IMAGEN Chlamydia [FR]
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1. On a r alis des frottis partir de pr l vements la clinique et ces pr l vement ont t plac s dans un milieu de transport en vue de leur valuation par culture cellulaire Un chantillon tait consid r comme positif selon le test IMAGEN Chlamydia lorsqu au moins 10 corps fluorescents taient observ s voir Section 11 2 2 Un chantillon tait consid r comme positif selon la culture cellulaire lorsqu au moins une inclusion intracytoplasmique color e tait observ e Le tableau 14 2 reprend les r sultats de cette tude Sur les 178 chantillons test s on a obtenu les m mes r sultats avec les deux m thodes dans 174 cas soit une corr lation de 98 La sensibilit et la sp cificit du test IMAGEN Chlamydia atteignent respectivement 100 et 97 5 en supposant que la m thode de culture cellulaire soit 100 sensible et sp cifique Les valeurs pr dictives pour les tests positifs et n gatifs atteignent respectivement 79 et 100 Tableau 14 2 Comparaison des r sultats du test selon la culture cellulaire et selon le test IMAGEN Chlamydia sur des chantillons ophtalmiques TEST RESULTAT Culture cellulaire N gatif Positif Positif N gatif IMAGEN Chlamydia N gatif Positif N gatif Positif Nombre d chantillons 159 15 0 4 i Ces chantillons ont t pr lev s sur des patients soumis un traitement par antibiotiques Ce traitement peut avoir influenc le r sultat de la culture c2. Echantillon ophtalmique Pr paration des lames pr parer la lame avec la totalit de l embout d couvillon Laisser l chantillon s cher compl tement l air libre temp rature ambiante 15 30 C puis fixer dans l ac tone frais pendant 10 minutes Laisser la lame s cher Fair libre Si l chantillon n est pas imm diatement color conserver 4 Cpendant une nuit ou conserver congel 20 C pendant 2 mois maximum 9 2 MONOCOUCHES DE CULTURE CELLULAIRE Eliminer le milieu de la surface de la monocouche Ne pas laisser s cher les cellules car les corps d inclusion risquent d clater Fixer imm diatement la monocouche dans du m thanol frais pendant 10 minutes puis s cher convenablement l aide de papier absorbant Les monocouches fix es doivent tre color es imm diatement Elles peuvent toutefois tre conserv es une nuit 4 C avant la coloration 10 MODE OPERATOIRE VEUILLEZ CONSULTER LA SECTION 8 2 TECHNIQUES AVANT DE R ALISER LE TEST 10 1 AJOUT DU REACTIF Ajouter 25uL de r actif sur l chantillon fix voir Section 9 1 la monocouche de culture cellulaire fix e voir Section 9 2 ou la lame de contr le positif Veiller ce que le r actif recouvre le puits en totalit 10 2 PREMIERE INCUBATION Incuber les lames avec le r actif dans une chambre humide pendant 15 minutes 37 C Ne pas laisser le r actif s cher sur l chantillon ceci entra nerait une col
3. Schmidt N J 5th edition American Public Health Association 1021 1059 Goh B 1988 Chlamydia trachomatis genital infection The Practitioner 232 813 818 Caul E O Paul I D Milne J D and Crowley T 1988 Non invasive sampling method for detecting Chlamydia trachomatis Lancet 11 1246 1247 Sillis M and White P 1990 Rapid identification of Chlamydia psittaci and TWAR C pneumoniae in sputum samples using an amplified enzyme immunoassay Journal Clinical Pathology 43 260 262 Hammerschlag M R 1992 Chlamydia pneumoniae A New Respiratory Pathogen Infectious Diseases Newsletter Vol 11 No 1 January 1992 Pugh S F Slack R C B Caul E O Paul I D Appleton P N and Gatley S 1985 Enzyme amplified immunoassay A novel technique applied to direct detection of Chlamydia trachomatis in clinical specimens Journal of Clinical Pathology 38 1139 1141 Alexander I Paul I D and Caul E O 1985 Evaluation of a genus reactive monoclonal antibody in rapid identification of Chlamydia trachomatis by direct immunoflourescence Genitourinary Medicine 61 252 254 Potts M J Paul I D Roome A P C H and Caul E O 1986 Rapid diagnosis of Chlamydia trachomatis infection in patients attending an ophthalmic casualty department British Journal of Ophthalmology 70 677 681 Thornley M J Zamze S E Byrne M D Lusher M and Evans R T 1985 Properties of monoclonal antibodies
4. examiner le d p t centrifug Des chantillons respiratoires par exemple sputum ont galement t examin s directement en vue de d tecter C psittaci et C pneumoniae dans le cadre du d pistage des infections respiratoires Il existe actuellement 3 m thodes principales de diagnostic utilis es pour d tecter les Chlamydiae dans des chantillons cliniques La premi re isole l organisme et le visualise les corps l mentaires viables pr sents dans les chantillons cliniques infectent les cellules de culture de tissus et les inclusions qui en r sultent sont mises en vidence par des techniques de coloration comme par exemple l iode ou l immunofluorescence La seconde m thode met directement en vidence les Chlamydiae dans les chantillons cliniques en utilisant un anticorps monoclonal marqu la fluoresc ine La troisi me consiste utiliser un test immuno enzymatique par exemple IDEIA Chlamydia afin de d terminer la pr sence de l antig ne de Chlamydia dans les chantillons cliniques Les techniques d immunofluorescence directe qui utilisent des anticorps monoclonaux marqu s la fluoresc ine ont r v l une bonne corr lation par rapport aux techniques de culture cellulaire utilis es pour d tecter C trachomatis Le test IMAGEN Chlamydia est un test d immunofluorescence directe con u pour d tecter et identifier les Chlamydiae dans des chantillons cliniques ou des cultures
5. pr sente les r sultats de 2 tudes Sur les 935 chantillons test s on a obtenu le m me r sultat d apr s les deux m thodes dans 898 cas soit une corr lation de 96 La sensibilit et la sp cificit g n rales du test IMAGEN Chlamydia atteignent respectivement 92 et 97 en supposant que les m thodes de culture cellulaire soient 100 sensibles et sp cifiques Les valeurs pr dictives des tests positifs et n gatifs atteignent respectivement 84 et 98 Tableau 14 1 Comparaison des r sultats obtenus par culture cellulaire et avec le test IMAGEN Chlamydia sur des chantillons uro g nitaux TEST RESULTAT Culture cellulaire N gatif Positif Positif N gatif IMAGEN Chlamydia N gatif Positif N gatif Positif Centre 1 337 74 4 17 Centre 2 427 60 8 8 Total 764 134 12 25 14 2 2 Echantillons Ophtalmiques Le test IMAGEN Chlamydia a t valu dans un laboratoire de diagnostic ordinaire par rapport un syst me de culture cellulaire reconnu coloration Giemsa de monocouches de cellules McCoy pr trait es apr s culture primaire avec des chantillons On a pr lev des chantillons conjonctifs sur 178 patients atteints de conjonctivite inclusions fr quentant un service d ophtalmologie 163 d entre eux taient g s de 13 55 ans 3 b b s 10 semaines 12 mois et 12 nouveau n s 12 jours 4 semaines Le taux de pr valence d infections Chlamydia dans le groupe de population tudi atteignait 8
6. te disponible chez votre distributeur local Code n S611430 6 IMAGEN Chlamydia Positive Control Slides Code No S610930 2 Kit de pr l vement d chantillons Chlamydia disponible par 20 en bo te distributeur Code No S610730 2 7 EQUIPMENT Le mat riel suivant est n cessaire Pipette de pr cision et embouts jetables pour des quantit s de 25uL Bain de lavage Lamelles pour des puits de 6mm de diam tre Huile d immersion non fluorescente Microscope pifluorescent avec filtre pour FITC longueur d onde d excitation maximale 490nm longueur d onde d mission moyenne 520nm et lentilles pour amplification x200 x400 et x600 x1000 Incubateur 37 C Centrifugeuse basse vitesse Pour confirmation de culture Ecouvillons st riles et milieu de transport adapt au pr l vement au transport et la culture des Chlamydiae Lign es de culture cellulaire recommand es pour l isolation de Chlamydia 8 PRECAUTIONS Pour usage diagnostique in vitro L utilisateur doit maitriser les proc dures g n rales de laboratoire et tre sp cifiquement form pour l emploi de ce test 8 1 MESURES DE SECURITE 8 1 1 Le r actif IMAGEN test de Chlamydia contient lt 0 1 d azoture de sodium qui est un poison L azide de sodium risque de r agir avec les canalisations de plomb ou de cuivre formant ainsi des azides de m tal tr s explosifs Toujours liminer les mat riaux contenant de l azide en rin ant avec d
7. IMAGEN Chlamydia K610111 2 50 F R Test pour la d tection de Chlamydia par immunofluorescence directe 1 MODE D EMPLOI Le test IMAGEN Chlamydia est un test d immunofluorescence directe qualitatif pour la d tection de Chlamydia dans des chantillons uro g nitaux ou ophtalmiques humains ainsi que pour la confirmation des Chlamydiae en culture cellulaire 2 RESUME Les Chlamydiae sont des parasites intracellulaires obligatoires troitement li s aux ent robact ries Le genre Chlamydia comporte trois esp ces connues Chlamydia trachomatis C trachomatis Chlamydia psittaci C psittaci et Chlamydia pneumoniae TWAR Le cycle de vie des Chlamydiae est complexe mais deux structures principales sont connues le corps l mentaire infectieux et le corps r ticul l infection d une cellule commence quand le corps l mentaire adh re la surface de la cellule h te et se fraye un passage dans la cellule par endocytose Le corps l mentaire se d veloppe l int rieur de la vacuole form e par la membrane de la cellule h te et se diff rencie pour former les corps r ticul s Les corps r ticul s sont seuls impliqu s dans la multiplication des Chlamydiae et se divisent par fission binaire en utilisant l apport nerg tique de la cellule h te Environ 24 heures apr s l infection les corps r ticul s se diff rencient l int rieur de l inclusion pour former des corps l mentaires Le cycle de repr
8. KIT Pour des performances optimales il convient de stocker tous les composants du kit inutilis s en respectant les consignes suivantes 5 3 LAMES DE CONTROLE POSITIF Les lames de contr le positif sont fournies dans des poches individuelles tanches avec de l azote Conserver les lames inutilis es une temp rature comprise entre 2 8 C Laisser reposer la lame pendant 5 minutes temp rature ambiante 15 30 C avant ouverture Utiliser la lame imm diatement apr s ouverture de l emballage 5 4 LIQUIDE DE MONTAGE Pr t l emploi Conserver le liquide de montage inutilis une temp rature comprise entre 2 8 C Il faut laisser reposer le liquide de montage temp rature ambiante 15 30 C pendant 5 minutes avant utilisation 5 5 REACTIF Pr t l emploi Conserver le r actif inutilis l abri de la lumi re une temp rature comprise entre 2 8 C Laisser reposer le r actif pendant 5 minutes temp rature ambiante 15 30 C avant ouverture 6 REACTIFS ET MATERIEL NECESSAIRES MAIS NON FOURNIS 6 1 REACTIFS Fresh ac tone pour la fixation Solution saline tamponn e au phosphate PBS pH 7 5 pour le lavage des chantillons et monocouches color s 6 2 ACCESSOIRES Les produits suivants doivent tre utilis s avecIMAGEN Chlamydia Contactez votre distributeur local pour plus d informations T flon lames de microscope en verre avec bien seul diam tre 6mm 100 lames par bo
9. VITE CROISEE Il a t d montr que l anticorps monoclonal utilis pour le test IMAGEN Chlamydia ne r agit pas avec les micro organismes list s ci dessous Acholeplasma laidlawii Mycoplasma arginini Acinetobacter calcoaceticus var Mycoplasma hyorhinis anitratus Aeromonas hydrophila Mycoplasma pneumoniae Bacteroides fragilis Mycoplasma genitalium Bacillus cereus Neisseria gonorrhoeae Campylobacter coli Peptococcus sp Candida albicans Peptostreptococcus anaerobius Citrobacter freundii Proteus mirabilis Clostridium perfringens Clostridium difficile Enterobacter cloacae Enterococcus faecalis Escherichia coli Gardnerella vaginalis Haemophilus influenzae Klebsiella aerogenes Pseudomonas aeruginosa Salmonella minnesota Serratia marcescens Shigella sonnei Staphylococcus epidermidis Staphylococcus aureus Streptococcus agalactiae Streptococcus dysgalactiae Streptococcus pyogenes Lactobacillus lactis Listeria monocytogenes Mycoplasma orale Streptococcus subsp equisimilis Streptococcus pneumoniae Ureaplasma sp Veillonella spp dysgalactiae Mycoplasma hominis Virus Herpes simplex virus 15 ilp 10 41 12 REFERENCES Chlamydial Disease 1983 Ed Darougar S British Medical Bulletin 39 107 203 Schachter J and Dawson C R 1979 Psittacosis lymphogranuloma venereum agents TRIC agents In Diagnostic procedures for viral rickettsial and chlamydial infections Eds Lennene E H and
10. a pr sence de chlamydia dans les chantillons cliniques n exclue pas n cessairement la possibilit d une infection concomitante due d autres pathog nes Les r sultats doivent tre interpr t s conjointement aux informations recueillies partir des tudes pid miologiques de l examen clinique du patient et d autres proc dures de diagnostic 13 VALEURS NORMALES Le taux de pr valence des infections Chlamydia dans une tude de population varie en fonction du type de population tudi Le taux de pr valence des infections uro g nitales par Chlamydia pour des patients non s lectionn s suivis par un centre de m decine g nito urinaire varie entre 10 et 25 En ce qui concerne les patients soign s pour ur trite non sp cifique ou ur trite blennorragique le taux peut atteindre 30 60 On constate un taux de pr valence d infections uro g nitales moins lev moins de 10 chez les patients suivis par des cliniques obst triques et gyn cologiques Le taux de pr valence des infections ophtalmiques par Chlamydia peut varier entre 5 et 20 dans le cadre d tudes consacr es au paratrachome conjonctivite inclusions 14 PERFORMANCES CARACTERISTIQUES 14 1 SPECIFICITE DE L ANTICORPS MONOCLONAL Il a t d montr que l anticorps monoclonal utilis dans le r actif IMAGEN Chlamydia r agissait avec un pitope de Chlamydia lipopolysaccharide commun toutes les souches de Ch
11. aires color s en rouge PR CAUTIONS D autres formes de Chlamydia 2 3 fois plus grandes que les CE peuvent galement appara tre certaines d entre elles pr sentent la m me fluorescence ou leur centre est noir et entour d une aur ole de fluorescence vert pomme Il s agit l probablement de formes interm diaires de Chlamydia ou de corps r ticul s Parfois de grandes inclusions de Chlamydia intracytoplasmiques intactes tr s fluorescentes apparaissent 11 1 2 Si un contr le n gatif s av re n cessaire il est recommand d utiliser des cellules intactes non contamin es ou rompues d un type semblable celles utilis es pour la culture et l isolation de Chlamydia Les cellules doivent tre pr par es et fix es conform ment aux indications de la Section 9 2 et color es comme indiqu la Section 10 11 2 ECHANTILLONS CLINIQUES 11 2 1 Apparition de Corps de Chlamydia Les corps l mentaires extracellulaires constituent la forme la plus courante de chlamydia dans les chantillons cliniques et se pr sentent sous la forme de corps aux contours lisses vert pomme vifs d environ 300nm de diam tre comme indiqu la Section 11 1 1 11 2 2 Le diagnostic est positif lorsque les chantillons color s et fix s pr sentent au moins 10 corps de Chlamydia Ce nombre a t d fini de mani re limiter les r sultats positifs erron s dus une mauvaise interpr tation de la fluorescence non sp c
12. cellulaires Le test utilise un anticorps monoclonal sp cifique du genre de l antig ne de Chlamydia lipopolysaccharide pr sent dans toutes les souches connues de Chlamydiae 3 PRINCIPE DU TEST Le r actif du test IMAGEN Chlamydia contient un anticorps monoclonal conjugu de l isothiocyanate de fluoresc ine FITC L anticorps monoclonal sp cifique du genre d tecte les corps l mentaires de toutes les esp ces humaines de C trachomatis connues ainsi que des souches de C psittaci et C pneumoniae L anticorps conjugu est utilis dans le cadre d une technique d immunofluorescence directe en une tape Les chantillons sont incub s avec le r actif conjugu au FITC pendant 15 minutes l exc s de r actif est ensuite limin par lavage l aide d une solution saline tamponn e au phosphate PBS les zones color es sont mont es entre lame et lamelle et examin es au moyen d un clairage pifluorescent Si des Chlamydia sont pr sents dans l chantillon clinique ils apparaissent sous forme de corps l mentaires fluorescent vert pomme vifs qui contrastent avec la couleur du r actif de contraste Les monocouches de culture cellulaire infect es color es l aide de l anticorps monoclonal conjugu au FITC contiennent des inclusions intracytoplasmiques vert pomme de Chlamydia qui se diff rencient de la coloration de l arri re plan cellulaire color par le r actif de contraste Reme
13. e grandes quantit s d eau 8 1 2 Les Chlamydiae de la lame de contr le positif se sont r v l s non infectieux lors de la culture cellulaire Toutefois il convient de manipuler et d liminer la lame comme susceptible d tre infectieuse 8 1 3 Pr sence du colorant bleu Evans dans le r actif Bien que le produit soit en concentrations inf rieures celles qui requi rent qu on le classe comme canc rog ne viter tout contact avec la peau 8 1 4 Mounting Fluid contient un produit irritant pour la peau des pr cautions particuli res doivent donc tre prises lors de son utilisation Bien que le produit soit en concentrations inf rieures celles qui requi rent qu on le classe comme irritant rincer la peau sous l eau en cas de contact Le r actif du test IMAGEN Chlamydia contient des immunoglobulines humaines Ce compos a donn des r sultats n gatifs pour la pr sence d anticorps anti HIV et d antig ne de surface de l h patite C et de l h patite B N anmoins il convient de le manipuler avec pr caution et de le consid rer comme potentiellement infectieux 8 1 5 8 1 6 Ne pas manger boire fumer conserver ou pr parer de la nourriture ni utiliser des cosm tiques dans les lieux d utilisation 8 1 7 Ne pas pip ter les solutions la bouche 8 1 8 Porter des gants jetables lors de la manipulation des chantillons cliniques et des cellules infect es et toujours se laver les mains a
14. ellulaire 14 2 3 Confirmation de la culture cellulaire Le test IMAGEN Chlamydia a t valu en tant que test de confirmation de culture par rapport 2 proc dures de confirmation de culture g n ralement utilis es Giemsa et iode 132 chantillons uro g nitaux ont chacun t inocul s sur 3 monocouches de cellules flacon cylindrique McCoy trait es l iodod oxyuridine Les monocouches inocul es ont t incub es 37 C pendant 48 72 heures puis fix es dans du m thanol pendant 10 minutes Les monocouches fix es ont ensuite t color es par Giemsa iode ou r actif du test IMAGEN Chlamydia Un chantillon tait consid r comme positif lorsqu au moins une inclusion intracytoplasmique color e tait observ e au microscope Le tableau 14 3 pr sente les r sultats de cette tude Sur les 132 chantillons test s 56 42 ont d velopp des corps inclusion La coloration l iode a d cel le Chlamydia dans 46 chantillons la coloration Giemsa dans 49 chantillons et IMAGEN Chlamydia dans 56 chantillons Tableau 14 3 Comparaison des m thodes de coloration pour d tection des inclusions de Chlamydia dans la culture en flacons cylindriques TEST RESULTAT IMAGEN Chlamydia Positif N gatif Positif Positif Positif Coloration Giemsa Positif N gatif N gatif Positif N gatif Coloration l iode Positif N gatif N gatif N gatif Positif Nombre d chantillons 42 76 3 7 4 14 3 REACTI
15. ffectuer le frottis ur tral en ins rant dans l ur tre sur 2 4cm un couvillon fin embout en alginate ou en coton Faire tourner plusieurs fois l couvillon puis le retirer de l ur tre 9 1 2 Avant d effectuer un pr l vement endocervical nettoyer l orifice cervical l aide de gaze st rile pour liminer tout exc s de mucus de sang pus etc Effectuer le frottis endocervical en ins rant dans le canal cervical sur environ 1cm un couvillon embout en alginate ou en coton ou une brosse cytologique Faire tourner l couvillon plusieurs fois au niveau de la jonction entre l pith lium prismatique et l pith lium squameux puis retirer l couvillon sans toucher les surfaces vaginales 9 1 3 Appliquer sur l il un anesth sique local ensuite exposer la conjonctive sup rieure et inf rieure En utilisant un couvillon embout en coton ou en Dacron frotter vigoureusement les surfaces conjonctivales sup rieure et inf rieure en faisant tourner l couvillon au cours du pr l vement pour que la totalit de la surface conjonctivale soit chantillonn e REMARQUE Le kit de pr l vement d chantillons IMAGEN Chlamydia voir Section 6 2 convient pour le pr l vement des chantillons mentionn s ci dessus 9 1 4 Faire tourner l couvillon d chantillon en appliquant une l g re pression sur le puits de 6mm de la lame pour microscope Veiller Echantillon endocervical femmes
16. ifique Les cellules contre color es doivent tre visibles l int rieur d un puits pour permettre de conclure un r sultat n gatif peut s agir de cellules pith liales cylindriques ou squameuses intactes ou bris es ou m me de leucocytes polymorphonucl aires Si le pr l vement des chantillons n a pas t correctement effectu il risque de ne pas y avoir de substance cellulaire auquel cas il convient de recommencer le pr l vement 11 2 3 Les substances de forme irr guli re dont la morphologie diff re des corps de chlamydia d crits la Section 11 1 1 et qui pr sentent une fluorescence blanche rouge ou jaune plut t que vert pomme doivent tre consid r es comme tant le r sultat d une coloration non sp cifique 11 3 CONFIRMATION DE LA CULTURE CELLULAIRE 11 3 1 Apparition d Inclusions de Chlamydia Les inclusions intracellulaires de chlamydia se pr sentent comme des sacs vert pomme dans le cytoplasme des cellules contamin es Une inclusion peut occuper jusqu 75 du cytoplasme de la cellule h te 11 3 2 Le diagnostic est positif lorsqu une ou plusieurs inclusions intracellulaires de Chlamydia color es apparaissent dans la monocouche 12 LIMITES DU TEST 12 1 Contr le n gatif Interpr tation des R sultats Fluorescence Non Sp cifique Interpr tation des R sultats l apparence visuelle de l image de fluorescence obtenue peut varier en fonction du type de microsco
17. lamydiae Une coloration non sp cifique appara t parfois lors de la coloration immunochimique et ce en raison de liaisons entre les fragments Fc de l anticorps et la prot ine A produite par certaines souches de Staphylococcus aureus Le r actif IMAGEN Chlamydia a t con u pour r duire de telles liaisons 14 2 PERFORMANCES CLINIQUES 14 2 1 Echantillons uro genitaux Le test IMAGEN Chlamydia a t valu par 2 laboratoires de diagnostic par rapport des syst mes de culture cellulaire reconnus coloration Giemsa de monocouches de cellules McCoy pr tait es apr s culture primaire avec les chantillons Des chantillons ur traux et cervicaux ont t pr lev s sur des patients non s lectionn s suivis par des centres de traitement des maladies sexuellement transmissibles Le taux d infections par Chlamydia pour les groupes de population tudi s variait entre 10 et 20 On a r alis des frottis partir de pr l vements la clinique et ces pr l vements ont ensuite t plac s dans un milieu de transport en vue de leur valuation par culture cellulaire Un chantillon tait consid r comme positif dans le cadre du test IMAGEN Chlamydia lorsqu on observait un minimum de 10 corps fluorescents voir Section 11 2 2 Un chantillon tait consid r comme positif selon le test de culture cellulaire lorsqu on observait au moins une inclusion de Chlamydia intracytoplasmique color e Le tableau 14 1
18. oduction dure entre 48 et 72 heures et se termine par la rupture de l inclusion et la lib ration des corps l mentaires Une inclusion arriv e maturit peut contenir environ 10 corps l mentaires de Chlamydiae et occuper 75 du volume de la cellule h te C trachomatis ou trachome a t reconnu comme source fr quente des maladies sexuellement transmissibles et on a montr qu il occasionnait une grande vari t d infections chez l homme dont certaines peuvent tre asymptomatiques Chez l adulte C trachomatis peut galement occasionner une conjonctivite folliculaire aigu ou sub aigu qui risque d voluer en k ratite ponctu e Occasionnellement peut se d velopper un trachome cicatriciel et end mique La plupart de ces sympt mes se d veloppent chez les patients souffrant d infections g nitales non reconnues L ophtalmie des nouveau n s est une complication de la maladie chez les enfants n s de m re infect e Les sites anatomiques o l on effectue g n ralement les pr l vements en vue de diagnostiquer le Chlamydia sont la conjonctive le canal cervical ut rin et l ur tre Chez les hommes et plus particuli rement les adolescents et les hommes asymptomatiques examin s suite au trac de contact post hospitalier il peut s av rer impossible de pr lever des chantillons ur traux par voie interne Dans ce cas il est sugg r d utiliser des chantillons de la premi re urine du matin et d
19. oration non sp cifique 10 3 LAVAGE DE LA LAME Eliminer le r actif en exc s avec de la solution saline tamponn e au phosphate PBS puis laver doucement la lame dans un bain sous agitation contenant de la solution PBS pendant 5 minutes Eliminer la solution PBS et laisser la lame s cher lair libre temp rature ambiante 15 30 C 10 4 AJOUT DU LIQUIDE DE MONTAGE Ajouter une goutte de liquide de montage au centre de chaque puits et placer un couvre objet sur le liquide de montage et sur l chantillon en veillant ne pas pi ger de bulles d air 10 5 LECTURE DE LA LAME Examiner au microscope pifluorescence la totalit du puits contenant l chantillon color La fluorescence doit tre visible un grossissement de x200 x500 voir Section 11 Pour obtenir des r sultats optimums il convient d examiner les lames imm diatement apr s coloration celles ci peuvent cependant tre conserv es entre 2 8 C l abri de la lumi re pendant 24 heures maximum 11 INTERPRETATION DES RESULTATS DU TEST 11 1 CONTR LES 11 1 1 Lames de contr le positifs Lors de l examen conform ment aux instructions de la Section 10 la lame de contr le positif doit pr senter des corps l mentaires extracellulaires CE sous la forme de tr s petits cercles fluorescents vert pomme vifs aux contours lisses d environ 300nm de diam tre Ces corps l mentaires se d tachent sur un fond de cellules et d bris cellul
20. pe et de la source lumineuse utilis e 12 2 12 3 Utiliser exclusivement le liquide de montage fourni Il est recommand d utiliser 25uL de r actif pour couvrir la surface d un puits de 6mm Si ce volume est r duit il risque de s av rer difficile de recouvrir la surface de l chantillon au risque de diminuer la sensibilit 12 4 Tous les r actifs sont fournis pour des dilutions d termin es Les performances du test risquent d tre alt r es si les r actifs sont modifi s de quelque fa on que ce soit ou s ils ne sont pas conserv s dans les conditions recommand es comme indiqu la Section 5 1 12 5 La non d tection de Chlamydia dans une culture cellulaire peut r sulter de divers facteurs comme le pr l vement de l chantillon un moment inappropri de l volution de la maladie le pr l vement et ou la manipulation inappropri s de l chantillon une culture cellulaire d fectueuse etc Un r sultat n gatif n exclut donc pas la possibilit d une infection par Chlamydia 12 6 Les syst mes de d tection d antig ne tels que le test IMAGEN Chlamydia ne doivent pas tre utilis s pour obtenir des informations dans le cadre d examens m dico l gaux Seules les cultures standard de Chlamydia peuvent tre utilis es pour valuer des cas d abus ou autres dans lesquels l ventualit d un r sultat faux positif aux syst mes de d tection d antig ne est inacceptable 12 7 L
21. pr s avoir utilis des substances infectieuses 8 1 9 l limination de tous les chantillons cliniques doit avoir lieu conform ment la l gislation en vigueur 8 1 10 Fixe toxicologique disponible pour les utilisateurs professionnels sur demande 8 2 8 2 PRECAUTIONS TECHNIQUES 8 2 1 Ne pas utiliser les composants apr s la date d expiration imprim e sur les tiquettes Ne pas m langer diff rents lots de r actifs 8 2 2 Les r actifs sont fournis des concentrations dos es fixes Les performances du dosage seront alt r es si les r actifs sont conserv s dans des conditions autres que celles d crites dans la Section 5 8 2 3 Pr parer de la solution saline tamponn e au phosphate PBS fra che selon les besoins le jour de son utilisation 8 2 4 Le lavage dans du PBS est n cessaire L utilisation d autres solutions de lavage comme l eau du robinet ou l eau distill e compromettrait les r sultats du test 8 2 5 Eviter la contamination microbienne des r actifs 8 2 6 Ne pas congeler les r actifs 9 PRELEVEMENT ETPREPARATION DES ECHANTILLONS Les chantillons pr lev s dans l ur tre chez l homme le col ut rin chez la femme et sur la conjonctive doivent contenir autant de cellules pith liales que possible dans la mesure o les Chlamydiae sont des organismes intracellulaires qui infectent les surfaces pith liales 9 1 ECHANTILLONS CLINIQUES 9 1 1 Echantillon ur tral hommes E
22. rciements L anticorps monoclonal a t produit par le Department of Pathology University of Cambridge Cambridge Royaume Uni et la Division of Communicable Diseases Clinical Research Centre Harrow Middlesex Royaume Uni 4 DEFINITIONS Les symboles suivants sont utilis s dans informations relatives au produit l ensemble des Num ro de catalogue Consulter les instructions d utilisation Contenu suffisant pour lt N gt tests Fabricant SE lt H Dispositif m dical de diagnostic n vitro 7 Utilisez par date 8c Code du Lot Limites de temp rature 5 REACTIFS FOURNIS 50 Chaque kit contient suffisamment de r actif pour traiter 50 pr parations de culture cellulaire z La date de p remption du kit est indiqu e sur l tiquette ext rieure de la bo te 5 1 REACTIF IMAGEN CHLAMYDIA li Un livret d instructions d utilisation 2 x 1 lame de contr le positif contenant des cellules de tissu conjonctif de souris fix es l ac tone L929 infect es par la souche L de C trachomatis Un flacon de chacun des produits suivants 3mL de liquide de montage Le liquide de montage contient un inhibiteur de blanchissage optique dans une solution de glyc rol pH 10 0 1 4mL du r actif de test IMAGEN Chlamydia Ce r actif contient de l anticorps monoclonal murin purifi sp cifique du genre Chlamydia conjugu du FITC 5 2 PREPARATION STOCKAGE ET REUTILISATION DES COMPOSANTS DU
23. to the genus specific antigen of Chlamydia and their use for antigen detection by reverse passive haemagglutination Journal of General Microbiology 131 7 15 CDC Report 1991 False Positive Results with the Use of Chlamydia Test in the Evaluation of Suspected Sexual Abuse Ohio 1990 Morbidity and Mortality 39 932 935 Chlamydial Infections 1986 Eds Oriel D Ridgway G Schachter J Taylor Robinson D and Ward M From Proceedings of the Sixth International Symposium on Human Chlamydial infections Cambridge University Press 13 Galen R S 1982 Application of the Predictive Value Model in the analysis of test effectiveness In Clinics in Laboratory Medicine Symposium on Test Selection Strategies Volume 2 W B Saunders Company 685 699 X7847 R vis Mars 2013 OXOID Limited Wade Road Basingstoke Hampshire RG24 8PW Royaume Uni Pour toute information veuillez contacter votre distributeur local e CE 0086
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