Microscopie et photographie Histoire d`une évolution
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1. me si on ne conna t pas la dur e de vie exacte des supports utilis s MAIS un probl me majeur s est tr s vite pr sent apparition rapide de grosses difficult s de mise au point de l image nettet sur un cran de contr le de petite taille peine 3 x 4 cm 38 Nous l avons r solu assez facilement gr ce l utilisation du canal vid o du C995 qui a permis de con necter l appareil en direct sur un cran de t l vision et de voir ainsi une image en grand format qui permettait d abord une mise au point facile et impeccable mais aussi rendait l observation plus convi viale car plusieurs observateurs pouvaient se regrouper autour de l cran de t l vision Puis la question s est pos e de pouvoir visionner en direct l image sur l cran d un ordinateur La solu tion est pass e pour nous par un relais vid o externe Tout cela n avait pas r solu le probl me de capture d images il fallait saisir les images sur APN puis charger le contenu de la carte sur l ordinateur gr ce un c ble ou un lecteur de cartes Compact Flash beaucoup de manipulations et de pertes de temps De timides essais avaient lieu en parall le dans la conception de logiciels permettant de g rer APN au d part de l ordinateur mais on tait loin d une solution facile et universelle Une petite merveille de technologie qui permet la r alisation de photos excel lentes sans quasi aucune manipulation photo Marcel2. ra qu avec un APN sauf s il est connect sur un ordi par le canal vid o ou sur un t l viseur pour la nettet de l image et qu on utilise une t l commande pour les prises de vue pour viter le bouger car il n y a aucune vibration transmise et on ne touche pas l ensemble microscope cam ra sauf pour faire varier la mise au point avec la vis microm trique toutes les commandes se font au d part de l ordinateur ATTENTION Ne pas d monter le filtre qui se trouve sur la cam ra car c est un filtre RVB Rouge Vert Bleu aussi appel en anglais RGB Red Green Blue car cela modifie consid rablement le rendu colorim trique de la cam ra fournissant ainsi des images qui sont quasi des d grad s de gris l g rement color s la page suivante vous trouverez 2 s ries de 3 photos repr sentant des spores de Lactarius pyroga lus trait es au r actif de Melzer ainsi que la photo encadr e de noir r sultant de la superposition des 3 images l aide du logiciel Combine ZM Il n y a eu aucune manipulation avec un logiciel de retouche d image L La 4 image r sulte de la superposition des 3 premi res spores de Lactarius pyrogalus a 4 image r sulte de la superposition des 3 premi res spores de Lactarius pyrogalus
3. Lecomte Il y a trois ans sur les conseils et en suivant l exemple d un ami sp cialiste des Russules nous avons eu l occasion de d tourner de leur finalit des cam ras de surveillance avec capteur CCD et d obtenir des r sultats spectaculaires par le biais d un relais vid o DIGIT AL muni d un logiciel de capture et se connectant directement sur un CAMERA port USB d ordinateur D Puis les choses se sont emball es et nous avons tr s vite d cou vert des cam ras sp cialement con ues pour la microscopie mais il faut l avouer avec des fortunes diverses Tous ces essais et er MOCE 5 A reurs nous ont co t beaucoup d argent Nous vous ferons gr ce de tous les d boires et d ceptions Ils ne pr sentent qu un seul USB 2 0 int r t nos yeux viter d autres personnes les m mes d penses inutiles en ciblant directement un ou deux ma tres achats Nous sommes pass s par la Deltapix Infinity une merveille 21 000 000 de pixels mais un prix tr s lev et quasi inaccessible pour des amateurs la HDCE30 mod le chinois 3 000 000 de pixels et pr s de 1 000 et d autres marques dont je ne citerai pas le nom afin de ne pas tre accus de contre publicit Cela repr sente une dizaine d exemplaires divers Finalement une cam ra chinoise largement commercialis e maintenant sous le code MDCE5a nous a permis d obtenir des r sultats excellents combin s une tr s grande facilit d utilis
4. qui n cessitent ce coefficient de correction apr s v rification de correspondance de l chelle microm trique avec une lame talon Exemple longueur de spore mesur e 269 pixels avec l objectif x100 gt 269 x 0 053 14 257 um O gt 269 18 95 14 271 um Il s av re assez facile de composer sous Excel un tableau de conversion automatique sur base de 10 ou 20 mesures par exemple et qui calculerait en m me temps le Q de la spore Il faut galement savoir qu il existe actuellement de remarquables logiciels de mesure en acc s libre sur le Net et tr s faciles d emploi Je citerai par ordre alphab tique avec le nom de l auteur 41 Axio Vision Zeiss Micro Cartouche Christian Aubert Mycom tre Georges Fannech re Pixim tre Alain Henriot pr paration trop paisse pr paration mal color e et satur e ou emp t e pr paration non lav e et donc pas assez contrast e gt Impossible dans de telles conditions d obtenir de bonnes photos effectuer un r glage correct des diaphragmes de champ et d ouverture TRES IMPORTANT et r aliser quasi chaque observation et changement d objectif bien r gler la hauteur du condenseur plus le grossissement augmente plus la lentille du con denseur doit tre proche de la pr paration utiliser un autre milieu d observation que l eau pour am liorer l indice de r fraction acide lac tique hydrate de chloral lactoph nol chloral lactoph nol surtout l
5. Microscopie et photographie Histoire d une volution personnelle par Marcel Lecomte Pr ambule Il faut savoir que ce texte est r dig avec l esprit dun amateur au sens noble du terme et destin d autres passionn s qui ne disposent pas n cessairement d un budget lev consacrer l exercice d une passion gratuite au niveau des r sultats un professionnel qui dispose de cr dits di vers et ne d bourse rien de ses deniers personnels ne tiendra videmment pas le m me raisonne ment que le n tre et aura acc s d autres moyens ou technologies Il reste que des sp cialistes comme des amis repr sentants des firmes Nachet et Zeiss par exemple sont r ellement merveill s en consid rant les r sultats obtenus par des amateurs gr ce un esprit inventif et ing nieux qui a pu contourner et r soudre nombre de probl mes souvent sans bourse d lier Historique Il y a pr s de quinze ann es nos timides essais de photographie en microscopie nous ont laiss un grand sentiment de frustration car il fallait faire face des difficult s ou inconv nients majeurs N cessit de poss der un microscope avec une t te trinoculaire Grands probl mes d exposition et d clairage avec un bo tier reflex argentique utilisa tion d une pellicule photos ou diapositives D lai d attente important entre la prise de vue et le contr le du r sultat Prix de revient lev des photos souvent un
6. ande facilit d installation et d emploi R glages et balance automatiques quelle que soit l intensit lumineuse Connexion sur un port USB2 Cam ra de diam tre standard 23 mm ce qui permet de la poser sur un tube oculaire si on ne dispose pas d un tube trinoculaire Livr e avec un adaptateur d oculaire 30 mm ce qui permet de lutiliser avec une loupe st r oscopique de mod le standard Encombrement minime VV NNNNVY La prise en main est extr mement rapide si on l utilise en mode automatique install par d faut Nous avons r dig un mode d emploi en fran ais bas sur notre exp rience et notre pratique gt Installer la cam ra sur le tube photo de la t te trinoculaire du microscope ou sur un des ocu laires si vous ne poss dez pas de t te trinoculaire elle est adaptable directement sur un tube standard de 23 mm gt Raccorder la cam ra sur le port USB prioritaire en effet sur les PC portables comptant nombre de ports USB il est fr quent d en trouver un qui accepte certains p riph riques im primante bo tier TV cam ras alors que les autres peuvent provoquer des mauvais fonction nements gt INDICE si la fen tre de capture du programme ne s ouvre que sur la de l cran et est pix lis e changer de port gt ATTENTION Si vous utilisez un microscope binoculaire et que vous remplacez un oculaire par la cam ra il est imp ratif de poser un masque un capuchon opaque sur l autre oculair
7. ation Avec en prime un prix d fiant toute concurrence puisqu il se situe actuellement aux alentours de 325 00 L utilisation simultan e d un microscope d une cam ra d un ordinateur et d un projecteur vid o nous permet maintenant de r aliser des manipulations et des observations l intention d une salle enti re sans limite du nombre de participants Nous avons m me pouss le luxe tr s loin Un second ensemble ordinateur projecteur vid o aliment par une webcam de bonne d finition mont e sur un pied flexible permet au spectateur de voir en direct les mains de l op rateur lors des travaux pr paratoires coupes colorations montage qui pr c dent l observation microscopique Une petite merveille de technologie la Cam ra VIDEO MDCE 5A 1 5 millions de pixels sp cialement con ue pour l imagerie en microscopie optique Voici les crit res techniques annonc s par le constructeur Digital Output 24 bit color Image Format YUY2 640x480 800x600 1024x760 1280x1024 Data Format YUY2 1420 Image Output USB2 0 Plug and Unplug Freely Connecting Mode Insert it into Eyepiece Tube of Microscope Directly 23 2mm or 30mm Image Velocity 30 PfS VGA I420 15 P S VGA YUY2 SNR gt 48dB Camera Image Control Saturation Contrast Sharpness and so on Working Current Expo Auto Manual sure Working Current lt 200mA Caract ristiques Images de 1 3 millions de pixels Tr s gr
8. e sous peindre d obtenir des variations d clairage importantes si vous vous trouvez sous une source de lu mi re C Mertens Cam ra Deltapix adapt e sur un tube photo avec zoom optique de 0 4 2x ce dispositif permet de conserver la profondeur de champ de l objectif en doublant le grossissement de l objectif initial photo Marcel Lecomte Avantages gt Possibilit de visionner l image en continu et en plein cran d s que l acc s est donn la cam ra au d part du mi croscope tirette lat rale gt L image est en direct et en temps r el l cran on peut parcourir toute la pr paration l aide des molettes de d placement de la platine du microscope gt Possibilit de saisir une image en un clic de souris n importe quel moment et de l enregistrer directement gt Possibilit d effectuer une rotation d image gt Possibilit de saisir seulement une partie de l image et 40 d en liminer tout de suite des parties inutiles gt Possibilit d ins rer du texte dans l image gt Possibilit d effectuer des mesures notre connaissance actuelle il n est pas possible d utiliser une autre barre de mesures qu en pixels sur la cam ra MDCE5A Il s av re donc n cessaire de calculer les coefficients de conversion de la mesure en pixels une mesure en microns Pour ce faire Adaptateur trino avec rep re de hauteur constante IMPERATIF pour r aliser des mesures sous p
9. eine de fausser toutes les informations photo Marcel Lecomte gt Il faut disposer d une lame microm trique gradu e en 1 100 mes de mm une graduation vaut donc 10 um gt Il faut que le tube d accueil amovible de la cam ra soit toujours dispos la m me hauteur marquer un rep re ind l bile et pr cis la jonction avec le support fixe sous peine de fausser les mesures Avec chaque objectif r aliser une photo de la lame microm trique Effectuer une mesure en pixels sur chaque photo de 10 graduations 100 um Calculer le coefficient de conversion CC voici un exemple de calcul r alis sur les 5 objectifs d un BK5000 ce coefficient vi demment sera diff rent sur chaque mi croscope puisqu il varie selon la longueur du tube objectif Longueur mesur e pixels calcul coefficient 10x x10 00 pm 9 S pm 189 100 1 89 1 pixel 100 189 x0 529 220x x5 00 pm 877 S pm 87700 BTT 1 pixel 100 877 x0 265 40x x2 5 400 pm 79 S pm 759 100 7 59 1 pixel 100759 x0 132 7 63x 1 587 400 pm 1080 Coef Corr 1 1 gt 1 pm 1080 100x1 1 711 9 1 pixel 100 1080 1 1 x0 0841 100x 1 SOpm x 2 867 X 2 4704 Coef Corr 1 1 gt 1 pm 1714 100x1 1 18 85 1 pixel 100 1714 1 1 x0 053 il faut savoir que j ai remplac sur mon BK5000 les objectifs 40x et 100x originaux par des plana pochromatiques 63x et 100x de marque Nachet
10. film entier pour obtenir une bonne image Sans certitude Impossibilit souvent de pouvoir recommencer les photos en cas d chec Manque cruel de documentation sur ce sujet YY YNV NV Un Coolpix 995 avec son oculaire photo filet et un adapta teur pos sur un tube trino d un Euromex photo Marcel Le comte Il y a six ou sept ans nous avons consid rable ment progress dans le monde de l imagerie micros copique gr ce l utilisation d un appareil photo nu m rique APN en loccurrence un Coolpix Nikon 995 Cet APN et ses cousins de la s rie Coolpix 990 et 4500 ont balay nombre de difficult s et ont permis aux amateurs de r aliser des progr s impres sionnants notamment gr ce la pr sence d un filet interne sur lobjectif qui a permis de fixer un oculaire photo et de stabiliser l ensemble sur le tube trinocu laire L ing niosit et le bricolage ont jou un r le essentiel dans la conception d adaptateurs divers La microphotographie venait de r aliser un progr s spectaculaire gt Possibilit de r aliser des photos gratuites sans limite de nombre gt R sultats instantan s et directement con tr lables gt Obtention d images faciles am liorer ou corriger gr ce des logiciels de retouche de photos num riques ils sont nombreux sur le march gt Possibilit d changer facilement des photos par l interm diaire du courrier lectronique gt Grande facilit de stockage m
11. immersion Y YV N NN VV Quels que soient la qualit et le prix de votre mat riel la r ussite et la qualit de vos photos passent OBLIGATOIREMENT par une pr paration la plus soign e et la plus fine possibles Cela demande rigueur application soin et m thode Le meilleur des microscopes accompagn d une pr paration de mauvaise qualit donnera des r sul tats nuls ou tr s peu satisfaisants gt pour quelqu un qui est exigeant sur la qualit des images nettet et contraste il faut savoir que m me si vous disposez d un bon objectif 100x plan achromatique n 1 25 il est tr s loin d tre le meilleur gt Pour que votre microscope r ponde de grandes exigences il faut lui apporter un objectif 63x immersion avec n 0 95 1 15 minimum et un 100x immersion avec n 1 30 1 40 les deux en plan apochromatique MAIS il faut savoir que pour ces 2 objectifs en occasion cela co te cher de 500 600 pour un 63x et de 600 1 200 pour un 100x Nous savons tous que le probl me majeur en imagerie microscopique est l absence cruelle de profon deur de champ surtout des grossissements lev s Ce probl me est en partie r solu depuis l apparition de logiciels de superposition d images les 2 plus connus sont Helicon Focus et Combine Z avec ses d clinaisons Leur fonctionnement ne fait pas l objet de cet article mais l utilisation de Combine ZM s av re beau coup plus facile avec une cam
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