BBLâUROTUBEÔ Products
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1. beiges ou ambr es sur un milieu orange brun tre indiquent la pr sence de non fermentants du lactose Noter que le BBL UROTUBE 2S comporte deux faces et contient uniquement des CLED et MacConkey Agars Interpr tation de la croissance sur le troisi me milieu correspondant Milieu 3 Comme il a t stipul ci dessus le troisi me milieu d pend du type de lame utilis BBL UROTUBE Toute croissance obtenue sur Cetrimide Agar doit tre interpr t e comme suit des colonies fluorescentes de couleur verte jaune indiquent la pr sence de Pseudomonas aeruginosa Ce diagnostic peut tre confirm par un test d oxydase positif voir Mat riaux non fournis Si une croissance non fluorescente est observ e dans ce milieu il convient d effectuer des tests suppl mentaires afin d obtenir une identification compl te BBL UROTUBE M Une croissance sur Malt Agar indique la pr sence de levures p ex Candida albicans ou d autres champignons Noter que certaines souches de levures n cessitent 42 48 h pour se d velopper compl tement dans ces milieux Peu fr quemment certaines bact ries comme des lactobacilles peuvent se d velopper dans ce milieu Par cons quent il peut s av rer utile d effectuer une coloration de Gram sur la croissance obtenue dans ce milieu Des tests suppl mentaires sont n cessaires pour obtenir une identification compl te BBL UROTUBE E L apparition de colonies marrons noires sur la E2. modifi e plusieurs reprises par la suite en vue de son utilisation en uroculture I a t rapport que ce milieu appel Cystine Lactose Electrolyte Deficient CLED est id al pour les techniques de la lame immerg e et pour la bact riologie urinaire en g n ral Les l ments nutritifs de la CLED Agar sont fournis par les peptones de g latine et de cas ine ainsi que par l extrait de boeuf Le lactose incorpor dans cette g lose fournit une source d nergie aux microorganismes qui sont capables de le m taboliser et d clenchent alors un processus de fermentation Le bleu de bromothymol est utilis comme indicateur de pH pour diff rencier les fermentants des non fermentants du lactose Les microorganismes qui fermentent le lactose provoquent une diminution du pH et font passer la couleur du milieu de vert jaune La cystine permet la croissance de coliformes de colonie naine Les sources d lectrolyte sont limit es afin de r duire au maximum l essaimage des Proteus spp Le nombre de colonies pr sentes sur la CLED Agar est directement proportionnel au nombre de bact ries par mL contenues dans l chantillon d urine La CLED Agar est incluse sur toutes les lames immerg es appartenant la gamme BBL UROTUBE en tant que milieu 1 Le second milieu est une MacConkey Agar Il est seulement l g rement s lectif car la concentration de sels biliaires qui inhibe les microorganismes Gram positif est faible par compa
3. s pour effectuer des tests de sensibilit l aide de la m thode de diffusion sur disque Bien qu il soit possible de proc der certains tests diagnostiques directement sur les milieux il est n cessaire d effectuer des tests biochimiques et le cas ch ant immunologiques portant sur des cultures pures pour aboutir une identification compl te E coli et les groupes Proteus Morganella Providencia constituent des exceptions puisqu il est possible de les identifier sur le milieu 3 BGLU Agar de BBL UROTUBE E coli si les tests compl mentaires recommand s DA 212115 02 9 indole TDA ont t r alis s De m me Pseudomonas aeruginosa peut tre identifi e directement sur le milieu 3 Cetrimide Agar de BBL UROTUBE si des colonies fluorescentes verd tres produisant une r action positive l oxydase y sont observ es La mise en place d une th rapeutique adapt e n cessite parfois l ex cution de tests de sensibilit sur les microorganismes isol s Tout d veloppement de bact rie dans le milieu 3 PDM Medium avec trim thoprime sulfam thoxazole de BBL UROTUBE SXT doit tre interpr t e comme une r sistance des microorganismes cet agent antimicrobien SXT REFERENCES 1 Gallien R 1988 Mikrobiologische Diagnostik in der rztlichen Praxis G Fischer Verlag Stuttgart 2 Ellner P D and M S Papachristos 1975 Detection of bacteriuria by dip slide Am J Clin Pathol 63 516 521 3 Guttmann D
4. 1967 Dip slide an aid to quantitative urine culture in general practice Br Med J 3 343 345 4 McAllister T A et al 1973 Assessment of plane dipslide quantitation of bacteriuria Nephron 11 111 122 5 Van Dorsten J P and E R Bannister 1986 Office diagnosis of asymptomatic bacteriuria in pregnant women Am J Obstet Gynecol 155 777 780 6 Sandys G H 1960 A new method of preventing swarming of Proteus sp with a description of a new medium suitable for use in routine laboratory practice J Med Lab Technol 17 224 233 7 Mackey J P and G H Sandys 1965 Laboratory diagnosis of infection of the urinary tract in general practice by means of a dip inoculum transport medium Br Med J 2 1286 1288 8 Farmer Ill J J 2003 Enterobacteriaceae introduction and identification In Murray P R E J Baron J H Jorgensen M A Pfaller and R H Yolken ed Manual of clinical microbiology 8th ed American Society for Microbiology Washington D C 9 Murray P R E J Baron J H Jorgensen M A Pfaller and R H Yolken ed 2003 Manual of clinical microbiology 8th ed American Society for Microbiology Washington D C 10 King E O M K Ward and E E Raney 1954 Two simple media for the demonstration of pyocyanin and fluorescein J Lab Clin Med 44 301 11 MacFaddin J F 1985 Media for the isolation cultivation maintenance of medical bacteria Volume 1 Williams and Wilkins Baltimore Lond
5. disponibilit de r actifs voir Mat riaux non fournis METHODE Mat riaux fournis BBL UROTUBE 2s BBL UROTUBE BBL UROTUBE M BBL UROTUBE E BBL UROTUBE E coli ou BBL UROTUBE SXT Produits contr l s microbiologiquement Mat riaux non fournis Milieux de culture auxiliaires r actifs et mat riel de laboratoire requis Pour les tests d indole et de TDA sur le milieu 3 du BBL UROTUBE E coli Indole Dropper Reagent n r f 261185 ou Indole DMACA Dropper Reagent n r f 261187 Ferric Chloride Dropper Reagent n r f 261190 Pour les tests d oxydase sur le milieu 3 du BBL UROTUBE Oxidase Dropper Reagent n r f 261181 Types d chantillons Ces produits conviennent l isolement et l num ration de bact ries et de champignons partir d chantillons d urine provenant du jet urinaire principal ou d un cath ter ou pr lev e lors d une ponction v sicale sus pubienne Consulter CARACTERISTIQUES DE PERFORMANCES ET LIMITES DE LA PROCEDURE Pr l vement et pr paration des chantillons Respecter les techniques d asepsie lors du pr l vement des chantillons Utiliser les m thodes standard de pr l vement 1 Les chantillons d urine doivent tre frais ou ne pas tre g s de plus de 2 h Ou alors les chantillons d urine peuvent tre conserv s au r frig rateur 24 h au maximum afin d emp cher une croissance excessive des agents infectieux ou des contaminants avant l ensemencement Mod
6. du produit en cours d utilisation voir PRINCIPES ET EXPLICATION DE LA METHODE En plus des milieux 1 et 2 mentionn s pr c demment le BBL UROTUBE contient une Cetrimide Agar En plus des milieux 1 et 2 mentionn s pr c demment le BBL UROTUBE M contient une Malt Agar Digestion peptique de g latine 16 0g Glyc rol 8 0g Cas ine hydrolys e 10 0 Bromure de c tyltrim tylammonium 0 3 Sulfate de potassium 10 0 G lose 13 0 Chlorure de magn sium 1 4 pH 7 1 0 2 Extrait de malt 30 0 g G lose 18 0g Acide lactique 6 3 pH 4 0 0 4 En plus des milieux 1 et 2 mentionn s pr c demment le BBL UROTUBE E contient une Enterococcus Agar En plus des milieux 1 et 2 mentionn s pr c demment le BBL UROTUBE E coli contient une Beta Glucuronidase BGLU Agar Digestion peptique de cas ine 20 0 g Kanamycine 0 02 g Extrait de levure 5 0 Polymyxine B 0 002 Chlorure de sodium 5 0 Acide nalidixique 0 0075 Citrate 1 5 N omycine 0 002 Azide de sodium 0 15 G lose 15 0 Esculine 1 0 pH 7 1 0 2 Citrate d ammonium ferrique 0 5 Peptone 10 0 g Chlorure de sodium 5 0 g Nitroph nyl R glucuronide 0 1 G lose 15 0 Tryptophane 0 3 pH 7 2x0 2 En plus des milieux 1 et 2 mentionn s pr c demment le BBL UROTUBE SXT contient un milieu d pourvu d antagonistes PDM Medium avec du trim thoprim
7. 4 MODE D EMPLOI MILIEUX SUR LAMES C 4 RIJ IMMERGEES PRETS A L EMPLOI DA 212115 02 Rev F vr 2004 BD BBL UROTUBE 2s BBL UROTUBE BBL UROTUBE M e BBL UROTUBE E BBL UROTUBE E coli e BBL UROTUBE SXT APPLICATION Les produits BBL UROTUBE sont des lames immerg es utilis es pour l isolement et la d termination du compte de colonies de microorganismes isol s partir d chantillons d urine Les surfaces des lames immerg es sont recouvertes avec deux ou trois milieux de culture diff rents Tous les produits BBL UROTUBE contiennent une CLED Agar pour l num ration compl te des bact ries et ou des levures et une MacConkey Agar pour la d tection de bact ries Gram n gatif p ex Enterobacteriaceae Le troisi me milieu s il est disponible d pend du produit correspondant PRINCIPES ET EXPLICATION DE LA METHODE M thode microbiologique De nos jours l utilisation de lames immerg es en tant que technique de d pistage pour l num ration et l isolement de microorganismes partir d chantillons d urine de routine est courante La lame est immerg e dans un chantillon d urine frais et correctement pr lev et incub e puis le nombre de colonies observ es sur la surface de la CLED Agar est compar une photographie de r f rence La CLED Agar a t labor e par Sandys en 1960 afin d emp cher l essaimage de Proteus par la r duction du taux d lectrolytes dans le milieu de culture La pr paration a t
8. arron colonies incolores milieu jaune vert vert colonies colonies de petites jaunes milieu couleur p le colonies jaune blanch tres milieu bleu vert milieu jaun tre bleu vert colonies incolores beiges milieu orange marron colonies de couleur p le bleu vert avec ou sans fluorescence colonies incolores colonies incolores milieu jaune vert vert colonies colonies de petites jaunes milieu couleur p le colonies jaune blanch tres milieu jaun tre bleu vert colonies de couleur p le bleu vert avec ou sans fluorescence Proteus Enterococcus Pseudomonas Candida mirabilis faecalis aeruginosa albicans ATCC 12453 ATCC 29212 ATCC 27853 ATCC 10231 colonies incolores beiges milieu orange marron colonies incolores milieu jaune colonies colonies de petites jaunes milieu couleur p le colonies jaune blanch tres 5 vert vert milieu bleu milieu jaun tre ver bleu vert en 2 rose colonies colonies roses milieu incolores le rouge rose beiges milieu bleu vert avec orange marron ou sans fluorescence Milieu 3 incolore 4 l g rement ambr aucune croissance ou traces de croissance faible croissance croissance bonne importante Effectuer ces tests compl mentaires avec la croissance issue du milieu 3 Pour la
9. bact riologie pour traitement ult rieur Noter que les tubes ensemenc s doivent tre achemin s jusqu au laboratoire dans un d lai de 24 h Ne pas exposer les lames des temp ratures lev es ni les congeler lors du transport Figure 4 Figure 5 Figure 6 R sultats et interpr tation Apr s l incubation retirer la lame du tube afin de lire les r sultats Pour une estimation quantitative du nombre de colonies viables comparer la croissance obtenue sur la CLED agar avec les photographies de r f rence fournies ci dessous utiliser un clairage suffisant lors de l interpr tation Fig 6 Une croissance agglom r e due un nombre de colonies viables sup rieur 10 mL peut tre difficile reconna tre dans la mesure o elle peut recouvrir uniform ment toute la surface de la g lose Dans ce cas il peut tre utile d effleurer la surface avec une anse ou un couvillon L apparition d une croissance sur MacConkey Agar milieu 2 indique la pr sence de b tonnets Gram n gatif Toute apparition de croissance sur le milieu 3 s il est disponible indique la pr sence des groupes de microorganismes correspondants en fonction du milieu et du type de lame utilis s Une description d taill e de la croissance obtenue dans le milieu est fournie ci dessous Ne pas essayer de d terminer le nombre de microorganismes viables qui se d veloppent sur les faces 2 et 3 car les agents s lectifs contenus dans ces milieux sont susce
10. de temp rature Les lames peuvent tre ensemenc es jusqu la date de p remption indiqu e voir l tiquette de l emballage et incub es pendant les dur es recommand es Les lames non ouvertes provenant de boites d j entam es peuvent tre utilis es jusqu la date de p remption indiqu e dans la mesure o elles sont conserv es dans un lieu propre entre 15 et 20 C Une fois ouvertes les lames doivent tre utilis es imm diatement CONTROLE DE QUALITE PAR L UTILISATEUR Pr parer des suspensions des souches de test mentionn es ci dessous dans une solution saline physiologique jusqu obtenir une turbidit quivalente un standard McFarland 0 5 environ 5 x 10 UFC mL Diluer les suspensions jusqu obtention d une valeur d UFC comprise entre 10 et 10 par mL Immerger des chantillons de lames dans cette dilution laisser s couler l exc dent de suspension et replacer les lames dans leurs tubes Incuber entre 35 et 37 C pendant 18 24 h Examiner comme indiqu Les r sultats attendus sont pr sent s dans le tableau ci dessous Proteus Enterococcus Pseudomonas Candida mirabilis faecalis aeruginosa albicans milieu jaune jaune blanch tres vert vert bleu vert e Milieu 2 rose colonies colonies colonies de roses milieu lincolores couleur p le rouge rose beiges milieu bleu vert avec orange marron ou sans fluorescence e Milieu 3 incolore colonies l
11. e op ratoire du test 1 Examiner les surfaces de la g lose sans ouvrir le tube Ne pas utiliser de lames immerg es pr sentant des signes de dess chement de contamination ou d autres signes de d t rioration 2 Etiqueter le tube avec le nom du patient le num ro de l chantillon et la date de l ensemencement 3 D visser le bouchon et retirer la lame du tube plastique en prenant soin de ne pas toucher aux surfaces de la g lose Fig 1 Ne pas pr lever d chantillons d urine partir du tube BBL UROTUBE 4 Plonger bri vement la lame trois reprises dans l urine en immergeant compl tement les surfaces de la g lose Fig 2 Veiller ne pas laisser la lame plus de 10 sec dans le liquide car les composants du milieu risquent de se diluer et ou le gel risque de se d solidariser de son support plastique Si la lame ne peut pas tre immerg e car le volume d urine est insuffisant celle ci peut tre vers e d licatement sur les surfaces de la g lose 5 Maintenir le bout de la lame contre le rebord interne du tube afin de permettre l exc dent d urine de s goutter Fig 3 Il est possible d liminer les derni res gouttes pr sentes sur l extr mit de la lame avec un mouchoir en papier Fig 4 DA 212115 02 6 6 Replacer d licatement la lame l int rieur de son tube en plastique et bien le reboucher 7 Incuber le tube pendant 18 24 h entre 35 et 37 C Fig 5 ou le transmettre un laboratoire de
12. e sulfam thoxazole SXT Milieu PDM 32 3 g Trim toprime 0 003 g Sulfam thoxazole 0 04 pH 7 3 0 3 Les formules peuvent tre ajust es et ou compl ment es en fonction des crit res de performances impos s PRECAUTIONS A usage professionnel uniquement Ne pas utiliser de lames pr sentant des signes de contamination microbienne d coloration dessiccation ou fissure ou d autres signes de d t rioration DA 212115 02 ECT Respecter les techniques d asepsie et les mesures de protection contre les risques biologiques tout au long de la proc dure Porter des gants de protection lors du pr l vement et de la manipulation des chantillons et des lames positives contenant des agents infectieux Consulter le document MODE D EMPLOI GENERAL pour plus d informations sur les proc dures de manipulation aseptique les risques biologiques et l limination des produits usag s Lors de l utilisation de ces produits en tant que milieu de transport entre un cabinet m dical et un laboratoire de diagnostic respecter la r glementation locale en vigueur concernant l exp dition d chantillons infectieux STOCKAGE ET DUREE DE CONSERVATION D s r ception conserver les produits BBL UROTUBE dans l obscurit entre 15 et 20 C dans leur emballage d origine jusqu au moment de leur utilisation Ne pas les congeler les surchauffer les laisser se dess cher ni les soumettre des variations
13. fi es pr c demment des d lais d acheminement trop longs avant le traitement des lames ensemenc es ou leur exposition des temp ratures extr mes sont susceptibles d engendrer un diagnostic erron voire m me de rendre impossible tout diagnostic Le diagnostic le plus exact en ce qui concerne les infections des voies urinaires est obtenu partir d urine pr lev e par ponction v sicale car les microorganismes pr sents dans la flore ur trale normale peuvent contaminer les chantillons pr lev s selon d autres techniques Les bact ries exigeantes comme les mycoplasmes les chlamydiae Neisseria gonorrhoeae les mycobact ries ou Gardnerella vaginalis ne se d veloppent pas dans les milieux pr sents sur ces types de lames immerg es Si ces microorganismes sont pr sum s tre impliqu s dans un cas d infection des voies urinaires il convient d appliquer les techniques appropri es afin de les mettre en vidence Certaines souches de streptocoques en particulier celles du groupe Streptococcus agalactiae groupe B ne se d veloppent pas suffisamment dans le milieu 1 CLED Agar Par cons quent lorsque ces souches sont pr sum es tre impliqu es dans un cas d infection des voies urinaires il est recommand d effectuer une culture de l urine dans une boite de P tri contenant une g lose au sang p ex la BD Columbia Agar with 5 Sheep Blood Les milieux d pos s sur les lames immerg es ne doivent pas tre utilis
14. g reme jaun tres nt ambr bleu vert Proteus Enterococcus Pseudomonas Candida mirabilis faecalis aeruginosa albicans DA 212115 02 4 e Milieu 2 colonies roses milieu rouge rose incolore l g reme nt ambr BBL UROTUBE E e Milieu 1 jaun tre colonies e jaune vert jaunes milieu BBL UROTUBE E coli e Milieu 3 colonies roses milieu rouge rose Couleur ambr e claire colonies roses milieu rouge rose incolore milieu et l g reme colonies nt ambr jaunes BBL UROTUBE 2S l Produit et Couleur Escherichia milieu non coli ensemenc ATCC 25922 colonies roses milieu rouge rose BBL UROTUBE SXT e Milieu 1 jaun tre colonies jaune vert jaunes milieu DA 212115 02 vert vert milieu bleu vert milieu jaun tre bleu vert colonies de couleur p le bleu vert avec ou sans fluorescence colonies incolores beiges milieu orange marron colonies blanch tres colonies jaunes milieu jaune colonies incolores milieu jaune vert vert colonies de petites couleur p le colonies bleu vert blanch tres milieu bleu vert milieu jaun tre bleu vert colonies de couleur p le bleu vert avec ou sans fluorescence colonies de couleur marron noir milieu marron noir colonies incolores beiges milieu orange m
15. latine et de cas ine fournit les nutriments n cessaires Les sels de potassium et de magn sium stimulent la formation de pigment de P aeruginosa Le glyc rol constitue une source d nergie et de carbone Le bromure de c tyltrim tylammonium c trimide est un d tergent qui inhibe s lectivement la plupart des b tonnets Gram n gatif autres que P aeruginosa En plus des milieux 1 et 2 mentionn s ci dessus le BBL UROTUBE M contient une Malt Agar milieu partiellement s lectif pour l isolement de levures comme Candida albicans L extrait de malt et l acide lactique apportent les nutriments n cessaires et maintiennent le pH un niveau faible qui fournit la s lectivit requise pour inhiber de nombreuses esp ces de bact ries En plus des milieux 1 et 2 mentionn s ci dessus le BBL UROTUBE E contient une Enterococcus Agar milieu diff rentiel s lectif pour les Enterococcus spp Dans la Enterococcus Agar la cas ine et l extrait de levure fournissent les l ments nutritifs Le chlorure de sodium maintient la stabilit osmotique La combinaison de citrate d azide de kanamycine de polymyxine B d acide nalidixique et de n omycine inhibe la plupart des bact ries autres que les Enterococcus spp L esculine est un substrat pour la b ta glucosidase pr sente de mani re caract ristique chez les Enterococcus spp L un des produits de l hydrolyse enzymatique l escul tine r agit aux ions ferriques en produisant un pr cipit br
16. nterococcus Agar indiquent la pr sence d Enterococcus spp notamment Enterococcus faecalis Le d veloppement de colonies incolores grises est susceptible d indiquer la pr sence de streptocoques toutefois il convient de confirmer cette pr somption BBL UROTUBE E coli Si le milieu BGLU vire au jaune cela indique qu Escherichia coli ou d autres bact ries positives la b ta glucuronidase sont pr sentes Effectuer un test de l indole partir de la croissance jaune issue de ce milieu Une r action positive l indole DA 212115 02 8 indique la pr sence d E coli Si ce milieu pr sente une croissance incolore beige effectuer un test de TDA Un test de TDA positif indique la pr sence de microorganismes appartenant au groupe Proteus Morganella Providencia Pour la disponibilit de r actifs l indole et au TDA voir Mat riaux non fournis Pour l ex cution de ces tests suppl mentaires suivre le mode d emploi fourni avec les r actifs BBL UROTUBE SXT Ce milieu est utilis afin de d terminer la sensibilit ou la r sistance des bact ries isol es au trim thoprime sulfam thoxazole SXT L absence de croissance dans ce milieu signale une sensibilit tandis qu une croissance importante est le signe d une r sistance au SXT L obtention d une croissance plus r duite dans ce milieu par comparaison celle obtenue sur la CLED Agar milieu 1 peut r v ler la pr sence d une culture mixte contenant au moins un micr
17. on 12 Chapin K C and T L Lauderdale 2003 Reagents stains an media bacteriology In Murray P R E J Baron J H Jorgensen M A Pfaller and R H Yolken ed Manual of clinical microbiology 8th ed American Society for Microbiology Washington D C 13 Thomson R B jr and J M Miller 2003 Specimen collection transport and processing bacteriology In Murray P R E J Baron J H Jorgensen M A Pfaller and R H Yolken ed Manual of clinical microbiology 8th ed American Society for Microbiology Washington D C DA 212115 02 10 CONDITIONNEMENT N r f Nom du produit Taille de l emballage 212115 BBL UROTUBE E coli 10 lames 272805 BBL UROTUBE E 10 lames 273007 BBL UROTUBE 10 lames 273357 BBL UROTUBE 50 lames 273008 BBL UROTUBE SXTBBL 10 lames UROTUBE SXT 273171 BBL UROTUBE M 10 lames 273249 BBL UROTUBE 2s 10 lames INFORMATIONS COMPLEMENTAIRES Pour plus d informations contacter le repr sentant local de BD BD Diagnostic Systems Tullastrasse 8 12 D 69126 Heidelberg Germany Phone 49 62 21 30 50 Fax 49 62 21 30 52 16 Reception Germany Qeurope bd com BD Diagnostic Systems Europe Becton Dickinson France SA 11 rue Aristide Berg s 38800 Le Pont de Claix France Tel 33 476 68 3636 Fax 33 476 68 3292 http www bd com BD BD logo and BBL are trademarks of Becton Dickinson and Company Urotube is a trademark of Becton Dickinson GmbH ATCC is a trademark of the American T
18. oorganisme r sistant au SXT Apr s utilisation autoclaver ou incin rer tous les tubes usag s et tout autre mat riel contamin avant de les liminer Pour plus d informations voir le document MODE D EMPLOI GENERAL CARACTERISTIQUES DE PERFORMANCES ET LIMITES DE LA PROCEDURE BBL UROTUBE 2s BBL UROTUBE BBL UROTUBE M BBL UROTUBE E BBL UROTUBE E coli et BBL UROTUBE SXT conviennent pour effectuer le diagnostic d infections des voies urinaires courantes partir d chantillons d urine Il a t tabli que l application de la m thode de la lame immerg e avec des g loses CLED et MacConkey constituait un moyen ais et efficace pour d nombrer les bact ries courantes p ex Enterobacteriaceae les autres b tonnets Gram n gatif tels que Pseudomonas les ent rocoques les staphylocoques et bien d autres pr sents dans l urine L utilisation d un troisi me milieu si disponible en plus de ces milieux standard se r v le utile lorsque la pr sence de groupes sp ciaux de microorganismes susceptibles d agir en tant qu agents infectieux est pr sum e Les chantillons d urine utilis s avec ces syst mes et milieux ou d autres doivent imp rativement avoir t pr lev s selon les conditions d asepsie tre frais g s de 2h au maximum ou avoir t conserv s en r frig ration 24 h au maximum Des conditions inappropri es de pr l vement d urine la conservation d chantillons au del des limites sp ci
19. ptibles d affecter la croissance Une fois un repiquage sur un milieu appropri effectu toute croissance issue de l un des milieux contenus sur les lames peut tre utilis e pour ex cuter des tests biochimiques ou de sensibilit suppl mentaires e CLED Agar Milieu 1 sur tous les produits BBL UROTUBE La CLED Agar permet le d veloppement des bact ries Gram positif et Gram n gatif et des levures Une d coloration jaune du milieu indique une fermentation du lactose tandis qu un milieu jaune vert et vert signale la pr sence de non fermentants du lactose Les directives suivantes ainsi que le guide d interpr tation photographies pr sent la fin de ce document peuvent tre utilis s pour l interpr tation du nombre des microorganismes obtenus sur CLED Agar DA 212115 02 7 Compte de micro organismes viables Inf rieur 10 000 bact ries par mL 10 000 100 000 bact ries par mL Sup rieur 100 000 bact ries par mL Interpr tation clinique Urine provenant du jet urinaire principal Contamination Des d nombrements faibles peuvent tre significatifs chez les patients pr trait s ou chez ceux atteints d infections chroniques Urine obtenue par cath t risation ou par ponction v sicale Dans de tels cas un nombre de bact ries inf rieur 10 000 par mL peut d j indiquer une infection Urine provenant du jet urinaire principal Incertain Il est recommand de r p ter le te
20. raison avec d autres milieux d talement ent riques Ce milieu est recommand pour les chantillons cliniques susceptibles de contenir un m lange de flores microbiennes tels que l urine car il autorise un groupement pr liminaire des bact ries ent riques et de nombreuses autres bact ries Gram n gatif dans les fermentants et non fermentants du lactose Dans la MacConkey Agar les peptones apportent les nutriments n cessaires Le cristal violet inhibe les bact ries Gram positif en particulier les ent rocoques et les staphylocoques Les microorganismes ent riques sont diff renci s par l association du lactose et de l indicateur de pH au rouge neutre Les colonies sont incolores ou de couleur rose rouge selon la capacit de l isolat fermenter ou non l hydrate de carbone La MacConkey Agar est incluse sur tous les produits de type lame immerg e BBL UROTUBE en tant que milieu 2 DA 212115 02 1 Le BBL UROTUBE 2S comporte deux faces et contient uniquement des g loses CLED et MacConkey Un troisi me milieu est inclus sur les surfaces de toutes les lames immerg es trois faces afin de d tecter la pr sence de groupes bact riens et de levures caract ristiques Le type de milieu d pend du produit en cours d utilisation En plus des milieux 1 et 2 mentionn s ci dessus le BBL UROTUBE contient une Cetrimide Agar milieu couramment utilis pour l isolement s lectif de Pseudomonas aeruginosa La peptone de g
21. rovidencia spp et Morganella morganii En plus des milieux 1 et 2 mentionn s pr c demment le BBL UROTUBE SXT contient un milieu de test de sensibilit PDM Medium d pourvu d antagonistes et contenant du trim thoprime sulfam thoxazole SXT pour la d termination de la r sistance ou de la sensibilit vis vis du SXT La croissance d une bact rie quelconque dans ce milieu indique une r sistance au SXT Apr s l ensemencement ou apr s l ensemencement et l incubation les lames immerg es peuvent galement tre utilis es comme milieu de transport pour acheminer les chantillons du cabinet m dical aux laboratoires d analyse Il est possible d utiliser la croissance issue des milieux pr sents sur les lames immerg es pour effectuer des tests d identification et de sensibilit sur les isolats REACTIFS Formules par litre d eau purifi e Les milieux 1 et 2 sont communs toutes les lames immerg es BBL UROTUBE DA 212115 02 2 Milieu 1 CLED Agar Milieu 2 MacConkey Agar Digestion peptique de cas ine 4 0 g Digestion peptique de cas ine 17 0 g Peptones s lectionn es 4 0 Peptone de viande 3 0 Extrait de viande 3 0 Lactose 10 0 Lactose 10 0 Chlorure de sodium 5 0 Cystine 0 128 M lange de sels biliaires 1 5 Bleu de bromothymol 0 02 Rouge neutre 0 03 G lose 15 0 Cristal violet 0 001 pH 7 3 0 2 G lose 13 5 pH 7 1 0 2 Milieu 3 Le type de milieu 3 s il est disponible d pend
22. st car de telles quantit s de bact ries surviennent dans les cas d infections chroniques des voies urinaires mais peuvent galement tre pr sentes en tant que contaminants dans l urine provenant du jet urinaire principal Des populations de bact ries de cet ordre peuvent tre significatives chez les patients pr trait s ou chez ceux atteints d infections chroniques Urine obtenue par cath t risation ou par ponction v sicale Dans de tels cas un nombre de bact ries inf rieur 10 000 par mL peut d j indiquer une infection Ces quantit s lev es r v lent la pr sence d une infection quelle que soit la source de l chantillon d urine test y compris l urine provenant du jet urinaire principal La pr sence d une forte concentration de leucocytes dans le culot urinaire peut alors confirmer ce diagnostic Chez la femme un nombre de colonies bact riennes lev peut survenir suite une contamination externe leucorrh e vaginite ce diagnostic est confirm en pr sence d une augmentation du nombre de cellules pith liales pavimenteuses sans aucun accroissement du nombre de leucocytes dans le culot urinaire MacConkey Agar Milieu 2 sur tous les produits BBL UROTUBE Tous les Enterobacteriaceae et certains non fermentants p ex Pseudomonas aeruginosa se d veloppent dans ce milieu Une d coloration de couleur rose rouge indique une fermentation du lactose p ex avec E coli tandis que des colonies incolores
23. un noir dans le milieu entourant les colonies d Enterococcus En plus des milieux 1 et 2 mentionn s ci dessus le BBL UROTUBE E coli contient de la Beta Glucuronidase BGLU Agar milieu diff rentiel pour la d tection sp cifique des E coli et Proteus spp Il contient de la nitroph nyl R glucuronide substrat chromog ne permettant de d tecter l activit de la b ta glucuronidase typiquement pr sente chez Escherichia coli alors que de nombreuses autres bact ries dont Proteus Providencia et Morganella sont n gatives La d gradation du substrat provoque une accumulation de nitroph nol jaune dans le milieu et dans les colonies tandis que les colonies n gatives la glucuronidase sont incolores ou grises sur un milieu incolore La croissance jaune issue de ce milieu peut tre soumise au test de l indole qui s il est positif confirme l identification d E coli La formation d indole sur ce milieu est favoris e par l ajout du pr curseur de l indole le tryptophane De plus cet aminoacide est le substrat pour l enzyme tryptophane d saminase TDA pr sent de mani re caract ristique chez Proteus Providencia et Morganella spp Cet enzyme peut tre facilement d tect en effectuant un test de TDA avec du chlorure ferrique Pour confirmer l identification il est possible de r aliser un test d indole partir d chantillons issus de la croissance incolore qui produit un r sultat positif en pr sence de Proteus vulgaris P
24. ype Culture Collection 2003 Becton Dickinson and Company DA 212115 02 11 GUIDE D INTERPR TATION CLED Agar Milieu 1 uniquement espe AL S e T9 LA e LP e ri Ld A f e X Are vip dae E NE do P 1 000 10 000 100 000 1 000 000 2105 mL 210 mL 2105 mL 2109 mL Contamination Doute Infection 1 000 10 000 gt 10 000 100 000 100 000 1 000 000 2105 105 CFU mL 210 10 CFU mL 710 10 CFU mL DA 212115 02 12
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