Haemophilus influenzae Agglutinating Sera [FR]
Contents
1. FR S rums d agglutination de Haemophilus influenzae 1 DOMAINE D APPLICATION Les s rums d agglutination de Haemophilus influenzae sont destin s tre utilis s lors des tests qualitatifs d agglutination sur lame et lors de la contre immuno lectrophor se CIEP pour une identification s rologique du type de structure des souches pathog nes d H influenzae types a f des fins pid miologiques et diagnostiques 2 RESUME ET EXPLICATION DU TEST Les souches pathog nes poss dent des capsules et sont classifi es en 6 types s rologiques selon la structure chimique des antig nes capsulaires Les souches poss dant ces antig nes sont sp cifiquement agglutin es par l antis rum homologue et le type d une culture encapsul e peut donc tre d fini par des tests d agglutination sur lame Une technique alternative de typage la contre immuno lectrophor se CIEP exploite le fait que sous des conditions appropri es les anticorps migrent vers la cathode sous l influence d un champ lectrique alors que les antig nes migrent vers l anode Des suspensions de bact ries provenant d une culture solide ou liquide et des antis rums sont plac s dans des puits creus s dans une couche de g lose de fa on ce que lorsque la g lose est expos e un champ lectrique les antig nes et les anticorps migrent les uns vers les autres et forment un pr cipit visible en relativement peu de temps Da2. ml 2AM23 RS DGA 2 ml AM2S RDC 2 ml ZM24 R30166401Lnenrnenenernrnes 2 ml ZM25 R3016650Lrererrneeerenrnnes 2 ml L gende des symboles REF R f rence de catalogue Dispositif m dical de diagnostic in vitro Consulter le mode d emploi Limite de temp rature temp rature de conservation Code de lot num ro de lot A utiliser avant date de p remption fabriqu par MEET TLE IFU X7809A r vis e Octobre 2013 E Remel Europe Ltd Clipper Boulevard West Crossways Dartford Kent DA2 6PT UK Pour tout support technique contacter le distributeur local
3. c s le long de l axe d lectrophor se Plusieurs de ces unit s peuvent tre d coup es sur chaque lame une lame de 81 x 81 mm peut accueillir 18 paires de puits voir la figure 1 qui peut servir de calibre Figure 1 J G O O Q Q w G O G G Q A GG GFG Q U G G O J U EC OQ G O G U O a ae a e a Etape 3 A laide d une pipette Pasteur fine remplir le puits anodique de chaque paire avec une quantit suffisante d antis rum sans faire d border Etape 4 De la m me fa on remplir le puits cathodique de chaque paire avec l chantillon tester Etape 5 Placer rapidement la lame dans la cuve de l appareil d lectrophor se et tablir les connexions entre les extr mit s de la lame et les compartiments de la solution tampon l aide de m ches de papier filtre doux imbib es de solution tampon Seuls les 10 derniers millim tres d agarose doivent tre couverts par les m ches Lisser doucement de fa on chasser les bulles d air Remettre le couvercle de la cuve en place Etape 6 V rifier la polarit des connexions la source de courant l antis rum est dans les puits anodiques Brancher le courant et le stabiliser 2 5 mA cm de largeur de gel Etape 7 Au bout d une heure d brancher le courant et retirer la lame de la cuve Observer avec un clairage sur fond noir ou un clairage oblique sur fond noir La lecture est souvent plus ais e si la lame reste immerg e dans une bo te d
4. e Un tel quipement est disponible aupr s de nombreux fournisseurs Peigne tube extr mit tranchante 3 mm de diam tre et appareil d aspiration PROCEDURE DU TEST Test d agglutination sur lame D poser deux gouttes s par es 40 ul chacune de s rum physiologique sur une lame de verre Emulsionner les parties de la culture tester avec une anse dans chaque goutte de s rum physiologique pour obtenir une suspension homog ne et assez dense Dans l une des suspensions utilis es ajouter une goutte 40 ul de s rum physiologique comme t moin et homog n iser Dans l autre suspension ajouter une goutte 40 ul d antis rum non dilu et homog n iser Faire osciller la lame pendant une minute et observer s il se produit une agglutination plus facilement visible sur un fond sombre clair par une lumi re indirecte Eliminer la lame utilis e selon les r gles de d sinfection et d limination appropri es 8 2 Contre immuno lectrophor se Remplir la cuve de l appareil d lectrophor se avec la solution tampon barbital HCI jusqu au niveau requis Etape 1 Etape 2 Creuser des puits dans l agarose avec le peigne en aspirant soigneusement un chantillon de chaque puits l aide d une pipette Pasteur reli e un syst me d aspiration Veiller ne pas endommager les parois des puits Une unit de test est constitu e de deux puits de 3 mm de diam tre s par s de 5 mm et pla
5. e Petri contenant du s rum physiologique pour l observation 9 RESULTATS Agglutination sur lame l agglutination doit tre forte et nettement visible au bout d une minute Il ne doit se produire aucune agglutination visible dans la suspension t moin dans un tel cas la suspension n est pas appropri e pour une analyse par cette m thode Contre immuno lectrophor se En cas de r sultat positif un pr cipit blanc lin aire est visible entre chaque paire de puits perpendiculairement l axe d lectrophor se figure 2 En cas de r action n gative aucun pr cipit n est visible entre les puits Figure 2 LA 10 CONTROLE QUALITE Agglutination sur lame Il est recommand de temps en temps de tester les antis rums comme d crit avec des cultures connues comme tant positives et n gatives Il est conseill d utiliser les cultures homologues comme t moins positifs Utiliser Neisseria lactamica en tant que culture t moin n gative Il est possible de se procurer des souches dot es des s rotypes appropri s dans une souchoth que reconnue telle que NCTC ou ATCC 11 INTERPRETATION DES RESULTATS Agglutination sur lame L agglutination des souches de type e est g n ralement plus fine que celle des autres Les r actions d agglutination sur lame de faible intensit ou qui ont un d lai d apparition sup rieur une minute ne sont pas significatives Si une agglutina
6. er les antis rums au del de la date de p remption indiqu e Eviter la contamination microbienne des antis rums ceci pouvant provoquer des r sultats erron s et r duire la dur e de vie du produit Ne pas modifier la proc dure du test ni le temps d incubation ou les temp ratures Ne pas diluer les s rums d agglutination 5 2 2 5 2 3 Apr s emploi replacer les s rums la temp rature de conservation recommand e Ne pas utiliser d anse bact riologique pour distribuer lantis rum Utiliser le compte gouttes fourni 6 PRELEVEMENT TRANSPORT ET CONSERVATION DES ECHANTILLONS 5 2 4 Le s rotypage ne donne des r sultats fiables que si la culture contient des capsules Il est conseill de s rotyper une souche d s que possible apr s son isolation car la capacit produire des capsules dispara t avec le temps Les souches encapsul es sont reconnaissables par l iridescence caract ristique visible lorsqu une forte lumi re blanche oblique est projet e sur une culture en roissance sur g lose de L vinthal Pour de plus amples informations sur le pr l vement et la r paration des chantillons se r f rer un manuel standard Il est recommand d utiliser des cultures r centes en croissance sur une g lose de L vinthal 7 PROCEDURE MATERIEL FOURNI Voir le paragraphe Composition du coffret MATERIEL N CESSAIRE MAIS NON FOURNI 1 S rum physiologique 0 85 2 Lames de verre 3 A
7. ivent tre conserv s entre 2 et 8 C pour maintenir leur activit au moins jusqu la date inscrite sur le flacon AGGLUTINATING SERUM S rums d agglutination de Haemophilus influenzae Les s rums d agglutination H influenzae sont produits par des lapins et sont conserv s avec du ph nol 0 5 Chaque flacon dot d un compte gouttes et d une t tine contient 2 ml de liquide et est fourni pr t l emploi Lors de leur conservation il arrive que certains s rums se troublent l g rement Ceci n indique pas n cessairement leur d t rioration et ne provoque normalement pas d interf rences avec les r sultats les s rums peuvent cependant tre clarifi s par centrifugation ou par filtration travers une membrane 0 45 um avant l emploi Les s rums fortement troubles sont contamin s et doivent tre jet s 5 PRECAUTIONS ET RESTRICTIONS D EMPLOI Destin exclusivement au diagnostic in vitro R serv exclusivement un usage professionnel Attention Ce produit contient du caoutchouc naturel sec Pourdeplusamplesinformationssurlescomposants potentiellement dangereux se r f rer la fiche de s curit fournie par le fabricant et l tiquetage du produit 5 1 informations de securite 5 1 1 Manipuler toutes les bact ries conform ment aux directives appropri es en vigueur 5 1 2 L quipement non jetable doit tre st rilis en utilisant une proc dure appropri e apr s l empl
8. ns certaines circonstances par exemple en cas de m ningite bact rienne il est important de parvenir l identification de l agent infectieux probable le plus rapidement possible afin de commencer un traitement antimicrobien adapt L antig ne libre peut souvent tre identifi dans les pr l vements de liquide c phalo rachidien par la technique sensible de CIEP Cette technique d identification est particuli rement utile quand la concentration bact rienne du liquide c phalo rachidien est trop faible pour permettre une isolation ou lorsque la viabilit des organismes a t affect e par un traitement antibiotique pr alable 3 PRINCIPE DE LA METHODE Les tests s rologiques sont bas s sur le fait que les anticorps contenus dans le s rum produits en r ponse l exposition des antig nes bact riens agglutinent les bact ries portant les antig nes homologues 4 REACTIFS 4 1 COMPOSITION DU COFFRET S rums d agglutination de Haemophilus influenzae 2ml Type a ZM20 R30166001 1 flacon compte gouttes Type b ZM21 R30166101 1 flacon compte gouttes Type c ZM22 R30166201 1 flacon compte gouttes Type d ZM23 R30166301 1 flacon compte gouttes Type e ZM24 R30166401 1 flacon compte gouttes Type f ZM25 R30166501 1 flacon compte gouttes 4 2 DESCRIPTION PREPARATION ET CONDITIONS DE CONSERVATION RECOMMANDEES Voir galement le paragraphe Pr cautions et restrictions d emploi 2C Les s rums do
9. nse bact riologique et bec bunsen LAN 10 11 8 8 1 Etape 1 Etape 2 Etape 3 Source de lumi re sur fond sombre Chronom tre Pipette Pasteur Tampon barbital HCl pH 8 6 Dissoudre 8 25 g de di thylbarbiturate de sodium dans 1 litre d eau distill e et ajouter 38 2 ml d acide chlorhydrique 0 2N afin d obtenir un pH de 8 6 ATTENTION Le barbital HCl est nocif par ingestion Se laver soigneusement les mains apr s manipulation Agarose 1 Ajouter 1 g d agarose 100 ml de tampon barbital HClI et dissoudre en chauffant dans un bain marie en bullition pendant 5 10 minutes M langer doucement en vitant la formation de bulles d air et s assurer que l agarose se dissout en totalit et se r partit de fa on uniforme Les flacons de gel peuvent se conserver temp rature ambiante 18 30 C pendant 4 semaines maximum Lames recouvertes d agarose Faire fondre le contenu d un flacon de gel d agarose 1 dans un bain marie en bullition et distribuer sur des lames en verre propres pos es sur une surface plane La couche de gel doit avoir 1 1 5 mm d paisseur pour une lame de 26 x 76 mm 3 ml d agarose suffisent alors qu une lame de 81 x 81 mm n cessite 10 ml d agarose Les lames inutilis es une fois solidifi es peuvent tre conserv es 24 heures entre 2 et 8 C en chambre humide Appareil d lectrophor se appropri pour une lectrophor se sur g los
10. oi bien que la m thode la plus appropri e soit la st rilisation par autoclave pendant au moins 15 minutes 121 C Le mat riel usage unique doit tre st rilis par autoclave ou incin r Les claboussures de mat riaux potentiellement infectieux doivent tre limin es imm diatement l aide d un papier absorbant et les surfaces contamin es doivent tre nettoy es avec un d sinfectant anti bact rien standard ou de l alcool 70 Le mat riel utilis pour le nettoyage des claboussures y compris les gants doit tre limin comme s il s agissait de d chets biologiquement dangereux Ne pas effectuer les pipetages la bouche Pour manipuler les chantillons et effectuer le test porter des gants usage unique et une protection des yeux Une fois le test termin se laver soigneusement les mains Ces r actifs contiennent du ph nol Bien que sa concentration soit faible le ph nol est connu comme tant toxique par ingestion et par contact avec la peau Ne pas avaler les r actifs Si l un d entre eux entre en contact avec la peau ou les yeux laver la surface en rin ant imm diatement et abondamment l eau 6 Conform ment aux bonnes pratiques de laboratoire il est fortement recommand de traiter les chantillons et r actifs comme s ils taient potentiellement infectieux et de les manipuler avec toutes les pr cautions n cessaires 5 2 Precautions d analyse 5 2 1 Ne pas utilis
11. ssociation avec un test biochimique 13 RESULTATS ATTENDUS Agglutination ou pr cipitation visible en pr sence de cultures et antig nes homologues 14 CARACTERISTIQUES SPECIFIQUES Les antis rums ZM20 R30166001 ZM25 R30166501 doivent donner une agglutination visible dans les tests d agglutination sur lame et une pr cipitation lin aire dans le test par CIEP avec les antig nes capsulaires de H influenzae de type a b c d e et f respectivement 15 BIBLIOGRAPHIE 1 Turk D C and May J R 1967 Haemophilus influenzae London English Universities Press 2 Myhre E B 1974 Typing of Haemophilus influenzae by counterimmuno electrophoresis Acta path microbiol scan B 82 164 3 Edwards E A Muehl P M et al 1972 Diagnosis of bacterial meningitis by counterimmunoelectrophoresis J Lab Clin Med 60 449 4 Myhre E B 1974 Rapid diagnosis of bacterial meningitis Scand J Infect Dis 6 237 gt Aaron L Handzel Z et al 1974 Monospecific serum for typing Haemophilus influenzae type b produced by immunization with Escherichia coli strain Easter J Biol Stand 2 25 Argaman M Liu T Y et al 1974 Polyribitol phosphate an antigen of four gram positive bacteria cross reactive with the capsular polysaccharide of Haemophilus influenzae type b J Immunol 112 649 16 CONDITIONNEMENT REF 7M20 R30166001 rrrrrrrrrrrerrnnnes 2ml ZM21 R3016610Lrrernerrneneerenrnnes 2
12. tion est observ e dans la suspension t moin la culture n est pas adapt e au test Contre immuno lectrophor se Si la concentration d antig ne est faible le pr cipit peut tre peu visible et l interpr tation sera alors facilit e par l utilisation d une loupe Les r actions sont suffisamment stables pour que les r sultats restent inchang s pendant plusieurs heures mais les lames doivent tre lues imm diatement apr s l arr t de l lectrophor se Si l on souhaite conserver une trace durable les lames peuvent tre lav es color es et s ch es selon les techniques classiques 12 LIMITES DE LA METHODE L absorption des s rums d agglutination de H influenzae a t effectu e de fa on assurer leur sp cificit pour l esp ce H influenzae Toutefois des r actions crois es ont t observ es avec des organismes d autres esp ces f est important de confirmer l esp ce de l organisme isol par les techniques classiques de morphologie de culture et de biochimie Cette r serve s applique toutes les m thodes de tests s rologiques et rappelle que la CIEP doit compl ter les techniques classiques plut t que les remplacer Si la concentration d antig ne n est pas suffisante dans l chantillon le r sultat obtenu sera alors n gatif Les antis rums fournissent uniquement une identification s rologique l identification compl te d un organisme doit se faire uniquement en a
Download Pdf Manuals
Related Search