BBL? Mycoslide? 4373157
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1. l num ration des bact ries partir d chantillons d urine Il peut galement tre utilis pour l isolement de bact ries partir d autres chantillons si ces bact ries sont mod r ment exigeantes Sur la BBL Mycoslide le milieu est principalement utilis pour d terminer la flore bact rienne associ e La BBL Mycoslide est utilis e pour la d tection l isolement et le d nombrement de champignons partir de divers sites anatomiques et types d chantillons Elle peut galement tre utilis e comme milieu de transport pour acheminer les chantillons partir du cabinet m dical jusqu au laboratoires d analyse DA 273157 00 1 REACTIFS Formules par litre d eau purifi e BBL Mycoslide Milieu 1 Malt Agar Milieu 2 Malt Agar avec Milieu 3 CLED Agar cycloheximide Extrait de malt 30 0 g Extrait de malt 30 0 g Peptone de g latine 4 0g 4 0 pH 4 1 0 2 3 0 pH 4 1 0 2 10 0 0 128 bromothymol 5 0 Ajust es et ou compl ment es en fonction des crit res de performances impos s PRECAUTIONS usage professionnel uniquement Ne pas utiliser de lames pr sentant des signes de contamination microbienne d coloration dessiccation ou fissure ou d autres signes de d t rioration Respecter les techniques d asepsie et les mesures de protection contre les risques biologiques tout au long de la proc dure Consulter le document MODE D EMPLOI GENERAL pour plus d informations sur les pr2. nes Pour une d termination quantitative comparer la croissance effective obtenue sur la lame avec les photographies de r f rence fournies dans le Guide d interpr tation situ la fin de ce document En pr sence d une croissance importante et d un nombre lev de colonies sup rieur 10 les surfaces de la g lose peuvent appara tre compl tement recouvertes par un tapis de croissance agglom r e Se reporter au tableau et aux r f rences pour interpr ter la signification clinique des d nombrements de pathog nes dans les chantillons issus de divers sites anatomiques Type d chantillon plencing plan clinique ou d un cath ter pubienne de vue clinique Lavages de gorge 10 10 107 10 107 10 Echantillons vaginaux Toute apparition de champignons est significative du point de vue clinique DA 273157 00 4 Note au bas de la table 1 Des d nombrements faibles peuvent tre significatifs chez les patients pr trait s ou chez ceux atteints 3 infections chroniques R valuer si possible La th rapeutique mise en place pour les patients dont les selles pr sentent des d nombrements importants de levures doit tre soigneusement valu e Il n est pas rare d obtenir des populations de levures importantes dans les selles de patients pr trait s avec des antimicrobiens antibact riens En principe le compte des levures revient un niveau normal d s la th rapie antimigrobienne achev e
3. croissance des bact ries observ e dans les milieux de culture fongique milieux 1 et 2 de cette lame immerg e n est pas totalement inhib e En cas de doute il convient d effectuer une coloration de Gram ou au bleu de m thyl ne sur les colonies suspectes La plupart des esp ces bact riennes moins exigeantes se d veloppent dans le milieu 3 CLED Agar Toutefois ce milieu ne favorise pas la croissance de microorganismes tels que les Neisseria spp pathog nes Haemophilus spp et d autres Les streptocoques b ta h molytiques se d veloppent difficilement dans ce milieu Par cons quent une g lose au sang ou au chocolat doit tre inclue lorsqu une infection bact rienne li e ces microorganismes est pr sum e Sur la BBL Mycoslide la CLED Agar sert principalement d terminer la flore bact rienne associ e Pour tablir un diagnostic exact des infections bact riennes l utilisation d autres syst mes et milieux est recommand e Les syst mes BBL Urotube doivent tre utilis s pour diagnostiquer des infections bact riennes partir d chantillons d urine Le traitement des chantillons issus d autres sites anatomiques et destin s la d tection des infections bact riennes doit tre effectu dans des bo tes de P tri contenant des milieux adapt s la nature des chantillons Le nombre d esp ces susceptibles de se d velopper dans les milieux fournis avec cette lame immerg e est important et ne se limite pas c
4. suspension de la souche pr par e comme d crit ci dessus Ouvrir une BBL Mycoslide retirer le support de g lose le plonger bri vement l int rieur de la suspension de la souche de test et proc der conform ment aux m thodes d crites dans la rubrique Mode op ratoire du test Incuber pendant 2 5 jours 35 2 C Examiner les surfaces de la g lose comme d crit sous R sultats et interpr tation afin de rechercher une croissance ventuelle DA 273157 00 2 Milieu 1 Milieu 2 Milieu 3 Malt Agar Malt Agar avec CLED Agar cycloheximide ATCC 10231 ATCC 16404 compl te ATCC 25922 compl te compl te ATCC 27853 compl te compl te ATCC 29212 compl te compl te ATCC 25923 compl te compl te ambr e verd tre METHODE Mat riaux fournis BBL Mycoslide Produits contr l s microbiologiquement Mat riaux non fournis Milieux de culture auxiliaires r actifs et mat riel de laboratoire requis Types d chantillons La BBL Mycoslide convient pour l isolement et l num ration de champignons partir d chantillons d urine provenant du jet urinaire principal ou d un cath ter ou pr lev s lors d une ponction v sicale sus pubienne d expectorations de lavages de gorge de selles et de nombreux autres chantillons p ex couvillons vaginaux A ne pas utiliser pour d tecter des infections bact riennes Pr l vement et pr paration des chantillons Respecter les techniques d asepsie lors du pr l
5. vement des chantillons Utiliser les m thodes standard de pr l vement 1 L urine doit tre fra che ou ne pas tre g e de plus de 2 h Ou alors les chantillons d urine peuvent tre conserv s au r frig rateur 24 h au maximum afin d emp cher une croissance excessive des agents infectieux ou des contaminants avant l ensemencement Expectorations Ajouter une partie d expectorations fra ches spontan es ou provoqu es une partie d une solution de trypsine dilu e 0 25 et agiter pendant 45 min 37 C avec des billes de verre st riles Ou alors homog n iser l expectoration dans un Stomacher pendant 1 min Si la quantit d expectorations disponible est faible elle peut tre utilis e sans pr traitement Lavages de gorge Centrifuger le liquide pendant 10 min 2 000 x g Jeter la phase liquide placer le s diment dans 5 mL de solution de trypsine 0 25 ou dans du s rum physiologique et agiter avec des billes de verre st riles pendant 15 min 37 C Echantillons f caux frais ou conserv s en r frig ration depuis 48 h au maximum Homog n iser 1 g de mati re f cale dans 100 mL de solution de trypsine dilu e 0 25 contenant des billes de verre st riles pendant 15 min 37 C Ecouvillons Pr lever l chantillon p ex dans la gorge ou le vagin l aide d un couvillon et appliquer directement sans pr traitement comme d crit ci dessous Si un d lai est pr visible entre l insta
6. BD BD Diagnostic Systems Tullastrasse 8 12 D 69126 Heidelberg Germany Phone 49 62 21 30 50 Fax 49 62 21 30 52 16 Reception Germany europe bd com BD Diagnostic Systems Europe Becton Dickinson France SA 11 rue Aristide Berg s 38800 Le Pont de Claix France Tel 33 476 68 3636 Fax 33 476 68 3292 http www bd com BD BD logo and BBL are trademarks of Becton Dickinson and Company Urotube and Mycoslide are trademarks of Becton Dickinson GmbH ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection 2003 Becton Dickinson and Company GUIDE D INTERPRETATION Malt Agar milieu 1 Pour la d termination quantitative du d nombrement cellulaire voir la rubrique R sultats et interpr tation pour les d nombrements significatifs sur le plan clinique arte re PEN 3 iE A HER pire Er EX He Fe os 10 a DA 273157 00
7. Chez les patients immunocompromis m me une num ration faible peut r v ler une infection Milieu 2 Malt Agar avec cycloheximide Ce milieu permet d liminer les champignons filamenteux sensibles au cycloheximide p ex les moisissures comme l Aspergillus Certaines levures sont galement inhib es par cet additif La r sistance au cycloheximide est une caract ristique importante pour la diff renciation des champignons fr quence cycloheximide OOOO O e O eee infect s par le VIH OOOO UUU O JUMOrMONQI Rare Rare faible C C pseudotropicalis U___ Other speciesAutres esp ces Rare C krusei Relativement fr quent pathog ne connu C C parapsilosis Rare pathog ne connu D Candida Torulopsis glabrata Relativement fr quent pathog ne connu FU Cryptococcus neoformans Rare pathog ne important Aspergillus Penicillium et autres Aspergillus peut provoquer une champignons infection des voies respiratoires inf rieures ou d autres infections Ces champignons peuvent aussi tre pr sents en tant que contaminants Noter que la croissance ou l inhibition observ e dans ce milieu ne se limite pas aux esp ces r pertori es dans ce tableau Les microorganismes mentionn s sont fr quemment pr sents dans les chantillons cliniques Pour plus d informations consulter les documents cit s en r f rence Li Le milieu 3 CLED Agar est utilis pour la d termination quantitative du nom
8. M MODE D EMPLOI RJ B D MILIEUX SUR LAMES IMMERGEES PRETS A L EMPLOI DA 273157 00 Rev Juin 2003 BD BBL Mycoslide APPLICATION La BBL Mycoslide est une lame immerg e trois faces contenant des milieux destin s la d tection de champignons notamment des levures partir d chantillons d urine d expectorations de lavages de gorge de selles ainsi que divers autres chantillons pr lev s par couvillonnage PRINCIPES ET EXPLICATION DE LA METHODE M thode microbiologique Les champignons filamenteux et les levures sont des pathog nes courants responsables de nombreux types d infections locales et syst miques chez les individus immunocomp tents et immunocompromis L un des pathog nes fongiques les plus fr quents est Candida albicans Chez les patients immunocompromis il n est par rare que C albicans et C dubliniensis soient les agents responsables d infections localis es et syst miques Les trois principaux sites anatomiques impliqu s dans les cas d infections locales sont les voies respiratoires l appareil g nito urinaire et le tube digestif Une d termination quantitative des levures isol es partir de ces sites anatomiques est importante car si elles sont susceptibles d tre pr sentes en petites quantit s dans la flore normale leur population augmente de mani re significative en cas d infection La BBL Mycoslide est un support de g lose trois faces recouvert par deux milieux fongiques
9. bre de bact ries pr sentes dans l chantillon Ces chiffres peuvent tre importants car ils permettent d valuer la relation entre la croissance bact rienne et la croissance fongique notamment dans les selles Noter que des tests suppl mentaires tels que des proc dures biochimiques et ou microscopiques sont n cessaires pour obtenir une identification compl te des pathog nes isol s sur cette lame immerg e La plupart de ces m thodes sont uniquement applicables en laboratoire de diagnostic et ne peuvent pas tre r alis es dans un cabinet m dical standard Par cons quent toutes les lames immerg es pr sentant des r sultats nettement positifs ou ind termin s doivent tre transmises un laboratoire d analyse m me d ex cuter les tests mycologiques Apr s utilisation autoclaver ou incin rer tous les tubes usag s et tout autre mat riel contamin avant de les liminer Pour plus d informations voir le document MODE D EMPLOI GENERAL DA 273157 00 5 CARACTERISTIQUES DE PERFORMANCES ET LIMITES DE LA PROCEDURE La BBL Mycoslide est utilis e pour la d tection l isolement et l num ration de champignons notamment des levures partir d chantillons d urine d expectorations de lavages de gorge de selles et de nombreux autres Les milieux contenus sur cette lame immerg e sont des milieux standard couramment utilis s pour l isolement des groupes bact riens et fongiques correspondants 1 Quelquefois la
10. elles mentionn es dans la rubrique R sultats et interpr tation Seuls des laboratoires d analyse sont en mesure de garantir une identification exacte de nombreux microorganismes Par cons quent les lames doivent tre exp di es dans des structures de ce type d s l ensemencement ou apr s un ensemencement suivi d une p riode d incubation La BBL Mycoslide convient l isolement primaire et au d nombrement Pour r aliser des tests suppl mentaires en particulier si des cultures mixtes sont observ es dans les milieux de ce syst me repiquer dans des milieux d talement appropri s afin d obtenir des cultures pures indispensables l identification compl te et la r alisation de tests de sensibilit Les lames immerg es ne doivent pas tre utilis es pour effectuer des tests de sensibilit sur disque REFERENCES 1 Fromiling R A section editor 2003 Mycology In Murray P R E J Baron J H Jorgensen M Pfaller and R H Yolken ed Manual of clinical microbiology 8th ed American Society for Microbiology Washington D C 2 Halle E et al 2000 Genitalinfektionen Teil I und Il In Mauch H L ttiken R and S Gatermann eds MiQ Qualit tsstandards in der mikrobiologisch infektiologischen Diagnostik vol 10 and 11 Urban amp Fischer Munich Germany 3 Kist M et al 2000 Infektionen des Darmes In Mauch H L ttiken R and S Gatermann eds MiQ Qualita tsstandards in d
11. er mikrobiologisch infektiologischen Diagnostik vol 9 Urban amp Fischer Munich Germany 4 Podbielski A et al 2000 Infektionen des Mundes und der oberen Atemwege In Mauch H and R L ttiken eds MIQ Qualit tsstandards in der mikrobiologisch infektiologischen Diagnostik vol 13 Urban amp Fischer Munich Germany 5 Mauch H et al 2003 Infektionen der tiefen Atemwege Teil Il In Mauch H L ttiken R and S Gatermann eds MiQ Qualit tsstandards in der mikrobiologisch infektiologischen Diagnostik vol 8 Urban amp Fischer Munich Germany 6 Sutton D A 2003 Specimen collection transport and processing mycology In Murray P R E J Baron J H Jorgensen M Pfaller and R H Yolken ed Manual of clinical microbiology 8th ed American Society for Microbiology Washington D C 7 Hazen K C 1995 New and emerging yeast pathogens Clin Microbiol Rev 8 462 478 DA 273157 00 6 8 MacFaddin J D 1985 Media for isolation cultivation identification maintenance of medical bacteria vol 1 p 275 284 Williams amp Wilkins Baltimore MD 9 Larone D H 1995 Medically important fungi a guide to identification 3rd edition ASM Press Washington 10 Atlas R M 1993 Handbook of Microbiological media CRC Press Boca Raton FL CONDITIONNEMENT BBL Mycoslide N r f 273157 10 lames INFORMATIONS COMPLEMENTAIRES Pour plus d informations contacter le repr sentant local de
12. et par un troisi me milieu destin la d tection des bact ries ventuellement pr sentes au sein de l chantillon L int gralit du support de g lose est plong dans des chantillons liquides ou ensemenc par striation avec des chantillons pr lev s par couvillonnage Apr s l incubation les isolats peuvent tre d nombr s puis utilis s pour des tests de diff renciation et d identification suppl mentaires et pour r aliser des tests de sensibilit Le milieu 1 Malt agar permet la d tection de tous les types de champignons notamment les moisissures et les levures L extrait de malt contient toutes les substances nutritives n cessaires la croissance des champignons Le faible pH du milieu entra ne une inhibition partielle compl te des bact ries contaminantes mais est bien tol r par les champignons Ce milieu est utilis pour la d termination quantitative des pathog nes fongiques Le milieu 2 est une Malt Agar compl ment e en cycloheximide un inhibiteur des moisissures saprophytes et de certaines levures La plupart des champignons pathog nes notamment Candida albicans ne sont pas inhib s dans ce milieu Cependant Cryptococcus neoformans et certaines Candida spp autres que C albicans qui peuvent galement servir d agents infectieux sont inhib s par le cycloheximide Le milieu 3 est une CLED Cystine Lactose Electrolyte Deficient Agar milieu de culture diff rentiel servant l isolement et
13. lame l aide d un mouchoir en papier Replacer d licatement la lame l int rieur du tube en plastique et bien le reboucher 5 Incuber la lame pendant 48 h 30 2 C ou la transmettre apr s ensemencement un laboratoire sp cialis La croissance des champignons filamenteux n cessite parfois une incubation plus longue notamment en cas d infections des voies respiratoires inf rieures Ensemencement avec des chantillons sur couvillons Strier d licatement les trois milieux de culture de la lame avec l couvillon R sultats et interpr tation Apr s l incubation retirer d licatement la lame du tube afin de lire les r sultats Respecter les techniques d asepsie tout au long de la proc dure d inspection Le port de gants chirurgicaux pendant l inspection est recommand Ne pas toucher les surfaces de la g lose Milieu 1 Malt Agar Ce milieu permet de d terminer le nombre total de colonies pour tous les champignons Les champignons filamenteux produisent g n ralement des colonies pr sentant une surface rugueuse myc lium a rien Les colonies sont souvent pigment es noires grises bleu vert jaunes et autres Les diff rentes esp ces de levures produisent des colonies blanches cr mes d aspect brillant mat qui pr sentent g n ralement une surface lisse et dont l aspect s apparente aux colonies bact riennes Des tests suppl mentaires sont n cessaires pour une identification compl te des pathog
14. nt o le pr l vement est effectu et son ensemencement il faut placer l couvillon dans un milieu de transport appropri Mode op ratoire du test 1 Inspecter visuellement les surfaces de la g lose sans ouvrir le tube contenant la BBL Mycoslide Eliminer les lames pr sentant une contraction des milieux ou une contamination 2 Etiqueter le tube avec le nom du patient le num ro de l chantillon et la date de l ensemencement DA 273157 00 3 3 D visser le bouchon et retirer la lame du tube plastique en prenant soin de ne pas toucher les surfaces de la g lose Ensemencement avec des chantillons liquides p ex urine ou lavages de gorge 1 Plonger bri vement la lame trois reprises dans les chantillons liquides p ex urine ou expectorations pr trait es lavages de gorge etc pour que les couches de g lose soient compl tement ensemenc es par le liquide Veiller ne pas laisser la lame plus de 10 sec dans le liquide car les composants du milieu risquent de se diluer et ou le gel risque de se d solidariser de son support plastique 2 Si seul un petit volume d chantillon est disponible utiliser une pipette ou une seringue st rile pour le recueillir et rincer compl tement les trois milieux 3 Maintenir le bout de la lame contre le rebord interne du tube afin de permettre l exc dent de liquide de s goutter 4 Il est possible d liminer les derni res gouttes pr sentes sur l extr mit de la
15. oc dures de manipulation aseptique les risques biologiques et l limination des produits usag s Lors de l utilisation de BBL Mycoslide en tant que milieu de transport entre un cabinet m dical et un laboratoire de diagnostic respecter la r glementation locale en vigueur concernant lacheminement des chantillons infectieux STOCKAGE ET DUREE DE CONSERVATION D s r ception conserver les produits BBL Mycoslide dans l obscurit entre 15 et 20 C dans leur emballage d origine jusqu au moment de leur utilisation Ne pas les congeler les surchauffer les laisser se dess cher ni les soumettre des variations de temp rature Les lames peuvent tre ensemenc es jusqu la date de p remption indiqu e voir l tiquette de l emballage et incub es pendant les dur es recommand es Les lames non ouvertes provenant de bo tes d j entam es peuvent tre utilis es jusqu la date de p remption indiqu e dans la mesure o elles sont conserv es dans un lieu propre entre 15 et 20 C Une fois ouvertes les lames doivent tre utilis es imm diatement CONTROLE DE QUALITE PAR L UTILISATEUR Pr parer des suspensions des souches mentionn es ci dessous jusqu obtenir une turbidit quivalente un standard McFarland 0 5 Pour chaque microorganisme verser 20 25 mL de s rum physiologique l int rieur d un tube de diam tre suffisamment large pour accueillir un support de g lose BBL Mycoslide puis ajouter 1 mL de la
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