Gélose MRS - Biokar Diagnostics
Contents
1. ingr dient de composition tr s variable PRINCIPES La peptone le glucose et les sels de mangan se et de magn sium apportent les l ments nutritifs indispensables la croissance des lactobacilles Le Tween 80 m lange d esters ol iques est une source d acides gras n cessaires la croissance de ces germes Le phosphate dipotassique contribue stabiliser le pH au cours de la croissance bact rienne Le citrate d ammonium et l ac tate de sodium constituent les substances inhibitrices du d veloppement de la plupart des contaminants tels que les streptocoques et les moisissures 1 5 Biokar Diagnostics Rue des Quarante Mines ZAC de Ther Allonne B P 10245 F60002 Beauvais Cedex France T l 33 0 3 44 14 33 33 Fax 33 0 3 44 14 33 34 www biokar diagnostics fr PREPARATION Mettre en suspension 70 3 g de milieu d shydrat BK0O89 dans 1 litre d eau distill e ou d min ralis e Porter lentement le milieu bullition sous agitation constante et l y maintenir durant le temps n cessaire sa dissolution Une liqu faction partielle de lagar entra nera in vitablement une alt ration significative de la consistance du gel du milieu solidifi apr s st rilisation et refroidissement Ajuster au pH convenant au produit analyser Dans le cas de l analyse des yaourts utiliser de l acide ac tique de fa on obtenir un pH final de 5 4 0 1 Pour le d2. nombrement des bact ries lactiques m sophiles il n est pas n cessaire d ajuster le pH du milieu Dans le cas de l analyse des produits destin s l alimentation animale utiliser une solution de soude de fa on obtenir un pH final de 6 5 0 2 NF EN 15785 6 2 0 2 NF EN 15786 et NF EN 15787 R partir en tubes ou en flacons St riliser l autoclave 121 C pendant 15 minutes NOTE 1 En raison de son pH acide le milieu est tr s sensible la chaleur c est pourquoi le bar me de st rilisation doit tre parfaitement respect NOTE 2 Avec le milieux pr t liqu fier BM089 pH 5 7 ou bien si le milieu est pr par l avance partir du milieu d shydrat faire fondre la g lose pendant le minimum de temps n cessaire la reliqu faction totale Ne pas r p ter l op ration plus d une fois MODE D EMPLOI Refroidir et maintenir le milieu 47 C Ajouter si n cessaire les solutions antibiotiques souhait es telles que Clindamicine et ou Ciprofloxacine Dans ce cas le milieu doit tre ensemenc en surface apr s s chage des bo tes de P tri coul es Transf rer 1 mL du produit analyser et de ses dilutions d cimales dans des bo tes de Petri st riles Couler 15 mL de milieu Homog n iser parfaitement Laisser solidifier sur une surface froide Placer les bo tes ensemenc es dans les conditions sp cifi es dans le mode op ratoire choisi Incuber 30 ou 37 C pe
3. CO 5 Colonies caract ristiques blanches de taille uniforme Les colonies qui se trouvent soit en surface de la g lose soit au fond de la bo te ont tendance plus s taler du fait de l absence d agar 4 5 Biokar Diagnostics Rue des Quarante Mines ZAC de Ther Allonne B P 10245 F60002 Beauvais Cedex France T l 33 0 3 44 14 33 33 Fax 33 0 3 44 14 33 34 www biokar diagnostics fr REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES De Man J C Rogosa M and Sharpe M E 1960 A medium for the cultivation of lactobacilli J App Bacteriol 23 1 130 135 Journal Officiel du 4 janvier 1978 M thode officielle d analyse pour le d nombrement de la flore sp cifique du yaourt ou yoghourt arr t du 25 Novembre 1977 NF V 04 503 Septembre 1988 Viandes et produits base de viande D nombrement des Bact ries lactiques FIL IDF 149A Juillet 1997 Levains lactiques de cultures de bact ries lactiques Norme de composition NF ISO 15214 V 08 030 Septembre 1998 Microbiologie des aliments M thode horizontale pour le d nombrement des bact ries lactiques m sophiles Technique par comptage des colonies 30 C ISO 7889 IDF 117 F vrier 2003 Yaourt D nombrement des micro organismes caract ristiques Technique de comptage des colonies 37 C XP CEN ISO TS 11133 2 V 08 104 2 Janvier 2004 Microbiologie des aliments Guide pour la pr paration et la production des milieux de cultur
4. g lose ambr e R ponse culturale typique apr s 72 heures d incubation en atmosph re CO 5 30 f Croissance Rapport de productivit Pa Lactobacillus casei subsp rhamnosus ATCC 7469 Pr gt 70 Lactobacillus plantarum ATCC 8014 Pr gt 70 Lactobacillus sake CIP 103139T PR gt 70 Escherichia coli ATCC 25922 inhib e score 0 Bacillus cereus ATCC 11778 inhib e score 0 STOCKAGE CONSERVATION Milieu d shydrat 2 20 C La date de p remption est mentionn e sur l tiquette Milieu pr par en flacons 6 mois 2 8 C titre indicatif Milieu pr t liqu fier en flacons Stocker entre 2 et 8 C l abri de la lumi re Les dates de p remption sont mentionn es sur les tiquettes PRESENTATION Code Milieu d shydrat Flacon de 500 g BKO89HA Milieu pr t liqu fier pH 5 7 Coffret de 10 flacons de 200 mL BM08908 3 5 Biokar Diagnostics Rue des Quarante Mines ZAC de Ther Allonne B P 10245 F60002 Beauvais Cedex France T l 33 0 3 44 14 33 33 Fax 33 0 3 44 14 33 34 www biokar diagnostics fr SUPPORT PHOTO De R f rence BKO89HA BM08908 B l 0 Ka r us Domaine d utilisation D nombrement des bact ries lactiques Lactobacillus casei subsp rhamnosus Colonie caract ristique Colonies blanches de taille uniforme G lose MRS R f BM08908 Incubation 72 heures 30 C sous atmosph re
5. G lose MRS DOMAINE D UTILISATION La g lose MRS de De Man Rogosa et Sharpe est utilis e pour la culture et le d nombrement des Lactobacillus dans les produits laitiers et les autres produits alimentaires ainsi que dans les produits destin s l alimentation animale Ce milieu permet de cultiver des germes croissance ralentie tels que Lactobacillus brevis et Lactobacillus fermentum Acidifi pH 5 4 il permet galement de d nombrer Lactobacillus bulgaricus dans les yaourts D apr s la norme NF ISO 15214 pour le d nombrement des bact ries lactiques m sophiles la g lose MRS doit tre utilis e pH 5 7 Si une contamination de l chantillon analyser par des levures est craindre par exemple dans le cas des saucissons secs il est utile d ajouter de l acide sorbique au milieu de fa on les inhiber Par adjonction de 0 1 mg de Clindamicine et de 10 mg de Ciprofloxacine par litre on obtient un milieu d nomm MRS CL CIP Agar destin num rer s lectivement Lactobacillus acidophilus dans les produits laitiers ceci suivant la norme ISO 20128 IDF 192 Dans le cadre des analyses des produits destin s l alimentation animale la g lose MRS doit tre utilis e aux pH pr conis s par les normes en vigueur HISTORIQUE En 1960 de Man Rogosa et Sharpe ont d velopp la formulation d un milieu sp cialement adapt aux cultures des lactobacilles provenant de produits laitiers ceci sans rajouter de jus de tomate
6. e Partie 2 Guide g n ral pour les essais de performance des milieux de culture ISO 20128 IDF 192 Mai 2006 Produits laitiers D nombrement de Lactobacillus acidophilus pr somptifs sur un milieu s lectif Technique de comptage des colonies 37 C NF EN 15785 V 18 238 D cembre 2009 Aliments des animaux Isolement et d nombrement du Bifidobacterium spp NF EN 15786 V 18 230 D cembre 2009 Aliments des animaux Isolement et d nombrement du Pediococcus spp NF EN 15787 V 18 231 D cembre 2009 Aliments des animaux Isolement et d nombrement du Lactobacillus spp Les mentions port es sur les tiquettes sont pr dominantes sur les formules ou les instructions d crites dans ce document Les informations et les sp cifications contenues dans cette fiche technique ont t tablies la date du 2010 01 13 Elles sont susceptibles d tre modifi es tout moment sans pr avis Code document BK089 F 2003 10 7 5 5 Biokar Diagnostics Rue des Quarante Mines ZAC de Ther Allonne B P 10245 F60002 Beauvais Cedex France T l 33 0 3 44 14 33 33 Fax 33 0 3 44 14 33 34 www biokar diagnostics fr
7. ndant 2 3 jours suivant le cas LECTURE Proc der au comptage des colonies pour chaque bo te contenant 300 colonies au maximum En raison de la possibilit de d veloppement de germes autres que les bact ries lactiques il peut tre n cessaire dans certains cas de v rifier au microscope qu il s agit bien de bacilles Gram positif non sporul s 2 5 Biokar Diagnostics Rue des Quarante Mines ZAC de Ther Allonne B P 10245 F60002 Beauvais Cedex France T l 33 0 3 44 14 33 33 Fax 33 0 3 44 14 33 34 www biokar diagnostics fr FORMULE TYPE pouvant tre ajust e de fa on obtenir des performances optimales Pour 1 litre de milieu PONPBDIO NS a 10 00 g Extrait de viande ses 10 00 g Extrait autolytique de levure 5 00 g OISE ne a A E 20 00 g Ween 80 rasion aiat eaa e EEE E A E 1 08 g Phosphate dipotassique 2 00 g Ac tate de sodium 5 00 g Citrate d AMMIO IL 22 enter en uen tetes ennnen 2 00 g Sulfate de Magn SIUM r s rrrsrniianennenrgemennes tt enmetes es 0 20 g Sulfate de mangan se 0 05 g Agar agar bact riologique 15 00 g pH du milieu pr t l emploi 25 C 5 7 0 1 CONTR LE QUALITE Milieu d shydrat poudre cr me l g rement mott e friable Milieu pr par
Download Pdf Manuals
Related Search