Utilisation du Coulter Counter
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1. VERIFIER QUE LES SEUILS SONT BIEN SITUES votre comptage tient compte de l ensemble de votre population cellulaire sans compter les d bris SINON RE AJUSTER LES SEUILS cf tableau plus bas 4 Garder les valeurs seuils pour votre population cellulaire puis proc der la m me fa on pour tous vos comptages 5 Lorsque vous avez termin Rincer l isoton Mettre l electrode dans eau permut e cf entretien 6 Eteindre l appareil 7 Vider le flacon de d chets 1 L op rateur peut bouger les seuils en cours d analyse et de comptage en pressant les touches ou v Les r sultats de l analyse sont alors invalides et il faut refaire une analyse en fonction des nouveaux seuils 2 A partir du menu de comptage A2 lorsque le syst me compte et affiche le message COUNTING presser les touches or v L cran A6 apparait A6 ANALYSIS Tu 420 29 3um n BEEE 50 ADJUSTING THRESHOLD TI 13 0 9 2 um Le seuil bas est 13 0 de la pleine chelle des impulsions Les 13 0 repr sentent un diam tre de 9 2 um Tu 42 0 29 3 um Le seuil haut est 42 0 de la pleine chelle des impulsions Mod le ZI double seuil Les 42 0 repr sentent une taille de 29 3 um 3 Le seuil est ajust l aide des touches et v Pour le ZI double seuils commuter d un seuil l autre en utilisant le curseur lt et gt le seuil s lectionn apparait en surbrillance La ligne horizontale indiquant sa2. 1X semaine 1 Presser la touche FUNCTIONS pour acc der au menu suivant F1 INSTRUMENT FUNCTIONS 2 Utiliser les touches gt et lt pour faire apparaitre et s lectionner fonction FILL SYSTEM 3 Presser la touche START pour ex cuter AUTRES FUNCTIONS DU MENU Prime Aperture Remplissage du tube orifice A utiliser chaque fois qu il faut remplir uniquement le tube orifice avec de l lectrolyte Le reste du syst me doit tre rempli de diluant Fill System Remplissage du syst me enti rement avec du diluant A utiliser chaque installation ou lorsque le syst me hydraulique a t enti rement vid pour un changement d lectrolyte TI y a une purge des bulles d air Drain Aperture Vidange le syst me Vide et d samorce enti rement le syst me A utiliser lors d un changement de diluant Le tuyau d alimentation en lectrolyte reli au flacon de diluant doit tre plac sur le flacon de d chets pour cette op ration Ne pas oublier de le replacer dans sa position initiale apr s l op ration Flush Aperture Applique un contre courant au niveau de l orifice pour chasser les particules et les bulles d air de l orifice Vent Mise la pression atmosph rique de la partie interne du tube orifice TI y a une mise l atmosph re automatique lors des proc dures de vidange de l orifice ou du syst me hydraulique User Testing Ces fonctions sont utilis es pour tester le syst me e Softwar
3. position bouge au fur et mesure du changement de la valeur Une fois que les seuils sont plac s la valeur choisie presser la touche START Le comptage red marre en fonction des nouveaux r glages Page 4 sur 9 UMR 7052 CC 19 B20A Utilisation Coulter Type cellulaire Unit Lower size TI Upper size Tu Count mode hMSC um 8 18 Above TI C3H10T1 2 7 18 Above TI MSC rat 8 5 21 Above TI A faire 1X mois Chaque tube orifice poss de une constante de calibration unique qui est fonction de ses caract ristiques Il est recommand de calibrer les tubes orifice au moins une fois par mois afin de tenir compte de certaines variations du syst me La calibration doit tre r alis e partir d un talon de taille parfaitement connue comme les Latex Coulter pour les applications non biologiques ou un talon de volume moyen cellulaire parfaitement connu pour les applications biologiques La proc dure de calibration est enti rement automatique Avant de r aliser la proc dure v rifier que e l instrument est mis sous tension e le tube orifice ad quat est s lectionn e le syst me est amorc en lectrolyte Pr paration de l talon 1 Choisir un talon dont le diam tre quivalant soit compris entre 5 et 20 du diam tre du tube orifice notre tube 100um 2 Pr parer la suspension contenant l talon Pr parer 1 cuvette contenant 20 mi d isoton 8 goutte
4. REGLAGF DU FOCUS REGLAGE DU FOCUS PORTE AVANT EVIER DE REGLAGE HA PLATEAU ECHANTILLON ECRAN CLAVIER DATA TERMINAL i AFFICHEUR A CRISTAUX LIQUIDES CLAVIER NUMERIQUE POSITION DU TOUCHES DE Figure 1 1 COULTER Z1 FACE AVANT CURSEUR FONCTIONS Page 9 sur 9
5. UMR 7052 B20A CC 19 Utilisation Coulter Num ro de protocole CC 19 R dacteur D Logeart Valid par Date de validation Fev 2014 Nombre de pages du protocole complet 9 Coulter Counter Mod le Z2 N S rie AE04055 N ID 839651 Site www beckmancoulter com Contact BeckmanCoulter beckman com Nicolas Jan lt njan beckman com gt Ingenieur Service Clients Particle analysis amp Cellular analysis BECKMAN COULTER FRANCE R actifs ACCUVETTE VIAL 20mL PK250 beckmancoulter ref 899366014 ISOTON II 20 LITERS beckmancoulter ref 8448011 Mode d emploi simplifi Mettre en marche bouton en haut droite OWPFWNDR proc dure 3 Eventuellement RECALIBRER l appareil cf proc dure 4 PARAMETRER votre appareil avant de compter cf proc dure 1 COMPTER vos cellules cf proc dure 2 v rifier vos SEUILS ou ajuster les cf Avant toute utilisation v rifier que le niveau d isoton dans flacon diluant est rempli L lectrode ne doit pas s cher toujours la plonger dans l electrolyte ou eau 7 Lorsque vous avez fini rincer 2 fois votre tube avec isoton propre et teindre appareil selon proc dure cf Proc dure 5 Page 1 sur 9 UMR 7052 CC 19 B20A Utilisation Coulter Dans un premier il faut conna tre les param tres de la lign e cellulaire que vous utilisez Pour cela pr parer une solution cellulaire assez concentr e 1 Presser la touche SET UP S1 appa
6. e level niveau de r vision du programme e Keyboard clavier e Display cran Page 7 sur 9 UMR 7052 B20A CC 19 Utilisation Coulter SET UP Ces menus SET UP permettent de configurer le syst me et modifier les param tres avant l analyse SI SETUP ENTER SIZE DATA S2 SETUP ENTER ANALYSIS DATA S3 SETUP INSTRUMENT SETTINGS S4 SETUP APERTURE SELECTION CAL Les menus de calibration permettent de d finir des param tres n cessaires la proc dure de calibration de l instrument CI CALIBRATION C2 CALIBRATION FACTOR C3 CAL INSTRUMENT SETTINGS OUTPUT Le menu Analysis permet de configurer la sortie ainsi que l impression automatique des r sultats Al ANALYSIS OUTPUT FORMAT A4 ANALYSIS RESULT UNBLOCK Presser la touche UNBLOCK pour d boucher l orifice dans le cas d un bouchage ventuel Cette fonction inverse le flux de passage travers l orifice pour chasser les d bris PRINT Presser la touche PRINT pour imprimer manuellement un r sultat FUNCTIONS Cf proc dure entretien EMBOUT EN PLASTIQUE FLACON DE DILUANT DETECTION DE NIVEAU VERS IMPRIMANTE DATA TERMINAL CLAVIER ECRAN FLACON DE DECHETS Page 8 sur 9 UMR 7052 CC 19 B20A Utilisation Coulter REGLAGE DE LA VITESSE DE L AGITATEUR POSITION AGITATEUR INTERRUPTEUR 1 MARCHE 0 ARRET VISUALISATION DE L ORIFICE MANDRIN DE
7. quel les particules sont compt es Above Tu Valeur du seuil haut au del duquel les particules sont compt es Between Ti Tu Mod le ZI double seuil Nombre de particules compt es entre les deux seuils Mode de comptage s lectionn dans le menu SI ou dans le menu Output TI repr sente le seuil bas et Tu le seuil haut Conc Indicateur de concentration Il doit indiquer entre O et 20 de coincidence Pour une analyse optimale l indicateur doit afficher entre 5 et 10 Pulse display e Affichage des impulsions e Affiche l amplitude d une s rie d impulsions prises au hasard sur une chelle de O 100 unit s e Le niveau du bruit de fond est affich e Des lignes horizontales montrent la position des seuils hauts Upper Size Tu et bas Lower Size TI e Le nombre d impulsions indique la concentration e La hauteur de l impulsion est proportionnelle au volume de la particule analys e Si la touche STOP est press e en cours de cycle l analyse est interrompue RESULTATS 1 Pendant le comptage le menu A2 appara t Vous pouvez suivre l indicateur de concentration et l affichage des impulsions 2 Lorsque le comptage est termin le menu A4 appara t Les r sultats sont exprim s en Counts ou en Concentration Page 3 sur 9 UMR 7052 CC 19 B20A Utilisation Coulter 3 Presser la touche OUTPUT l histogramme du nombre de particules en fonction de leur taille appara t ainsi que les seuils
8. ra t 2 SELECT UNITS choisisser l unit de la taille de vos cellules g n ralement um 3 SET Lower Size TI et Lower Size Tu entrer les valeurs de seuils haut et bas ATTENTION le rapport entre seuil haut et seuil bas ne doit pas exc der 3 1 en diam tre 27 1 en volume si la gamme d analyse est trop large un message d erreur s affichera au comptage 4 COUNT MODE choisisser si voulez compter Above TI Between ou Above Tu 5 Presser Set up le menu S2 appara t v rifier le diam tre de l orifice le volume aspir Measure aperture et Optimize size doivent tre YES 6 Presser la touche OUTPUT menu d affichage et de param trages des r sultats apr s analyse 7 RESULT TYPE Choisir Count nombres de particules compt es dans la gamme s lectionn e et dans le volume aspir ou Concentration comptage rapport au volume d aspiration metered volume et corrig du facteur de dilution 8 DILUTION FACTOR entrer votre facteur de dilution si vous compter en concentration Page 2 sur 9 UMR 7052 CC 19 B20A Utilisation Coulter e Plonger l lectrode dans votre solution de cellules puis appuyer sur START le menu A2 appara t e Des messages d tat sont affich s sur l cran BUILDING VACUUM PREPARE TO COUNT ensuite COUNTING DESCRIPTION DU MENU DE COMPTAGE Test Le num ro de test de l analyse Count Comptage en temps r el Above Ti Valeur du seuil bas au del du
9. rop importante gt 0 7 CC 19 Utilisation Coulter PULSE DISPLAY Affichage des impulsions Affichage de l amplitude d une s rie d impulsions prises au hasard selon une chelle de O 100 unit s La hauteur de chaque impulsion est proportionnelle au volume et le nombre d impulsions affich es refl te la concentration 14 A la fin de la proc dure de calibration la nouvelle constante KD est affich e pour le tube orifice Presser sur START pour valider la nouvelle valeur 15 Le menu C7 indique les nouveaux param tres Page 6 sur 9 UMR 7052 CC 19 B20A Utilisation Coulter e Si arr t pour une p riode courte Placer un b cher rempli d isoton ou d eau distill e sur le plateau porte chantillon v rifier que l lectrode le tube orifice sont immerg s dans le b cher et teindre l appareil e Si arr t pour une p riode plus longue gt 2 semaines il est conseill de laisser l lectrode et le tube orifice dans de l eau d ionis e afin d viter le d p t de cristaux d isoton dans le tube orifice e 1 Fois par semaine nettoyer avec du CLENZ solution bleue remplir une cuvette de clenz et mettre le tube de diluant dans la bouteille de CLENZ et effectuer un FILL SYSTEM Mode FUNCTIONS 1 fois par mois M me proc dure avec de l eau d ionis e e FILL SYSTEM e Afaire au d marrage e Pour nettoyer en fin de service e A utiliser avec Clenz
10. s de billes de Latex calibr es 3 Placer un b cher contenant l talon sur le plateau porte chantillon et r gler la hauteur de ce dernier de fa on ce que l lectrode l orifice du tube et l agitateur soient immerg s 4 Fermer la porte Pr paration de l instrument Presser 2 fois la touche SET UP vous tes sur le menu S2 Select aperture V rifier le diam tre du tube orifice 100 um Metered volume Le volume d aspiration est g n ralement fix 0 5 ml Presser la touche CAL Select units Choisisser l unit de l talon um ou fl g n ralement en um 10 Calibration size Entrer la valeur du diam tre des billes de latex utilis es indiqu e sur la feuille jointe aux billes 11 Measure aperture doit tre index YES 12 Presser la touche START le menu C4 appara t puis C3 13 Presser nouveau la touche START le menu C6 appara t g ou Page 5 sur 9 UMR 7052 B20A SAT L indicateur de concentration Pour viter un nombre de cycles de calibration trop important et une concentration trop forte l indicateur doit afficher entre 0 3 et 0 7 Si la concentration est trop faible le message LOW CONCENTRATION est affich La pr cision de la calibration n est pas affect e par une concentration trop faible cependant le temps d analyse et le volume de comptage requis sont trop importants La pr cision de la calibration est incorrecte si la concentration est t
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