 12 Expected val es 2 2 2 22er ran ir 13 Performance charactertstics ttn ttnSttEEAEEAEESEEEEEEEAEAEEEEEEEEEEESEEE EEE
7. 94 98 93 97 Intervalles de confiance binomiaux a 95 Specificite analytique L ADN g nomique de 99 souches ATCC repr sentant 27 esp ces de streptocoques d autres esp ces phylog n tiquement li es S agalactiae d autres bact ries et levures souvent pr sentes dans la flore vaginale et rectale ainsi que l ADN humain ont t test s Parmi les micro organismes analys s 9 pr sentaient une activit pseudo CAMP sans poss der le g ne cfb Pour l ADN microbien la concentration utilis e tait de 1 5 ng l quivalent de 2 x 10 copies de g nome par PCR ou de 10 copies de g nome par millilitre Pour l ADN humain les concentrations utilis es variaient de 75 233 ng jusqu 1 4 x 10 copies de g nome par r action ou 10 copies du g nome par millilitre La sp cificit a t tablie 100 Sensibilit analytique La sensibilit analytique seuil de d tection du test BD GeneOhm StrepB a t d termin e partir de 12 souches de S agalactiae repr sentant 11 s rotypes ou variants connus Des cultures talonn es et des ADN g nomiques purifi s ont t dilu s dans le tampon d chantillon et test s en cinq exemplaires Le seuil a t d fini comme la plus faible concentration laquelle tous les r plicats se sont r v l s positifs Le seuil de d tection du test BD GeneOhm StrepB l gard de S agalactiae des s rotypes et des variants la Ib c Il IIc IIR Il
8. Carbohydrate lt 0 001 non infectious genomic GBS DNA with the cfb gene Negative Control 50 tubes lt 0 001 DNA polymerase complex P0001 02 _6 BD Diagnostics BD GeneOhm StrepB lt 0 001 Internal Control non infectious DNA containing GBS primers binding sequences and a unique sequence for probe hybridization lt 0 001 primers lt 0 002 molecular probes lt 0 05 dATP dCTP dGTP dTTP Bovine serum albumin Carbohydrate lt 0 005 non infectious genomic DNA from Streptococcus pneumoniae Diluent 50 x 1 mL Tris HCI buffer MgCl NH4 2S04 Precautions This test is for in vitro diagnostic use only e Do not use the kit if the outer carton safety seal is broken e Do not use reagents if the protective pouches are open or torn upon arrival e Close protective pouches of Master Mix and Controls quickly with the zip seal after each use e Do not use reagents if desicant is not present inside Master Mix and Control pouches e Do not remove desiccant from Master Mix and Control pouches e Reagents are not interchangeable between lots Never pool reagents from different tubes even if they are from the same lot e Do not use the reagents after their expiration date e Do not interchange caps among reagents as contamination may occur and compromise test results e Avoid microbial and deoxyribonuclease DNAse contamination of reagents when removing aliquots from tubes The use of sterile DNAse free dispos
9. an der Studie teilzunehmen Von ihnen wurden 78 ausgeschieden weil die Frau es sich entweder anders berlegt hatte oder nicht in Wehen lag oder wegen Abweichungen vom Protokoll Daher wurden die Leistungscharakteristika von BD GeneOhm StrepB aus den Ergebnissen von 803 Intrapartum Mutterschaftspatientinnen ermittelt Zwei vaginale rektale Proben von jeder Intrapartum Mutterschaftspatientin wurden mit dem empfohlenen Tupfer mit Fl ssigem Stuart Medium entnommen siehe Materlalien welche ben tigt aber nicht mitgeliefert werden und zwar unter Anwendung der CDC empfohlenen Vorgehensweise Ein Tupfer wurde mit der CDC empfohlenen Kulturtechnik getestet und ein Tupfer wurde mit der BD GeneOhm StrepB Test getestet Die Ergebnisse der Studien sind inTabellen 1 bis 4 dargestellt Tabelle 1 Ergebnisse welche mit dem BD GeneOhm StrepB Test erhalten wurden im Bezug auf die Kulturtechnik BD GeneOhm StrepB Test Positiv Negativ Gesamt Positiv 140 9 149 Kulturtechnik A S Negativ 27 626 653 Gesamt 167 635 802 gt Vierzehn 14 Proben waren zuerst kulturnegativ zeigten sich aber nach einer Untersuchung als kulturpositiv 1 von 14 war zuerst ungel st gab aber nach erneutem Testen ein positives Ergebnis 3 Proben welche sich zuerst mit dem BD GeneOhm StrepB Test als positiv zeigten wurden wegen ung ltigen Kontrollen positiv und negativ erneut getestet un
10. derselben Charge bei 2 8 C aufbewahrt werden Falls der Beutel nach jedem Gebrauch richtig mit dem Reissverschluss verschlossen wird Master Mix und Controls Satzbestandteile ausserhalb des Schutzbeutels weisse rote oder gr ne Etiketten Nicht Temperatur 15 25 C wiederhergestellte R hrchen Stabilit t 2 Stunden P0001 02 32 BD Diagnostics BD GeneOhm StrepB Materialien welche benotigt aber nicht mitgeliefert werden e BBL CultureSwab Liquid Stuart n 220099 au catalogue Becton Dickinson Ecouvillons Copan Transystem Liquid Stuart n 141C USE au catalogue Copan Italia International Copan Venturi Transystem Liquid Stuart n 141C US au catalogue Copan Diagnostics Inc HealthLink TransPorter single Liquid Stuart n 4432 au catalogue HealthLink e Vortex Genie 2 Fisher mit Mikror hrchenhalter oder hnlichem zum Bearbeiten von mehrfachen Proben Adapter mit mehrfachen Halterungen k nnen angewandt werden Mikropipetten Genauigkeit zwischen 1 50 uL Sterile DNAse freie Pipettenspitzen mit Filterblockierung oder positiver Verdr ngung Scheren Gaze Einweg Handschuhe ungepudert Mikrozentrifuge f r Zentrifugierung bei niedriger Geschwindigkeit Trockener Erhitzungsblock f r 1 5 mL R hrchen oder Wasserbad Eis oder Kthlblock f r 1 5 mL R hrchen Stoppuhr oder Timer SmartCycler Startersystem mit Diagnostik Software Verarbeitungsblock Gebrauchsanl
11. oo 9 9 27 27 100 positiv 9 9 oo 9 9 27 27 100 stark positiv 9 9 9 9 9 9 27 27 100 stark positiv 9 9 9 9 9 9 27 27 100 stark positiv 9 9 9 9 9 9 27 27 100 pos Kontrolle 3 3 9 9 9 9 21 21 100 neg Kontrolle 3 3 9 9 9 9 21 21 100 Ee 88 96 106 108 107 108 301 312 96 5 s 91 6 98 1 99 1 96 5 A S mtliche positiven Proben haben verschiedene Mengen von GBS B Die Probe war zuerst ungel st gab aber bei wiederholtem Testen das erwartete Ergebnis Alle Repliken wurden als ein einziger Durchlauf getestet und nicht als drei Durchl ufe mit je 10 Proben und 2 Kontrollen P0001 02 41 BD Diagnostics BD GeneOhm StrepB Espanol Indicaciones de uso La prueba BD GeneOhm StrepB es una prueba diagn stica cualitativa in vitro para la detecci n rapida de ADN de Streptococcus del grupo B SGB en muestras vaginales rectales de mujeres tomadas antes o durante el parto La prueba se realiza en un SmartCycler y utiliza la reacci n en cadena de la polimerasa PCR por sus siglas en ingl s para la amplificaci n de una secuencia del gen cfb de SGB obtenida de muestras clinicas y una hibridaci n fluorogenica especifica para la diana que permite la detecci n del ADN amplificado La prueba BD GeneOhm StrepB puede utilizarse para establecer el estado de colonizaci n de SGB en mujeres antes y durante el parto Resumen y explicacion de la prueba Se obtiene una muestra vaginal rectal y se tr
12. r jede Probe die getestet werden soll ben tigt Die ben tigte Anzahl von R hrchen aus dem Schutzbeutel entnehmen bersch ssige Luft hinausdr cken und den Beutel rasch mit dem Reissverschluss schliessen 1 Das Sammelger t Tupfer in ein Probenpuffer R hrchen geben blauer Verschluss Den Probenpuffer auf dem Verschluss und oder dem R hrchenetikett identifizieren 2 Den Tupferstab brechen und das R hrchen fest verschliessen Den Tupfer am Stab nahe dem R hrchenrand halten Gaze anwenden um das Risiko von Verunreinigung auf ein Mindestmass zu halten Den Tupfer ein paar Millimeter mm vom Boden des R hrchens abheben und den Stab gegen den Rand des R hrchens dr cken um ihn zu P0001 02 33 BD Diagnostics BD GeneOhm StrepB 5 ver 9 brechen Alternativmethode Den Stab mit sauberen Scheren durchschneiden Sicherstellen dass der Verschluss dicht schliesst 5 Minuten lang stehen lassen Vortex bei Hochgeschwindigkeit 15 Sekunden Um mehrfache Proben zu bearbeiten kann man Adapter mit mehrfachen Halterungen anwenden 50 uL der Zellensuspension in das Lyser hrchen transferieren gelber Verschluss fest schliessen Fur jede Probe eine neue Mikropipettenspitze anwenden Vortex bei Hochgeschwindigkeit 5 Minuten Um mehrfache Proben zu bearbeiten kann man Adapter mit mehrfachen Halterungen anwenden Das Lyser hrchen kurz zentrifugieren Quick Spin Bei niedriger Geschwindigkeit f r 2 bis 5 S
13. 9 9 9 9 9 27 27 100 Fortemente positivo 9 9 9 9 9 9 27 27 100 Fortemente positivo 9 9 9 9 9 9 27 27 100 Controllo pos 3 3 9 9 9 9 21 21 100 Controllo neg 3 3 9 9 9 9 21 21 100 Accordo totale 88 96 106 108 107 108 301 312 96 5 accordo 91 6 98 1 99 1 96 5 BD Diagnostics BD GeneOhm StrepB References R f rences Referenzen Referencias Riferimenti 1 Schrag SJ Zywicki S Farley MM Reingold AL Harrison LH Lefkowitz LB Hadler JL Danila R Cieslak PR Schuchat A Group B streptococcal disease in the era of intrapartum antibiotic prophylaxis N Engl J Med 2000 342 15 20 Centers for Disease Control and Prevention Prevention of perinatal group B streptococcal disease Revised guidelines from CDC MMWR 2002 51 RR 11 1 22 Watt JP Schuchat A Erickson K Honig JE Gibbs R Schulkin J Group B streptococcal disease prevention practices of obstetrician gynecologists Obstet Gynecol 2001 98 7 13 Hager WD Schuchat A Gibbs R Sweet R Mead P and Larsen WL Clinical commentary Prevention of perinatal group B streptococcal infection Current controversies Obstet Gynecol 2000 96 141 45 5 Wilkinson HW CAMP disk test for presumptive identification of group B streptococci J Clin Microbiol 1977 6 42 5 Podbielski A Blankenstein O Lutticken R Molecular characterization of the cfb gene encoding group B streptococcal CAMP factor Med Microbiol Immunol 1994 183 239 56 Centers for Disease Cont
14. CDC erh ltlich Auswertung der Ergebnisse Der Entscheidungs Algorithmus f r den BD GeneOhm StrepB Satz ist in der SmartCycler Software eingebettet Die Satzergebnisse werden nach den folgenden Kriterien bewertet i Berichtetes IC e PS s Interpretation des Ergebnisses Tests ergebnis Ergebnis PASS Keine GBS DNA gefunden angenommen als negativ auf GBS NEG NEG _ oder die Anzahl der Organismen k nnte sich unterhelb der Grenze BESTANDEN A f r den Test befinden POS POS NA NZ GBS DNA festgestellt angenommen als positiv auf GBS Unresolved FAIL A Ungel st VERFEHLT Ungel st hemmende Probe oder Reagenzdefekt Nicht festgestellt wegen I Core Modulfehlschlag mit Warnungs SEND SEN oder Fehlerkoden IK Interne Kontrolle NZ nicht zutreffend NF nicht festgestellt A Lesen Sie in der SmartCycler Dx Software Gebrauchsanleitung Uber die Interpretation von Warnungs und Fehlerkoden nach Eine ung ltige positive oder negative Kontrolle macht den Pr fdurchlauf ung ltig In solchen F llen sind die Pr fergebnisse von diesem Durchlauf ung ltig und sollen nicht berichtet werden Ung ltige Pr fdurchl ufe oder Instrument Fehlerkoden oder Warnungen werden auf dem Bildschirm und in Berichten beflaggt Vor dem Berichten der GBS Ergebnisse muss man immer sicherstellen dass der Pr fdurchlauf g ltig ist Lesen Sie in der SmartCycler Dx Software Gebrauchsanleitung
15. Cultivo negativo Tiempo o i iranse rrido BD BD BD BD de EES horas GeneOhm GeneOhm GeneOhm GeneOhm 95 IC positivo negativo negativo positivo 0a4 11 3 88 4 93 87 97 4a8 32 3 220 10 95 92 97 8a12 9 0 29 2 95 83 99 12 a 24 41 2 143 4 97 93 99 24 a 48 35 0 127 7 96 92 98 gt 48 12 1 19 0 97 84 100 Total 140 9 626 27 96 94 97 Todas las muestras ten an una carga bacteriana por debajo del limite de detecci n de BD GeneOhm StrepB Todas las muestras conten an la regi n diana adecuada incluyendo las regiones de uni n de los cebadores del gen cfb y el producto amplificado fue el esperado con BD GeneOhm StrepB La ruptura de la membrana no afect la eficacia de la prueba BD GeneOhm StrepB Utilizando la presencia o ausencia de l quido amni tico y o meconio en las muestras obtenidas como indicaci n de ruptura de la membrana la sensibilidad y especificidad de la prueba BD GeneOhm StrepB son las mismas utilizadas antes o durante el parto Tabla 4 Tabla 4 Eficacia de la prueba BD GeneOhm StrepB antes y durante el parto Sensibilidad Antes del parto 95 53 56 Especificidad 96 301 315 de concordancia 95 354 371 85 99 93 98 93 97 94 87 93 96 325 338 96 412 431 Durante el parto 86 98 94 98 93 97 Intervalos de confianza del 95 por
16. E nr nee Den ed o lieto a ia ii a i RO e ess 55 Principio della procedura sers 55 Reagen actes dalai alain earn 56 Precauzioni iii ci ii A la 57 Materlallto rn ici 58 Conservazione trattamento e stabilit 000000nnnnannnnonnnnannennsnnnrnnnesnsrrriinnnnsnsrrrnrnnnssnnrirnrnnnesenne 58 Campione prelevato 58 Reagenti 58 Materiali necessari ma non forniti ss 58 IStrUZIONI ERT iii aaa 59 Prelievo di campioni 59 Preparazione del campione 59 Procedura di saggio BD GeneOhm StrepB 60 Controllo digualit EE 61 Controlli positivi e negativi 61 Controlli di trattamento dei campioni 61 Test di suscettibilit antimicrobica per pazienti allergiche alla penicillina 61 Interpretazione dei resultat 61 Analisi del saggio non valida 62 Campioni non chiari 62 Campione non determinato a causa di problema del modulo I CORE 62 Limiti della procedura eee 62 Sostanze interferenti re ne RIA Va dede da ed du de da due da 63 Ee NR E TEE 63 Caratteristiche prestazionali nare ee geet take iaia 64 Prestazioni cliniche 64 Specificit analitica 65 Sensibilit analitica 65 Riproducibilit 66 References R f rences Referenzen Referencias Riferimenti ranas 67 Index of symbols Table des symbols Symbolindex Indice de s mbolos Indice de
17. GeneOhm StrepB La prevalencia general en la poblaci n estudiada fue del 18 6 con un intervalo del 9 1 al 28 7 en las diferentes instituciones clinicas El valor de predicci n negativo fue de 98 6 95 IC 97 3 99 3 y el valor de predicci n positivo fue de 83 8 95 IC 77 4 89 1 Tabla 2 Eficacia clinica de la prueba BD GeneOhm StrepB en relaci n con la t cnica de cultivo recomendada por los CDC Sensibilidad clinica Especificidad clinica N LF NEO Centro 1 93 n 15 68 100 93 n 150 87 96 5 2 55 Centro 2 88 n 25 69 97 100 n 62 97 100 0 0 38 Centro 3 99 n 77 93 100 97 n 350 94 98 1 1 56 Centro 4 85 n 13 54 98 100 n 35 98 100 1 1 21 Centro 5 89 n 19 67 99 93 n 56 82 98 3 1 22 Total 194 n 149 89 97 96 n 653 94 97 10 5 192 Alntervalos de confianza del 95 por el m todo de exacto binomial BTodas las muestras quedaron sin resolver debido a controles internos fallidos que revelan la inhibici n de la PCR o defecto de reactivo Nueve 9 de las 10 fueron resueltas tras ser sometidas a otra prueba P0001 02 52 BD Diagnostics BD GeneOhm StrepB Tabla 3 Estratificaci n de los resultados de acuerdo con el tiempo transcurrido entre la obtenci n de muestras y el an lisis con la prueba BD GeneOhm StrepB b Cultivo positivo
18. IC il molecular beacon contiene il fluoroforo TET all estremit 5 e l inibitore DABCYL all estremit 3 Ciascun ibrido target beacon diventa fluorescente ad una lunghezza d onda caratteristica del fluoroforo utilizzato nel particolare molecular beacon La quantit di fluorescenza in qualsiasi dato ciclo o nei cicli seguenti dipende dalla quantit di sequenze amplificate specifiche presenti in tale momento Lo SmartCycler esegue simultaneamente il monitoraggio della fluorescenza emessa da ciascun beacon interpreta tutti i dati e alla fine del programma di ciclo fornisce un risultato finale vedere Interpretazione dei risultati Reagenti Saggio BD GeneOhm StrepB 50 test Tampone Sample buffer 60 x 1 mL Soluzione tampone EDTA tris Provetta di lisi Lysis tube 50 provette Perle di vetro Master mix Master Mix 50 provette lt 0 001 complesso polimerasi DNA lt 0 001 controllo interno DNA non infettivo contenente sequenze di legame di primer GBS e una sequenza unica per l ibridizzazione delle sonde lt 0 001 primer lt 0 002 sonde molecolari lt 0 05 dATP dCTP dGTP dTTP Siero albumina bovina Carboidrati lt 0 005 DNA genomico non infettivo da Streptococcus pneumoniae Controllo positivo Positive Control 50 provette lt 0 001 complesso polimerasi DNA lt 0 001 controllo interno DNA non infettivo contenente sequenze di legame di primer GBS e una sequenza unica per l ibridizzazione d
19. St mmen welche 27 Spezies von Streptokokken darstellen andere Spezies welche phylogenetisch mit S agalactiae verwandt sind andere Bakterien und Hefen welche normalerweise in der vaginalen und rektalen Flora vorgefunden werden und menschliche DNA wurden getestet Unter ihnen gab es 9 Organismen bei welchen das cfb Gen noch nicht berichtet worden war aber welche CAMP hnliche Aktivit ten zeigten F r mikrobielle DNA wurden 1 5 ng 2x10 gleiche Genomkopien pro PCR Reaktion oder 10 gleiche Genomkopien mL angewandt Fur menschliche DNA wurden 75 bis 233 ng bis zu 1 4x10 Genomkopien pro Reaktion oder 10 Kopien mL angewandt Die Spezifit t war 100 Analytische Empfindlichkeit Die analytische Empfindlichkeit Limit of Detection oder LOD d h Feststellungsgrenze des BD GeneOhm StrepB Tests wurde mit 12 St mmen von S agalactiae festgestellt welche 11 bekannte Serotypen oder Varianten darstellten Quantifizierte Kultur und gereinigte genomische DNA welche im Probenpuffer des BD GeneOhm StrepB Tests verd nnt wurden wurden in allen 5 Replikaten getestet Das LOD wird als die kleinste Konzentration definiert bei welcher alle Replikate als positiv testen Das LOD des BD GeneOhm StrepB Tests f r S agalactiae Serotypen und Varianten la Ib c Il Ilc IIR III Mic IIR V und VR variiert zwischen 10 und 50 Genomkopien pro Reaktion mit einem Medianwert von 25 Genomkopien pro Reaktion Das LOD in CFU steht 3 zu 9 CFU Reak
20. ail 29 43 Vorgesehene Anwendung ii 29 Zusammenfassung und Erkl rung des Tests 29 VVT ar heidi 29 Das Prinzip der Methode aaa eine aia Ee 30 RE te E EE EE 30 Vorsichtsmassnahmeni ana aaa 31 Mitgelieferte Materialien sers 32 Lagerung Handhabung und Stabilit t eeeaeeeeeeeeeaeeseaeeeseaeeseaeeseeeeseaeeseneeeeeas 32 Gesammelte Proben 32 Reagenzien 32 Materialien welche ben tigt aber nicht mitgeliefert werden 33 CAES AND i 33 Probensammlung 33 Probenvorbereitung 33 BD GeneOhm StrepB Testvorgang 34 Qualit tskontrolle areali 35 Positive und negative Kontrollen 35 Proben Verarbeitungskontrollen 35 Antimikrobieller Anf lligkeitstest f r Patienten mit Penicillin Allergien 36 Auswertung der Ergebnisse AAA 36 Ung ltiger Pr fdurchlauf 36 Ungel ste Proben 36 Probe wegen Fehlfunktion des I CORE Moduls nicht festgestellt 36 Einschr nkungen des Verfahrens 000 nnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnn 36 St rs bsta ze EE 37 Erwartete Worle ceee a e SEA EEEE EONA ao asia acari 37 LC ist ungs haraktorisUKa erir es Reken Hose eh ee nenn 38 Klinische Leistungen 38 Analytische Spezifit t 40 Analytische Empfindlichkeit 40 Reproduzierbarkeit 41 Sne EE 42 56 INdicCaciones de USO EE 42 Resu
21. an mehreren Stellen festgestellt f nf Instituten mit Mutterschaftsdiensten 2 in Kanada und 3 in den Vereinigten Staaten Jede Anstalt hatte bereits ein kulturbasierendes Selektionsprogramm Tests wurden in klinischen Laboratorien ausgef hrt welche mit der jeweilligen Anstalt verbunden waren Um an der Studie teilzunehmen mussten Frauen ihr schriftliches Einverst ndnis geben in den Wehen liegen und keine Kontraindikationen f r vaginale Untersuchungen haben z B Blutung Es gab auch keine Anzeichen von Placenta previa keine dringliche Indikation mit der Geburt voranzuschreiten und keinen Antibiotikagebrauch in der Woche vor der Aufnahme ins Krankenhaus Die Studie schloss die Zeit bis zur Geburt bei den Patientinnen nicht ein Die angewandte Bezugsmethode war die Kulturtechnik welche von Centers f r Disease Control and Prevention Zentren f r Krankheitskontrolle und Vorbeugung empfohlen wurde namentlich mikrobiologische Kultur in einem selektiven Br hemedium Todd Hewitt Br hemedium mit 15 ug mL Nalidixins ure und 10 ug mL of Colistin erg nzt oder alternativ mit 8 ug mL Gentamizin und 15 ug mL Nalidixins ure andere kommerziell erh ltlichen Medien sind z B SBM Br he oder Lim Br he gefolgt von Inkubation und Subkultur auf ein festes Blutagar Medium Die spezifische Identifizierung welche GBS andeutet wurde mit Platten Zusammenballungstests ausgef hrt Achthundert und einundachtzig 881 Frauen gaben ihr Einverst ndnis dazu
22. campioni avevano un carico batterico sotto il limite di rilevamento di BD GeneOhm StrepB B Tutti i campioni contenevano la corretta regione del target comprese le regioni di legame del primer del gene cfb e che il prodotto amplificato era quello atteso con BD GeneOhm StrepB La rottura della membrana non influenzava le prestazioni del saggio BD GeneOhm StrepB Utilizzando la presenza o l assenza di liquido amniotico e o meconio in campioni prelevati come indicazione di rottura della membrana la sensibilit e la specificit del saggio BD GeneOhm StrepB erano le stesse abituali antepartum o intrapartum Tabella 4 Tabella 4 Prestazioni del saggio BD GeneOhm StrepB antepartum e intrapartum Sensibilit Specificit accordo Menai 95 53 56 96 301 315 95 354 371 H 85 99 93 98 93 97 barons 94 87 93 96 325 338 96 412 431 P 86 98 94 98 93 97 A Intervalli di confidenza binomiale 95 Specificit analitica Sono stati sottoposti a test il DNA genomico da 99 ceppi ATCC che rappresentavano 27 specie di streptococchi altre specie filogeneticamente correlate a S agalactiae altri batteri e lieviti comunemente rilevati nella flora vaginale e rettale e nel DNA umano Tra questi erano 9 organismi che non erano stati riferiti trasportare il gene cfb ma provocano attivit simile a CAMP Per il DNA microbico sono stati utilizzati 1 5 ng 2x10 co
23. di organismi vitali tuttavia presuntivo per la presenza di Streptococcus gruppo B e metodi per la coltivazione dalla soluzione tampone campione BD GeneOhm StrepB non sono stati valutati laboratori devono convalidare le proprie procedure di coltivazione o prelevare un secondo campione da tenere come riserva e risultati del saggio BD GeneOhm StrepB vanno utilizzati come ausilio per le osservazioni cliniche e altre informazioni disponibili al medico Il test non previsto per differenziare i trasportatori di Streptococcus gruppo B da quelli con infezione streptococcica risultati del test potrebbero anche essere influenzati da terapia antibiotica concorrente quindi il successo o il fallimento terapeutici non possono essere valutati utilizzando questo test in quanto il DNA potrebbe persistere dopo la terapia antimicrobica e Sebbene non vi sia alcuna esigenza di preparazione dei reagenti e le principali operazioni tecniche includano la pipettatura una buona tecnica di laboratorio essenziale per la corretta esecuzione di questo saggio A causa dell elevata sensibilit analitica di questo test va prestata estrema attenzione a preservare la purezza di tutti i reagenti particolarmente nei casi in cui pi aliquote sono prelevate da una singola provetta e Si consigliano procedure di laboratorio valide e l utilizzo di guanti per evitare la contaminazione dei campioni o dei reagenti Sostanze interferenti Tra le potenzial
24. die PCR Hemmung in jeder Probe zu berwachen Eine positive Kontrolle und eine negative Kontrolle m ssen f r jeden Testsatz welcher durch den SmartCycler l uft verarbeitet werden Die Software weist automatisch die Positionen der Kontrollen am Instrument zu siehe die SmartCycler Dx Software Bedienungsanleitung Proben Verarbeitungskontrollen Kontrollstamme k nnen je nach den Richtlinien oder Anforderungen von lokalen staatlichen und oder Bundes Vorschriften oder akkreditierenden Organisationen getestet werden Eine Kultur von Gruppe B Streptococcus e g S agalactiae American Type Culture Collection Amerikanischer Typ Kultursammlung ATCC 12973 oder ein gut charakterisiertes klinisches Isolat von S agalactiae kann als Probenverarbeitungskontrolle angewandt werden w hrend eine Kultur von Streptococcus bovis z B ATCC 33317 oder sonstige Streptococcus welche nicht aus der Gruppe B sind k nnen als eine externe negative Kontrolle angewandt werden 3 Kolonien von 1 2 mm Gr sse aus einem frischen Schafsblut Agarplatte in 3 mL tryptischer Sojabr he transferieren und bis zu einem OD von 0 6 bei 600 nm wachsen lassen Serienverd nnungen in Salzl sung aufbereiten um eine bakterielle Suspendierung von etwa 10 CFU mL zu erhalten Den empfohlenen Tupfer mit Fl ssigem Stuart Medium siehe Materialien welche ben tigt aber nicht mitgeliefert werden in die bakterielle Suspendierung tauchen den Tupfer in seinen Beh lter z
25. el m todo de exacto binomial Especificidad anal tica Se analiz el ADN gen mico de 99 cepas ATCC de 27 especies de estreptococos otras especies relacionadas filogen ticamente con S agalactiae otras bacterias y hongos levaduriformes encontrados com nmente en la flora vaginal y rectal y ADN humano Entre ellos habia 9 microorganismos que no se hab an notificado como portadores del gen cib pero provocaban actividad similar al factor CAMP Para el ADN microbiano se utilizaron 1 5 ng 2x10 copias de genoma equivalente por reacci n PCR o 10 copias de genoma equivalente mL Para el ADN humano se utilizaron de 75 a 233 ng hasta 1 4x10 copias de genoma por reacci n o 10 copias mL La especificidad fue del 100 Sensibilidad analitica La sensibilidad anal tica L mite de detecci n o LD de la prueba BD GeneOhm StrepB fue determinada con 12 cepas de S agalactiae de 11 serotipos o variantes conocidos El cultivo cuantitativo y el ADN gen mico purificado diluidos en la soluci n tamp n de muestras de la prueba BD GeneOhm StrepB se analiz en 5 muestras El LD se define como la concentraci n mas pequefia en la que todas las muestras dan resultado positivo El LD de la prueba BD GeneOhm StrepB para S agalactiae serotipos y variantes la Ib c Il IIc IIR III llic HR V y VR varia entre 10 y 50 copias del genoma por reacci n con una media de 25 copias del genoma por reacci n El LD en UFC es de 3 a 9 UFC reacci
26. l operatore del software SmartCycler Dx necessaria per evitare risultati erronei L utilizzo di questo test va limitato al personale addestrato alla procedura e all utilizzo dello SmartCycler Poich il rilevamento dello Streptococcus gruppo B dipende dal numero di organismi presenti nel campione l affidabilit dei risultati dipende dalla correttezza del prelievo del trattamento e della conservazione dei campioni risultati del saggio BD GeneOhm StrepB potrebbero talvolta essere non chiari o invalidati a causa di un controllo non valido e potrebbero richiedere un nuovo test che potrebbe comportare un ritardo nell ottenimento dei risultati Potrebbero verificarsi risultati falsi negativi anche a causa della presenza di sostanze inibitorie della polimerasi il controllo interno presente nel Master Mix consente il rilevamento di tali sostanze P0001 02 62 BD Diagnostics BD GeneOhm StrepB e Le mutazioni nelle regioni di legame della sonda o del primer potrebbero influenzare il rilevamento particolarmente quando gli organismi sono presenti a meno di 10 organismi Non esiste alcun rapporto pubblicato di isolati o ceppi GBS mancanti del gene cfb Se si verificasse un simile caso il saggio BD GeneOhm StrepB fornirebbe un risultato falso negativo Nessun isolato GBS fenotipicamente CAMP negativo stato valutato col saggio BD GeneOhm StrepB e Un risultato positivo del test non indica necessariamente la presenza
27. la relativa data di scadenza e Non scambiare i tappi tra i reagenti in quanto esiste la possibilit di contaminazione che comprometterebbe i risultati del test e Evitare la contaminazione microbica e da deossiribonucleasi DNAse dei reagenti quando si rimuovono aliquote dalle provette Si consiglia l utilizzo di puntali per pipettatrice sterili monouso con blocco a filtro privi di DNAse o a spostamento positivo e Per evitare la contaminazione dell ambiente con sequenze amplificate GBS non aprire le provette di reazione dopo l amplificazione e Utilizzare un nuovo puntale per ciascun campione o reagente e L esecuzione del saggio al di fuori degli intervalli temporali consigliati pu produrre risultati non validi campioni che non rientrano negli intervalli temporali specificati vanno ripetuti e possibile sottoporre a test ulteriori controlli secondo le indicazioni o i requisiti delle normative locali regionali e o nazionali o delle organizzazioni di verifica e Nei casi in cui il laboratorio esegua anche test PCR a provetta aperta utilizzare aree di lavoro separate e isolate per le attivit di preparazione e amplificazione rilevamento dei campioni rifornimenti e le apparecchiature vanno dedicati a ciascuna area e non vanno spostati da un area all altra Devono essere sempre indossati guanti che devono essere cambiati prima di passare da un area all altra o prima di manipolare reagenti liofilizzati e Trattare sem
28. n Teniendo en cuenta el factor de diluci n debido al procesamiento de muestras esto se traduce en 10 a 10 UFC muestra En la siguiente tabla se detalla la concentraci n m s baja de cada subtipo que da un resultado positivo en las 5 muestras Tabla 5 LD obtenido de cada serotipo analizado Serotipo UFC reacci n Copias de genoma reacci n 10 3 25 6 ATCC 12973 Il IIIR P0001 02 53 BD Diagnostics BD GeneOhm StrepB Serotipo Copias de genoma reaccion UFC reaccion la c 50 4 VR 50 3 Il 25 3 la 25 3 V 50 8 Ib c 25 3 IIR 25 4 Il 25 9 IIIc 25 3 Ich 50 4 Para el serotipo Ilc existe incompatibilidad en una de las regiones de uni n de los cebadores Reproductibilidad Un panel de 10 muestras simuladas R1 a R10 con diversas concentraciones de SGB y los dos controles positivo y negativo suministrados con la prueba BD GeneOhm StrepB se analiz por triplicado en tres dias distintos en 3 instituciones 10 muestras mas 2 controles analizados X 3 X 3 dias X 3 instituciones Se utiliz un lote de reactivo para el estudio Tabla 6 Resumen de resultados de reproductibilidad Muestra ID Centro 1 Centro 2 Centro 3 ee i Negativo 9 9 9 9 9 9 27 27 100 Negativo 9 9 9 9 9 9 27 27 100 Positivo d bil 3 9 7 9 8 9 18 27 66 Positivo d bil
29. proporcionar resultados durante el parto a tiempo para administrar la profilaxis con antibidticos seria beneficiosa para varios grupos de mujeres incluidas aquellas que han recibido una atenci n prenatal inadecuada las mujeres cuyos resultados de la detecci n sistematica prenatal son desconocidos en el momento del parto y las mujeres con amenaza de parto prematuro Advertencia e El uso de BD GeneOhm StrepB para la detecci n sistematica durante el parto no deberia excluir el uso de otras estrategias p ej pruebas prenatales Los resultados de BD GeneOhm StrepB durante el parto son Utiles para identificar candidatas para la profilaxis con antibi ticos durante el parto cuando puede disponerse de los resultados a tiempo para administrar antibidticos por via intravenosa al menos 4 horas antes del parto e La prueba BD GeneOhm StrepB no proporciona resultados de sensibilidad a los antibi ticos Se necesita mas tiempo para cultivar y realizar antibiogramas que serian recomendables para las mujeres al rgicas a la penicilina P0001 02 42 BD Diagnostics BD GeneOhm StrepB Principio de procedimiento La diana gen tica de la prueba BD GeneOhm StrepB es el gen cfb Este gen codifica para el factor CAMP una proteina extracelular capaz de difundir presente pr cticamente en todas las cepas aisladas de SGB La detecci n del factor CAMP se utiliza para la presunta identificaci n de SGB por m todos bioquimicos Las caract
30. rapide et sensible du SGB effectu en phase intrapartum pouvant fournir les r sultats temps pour l antibioth rapie prophylactique sera utile pour les femmes qui n ont pas b n fici de surveillance antepartum celles pour lesquelles les r sultats du d pistage antepartum n est pas connu et celles qui accouchent pr matur ment Mise en garde e Le recours au test BD GeneOhm M StrepB pour le d pistage en phase intrapartum ne devrait pas exclure le recours d autres strat gies par exemple le d pistage en phase antepartum Le test BD GeneOhm StrepB en phase intrapartum permet d identifier les candidates a l antibioth rapie prophylactique lorsque les r sultats sont connus au moins 4 heures avant l accouchement afin de permettre l antibiotherapie e Le test BD GeneOhm M StrepB ne donne pas de r sultats quant la sensibilit aux antibiotiques Un d lai additionnel peut tre requis pour proc der aux cultures et aux preuves de sensibilit aux antibiotiques recommand s pour les patientes allergiques la p nicilline Principe du test Le gene ctb est la cible g n tique du test BD GeneOhm StrepB Ce gene code pour le facteur CAMP une prot ine extracellulaire diffusible virtuellement pr sente chez tous les SGB La d tection de cette prot ine par les m thodes biochimiques est utilis e pour l identification pr sum e de la bact rie Les analyses ph notypiques et mol culaires ont d montr le haut de
31. sous licence a Idaho Technology Inc uniquement pour l utilisation de la quantit incluse de produit conform ment aux protocoles sp cifi s Il n est conf r aucun droit explicite implicite ou par pr clusion permettant d utiliser un instrument ou un systeme sous une revendication quelconque du brevet am ricain N 6 787 338 autre que pour la quantit de produit indiqu e dans le pr sent document P0001 02 67 Printed in Canada Imprim au Canada Printed in Kanada Impreso en Canada Stampato in Canada BD Diagnostics BD GeneOhm StrepB Dieser Satz wird durch eine Lizenz vom Public Health Research Institute Offentliches Gesundheits Forschungsinstitut von der Stadt von New York Inc verkauft und darf nur unter den PHRI Patentrechten und nur f r menschliche klinische n Vitro Diagnostik angewandt werden Der Kauf dieses Produktes gestattet dem Kaufer die Verstarkung und Feststellung von Nukleinsequenzen zum Zweck von menschlicher n Vitro Diagnostik Kein generelles Patent und keine Lizenz jeglicher anderen Art ausser diesem spezifischen Gebrauchsrecht aus dem Verkauf wird hiermit abgetreten Der Erwerb dieses Produkts beinhaltet eine beschrankte nicht bertragbare Uberlassung unter der US Patent Nr 6 787 338 dem Eigentum der University of Utah Research Foundation Forschungsstiftung der US Universitat Utah und lizenziert f r Idaho Technology Inc einzig zum Gebrauch der eingeschlossenen Produktmenge gem
32. stelo in prossimit dell orlo della provetta utilizzare garza per ridurre al minimo i rischi di contaminazione Sollevare il tampone di qualche millimetro mm dal fondo della provetta e piegare lo stelo contro il bordo della provetta per romperlo Metodo alternativo utilizzare forbici pulite per tagliare lo stelo Accertarsi che il tappo si chiuda saldamente Lasciare a riposo per 5 minuti Mescolare con moto vorticoso ad alta velocit per 15 secondi Per trattare pi campioni possibile utilizzare adattatori con pi siti di mantenimento P0001 02 59 BD Diagnostics BD GeneOhm StrepB 5 Trasferire 50 uL di sospensione cellulare alla provetta di lisi tappo giallo chiudere saldamente Utilizzare un nuovo puntale per micropipettatrice per ogni campione 6 Mescolare con moto vorticoso ad alta velocit per 5 minuti Per trattare pi campioni possibile utilizzare adattatori con pi siti di mantenimento 7 Centrifugare brevemente la provetta di lisi rotazione veloce A bassa velocit per 2 5 secondi per portare il contenuto al fondo della provetta 8 Riscaldare a 95 2 C per 2 minuti Utilizzare un blocco di riscaldamento a secco per provette da 1 5 mL o bagno d acqua 9 Collocare la provetta di lisi su ghiaccio o su un blocco di raffreddamento Procedura di saggio BD GeneOhm StrepB Nota Una provetta Master Mix Master Mix provetta SmartCycler con etichetta bianca 4 le p necessaria per il
33. substance was observed Expected values Approximately 10 to 30 of pregnant women are colonized with GBS in the vagina or rectum GBS colonization can be transient chronic or intermittent Culture screening of both the vagina and rectum for GBS late in gestation during prenatal care can detect women who are likely to be colonized with GBS at the time of delivery In the investigational study for BD GeneOhm StrepB the overall colonization rate at the time of delivery determined with the culture technique was 18 6 with a range from 9 1 to 28 7 at the different clinical sites With BD GeneOhm StrepB overall 20 1 of intrapartum women were positive In addition to intrapartum screening a subset of women 674 also had preterm culture screening Of these 11 7 were positive during antepartum testing Overall 10 2 of these women had antepartum culture results different than intrapartum culture results and 11 6 had antepartum culture results different than BD GeneOhm StrepB intrapartum results In other studies sensitivities of 87 83 92 Cl and 69 57 79 Cl and specificities of 96 95 98 Cl and 92 89 94 Cl have been reported for late prenatal cultures for identifying colonization status at delivery Performance characteristics Clinical performances Performance characteristics of BD GeneOhm StrepB assay were determined in a multi site prospective investigational study five institutions with maternity s
34. test di ciascun campione Una provetta di Positive control controllo positivo etichetta rossa e una provetta di Negative control controllo negativo etichetta verde sono necessarie per ciascuna analisi di un saggio Una provetta di Diluent diluente etichetta con striscia nera necessaria per la preparazione di un numero massimo di 40 reazioni PCR Rimuovere il numero necessario di provette dalle rispettive buste protettive rimuovere l aria in eccesso e chiudere rapidamente le buste con la chiusura a cerniera Preparare solo il numero di provette SmartCycler sufficiente a riempire i moduli disponibili CORE sullo strumento SmartCycler Collocare le provette Master Mix di controllo positivo e negativo da sottoporre a test sul blocco di raffreddamento SmartCycler Identificare le provette Master mix etichetta bianca sul tappo con le etichette di identificazione del campione fornite col kit Aprire le provette Master Mix di controllo positivo e negativo Tenere saldamente la provetta per la parte scanalata superiore e sollevare il tappo con un movimento verticale verso l alto Non sollevare orizzontalmente Evitare di toccare le finestre di rilevamento ottico ai bordi inferiori della provetta e l area inferiore a forma di rombo Aggiungere 25 ul di diluente etichetta nera a tutte le provette chiudere parzialmente le provette Master Mix Erogare il diluente nel serbatoio parte superiore di ciascuna provetta Aggiu
35. the SmartCycler 6 Centrifuge all reaction tubes for 5 10 seconds Use the specially adapted microcentrifuge provided with the SmartCycler 7 Keep the reaction tubes at 2 8 C on the SmartCycler cooling block before loading on the instrument The remaining lysates should be frozen at 20 5 C for later use if necessary 8 Just before loading the tubes on the instrument take the COOLING BLOCK WITH THE TUBES STILL IN PLACE and VORTEX UPSIDE DOWN for 5 10 seconds 9 Create a run with the BD GeneOhm StrepB assay protocol Refer to the SmartCycler Dx Software Operator Manual if needed You should enter the identification parameters for the specimens before starting the run 10 Insert each reaction tube in an I CORE module of the SmartCycler and close the I CORE lid Place the Positive and Negative Controls at their appropriate position see the section entitled Quality control Press down all the tubes firmly into place 11 Start the run Quality Control Positive and negative Controls Quality control procedures are designed to monitor assay performance The Positive Control is intended to monitor for substantial reagent failure The Negative Control is used to detect reagent or environmental contamination or carry over by either S agalactiae or GBS amplicons Positive and Negative Controls are assay controls run controls An invalid control invalidates the run Finally an internal control incorpor
36. the opposite end of the oligonucleotide For the detection of the IC amplicons the molecular beacon contains the fluorophore TET at the 5 end and the quencher DABCYL at the 3 end Each beacon target hybrid fluoresces at a wavelength characteristic of the fluorophore used in the particular molecular beacon The amount of fluorescence at any given cycle or following cycling depends on the amount of specific amplicons present at that time The SmartCycler simultaneously monitors the fluorescence emitted by each beacon interprets all data and at the end of the cycling program provides a final result see Interpretation of Results Reagents BD GeneOhm StrepB 50 tests Sample Buffer 60 x 1 mL Tris EDTA buffer Lysis tube 50 tubes Glass beads Master Mix 50 tubes lt 0 001 DNA polymerase complex lt 0 001 Internal Control non infectious DNA containing GBS primers binding sequences and a unique sequence for probe hybridization lt 0 001 primers lt 0 002 molecular probes lt 0 05 dATP dCTP dGTP dTTP Bovine serum albumin Carbohydrate lt 0 005 non infectious genomic DNA from Streptococcus pneumoniae Positive Control 50 tubes lt 0 001 DNA polymerase complex lt 0 001 Internal Control non infectious DNA containing GBS primers binding sequences and a unique sequence for probe hybridization lt 0 001 primers lt 0 002 molecular probes lt 0 05 dATP dCTP dGTP dTTP Bovine serum albumin
37. 0 n 35 98 100 1 1 21 Site 5 89 n 19 67 99 93 n 56 82 98 3 1 22 Total 94 n 149 89 97 96 n 653 94 97 10 5 192 Binomial 95 confidence intervals B All specimens were unresolved due to failed internal controls indicative of inhibition or reagent failure Nine 9 of the 10 were resolved upon re testing Table 3 Stratification of results according to the time elapsed between specimen collection and testing with BD GeneOhm StrepB assay Culture positive Culture negative Ge BD BD BD BD agreement 95 Cl hours GeneOhm GeneOhm GeneOhm GeneOhm positive negative negative positive 0 to 4 11 3 88 4 93 87 97 4 to 8 32 3 220 10 95 92 97 8 to 12 9 0 29 2 95 83 99 12 to 24 41 2 143 4 97 93 99 24 to 48 35 0 127 7 96 92 98 gt 48 18 1 19 0 97 84 100 Total 140 g 626 27 96 94 97 A All specimens had a bacterial load below the detection limit of BD GeneOhm StrepB B All specimens did contain the proper target region including primer binding regions of the cfb gene and that the amplified product was that expected with BD GeneOhm StrepB Membrane rupture did not affect performances of BD GeneOhm StrepB assay Using the presence or absence of amniotic fluid and or meconium in collected specimens as an indication of membrane rupture the sensitivity and specificity of
38. 1 specimen that gave an initially unresolved result remained unresolved upon retesting and was not included in the table BD Diagnostics BD GeneOhm StrepB Investigation of specimens that yielded culture positive BD GeneOhm StrepB negative results n 9 revealed that all specimens had a bacterial load below the detection limit of BD GeneOhm StrepB It was also shown that all isolates recovered from the culture positive plates yielded a positive result with BD GeneOhm StrepB Investigation of specimens that yielded culture negative BD GeneOhm SirepB positive results n 27 revealed that all specimens did contain the proper target region including primer binding regions of the cfb gene and that the amplified product was that expected with BD GeneOhm StrepB The overall prevalence of the study population was 18 6 with a range from 9 1 to 28 7 at the different clinical sites The negative predictive value was 98 6 95 Cl 97 3 99 3 and the positive predictive value was 83 8 95 Cl 77 4 89 1 Table 2 Clinical performance of BD GeneOhm StrepB assay in reference to the CDC recommended culture technique Clinical Sensitivity Clinical Specificity a ni Site 1 93 n 15 68 100 93 n 150 87 96 5 2 55 Site 2 88 n 25 69 97 100 n 62 97 100 0 0 38 Site 3 99 n 77 93 100 97 n 350 94 98 1 1 56 Site 4 85 n 13 54 98 10
39. 2 a 5 segundos para que el contenido quede al fondo del tubo Caliente a 95 2 C durante 2 minutos Utilice un bloque de calor seco para los tubos de 1 5 mL o un bafio maria Ponga el tubo de lisis en hielo o en un bloque de enfriamiento Procedimiento de la prueba BD GeneOhm StrepB Nota Se necesita un tubo de Master Mix mezcla maestra tubo SmartCycler con etiqueta blanca 4 her para analizar cada muestra Se necesitan un tubo de Positive Control control positivo etiqueta roja y un tubo de Negative Control control negativo etiqueta verde para cada serie anal tica Se necesita un tubo de Diluent diluyente etiqueta con tira negra para la preparaci n de hasta 40 reacciones de PCR Saque el numero necesario de tubos de las bolsas protectoras extraiga el exceso de aire y cierre las bolsas r pidamente con el cierre deslizante Prepare s lo el n mero necesario de tubos SmartCycler para llenar los m dulos I CORE disponibles en el instrumento SmartCycler Coloque en el bloque de enfriamiento SmartCycler los tubos de mezcla maestra control positivo y control negativo que vayan a ser analizados Identifique el los tubo s de mezcla maestra etiqueta blanca en la tapa con las etiquetas de identificaci n de muestras incluidas en el equipo Abra los tubos de mezcla maestra control positivo y control negativo Sujete el tubo firmemente por la parte superior estriada y levante la tapa con un movimiento vertical h
40. 8 9 9 9 9 9 26 27 96 Positivo 8 9 9 9 9 9 26 27 96 Positivo 9 9 9 9 9 9 27 27 100 Positivo 9 9 9 9 9 9 27 27 100 Positivo fuerte 9 9 9 9 9 9 27 27 100 Positivo fuerte 9 9 9 9 9 9 27 27 100 Positivo fuerte 9 9 9 9 9 9 27 27 100 Control Pos 3 3 9 9 9 9 21 21 100 Control Neg 3 3 9 9 9 9 21 21 100 Total concordancia 88 96 106 108 107 108 301 312 96 5 de concordancia 91 6 98 1 99 1 96 5 Todas las muestras positivas tienen cantidades distintas de SGB B Muestra inicialmente sin resolver pero despu s de volver a ser analizada dio el resultado esperado Todas las muestras fueron analizadas como serie Unica en vez de tres series distintas de 10 muestras y 2 controles P0001 02 54 BD Diagnostics BD GeneOhm StrepB Uso previsto Il saggio BD GeneOhm StrepB un test diagnostico qualitativo in vitro per il rilevamento rapido del DNA dello streptococco Gruppo B Group B streptococcus GBS in campioni vaginali rettali per donne prepartum o intrapartum Il test eseguito sull analizzatore automatizzato SmartCycler utilizza la reazione a catena della polimerasi polymerase chain reaction PCR per l amplificazione di una sequenza genica cfb di GBS recuperato da campioni clinici e ibridizzazione specifica per il target fluorogenico per il rilevamento del DNA amplificato Il saggio BD GeneOhm StrepB pu essere utilizzato per stabilire lo stato della colonizzazione GBS delle donne prepart
41. 95 Cl positiv _negativ negativ positiv 0 bis 4 11 3 88 4 93 87 97 4 bis 8 32 3 220 10 95 92 97 8 bis 12 9 0 29 2 95 83 99 12 bis 24 41 2 143 4 97 93 99 24 bis 48 35 0 127 7 96 92 98 gt 48 12 1 19 0 97 84 100 Gesamt 140 o 626 27 96 94 97 A S mtliche Proben hatten eine bakterielle Last unterhalb der Detektionsgrenze von BD GeneOhm StrepB S mtliche Proben enthielten die richtige Zielregion einschliesslich der Primer Bindungsregionen des cfb Gens und das verst rkte Produkt war dasselbe welches mit BD GeneOhm StrepB erwartet wurde Membranrisse beeinflussten die Leistung des BD GeneOhm StrepB Tests nicht Mit Gebrauch von der Anwesenheit oder Abwesenheit von Fruchtwasser und oder Mekonium in gesammelten Proben als Anzeige von Membranriss blieben die Empfindlichkeit und Spezifit t des BD GeneOhm StrepB Tests Antepartum und Intrapartum gleich Tabelle 4 P0001 02 39 BD Diagnostics BD GeneOhm StrepB Tabelle 4 Leistung des BD GeneOhm StrepB Tests Antepartum und Intrapartum Empfindlichkeit 95 53 56 Spezifit t 96 301 315 Ubereinstimmung 95 354 371 Antepartum 85 99 93 98 93 97 94 87 93 96 325 338 96 412 431 Intrapartum 86 98 94 98 93 97 A Binomische 95 Sicherheitsintervalle Analytische Spezifitat Genomische DNA von 99 ATCC
42. BD GeneOhm StrepB assay are the same used antepartum or intrapartum Table 4 Table 4 Performance of BD GeneOhm StrepB assay antepartum and intrapartum Sensitivity Specificity agreement Antepartum 95 53 56 96 301 315 95 354 371 P 85 99 93 98 93 97 GE E 94 87 93 96 325 338 96 412 431 H 86 98 94 98 93 97 A Binomial 95 confidence intervals P0001 02 14 BD Diagnostics BD GeneOhm StrepB Analytical specificity Genomic DNA from 99 ATCC strains representing 27 species of streptococci other species phylogenetically related to S agalactiae other bacteria and yeasts commonly found in vaginal and rectal flora and human DNA were tested Among those were 9 organisms that had not been reported to carry the cfb gene but elicit CAMP like activity For microbial DNA 1 5 ng 2x1 0 equivalent genome copies per PCR reaction or 10 equivalent genome copies mL were used For human DNA 75 to 233 ng up to 1 4x10 genome copies per reaction or 10 copies mL were used The specificity was 100 Analytical sensitivity The analytical sensitivity Limit of Detection or LOD of BD GeneOhm StrepB assay was determined with 12 strains of S agalactiae representing 11 known serotypes or variants Quantitated culture and purified genomic DNA diluted in the Sample Buffer of BD GeneOhm StrepB assay were tested in 5 replicates The LOD is defined a
43. CA EE UU Modo de empleo Obtenci n de muestras Para obtener una muestra adecuada debe seguirse rigurosamente el procedimiento para obtenci n de muestras Utilizando la torunda recomendada en medio Stuart l quido consulte la secci n Material necesario pero no suministrado se obtienen muestras vaginales rectales de acuerdo con el siguiente procedimiento 1 Limpie el exceso de secreci n o flujo de la zona vaginal 2 Inserte la torunda con cuidado en el tercio inferior de la vagina y obtenga muestras de secreciones de la mucosa 3 Inserte la misma torunda con cuidado aproximadamente 2 5 cm m s all del esf nter anal y gire suavemente para obtener muestras de las criptas anales Vuelva a poner la torunda en su recipiente Etiquete el recipiente Env e las muestras al laboratorio de acuerdo con los procedimientos normalizados de trabajo del hospital Proteja contra la exposici n a un calor excesivo las muestras que se env an a un laboratorio externo 7 En el laboratorio mantenga todas las muestras a temperatura ambiente hasta la realizaci n de las pruebas si se llevan a cabo en un plazo de 24 horas a partir de la obtenci n de muestras 8 Consulte la secci n titulada Conservaci n manipulaci n y estabilidad Muestras obtenidas para informaci n sobre conservaci n y manipulaci n Preparaci n de muestras Nota Se requieren un tubo de Sample Buffer tamp n de muestras tapa azul y un Lysis tu
44. Diluent e Proben Identifizierungsetiketten Lagerung Handhabung und Stabilitat Gesammelte Proben Proben sollten wahrend dem Transport zwischen 2 C und 30 C aufbewahrt werden Vor Gefrieren und vor zu heissen Temperaturen sch tzen Proben welche innerhalb von 24 Stunden getestet werden k nnen k nnen bei Zimmertemperatur aufbewahrt werden falls nicht wird es empfohlen sie k hl zu halten Proben welche zwischen 2 C und 8 C aufbewahrt werden bleiben bis zu 6 Tage lang stabil Reagenzien Hinweis Die Lagerungszust nde m ssen die Spezifikationen auf jedem Beutel befolgen R hrchen ausserhalb des Schutzbeutels welche nicht innerhalb der angegebenen Zeit verwendet werden sollten verworfen werden Sample Buffer Master Mix und Controls Lysis tube gt eun Satzbestandteil weisse rote oder gr ne gelber Verschil d Etiketten Verschluss SE schwarzes Bandetikett Versiegelter Temperatur 2 25 C 2 25 C 2 25 C Beutel Stabilit t Verfallsdatum Verfallsdatum Verfallsdatum Ge ffneter Temperatur 2 8 C 2 25 C 2 25 C gt Beutel Stabilit t 1 Monat Verfallsdatum 2 Monate Wenn das Originalsiegel am Beutel aufgebrochen ist den Beutel nach jedem Gebrauch sorgfaltig mit dem Reissverschluss verschliessen und bei 2 8 C aufbewahren Obwohl diese Reagenzien bei Zimmertemperatur aufbewahrt werden k nnen sollten sie mit ihren begleitenden Reagenzien von
45. EEE EESE EEEE 13 Clinical performances 13 Analytical specificity 15 Analytical sensitivity 15 Reproducibility 16 Ce 17 30 Jee EE 17 Resume et explication du test A ee etnttttttrttntknttkntetntttntsrutstnnstutstnnstnnstnnatenstennenn 17 Mise engarde ge Ee tao 17 Principe IK E 17 SE LCE 18 NL el 19 Material te RE 19 Entreposage manutention et stabilit 20 Echantillons pr lev s 20 R actifs 20 Mat riel n cessaire mais non fourni nn 20 Mode Kl EE sailor 21 Pr l vement des chantillons 21 Pr paration des chantillons 21 Proc dure du test BD GeneOhm StrepB 21 Controle qualit aiar 22 Contr les positif et n gatif 22 Contr le du processus de pr paration des chantillons 23 D termination de la sensibilit aux antibiotiques pour les patientes allergiques la p nicilline 23 Interpr tation des r sultats eeek eee ke eteetttttettttinttkntkntkntstntstnnstunstntstunstunstnnstnnntnnntenaennt 23 S rie invalid e 23 Echantillons non r solus 24 chantillons ind termin s en raison d une d faillance du module I CORE 24 IER E CSS E EE ea E E ons fase E E 24 Substances interf rentes an il iii 25 Valeurs atendUES E 25 Caract ristiques de rendement i 25 Sensibilit et sp cificit cliniques 25 Sp cificit analytique 27 Sensibilit analytique 27 Reproductibilit 28 P0001 02 2 BD Diagnostics BD GeneOhm StrepB Deutsch nate a a
46. R reactions Remove the required number of tubes from their protective pouch remove the excess air and close the pouch quickly with the zip seal Prepare only enough SmartCycler tubes to fill available I CORE modules on the SmartCycler instrument Place Master Mix Positive and Negative Control tubes to be tested on the SmartCycler cooling block Identify the Master Mix tube s white label on the cap with the specimen identification labels provided with the kit 2 Open the Master Mix Positive and Negative Control tubes Hold the tube firmly by the ribbed upper portion and lift the cap with an upward vertical movement Do not lift horizontally Avoid touching the optical detection windows at the bottom edges of the tube and the lower diamond shaped area 3 Add 25 uL of Diluent black label to all tubes partially close the Master Mix tubes Deliver the Diluent into the reservoir upper part of each tube 4 Add 1 5 uL of each lysate to a different Master Mix tube close the tubes tightly Take care not to aspirate beads when pipetting into the Lysis tube After the addition of the specimen pipette up and down 2 3 times in the reservoir to ensure transfer of the complete volume Close the Lysis tube and the Master Mix tube Use a new micropipettor tip for each specimen 5 Close the Positive and Negative Control tubes The Negative Control should be the last sample prepared for a given assay i e all samples run simultaneously on
47. a non forniti Il tampone collocato in una soluzione tampone campione per eluirne il contenuto e un aliquota trasferita alla provetta di lisi La lisi si verifica attraverso una combinazione di azione chimica e fisica e richiede meno di 15 minuti Un campione del lisato aggiunto direttamente ai reagenti PCR contenuti nella provetta di reazione SmartCycler e analizzato con lo strumento SmartCycler un variatore termico di fluorescenza in tempo reale ad accesso casuale In campioni contenenti GBS la regione 154 bp del gene cfb amplificata e rilevata Si verifica anche l amplificazione dell IC un frammento di DNA 180 bp composto da una sequenza 134 bp non rilevata in GBS fiancheggiata dalla sequenza di ciascuno dei due primer specifici GBS target DNA amplificati sono rilevati con molecular beacon un oligonucleotide a filo singolo a forma di forcina etichettato ad un estremit con un inibitore e all altra estremit con un colorante reporter fluorescente fluoroforo In assenza del target la fluorescenza inibita In presenza del target la struttura a forcina si apre all ibridazione del beacon target comportando l emissione di fluorescenza Per il rilevamento delle sequenze amplificate GBS il molecular beacon contiene il fluoroforo FAM all estremit 5 e la parte caratteristica della molecola dell inibitore DABCYL non fluorescente all estremit opposta dell oligonucleotide Per il rilevamento delle sequenze amplificate
48. able filter blocked or positive displacement pipettor tips is recommended e To avoid contamination of the environment with GBS amplicons do not open the reaction tubes post amplification e Use a new tip for each specimen or reagent e Performing the assay outside the time ranges recommended can produce invalid results Assays not falling within the specified time ranges should be repeated e Additional controls may be tested according to guidelines or requirements of local state provincial and or federal regulations or accrediting organizations e In cases where open tube PCR tests are also conducted by the laboratory separated and segregated working areas should be used for specimen preparation and amplification detection activities Supplies and equipment should be dedicated to each area and should not be moved from one area to another Gloves must always be worn and must be changed before changing from one area to another or before manipulating lyophilized reagents e Always handle specimens as if they are infectious and in accordance with safe laboratory procedures such as those described in Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories and in the CLSI Document M29 e Wear protective clothing and disposable gloves while handling kit reagents Wash hands thoroughly after performing the test e Do not pipet by mouth e Do not smoke drink or eat in areas where specimens or kit reagents are being handled e Dis
49. aboratory technique is essential to the proper performance of this assay Due to the high analytical sensitivity of this test extreme care should be taken to preserve the purity of all reagents especially in cases where multiple aliquots are taken from a single tube Good laboratory practices and the use of gloves are recommended to avoid contamination of specimens or reagents Interfering substances Potentially interfering substances include but are not limited to the following amniotic fluid meconium blood feces lubricant urine and vaginal mucosa The presence of excessive vaginal secretions antepartum or intrapartum may inhibit PCR and give unresolved results Therefore it is recommended that the vaginal area be wiped away prior to sampling The presence of excessive blood may also lead to PCR inhibition and an unresolved result In an investigational study involving 803 vaginal rectal specimens from intrapartum maternity patients potentially interfering substances mentioned above were reported for 63 of collected specimens Only 1 10 803 of the specimens yielded unresolved results Of those there was no potentially interfering P0001 02 249 BD Diagnostics BD GeneOhm StrepB substance reported for 6 specimens amniotic fluid for 1 and a combination of substances for 3 of them All but one were resolved following a freeze thaw cycle of the specimen For the specimen that could not be resolved no potentially interfering
50. acia arriba No la levante horizontalmente Evite tocar las ventanas de detecci n ptica en los bordes inferiores del tubo y la parte inferior en forma de rombo Agregue 25 uL de diluyente etiqueta negra a todos los tubos cierre parcialmente los tubos de mezcla maestra Vierta el diluyente en el dep sito parte superior de cada tubo Agregue 1 5 uL de cada lisado a un tubo de mezcla maestra diferente cierre los tubos m ticamente Tenga cuidado de no aspirar las perlas al llenar el tubo de lisis Despu s de a adir la muestra pipetee hacia arriba y hacia abajo en el dep sito de 2 a 3 veces para asegurar la transferencia del volumen completo Cierre el tubo de lisis y el tubo de mezcla maestra Utilice una punta de micropipeta nueva para cada muestra Cierre los tubos de control positivo y negativo El control negativo deber a ser la ltima muestra preparada para un ensayo dado es decir todas las muestras se analizan simult neamente en el SmartCycler Centrifugue todos los tubos de reacci n durante 5 a 10 segundos Utilice la microcentr fuga especialmente adaptada suministrada con el SmartCycler Mantenga los tubos de reacci n entre 2 y 8 C en el bloque de enfriamiento SmartCycler antes de colocarlos en el instrumento P0001 02 47 BD Diagnostics BD GeneOhm StrepB Los lisados restantes deben congelarse a 20 5 C para uso posterior si es necesario 8 Justo antes de colocar los tubos en el inst
51. adores de SGB y una secuencia nica para hibridaci n con la sonda lt 0 001 cebadores lt 0 002 sondas moleculares lt 0 05 dATP dCTP dGTP dTTP Alb mina s rica bovina Hidrato de carbono lt 0 005 ADN gen mico no infeccioso de Streptococcus pneumoniae Control positivo Positive Control 50 tubos lt 0 001 Complejo ADN polimerasa lt 0 001 Control Interno ADN no infeccioso que contiene secuencias de uni n de cebadores de SGB y una secuencia nica para hibridaci n con la sonda lt 0 001 cebadores P0001 02 432 BD Diagnostics BD GeneOhm StrepB lt 0 002 sondas moleculares lt 0 05 dATP dCTP dGTP dTTP Albumina s rica bovina Hidrato de carbono lt 0 001 ADN gen mico no infeccioso de SGB con el gen cfb Control negativo Negative Control 50 tubos lt 0 001 Complejo ADN polimerasa lt 0 001 Control Interno ADN no infeccioso que contiene secuencias de uni n de cebadores de SGB y una secuencia Unica para hibridaci n de sonda lt 0 001 cebadores lt 0 002 sondas moleculares lt 0 05 dATP dCTP dGTP dTTP Alb mina s rica bovina Hidrato de carbono lt 0 005 ADN gen mico no infeccioso de Streptococcus pneumoniae Diluyente Diluent 50 x 1 mL Soluci n tamp n Tris HCl MgCl NHa 2SO4 Precauciones Esta prueba es nicamente para diagn stico in vitro No utilizar el kit si el precinto de seguridad de la caja exterior esta roto No utilizar l
52. ai Centers for Disease Control and Prevention CDC Inoltre nei casi di travaglio breve la disponibilit dei risultati dello screening antepartum consente la somministrazione di antibiotici per via endovenosa non appena possibile dopo il ricovero lt 5 ore In base agli attuali strumenti diagnostici la CDC USA consiglia uno screening universale prenatale basato su colture per la colonizzazione GBS vaginale e rettale di tutte le donne alla 35 37 settimana di gestazione Sebbene questo consiglio sia basato sulla documentazione di un forte effetto protettivo della strategia di screening basata su colture rispetto alla strategia basata sul rischio lo screening antepartum presenta limitazioni risultati dello screening sono talvolta non noti al medico al momento del parto lo stato della colonizzazione potrebbe cambiare fra il test e il parto e alcune donne non si sottopongono a screening antepartum In ciascun caso tali donne potrebbero non essere trattate adeguatamente per la colonizzazione GBS aumentando cosi il rischio di infezione del neonato Un test sensibile di screening rapido per GBS che possa fornire risultati di screening intrapartum in tempo per somministrare profilassi antibiotica sarebbe utile a diversi gruppi di donne tra cui coloro che hanno ricevuto una cura prenatale inadeguata quelle i cui risultati dello screening antepartum non sono noti al momento del parto e quelle per cui sussista pericolo di parto prematuro
53. alogo Copan Italia International n 141C USE Copan Venturi Transystem Liquid Stuart catalogo Copan Diagnostics Inc n 141C US 220099 TransPorter single Liquid Stuart catalogo HealthLink n 4432 e Vortice Genie 2 Fisher con supporto per microprovette o equivalente per trattare pi campioni possibile utilizzare adattatori con pi siti di mantenimento e Micropipettatrici intervallo accurato 1 50 uL e Puntali per pipettatrice sterili privi di DNAse con blocco a filtro o a spostamento positivo P0001 02 58 Copan HealthLink BD Diagnostics BD GeneOhm StrepB e Forbici e Garze e Guanti monouso senza polvere e Microcentrifuga per la centrifugazione a bassa velocit e Blocco di riscaldamento a secco per provette da 1 5 mL o bagno d acqua e Ghiaccio o blocco di raffreddamento per provette da 1 5 mL e Cronometro o timer e Sistema iniziale SmartCycler con software Dx blocco di elaborazione manuale per l utente kit degli accessori e computer desktop Cepheid Sunnyvale CA USA Istruzioni per l uso Prelievo di campioni AI fine di ottenere un campione adeguato la procedura per il prelievo di campioni deve essere seguita strettamente Utilizzando il tampone consigliato con mezzo liquido di Stuart fare riferimento a Materiali necessari ma non forniti i campioni vaginali rettali sono prelevati in base alla seguente procedura 1 Rimuovere la quantit in eccesso di se
54. analitica de la prueba Es necesario ajustarse cuidadosamente a las instrucciones incluidas en este prospecto y en el Manual del operador del Software Dx de SmartCycler para evitar resultados err neos El uso de esta prueba debe limitarse al personal capacitado en el procedimiento y a la utilizaci n del SmartCycler e Debido a que la detecci n del Streptococcus grupo B depende del n mero de organismos presentes en la muestra los resultados fiables dependen de la obtenci n manipulaci n y conservaci n adecuadas de las muestras e A veces los resultados de la prueba BD GeneOhm StrepB pueden quedar sin resolver o invalidados debido a un control no v lido y es necesario volver a hacer pruebas que pueden ocasionar un retraso en la obtenci n de los resultados e Asimismo pueden producirse resultados falsos negativos debido a la presencia de sustancias inhibidoras de polimerasa el control interno presente en la mezcla maestra permite la detecci n de dichas sustancias e La presencia de mutaciones en las regiones de uni n de las sondas o de los cebadores puede afectar la detecci n especialmente cuando la concentraci n de microorganismos es inferior a 10 organismos No existen informes publicados de cepas o cepas aisladas de SGB carentes del gen cfb Si ocurriera tal caso la prueba BD GeneOhm StrepB producir a un resultado falso negativo No se ha evaluado con la prueba BD GeneOhm StrepB ninguna cepa aislada de SGB fenotipicame
55. ansporta al laboratorio utilizando una torunda recomendada en medio Stuart liquido consulte la secci n Material necesario pero no suministrado La torunda se eluye en el tamp n de muestras y a continuaci n una al cuota de la muestra se lisa y se agrega a los reactivos de PCR que contienen los cebadores espec ficos de SGB utilizados para amplificar la diana gen tica de la prueba gen cfb si est presente La prueba adem s incluye un control interno Cl para detectar muestras inhibidoras de PCR y para confirmar la integridad de los reactivos de la prueba Las dianas amplificadas gen cfb y Cl se detectan con sondas de hibridaci n marcadas con fluor foros que no emiten fluorescencia marcadores moleculares La amplificaci n la detecci n y la interpretaci n de las se ales son realizadas autom ticamente por el software Cepheid SmartCycler El procedimiento completo dura unos 45 minutos Recientemente se ha observado una disminuci n en la incidencia de la enfermedad estreptoc cica del grupo B perinatal en los Estados Unidos debido al uso de profilaxis con antibi ticos para la prevenci n de enfermedades de SGB Una encuesta nacional realizada entre los miembros del Colegio Americano de Obstetricia y Ginecolog a ACOG en 2000 concluy que el 73 5 de los encuestados utiliz una estrategia de detecci n sistem tica lo que mostr que la detecci n sistem tica antes del parto contribuy a una disminuci n del 70 en enfermedade
56. antepartum ou intrapartum peut aussi inhiber la PCR et donner des r sultats non r solus Aussi est il recommand d essuyer la r gion vaginale avant de proc der au pr l vement La pr sence d une trop grande quantit de sang peut galement entra ner l inhibition de la PCR et donner des r sultats non r solus Dans le cadre d une tude de recherche comptant 803 chantillons vagino rectaux provenant de femmes en accouchement les substances potentiellement interf rentes mentionn es pr c demment ont t d cel es dans 63 des pr l vements mais elles n ont g n r des r sultats non r solus que dans 1 10 803 des cas Pour six d entre eux aucune substance potentiellement interf rente n a t relev e pour un autre le liquide amniotique a t mis en cause pour les trois autres la pr sence concomitante de diff rentes substances a t not e Dans tous les cas sauf un le probl me a t r solu a la suite d un cycle de cong lation d cong lation Quant a l chantillon non r solu aucune substance potentiellement interf rente n a t d cel e Valeurs attendues Environ 10a 30 des femmes enceintes sont porteuses du SGB dans le vagin ou le rectum La colonisation peut tre temporaire chronique ou intermittente Le d pistage de la pr sence de SGB dans le vagin et le rectum par culture en fin de grossesse permet de rep rer durant le suivi pr natal les femmes susceptibles d tre col
57. ated into each reaction mixture is intended to monitor PCR inhibition in each specimen P0001 02 10 BD Diagnostics BD GeneOhm StrepB One Positive Control and one Negative Control must be processed for each assay run on the SmartCycler The software automatically assigns the position of the controls on the instrument refer to the SmartCycler Dx Software Operator Manual Specimen processing controls Control strains may be tested according to guidelines or requirements of local state and or federal regulations or accrediting organizations A culture of group B Streptococcus e g S agalactiae American Type Culture Collection ATCC 12973 or a well characterized clinical isolate of S agalactiae may be used as a specimen processing control while a culture of Streptococcus bovis e g ATCC 33317 or of any other non group B Streptococcus may be used as an external negative control Transfer 3 colonies of 1 2 mm in size from a fresh sheep blood agar plate into 3 mL of Tryptic Soy Broth and grow to an OD of 0 6 at 600 nm Prepare serial dilutions in saline to obtain a bacterial suspension of approximately 10 CFU mL Dip the recommended swab with Liquid Stuart Medium refer to Materials required but not provided into the bacterial suspension replace the swab into its container to allow contact with the transport medium let stand at room temperature for 5 min and then process and test as a clinical specimen Refer to sections entitle
58. autre En absence de la cible le fluorophore est teint par le quencher En pr sence de la cible toutefois la structure en pingle cheveux s ouvre suite son appariement avec l amplicon permettant l mission de fluorescence par le fluorophore Pour la d tection des amplicons du SGB le beacon mol culaire est marqu par le fluorophore FAM a son extr mit 5 et par le DABCYL une mol cule absorbante non fluorescente a son extr mit 3 Les amplicons du contr le interne sont d tect s par un beacon marqu avec le fluorophore TET l extr mit 5 et le DABCYL l extr mit 3 Chaque hybride beacon cible fluoresce a une longueur d onde caract ristique du fluorophore utilis pour marquer le beacon La quantit de fluorescence mise a chaque cycle ou a la fin du PCR est repr sentative de la quantit d amplicons sp cifiques presents au m amp me moment Le SmartCycler mesure simultan ment la fluorescence mise par chaque beacon et interpr te les donn es g n r es afin de fournir un r sultat final a la fin du programme PCR se r f rer a la section Interpr tation des r sultats Reactifs Test BD GeneOhm StrepB 50 tests Tampon d chantillon Sample Buffer 60 x 1 mL Tris EDTA buffer Tube de lyse Lysis tube 50 tubes Billes de verre M lange r actionnel Master Mix 50 tubes Complexe ADN polym rase lt 0 001 Contr le interne lt 0 001 ADN non infectieux contenant les s quenc
59. b gene A vaginal rectal swab is collected and transported to the laboratory using the recommended swab with Liquid Stuart Medium refer to Materials required but not provided The swab is placed in sample buffer P0001 02 e BD Diagnostics BD GeneOhm StrepB to elute its content and an aliquot is transferred to the lysis tube Lysis occurs through a combination of chemical and physical actions and takes less than 15 minutes A sample of the lysate is added directly to the PCR reagents contained into the SmartCycler reaction tube and run with the SmartCycler instrument a random access real time fluorescence thermal cycler In specimens containing GBS the 154 bp region of the cfb gene will be amplified and detected Amplification of the IC a 180 bp DNA fragment consisting of a 134 bp sequence not found in GBS flanked by the sequence of each of the two GBS specific primers will also take place The amplified DNA targets are detected with molecular beacons a hairpin forming single stranded oligonucleotides labelled at one end with a quencher and at the other end with a fluorescent reporter dye fluorophore In the absence of target the fluorescence is quenched In the presence of target the hairpin structure opens upon beacon target hybridization resulting in emission of fluorescence For the detection of GBS amplicons the molecular beacon contains the fluorophore FAM at the 5 end and the non fluorescent quencher moiety DABCYL at
60. be tubo de lisis tapa amarilla para el an lisis de cada muestra Saque el n mero necesario de tubos de las bolsas protectoras extraiga el exceso de aire y cierre las bolsas r pidamente con el cierre deslizante 1 Coloque el dispositivo de obtenci n de muestras la torunda en un tubo de soluci n tamp n de muestras tapa azul Identifique la soluci n tamp n de muestras en la tapa y o la etiqueta del tubo P0001 02 46 BD Diagnostics BD GeneOhm StrepB 5 her Rompa el palo de la torunda y cierre el tubo herm ticamente Sujete la torunda por el palo cerca del borde del tubo utilice gasa para minimizar los riesgos de contaminaci n Levante la torunda unos milimetros mm del fondo del tubo y doble el palo contra el borde del tubo para romperlo M todo alternativo use tijeras limpias para cortar el palo Asegurese de cerrar la tapa herm ticamente D jela reposar durante 5 minutos Agite con Vortex a alta velocidad durante 15 segundos Para procesar multiples muestras pueden usarse adaptadores con varios lugares de sujeci n Transfiera 50 pL de suspension celular al tubo de lisis tapa amarilla ci rrelo m ticamente Utilice una punta de micropipeta nueva para cada muestra Agite con Vortex a alta velocidad durante 5 minutos Para procesar multiples muestras pueden usarse adaptadores con varios lugares de sujeci n Centrifugue el tubo de lisis brevemente centrifugado rapido A velocidad baja durante
61. ber Druckergebnisse nach Ung ltiger Pr fdurchlauf Mit gefrorenem Lysat f r alle klinischen Proben neue Reaktionsr hrchen in diesem Pr fdurchlauf erstellen und auch neue Kontrollr hrchen Ungel ste Proben Den Test mit der entsprechenden gefrorenen Lysatprobe wiederholen Es ist gezeigt worden dass die Wirkung des Gefrier und Tauzyklus PCR hemmende Substanzen reduziert Probe wegen Fehlfunktion des I CORE Moduls nicht festgestellt Test mit der entsprechenden gefrorenen Lysatprobe wiederholen Zur Interpretation von Warnungs und Fehlerkode Anzeigen bitte in der SmartCycler Dx Software Gebrauchsanleitung nachlesen Einschr nkungen des Verfahrens e Die Leistung dieses Tests wurde mit dem SmartCycler Instrument festgestellt und zwar mit vaginal rektalen Proben von Antepartum und Intrapartum Patientinnen mit dem Copan Venturi Transystem mit Fl ssigem Stuart Medium Daher kann dieses Produkt nur mit dem SmartCycler Instrument angewandt werden Daher kann dieses Produkt nur mit dem SmartCycler angewandt werden ausserdem wird die Anwendung von anderen Sammlungs und Transportsystemen als denen welche in der Liste der Materialien die ben tigt aber nicht mitgeliefert werden benannt sind nicht empfohlen Andere klinische Quellen wurden nicht bewertet und die Leistungscharakteristiken bei anderen Probearten sind unbekannt e Negative Testergebnisse k nnen aus diesen Gr nden resultieren Durch unrichtige Probeen
62. celant toute d faillance importante Le contr le n gatif d tecte la contamination des r actifs ou de l environnement par S agalactiae ou des amplicons de SGB Les contr les positifs et n gatifs sont des contr les de s rie Un contr le invalid annule toute la s rie Finalement un contr le interne int gr dans chaque m lange r actionnel d tecte l inhibition de la PCR dans chaque chantillon Chaque s rie de tests effectu e avec le SmartCycler doit comprendre un contr le positif et un contr le n gatif Le logiciel SmartCycler attribue la position des contr les par d faut consulter le manuel d utilisation du logiciel SmartCycler Dx P0001 02 22 BD Diagnostics BD GeneOhm StrepB Controle du processus de pr paration des chantillons Des souches contr les peuvent tre test es selon les directives ou les exigences des organismes f d raux provinciaux ou locaux de r glementation ou des organismes d accr ditation Une culture de streptocoque du groupe B ex S agalactiae ATCC 12973 ou un isolat clinique bien caract ris de S agalactiae peut servir de contr le de pr paration des chantillons une culture de Streptococcus bovis par exemple ATCC 33317 ou de tout autre streptocoque n appartenant pas au groupe B peut servir de contr le n gatif externe Transf rer 3 colonies mesurant 1 2 mm de diam tre provenant d une culture sur g lose au sang de mouton dans 3 mL de bouillon de tryptica
63. cerrar la bolsa I despu s de la utilizaci n Richiudere la sacca dopo l uso Consult instructions for use Se r f rer aux instructions li d utilisation Gebrauchanweisung beachten Ver las instrucciones de utilizaci n Consultare le instruzioni per l uso NUN GeneOhm Sciences Canada Inc RJ steli 2555 boul du Parc Technologique Qu bec QC Canada G1P 4S5 Helping all people live healthy lives Customer Service Service a la Client le Kundendienst Servicio de Atenci n al Cliente Servizio Assistenza 1 888 436 3646 www bd com ds Australian Representative Benex Limited Becton Dickinson Pty Ltd Pottery Road 4 Research Park Drive Don Laoghaire Macquarie University Research Co Dublin Ireland Park North Ryde NSW 2113 Australia BD and BD logo are trademarks of Becton Dickinson and Company 2014 BD P0001 02 69 Printed in Canada Imprim au Canada Printed in Kanada Impreso en Canada Stampato in Canada
64. chen provinziellen und oder F derations Vorschriften oder Akkreditierungs Organisationen In F llen wo das Labor auch PCR Tests mit offenen R hrchen ausf hrt sollten getrennte und abgeschlossene Arbeitsr ume zur Probenvorbereitung und zur Verst rkung Feststellung angewandt werden Vorr te und Ger te sollten zum jeweiligen Arbeitsraum geh ren und nicht von einem Raum in den anderen bewegt werden Es m ssen stets Handschuhe getragen und beim Wechsel von einem Raum in einen anderen oder vor der Manipulierung von lyophilisierten Reagenzien ausgewechselt werden P0001 02 31 BD Diagnostics BD GeneOhm StrepB e Proben immer als infekti s und im Einvernehmen mit sicheren Laborvorgangen wie sie in Biosafety in Microbiological und Biomedical Laboratories und im CLSI Dokument M29 beschrieben sind behandeln e Bei der Handhabung von Satzreagenzien Schutzkleidung und Einweg Handschuhe tragen Nach dem Test gr ndlich die H nde waschen e Nicht mit dem Mund pipettieren e In Gegenden wo Proben oder Satzreagenzien gehandhabt werden nicht essen trinken oder rauchen e Unverwandte Reagenzien und Abf lle im Einvernehmen mit Landes F derations Provinz Staats und lokalen Vorschriften entsorgen Mitgelieferte Materialien e Probenpuffer Sample Buffer e Lyser hrchen Lysis tube e Master Mix Master mix e Positive Kontrolle PC Positive control e Negative Kontrolle NC Negative control e Verd nnungspuffer
65. cip cing tablissements dot s d un service de maternit dont deux au Canada et trois aux Etats Unis Chaque tablissement avait d ja mis en place un programme de d pistage bas sur les cultures Les tests ont t effectu s dans des laboratoires cliniques rattach s a chacun des tablissements Pour tre s lectionn es les femmes devaient fournir un consentement crit tre en travail et ne pas pr senter de contre indication l examen vaginal ex saignement Il ne devait pas non plus y avoir de signe de placenta praevia d indication imm diate de proc der l accouchement ou de prise d antibiotiques au cours de la semaine pr c dant l admission L tude n a pas tenu compte du temps coul avant l accouchement La m thode de r f rence tait la technique de culture recommand e par les Centers for Disease Control and Prevention soit une culture microbiologique en milieu liquide s lectif milieu liquide de Todd Hewitt enrichi de 15 ug mL d acide nalidixique et de 10 ug mL de colistine ou de 8 ug mL de gentamicine et de 15 ug mL d acide nalidixique il existe d autres pr parations commerciales notamment le bouillon SBM ou Lim Broth suivie d une incubation pendant la nuit et d une sous culture sur g lose au sang L identification sp cifique des colonies suggestives de SGB a t faite au moyen de test d agglutination Huit cent quatre vingt une 881 femmes ont accept de participer l tude 78 d entre
66. crezione o escrezione dall area vaginale 2 Inserire con cura il tampone nel terzo inferiore della vagina e campionare le secrezioni dalla mucosa 3 Inserire con cura lo stesso tampone circa 2 5 cm oltre lo sfintere anale e ruotare delicatamente per campionare i seni anali Ricollocare il tampone nel relativo contenitore Etichettare il contenitore Spedire i tamponi al laboratorio secondo le procedure operative standard dell ospedale Per campioni inviati ad un laboratorio esterno il campione va protetto contro l esposizione a calore eccessivo 7 AI laboratorio mantenere tutti i campioni a temperatura ambiente fino al momento del test se entro 24 ore dal prelievo 8 Fare riferimento alla sezione intitolata Conservazione trattamento e stabilit Campioni prelevati per la conservazione e il trattamento Preparazione del campione Nota Una provetta di Sample Buffer Tampone tappo blu e una Lysis tube Provetta di lisi tappo giallo sono necessarie per il test di ciascun campione Rimuovere il numero necessario di provette dalle rispettive buste protettive rimuovere l aria in eccesso e chiudere rapidamente le buste con la chiusura a cerniera 1 Collocare il dispositivo di prelievo tampone in una provetta di tampone campione tappo blu Identificare la tampone campione sull etichetta del tappo e o della provetta 2 Romperelo stelo del campione e chiudere saldamente la provetta Tenere il tampone per lo
67. cur due to the presence of polymerase inhibitory substances the internal control present in the Master Mix allows the detection of such substances Mutations in primer or probe binding regions may affect detection especially when organisms are present at less than 10 organisms There are no published reports of GBS strains or isolates lacking the cfb gene If such a case occurred BD GeneOhm StrepB assay would yield a false negative result No phenotypically CAMP negative GBS isolates have been evaluated with BD GeneOhm StrepB assay A positive test result does not necessarily indicate the presence of viable organism It is however presumptive for the presence of group B Streptococcus Methods for culturing from the BD GeneOhm StrepB Sample Buffer have not been evaluated Laboratories must validate their own culturing procedures or collect a second specimen to hold in reserve Results from BD GeneOhm StrepB assay should be used as an adjunct to clinical observations and other information available to the physician The test is not intended to differentiate carriers of group B Streptococcus from those with streptococcal infection Test results may also be affected by concurrent antibiotic therapy therefore therapeutic success or failure cannot be assessed using this test since DNA may persist following antimicrobial therapy Although there is no need for reagent preparation and the main technical operations include pipetting good l
68. d tecter les produits d amplification Le test BD GeneOhm StrepB sert a d terminer le statut de colonisation a streptocoques du groupe B SGB chez les femmes enceintes stades prepartum et intrapartum Resume et explication du test Un chantillon vagino rectal est pr lev l aide d un couvillon conserv dans un milieu de transport et achemin au laboratoire L couvillon est retir de la gaine protectrice et plac dans le tampon d chantillon Apr s l obtention d une suspension une aliquote de l chantillon est pr lev e lys e puis ajout e aux r actifs de la PCR qui sont des r actifs pr ts l emploi permettant la mise en uvre du test Le logiciel SmartCycler de Cepheid analyse automatiquement les donn es g n r es La dur e totale du test est d environ 45 minutes L incidence des infections p rinatales streptocoques du groupe B a diminu r cemment aux Etats Unis en raison de la pratique tr s r pandue de l antibioth rapie prophylactique Selon une enqu te nationale men e en 2000 aupr s des membres de l American College of Obstetricians and Gynecologists ACOG 73 5 des r pondants ont eu recours au d pistage indiquant qu il a grandement contribu a la r duction des infections SGB depuis la publication en 1996 des recommandations des Centers for Disease Control and Prevention CDC Cependant le d pistage en phase antepartum a des limites Un test de d pistage
69. d Specimen preparation and BD GeneOhm StrepB assay procedure All specimens and controls should yield valid results no invalid positive or negative control and no failed internal control This procedure may also serve as a quality control procedure for specimen collection devices In such cases testing should be done in triplicate according to the package insert instructions Specimen preparation including controls All specimens and controls should yield valid results no invalid positive or negative control and no failed internal control For general QC guidance the user may wish to refer to CLSI MM3 and C24 Antimicrobial susceptibility testing for penicillin allergic patients Note The Sample Buffer should not affect organism viability However use of the buffer in culturing has not been evaluated A second swab may be obtained from women in order to conduct antimicrobial susceptibility testing Laboratories may choose to validate other approaches Procedures for culturing and antimicrobial susceptibility testing are available from the CDC Interpretation of results The decisional algorithm for the BD GeneOhm StrepB assay is embedded in the SmartCycler software Interpretation of assay results is done according to the following criteria ASSAY result reau Interpretation of result reported reported NEG PASS No GBS DNA detected presumed negative for GBS or number of organisms may be b
70. d zeigten sich als positiv Eine 1 Probe welche sich zuerst mit dem BD GeneOhm StrepB Test als positiv zeigte wurde wegen einer ung ltigen Kontrolle erneut getestet und zeigte sich wiederum als positiv Zw lf 12 Proben welche sich zuerst mit dem BD GeneOhm StrepB Test als negativ zeigten wurden wegen einer ung ltigen Kontrolle erneut getestet und zeigten sich alle wiederum als negativ 8 Proben welche zuerst ein ungel stes Ergebnis zeigten zeigten nach erneutem Testen ein negatives Ergebnis Eine 1 Probe welche zuerst ein ungel stes Ergebnis zeigte blieb nach erneutem Testen ungel st und wurde nicht in die obige Tabelle eingeschlossen D o D P0001 02 38 BD Diagnostics BD GeneOhm StrepB Die Untersuchung von Proben welche kulturpositive BD GeneOhm StrepB negative Ergebnisse lieferten n 9 zeigten dass samtliche Proben eine bakterielle Last unter der Detektionsgrenze von BD GeneOhm StrepB hatten Es wurde ausserdem gezeigt dass die Isolate welche von den kulturpositiven Platten erhalten wurden mit BD GeneOhm StrepB positive Ergebnisse zeigten Die Untersuchung von Proben welche kulturnegative BD GeneOhm StrepB positive Ergebnisse lieferten n 27 zeigten dass samtliche Proben die richtige Zielregion einschliesslich Primer Bindungsregionen des cfb Gens enthielten und dass das verstarkte Produkt dasselbe war welches mit BD GeneOhm StrepB erwartet wurde Die Gesamtpravalen
71. da procedura di controllo della qualit per dispositivi di prelievo di campioni In tali casi i test vanno eseguiti in triplicato secondo le istruzioni dell inserto della confezione Preparazione del campione compresi i controlli Tutti i campioni e i controlli dovranno fornire risultati validi nessun controllo non valido positivo o negativo e nessun controllo interno non riuscito Per indicazioni generali sul controllo della qualit l utente pu fare riferimento a CLSI MM3 e C24 Test di suscettibilit antimicrobica per pazienti allergiche alla penicillina Nota La soluzione tampone campione non dovr influenzare la vitalit dell organismo Tuttavia Putilizzo della soluzione tampone nelle colture non stato valutato Un secondo tampone pu essere ottenuto dalle donne al fine di svolgere un test di suscettibilit antimicrobica laboratori potrebbero scegliere di convalidare altri metodi Le procedure per la coltivazione e i test di suscettibilit antimicrobica sono disponibili presso i CDC Interpretazione dei risultati L algoritmo decisionale per il saggio BD GeneOhm StrepB incorporato nel software SmartCycler L interpretazione dei risultati del saggio eseguita in base ai seguenti criteri P0001 02 61 BD Diagnostics BD GeneOhm StrepB Risultato I SE IC Interpretazione del risultato saggio riportato riportato PASS Nessun DNA GBS rilevato presunto negativo
72. de Catalogo Numero di catalogo Symbol Symbole Meaning Signification Bedeutung Significado Simbolo Simbolo Significato REF Catalog number R f rence du Catalogue Bestellnummer In Vitro Diagnostic use Aux fins de Diagnostic In Vitro In vitro IVD Diagnostika Para fines de Diagn stico in Vitro Uso diagnostico In Vitro m Manufacturer Fabricant Hersteller Fabricante Produttore Authorized european representative Repr sentant europ en ec rer autoris Bevollmachtigter in der Europ ischen Gemeinschaft Representante europeo autorizado Rappresentante europeo autorizzato Contains sufficient for n tests Contenu suffisant pour n tests Inhalt ausreichend fur n Prufungen Contiene cantidad sufficiente para n pruebas Il contenuto sufficiente per n test Batch code Code de lot Chargenbezeichnung Codigo de lote Codice del lotto Use by Utiliser avant Verwendbar bis Fecha de caducidad Data di scadenza Temperature limitation Limites de temp rature Temperaturbegrenzung Limites de temperatura Limiti di temperatura E Protect from light and moisture Conserver a l abri de la lumi re A et de l humidit Vor Licht und Feuchtigkeit sch tzen Conservar al abrigo de la luz y la humedad Proteggere da luce e umidita lt Q ES Reseal bag after use Refermer le sac apres utilisation Beutel M nach Gebrauch wieder verschliefen Volver a
73. demeur s positifs Un 1 chantillon consid r d abord comme positif au test BD GeneOhm StrepB a t repris en raison d un contr le invalid et est demeur positif Douze 12 chantillons consid r s d abord comme n gatifs au test BD GeneOhm StrepB ont t repris en raison d un contr le invalid et sont tous demeur s n gatifs 8 chantillons ayant donn initialement des r sultats non r solus se sont r v l s n gatifs la reprise du test Un 1 chantillon ayant donne initialement un r sultat non r solu est rest non r solu a la reprise du test et n a pas t inclus dans le tableau ci dessus D o D L examen des chantillons ayant donn des r sultats positifs a la culture et n gatifs au test BD GeneOhm StrepB n 9 a r v l la pr sence d une charge bact rienne inf rieure au seuil de d tection du test De plus tous les isolats provenant de ces cultures sur g lose positives ont donn des r sultats positifs au test BD GeneOhm StrepB L examen des chantillons ayant donn des r sultats n gatifs a la culture et positifs au test BD GeneOhm M StrepB n 27 a r v l que tous contenaient la r gion cibl e y compris les r gions compl mentaires des amorces du g ne cfb et que le produit amplifi correspondait celui attendu avec le test BD GeneOhm StrepB La pr valence g n rale de colonisation dans la population l tude s est tablie 18 6 varia
74. den angegebenen Anleitungen Es wird nicht weder ausdr cklich noch stillschweigend noch durch Duldung das Recht bertragen Instrumente oder Systeme ber die in diesem Produkt enthaltene Menge hinaus unter dem US Patentanspruch Nr 6 787 338 zu verwenden Este equipo se vende bajo licencia del Public Health Research Institute of the City of New York Inc PHRI y puede ser utilizado nicamente para diagn stico clinico in vitro en seres humanos seg n los derechos de patente del PHRI La compra de este producto permite al comprador utilizarlo para la amplificaci n y detecci n de secuencias de cido nucleico en los diagn sticos cl nicos in vitro en seres humanos No se otorga por el presente documento ninguna patente general ni ninguna otra licencia de cualquier tipo aparte del derecho de utilizaci n espec fica conferido por la compra La adquisici n de este producto incluye una licencia limitada no transferible bajo la patente de los EE UU N 6 787 338 propiedad de la Fundaci n de Investigaci n de la Universidad de Utah y licenciada a Idaho Technology Inc para utilizar solamente la cantidad adjunta del producto de conformidad con los protocolos especificados No se concede ning n derecho expreso o impl cito ni por impedimento para utilizar ning n instrumento o sistema bajo ninguna afirmaci n de la patente de los EE UU N 6 787 338 m s que para la cantidad de producto aqu contenida Questo kit venduto sotto lic
75. e devono rispettare le specifiche riportate su ogni busta Le provette esterne alla loro sacca protettiva e non utilizzate entro il limite temporale specificato vanno scartate Sample buffer e Diluent rispettivamente tappo blu ed etichetta a strisce nere Master mix e Controls etichette a strisce bianche e rosse Lysis tube i del ki Componenti del kit tappo giallo 2 25 C Data di scadenza 2 25 C Data di scadenza 2 25 2 25 C Data di scadenza 2 25 C Temperatura Stabilita Busta sigillata 2 8 C 1 mese Temperatura Stabilit Busta aperta Data di scadenza 2 mesi Una volta rotto il sigillo originale sulla busta chiudere con cura la busta con la chiusura a cerniera dopo ciascun utilizzo e conservare a 2 8 C Sebbene questi reagenti possano essere conservati a temperatura ambiente vanno conservati assieme ai rispettivi reagenti di accompagnamento dello stesso lotto a 2 8 C Purch la sacca sia correttamente chiusa con la chiusura a cerniera dopo ciascun utilizzo Master Mix e Controls Componente del kit esterno alla propria busta protettiva etichette bianche rosse o verdi Temperatura 15 25 C Provette non ricostituite Stabilita 2 ore Materiali necessari ma non forniti e BBL CultureSwab Liquid Stuart catalogo Becton Dickinson n Transystem Liquid Stuart cat
76. e i ceppi di controllo secondo le indicazioni o i requisiti delle normative locali regionali e o nazionali o delle organizzazioni di verifica Una coltura di Streptococcus gruppo B ad es S agalactiae American Type Culture Collection ATCC 12973 o un isolato clinico ben caratterizzato di S agalactiae possono essere utilizzati da un controllo di trattamento dei campioni mentre una coltura di Streptococcus bovis ad es ATCC 33317 o di qualsiasi altro Streptococcus non gruppo B pu essere utilizzata come controllo negativo esterno Trasferire 3 colonie di dimensione 1 2 mm da una piastra agar di sangue di pecora fresco in 3 mL di brodo al triptone di soia e far crescere fino ad un DE di 0 6 a 600 nm Preparare diluizioni seriali in soluzione salina per ottenere una sospensione batterica di circa 10 CFU mL Immergere il tampone consigliato con mezzo liquido si Stuart fare riferimento a Materiali necessari ma non forniti nella sospensione batterica ricollocare il tampone nel relativo contenitore per consentire il contatto col mezzo di trasporto lasciare riposare a temperatura ambiente per 5 min e quindi sottoporre a test come campione clinico fare riferimento alle sezioni intitolate Preparazione del campione e Procedura di saggio BD GeneOhm StrepB Tutti i campioni e i controlli dovranno fornire risultati validi nessun controllo non valido positivo o negativo e nessun controllo interno non riuscito Questa procedura pu anche servire
77. e junto con nuevos tubos de control Muestras sin resolver Repita la prueba con el lisado congelado de la muestra correspondiente Se ha demostrado que el efecto del ciclo de congelaci n descongelaci n reduce las sustancias inhibidoras de PCR Muestra sin determinar debido a fallo del m dulo I CORE Repita la prueba con el lisado congelado de la muestra correspondiente Para la interpretaci n de mensajes de advertencia o c digos de error consulte el Manual del operador del Software Dx de SmartCycler P0001 02 49 BD Diagnostics BD GeneOhm StrepB Limitaciones del procedimiento e La eficacia de esta prueba se ha establecido con el SmartCycler con muestras vaginales rectales de pacientes antes y durante el parto obtenidas con Copan Venturi Transystem y medio Stuart liquido Por consiguiente este producto s lo puede utilizarse con el SmartCycler ademas no se recomienda el uso de otros sistemas de obtenci n y transporte de muestras aparte de los que figuran en la secci n Material necesario pero no suministrado No se han evaluado otras fuentes clinicas y se desconoce la eficacia de esta prueba en otros tipos de muestras e Pueden producirse resultados negativos de la prueba debido a una obtenci n manipulaci n o conservaci n inadecuadas de las muestras a la presencia de un inhibidor a un error t cnico a la confusi n de muestras o a que el numero de organismos en la muestra sea inferior a la sensibilidad
78. e le donne che saranno verosimilmente colonizzate con GBS al momento del parto Nello studio di ricerca per BD GeneOhm StrepB la frequenza di colonizzazione complessiva al momento del parto determinata con la tecnica della coltura era del 18 6 con un intervallo dal 9 1 al 28 7 nei diversi siti clinici Con BD GeneOhm StrepB complessivamente il 20 1 delle donne intrapartum era positivo Oltre allo screening intrapartum anche un sottoinsieme di donne 674 stato sottoposto a screening della coltura prematura Di queste l 11 7 era positivo durante il test antepartum Complessivamente il 10 2 di queste donne aveva risultati della coltura antepartum diversi da quelli della coltura intrapartum e 1 11 6 aveva risultati della coltura antepartum diversi dai risultati intrapartum di BD GeneOhm StrepB In altri studi sono state riportate sensibilit dell 87 83 92 Cl e del 69 57 79 Cl e specificit del 96 95 98 CI e del 92 89 94 Cl per colture nell ultima fase prenatale per identificare lo stato della colonizzazione al momento del parto P0001 02 63 BD Diagnostics BD GeneOhm StrepB Caratteristiche prestazionali Prestazioni cliniche Le caratteristiche prestazionali del saggio BD GeneOhm SirepB sono state determinate in uno studio di ricerca prospettivo a piu siti cinque istituzioni con servizi di maternita 2 in Canada e 3 negli U S A Ciascuna istituzione aveva avviato un programma di screeni
79. e n gative Temps coul BD BD BD BD concordance IC a heures GeneOhm GeneOhm GeneOhm GeneOhm 95 pos L n g L n g pos 0 to 4 11 3 88 4 93 87 97 4108 32 3 220 10 95 92 97 8 to 12 9 0 29 2 95 83 99 12 to 24 41 2 143 4 97 93 99 24 to 48 35 0 127 7 96 92 98 gt 48 12 1 19 0 97 84 100 Total 140 9 626 27 96 94 97 Tous les chantillons avaient une charge bact rienne inf rieure au seuil de d tection du test BD GeneOhm StrepB Tous les chantillons contenaient la r gion cibl e y compris les r gions de liaison des amorces du g ne cfb et le produit amplifi correspondait celui attendu avec le test BD GeneOhm StrepB B La rupture des membranes n a pas eu d effet sur la performance du test BD GeneOhm StrepB La pr sence ou l absence de liquide amniotique ou de m conium dans les chantillons pr lev s a servi d indicateur de la rupture des membranes La sensibilit et la sp cificit du test BD GeneOhm StrepB n ont pas vari selon que les pr l vements aient t effectu s en phase antepartum ou intrapartum tableau 4 Tableau 4 Performance du test BD GeneOhm StrepB effectu en phase antepartum ou intrapartum Sensibilit Sp cificit Concordance Se 95 53 56 96 301 315 95 354 371 p 85 99 93 98 93 97 inganni 94 87 93 96 325 338 96 412 431 p 86 98
80. e sollten zum sp teren Gebrauch bei 20 5 C eingefroren werden falls n tig 8 Unmittelbar bevor man die R hrchen ins Instrument l dt DEN K HLBLOCK MIT DEN ROHRCHEN 5 10 Sekunden lang IM VORTEXGERAT WIRBELN 9 Mit dem BD GeneOhm StrepB Pr fprotokoll einen Durchlauf erstellen Bei Bedarf in der SmartCycler Dx Software Bedienungsanleitung nachschlagen Sie sollten die Identifizierungsparameter f r die Proben eingeben bevor Sie den Durchlauf starten 10 Jedes Reaktionsr hrchen in ein I CORE Modul des SmartCycler einschieben und den I CORE Deckel schliessen Die Positive und Negative Kontrollen in ihren richtigen Positionen einschieben siehe den Abschnitt Qualit tskontrolle S mtliche R hrchen fest an ihren Platz herunterdr cken 11 Den Durchlauf starten Qualit tskontrolle Positive und negative Kontrollen Qualit ts Kontrollvorg nge sind dazu gestaltet die Leistung des Testsatzes zu berwachen Die positive Kontrolle soll wesentliche Reagenzfehlschl ge berwachen Die negative Kontrolle wird angewandt um Verunreinigungen in der Reagenz oder aus der Umwelt oder eingetragene Verunreinigungen durch entweder S agalactiae oder GBS Amplikonen festzustellen Positive und negative Kontrollen sind Satzkontrollen Durchlaufkontrollen Eine ung ltige Kontrolle macht den Durchlauf ung ltig Schliesslich ist eine interne Kontrolle welche ein Bestandteil von jeder Reagenzmischung ist dazu gedacht
81. eitung Zusatzteile und Desktop Computer Cepheid Sunnyvale CA USA Gebrauchsanweisungen Probensammlung Um eine gen gende Probe zu erhalten muss das Arbeitsverfahren zur Probensammlung genau befolgt werden Mit dem empfohlenen Tupfer mit Fl ssigem Stuart Medium siehe Materialien welche ben tigt aber nicht mitgeliefert werden werden vaginal rektale Proben nach dem folgenden Verfahren genommen 1 bersch ssiges Sekret oder Ausfluss von der Vaginalgegend wegwischen 2 Den Tupfer vorsichtig in das untere Drittel der Vagina schieben und Proben von den Sekreten der Schleimh ute entnehmen 3 Denselben Tupfer vorsichtig etwa 2 5 cm durch den analen Schliessmuskel schieben und leicht rotieren um eine Probe aus den Analkrypten zu entnehmen Den Tupfer in seinen Beh lter zur cktun Den Beh lter etikettieren Die Tupfer im Einklang mit den Standard Arbeitsverfahren des Krankenhauses zum Labor transportieren Wenn Proben an ein Labor an einem anderen Ort verschickt werden sollten die Proben vor berm ssiger Hitze gesch tzt werden 7 Im Labor alle Proben bis zum Testen bei Zimmertemperatur aufbewahren falls inerhalb von 24 Stunden nach Entnahme 8 F r Lagerung und Handhabung den Abschnitt Lagerung Handhabung und Stabilit t Gesammelte Proben lesen Probenvorbereitung Hinweis Ein Sample Buffer R hrchen Probenpuffer blauer Verschluss und ein Lysis tube Lyser hrchen gelber Verschluss werden f
82. ekunden um den Inhalt zum Boden des R hrchens zu bringen Bei 95 2 C 2 Minuten lang erhitzen Einen trockenen Erhitzungsblock f r 1 5 mL R hrchen oder ein Wasserbad anwenden Das Lyser hrchen auf Eis oder einen K hlblock stellen BD GeneOhm StrepB Testvorgang Hinweis Ein R hrchen Master Mix Master Mix SmartCycler R hrchen mit einem weissen 4 Etikett wird f r jede zu testende Probe ben tigt Ein Positive control tube Positive Kontrolle rotes Etikett und ein Negative controltube Negative Kontrolle gr nes Etikett werden f r jeden Pr fvorgang ben tigt Ein R hrchen mit Diluent Verd nnungspuffer Etikett mit schwarzem Streifen wird f r die Aufbereitung von etwa 40 PCR Reaktionen ben tigt Die ben tigte Anzahl von R hrchen aus dem Schutzbeutel nehmen bersch ssige Luft hinausdr cken und den Beutel rasch mit dem Reissverschluss verschliessen Nur genug SmartCycler R hrchen vorbereiten um die verf gbaren I CORE Module am SmartCycler Instrument zu f llen Die Master Mix und die Positive Kontrolle tubes und Negative Kontrolle tubes zum Testen auf den SmartCycler K hlblock stellen Die Master Mix tubes weisses Etikett auf dem Verschluss mit den Probenidentifizierungsetiketten identifizieren welche mit dem Satz mitgeliefert werden Die Master Mix und die Positive Kontrolle tubes und Negative Kontrolel tubes ffnen Das R hrchen fest am oberen gerippten Teil halten und den Verscshlus
83. elle sonde lt 0 001 primer lt 0 002 sonde molecolari lt 0 05 dATP dCTP dGTP dTTP Siero albumina bovina Carboidrati lt 0 001 DNA GBS genomico non infettivo col gene cfb Controllo negativo Negative Control 50 provette lt 0 001 complesso polimerasi DNA lt 0 001 controllo interno DNA non infettivo contenente sequenze di legame di primer GBS e una sequenza unica per l ibridizzazione delle sonde P0001 02 56 BD Diagnostics BD GeneOhm StrepB lt 0 001 primer lt 0 002 sonde molecolari lt 0 05 dATP dCTP dGTP dTTP Siero albumina bovina Carboidrati lt 0 005 DNA genomico non infettivo da Streptococcus pneumoniae Diluente Diluent 50 x 1 mL Soluzione tampone HCI tris MgCl NH4 2SO4 Precauzioni Questo test solo per uso diagnostico in vitro e Non utilizzare il kit se rotta la chiusura di sicurezza sul contenitore esterno e Non utilizzare i reagenti se i sacchetti protettivi sono aperti o danneggiati alla consegna e Chiudere rapidamente le borse protettive dei Master Mix e dei controlli con la chiusura a cerniera dopo ciascun utilizzo e Non togliere l essiccante dai sacchetti di Master Mix e controlli e Non usare i reagenti se l essiccante non presente nei sacchetti di Master Mix e controlli e reagenti non sono intercambiabili tra i lotti e Non riunire reagenti di provette diverse anche se provengono dallo stesso lotto e Non utilizzare i reagenti dopo
84. elles ont t exclues pour diff rents motifs changement d avis vrai travail non commenc ou autre cart au protocole Par cons quent les caract ristiques d efficacit du test BD GeneOhm M StrepB ont t tablies partir des r sultats obtenus chez 803 femmes en accouchement Tous les sujets en phase intrapartum ont t soumis deux pr l vements vagino rectaux effectu s l aide de l couvillon recommand avec milieu Stuart liquide voir mat riel n cessaire mais non fourni selon la technique recommand e par les CDC l un a t analys selon la technique de culture P0001 02 25 BD Diagnostics BD GeneOhm StrepB recommand e par les CDC l autre selon le test BD GeneOhm StrepB Les r sultats de l tude figurent aux tableaux 1 4 Tableau 1 R sultats obtenus au test BD GeneOhm StrepB par rapport a la culture Test BD GeneOhm StrepB Positif N gatif Total M thodes de Positif 1408 9 149 culture N gatif 27 626 653 Total 167 635 802 gt Quatorze 14 chantillons d abord consid r s comme n gatifs a la culture se sont av r s positifs apres examen 1 d entre eux tait initialement non r solu mais a la reprise du test a donn un r sultat positif 3 chantillons consid r s d abord comme positifs au test BD GeneOhm StrepB ont t repris en raison de contr les invalid s positif et n gatif et sont
85. elow the limit of detection of the assay POS NA GBS DNA detected presumed positive for GBS Unresolved FAIL Unresolved inhibitory specimen or reagent failure Not determined due to I Core Module failure with Warning or Error ND ND Codes IC Internal Control NA not applicable ND not determined A Refer to the SmartCycler Dx Software Operator Manual for the interpretation of warning and error codes An invalid positive or negative control invalidates the assay run In such cases assay results obtained in that run are invalid and must not be reported Invalid assay run or instrument error codes or warnings are flagged on screen and on reports Before reporting GBS results always verify that the assay run is valid Refer to the SmartCycler Dx Software Operator Manual for printing results Invalid assay Run Using frozen lysate s prepare new reaction tubes for all clinical specimens within that assay run along with new control tubes Unresolved specimens Repeat testing with the corresponding specimen frozen lysate The effect of the freeze thaw cycle has been shown to reduce PCR inhibitory substances P0001 02 Tt BD Diagnostics BD GeneOhm StrepB Specimen not determined due to I CORE module failure Repeat testing with the corresponding specimen frozen lysate For the interpretation of warning or error code messages refer to the SmartCycler Dx Software Operator Manual Limitations of the procedure P
86. en la vagina o el recto La colonizaci n por SGB puede ser transitoria cr nica o intermitente La detecci n de la presencia de SGB en vagina y recto mediante cultivo al final de la gestaci n permite determinar durante el seguimiento prenatal las mujeres susceptibles de estar colonizadas por SGB en el momento del parto En el estudio experimental para BD GeneOhm StrepB la tasa de colonizaci n global en el momento del parto determinada con la t cnica de cultivo fue del 18 6 con un intervalo entre 9 1 y 28 7 en las distintas instituciones cl nicas Con BD GeneOhm StrepB en general el 20 1 de las mujeres durante el parto dieron positivo Adem s de la detecci n precoz durante el parto a un grupo de mujeres 674 se le realiz un cultivo antes del parto de ellas el 11 7 dio positivo en las pruebas prenatales En general el 10 2 de esas mujeres present resultados de cultivo antes del parto diferentes a los resultados de cultivo durante el parto y el 11 6 present resultados de cultivo antes del parto diferentes a los resultados de BD GeneOhm StrepB durante el parto En otros estudios se notificaron sensibilidades del 87 83 92 IC y del 69 57 79 IC y especificidades del 96 95 98 IC y del 92 89 94 IC para los cultivos prenatales tard os en la identificaci n del estado de colonizaci n durante el parto Eficacia diagn stica Eficacia cl nica La eficacia diagn stica de la prueba BD GeneOhm
87. enza dal Public Health Research Institute della City of New York Inc e pud essere utilizzato nell ambito dei diritti del paziente PHRI solo per la diagnostica clinica umana in vitro L acquisto di questo prodotto consente all acquirente di utilizzarlo per Pamplificazione e il rilevamento delle sequenze di acidi nucleici per la fornitura di diagnostica umana in vitro Con la presente non concesso alcun brevetto generale o altra licenza di alcun tipo diversa da questo specifico diritto di utilizzo conferito dall acquisto Con l acquisto del suddetto prodotto viene altres conferita una licenza d uso limitata e non trasferibile in conformit con il brevetto N 6 787 338 depositato negli Stati Uniti detenuto dalla University of Utah Research Foundation e concesso in licenza alla Idaho Technology Inc esclusivamente per l utilizzo del quantitativo di prodotto accluso conformemente con i protocolli indicati Peraltro non viene conferito alcun diritto esplicito implicito o preclusivo in relazione all uso di strumenti o sistemi in virt dei diritti derivanti dal brevetto N 6 787 338 depositato negli Stati Uniti salvo per quanto attiene al quantitativo di prodotto di cui sopra P0001 02 68 Printed in Canada Imprim au Canada Printed in Kanada Impreso en Canad Stampato in Canada BD Diagnostics BD GeneOhm StrepB Index of symbols Table des symboles Symbolindex Indice de simbolos Indice dei simboli Numero
88. epB Tabella 2 Prestazioni cliniche del saggio BD GeneOhm StrepB in riferimento alla tecnica di coltura consigliata da CDC Sensibilit clinica Specificit clinica en Da Sito 1 93 n 15 68 100 93 n 150 87 96 5 2 55 Sito 2 88 n 25 69 97 100 n 62 97 100 0 0 38 Sito 3 99 n 77 93 100 97 n 350 94 98 1 1 56 Sito 4 85 n 13 54 98 100 n 35 98 100 1 1 21 Sito 5 89 n 19 67 99 93 n 56 82 98 3 1 22 Totale 94 n 149 89 97 96 n 653 94 97 10 5 192 Intervalli di confidenza binomiale 95 B Tutti i campioni erano non chiari a causa di controlli interni non superati indicativi di inibizione o di problemi del reagente Nove 9 dei 10 sono stati risolti con un nuovo test Tabella 3 Stratificazione dei risultati in base al tempo trascorso tra il prelievo dei campioni e il test col saggio BD GeneOhm StrepB Positivo alla coltura Negativo alla coltura Tempo S D trascorso Positivo Negativo Negativo Positivo di accordo CI 95 ore BD BD BD BD GeneOhm GeneOhm GeneOhm GeneOhm da0a4 11 3 88 4 93 87 97 da4a8 32 3 220 10 95 92 97 da 8 a 12 9 0 29 2 95 83 99 da 12 a 24 41 2 143 4 97 93 99 da 24 a 48 35 0 127 7 96 92 98 gt 48 12 1 19 0 97 84 100 Totale 140 9 626 27 96 94 97 A Tutti i
89. equate specimen the procedure for specimen collection must be followed closely Using the recommended swab with Liquid Stuart Medium refer to Materials required but not provided vaginal rectal specimens are collected according to the following procedure 1 Wipe away excessive amount of secretion or discharge from the vaginal area 2 Carefully insert the swab into the lower one third part of the vagina and sample secretions from the mucosa 3 Carefully insert the same swab approximately 2 5 cm beyond the anal sphincter and gently rotate to sample anal crypts Replace the swab in its container Label the container Ship the swabs to the laboratory according to hospital standard operating procedures For specimens sent to a laboratory off site the specimen should be protected against exposure to excessive heat 7 At the laboratory keep all specimens at room temperature until testing if within 24 hours from collection 8 Refer to the section entitled Storage handling and stability Collected specimens for storage and handling Specimen preparation Note One Sample Buffer tube blue cap and one Lysis tube yellow cap are required for each specimen to be tested Remove the required number of tubes from their protective pouches remove the excess air and close the pouches quickly with the zip seal 1 Place the collection device swab in a Sample Buffer tube blue cap Identify the Sample Buffer on the cap and or
90. erformance of this test has been established with the SmartCycler instrument with vaginal rectal specimen from antepartum and intrapartum patients collected with Copan Venturi Transystem with Liquid Stuart Medium Therefore this product can only be used with the SmartCycler moreover the use of specimen collection and transport system other than those listed in the Material required but not provided section is not recommended Other clinical sources have not been assessed and performance characteristics of this test are unknown on other specimen types Negative test results may occur from improper specimen collection handling or storage presence of inhibitor technical error sample mix up or because the number of organisms in the specimen is below the analytical sensitivity of the test Careful compliance to the instructions given in this insert and in the SmartCycler Dx Software Operator Manual is necessary to avoid erroneous results Use of this test should be limited to personnel trained on the procedure and on the use of the SmartCycler Since detection of group B Streptococcus is dependent on the number of organisms present in the sample reliable results are dependent on proper specimen collection handling and storage BD GeneOhm StrepB assay results may sometimes be unresolved or invalidated due to an invalid control and require retesting that can result in a delay for obtaining the results False negative results may also oc
91. eristicas fenotipicas y moleculares mostraron que el gen cfb esta bien conservado dentro de esta especie Se han desarrollado cebadores complementarios a las regiones conservadas y espec ficas del gen para amplificar un fragmento de 154 bp del gen cfb Se recoge una muestra vaginal rectal y se transporta al laboratorio utilizando la torunda recomendada en medio Stuart l quido consulte la secci n Material necesario pero no suministrado La torunda se coloca en la soluci n tamp n a fin de eluir su contenido y una al cuota se transfiere al tubo de lisis La lisis se produce por una combinaci n de mecanismos f sicos y qu micos en menos de 15 minutos Se agrega una muestra del lisado directamente a los reactivos de PCR contenidos en el tubo de reacci n del SmartCycler y se analiza con el instrumento SmartCycler un termociclador de fluorescencia a tiempo real y de acceso aleatorio En las muestras que contienen SGB la regi n de 154 bp del gen cfb se amplificar y se detectar Asimismo se producir la amplificaci n del Cl un fragmento de ADN de 180 bp que consiste en una secuencia de 134 bp no encontrada en SGB flanqueada por la secuencia de cada uno de los dos cebadores espec ficos de SGB Las dianas amplificadas de ADN se detectan con marcadores moleculares oligonucle tidos monocatenarios en forma de horquilla que disponen de un desactivador de fluorescencia quencher en un extremo y de un colorante indicador fluorescente flu
92. ervices 2 in Canada and 3 in the U S Each institution had in place a culture based screening program Testing was done in clinical laboratories affiliated with each institution To be enrolled in the study women had to provide written consent be in labor and have no contraindication to vaginal examination e g bleeding There was also no evidence of placenta previa no urgent indication to proceed to delivery and no antibiotic used in the week prior to admission The study did not account for times to delivery for the patients The method of reference used was the culture technique recommended by the Centers for Disease Control and prevention that is microbiological culture in selective broth medium Todd Hewitt broth medium supplemented with 15 ug mL of nalidixic acid and 10 ug mL of colistin or with 8 ug mL of gentamicin and 15 ug mL of nalidixic acid other commercially available media include SBM broth or Lim Broth followed by overnight incubation and subculture onto solid blood agar medium Specific identification of colonies suggestive of GBS was done with slide agglutination tests Eight hundred and eighty one 881 women consented to participate in the study Of those 78 were excluded because the woman had either changed her mind or was not in labor or because of deviations to the protocol Therefore the performance characteristics of BD GeneOhm StrepB were determined from results of 803 intrapartum maternity patients Two vagina
93. es compl mentaires des amorces de SGB et une s quence unique pour la sonde d hybridation Amorces lt 0 001 Sondes d hybridation lt 0 002 dATP dCTP dGTP dTTP lt 0 05 Albumine bovine Hydrate de carbone ADN g nomique non infectieux de Streptococcus pneumoniae lt 0 005 Contr le positif Positive Control 50 tubes Complexe ADN polym rase lt 0 001 Contr le interne lt 0 001 ADN non infectieux contenant les s quences compl mentaires des amorces de SGB et une s quence unique pour la sonde d hybridation Amorces lt 0 001 Sondes d hybridation lt 0 002 dATP dCTP dGTP dTTP lt 0 05 Albumine bovine Hydrate de carbone ADN g nomique non infectieux de SGB contenant le g ne cfb lt 0 001 Contr le negatif Negative Control 50 tubes Complexe ADN polym rase lt 0 001 Contr le interne lt 0 001 ADN non infectieux contenant les s quences compl mentaires des amorces de SGB et une s quence unique pour la sonde d hybridation Amorces lt 0 001 Sondes d hybridation lt 0 002 dATP dCTP dGTP dTTP lt 0 05 Albumine bovine Hydrate de carbone ADN g nomique non infectieux de Streptococcus pneumoniae lt 0 005 Diluant Diluent 50 x 1 mL Tampon Tris HCl P0001 02 18 BD Diagnostics BD GeneOhm StrepB MgCl NH4 2SO4 Pr cautions Test aux fins de diagnostic in vitro seulement Ne pas utiliser la trousse si le sceau de s curit sur la bo
94. es plages de temps indiqu es devraient tre repris Des contr les suppl mentaires peuvent tre effectu s suivant les directives ou les exigences des organismes f d raux provinciaux ou locaux de r glementation ou des organismes d accr ditation Lorsque des r actions de PCR en tube ouvert sont galement effectu es dans le laboratoire la pr paration des chantillons ainsi que les activit s d amplification et de detection devraient se faire dans des zones distinctes de travail Les fournitures et le mat riel devraient tre exclusifs chaque zone et ne devraient pas passer d une zone a l autre Il faut toujours porter des gants et les changer avant de passer dans une autre zone ou avant de manipuler les r actifs lyophilis s Toujours manipuler les chantillons comme s ils taient infectieux et appliquer les pr cautions d usage comme celles d crites dans Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories et dans le document M29 du CLSI Porter des v tements de protection et des gants jetables pour la manipulation des r actifs Se laver soigneusement les mains apr s avoir effectu le test Ne pas pipeter avec la bouche Ne pas fumer boire ou manger dans les zones de manipulation des chantillons et des r actifs Jeter les r actifs non utilis s et les d chets conform ment a la r glementation nationale f d rale provinciale ou locale Mat riel fourni Tampon d chantillon Sample Buf
95. eva a cabo de acuerdo con los siguientes criterios Resultado Resultado notificado de la notificado de Interpretaci n del resultado prueba Cl NEG PASS No se ha detectado ning n ADN de SGB supuesto negativo de SGB o el numero de organismos puede estar por debajo del limite de Negativo Aceptado detecci n de la prueba POS NA D Detectado ADN de SGB supuesto positivo de SGB Positivo NA U lved FAIL SSR ge Sin resolver Muestra inhibidora o defecto de reactivo Sin resolver Rechazado ND ND Sin determinar debido a fallo del M dulo I Core con advertencias o SD SD c digos de error IC Control Interno NA no aplicable SD sin determinar A Consulte el Manual del operador del Software Dx de SmartCycler para la interpretaci n de advertencias y c digos de error Un control positivo o negativo no v lido invalida la serie anal tica En dichos casos los resultados de la prueba obtenidos en esa serie no son v lidos y no deben ser notificados En la pantalla y en los informes aparece marcado serie no v lida o c digos de error o advertencias del instrumento Antes de notificar los resultados de SGB verifique siempre que la serie sea v lida Consulte el Manual del operador del Software Dx de SmartCycler para imprimir los resultados Serie no v lida Utilizando lisados congelados prepare nuevos tubos de reacci n para todas las muestras cl nicas de esa seri
96. ez des femmes en phase antepartum ou intrapartum en utilisant des couvillons simples Copan Venturi Transystem avec milieu Stuart liquide Ainsi ce test peut tre utilis uniquement avec le SmartCycler L utilisation de syst mes de pr l vement et de transport des chantillons autres que ceux indiqu s la section Mat riel requis mais non fourni n est pas recommand Aucune autre source de pr l vements cliniques n a fait l objet d valuation les caract ristiques d efficacit du test pour d autres types d chantillons ne sont donc pas connues Des techniques inad quates de pr l vement d chantillons de manutention et d entreposage la pr sence de substances inhibitrices des erreurs techniques un m lange d chantillons ou un nombre de micro organismes dans l chantillon inf rieur la sensibilit analytique du test peuvent donner lieu des r sultats n gatifs Pour viter des r sultats erron s il est essentiel de respecter scrupuleusement les consignes donn es dans la pr sente notice et dans le manuel d utilisation du logiciel SmartCycler Dx Le test devrait tre effectu uniquement par du personnel form la technique ainsi qu l analyse sur le SmartCycler Puisque la d tection du streptocoque du groupe B est tributaire du nombre de micro organismes pr sents dans l chantillon l obtention de r sultats fiables d pend de la qualit des techniques de pr l vement de manipulation et de transp
97. federal o de organizaciones acreditadoras En los casos en que el laboratorio realiza tambi n pruebas de PCR con tubos abiertos deben utilizarse zonas de trabajo separadas y aisladas para las actividades de preparaci n de muestras y amplificaci n detecci n Los suministros y el equipo deben estar dedicados a cada rea y no deben moverse de un rea a otra Siempre deben llevarse guantes y stos deben cambiarse antes de pasar de un rea a otra o antes de manipular reactivos liofilizados P0001 02 44 BD Diagnostics BD GeneOhm StrepB e Manipule siempre las muestras como si fueran infecciosas y de acuerdo con los procedimientos de seguridad en laboratorio como los descritos en Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories y en el en Documento M29 de CLSI e Lleve ropa protectora y guantes desechables cuando manipule los reactivos del equipo Lavese las manos bien despu s de realizar la prueba e No pipetee con la boca e No fume beba o coma en reas donde se trabaje con muestras o reactivos del equipo e Deshagase de los reactivos no utilizados y de los desechos de acuerdo con el reglamento federal provincial estatal y local del pais Material proporcionado e Tampon de muestras Sample Buffer e Tubo de lisis Lysis tube e Mezcla maestra Master Mix e Control positivo CP Positive Control e Control negativo CN Negative Control e Diluyente Diluent e Etiquetas de identificaci n de
98. fer Tube de lyse Lysis tube M lange r actionnel Master Mix Contr le positif Positive Control Contr le n gatif Negative Control Diluant Diluent Etiquettes d identification des chantillons P0001 02 19 BD Diagnostics BD GeneOhm StrepB Entreposage manutention et stabilite Echantillons pr lev s Les chantillons doivent tre conserv s entre 2 C et 30 C durant le transport et doivent tre prot g s du gel et de la chaleur excessive Les chantillons qui peuvent tre test s l int rieur de 24 heures peuvent tre conserv s temp rature ambiante 15 30 C dans le cas contraire il est recommand de les r frig rer Les chantillons conserv s entre 2 C et 8 C sont stables jusqu a 6 jours R actifs Note Entreposer les r actifs tel que pr cis sur chaque pochette Hors de leur pochette protectrice les tubes non utilis s a l int rieur des d lais prescrits doivent tre jet s Master mix et Sample buffer et Composante de la Controls tiquette Lysis tube Diluent trousse blanche rouge ou hon iaun capuchon bleu et verte capuchon jaune tiquette bande respectivement noire respectivement Pochette 2 25 C 2 25 C 2 25 C scell e Stabilit Date de p remption Date de p remption Date de p remption Pochette 2 8 C 2 25 0 2 25 0 1 ouverte Stabilit 1 mois Date de p remption 2 mois Une fois que le scellement
99. gr de conservation du g ne cfb parmi l esp ce Une r gion conserv e et sp cifique du gene a t retenue comme cible d amplification produisant un fragment de 154 pb Un chantillon vagino rectal est pr lev a l aide d un couvillon recommand avec milieu Stuart liquide voir Mat riel n cessaire mais non fourni et transport au laboratoire L couvillon est plac dans le tampon d chantillon afin d en luer le contenu puis une aliquote est transf r e dans le tube de lyse La lyse se fait par actions chimique et m canique et dure moins de 15 minutes Un chantillon du lysat est ajout directement au r actif de la PCR contenus dans un tube r actionnel SmartCycler le test est ensuite r alis sur le SmartCycler La r gion de 154 pb du g ne cfb sera amplifi e et d tect e dans les chantillons contenant du SGB Il y aura galement amplification d un fragment de 180 pb du contrdle interne Cl fragment compos d une P0001 02 247 BD Diagnostics BD GeneOhm StrepB sequence de 134 pb trang re au g nome du SGB et flanqu par la sequence de chacune des deux amorces sp cifiques aux SGB Les cibles d ADN amplifies sont d tect es l aide de beacons mol culaires Il s agit de courts oligonucl otides simple brin adoptant une conformation en pingle cheveux et marqu s par une mol cule absorbante quencher une extr mit et par une mol cule fluorescente fluorophore l
100. h sein Kulturtests auf GBS in Vagina und Rektum sp t in der Schwangerschaft im Laufe der vorgeburtlichen Gesundheitspflege kann feststellen welche Frauen wahrscheinlich zur Zeit der Geburt GBS Kolonisierung haben In der P0001 02 37 BD Diagnostics BD GeneOhm StrepB Untersuchungsstudie f r BD GeneOhm StrepB lag die gesamte Kolonisierungsrate zur Geburtszeit welche mit der Kulturtechnik festgestellt wurde bei 18 6 in einem Bereich von 9 1 bis 28 7 bei den verschiedenen klinischen Standorten Mit BD GeneOhm StrepB zeigten insgesamt 20 1 aller Intrapartum Frauen positive Ergebnisse Zusatzlich zu Intrapartum Tests bekam eine Untergruppe von Frauen 674 auch vorgeburtliche Kulturtests Von diesen Frauen zeigten 11 7 bei Antepartum Tests ein positives Ergebnis Insgesamt hatten 10 2 dieser Frauen Antepartum Kulturergebnisse welche sich von den Intrapartum Kulturergebnissen unterschieden und 11 6 hatten Antepartum Kulturergebnisse welche sich von den BD GeneOhm StrepB Intrapartum Ergebnissen unterschieden In anderen Studien wurden Empfindlichkeiten von 87 83 92 Cl und 69 57 79 Cl und Spezifit ten von 96 95 98 Cl und 92 89 94 CI bei sp t vorgeburtlichen Kulturen zur Identifizierung des Kolonisierungszustandes bei Geburt berichtet Leistungscharakteristika Klinische Leistungen Die Leistungscharakteristika des BD GeneOhm StrepB Tests wurden in einer weitsichtigen Untersuchungsstudie
101. heid SmartCycler software The whole procedure takes about 45 minutes Recently the incidence of perinatal group B streptococcal disease in the United States has been decreasing because of antibiotic prophylaxis used for prevention of GBS diseases A national survey of ACOG members in 2000 found that 73 5 of respondents used a screening based strategy showing that antepartum screening highly contributed to the 70 decrease of early onset GBS disease since the 1996 Centers for Disease Control and Prevention CDC guidelines were implemented Moreover in cases of short labor the availability of antepartum screening results allows for the administration of intravenous antibiotics as soon as possible after admission lt 5 hours Based on current diagnostic tools the US CDC recommends universal prenatal culture based screening for vaginal and rectal GBS colonization of all women at 35 37 weeks gestation Although this recommendation is based on documentation of a strong protective effect of the culture based screening strategy relative to the risk based strategy antepartum screening has limitations The results of the screening are sometimes not known to the physician at the time of delivery colonization status may change between testing and delivery and some women do not undergo antepartum screening In each case these women may not be treated appropriately for GBS colonization thereby increasing the risk of infecting the newb
102. her und am anderen Ende mit einer fluoreszierenden Reporterfarbe Fluorophor markiert sind Wenn das Ziel abwesend ist wird die Fluoreszenz gel scht Wenn das Ziel anwesend ist ffnet sich die Haarnadelstruktur nach der Beacon Ziel Hybridisierung woraufhin Fluoreszenz ausgesandt wird Zur Feststellung von GBS Amplikonen enth lt der Molekular Beacon den Fluorophor FAM am 5 Ende und den nicht fluoreszierenden L scher Moietyl DABCYL am anderen Ende des Oligonukleotids Zur Feststellung der IC Amplikonen enth lt der Molekular Beacon das Fluorophor TET am 5 Ende und den L scher DABCYL am 3 Ende Jeder Hybride der von einem Beacon angezielt wird fluoresziert bei einer Wellenl nge die f r den Fluorophor charakteristisch ist welcher in dem jeweiligen Molekular Beacon angewandt wird Die Menge der Fluoreszenz in jedem beliebigen Zyklus oder nach dem Zyklus h ngt von der Menge der spezifischen Amplikonen ab welche zu dieser Zeit anwesend waren Der SmartCycler berwacht gleichzeitig die Fluoreszenz welche von jedem Beacon ausgesandt wird interpretiert s mtliche Daten und gibt am Ende des Zyklusprogramms die Endresultate siehe die Interpretierung der Ergebnisse Reagenzien BD GeneOhm StrepB Test 50 Tests Probenpuffer Sample Buffer 60 x 1 mL Tris EDTA Puffer Lyser hrchen Lysis tube 50 Rohrchen Glasperlen Master Mix Master mix 50 Rohrchen lt 0 001 DNA Polymerase Komplex lt 0 001 Interne Kontrolle nich
103. i simboli 69 P0001 02 ies BD Diagnostics BD GeneOhm StrepB English Intended use BD GeneOhm StrepB assay is a qualitative in vitro diagnostic test for the rapid detection of Group B streptococcus GBS DNA in vaginal rectal specimens from prepartum or intrapartum women The test performed on the SmartCycler automated analyzer utilizes polymerase chain reaction PCR for the amplification of a cfb gene sequence of GBS recovered from clinical samples and fluorogenic target specific hybridization for the detection of the amplified DNA BD GeneOhm StrepB assay can be used to establish GBS colonization status of prepartum and intrapartum women Summary and explanation of the test A vaginal rectal specimen is collected and transported to the laboratory using a recommended swab with Liquid Stuart Medium refer to Materials required but not provided The swab is eluted in sample buffer an aliquot of the specimen is then lysed and added to the PCR reagents which contain the GBS specific primers used to amplify the genetic target of the assay cfb gene if present The assay also includes an internal control IC to detect PCR inhibitory specimens and to confirm the integrity of assay reagents Amplified targets cfb gene and IC are detected with hybridization probes labelled with quenched fluorophores molecular beacons The amplification detection and interpretation of the signals are done automatically by the Cep
104. i sostanze interferenti sono da annoverare in modo non limitativo liquido amniotico meconio sangue feci lubrificante urina e mucosa vaginale La presenza di eccessive secrezioni vaginali antepartum o intrapartum potrebbe inibire PCR e fornire risultati non chiari Per questo motivo si consiglia di ripulire l area vaginale prima del campionamento Anche la presenza di sangue eccessivo potrebbe condurre ad inibizione di PCR e ad un risultato non chiaro In uno studio di ricerca che interessava 803 campioni vaginali rettali da pazienti in maternit intrapartum le sostanze potenzialmente interferenti menzionate in precedenza sono state riportate per il 63 dei campioni prelevati Solo l1 10 803 dei campioni ha fornito risultati non chiari Di questi non esisteva alcuna sostanza potenzialmente interferente riportata per 6 campioni liquido amniotico per 1 e una combinazione di sostanze per 3 di loro Tutti tranne uno sono stati risolti dopo un ciclo di congelamento scongelamento del campione Per il campione che non stato possibile risolvere non stata osservata alcuna sostanza potenzialmente interferente Valori attesi Circa dal 10 al 30 delle donne in gravidanza sono colonizzate con GBS nella vagina o nel retto La colonizzazione da GBS pu essere transeunte cronica o intermittente Lo screening delle colture sia della vagina sia del retto per GBS nell ultima fase della gestazione durante il trattamento prenatale pu rilevar
105. ilizaci n de guantes para evitar la contaminaci n de las muestras o los reactivos P0001 02 50 BD Diagnostics BD GeneOhm StrepB Sustancias interferentes La lista no exhaustiva de sustancias potencialmente interferentes es la siguiente liquido amni tico meconio sangre heces lubricantes orina y mucosa vaginal La presencia de un exceso de secreciones vaginales antes y durante el parto puede inhibir la PCR y producir resultados no concluyentes Por consiguiente se recomienda limpiar la zona vaginal antes de la obtenci n de muestras La presencia de un exceso de sangre puede tambi n provocar la inhibici n de la PCR y producir resultados indeterminados En un estudio experimental en el que se obtuvieron 803 muestras vaginales y rectales de pacientes durante el parto se notificaron sustancias potencialmente interferentes previamente mencionadas en el 63 de las muestras obtenidas S lo un 1 10 803 de las muestras produjo resultados indeterminados De ellas no se notificaron sustancias potencialmente interferentes en 6 muestras se notific l quido amni tico en 1 y una combinaci n de sustancias en 3 de las muestras Todas menos una fueron resueltas despu s de un ciclo de congelaci n descongelaci n de la muestra En la muestra que no pudo resolverse no se observ ninguna sustancia potencialmente interferente Valores previstos Aproximadamente entre el 10 y el 30 de mujeres embarazadas est n colonizadas por SGB
106. ioni P0001 02 60 BD Diagnostics BD GeneOhm StrepB 10 Inserire ciascuna provetta di reazione in un modulo I CORE dello SmartCycler e chiudere il coperchio dell I CORE Collocare i Positive e Negative control nella rispettiva posizione appropriata vedere la sezione intitolata Controllo della qualit Premere verso il basso tutte le provette saldamente in posizione 11 Avviare l analisi Controllo di qualit Controlli positivi e negativi Le procedure di controllo della qualit sono progettate in modo da controllare le prestazioni del saggio Il controllo positivo ha lo scopo di controllare eventuali problemi importanti ai reagenti Il controllo negativo utilizzato per rilevare la contaminazione del reagente o quella ambientale o trascinamento da parte di sequenze amplificate di S agalactiae o GBS controlli positivi e negativi control sono controlli di saggio controlli dell analisi Un controllo non valido invalida l analisi Infine un controllo interno incorporato in ciascuna miscela di reazione ha lo scopo di monitorare l inibizione PCR in ciascun campione Un controllo positivo e un controllo negativo devono essere eseguiti per ciascuna analisi del saggio sullo SmartCycler Il software assegna automaticamente la posizione dei controlli sullo strumento fare riferimento al Manuale per l operatore del software SmartCycler Dx Dx Controlli di trattamento dei campioni possibile testar
107. l Mic HIR V et VR varie entre 10 et 50 copies de g nome par r action avec une m diane de 25 copies Quant au seuil de d tection pour les unit s formatrices de colonies UFC il varie entre 3 et 9 UFC par r action Si l on tient compte du facteur de dilution inh rent au processus de traitement des chantillons cela quivaut une concentration de 10 10 UFC par couvillon Le tableau suivant pr sente en d tail la concentration la plus faible a laquelle les cing r plicats d un m me sous type ont donn des r sultats positifs P0001 02 D7 BD Diagnostics Tableau 5 Seuil de d tection pour chacun des s rotypes test s BD GeneOhm StrepB S rotype Copies du g nome r action UFC r action ATCC 12973 Il 10 3 IHR 25 6 la c 50 4 VR 50 3 Ill 25 3 la 25 3 V 50 8 Ib c 25 3 IIR 25 4 Il 25 9 Ile 25 3 Ich 50 4 Reproductibilit Pour le s rotype llc il y a m sappariement d une base dans l une des r gions compl mentaires des amorces Un jeu de 10 chantillons simul s R1 a R10 comportant diff rentes concentrations de SGB ainsi que deux contr les positif et n gatif fournis avec la trousse du test BD GeneOhm StrepB ont t test s en triple sur trois jours diff rents dans trois centres diff rents 10 chantillons 2 contr les x 3 tests x 3 jours x 3 centres Un seul lot de r actifs a t utilis pour l t
108. l rectal specimens from each intrapartum maternity patient were collected with the recommended swab with Liquid Stuart Medium refer to Materials required but not provided using the CDC recommended procedure One swab was tested with the CDC recommended culture technique and one swab with the BD GeneOhm StrepB assay The results of the study are presented in Tables 1 to 4 Table 1 Results obtained with BD GeneOhm StrepB assay in reference to the culture technique gt BD GeneOhm StrepB assay Positive Negative Total Culture Positive 140 9 149 technique Negative 27 626 653 Total 167 635 802 Fourteen 14 specimens were initially culture negative but upon investigation were found to be culture positive 1 ofthe 14 had initially tested unresolved but upon re testing gave a positive result 3 specimens that were initially BD GeneOhm StrepB assay positive were retested because of invalid controls positive and negative and tested positive One 1 specimen that was initially positive with BD GeneOhm StrepB assay was retested because of an invalid control and re tested positive Twelve 12 specimens that were initially negative with BD GeneOhm StrepB assay were retested because of an invalid control D o and all tested negative 8 specimens that initially gave an unresolved result gave a negative result upon retesting D above P0001 02 One
109. la prueba BD GeneOhm StrepB fueron analizadas de nuevo debido a controles no v lidos positivo y negativo y dieron resultado positivo Una 1 muestra que inicialmente dio positivo con la prueba BD GeneOhm StrepB fue analizada de nuevo debido a un control no valido y dio nuevamente un resultado positivo Doce 12 muestras que inicialmente dieron negativo en la prueba BD GeneOhm StrepB fueron analizadas de nuevo debido a un control no v lido y todas dieron resultado negativo 8 muestras que inicialmente dieron un resultado indeterminado dieron resultado negativo tras ser analizadas de nuevo Una 1 muestra que dio inicialmente un resultado indeterminado qued sin resolver tras ser analizada nuevamente y no se incluy en la tabla expuesta m s arriba D el D La investigaci n de las muestras que dieron cultivo positivo resultados negativos de BD GeneOhm StrepB n 9 revel que todas las muestras tenfan una carga bacteriana por debajo del limite de detecci n de BD GeneOhm StrepB Tambi n se demostr que todas las cepas aisladas recuperadas de las placas de cultivo positivo dieron un resultado positivo con BD GeneOhm StrepB La investigaci n de las muestras que dieron cultivo negativo resultados positivos de BD GeneOhm StrepB n 27 revel que todas las muestras contenian la regi n diana adecuada incluidas las regiones de uni n de los cebadores del gen cfb y que el producto amplificado fue el esperado con BD
110. men y explicaci n de la prueba conocio non n carr n cnn nn nan carr rcnannnnnnne 42 AAVGMten la TEE 42 Principio de procedimiento cicis erene ia 43 ENI OR A E A O RA T 43 Precauciones EE 44 Material proporcionado EAKA EAE nena nn KEER EITAN RE K 45 Conservaci n manipulaci n y estabilidad sees eeeaeeeeeeeseaeeseeeeeeaeeseeeee 45 Muestras obtenidas 45 Reactivos 45 Material necesario pero no suministrado i 46 Modo de empleo cilena gialle lo ids ated ds ote rai 46 Obtenci n de muestras 46 Preparaci n de muestras 46 Procedimiento de la prueba BD GeneOhm StrepB 47 CGontrol de calidad 2 4 eg Eege ai eae ee A ia 48 Controles positivo y negativo 48 Controles de procesamiento de las muestras 48 Prueba de sensibilidad antibi tica para pacientes al rgicas a la penicilina 49 Interpretaci n de resultados 49 Serie no valida 49 Muestras sin resolver 49 Muestra sin determinar debido a fallo del m dulo I CORE 49 Limitaciones del procedimiento AAA 50 Sustancias interferentes i 51 Valores previstos Ga nia aiar iaia ibid 51 Eficacia dagngostca i 51 Eficacia clinica 51 Especificidad analitica 53 Sensibilidad analitica 53 Reproductibilidad 54 P0001 02 3 BD Diagnostics BD GeneOhm StrepB EI Lu NEE 55 68 USO previsSto EE 55 Riassunto e spiegazione del test AA 55 AEN
111. muestras Conservaci n manipulaci n y estabilidad Muestras obtenidas Las muestras deben mantenerse entre 2 C y 30 C durante el transporte Prot jalas contra la congelaci n o exposici n a un calor excesivo Las muestras que puedan ser analizadas dentro de las 24 horas pueden guardarse a temperatura ambiente de lo contrario se recomienda refrigerarlas Las muestras guardadas entre 2 C y 8C se mantienen estables hasta 6 d as Reactivos Nota Las condiciones de conservaci n deben seguir las especificaciones escritas en cada bolsa Los tubos que est n fuera de su bolsa protectora y no fueran utilizados dentro de los intervalos de tiempo especificados deben ser desechados Sample buffer y Diluent Master Mix y Controls Lysis tube j I d Componente del equipo etiquetas blancas il on y etiqueta rojas o verdes tapa amarilla e tira negra respectivamente Bolsa Temperatura 2 25 C 2 25 C 2 25 C cerrada Estabilidad Fecha de caducidad Fecha de caducidad Fecha de caducidad Bolsa Temperatura 2 8 C 2 25 C 2 25 1 ecs ra ii abierta Estabilidad 1 mes Fecha de caducidad 2 meses Una vez roto el precinto original cierre con cuidado la bolsa con el cierre deslizante despu s de cada uso y cons rvela a 2 8 C Aunque estos reactivos pueden almacenarse a temperatura ambiente deber an ser conservados con sus reactivos asociados del mismo lote a 2 8 C Siem
112. ng basato su colture Il test stato eseguito in laboratori clinici affiliati a ciascuna istituzione Per poter partecipare allo studio le donne dovevano fornire consenso scritto essere in travaglio e non avere alcuna controindicazione all esame vaginale ad es sanguinamento Non esisteva inoltre alcuna evidenza di placenta previa nessuna indicazione urgente di procedere al parto e nessun antibiotico era stato utilizzato nella settimana precedente al ricovero Lo studio non prendeva in considerazione i tempi per il parto per le pazienti Il metodo di riferimento utilizzato era la tecnica di coltura consigliata dai Centers for Disease Control and prevention vale a dire coltura microbiologica nel mezzo brodo selettivo brodo Todd Hewitt integrato da 15 ug mL di acido nalidissico e 10 ug mL di colistina oppure con 8 ug mL di gentamicina e 15 ug mL di acido nalidissico tra gli altri mezzi disponibili in commercio sono da segnalare il brodo SBM o il brodo Lim seguita da incubazione per tutta la notte e sottocoltura su mezzo agar di sangue solido E stata eseguita identificazione specifica di colonie evocative di GBS con test di agglutinazione sui vetrini Ottocentoottantuno 881 donne hanno acconsentito a partecipare allo studio Di queste 78 sono state escluse in quanto la donna aveva cambiato parere o non era in travaglio o a causa di deviazioni rispetto al protocollo Per questo motivo le caratteristiche prestazionali di BD GeneOhm StrepB so
113. nge r actionnel contr le positif et contr le n gatif tester sur le bloc r frig rant SmartCycler Identifier le s tube s de m lange r actionnel tiquette blanche sur le capuchon a l aide des tiquettes d identification fournie dans la trousse 2 Ouvrir les tubes de m lange r actionnel contr le positif et contr le n gatif Tenir le tube fermement par la partie c tel e et soulever le capuchon avec un mouvement vertical Ne pas effectuer de mouvement horizontal Eviter de toucher aux fen tres de d tection optique se trouvant sur les bords inf rieurs du tube et a la partie inf rieure en forme de diamant 3 Ajouter 25 uL de diluant tiquette bande noire tous les tubes refermer partiellement les tubes de m lange r actionnel D poser le diluant dans le r servoir partie sup rieure de chaque tube 4 Ajouter 1 5 HL de chacun des chantillons lys s a un tube de m lange r actionnel different fermer completement les tubes Prendre soin de ne pas aspirer de billes lors du pipetage dans le tube de lyse Apr s le d p t de l chantillon rincer l embout 2 3 fois dans le r servoir pour assurer un transfert complet de l echantillon en entier Fermer le tube de lyse et le tube de m lange r actionnel Utiliser un nouvel embout pour chaque chantillon 5 Fermer les tubes de contr le positif et de contr le n gatif Le contr le n gatif devrait tre le dernier chantillon pr par p
114. ngere 1 5 uL di ciascun lisato ad una diversa provetta Master Mix chiudere saldamente rovette Prestare attenzione a non aspirare le perle quando si pipetta nella provetta di lisi Dopo l aggiunta del campione pipettare in alto e in basso 2 3 volte nel serbatoio per accertarsi del trasferimento del volume completo Chiudere la provetta di lisi e la provetta Master Mix Utilizzare un nuovo puntale per micropipettatrice per ogni campione Chiudere le provette di Positive e Negative control II Negative control dovrebbe essere l ultimo campione preparato per un dato saggio cio tutti i campioni sono analizzati contemporaneamente sullo SmartCycler Centrifugare tutte le provette di reazione per 5 10 secondi Utilizzare la microcentrifuga appositamente adattata fornita con lo strumento SmartCycler Mantenere le provette di reazione a 2 8 C sul blocco di raffreddamento dello SmartCycler prima del caricamento sullo strumento I lisati restanti vanno congelati a 20 5 C per l utilizzo successivo se necessario Poco prima di caricare le provette sullo strumento prendere il BLOCCO DI RAFFREDDAMENTO CON LE PROVETTE ANCORA IN POSIZIONE e MESCOLARLE CAPOVOLTE CON MOTO VORTICOSO per 5 10 secondi Creare un analisi col protocollo di saggio BD GeneOhm StrepB Fare riferimento al Manuale per l operatore del software SmartCycler Dx se necessario Prima di avviare l analisi vanno immessi i parametri di identificazione per i camp
115. no state determinate a partire dai risultati di 803 pazienti in maternit intrapartum Due campioni vaginali rettali da ciascuna paziente in maternit intrapartum sono stati raccolti col tampone consigliato con mezzo liquido di Stuart fare riferimento a Materiali necessari ma non forniti utilizzando la procedura consigliata dai CDC Un tampone stato sottoposto a test con la tecnica di coltura consigliata dai CDC e un tampone col saggio BD GeneOhm StrepB risultati dello studio sono presentati nelle Tabelle da 1 a 4 Tabella 1 Risultati ottenuti col saggio BD GeneOhm StrepB in riferimento alla tecnica di coltura Saggio BD GeneOhm StrepB Positivo Negativo Totale ess Tecnica di Positivo 140 9 149 coltura Negativo 27 626 653 Totale 167 635 802 Quattordici 14 campioni erano inizialmente negativi alla coltura ma all esame sono stati rilevati essere positivi alla coltura 1 dei 14 era risultato inizialmente non chiaro ma ad un test successivo ha dato un risultato positivo 3 campioni che erano inizialmente positivi al saggio BD GeneOhm StrepB sono stati sottoposti a nuovo test a causa di controlli non validi positivi e negativi e sono risultati positivi Un 1 campione che era inizialmente positivo col saggio BD GeneOhm StrepB stato sottoposto a nuovo test a causa di un controllo non valido ed risultato positivo ad un nuovo
116. nt de 9 1 a 28 7 selon les tablissements cliniques Le coefficient de pr vision d un test n gatif tait de 98 6 IC 95 97 3 99 3 et le coefficient de pr vision d un test positif de 83 8 IC 95 77 4 89 1 Tableau 2 Efficacit clinique du test BD GeneOhm StrepB par rapport a la technique de culture recommand e par les CDC Nombre d analyses Sensibilit Sp cificit ln iaia nabla total d analyses Centre 1 93 n 15 68 100 93 n 150 87 96 5 2 55 Centre 2 88 n 25 69 97 100 n 62 97 100 0 0 38 Centre 3 99 n 77 93 100 97 n 350 94 98 1 1 56 Centre A 85 n 13 54 98 100 n 35 98 100 1 1 21 Centre 5 89 n 19 67 99 93 n 56 82 98 3 1 22 Total 94 n 149 89 97 96 n 653 94 97 10 5 192 Intervalles de confiance binomiaux a 95 Tous les chantillons ont donn des r sultats non r solus en raison de contr les internes invalides indice d inhibition ou de d faillance des r actifs Le probl me a t r solu pour 9 d entre eux sur 10 la reprise du test B P0001 02 26 BD Diagnostics BD GeneOhm StrepB Tableau 3 Classification des r sultats en fonction du temps coul entre le pr l vement de l chantillon et la r alisation du test BD GeneOhm StrepB Culture positive Cultur
117. nte negativa con respecto al factor CAMP e Un resultado positivo no indica necesariamente la presencia de un organismo viable Sin embargo es un indicio de la presencia de Streptococcus grupo B e No se han evaluado los m todos de cultivo de la soluci n tamp n de muestras de BD GeneOhm StrepB Los laboratorios deben validar sus propios procedimientos de cultivo u obtener otra muestra para tenerla en reserva e Los resultados de la muestra BD GeneOhm StrepB deben utilizarse como un complemento de las observaciones cl nicas y otra informaci n a disposici n del m dico El prop sito de la prueba no es diferenciar los portadores de Streptococcus grupo B de aquellos con infecci n estreptoc cica Los resultados de la prueba pueden tambi n verse afectados por la terapia simult nea con antibi ticos por consiguiente el xito o fracaso terap utico no puede evaluarse utilizando esta prueba ya que el ADN puede persistir despu s de la terapia antimicrobiana e Aunque no hay necesidad de preparaci n de reactivos y las principales operaciones t cnicas incluyen pipeteado es esencial una buena t cnica de laboratorio para el funcionamiento adecuado de esta prueba Debido a la alta sensibilidad anal tica de esta prueba debe tenerse extrema precauci n para preservar la pureza de todos los reactivos especialmente en los casos en que se toman m ltiples al cuotas de un solo tubo e Se recomiendan buenas pr cticas de laboratorio y la ut
118. nto para participar en el estudio De ellas 78 fueron excluidas bien porque la mujer hab a cambiado de opini n porque no estaba de parto o debido a incumplimiento del protocolo Por consiguiente la eficacia diagn stica de BD GeneOhm StrepB fue determinada a partir de los resultados de 803 pacientes durante el parto Se obtuvieron dos muestras vaginales rectales de cada paciente durante el parto con la torunda recomendada en medio Stuart l quido consulte la secci n Material necesario pero no suministrado P0001 02 51 BD Diagnostics BD GeneOhm StrepB utilizando el procedimiento recomendado por los CDC Una muestra fue analizada con la t cnica de cultivo recomendada por los CDC y otra muestra con la prueba BD GeneOhm StrepB Los resultados del estudio se presentan en las Tablas 1 a 4 Tabla 1 Resultados obtenidos con la prueba BD GeneOhm StrepB con relaci n a la t cnica de cultivo Prueba BD GeneOhm StrepB Positivo Negativo Total T cnicade Positivo 140 9 149 cultivo Negativo 27 626 653 Total 167 635 802 gt Catorce 14 muestras resultaron inicialmente con cultivo negativo pero al someterlas a investigaci n se descubri que dieron cultivo positivo 1 de las 14 muestras inicialmente habia dado un resultado indeterminado pero tras ser analizada de nuevo dio resultado positivo 3 muestras que inicialmente dieron resultado positivo en
119. olcher Fall stattf nde w rde der BD GeneOhm StrepB Test ein falsches negatives Ergebnis liefern Es sind keine phenotypisch CAMP negativen GBS Isolate mit dem BD GeneOhm StrepB Test bewertet worden e Ein positives Testergebnis zeigt nicht unbedingt die Anwesenheit von lebensf higen Organismen an Es zeigt allerdings die vermutliche Anwesenheit von Gruppe B Streptococcus an e Kulturmethoden im BD GeneOhm StrepB Probenpuffer sind nicht bewertet worden Laboratorien m ssen ihre eigenen Kulturmethoden validieren oder eine zweite Probe als Reserve nehmen e Die Ergebnisse des BD GeneOhm StrepB Tests sollten als Zusatzmittel zu klinischer Bewertung und anderer dem Arzt verf gbarer Information dienen Der Test ist nicht dazu vorgesehen zwischen Tr gern des Gruppe B Streptococcus und Personen mit Streptokokken Infektion zu differenzieren Die Testergebnisse k nnen auch durch gleichzeitige Antibiotika Therapie beeinflusst werden Daher kann der therapeutische Erfolg oder Fehlschlag nicht mit diesem Test bewertet werden weil DNA nach antimikrobieller Therapie eventuell weiterhin besteht e Obwohl keine Reagenzien vorbereitet werden m ssen und die wesentlichen technischen Handlungen aus Pipettieren bestehen sind gute Labortechniken f r die richtige Funktion dieser Test unerl sslich Wegen der hohen analytischen Empfindlichkeit dieses Tests muss gross Sorge getragen werden um die Reinheit von allen Reagenzien zu erhalten besonder
120. on PCR um eine von klinischen Proben erworbene cfb Gensequenz von GBS zu verst rken und zur fluorogenischen zielspezifischen Hybridisierung zum Zweck der Feststellung von der verst rkten DNA Der BD GeneOhm StrepB Test kann angewandt werden um den GBS Kolonisierungsstatus bei Prepartum und Intrapartum Frauen festzustellen Zusammenfassung und Erkl rung des Tests Eine vaginale rektale Probe wird genommen und mit dem empfohlenen Tupfer mit fl ssigem Stuart Medium zum Labor transportiert siehe Materialien welche ben tigt aber nicht mitgeliefert werden Der Tupfer wird in Probenpuffer eluiert ein Aliquot der Probe wird anschliessend lysiert und zu den PCR Reagenzien hinzugegeben welche die GBS spezifischen Primers enthalten womit das genetische Ziel der Test cfb Gen falls anwesend verst rkt wird Der Test beinhaltet ausserdem eine interne Kontrolle IC um PCR hemmende Proben festzustellen und die Integrit t der Pr freagenzien zu best tigen Verst rkte Ziele cfb Gen und IC werden mit Hybridisierungsproben festgestellt welche durch gel schten Fluorophoren Molekular Beacons identifiziert sind Die Verst rkung die Feststellung der Fluoreszenz und die Auswertung der Signale werden automatisch von der Cepheid SmartCycler Software vorgenommen Der gesamte Vorgang dauert etwa 45 Minuten K rzlich hat sich das Vorkommen von perinataler Gruppe B Streptococcus Erkrankung in den Vereinigten Staaten durch Antibiotika Pro
121. onis es au moment de l accouchement Dans le cadre de l tude d investigation sur le test BD GeneOhm StrepB le taux g n ral de colonisation au moment de l accouchement selon la technique de culture a t tabli 18 6 variant de 9 1 28 7 selon les tablissements cliniques D apr s le test BD GeneOhm StrepB le taux g n ral de colonisation parmi les femmes en accouchement atteignait 20 1 En plus du d pistage en phase intrapartum un d pistage par culture a t fait en phase antepartum aupr s d un sous groupe de femmes 674 R sultat 11 7 d entre elles se sont r v l es positives au test pr natal Dans l ensemble des diff rences de 10 2 et de 11 6 ont t observ es entre les r sultats de culture antepartum et intrapartum et les r sultats de culture antepartum et ceux du test BD GeneOhm StrepB effectu s pendant l accouchement respectivement Dans d autres tudes des taux de sensibilit de 87 IC 83 92 et de 69 IC 57 79 et des taux de sp cificit de 96 IC 95 98 et de 92 IC 89 94 ont t enregistr s pour les cultures en phase antepartum tardive afin de conna tre le statut de colonisation au moment de l accouchement Caract ristiques de rendement Sensibilit et sp cificit cliniques Les caract ristiques d efficacit du test BD GeneOhm StrepB ont t tablies dans le cadre d une tude de recherche prospective multicentrique y ont parti
122. or foro en el otro Cuando la diana est ausente se desactiva la fluorescencia Cuando la diana est presente la estructura de horquilla se abre con la hibridaci n del marcador lo que resulta en la emisi n de fluorescencia Para la detecci n de amplicones de SGB el marcador molecular contiene el fluor foro FAM en el extremo 5 y el fragmento desactivador no fluorescente de DABCYL en el extremo opuesto del oligonucle tido Para la detecci n de amplicones de Cl el marcador molecular contiene el fluor foro TET en el extremo 5 y el fragmento desactivador de DABCYL en el extremo 3 Cada h brido diana marcador emite fluorescencia a una longitud de onda caracter stica del fluor foro utilizado en el marcador molecular particular La cantidad de fluorescencia en cualquier ciclo dado o en el siguiente ciclo depende de la cantidad de amplicones espec ficos presentes en ese momento El SmartCycler simult neamente controla la fluorescencia emitida por cada marcador interpreta todos los datos y al final del programa del ciclo proporciona un resultado final v ase Interpretaci n de resultados Reactivos Prueba BD GeneOhm StrepB 50 pruebas Tamp n de muestras Sample Buffer 60 x 1 mL Soluci n tamp n Tris EDTA Tubo de lisis Lysis tube 50 tubos Perlas de vidrio Mezcla maestra Master Mix 50 tubos lt 0 001 Complejo ADN polimerasa lt 0 001 Control Interno ADN no infeccioso que contiene secuencias de uni n de ceb
123. original a t bris refermer la pochette au moyen de la fermeture a glissi re apr s chaque utilisation et conserver le produit une temp rature de 2 8 C M me si ces r actifs peuvent tre conserv s a la temp rature de la pi ce il est recommand de les conserver avec les r actifs du m me lot a 2 8 C A condition que le sac soit bien referm au moyen de la fermeture a glissi re apr s chaque utilisation Composantes de la trousse a l ext rieur de leur pochette protectrice Master mix et Controls tiquette blanche rouge ou verte respectivement Tubes non Temp rature reconstitu s Stabilit 2 heures Mat riel n cessaire mais non fourni e BBL CultureSwab Liquid Stuart n 220099 au catalogue Becton Dickinson Ecouvillons Copan Transystem Liquid Stuart n 141C USE au catalogue Copan Italia International Copan Venturi Transystem Liquid Stuart n 141C US au catalogue Copan Diagnostics Inc HealthLink TransPorter single Liquid Stuart n 4432 au catalogue HealthLink e Vortex Genie 2 Fisher muni d un portoir pour microtubes de 1 5 mL ou mat riel quivalent pour le traitement de plusieurs chantillons un adaptateur a positions multiples peut tre utilis e Micropipettes plage de pr cision 1 50 uL e Embouts filtre ou d placement direct st riles exempts de DNAse e Ciseaux e Gazes e Gants jetables sans poudre e Microcentrifugeuse
124. orn A sensitive rapid screening test for GBS that can provide intrapartum screening results in time to administer antibiotic prophylaxis would be useful to several groups of women including those who have had inadequate prenatal care those whose results of antepartum screening are unknown at the time of delivery and those facing preterm delivery Warning e The use of BD GeneOhm StrepB for intrapartum screening should not preclude the use of other strategies e g antepartum testing Intrapartum BD GeneOhm StrepB results are useful to identify candidates for intrapartum antibiotic prophylaxis when results can be available in time to administer intravenous antibiotics at least 4 hours before delivery e The BD GeneOhm StrepB assay does not provide susceptibility results Additional time is needed to culture and perform susceptibility testing that would be recommended for penicillin allergic women Principle of the procedure The genetic target of the BD GeneOhm StrepB assay is the cfb gene This gene encodes for the CAMP factor a diffusible extra cellular protein which is present in virtually all GBS isolates Detection of the CAMP factor is used for the presumptive identification of GBS by biochemical methods ee and molecular characterizations showed that the cfb gene is well conserved within this species Primers complementary to conserved and specific regions of the gene have been developed to amplify a 154 bp fragment of the cf
125. ort des chantillons Le test BD GeneOhm StrepB peut parfois donner des r sultats non r solus ou invalides en raison d un contr le rejet ce qui n cessite une reprise du test et entra ne des retards quant la transmission des r sultats La pr sence de substances inhibitrices de la polym rase peut galement donner des r sultats faussement n gatifs le contr le interne pr sent dans le m lange r actionnel permet la d tection de ces substances La pr sence de mutations dans les r gions compl mentaires des sondes ou des amorces peut avoir une incidence sur la d tection surtout si la concentration de micro organismes est inf rieure 10 organismes Aucun rapport publi ne fait tat de l absence du g ne cfb dans des souches ou des isolats de SGB Si tel devait tre le cas le test BD GeneOhm M StrepB donnerait un r sultat faussement n gatif Aucun isolat de SGB ph notypiquement n gatif l gard du facteur CAMP n a t valu par le test BD GeneOhm StrepB Des r sultats positifs n indiquent pas n cessairement la pr sence d un micro organisme viable Ils sont toutefois pr somptifs de la pr sence de streptocoques du groupe B Les m thodes de culture partir du tampon d chantillon BD GeneOhm StrepB n ont pas fait l objet d evaluation Les laboratoires doivent donc valider leurs propres m thodes de culture ou proc der a un second pr l vement d chantillon a conserver Les r sultats d
126. os reactivos si las bolsas protectoras estan abiertas o desgarradas a su llegada Cierre las bolsas protectoras de las mezclas maestras y controles r pidamente con el cierre deslizante despu s de cada uso No retirar el desecante de las bolsas de mezcla maestra y de controles No utilizar los reactivos si no hay desecante dentro de las bolsas de mezcla maestra y de controles Los reactivos no son intercambiables entre los lotes No mezcle nunca los reactivos de distintos tubos incluso si pertenecen al mismo lote No utilice los reactivos despu s de la fecha de caducidad No intercambie tapas entre los reactivos ya que puede producirse contaminaci n que altere los resultados de la prueba Evite la contaminaci n microbiana y de desoxirribonucleasa DNAsa de los reactivos cuando saque las muestras de los tubos Se recomienda el uso de puntas de pipeta desechables de desplazamiento positivo o con filtro esterilizadas y sin DNAsa Para evitar la contaminaci n del medio con amplicones de SGB no abra los tubos de reacci n despu s de la amplificaci n Utilice una nueva punta para cada muestra o reactivo El realizar la prueba fuera de los intervalos de tiempo recomendados puede invalidar los resultados Las pruebas que no hayan sido realizadas dentro de los intervalos de tiempo especificados deben repetirse Pueden examinarse controles adicionales de acuerdo con las pautas o requisitos del reglamento local estatal provincial y o
127. our une s rie de tests donn e c d tous les chantillons test s simultan ment sur un SmartCycler 6 Centrifuger tous les tubes r actionnels pendant 5 10 secondes Utiliser la microcentrifugeuse sp cialement adapt e fournie avec le SmartCycler 7 Garder les tubes r actionnels sur le bloc r frig rant SmartCycler 2 8 C jusqu leur chargement sur l instrument Congeler le reste des lysats une temp rature de 20 5 C pour utilisation ult rieure si n cessaire 8 Tout juste avant de charger les tubes sur l instrument INVERSER LE BLOC REFRIGERANT CONTENANT LES TUBES et VORTEXER PENDANT 5 10 SECONDES 9 Cr er une s rie de tests avec le protocole du test BD GeneOhm StrepB Se r f rer au Manuel d utilisation du logiciel SmartCycler Dx si n cessaire Les param tres d identification des chantillons devraient tre entr s avant de d marrer la s rie de tests 10 Ins rer chaque tube r actionnel dans un module I CORE du SmartCycler refermer le couvercle du I CORE Placer les tubes de contr le positif et de contr le n gatifaux positions assign es par l instrument voir la section intitul e Contr le qualit Bien enfoncer chaque tube sa place respective 11 D marrer le programme PCR Contr le qualit Contr les positif et n gatif Les mesures de contr le qualit t moignent de l efficacit du test Le contr le positif v rifie la qualit des r actifs en d
128. packung gebrochen ist Reagenzien nicht verwenden wenn der Schutzbeutel bei Ankunft ge ffnet oder besch digt ist Schutzbeutel mit Master Mix und Kontrollen nach jedem Gebrauch rasch mit dem Reissverschluss schliessen Das Trockenmittel nicht aus dem Master Mix und den Kontrollen entfernen Reagenzien nicht benutzen wenn sich im Master Mix und in den Kontrollen kein Trockenmittel befindet Reagenzien lassen sich nicht zwischen Chargen austauschen Niemals Reagenzien von verschiedenen R hrchen zusammentun auch falls sie in derselben Charge sind Reagenzien nicht nach dem Verfallsdatum anwenden Verschlusskappen nicht unter Reagenzien austauschen da Verunreinigungen auftreten und Testergebnisse gef hrden k nnten Verunreinigung der Reagenzien durch Mikroben und Deoxyribonuklease DNAse beim Entfernen von Aliquoten aus R hrchen vermeiden Der Gebrauch von sterilen DNAse freien Einweg Pipettenspitzen mit Filterblockierung oder positiver Verdr ngung wird empfohlen Um Verunreinigung der Umgebung durch GBS Amplikone zu vermeiden das Reaktionsr hrchen nach der Verst rkung nicht ffnen F r jede Probe oder Reagenz eine neue Spitze anwenden Das Ausf hren der Test ausserhalb den empfohlenen Zeitspannen kann ung ltige Ergebnisse liefern Testen ausserhalb der angegebenen Zeitspannen sollten wiederholt werden Zus tzliche Kontrollen k nnen getestet werden je nach den Richtlinien oder Anforderungen von lokalen staatli
129. per GBS o il numero NEG NEG di organismi potrebbe essere inferiore al limite di rilevamento del SUPERATO A saggio POS POS NA NA DNA GBS rilevato presunto positivo per GBS Unresolved FAIL NON er al Non chiaro RIUSCITO Non chiaro campione inibitorio o problema del reagente i ND ND ND ND Non determinato a causa di problema del modulo LCore con codici di avvertenza o di errore IC Internal Control Controllo interno NA non applicabile ND non determinato A Fare riferimento al Manuale per l operatore del software SmartCycler Dx per l interpretazione dei codici di avvertenza e di errore Un controllo positivo o negativo non valido invalida l analisi del saggio In tali casi i risultati del S aggio ottenuti in tale analisi sono non validi e non devono essere riportati La mancata validit di un analisi del saggio o i codici di errore o le avvertenze dello strumento sono riportati su schermo e sui rapporti Prima di riportare i risultati GBS verificare sempre che l analisi del saggio sia valida Fare riferimento al Manuale per l operatore del software SmartCycler Dx per la stampa dei risultati Analisi del saggio non valida Utilizzando lisati congelati preparare nuove provette di reazione per tutti i campioni clinici entro tale analisi del saggio assieme a nuove provette di controllo Campioni non chiari Ripetere il test col corrispondente lisato congelato del campione s
130. phylaxe zur Vorbeugung gegen GBS Erkrankungen verringert Eine nationale Umfrage unter ACOG Mitgliedern in 2000 stellte fest dass 73 5 der Antwortenden eine Strategie anwandten welche auf Auslesetests basierte was zeigt dass Antepartum Auslesetests stark zu der 70 igen Reduktion in fr h anfangender GBS Erkrankung beitrug seit die 1996er Centers for Disease Control and Prevention CDC Zentrum f r Krankheitskontrolle und Vorbeugung Richtlinien implementiert wurden In F llen von kurzen Wehen gestattet die Erh ltlichkeit von Antepartum Auslesetest Ergebnissen ausserdem die Gabe von intraven sen Antibiotika sobald wie m glich nach der Aufnahme lt 5 Stunden Auf der Basis von jetzigen diagnostischen Methoden empfiehlt die US CDC universelle pr natale kulturbasierende Auslesetests auf vaginale und rektale GBS Kolonisierung umd zwar bei allen Frauen zwischen 35 37 Wochen Schwangerschaft Obwohl diese Empfehlung auf Dokumentierung einer stark sch tzenden Wirkung der kulturbasierenden Auslesetest Strategie relativ zur risikobasierenden Strategie basiert haben Antepartum Auslesetests ihre Einschr nkungen Die Testergebnisse stehen dem Arzt zur Zeit der Geburt nicht immer zur Verf gung der Kolonisierungsstatus kann sich zwischen dem Test und der Geburt ver ndern und manche Frauen werden den Antepartum Auslesetests nicht unterzogen In jedem Fall werden diese Frauen eventuell nicht richtig auf GBS Kolonisierung behandelt was da
131. pie equivalenti di genoma per reazione PCR o 10 copie equivalenti di genoma mL Per il DNA umano sono stati utilizzati da 75 a 233 ng fino a 1 4x10 copie di genoma per reazione o 10 copie mL La specificit era del 100 Sensibilit analitica La sensibilit analitica limite di rilevamento o LOD Limit of Detection del saggio BD GeneOhm StrepB stata determinata con 12 ceppi di S agalactiae in rappresentanza di 11 varianti o sierotipi noti La coltura quantificata e il DNA genomico purificato diluito nella soluzione tampone campione del saggio P0001 02 65 BD Diagnostics BD GeneOhm StrepB BD GeneOhm StrepB sono stati sottoposti a test in 5 replicati II LOD definito come la minima concentrazione alla quale tutti i replicati sono risultati positivi al test Il LOD del saggio BD GeneOhm StrepB per S agalactiae sierotipi e varianti la Ib c Il llc IIR III He IIIR V e VR varia tra 10 e 50 copie di genoma per reazione con una mediana di 25 copie di genoma per reazione Il LOD in CFU da 3 a 9 CFU reazione Prendendo in considerazione il fattore di diluizione dovuto al trattamento dei campioni ci si traduce in 10 10 CFU tampone La seguente tabella descrive in dettaglio la concentrazione minima di ciascun sottotipo fornendo un risultato positivo in tutti i 5 replicati Tabella 5 LOD ottenuto per ciascun sierotipo sottoposto a test Sie
132. plification and detection of nucleic acid sequences for providing human in vitro diagnostics No general patent or other license of any kind other than this specific right of use from purchase is granted hereby With sale of any kits label license in package insert The purchase of this product includes a limited non transferable license under U S Patent No 6 787 338 owned by the University of Utah Research Foundation and licensed to Idaho Technology Inc to use only the enclosed amount of product according to the specified protocols No right is conveyed expressly by implication or by estoppel to use any instrument or system under any claim of U S Patent No 6 787 338 other than for the amount of product contained herein Cette trousse est vendue sous licence du Public Health Research Institute of the City of New York Inc et peut tre utilis e uniquement pour du diagnostic clinique in vitro chez l humain L achat de ce produit permet a l acheteur de l utiliser pour proc der a une amplification et une d tection de s quences d acides nucl iques lors de diagnostics cliniques in vitro chez l humain Aucun brevet general ou licence autre que le droit d utilisation sp cifique conf r par l achat n est octroy par les pr sentes L achat de ce produit comprend une licence limit e non transf rable prot g e par le brevet am ricain n 6 787 338 appartenant a University of Utah Research Foundation et autoris
133. pose of unused reagents and waste in accordance with country federal provincial state and local regulations P0001 02 _7 BD Diagnostics BD GeneOhm StrepB Materials provided e Sample buffer e Lysis tube e Master mix e Positive Control PC e Negative Control NC e Diluent e Specimen identification labels Storage handling and stability Collected specimen Specimens should be kept between 2 C and 30 C during transport Protect against freezing or exposure to excessive heat Specimens that can be tested within 24 hours can be kept at room temperature if not it is recommended that they be refrigerated Specimens stored between 2 C and 8 C are stable for up to 6 days Reagents Note Storage conditions must follow the specifications written on each pouch Tubes outside of their protective bag and unused within specified time limit should be discarded Master mix and Sample buffer and Diluent Kit Component Controls white red blue cap and black strip or green labels label respectively Sealed Lysis tube yellow cap pouch SE Stability Expiration date Expiration date Expiration date 2 Si ge Opened ie Lille e hl REH 2 months Stability 1 month Expiration date Once the original seal on the pouch is broken carefully close the pouch with the zip seal after each use and store at 2 8 C Although these reagents can be stored at room tempera
134. pre i campioni come infettivi e in conformit alle procedure sicure di laboratorio quali ad esempio quelle descritte in Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories e nel documento CLSI M29 e Indossare abbigliamento protettivo e guanti monouso quando si trattano reagenti del kit Lavare accuratamente le mani dopo aver eseguito il test e Non pipettare con la bocca e Non fumare bere n mangiare in aree in cui sono maneggiati i campioni o i reagenti del kit e Smaltire i reagenti inutilizzati e i rifiuti in conformit alle normative nazionali regionali provinciali e locali P0001 02 57 BD Diagnostics BD GeneOhm StrepB Materiali forniti e Tampone Sample buffer e Provetta di lisi Lysis tube e Master mix Master Mix e Controllo positivo Positive Control PC e Controllo negativo Negative Control NC e Diluente Diluent e Etichette di identificazione dei campioni Conservazione trattamento e stabilit Campione prelevato campioni vanno mantenuti ad una temperatura compresa fra 2 C e 30 C durante il trasporto Proteggere contro il congelamento o l esposizione a calore eccessivo campioni che possono essere sottoposti a test entro 24 ore possono essere mantenuti a temperatura ambiente altrimenti si consiglia che siano refrigerati campioni conservati a temperature comprese tra 2 C e 8 C sono stabili per un massimo di 6 giorni Reagenti Nota Le condizioni di conservazion
135. pre que la bolsa est bien cerrada con el cierre deslizante despu s de cada uso Componente del equipo fuera de su Master Mix y Controls bolsa protectora etiquetas blancas rojas o verdes Tubos no Temperatura preparados Estabilidad 2 horas P0001 02 45 BD Diagnostics BD GeneOhm StrepB Material necesario pero no suministrado e Liquido de Stuart BBL CultureSwab n de catalogo de Becton Dickinson 220099 liquido de Stuart Transystem de Copan n de cat logo de Copan Italia International 141C USE liquido de Stuart Venturi Transystem de Copan n de catalogo de Copan Diagnostics Inc 141C US liquido de Stuart Unico TransPorter de HealthLink n de catalogo de HealthLink 4432 e Vortex Genie 2 Fisher con portamicrotubo o equivalente para procesar m ltiples muestras pueden usarse adaptadores con varios lugares de sujeci n Micropipetas margen de precisi n entre 1 50 uL Puntas de pipeta de desplazamiento positivo o con filtro est riles y sin DNAsa Tijeras Gasas Guantes desechables sin polvo Microcentrifuga para centrifugaci n a baja velocidad Bloque de calor seco para tubos de 1 5 mL o ba o maria Hielo o bloque de enfriamiento para tubos de 1 5 mL Cron metro o minutero Sistema iniciador starter system SmartCycler con Software Dx bloque de procesamiento manual del usuario equipo de accesorios y ordenador de escritorio Cepheid Sunnyvale
136. rol and Prevention Biosafety in microbiological and biomedical laboratories Richmond JY and McKinney RW eds 1993 HHS Publication number CDC 93 8395 Clinical and Laboratory Standards Institute Protection of laboratory workers from occupationally acquired infections Approved Guideline Document M29 Refer to latest edition Clinical and Laboratory Standards Institute Molecular Diagnostic Methods for Infectious Diseases Approved Guideline CLSI document MM3 A2 Refer to the latest edition Clinical and Laboratory Standards Institute Statistical quality control for quantitative measurements Principles and definitions Approved Guideline Document C24 Refer to latest edition Yancey MK Schuchat A Brown LK Ventura VL Markenson GR The accuracy of late antenatal screening cultures in predicting genital group B streptococcal colonization at delivery Obstet Gynecol 1996 88 811 15 Melin P Schmitz M Tsobo C Hayette MP De Mol P Rapid intrapartum test StrepB OIA and prenatal cultures for identification of Group B streptococal GBS carriers at delivery a prospective study Interscience Conference on Antimicrobial Agents and Chemotherapy Toronto 2000 Poster 357 This kit is sold under license from the Public Health Research Institute of the City of New York Inc and may be used under the PHRI patent rights only for human in vitro clinical diagnostics The purchase of this product allows the purchaser to use it for am
137. rotipo Copie di genoma reazione CFU reazione ATCC 12973 II 10 3 ITR 25 6 la c 50 4 VR 50 3 III 25 3 la 25 3 V 50 8 Ib c 25 3 IIR 25 4 Il 25 9 IIIc 25 3 Ich 50 4 A Per il sierotipo llc esiste una mancata corrispondenza in una delle regioni di legame del primer Riproducibilit Un gruppo di 10 campioni simulati da R1 a R10 con concentrazioni variabili di GBS e dei due controlli positivo e negativo forniti col saggio BD GeneOhm StrepB stato sottoposto a test in triplicato in tre giorni diversi a ciascuno dei 3 siti 10 campioni pi 2 controlli sottoposti a test X 3 X 3 giorni X 3 siti Per lo studio stato utilizzato un solo lotto di reagente Tabella 6 Riassunto dei risultati di riproducibilit Accordo A Tutti i campioni positivi hanno quantita variabili di GBS B Campione inizialmente non chiaro ma che dopo un nuovo test ha fornito il risultato atteso Tutti i replicati che abbiamo sottoposto a test come singola analisi invece di tre analisi separate di 10 campioni e 2 controlli P0001 02 66 ID del campione Sito 1 Sito 2 Sito 3 Accordo totale totale Negativo 9 9 9 9 9 9 27 27 100 Negativo 9 9 9 9 9 9 27 27 100 cea rg 3 9 7 9 8 9 18 27 66 een 8 9 9 9 9 9 26 27 96 Positivo 8 9 9 9 9 9 26 27 96 Positivo 9 9 9 9 9 9 27 27 100 Positivo 9 9 9 9 9 9 27 27 100 Fortemente positivo 9
138. rumento tome el BLOQUE DE ENFRIAMIENTO CON LOS TUBOS TODAVIA EN SU SITIO y AGITE EN EL VORTEX POR INVERSION durante 5 a 10 segundos 9 Cree una serie con el protocolo de la prueba BD GeneOhm StrepB Si es necesario consulte el Manual del operador del Software Dx de SmartCycler Debe introducir los parametros de identificaci n para las muestras antes de empezar la serie 10 Inserte cada tubo de reacci n en un modulo I CORE del SmartCycler y cierre la tapa del I CORE Coloque los controles positivo y negativo en su posici n adecuada v ase la secci n titulada Control de calidad Empuje hacia abajo todos los tubos firmemente hasta que est n en su sitio 11 Empiece la serie Control de calidad Controles positivo y negativo Los procedimientos de control de calidad est n concebidos para supervisar la eficacia de la prueba El control positivo est pensado para controlar fallos importantes de los reactivos El control negativo se utiliza para detectar la contaminaci n de reactivos o la contaminaci n ambiental o por recirculaci n por amplicones de S agalactiae o SGB Los controles positivo y negativo son controles de prueba controles de serie Un control no valido invalida la serie Por ultimo un control interno incorporado a cada mezcla de reacci n est concebido para controlar la inhibici n de PCR en cada muestra Deben procesarse un control positivo y un control negativo para cada serie en el SmartCycler
139. s Infektionsrisiko f r das Neugeborene erh ht Ein empfindlicher Schnell Auslesetest f r GBS welcher die Ergebnisse von Intrapartum Auslesetests rechtzeitig liefern k nnte um antibiotische Prophylaxe zu geben w re f r mehrere Gruppen von Frauen vorteilhaft einschliesslich denjenigen welche ungen gende pr natale Versorgung hatten deren Ergebnisse von Antepartum Auslesetests zur Zeit der Geburt unbekannt sind und Frauen mit m glicher Fr hgeburt Warnung e Der Gebrauch von BD GeneOhm StrepB f r Intrapartum Auslesetests sollte die Anwendung von anderen Strategien z B Antepartum Tests nicht ausschliessen Intrapartum BD GeneOhm StrepB Ergebnisse sind n tzlich um Kandidaten f r antibiotische IntrapartumProphylaxe zu identifizieren wenn die Ergebnisse rechtzeitig verf gbar sind um intraven se Antibiotika mindestens 4 Stunden vor der Geburt zu geben e Der BD GeneOhm StrepB Test liefert keine Anf lligkeitsergebnisse Zus tzliche Zeit wird ben tigt um Anf lligkeitstests zu kultivieren und auszuf hren welche f r Frauen mit Penizilin Allergien empfohlen w rden P0001 02 29 BD Diagnostics BD GeneOhm StrepB Das Prinzip der Methode Das genetische Ziel des BD GeneOhm StrepB Tests ist das cfb Gen Dieses Gen identifiziert den CAMP Faktor ein diffusionsfahiges ausser zellul res Protein welches in nahezu allen GBS Isolaten anwesend ist Feststellung des CAMP Faktors wird f r die mutmassliche Iden
140. s in F llen worin mehrfache Aliquote aus einem R hrchen entnommen werden e Gute Laborgewohnheiten und der Gebrauch von Handschuhen werden empfohlen um Verunreinigungen der Proben oder Reagenzien zu vermeiden St rsubstanzen Potentielle St rsubstanzen beinhalten folgende sind aber nicht darauf beschr nkt Fruchtwasser Mekonium Blut Faeces Gleitmittel Urin und vaginale Schleimh ute Die Anwesenheit von zuvielen Vaginalsekreten Antepartum oder Intrapartum kann PCR hemmen und ungel ste Ergebnisse liefern Daher wird es empfohlen die Vaginalgegend vor der Probeentnahme abzuwischen Die Anwesenheit von zuviel Blut kann ebenfalls zur PCR Hemmung und zu einem ungel sten Ergebnis f hren In einer Untersuchungsstudie mit 803 vaginalen rektalen Proben von Intrapartum Mutterschafts Patientinnen wurden bei 63 der gesammelten Proben potentielle St rsubstanzen berichtet Nur 1 10 803 der Proben ergab ungel ste Ergebnisse Von diesen wurden bei 6 Proben keine potentiellen St rsubstanzen berichtet Bei einer Probe lag Fruchtwasser vor und bei 3 Proben war es eine Kombination von Substanzen Alle ausser einer wurden nach einem Gefrier Tau Zyklus gel st Bei der Probe welche nicht gel st werden konnte wurde keine potentiell st rende Substanz beobachtet Erwartete Werte Ungef hr 10 bis 30 von schwangeren Frauen haben GBS Kolonisierung in der Vagina oder im Rektum GBS Kolonisierung kann vor bergehend chronisch oder periodisc
141. s mit einer nach oben gerichteten vertikalen Bewegung ffnen Nicht horizontal abheben Das Ber hren der optischen Detektionsfenster an den Unterkanten des R hrchens und der unteren diamantf rmigen Gegend vermeiden 25 uL des Verd nnungspuffer schwarzes Etikett zu allen R hrchen hinzugeben das Master Mix tube teilweise verschliessen Das Verd nnungspuffer in den Vorratsbeh lter oberer Teil von jedem R hrchen geben 1 5 pL von jedem Lysat in ein verschiedenes Master Mix tube geben und das R hrchen fest verschliessen Sorge tragen beim Pipettieren in das Lyser hrchen keine Perlen zu aspirieren Nach der Zugabe der Probe 2 3 mal im Vorratsbeh lter auf und ab pipettieren um die bergabe des Gesamtvolumens sicherzustellen Das Lyser hrchen und die Master Mix tubes schliessen F r jede Probe eine neue Mikropipettenspitze anwenden Die Positive Kontrolle tubes und Negative Controlle tubes schliessen Die Negative Kontrolle sollte die letzte Probe sein welche f r eine bestimmte Test fertiggestellt wird d h alle Proben laufen gleichzeitig im SmartCycler Alle Reaktionsr hrchen 5 10 Sekunden lang zentrifugieren Die besonders angepasste Mikrozentrifuge verwenden welche mit dem SmartCycler Instrument geliefert wird P0001 02 34 BD Diagnostics BD GeneOhm StrepB 7 Die Reaktionsr hrchen bei 2 8 C auf dem SmartCycler K hlblock halten bevor man sie ins Instrument l dt Die verbleibenden Lysat
142. s por SGB de aparici n temprana desde que se implantaron las pautas de los Centros para el Control y la Prevenci n de Enfermedades CDC en 1996 Adem s en casos de partos de corta duraci n la disponibilidad de los resultados de las pruebas de detecci n sistem tica antes del parto permite la administraci n de antibi ticos por v a intravenosa lo m s pronto posible tras el ingreso lt 5 horas Bas ndose en los m todos diagn sticos disponibles en la actualidad los CDC de EEUU recomiendan la realizaci n de un examen colectivo basado en un cultivo prenatal para observar la posible colonizaci n de vaginal y rectal de SGB en todas las mujeres entre la 35 y la 37 semanas de gestaci n Aunque esta recomendaci n se fundamenta en el fuerte efecto protector documentado de la estrategia del examen colectivo basado en cultivo prenatal frente a la estrategia basada en el riesgo la detecci n sistem tica antes del parto tiene limitaciones A veces el m dico no conoce los resultados de las pruebas de detecci n precoz en el momento del parto el estado de colonizaci n puede cambiar entre la prueba y el parto y algunas mujeres no son sometidas a dichas pruebas antes del parto En cada uno de estos casos es posible que estas mujeres no sean tratadas adecuadamente frente a la colonizaci n por SGB por lo que aumenta el riesgo de contagio para los reci n nacidos Una prueba sensible y rapida de detecci n sistematica de SGB que pueda
143. s pour les patientes allergiques la p nicilline Note Le tampon d chantillon ne devrait pas influer sur la viabilit des micro organismes Toutefois l utilisation du tampon dans les cultures n a pas fait l objet d valuation Un second pr l vement peut tre obtenu afin de proc der un test de sensibilit aux antibiotiques Les laboratoires peuvent choisir de valider d autres approches Les techniques de culture et d preuve de sensibilit aux antibiotiques sont d crites dans les documents des CDC Interpr tation des r sultats L algorithme de d cision relatif au test BD GeneOhm StrepB est int gr dans le logiciel SmartCycler L interpr tation des r sultats se fait selon les crit res suivants R sultat de bd 2 P chantilon R sultat du CI Interpr tation des r sultats NEG PASS Aucun ADN de SGB d tect r sultat pr sum n gatif pour le SGB N gatif Accept ou nombre d organismes inf rieur la limite de d tection de l essai POS NA E eeh 5 tif B Positif Non Applicable ADN de SGB d tect r sultat pr sum positif pour le SG l FAIL LASD use Non r solu chantillon inhibiteur ou r actif rejet Non r solu Rejet ND ND Ind termin en raison d une d faillance du module I CORE Ind termin Ind termin codes d erreur ou d avertissement affich s CI contr le interne Consulter le manuel d utili
144. s the smallest concentration at which all replicates test positive The LOD of BD GeneOhm StrepB assay for S agalactiae serotypes and variants la Ib c II Ic IIR III Ilic IHR V and VR ranges between 10 and 50 genome copies per reaction with a median of 25 genome copies per reaction The LOD in CFU is 3 to 9 CFU reaction Taking into account the dilution factor due to specimen processing this translates into 10 to 10 CFU swab The following table details the lowest concentration of each subtype giving a positive result in all 5 replicates Table 5 LOD obtained for each serotype tested Serotype Genome copies reaction CFU reaction ATCC 12973 Il 10 3 IHR 25 6 la c 50 4 VR 50 3 Ill 25 3 la 25 3 V 50 8 Ib c 25 3 IIR 25 4 Il 25 9 Ile 25 3 Ich 50 4 A For serotype llc a mismatch exists in one of the primer binding region P0001 02 15 BD Diagnostics Reproducibility A panel of 10 simulated specimens R1 to R10 with varying concentrations of GBS and the two controls positive and negative supplied with BD GeneOhm StrepB assay were tested in triplicate on three different days at each of 3 sites 10 specimens plus 2 controls tested X 3 X 3 days X 3 sites One lot of reagent was used for the study Table 6 Summary of reproducibility results BD GeneOhm StrepB
145. sation du logiciel SmartCycler Dx pour l interpr tation des codes d erreur ou d avertissement Un contr le positif ou n gatif invalid annule toute la s rie Dans ces cas les r sultats obtenus dans cette s rie sont nuls et ne doivent pas tre consign s Les s ries invalid es et les codes d erreur ou d avertissement de l appareil sont marqu s l cran et sur les rapports Avant de consigner les r sultats du test BD GeneOhm StrepB toujours v rifier si la s rie est valide Consulter le manuel d utilisation du logiciel SmartCycler Dx pour l impression des r sultats S rie invalid e En utilisant les lysats congel s pr parer de nouveaux tubes de r action pour tous les chantillons cliniques Pr parer aussi de nouveaux contr les P0001 02 23 BD Diagnostics BD GeneOhm StrepB Echantillons non r solus Reprendre le test avec le lysat congel de l chantillon non r solu Un cycle de cong lation d cong lation diminue l effet des substances inhibitrices de la PCR chantillons ind termin s en raison d une d faillance du module I CORE Reprendre le test avec les lysats congel s d chantillon correspondants Consulter le manuel d utilisation du logiciel SmartCycler Dx pour l interpr tation des codes d erreur ou d avertissement Limites du test L efficacit du test a t tablie avec le SmartCycler de Cepheid a partir d chantillons vagino rectaux pr lev s ch
146. se soja et cultiver jusqu a l obtention d une absorbance de 0 6 a 600 nm Pr parer des dilutions en s rie dans une solution saline pour obtenir une suspension bact rienne d environ 10 UFC mL Tremper l couvillon recommand avec milieu Stuart liquide voir la section Mat riel n cessaire mais non fourni dans la suspension bact rienne placer l couvillon dans sa gaine protectrice pour permettre un contact avec le milieu de transport laisser reposer durant 5 minutes temp rature ambiante puis traiter et analyser le contr le comme s il s agissait d un chantillon clinique cf Pr paration des chantillons et Proc dure du test BD GeneOhm StrepB Tous les chantillons et tous les contr les devraient donner des r sultats valides aucun contr le positif ou n gatif invalid aucun contr le interne rejet Cette proc dure peut galement servir de mesure de contr le qualit des dispositifs de pr l vement des chantillons Dans ce cas le test devrait tre fait en triplicata suivant les instructions indiqu es dans la notice cf Pr paration des chantillons y compris les contr les Tous les chantillons et tous les contr les devraient donner des r sultats valides aucun contr le positif ou n gatif invalid aucun contr le interne rejet Pour en savoir davantage sur les contr les qualit pri re de consulter les documents MM3 et C24 du CLSI D termination de la sensibilit aux antibiotique
147. sion cellulaire au tube de lyse capuchon jaune bien refermer le tube Utiliser un nouvel embout pour chaque chantillon 6 Vortexer grande vitesse durant 5 minutes Pour le traitement de plusieurs chantillons un adaptateur positions multiples peut tre utilis 7 Centrifuger le tube de lyse bri vement A faible vitesse durant 2 5 secondes pour faire descendre le liquide au fond du tube 8 Chauffer 95 2 C durant 2 minutes Utiliser un bloc chauffant a sec ou un bain marie 9 Placer le tube de lyse sur la glace ou sur un bloc r frig rant Proc dure du test BD GeneOhm StrepB Note Un tube de Master Mix m lange r actionnel tube SmartCycler a tiquette blanche est requis pour chaque chantillon a tester Un tube Positive Control contr le positif tiquette rouge et un tube P0001 02 21 BD Diagnostics BD GeneOhm StrepB Negative Control contr le n gatif tiquette verte doivent tre inclus dans chaque s rie de tests BD GeneOhm StrepB Un tube de Diluent diluant tiquette a bande noire est n cessaire pour pr parer jusqu a 40 r actions Retirer le nombre n cessaire de tubes de leur pochette de protection enlever le surplus d air et refermer rapidement les pochettes au moyen de la fermeture a glissi re Pr parer le nombre de tubes de e SmartCycler en fonction du nombre de modules I CORE disponibles sur le SmartCycler sans exc dant 1 Placer les tubes de mela
148. t infekti se DNA enth lt GBS Primer Bindungssequenzen und eine einzigartige Sequenz zur Probenhybridisierung lt 0 001 Primers lt 0 002 Molekularproben lt 0 05 dATP dCTP dGTP dTTP Rinder Serum Albumin Kohlehydrat lt 0 005 nicht infekti se genomische DNA von Streptococcus pneumoniae Positive Kontrolle Positive Control 50 Rohrchen lt 0 001 DNA Polymerase Komplex lt 0 001 Interne Kontrolle nicht infekti se DNA enthalt GBS Primer Bindungssequenzen und eine einzigartige Sequenz zur Probenhybridisierung P0001 02 30 BD Diagnostics BD GeneOhm StrepB lt 0 001 Primers lt 0 002 Molekular Proben lt 0 05 dATP dCTP dGTP dTTP Rinder Serum Albumin Kohlehydrat lt 0 001 nicht infekti se genomische GBS DNA mit dem cfb Gen Negative Kontrolle Negative Control 50 Rohrchen lt 0 001 DNA Polymerase Komplex lt 0 001 Interne Kontrolle nicht infekti se DNA enth lt GBS Primer Bindungssequenzen und eine einzigartige Sequenz zur Probenhybridisierung lt 0 001 Primers lt 0 002 Molekularproben lt 0 05 dATP dCTP dGTP dTTP Rinder Serum Albumin Kohlehydrat lt 0 005 nicht infekti se genomische DNA von Streptococcus pneumoniae Verdinnungspuffer Diluent 50 x 1 mL Tris HCl Puffer MgCl NH4 2SO4 Vorsichtsmassnahmen Dieser Test ist nur zum diagnostischen In Vitro Gebrauch Das Kit nicht verwenden wenn das Sicherheitssiegel an der u eren Ver
149. tato dimostrato che l effetto del ciclo di congelamento scongelamento di ridurre le sostanze inibitorie di PCR Campione non determinato a causa di problema del modulo I CORE Ripetere il test col corrispondente lisato congelato del campione Per l interpretazione dei messaggi di codice di avvertenza o di errore fare riferimento al Manuale per l operatore del software SmartCycler Dx Limiti della procedura Le prestazioni di questo test sono state stabilite con lo strumento SmartCycler con campione vaginale rettale da pazienti antepartum e intrapartum prelevati con Copan Venturi Transystem con mezzo liquido di Stuart Per questo motivo questo prodotto pu essere utilizzato solo con lo strumento SmartCycler Per questo motivo questo prodotto pu essere utilizzato solo con lo SmartCycler inoltre non si consiglia l utilizzo di un sistema di prelievo e trasporto di campioni diverso da quelli elencati nella sezione Materiali necessari ma non forniti Altre sorgenti cliniche non sono state valutate e le caratteristiche prestazionali di questo test sono ignote su altri tipi di campioni Possono verificarsi risultati di test negativi da prelievo trattamento o conservazione impropri di campioni presenza di inibitore errore tecnico miscela di campioni o poich il numero di organismi nel campione inferiore alla sensibilit analitica del test Un attenta conformit alle istruzioni fornite in questo inserto e nel Manuale per
150. te ext rieure est bris Ne pas utiliser les r actifs si les pochettes de protection sont ouvertes ou d chir es l arriv e Refermer rapidement apr s chaque emploi les pochettes de protection du m lange r actionnel et des contr les au moyen de la fermeture glissi re Ne pas utiliser le m lange r actionnel ou les contr les si les pochettes ne contiennent pas de dessiccant Ne pas retirer les dessiccants des pochettes de m lange r actionnel et de contr les Les lots de r actifs ne sont pas interchangeables Ne jamais m langer les r actifs de diff rents tubes m me s ils proviennent du m me lot Ne pas utiliser les r actifs apr s la date de p remption Ne pas changer les capuchons des r actifs entre eux tant donn qu ils peuvent tre contamin s et fausser les r sultats du test viter la contamination microbienne des r actifs ou la contamination par la d soxyribonucl ase DNAse lors du pr l vement des aliquotes dans les tubes Il est recommand d utiliser des micropipettes munies d embouts filtre d placement direct st riles jetables exempts de DNase Pour viter la contamination de l environnement par des amplicons ne pas ouvrir les tubes r actionnels apr s l amplification Utiliser un nouvel embout pour chaque chantillon ou r actif La r alisation du test en dehors des d lais recommand s peut se solder par des r sultats non valables Les tests qui ne respectent pas l
151. te jusqu au moment du test lorsque effectu moins de 24 heures suivant le pr l vement 8 Se r f rer la section Entreposage manutention et stabilit Echantillons pr lev s pour l entreposage et la manutention Pr paration des chantillons Note faut pour chaque chantillon analyser un tube de Sample Buffer tampon d chantillon capuchon bleu et un Lysis tube tube de lyse capuchon jaune Retirer le nombre n cessaire de tubes de leur pochette de protection enlever le surplus d air et refermer rapidement les pochettes au moyen de la fermeture glissi re 1 Placer l ecouvillon dans un tube de tampon d chantillon capuchon bleu Identifier le tube contenant le tampon d chantillon sur le capuchon et ou sur l tiquette du tube 2 Casser la tige de l couvillon et bien refermer le tube Tenir la tige de l couvillon pr s du bord du tube une gaze peut tre utilis e pour se prot ger contre les risques potentiels de contamination Soulever l couvillon de quelques millim tres mm du fond du tube et plier la tige contre le bord du tube pour la casser M thode alternative utiliser des ciseaux propres pour couper la tige S assurer que le capuchon se refermera compl tement Laisser reposer 5 minutes Vortexer grande vitesse durant 15 secondes Pour le traitement de plusieurs chantillons un adaptateur positions multiples peut tre utilis 5 Transf rer 50 uL de la suspen
152. test Dodici 12 campioni che erano inizialmente negativi col saggio BD GeneOhm StrepB sono stati sottoposti a nuovo test a causa di un controllo non valido e tutti sono risultati negativi 8 campioni che inizialmente hanno dato un risultato non chiaro hanno dato un risultato negativo dopo un nuovo test Un 1 campione che dava un risultato inizialmente non chiaro restava non chiaro ad un nuovo test e non stato incluso nella tabella precedente L esame dei campioni che hanno fornito risultati positivi alla coltura negativi a BD GeneOhm StrepB n 9 ha rivelato che tutti i campioni avevano un carico batterico sotto il limite di rilevamento di BD GeneOhm StrepB E stato anche mostrato che tutti gli isolati recuperati da piastre di coltura positive hanno fornito un risultato positivo con BD GeneOhm StrepB L esame dei campioni che hanno fornito risultati negativi alla coltura positivi a BD GeneOhm StrepB n 27 ha rivelato che tutti i campioni contenevano la corretta regione del target comprese le regioni di legame del primer del gene cfb e che il prodotto amplificato era quello atteso con BD GeneOhm StrepB La prevalenza complessiva della popolazione dello studio era del 18 6 con un intervallo da 9 1 a 28 7 ai diversi siti clinici Il valore predittivo negativo era di 98 6 95 CI 97 3 99 3 e il valore predittivo positivo era di 83 8 95 CI 77 4 89 1 P0001 02 64 BD Diagnostics BD GeneOhm Str
153. the tube label 2 Break the swab stem and close the tube tightly Hold the swab by the stem near the rim of the tube use gauze to minimize risks of contamination Lift the swab a few millimeters mm from the bottom of the tube and bend the stem against the edge of the tube to break it Alternative method use clean scissors to cut the stem Make sure the cap will close tightly Let stand for 5 minutes Vortex at high speed for 15 seconds For processing multiple samples adapters with multiple holding sites can be used 5 Transfer 50 uL of cell suspension to the Lysis tube yellow cap close tightly Use a new micropipettor tip for each specimen 6 Vortex at high speed for 5 minutes For processing multiple samples adapters with multiple holding sites can be used 7 Centrifuge the Lysis tube briefly quick spin P0001 02 ECH BD Diagnostics BD GeneOhm StrepB 9 At low speed for 2 to 5 seconds to bring the content to the bottom of the tube Heat at 95 2 C for 2 minutes Use a dry heating block for 1 5 mL tubes or a water bath Put the Lysis tube on ice or on a cooling block BD GeneOhm StrepB_ assay procedure Note One Master Mix tube SmartCycler tube with a white label is required for each specimen to be tested One Positive Control tube red label and one Negative Control tube green label are required per assay run One Diluent tube label with black strip is required for the preparation of up to 40 PC
154. tifizierung von GBS durch biochemische Methoden angewandt Phenotypische und molekulare Eigenschaften zeigten dass das cfb Gen in dieser Spezies gut konserviert ist Komplement re Primers zu den konservierten und spezifischen Regionen des Gens sind entwickelt worden um ein 154 bp Fragment des cfb Gens zu verstarken Ein vaginaler rektaler Tupfer wird genommen und mit dem empfohlenen Tupfer mit Fl ssigem Stuart Medium zum Labor transportiert siehe Materialien welche bendtigt aber nicht mitgeliefert werden Der Tupfer wird im Probenpuffer platziert um seinen Inhalt zu eluieren und ein Aliquot wird ins Lyser hrchen transferiert Lyse findet durch eine Kombination von chemischen und physischen Aktivitaten statt und braucht weniger als 15 Minuten Eine Probe des Lysats wird direkt zu den PCR Reagenzien im SmartCycler Reaktionsr hrchen hinzugegeben und mit dem SmartCycler Instrument einem thermischen Zufallszugang Echtzeit Fluoreszenz Zyklusger t durchgelaufen In Proben welche GBS enthalten wird die 154 bp Region des cfb Gens verstarkt und festgestellt Verstarkung des IC eines 180 bp DNA Fragmentes welches aus einer 134 bp Sequenz besteht die es in GBS nicht gibt und zwar von der Sequenz von jeder der zwei GBS spezifischen Primers wird auch stattfinden Die verst rkten DNA Targets werden mit Molekular Beacons festgestellt diese sind haarnadelf rmige Einzelstrang Oligonukleotiden welche an einem Ende mit einem L sc
155. tion Wenn man den Verd nnungsfaktor wegen der Probenbehandlung einrechnet bedeutet das 10 bis 10 CFU Tupfer Die folgende Tabelle zeigt die niedrigste Konzentration von jedem Untertyp die bei allen 5 Replikaten ein positives Ergebnis zeigt Tabelle 5 LOD welches fiir jeden getesteten Serotyp erhalten wurde Serotyp Genomkopien Reaktion CFU Reaktion ATCC 12973 11 10 3 ITR 25 6 la c 50 4 VR 50 3 Il 25 3 la 25 3 V 50 8 Ib c 25 3 IIR 25 4 Il 25 9 IIIc 25 3 Ich 50 4 f r Serotyp llc es gibt eine Fehlanpassung in einer Primer Bindungsregion P0001 02 40 BD Diagnostics BD GeneOhm StrepB Reproduzierbarkeit Eine Gruppe von 10 simulierten Proben R1 bis R10 mit unterschiedlichen Konzentrationen von GBS und den beiden Kontrollen positiv und negativ welche mit dem BD GeneOhm StrepB Test mitgeliefert wurden wurde dreifach an drei verschiedenen Tagen an drei Stellen getestet 10 Proben plus 2 Kontrollen getestet X 3 X 3 Tagen X 3 Stellen Eine Charge der Reagenz wurde f r diese Studie verbraucht Tabelle 6 Zusammenfassung der reproduzierbaren Ergebnisse Proben ID Stelle 1 Stelle 2 Stelle 3 De Grant negativ 9 9 9 9 9 9 27 27 100 negativ 9 9 9 9 9 9 27 27 100 schwach positiv 3 9 7 9 8 9 18 27 66 schwach positiv 8 9 9 9 9 9 26 27 96 positiv 8 9 oo 9 9 26 27 96 positiv 9 9
156. tnahme Handhabung oder Lagerung die Anwesenheit eines Hemmstoffes technische Fehler Probenverwechslung oder weil die Anzahl der Organismen in der Probe unterhalb der analytischen P0001 02 36 BD Diagnostics BD GeneOhm StrepB Empfindlichkeit dieses Tests liegt Sorgfaltige Befolgung der Anweisungen in dieser Beilage und in der SmartCycler Dx Software Gebrauchsanleitung ist notwendig um falsche Ergebnisse zu vermeiden Der Gebrauch dieses Tests sollte sich auf Personal beschranken welches in dem Verfahren und dem Gebrauch des SmartCycler unterwiesen wurde e Da die Detektion von Gruppe B Streptococcus von der Anzahl der Organismen in der Probe abh ngt hangen verlassliche Ergebnisse von der richtigen Entnahme Handhabung und Lagerung der Proben ab e Die Ergebnisse des BD GeneOhm StrepB Tests sind manchmal wegen einer ung ltigen Kontrolle ungel st oder ung ltig Dann wird erneutes Testen erforderlich was zu einer Verz gerung im Erhalten der Ergebnisse f hren kann e Falsche Negative k nnen auch wegen der Anwesenheit von Polymerase Hemmstoffen auftreten die interne Kontrolle in der Master Mix gestattet die Detektion von solchen Substanzen e Mutationen in Primer oder Probe Bindungsregionen k nnen die Detektion beeinflussen Das kann besonders zutreffen wenn weniger als 10 Organismen anwesend sind Es gibt keine publizierten Berichte ber GBS St mme oder Isolate welche den cfb Gen nicht besitzen Wenn ein s
157. to de la prueba BD GeneOhm StrepB Todas las muestras y controles deber an dar resultados v lidos ning n control positivo o negativo no v lido y ning n control interno fallido Este procedimiento puede servir tambi n como procedimiento de control de calidad para dispositivos de obtenci n de muestras En dichos casos las pruebas deben hacerse por triplicado de acuerdo con las instrucciones del prospecto Preparaci n de muestras incluidos los controles Todas las muestras y controles deber an dar resultados v lidos ning n control positivo o negativo no v lido y ning n control interno fallido Para orientaci n Po sobre control de calidad el usuario quiz s prefiera consultar el documento MM3 y C24 del CLSI P0001 02 48 BD Diagnostics BD GeneOhm StrepB Prueba de sensibilidad antibi tica para pacientes al rgicas a la penicilina Nota La soluci n tamp n de muestras no deber a afectar la viabilidad del organismo Sin embargo no ha sido evaluado el uso de la soluci n tamp n en el cultivo Puede obtenerse una segunda muestra de las mujeres para realizar un antibiograma Los laboratorios quiz s prefieran validar otros enfoques Los procedimientos para cultivos y antibiogramas pueden obtenerse de los CDC Interpretaci n de resultados El algoritmo de decisi n para la prueba BD GeneOhm StrepB est integrado en el software SmartCycler La interpretaci n de los resultados de la prueba se ll
158. ture they should be kept with their accompanying reagents of the same lot at 2 8 C 8 Provided the bag is properly closed with the zip seal after each use Kit Component outside of their protective Master mix and Controls pouch white red or green labels Not reconstituted Temperature 15 25 C tubes Stability 2 hours Materials required but not provided e BBL CultureSwab Liquid Stuart Becton Dickinson catalog no 220099 Copan Transystem Liquid Stuart Copan Italia International catalog no 141C USE Copan Venturi Transystem Liquid Stuart Copan Diagnostics Inc catalog no 141C US HealthLink TransPorter single Liquid Stuart HealthLink catalog no 4432 e Vortex Genie 2 Fisher with microtube holder or equivalent for processing multiple samples adapters with multiple holding sites can be used P0001 02 8 BD Diagnostics BD GeneOhm StrepB Micropipettors accurate range between 1 50 uL Sterile DNAse free filter blocked or positive displacement pipettor tips Scissors Gauzes Disposable gloves powderless Microcentrifuge for low speed centrifugation Dry heating block for 1 5 mL tubes or water bath Ice or cooling block for 1 5 mL tubes Stopwatch or timer SmartCycler starter system with Dx Software processing block user manual accessory kit and desktop computer Cepheid Sunnyvale CA USA Instructions for use Specimen collection In order to obtain an ad
159. u test BD GeneOhm StrepB devraient servir de compl ment aux observations cliniques et aux renseignements d j connus du m decin Le test n a pas t concu pour distinguer les personnes porteuses de streptocoque du groupe B des personnes atteintes d une infection a streptocoque Les r sultats du test peuvent galement tre affect s par une th rapie antibiotique simultan e Le test ne peut servir a d terminer le degr de r ussite ou d chec du traitement tant donn que l ADN peut toujours rester pr sent m me apr s le traitement antimicrobien M me s il n est pas n cessaire de pr parer des r actifs et que les principales op rations techniques font appel au pipetage le respect des bonnes pratiques de laboratoire est essentiel l efficacit du test Compte tenu de la grande sensibilit analytique du test il faut prendre grand soin de conserver la puret des r actifs surtout lorsque plusieurs aliquotes sont pr lev es dans un m me tube Les bonnes pratiques de laboratoire et le port de gants sont recommand s pour viter toute contamination des chantillons ou des r actifs P0001 02 24 BD Diagnostics BD GeneOhm StrepB Substances interf rentes La liste non exhaustive des substances potentiellement interf rentes est la suivante le liquide amniotique le m conium le sang les f ces les lubrifiants l urine la muqueuse vaginale La pr sence d un surplus de s cr tions vaginales en phase
160. ude Tableau 6 R sum des r sultats de reproductibilit Echantillon an a sn ae Concordance Negatif 9 9 9 9 9 9 27 27 100 N gatif 9 9 9 9 9 9 27 27 100 Positif faible 3 9 7 9 8 9 18 27 66 Positif faible 8 9 9 9 9 9 26 27 96 Positif 8 9 9 95 9 9 26 27 96 Positif 9 9 9 9 9 9 27 27 100 Positif 9 9 9 9 9 9 27 27 100 Positif fort 9 9 9 9 9 9 27 27 100 Positif fort 9 9 9 9 9 9 27 27 100 Positif fort 9 9 9 9 9 9 27 27 100 Contr le positif 3 3 9 9 9 9 21 21 100 Contr le n gatif 3 3 9 9 9 9 21 21 100 EN 88 96 106 108 107 108 301 312 96 5 Concordance 91 6 98 1 99 1 96 5 A B L chantillon initialement non r solu a donn le r sultat pr vu la reprise du test Tous les chantillons positifs avaient des concentrations variables en SGB Tous les r plicats ont t test s en une seule s rie plut t qu en trois s ries de 10 chantillons et de 2 contr les P0001 02 28 BD Diagnostics BD GeneOhm StrepB Vorgesehene Anwendung Der BD GeneOhm StrepB Test ist ein qualitativer diagnostischer n Vitro Test zur raschen Feststellung von Gruppe B Streptokokkus GBS DNA in vaginalen rektalen Proben von Prepartum oder Intrapartum Frauen Der Test welcher auf dem SmartCycler Automatisierten Analysegerat ausgef hrt wird verwendet eine Polymerase Kettenreaktion polymerase chain reacti
161. um e intrapartum Riassunto e spiegazione del test Un tampone vaginale rettale prelevato e trasportato al laboratorio utilizzando un tampone consigliato con mezzo liquido di Stuart fare riferimento a Materiali necessari ma non forniti Il tampone eluito in tampone un aliquota del campione quindi lisata e aggiunta ai reagenti PCR che contengono i primer specifici GBS utilizzati per amplificare il target genetico del saggio gene cfb se presente ll saggio include anche un controllo interno internal control IC per rilevare campioni inibitori PCR e confermare l integrit dei reagenti del saggio target amplificati gene cfb e IC sono rilevati con sonde di ibridizzazione etichettate con fluorofori temprati molecular beacon L amplificazione il rilevamento e l interpretazione dei segnali sono eseguiti automaticamente dal software Cepheid SmartCycler L intera procedura richiede circa 45 minuti Recentemente l incidenza della patologia perinatale streptococcica gruppo B negli Stati Uniti si ridotta a causa dell utilizzo della profilassi antibiotica per la prevenzione delle patologie GBS Un sondaggio nazionale tra i membri ACOG nel 2000 ha rilevato che il 73 5 degli intervistati utilizzava una strategia basata sullo screening che mostrava che lo screening antepartum contribuiva fortemente alla riduzione del 70 della patologia GBS ad attacco precoce da quando erano state applicate le indicazioni suggerite nel 1996 d
162. ur cktun um Kontakt mit dem Transportmedium zu erm glichen bei Zimmertemperatur 5 Minuten stehenlassen und dann als eine klinische Probe verarbeiten und testen siehe die Abschnitte Probenvorbereitung und BD GeneOhm StrepB Satzvorgang S mtliche Proben und Kontrollen sollten g ltige Ergebnisse liefern keine ung ltigen positiven oder negativen Kontrollen und keine verfehlte interne Kontrolle Dieses Verfahren kann auch als ein Qualit tskontroll Verfahren f r Ger te zum Sammeln von Proben angewandt werden In solchen F llen sollte dreifach getestet werden nach den Anweisungen auf der Packungsbeilage Probenvorbereitung einschliesslich Kontrollen S mtliche Proben und Kontrollen sollten g ltige Ergebnisse zeigen keine ung ltigen positiven oder negativen Kontrollen und keine fehlgeschlagene interne Kontrolle Der Anwender kann generelle QC Anleitungen in CLSI MM3 und C24 auffinden P0001 02 35 BD Diagnostics BD GeneOhm StrepB Antimikrobieller Anfalligkeitstest fur Patienten mit Penicillin Allergien Hinweis Der Probenpuffer sollte die Lebensfahigkeit der Organismen nicht beeinflussen Der Gebrauch des Puffers in Kulturen ist allerdings noch nicht bewertet worden Man kann von Frauen einen zweiten Tupfer nehmen um antimikrobielle Anf lligkeitstests auszuf hren Labore bevorzugen es eventuell andere Methoden zu g ltigieren Vorgehensweisen f r Kulturen und antimikrobielle Anf lligkeitstests sind von der
163. z der Studienbev lkerung betrug 18 6 Uber einen Bereich von 9 1 bis 28 7 bei den verschiedenen klinischen Stellen Der negative Vorhersagewert betrug 98 6 95 Cl 97 3 99 3 und der positive Vorhersagewert betrug 83 8 95 Cl 77 4 89 1 Tabelle 2 Klinische Leistung des BD GeneOhm SirepB Tests im Bezug auf die CDC empfohlene Kulturtechnik Anzahl der Ung ltig Klinische Empfindlichkeit Klinische Spezifit t ungel sten Gesamt anzahl Proben der Durchlaufe Stelle 1 93 n 15 68 100 93 n 150 87 96 5 2 55 Stelle 2 88 n 25 69 97 100 n 62 97 100 0 0 38 Stelle 3 99 n 77 93 100 97 n 350 94 98 1 1 56 Stelle 4 85 n 13 54 98 100 n 35 98 100 1 1 21 Stelle 5 89 n 19 67 99 93 n 56 82 98 3 1 22 Gesamt 94 n 149 89 97 96 n 653 94 97 10 5 192 Binomische 95 Sicherheitsintervalle B S mtliche Proben waren wegen fehlgeschlagenen internen Kontrollen ungel st welche Hemmung oder Reagenzdefekte vermuten liessen Neun 9 von 10 wurden nach erneutem Testen gel st Tabelle 3 Schichtung der Ergebnisse je nach der Zeit welche zwischen der Probeentnahme und dem Testen mit dem BD GeneOhm StrepB Test verging kulturpositiv kulturnegativ Vergange ne BD BD BD BD Ubereinstimmung Zeit Stunden GeneOhm GeneOhm GeneOhm GeneOhm

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