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Noémie Marcoz

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1. 4 5 e conc a 4 m conc b 3 5 x conc d a conc e 3 e conc f r f 2 5 0 8 24 48 temps j Figure 8 Variation du pH mesur sur le lot E Variation du pH en fonction du temps pour le lot F 4 5 e conc a 4 m conc b a cone c 3 5 x conc d I x conc e o 3 e conc f r f 2 5 0 8 24 48 temps j Figure 9 Variation du pH mesur sur le lot F Commentaires Une seule valeur a t prise pour le to pH 3 62 Pour le lot D sur 24 h la variation de pH est insignifiante il y a une baisse a 48h surtout pour les faibles concentrations La lumiere a donc une petite influence sur le pH a partir de 48 h La plus forte variation est de 0 57 unite de pH elle est plus importante que dans les deux autres lots mais reste toujours assez acceptable 52 Le pH est stable sur 48h et touta fait homogene quelle que soit la concentration sauf pour la concentration la plus dilu e qui s loigne le plus de la reference alors qu elle est recommand e par le fabricant Par contre la reference n a pas t conservee dans les m mes conditions de frigo c est una ampoule conserv e dans sa bo te dans un placard et qui est fraichement ouverte chaque jour de mesure de pH C est dans le lot F que la variation de pH est la moindre La concentration des solutions n a aucune influence su
2. dilution c lt dilution d x dilution e e dilution f r f rence gt gt gt O du J O ho O O se Far c dom O A 20 30 Temps h Figure 12 variation de la teneur en principe actif en fonction du temps pour le lot E Commentaires Dans le lot D la concentration la plus faible subit une perte importante en amiodarone d s les huit premi res heures 60 et cette perte se poursuit pour atteindre une baisse de 76 au bout de 48h Les autres concentrations subissent aussi une perte en principe actif elle reste acceptable apr s 24h mais sur 48h d passe les 10 autoris s 54 Une hypothese pourrait tre qu il y a une adsorption du produit sur la seringue 17 mais compte tenu du fait que le ph nom ne est nettement att nu lorsque les seringues sont stock es l abri de la lumi re cette hypoth se peut tre cart e Cette perte exceptionnelle est uniquement marqu e dans le lot D qui subit l influence de la lumi re On pourrait alors penser une photodegradation Il a t bien d crit que amiodarone est photosensible sa principale r action de d composition tant une r action de deshalog nation avec formation d un singulet d oxyg ne en passant par l tat triplet de Pamiodarone elle m me 37 Selon la litt rature la cin tique principale d une r action de photolyse est un processus de prem
3. ni pr cipit Evolution de l aspect au cours du temps Aucun changement n est apparu jusqu a tz Les solutions conservent un aspect visuel identique aux solutions de d part a to Chaque solution de concentration croissante est donc visuellement stable sur une p riode de 48 h La concentration n a aucune influence sur la stabilit visuelle 50 gt Variation du pH Ces mesures de pH ne sont que indicatives elles ne refl tent pas un activit ionique du H car le milieu de travail n est pas 100 aqueux les chantillons sont des solutions de Cordarone dilu es dans du glucose 5 Toutefois ces mesures sont effectu es pour permettre d avoir une comparaison de pH par rapport a une reference et de pouvoir observer surtout sa variation au cours du temps La solution de r f rence est aussi une solution non aqueuse a 100 puisqu il s agit d une ampoule de Cordarone pure 50 mg ml non dilu e On ne cherche pas a mesurer la concentration ionique des protons mais comme dans toute tude de stabilit voir la variation de ce parametre important qu est le pH Variation du pH en fonction du temps pour le lot D la 4 conc a 4 m conc b conc c 3 5 lt conc d conc e 3 e conc f ref 2 5 0 8 24 48 temps j Figure 7 Variation du pH mesur sur le lot D 51 Variation du pH en fonction du temps pour le lot E
4. BUG if UNIVERSITE DE GENEVE HOPITAUX UNIVERSITAIRES DE GENEVE FACULTE DES SCIENCES DEPARTEMENT APSIC SECTION DE PHARMACIE PHARMACIE DES HUG Mars Juin 2003 Memoire pour le travail de diplome d analyse pharmaceutique ETUDE DE STABILITE DES SOLUTIONS INJECTABLES D AMIODARONE Pr sent le 08 juillet 2003 par No mie Marcoz Sous la supervision du Dr P Bonnabry PD Membres du jury Prof J L Veuthey Prof R Gurny Dr A M Sautter Dr S Rudaz Mr H Ing TABLE DES MATIERES ISTE DES ABREYV UA TIONS o a 3 gt ADS PROD ans saacnss ss auc tases eu caatsccsgeneessaczsesouatunescaczans T 3 ah os Oe 134 Dr OREA rence E ren rr en ed ie E 4 DE INT RODOC TION 1 en T te een te eo 4 LZUNE SUBSTANCE AMIODARONE nine n s tentera tee aire edited 6 TAUNE METAIODE REC errr ter tern ee nen ce eee mer ce ere kere ae arene re 10 TA BIBLIOGRAPHY llos 13 PARTIETEAPE RIMENTALE 00 16 Td MATERIEL ET METHOD ES AAA 16 Pele TUB Is OCU EEEE en a O EE T O 16 DED ges Tit Cia UM TU iii od 17 1 1 3 Mise au point de la m thode et optimalisation des conditions 17 11 2 VALIDATION ET ROBUSTESSE DE LA METHODE 18 EZA VA ALOU sects ay hts AS a o is 18 AZ ROD ds Mea d 19 11 53 PARAMETRES DE L ETUDE DE STABILITE ressens E aiii 21 IES oducts e E Nel 21 1 3 2 Pr paration des lots d chantillons et des dosages 22 HARE SOLITATS ET DISCUSSION Se ida 29 WA lise pont de la method Sen in Sen nee Mens anes 29 HE 2 I
5. Chaque solution de concentration sp ciale des seringues est dilu e a 0 1 mg ml avant d tre dos e cf annexe p64 65 1 3 2 3 Partie 3 Le troisieme volet du travail traite des incompatibilites physico chimiques de la Cordarone avec plusieurs autres medicaments en effet les patients des SIM sont souvent polym diqu s et on ne dispose pas toujours d une voie veineuse differente pour chaque m dicament injectable On a donc souvent recours a les administrer simultan ment en Y dans la m me veine gt Preparation des chantillons Apres etude de la bibliographie il appara t inutile de tester le melange avec l h parine car celle ci est incompatible Nous aurons donc 7 m dicaments a tester L tude d incompatibilit physico chimique est effectu e selon le protocole utilis en routine au laboratoire de Contr le Qualit de la pharmacie des HUG Ce document interne r sultant d une synth se bibliographique des diff rentes m thodes utilis es dans divers laboratoires a t r dig par C Sierro Tests d incompatibilit s physico chimiques 1994 Dans chaque s rie chaque m dicament est test sa ses concentration s clinique s habituelle s La concentration clinique th rapeutique est nomm e M son double est donc 2M Diff rentes proportions de chacune d elle sont test es car tr s souvent la concentration du m dicament administrer change rapidement d une modification de posologie d cid e par l
6. 13 25 Selon de nombreux auteurs lorsque l amiodarone est m lang e a de nombreux principes actifs deux deux elle s av re tre compatible avec un certain nombre d entre eux sur une p riode de 24h 25 26 27 28 mais ne l est pas par exemple avec l h parine 12 Mais toute litt rature donne des m langes de m dicament toujours deux a deux et a des concentrations pr cises Or dans un service de soins intensifs ou l tat des patients est critique avec plusieurs organes vitaux pouvant tre touch s les concentrations des m dicaments utilis s sont souvent tres sup rieures a celles recommand es par le fabricant ou utilis es en routine dans d autres services Donc les conditions different de celles de la litterature Il est alors justifi de faire ces tests in vitro au laboratoire pour se placer dans les conditions exp rimentales r elles des SIM les livres tant trop loign s de la r alit du service Les incompatibilit s tant par d finition le r sultat d un changement physico chimique peuvent se manifester par la formation d un pr cipit un changement de coloration une opalescence un d gagement gazeux un changement de pH invisible et une diminution de teneur en principe actif invisible 29 Ces ph nom nes dont les origines peuvent tre tres vari es comme les probl mes de solubilisation de complexation d oxydo r duction d hydrolyse ou de r actions acide base ont t bien d crites 30 31
7. 32 car elles pr sentent un risque lev si un m lange est inject alors qu il est incompatible Un autre type d incompatibilit est une causes physique se manifestant par l adsorption du m dicament sur son contenant ou la desorption de celui dans la solution m dicamenteuse La photodegradation est une reaction chimique catalys e par la lumiere et provoque une decomposition du principe actif suite a un rearrangement mol culaire 29 Certains m dicament sont a conserver a l abri de la lumi re comme la Cordarone 4 et d autres comme Adalat n cessitent m me d tre prot ger durant le perfusion a l aide de tubulures noires Le pharmacien effectue aussi une r flexion th orique par rapport aux propri t s physico chimiques du principe actif qui permet parfois de pr voir telle ou telle r action lors d administration simultan e Ainsi l amiodarone poss dant un pH de environ 3 3 5 est un m dicament acide qu il faut donc viter de m langer avec un base Par ailleurs sa solubilit est moindre et le fabricant est oblig d y ajouter du polysorbate 80 comme co solvant afin de faire une forme injectable De ce fait les reactions de cette preparation lors de dilutions sont donc peu pr visibles surtout si on y ajoute un autre principe actif lors d un m lange La vigilance contre une ventuelle pr cipitation due a cette solubilit r duite est donc de rigueur On consid re qu un m lange de m dicaments est stable
8. Philadelphia 2001 pp 65 89 6 J Calop and coll Administration des m dicaments voie intraveineuse Dans P A Sado Pharmacie clinique g n rale Paris 1990 pp 81 95 7 D Fishman L arr t cardiorespiratoire Medecine amp Hygiene 2362 1911 19 2001 8 M SS Chow Intravenous amiodarone pharmacology pharmacokinetics and clinical use The Annals of Phamacotherapy 30 637 43 1996 9 Pharmacop e Europ enne Conseil de l Europe 4e dition Strasbourg 2002 10 The Merck Index M J O Neil 13th edition Whitehouse station 2001 p 84 11 Site internet Sci finder Scholar 12 Australian Injectable Drugs Handbook First Edition South Melbourne 1997 p 27 13 L A Trissel Handbook on Injectable Drugs C Reilly 11 edition Bethesda 2001 p 97 14 Soci t Suisse des Pharmaciens de l Administration et des H pitaux Questionnaire sur les sp cialit s pharmaceutiques Cordarone Labaz Sanofi Pharma AG Bale 1982 15 M Lagler C Elene et I Arnet Compendium Suisse des M dicaments J Morant et H Ruppanner Documed SA 24 dition Bale 2003 pp 582 583 13 16 N Goldschlager and coll Practical guidelines for clinicians who treat patients with amiodarone Arch Intern Med 160 1741 1748 2000 17 S J Weir V A Szucs Myers K D Bengtson and C T Ueda Sorption of amiodarone to polyvinyl chloride infusion bags and administration sets American Journal of Hospital Pharmac
9. r sultats visuels de l tude de canton acc l r e toi changements voues sees Chargement a spese OY A a PR egos fo i rs o D Coloration jaune Visuellement toutes les solutions subissent un changement sauf la solution acide Par contre toutes ne donnent pas forc ment une modification du spectre UV alors m me qu elles semblent visuellement d grad es Cf figure 2 3 50 241 09 2 219 3 0 241 90 2 1921 2 5 J04 61 2 0924 20 39710066 15 1 0 200 0 210 220 230 240 250 260 270 280 290 300 0 nm bleu Cordarone ug ml HCI rouge Cordarone g ml NaOH vert Cordarone ug ml H202 turquoise Cordarone ug ml r f rence rose Cordarone ug ml UV Figure 2 Spectres UV des produits de d gradation avec comparaison a la reference 31 C est pourquoi afin de verifier l apparition de produits de degradation une injection de chacune est r alis e en HPLC et les chromatogrammes sont compar s de facon qualitative uniquement a celui de l amiodarone pure Tableau 5 r sultats des observations des chromatogrammes des produits de d gradation Observations qualitatives du chromatogramme Disparition compl te du pic de l amiodarone Disparition complete du pic de l amiodarone Apparition de produits de d gradation Diminution du dd de l amiodarone o soprano Diminution du pic de l amiodarone e soprano De nombreux produits de d gradation apparaissent sur les chromatogrammes al
10. 17 a 19 pp 69a 69c 69 V 4 2 Etude de sp cificit gt Etude de d gradation acc l r e Chrom Type Fixed WL Chromatogram 206 nm D 6 7 0 5 d i E J 0 4 7 3 0 3 0 1 j 0 2 4 Cul Ll L x E 0 1 ef i o i A zN q i EN k 0 0 a tp H ET TT rror T FT z TTTTTT TT y TT T n E ae a es er a L o 1 2 3 i gt Retention Time min Figure 20 chromatogramme HPLC de Cordarone a la lumiere du jour pendant 1 mois 2 00 Bleu Cordarone 10 gimi pr par e extemporanement Vert Cardarene 10 mi laiss e 3 la lurni re du jour pendant 30 jours rouge Cordarone 10 pgm laiss e la lurn re du jour pendant 46 jours Figure 21 Spectres UV de Cordarone extemporan e Cordarone lumi re du jour pendant 30 jours et 46 jours gt Tween et effet m moire Cf figures 22 a 27 pp 70a 70f 70 V 5 ROBUSTESSE Coefficients des diff rents facteurs ro Cc O _ D x Hd uodule OU0D NOPN Hd UOdWE 2U09 uodwey 2U09 NO8W Hd N98W uodue 9U09 NOS SJU9191J909 sultats des kK resu Figure 28 71 D Cc O _ TD d p gt e Hd uodue OU0D NOSIN Hd uodue OUND uodue 9u0 NO8W Hd NOSW uodue 2U09 NOSN SIU91911J809 ltats des asym tries L resu Figure 29 O O _ ao Lo Q E O O QQ 10 1
11. Point central AO BO CO 2 5 50 26 5 Point central AO BO CO 2 5 50 26 5 5 A B C 2 3 45 29 6 A B C 23 45 24 Point central AO BO CO 2 5 50 26 5 7 A B C 2 3 55 24 Point central AO BO CO 2 5 50 26 5 8 A B C 2 7 45 29 20 11 3 PARAMETRES DE L ETUDE DE STABILITE 11 3 1 Introduction Il est demande d tudier la stabilite physico chimique des differents chantillons pr par s selon le plan ci dessous La m me tude de stabilit sera appliqu e pour les 3 parties e La premiere etude est une valuation visuelle des solutions afin d observer d ventuels changements pr cipitation d gagement gazeux changement de coloration a laquelle s ajoute des mesures de pH pour voir son volution On tudiera l influence de la lumi re naturelle pendant le stockage pour voir si comme il est pr cis dans la litt rature 37 38 le principe actif se d grade au cours du temps dans ce conditionnement different du conditionnement initial en ampoule a 150 mg ml et aussi l influence de la temp rature de conservation 4 et T ambiante e Pour valuer les ph nom nes chimiques non visibles un dosage analytique de l amiodarone est pr vu afin de comparer les concentrations obtenues a des intervalles de temps pr cis avec une concentration initiale a tp correspondant a 100 du principe actif et servant de t moin L observation devra tre effectu e sur une longue dur e 6 mois max car il serait souhaitab
12. adapt e a l usage pour lequel elle est pr vue Son objectif est de prouver que les r sultats qu elle permet d obtenir sont fiables Dans une phase de validation il est v rifi la lin arit capacit d obtenir des r sultats directement proportionnels a la concentration l exactitude accord entre la valeur th orique exacte et la valeur obtenue et la fid lit Cette derniere est valu e par la r p tabilit et la fid lit interm diaire Cette partie de l tude permet donc de valider la m thode d analyse mise au point pr c demment Elle s effectue sur trois jours et permet de verifier la lin arit l exactitude et la pr cision de la m thode Ces criteres sont valu s chaque jour gr ce aux solutions fraiches suivantes 1 5 standards de calibration de 50 75 100 125 et 150 de solution reconstitu e Std 2 5 solutions de 50 75 100 125 et 150 de formulation m dicamenteuse du commerce Raf 3 6 solutions nominales de 100 de formulation m dicamenteuse du commerce fid lit Les standards de calibration sont constitu s par une solution de formulation reconstitu e et non par une solution aqueuse de principe actif car la suite d une premi re validation effectu e de la sorte il est apparu que le PA aqueux ne convient pas pour doser l ampoule d a un effet de matrice Il a t d montr qu il est n cessaire de doser les ampoules de Cordarone l aide d un standard constitu par une fo
13. analys s Avant d effectuer le dosage proprement dit des chantillons des lots A B et C il s agit de pr parer les standards Raf reconstituted dosage form permettant de tracer la droite de calibration et de recalculer les concentrations obtenues Pour cela chaque jour de dosage une nouvelle solution Rdf est constitu e en m langeant l amiodarone et ses excipients selon la m me formule qu une ampoule de Cordarone mais dilu e 100 fois Cf formule en annexe pour tre dans le domaine analytique Cette solution mere de Rdf est a nouveau dilu e directement dans des vials de fa on obtenir les concentrations de calibration d sir es Le domaine de calibration choisi est le m me que celui de la validation mais pour la phase de dosage la droite de standards est constitu e uniquement des trois points 50 100 et 150 correspondant a 50 100 et 150 ug ml 23 D autre part une solution mere de reference est constitu e par une ampoule de Cordarone fraichement ouverte et dilu e a la m me concentration que la solution Raf soit 0 5 mg ml puis une nouvelle fois dilu e a 100 ug ml Cette reference nous permet de v rifier le dosage exact d une ampoule cens e tre a 100 et nous permet ainsi de ramener toutes les concentrations obtenues pour chaque solution cette valeur de r f rence Par exemple si une ampoule r f rence est dos e a 108 c est cette valeur qui servira de 100 pour les calculs Il faut pr ciser que le fabrican
14. d HPLC en phase invers e sp cialement d velopp e pour cette tude Cette m thode robuste et sp cifique a t valid e Les solutions de 50 mg ml sont stables pendant 30 jours celles de concentrations inf rieures le sont sur minimum 24 h si elles sont conserv es au frais et l abri de la lumi re La lumi re et la temperature doivent tre contr l s car ils provoquent une degradation de la substance et une perte de teneur en principe actif dans ces seringues La concentration la plus dilu e recommand e par le fabricant est tres instable si elle n est pas prot g e de la lumi re Une tude d incompatibilit physico chimique a t effectu e de fa on visuelle sans dosage Neuf m langes ont t constitu s entre differents principes actifs couramment utilises dans le services des soins intensifs de m decine et la Cordarone dilu e a 0 6 mg ml pour la premiere s rie A et a 25 mg ml pour la deuxieme B ll est possible d affirmer que tous les m langes sont stables 24 h pour la s rie A ce qui n est pas le cas pour la B ou de nombreux m langes deviennent opalescents Donc ces principes actifs ne devraient pas tre administr s simultan ment a la Cordarone 25 mg ml En r sum notre tude a permis de valider la stabilit de la solution non dilu e en seringues et la pratique de dilutions non recommand es par le fabricant mais appliqu es en routine aux soins intensifs de m decine
15. dure n est pas jug e fidele 11 4 3 5 Limites de confiance des r sultats d analyse Les limites de confiance 95 des r sultats d analyse sont d finies comme suit IC x t V SR N Ou SR 6 639 t de student pour 15 d d l 2 16 N 1 car 2 injections du m me vial pour un chantillon Donc ici IC x 5 56 44 114 4 Etude de la robustesse de la m thode 1 4 4 1 Pr paration des solutions La solution utilis e est une Raf dont la concentration quivaut a la valeur centrale du domaine de concentrations tudi es soit 100 100 ug ml pr par e a partir d une solution mere a 0 5 mg ml 11 4 4 2 R sultats Pour voir quelle est l influence de la variation des facteurs A B C les param tres k asym trie et surface du pic d amiodarone sont relev s Selon le plan d exp rience huit essais sont effectues de facon al atoire entre lesquels sont intercal s six essais au point central servant de reference Chaque essai est compose de deux injections a essais au point central Tableau 19 r ponses des essais au point central po R ponses obtenues _ _ _ _ _ _ _ _ po RH 1998249 481 FS 2207589 po 1996845 A 6 50 ts k 1719347 b essais du domaine tudi Tableau 20 r ponses des essais du domaine tudi A R ponses obtenues po 10 90 2008423 7 Y 2 90 1 34 1998027 TA 12 33 1723733 45 c Analyse des r sultats Chaque facteur agit d
16. la m thode est sp cifique et permet la s paration des excipients de la Cordarone et de ses produits de d gradation 36 1 4 3 Validation de la m thode d analyse Comme indiqu dans la litt rature 35 36 les crit res lin arit exactitude et fid lit ont t tudi s sur 3 jours grace aux solutions de Std Rdf de 50 75 100 125 et 150 ug ml et aux solutions fid lit de 100 ug ml Chaque solution est inject e deux fois 1 4 3 1 Lin arit a Droites de r gression lin aire Tableau 6 donn es solutions Std jour 1 Tableau 7 donn es solutions Raf jour 1 Std Concentration Surface Rdf Concentration Surface J1 mg ml moyenne J1 mg ml moyenne 50 0 04894 962765 50 0 05000 951694 75 0 07341 1489709 75 0 07500 1465837 150 0 14682 3117563 150 0 15000 3077989 quation des droites pour le jour 1 Std y 2 10 x 129348 r 0 9995 Rdf y 2 10 x 118368 r 0 9993 Tableau 8 donn es solutions Std jour 2 Tableau 9 donn es solutions Raf jour 2 Std Concentration Surface Rdf Concentration Surface 100 0 09812 2022614 100 0 10000 2100776 125 0 12265 2939705 125 0 12500 2624901 150 0 14718 3132058 150 0 15000 3222329 37 Equation des droites pour le jour 2 Std y 2 10 x 118002 r 0 9993 Rdf y 2 10 x 116356 r 0 9997 Tableau 10 donn es solutions Std jour 3 Tableau 11 donn es solutions Raf jour 3 Std Concentration Surface Rdf Concentration Surfa
17. les variations obtenues lorsque les analyses sont faites sur des jours differents mais dans un m me laboratoire la notion de jour refl tant un changement de phase mobile etc Le tableau suivant r sume les calculs des coefficients de variation de r p tabilit et de fid lit interm diaires 43 Tableau 18 r sultats des variances et coefficients de variation pour la fid lit Variance du groupe Jour 1 1 0217 Variance du groupe Jour 2 1 4287 Variance du groupe Jour 3 1 0487 Moyenne n 18 98 78 Variance de r p tabilit S Variance inter groupe Sy Variance de fid lit interm diaire SR Coefficient de variation de r p tabilit CVr Coefficient de variation de fid lit interm diaire CVR d Discussion La variance de r p tabilit est acceptable mais d l ajout de la variance inter groupe la variance de fid lit interm diaire devient grande ce qui refl te un effet jour qui tait d j connu avec le probleme de la grande dispersion des r sultats du jour 3 e Conclusion Sur l ensemble des trois jours les coefficients de variation pour la r p tabilit et la fid lit interm diaire sont assez lev s donc la m thode n est pas consid r e comme fid le notamment a cause de cet effet jour I1 4 3 4 Conclusion sur la validation Le mod le lin aire convient pour cette validation Une droite de calibration est choisie plut t qu un talon externe a 100 Mais la proc
18. licate car si l on souhaite obtenir principalement des interactions hydrophobes avec la silice greff e la base tudi e devrait se trouver sous forme mol culaire ce qui n cessiterait de travailler a pH pka 2 Or cela d passe souvent largement le domaine de stabilit des colonnes courantes compris entre pH 2 et pH 8 Pour pallier ce probl me il faut travailler en milieu acide o la base se retrouve alors sous forme cationique Une deuxi me possibilit est d utiliser une colonne sp cialement adapt e l analyse des bases comme la C18 Nucleodur gravity La colonne Nucleodur gravity C18 125x4 5um est une colonne dite sp ciale base car elle permet l analyse des compos s basiques m me des pH tr s lev s La colonne utilis e est en effet garantie par le fabricant jusqu pH 11 Elle est aussi appel e colonne d sactiv e car elle est greff e mais l int rieur des cha nes C18 sont intercal s des motifs polaires bloquant l acc s aux silanols r siduels emp chant ainsi des interactions ioniques suppl mentaires Ce sont donc principalement les interactions hydrophobes qui ont lieu et permettent ainsi la r tention sp cifique du compos s parer 11 D finitions La recherche des meilleures conditions de dosage se fait en faisant varier differents parametres pH du tampon proportion de solvant organique et en observant les reponses induites en fonction de ces changements Pour cela il s agit d tudier
19. maximum vers 238 nm mais le spectre fourni ne ressemble pas a celui de amiodarone Cf figures en annexe pp 70a 70f A ce stade il serait possible de dire que le tween a une absorption qui lui est propre et qui interfere avec le PA ll faudrait dans ce cas travailler a une longueur d onde qui permettrait de moins le d tecter voire plus du tout comme par exemple a 205 206 nm Toutefois pour confirmation le spectre de l excipient est effectu sur un appareil UV classique car selon sa structure chimique ce compos n est pas sens absorber en UV Le spectre obtenu nous confirme cette hypothese le tween pr sente un spectre pratiquement plat pas du tout caract ristique et qui ne ressemble pas non plus au spectre obtenu sur le DAD cf figure 26 annexes p 70e Mais il est vrai que l absorption a 244 nm n est pas nulle Donc bien qu il puisse avoir une absorption a la longueur d onde a laquelle le travail a t men jusqu a pr sent celle ci est tout a fait n gligeable et sur les chromatogrammes tudi s ce n est certainement pas ce compos qui est d tect e D autre part des injections r p t es et altern es de tween 20ug ml et de phase mobile sont effectu es afin d observer un ventuel effet m moire cf figure 27 annexe p Of 35 Le chromatogramme obtenu d montre que m me apres deux injections successives la ligne de base n est pas parfaitement plate et qu chaque fois que le tween est inject il sort le
20. un m tabolisme principalement h patique une faible clearance et une longue demi vie 52 j L amiodarone est m tabolis e par le cytochrome 3A4 en N des thylamiodarone son principal metabolite lui m me actif en tant qu antiarythmique L limination se fait principalement par la bile et tres peu par le rein L amiodarone est fortement li e aux prot ines plasmatiques gt 96 8 16 Les effets secondaires de la substance sont aussi li s sa nature lipophile car l amiodarone et son metabolite s accumulent dans le foie le tissu adipeux les poumons et d autres organes L accumulation pulmonaire est potentiellement fatale D autres effets ind sirables tels que hypotension bradycardie perturbation de la thyroide micro d p ts corn ens et photosensibilit sont plut t rencontr s lors de l utilisation de la forme orale Lors d injections il peut y avoir baisse de tension veinite bouff es de chaleur et sueurs 14 La principale m thode utilis e pour analyser et doser l amiodarone est la chromatographie liquide a haute performance en phase inverse ou normale 17 18 19 20 21 22 23 Mais cette methode est aussi compar e a la technique de spectrometrie UV vis 24 D autre part lorsqu il s agit d aborder une question concernant un probleme de compatibilit entre plusieurs medicaments le premier reflexe est de se referer a la litterature qui regroupe des tables d incompatibilit s entres principes actifs
21. 00000 S U9191909 200000 300000 400000 Hd uodue JUOI NISWS Hd uodwg 9U09 uodwey uon NO9N Hd NOSW uodwg 9U09 3sultats des surfaces resu Figure 30 12 gt Remerciements Je tiens a remercier toutes les personnes qui m ont permis d avancer lors de cette etude et d arriver a conclure ce travail de diplome Plus particulierement Monsieur Bonnabry pour m avoir accept e dans son service et m avoir ainsi permis d effectuer ce travail de dipl me Monsieur Ing pour m avoir guid e a l int rieur du laboratoire de la pharmacie Madame Sautter pour m avoir expliqu toute la partie clinique du travail et int gr e lors de ses visites du service des Soins Intensifs de M decine Madame Roulin pour m avoir gentiment accueillie dans son service et expliqu le fonctionnement des SIM Messieurs Veuthey et Rudaz pour leur collaboration et leur aide pr cieuse dans la poursuite de ce travail Monsieur Saadi pour son soutien moral et son aide technique au sein du laboratoire de la pharmacie Monsieur Sadeghipour pour son aide aux calculs Monsieur Schelling pour m avoir aid e concernant la validation de la m thode et pour son soutien moral Madame Stella pour m avoir soutenue et apport son aide Merci toutes ces personnes pour le temps qu elles m ont accord et les pr cieux conseils qu elles m ont dispens s 73
22. 5 groupe 2 101 16 16 594 104 68 groupe 3 95 22 groupe 4 100 21 97 23 Recouvrement moyen 100 4 Coefficient de d termination r 0 9729 b Etude statistique de l exactitude pour les 3 jours Tableau 15 Exactitude sur jours 1 2 3 avec talon externe a 100 Etude statistique Jour 1 2 3 Constantes statistiques Homog n it des variances C calcul 0 542 C 0 05 5 2 0 684 Cochran Variance de l talon externe inter groupe S C Variance inter analyses 17 637 intra groupe SE Validit des moyennes Fa Fa 3 467 F 0 05 4 110 3 48 Ecart type total S 5 484 t 0 05 14 2 145 Rendement moyen 98 84 3 04 41 Tableau 16 Exactitude sur jours 1 2 3 avec droite de r gression Etude statistique Jour 1 2 3 Rdf Constantes statistiques Say 77 316 5S2 119 621 Homog n it des variances C calcul 0 646 C 0 05 5 2 0 684 Cochran Variance de la r gression 23 066 inter groupe SC Variance inter analyses 23 924 intra groupe S E Validit des moyennes Fa F3 0 964 F 0 05 4 10 3 48 Ecart type total Sr 4 866 t 0 05 14 2 145 Rendement moyen 100 4 2 69 c Discussion La variance est homog ne pour les 5 groupes il n y a pas de biais donc statistiquement un talon externe suffirait Toutefois au vu des r sultats des concentrations de 50 et 150 qui different beaucoup il aurait t souhaitable pour la qualit de refaire un jour 4 de v
23. F J Holler Chimie analytique De Boeck amp Larcier s a 7 dition Paris Bruxelles 1997 pp 701 707 35 J Caporal Gautier et coll Guide de validation analytique Rapport d une commission SFSTP S T P Pharma pratiques 2 4 205 226 1992 36 S Rudaz Cours validation d une procedure analytique Geneve 2003 37 N Paillous and M Verrier Photolysis of amiodarone an antiarythmic drug Photochemistry and Photobiology 47 337 343 1988 38 D E Moore Standardization of photodegradation studies and kinetic treatment of photochemical reactions In H H Tonnesen Photostability of drugs and drugs formulation London 1996 pp 74 76 15 II PARTIE EXPERIMENTALE 1 1 MATERIEL ET METHODES 11 1 1 Produits Le principe actif utilis chlorhydrate d amiodarone gt 98 lot n 061K1807 provient de Sigma Aldrich Gmbh 59552 D Steinheim La forme m dicamenteuse test e est la Cordarone dos e a 50mg ml d amiodarone elle est distribu e par Sanofi Synthelabo SA 1217 Meyrin Ge Un lot unique n 826 est utilis pour l tude Le polysorbate 80 EP 4 employ pour faire la formulation reconstitu e est le lot n 0000114965 de Schweizerhall Chemie AG 4013 B le alors que l alcool benzylique de lot n 988797 provient de la maison Siegfried Les solvants d analyse utilises sont l ac tonitrile pour HPLC lot n 055391236 de Merck KGaA 64271 Darmstadt ainsi que le lot S 13620 402 de qualit sup r
24. GS de SPCC itt nn Red mime animent meme niet da 30 IAS Validation de la m tnode d analyses sus ne ur A pe Seite 37 1 4 4 Etude de la robustesse de la m thode ss 45 DME Bu SSS CAS sri e cared de eae sda Species bes iia 48 Hi CONCLUSIONS GENERALES ET GUIDELINES ns ios 59 PARER PECTIVE S cerea dais 59 INN ES tt cu 60 Vil dINTRODUCTION 2 iii 60 V2 VALIDATION Eee AA ita 61 Vi PARAMETRES DE L ETUDE DE STABILIT E 0 A caries 64 Vi RESUL LIT S ida 67 ROBES SE ee E N 71 gt REMERCIEMENTS usas 73 gt Liste des abreviations HPLC PA FM Rdf Std G5 SIM HUG S1 OH Si O 1 V 1 V d gt Abstract Chromatographie liquide a haute performance Principe actif Formulation m dicamenteuse Cordarone Formulation de dosage reconstitu e Standard Glucose 5 Soins intensifs de m decine H pitaux universitaires de Geneve Silice avec silanol protonn Silice avec silanol d protonn intra veineuse intra veineuse directe Bien que l amiodarone soit un produit ancien aux propri t s bien connues son utilisation en milieu de soins intensifs n cessite un mode de dilution non recommand par le fabricant dont nous avons cherch a valider l ad quation en terme de stabilit La stabilit physico chimique de seringues pr tes l emploi de 50 mg ml d amiodarone ainsi que celle de diverses solutions de concentrations comprises entre 0 6 mg ml et 25 mg ml d amiodarone a t valu e par une m thode
25. I THEORIE I 1 INTRODUCTION La mort subite due a une cause cardiaque touche des milliers de personnes chaque ann e en Suisse comme ailleurs 1 Les differents troubles cardiaques sont nombreux et vari s parmi ceux ci les arythmies telles que la fibrillation ventriculaire sont la source d une importante morbidit Le chlorhydrate d amiodarone est un agent antiarythmique largement utilise dans les unites de soins intensifs pour une vari t d arythmies cardiaques et c est notamment un des m dicaments de choix pour traiter la fibrillation et la tachycardie ventriculaire 2 Toutefois elle reste reservee aux Cas ou le prognostic vital est engage car ces pathologies sont traitees initialement par la cardioversion choc cardiog ne puis les antiarytmiques de premiere ligne tels que la quinidine ou la procainamide 3 2 La classification la plus largement utilis e pour les agents antiarythmiques est celle de Vaughan Williams qui est constitu e de quatre classes les bloqueurs des canaux sodiques les b ta bloquants sympatholytiques les m dicaments prolongeant le temps de repolarisation et les bloqueurs des canaux calciques L amiodarone est unique car bien qu elle soit class e principalement comme tant un agent de classe Ill elle possede des propri t s appartenant a chacune des quatre classes 2 4 L amiodarone peut tre administr e par voie orale ou par voie parent rale Il faut tout de m me rappeler que la voie inje
26. a 2 50 Son d bit est de 1 5 ml min La longueur d onde de d tection jug e optimale est 206nm 11 4 2 Etude de sp cificit Cette etude comporte deux points sp cificit vis a vis des produits de d gradation sp cificit vis a vis des excipients de la formulation m dicamenteuse 1 4 2 1 Etude de d gradation acc l r e M thode L tude consiste s assurer que les conditions analytiques choisies permettent bien de s parer le principe actif amiodarone de ses ventuels produits de degradation Pour cela une tude de degradation acc l r e est effectu e sur le principe actif amiodarone en lui appliquant des conditions de stress En fonction du facteur stressant applique on distingue cing lots chaque lot comprend 1 ml de solution d amiodarone a 5 mg ml produite a partir de l ampoule de Cordarone dilu e laquelle on ajoute Lot A 1 ml d acide chlorhydrique a 2M Lot B 1 ml d hydroxyde de sodium a 2M Lot C 1 ml d eau oxyg n e a 0 3 Lot D UV 366 nm pendant 4h 30 Les lots A a D sont plac s 2h au bain marie a 90 C afin de provoquer le maximum de degradation possible Les r sultats obtenus sont d crits dans les tableaux suivants Le premier tableau reflete les r sultats obtenus lors de l valuation visuelle des solutions stressees et de leur spectre UV r alis sur le spectrophotom tre en comparaison celui d une solution m thanolique d amiodarone de m me concentration R sultats Tableau 4
27. alidation D un point de vue de la validit des moyennes le r sultat du test F est trop proche de la valeur limite concernant l talon externe a 100 il est donc pr f r de prendre la droite de r gression comme talon pour calculer les dosages Le r sultat obtenu par la droite de r gression donne un intervalle de 97 705 a 103 095 donc l exactitude est valid e pour cette m thode d Conclusion concernant l exactitude L exactitude sur trois jours montre un biais inf rieur 5 sur les trois jours donc la m thode est jug e exacte L talon choisi est le mod le de la droite de r gression I1 4 3 3 Fid lit pour les Raf a R sultats de la fid lit La fid lit est constitu e de la r p tabilit 6 points au centre du domaine tudi 1 jour et de la fid lit interm diaire 18 points au centre soit 6 par jour 42 Tableau 17 r sultats obtenus pour l tude de la fid lit Essai 1 i validation solution j jour 0 0979 97 88 1 4 1 0 0969 96 89 5 1 0 0967 96 72 6 1 0 0989 98 92 101 19 101 10 102 00 103 50 101 09 99 93 b Etude statistique de la fid lit pour les 3 jours La r p tabilit tudie les variations tres faibles entre les mesures d un m me chantillon durant un intervalle de temps court par exemple une journ e La variance de r p tabilit est gale a la moyenne des variances de chaque jour La fid lit interm diaire repr sente
28. ant une pathologie cardiaque sont souvent en restriction hydrique par cons quent la dilution recommand e par le fabricant apporte une quantit de liquide trop importante Dans les cas d arythmies graves les doses d amiodarone prescrites peuvent tre de 1200 mg 24h ce qui correspond a un apport de 2 litres de liquide quotidiennement sans compter le volume apport par les autres m dicaments administr s simultan ment Aux Urgences et aux SIM des HUG une pratique courante consiste a administrer la Cordarone en pousse seringue a des concentrations de 450mg 600mg et jusqu a 1200 mg 48 ml de glucose 5 Or la litterature ne donne aucun renseignement sur la stabilite du m dicament dans ces conditions et le fabricant lui ne pr conise que la dilution mentionn e dans le Compendium Finalement les patients hospitalises dans ces unites recoivent un certain nombre de perfusions par voie v en continu ainsi que des perfusions par intermittence ll est important pour diverses raisons d velopp es plus bas de conna tre les compatibilit s physico chimiques entre ces differents m dicaments administr s simultan ment Ainsi par exemple un schema de traitement fr quemment utilis peut comporter h parine nitroglycerine insuline KCI midazolam fentanyl norepinephrine et dobutamine simultan ment L utilit et la place du travail de dipl me para t donc vidente et il s agira ainsi de d finir la stabilit de la Cordarone a
29. antite dos e n tant pas toujours n gligeable 0 41 dans le systeme 3 6 2 dans le syst me 7 0 6 dans le syst me 8 3 6 dans le syst me 9 il convient de s interroger sur l influence r elle de cet excipient sur le dosage de l amiodarone Avant toute chose il faut verifier si c est reellement le Tween lui m me qui absorbe et qui est d tect car cela pourrait aussi tre un effet m moire C est a dire que de par ses propri t s de tensioactif le Tween pourrait d crocher des quantit s infimes et non r guli res 34 d amiodarone qui seraient rest es sur la colonne ou dans le systeme d injection et cela serait en r alit notre principe actif qui serait d tect Cet effet est g nant dans le sens ou il peut provoquer des effets d accumulation au fur et a mesure des dosages et fausser completement les quantit s de principe actif d tect es Afin d lucider le probleme plusieurs approches on t men es e Tout d abord gr ce au d tecteur DAD coupl a notre syst me chromatographique il a ete possible de regarder quelle etait l influence de la longueur d onde de detection pour le Tween l amiodarone PA et la Cordarone FM Ces 2 dernieres presentent des maxima d absorption tres proches 243 et 206 nm pour PA et 244 et 205 nm pour FM et le spectre fourni sur l cran DAD est identique il s agit donc bien dans les deux cas du principe actif que l on d tecte et que l on dose Alors que le Tween presenterait un
30. btenir les concentrations d sir es des std 1 a 5 50 a 150 La concentration du 100 d analyse est fix a 100 ug ml et le domaine de validation s tend de 50 a 150 soit 50 75 100 125 et 150 ug ml Les solutions m res de Std et Raf tant toutes deux concentr es a 0 5 mg ml d amiodarone les m mes dilutions seront effectu es afin d obtenir les solutions filles a injecter Le solvant diluant est l ac tonitrile et le volume des solutions filles est de 1ml Le sch ma de dilution suivant est appliqu Tableau 28 mode de pr paration des solutions filles d analyse Pourcentage de Concentration Volume de Volume la concentration AR SINIBGSTGnE solution mere de d acetonitrile a en amiodarone 0 5 mg ml a ajouter ul ug ml prelever ul 50 50 100 900 75 75 150 850 100 100 200 800 125 125 250 750 150 150 300 700 62 gt Solutions reconstitu es Rdf 1 a 5 Une solution mere Rdf a 0 5 mg ml d amiodarone est consitu e en diluant 500 ul d une ampoule de Cordarone 50 mg ml dans de l eau millipore a l aide d un ballon jaug de 50 ml Cette solution est dilu e de la m me fa on que la solution m re Sid afin d obtenir les m mes concentrations 50 a 150 ug ml Cf tableau n 28 ci dessus gt Solutions fid lit Les solutions de fid lit sont constitu es a partir de la solution mere Raf ci dessus en effectuant six dilutions independantes identiques Le tableau suivan
31. c l r e est une lampe a ultraviolet classique de Camag clairant a 254 ou 366nm e Le projecteur a filtre polarisant provient de IST AG 5430 Wettingen e La hotte a flux laminaire horizontal provient de la maison SKAN e Les spectres UV sont r alis s grace au spectrophotom tre UV vis Perkin Elmer Lambda 20 e Les balances analytiques utilis es sont des mod les de Mettler Toledo AT 261 et PR 5002 Delta Range 1 1 3 Mise au point de la m thode et optimalisation des conditions Des recherches d optimalisation sont effectuees afin de trouver la meilleure composition de la phase mobile et de trouver la longueur d onde de d tection la plus satisfaisante pour le dosage de l amiodarone Le travail s largit avec l tude de l influence du Tween sur le dosage et une tude de sp cificit D apres nos r sultats les conditions chromatographiques optimales sont les suivantes La phase mobile compos e d ac tonitrile tampon phosphate 26 5mM a pH 2 5 en proportion 50 0 50 a un d bit de 1 5 ml min et est d gaz e aux ultrasons sous vide a l aide d une pompe a eau La longueur d onde de detection optimale de l amiodarone a t d termin e 206nm le volume inject est de 20ul la pression de l appareil est environ 135 bars et tous les essais sont effectu s temp rature ambiante 17 11 2 VALIDATION ET ROBUSTESSE DE LA METHODE 1 2 1 Validation Le but de valider la m thode est de d montrer que celle ci est
32. ce 100 0 10008 2274962 100 0 10000 2110737 125 0 12510 2600121 125 0 12500 2 04925 150 0 15012 3921386 150 0 15000 3889566 Equation des droites pour le jour 3 Std y 2 10 x 199398 r 0 9760 Rdf y 2 10 x 396448 r 0 9620 38 b Etude statistique de la lin arit sur les trois jours Ces tests sont effectu s apres un ajustement de variances sur la concentration moyenne des jours 1 2 3 Tableau 12 Lin arit sur jours 1 2 3 Etude statistique Jour 1 2 3 Rdf Constantes statistiques Ordonn es l origine a des droites Std a 154163 09 Rdf a 210390 5 d ajustement Ecart type de Std Sa 83739 62 Raf Sa 154551 25 l ordonn e l origine Comparaison des ordonn es l origine 1 84 1 36 0 05 13 2 16 avec 0 Pentes b des droites Std b 22669993 81 Rdf b 23361222 00 ES Comparaison des 0 320 10 05 13 2 16 ordonn es a l origine Comparaison des 0 416 t 0 05 13 2 16 O ee S2 a 3 54 10 1 87 10 Homog n it des variances C caicui 0 6201 C calcui 0 8592 C 0 05 5 2 0 684 Cochran Variance de la 9 34 10 1 02 10 r gression S 2 2 SES Existence pente F 798 97 F 257 04 Fo os 1 13 4 67 PAI Variance erreur 1 1410 4 36 10 EA Variance erreur 1 26 10 2 71 10 RC Validit des Fo 1 1044 F gt 0 6203 Ponana 39 b Discussion des r sultats Les ordonn es l origine ne sont pas significativement diff rente
33. cence observ e peut tre le d but d une pr cipitation ou d un trouble Cela rend le melange des deux principes actifs totalement inad quat la perfusion et l utilisation clinique La plupart du temps la solution 2M est touch e en premier car elle poss de la concentration la plus forte en principe actif d autre part souvent le rapport M 4 1 permet de confirmer l observation de M 1 1 car la solution est quatre fois plus concentr e Conclusion Lorsque la Cordarone est utilis e la concentration officielle recommand e par le fabricant 0 6 mg ml aucun probl me de compatibilit avec les sept autres m dicaments test s n appara t sur une p riode de 24 h Chacun peut donc tre administr en Y l amiodarone sans risque Par contre lorsque la concentration de celle ci s l ve 25 mg ml on rel ve des incompatibilit s sur 24h avec tous les m dicaments l exception du Perlinganit et de l Art r nol 5mg Ces deux derniers pourraient donc tre potentiellement administr s simultan ment et dans la m me voie la Cordarone 25 mg ml alors que tous les autres par mesure de s curit et de prudence ne doivent pas tre associ s cette derni re 58 TIT CONCLUSIONS GENERALES et GUIDELINES La technique HPLC permet d tudier la stabilit des solutions de differentes concentrations conserv es dans des milieux divers Contrairement a la technique de spectrom trie UV vis elle permet la visualisa
34. ctable repr sente une agression pour la peau qui est notre barriere naturelle nous prot geant entre autres contre les infections du milieu ext rieur 5 Toutefois l effet obtenu apres injection intra veineuse est imm diat c est pourquoi cette voie est n cessaire lorsque la voie orale est impossible pour diverses raisons 6 ou lorsque la situation est une urgence souvent vitale comme l arr t cardiorespiratoire par exemple 7 Vu l importance de la place de l amiodarone dans la th rapeutique cardiaque il est utile de s int resser a son emploi dans un service de soins intensifs de m decine SIM en milieu hospitalier comme les H pitaux universitaires de Gen ve HUG Ce pr sent travail apportera une contribution dans la r solution de certains probl mes rencontr s dans l unit de soins En effet l emploi de Cordarone par voie intraveineuse pose toujours un certain nombre de questions pratiques de manipulation de stabilit et d incompatibilit s physico chimiques En ce qui concerne le premier point il faut savoir que la solution contenue dans les ampoules de Cordarone est tres visqueuse en raison de la presence de polysorbate 80 qui est utilise pour solubiliser le principe actif Selon la pathologie on distingue deux modes d administration de la Cordarone soit en intra veineuse directe i v d a une concentration de 50 mg ml lors d un traitement d urgence soit en perfusion a diverses concentrations d pen
35. dantes des besoins du patient lors d un traitement continu Or dans une situation d urgence la viscosite de la solution rend difficile le prelevement rapide d un dosage pr cis d amiodarone Pour cette raison l Unit des SIM des HUG a demand la pharmacie la pr paration de seringues pr tes a l emploi d amiodarone a 300mg 6ml qu il serait possible d administrer directement sans manipulation pr alable Ces seringues pr tes a l emploi auraient ainsi leur place sur le chariot d urgence au m me titre que les seringues pr tes l emploi d adr naline par exemple Elles seraient administr es ou non en fonction de la situation Par cons quent dans certains cas elles peuvent ne pas tre utilis es d o l int r t de d terminer leur dur e de stabilit pour savoir combien de temps un telle seringue peut tre conserv e et dans quelles conditions D autre part selon la notice d emballage du fabricant Sanofi Meyrin Geneve sous posologie et mode d emploi dans le paragraphe Instructions sp ciales concernant le mode d application il est indiqu que pour des raisons gal niques il ne faut pas utiliser des concentrations inf rieures a 2 ampoules 300mg dans 500ml d une solution de glucose 5 Ce qui signifie qu il ne faut pas avoir une dilution inf rieure a 0 6 mg ml Mais ceci ne precise pas quelle concentration maximale il est possible d obtenir sans risque de pr cipitation Il faut savoir que les patients pr sent
36. de de stabilit comprend une evaluation physique visuelle et chimique dosage HPLC et pH cela est effectu sur une p riode plus ou moins longue selon les exigences de chaque partie 1 3 2 1 Partie 1 Pour obtenir des r sultats cliniques de long terme la dur e de l tude pr vue pour cette premiere partie tant de 6 mois 180j il s agit de pr voir un nombre suffisant d chantillons m me si le temps imparti pour le travail de dipl me nous permet de suivre l tude de stabilit uniquement sur une p riode de 30 jours Les solutions pr tes a l emploi fabriqu es dans cette premiere partie sont conditionnees dans des seringues opaques de 60 ml ou des transparentes de 10 ml Elles sont de m me concentration 50mg ml et de m me volume 6ml Elles sont constitu es de 2 ampoules de Cordarone non dilu es et conditionn es dans la seringue ad quate selon le lot dans des conditions aseptiques sous flux laminaire horizontal Il est vrai que la concentration initiale de chaque seringue n est pas exactement identique car il s agit de faire une seringue par lot et par intervalle de temps de pr l vement ce qui est contraire a une tude de stabilit et de dosage habituelle ou les pr levements successifs sont effectu s a partir d une seule et m me solution mere Mais dans cette partie il n a pas t possible de faire autrement car le volume approximatif n cessaire pour un jour d tude est d environ 3ml or selon les sp ci
37. e facon sp cifique sur chaque parametre reponse observ une formule annexe permet de mesurer cet effet en calculant le coefficient de chaque facteur sur les r ponses Les r sultats sont r sum s dans le tableau suivant Tableau 21 matrice des coefficients MeCN MeCN O amiodarone Asym trie 0 130 0 005 0 028 0 025 0 023 0 027 0 033 amiodarone Surface 27042 96989 35212 33591 23446 16378 31989 amiodarone Ces coefficients sont repr sent s dans les figures 28 30 en annexe p 71 72 Chaque r ponse poss de un intervalle de confiance calcul sur le domaine d exp rience N 8 selon la formule donn e en annexe L cart type utilise dans la formule a t calcul partir des valeurs du point central Le tableau suivant r sume les intervalles obtenus pour chaque r ponse Tableau 22 cart type et intervalles de confiance pour chaque param tres de r ponse k amiodarone Asym trie amiodarone Surface amiodarone Intervalle de 0 465 214393 confiance 46 e Coefficients des facteurs sur le k C est la variation du pourcentage d ac tonitrile qui agit de facon vraiment significative sur le facteur de r tention k de l amiodarone cf fig 28 Les interactions du premier ordre sont insignifiantes e Coefficients des facteurs sur l asym trie du pic Une variation du pourcentage d ac tonitrile agit de facon significative sur l asym trie du pic d amiodarone Aucune interac
38. e influence de la lumi re ni de la temp rature n est observ e car les trois conditions de stockage donnent des teneurs en amiodarone semblables au cours du temps Conclusion La stabilit physique et chimique des seringues pr tes a l emploi de 50 mg ml d amiodarone peut tre affirm e pour un p riode de 30 jours 49 De telles seringues pourraient donc potentiellement tre produites par la pharmacie des HUG et propos es aux SIM pour la fonction d sir e Toutefois il serait souhaitable de refaire des analyses si l on d sire avoir une preuve de reproductibilit et d y ajouter les r sultats sur six mois comme il est pr vu dans le plan de l tude 11 4 5 2 Partie 2 tude des lots D E F gt Stabilite physique Aspect de la solution to L aspect des solutions a a f des lots D E F est report dans le tableau suivant Tableau 23 aspect physique des solutions a to R f rence D E Fa D E F b D E F c D E F d D E F f 0 6mg ml 5mg ml 9 375mg m 12 5mg ml 18 75mgqg ml 25mg ml Liquide Liquide sirupeux limpide limpide transparent jaune pale par rapport Idem mais Idem mais Idem de Idem mais sans a la Commence coloration plus en plus coloration cristaux reference Idem que a a se colorer un peu plus jaune proche de ni trouble aspect jaune tres prononc e celle de la ni pr cipit liquide non p le r f rence sirupeux et sans commence cristaux a devenir ni trouble sirupeux
39. e m decin en fonction de l volution de l tat g n ral du patient 26 L tude d incompatibilit physico chimique est bas e sur une visualisation de la stabilit de diff rentes solutions obtenues par m lange du m dicament X a tester ici X Cordarone avec les principes actifs Y auxquels on souhaite l associer Les differentes solutions sont obtenues par m lange des deux constituants a diverses concentrations lla ete decide d effectuer deux s ries d tude A et B chacune comprenant une concentration extreme de Cordarone soit S rie Ca 0 6 mg ml concentration recommand e par le fabricant S rie B Cg 25 mg ml concentration maximale utilis e aux SIM Les dilutions effectu es sont les suivantes 2MS solution pure de la concentration 2M du medicament Y 2M 1 1 solution contenant 50 de Y a sa concentration 2M et 50 de X M 1 1 solution contenant 50 de Y a sa concentration M et 50 de X M 4 1 solution contenant 80 de Y a sa concentration M et 20 de X M 1 4 solution contenant 20 de Y a sa concentration M et 80 de X Voir les d tails en annexe p65 Ainsi pour chaque melange de Cordarone avec un principe actif il est necessaire de juger la stabilite de cing solutions Comme il a ete dit plus haut sept principes actifs sont testes mais la norepinephrine tant couramment employ e a trois concentrations en r alit 9 m langes sont effectu s selon le pla
40. entration maximale de 0 6 mg ml Or dans la pratique courante des SIM pour des cas d arythmies graves on peut utiliser des concentrations de 450mg 600mg et 1200mg 48ml Ce qui correspond respectivement a 9 375 12 5 et 25 mg ml d amiodarone Or on ne poss de aucune donn e concernant la stabilit des solutions a ces concentrations Le m me travail d tude de stabilit physico chimique que dans le point 1 sera donc a effectuer mais sur une p riode de 2 jours par s curit car dans la pratique hospitaliere les solutions des pousse seringues sont de toute facon remplac es toutes les 24h 24 Que se passe t il pour des concentrations allant de 0 6 mg ml a 25 mg ml Six concentrations sont donc choisies dans la fourchette de 0 6 a 25 mg ml afin d avoir un intervalle a peu pres homog ne entre les concentrations Pratiquement gt Preparation des chantillons Pour chaque concentration trois lots sont constitu s pour voir l influence des m mes parametres que precedemment Soit Lot D lumi re naturelle temp rature ambiante fen tre Lot E l abri de la lumi re 4 C frigo Lot F l abri de la lumi re temp rature ambiante placard Ces solutions dilu es sont destin es tre inject es directement au patient donc lors de la perfusion seule la lumi re peut jouer un r le savoir faut il prot ger le produit durant sa conservation certes mais aussi durant la perfusion a l aide de tubulur
41. es opaques lots D et F Alors que la temperature ne peut pas jouer de r le durant la perfusion car celle ci se fait automatiquement temp rature ambiante Toutefois il arrive que dans un service de soins une infirmi re pr pare le traitement mais ne l administre pas imm diatement Donc l int r t du lot E serait de d finir s il est n cessaire de conserver la solution dilu e au frais entre le moment de la dilution et le moment de l administration Chaque lot comprendra 6 solutions 6 seringues de concentration croissante obtenues par dilution d ampoules de Cordarone soit Ca 0 6 mg ml Cp 5 mg ml C 9 375 mg ml Ca 12 5 mg ml Ce 18 75 mg ml C 25 mg ml gt Etude des chantillons Les observations et mesures seront effectu es aux intervalles de temps suivants t 0 8h 24h 48h 25 Les seringues du lot D sont transparentes et celles des lots E et F sont opaques L echantillon du ty est constitu d une seule solution fra chement pr par e a partir d une ampoule ouverte et dilu e a la concentration d analyse de 0 1 mg ml et directement inject e et dos e C est donc la m me solution pour D E et F mais elle est inject e six fois Comme dans la premi re partie avant chaque dosage un Raf est constitu selon la m me proc dure Pour ces dosages un deuxieme Raf est ajout a chaque fois ainsi qu une solution reference de Cordarone dilu e a 0 1 mg ml 100 comme dans la premiere partie
42. esearch vol 5 No 11 1998 25 King Guide to Parenteral Admixtures CD Rom 2003 Et http www kingguide com 26 G R Hasegawa and J F Eder Visual compatibility of amiodarone hydrochloride injection with other injectable drugs American Journal of Hospital Pharmacy 41 1379 1380 1984 14 27 L V Allen Jr and M L Stilles Compatibility of various admixtures with secondary additives at Y Injections sites of intravenous administration sets Part 2 American Journal of Hospital Pharmacy 38 380 1 1981 28 M Gikic E R DiPaolo A Pannatier and J Cotting Evaluation of physicochemical incompatibilities during parenteral drug administration in a paediatric intensive care unit Pharm World Sci 22 3 88 91 2000 29 A M Sautter Cours pharmacie HUG Incompatibilites physico chimiques Geneve 2002 30 I Grenet G Hazebrouca Incompatibilites physico chimiques des m dicaments injectables consid rations pratiques Th rapie 50 191 5 1995 31 M Hoffman G Hazebroucg Incompatibilit s physico chimiques des m dicaments injectables Dans J P Giroud amp coll Pharmacologie clinique bases de la th rapeutique 2e dition Paris 1988 pp 171 177 32 P Bonnabry Cours pharmacie HUG Introduction a la pharmacie Hospitaliere Geneve 2003 33 J L Veuthey S Rudaz Cours d analyse pharmaceutique module methodes s paratives 1 dition Gen ve 2002 34 D A Skoog D M West
43. fications et les exigences du travail 300 mg 6ml la solution contenue dans les seringues devait tre de 6ml et pas plus donc une seringue eu ete suffisante pour realiser seulement deux dosages 2 3ml mais il a ete prefere fabriquer une seringue unique par jour d tude par s curit et aussi afin d uniformiser la realisation des conditions de prelevement et de dosage 22 Pratiquement gt Preparation des chantillons Chaque seringue est confectionn e en pr levant la totalit de 2 ampoules de Cordarone a 150mg 3ml pour donner une concentration finale d amiodarone de 50mg ml par seringue pr te a l emploi Nous allons tudier l influence des param tres temp rature et lumi re sur les seringues Pour cela 3 lots de 10 seringues chacun seront produits et conserv s durant toute l tude dans des conditions diff rentes Lot lumi re naturelle temp rature ambiante fen tre Lot B l abri de la lumi re 4 C frigo Lot C l abri de la lumi re temp rature ambiante placard gt Etude des chantillons Chaque lot sera soumis une tude de stabilit physico chimique comme indiqu plus haut Les observations et mesures seront effectu es aux intervalles de temps suivants t 0 1j 2j 4j 7j 14j 21j 30j 60j 90 180 Les seringues du lot A sont transparentes et celles des lots B et C sont opaques Durant la p riode effective du travail de dipl me seuls les temps t lt 30 seront
44. ier ordre avec un vitesse de d gradation proportionnelle la concentration de la substance Pour les faibles concentrations la vitesse de r action est limit e par la concentration et non par l intensit du rayonnement 38 En r sum il est probable que les r sulats obtenus refl tent une photod gradation particuli rement marqu e avec les solutions faiblement concentr es et plus tardive se manifester avec de plus fortes concentrations Le lot E appara t comme le plus stable La concentration n a pas d influence sur la perte en principe actif car au bout de 48h les concentrations a et f sont les seules d passer les 10 de perte autoris s alors que ces concentrations sont les deux extr mes En observant les r sultats du lot F on remarque la d gradation naturelle du produit alors qu il est dans les conditions optimales de stockage selon le fabricant Pratiquement toutes les concentrations d passent la limite autoris e apres de 48 h la solution la plus dilu e la d passe m me d j apr s 8 h La temperature influence la perte car si l on compare avec E on peut ais ment conclure que le frais permet de ralentir largement la d gradation D autre part l obscurit permet aussi de ralentir l g rement la perte d amiodarone Conclusion Ces dilutions sont cens es tre inject es directement au patient malgr tout s il doit y avoir un d lai entre la preparation et l administration il convient de les co
45. ieure gt 99 93 de Sigma Aldrich 89555 D Steinheim le m thanol utilis dans la mise au point est le lot K 31516209 250 provenant de Merck KGaA 64271 Darmstaat Le Glucose utilis pour les dilutions dans les chantillonnages est du Glucose 5 a 278 mmol l lot n 03012010 et vient de Bioren SA Couvet NE Le tampon phosphate 26 5 mM a ete prepare en dissolvant 3 61 g de dihydrogeno phosphate de potassium lot n 4873 1000 Na2HPO4 provenant de Merck KGaA 64271 Darmstadt dans 1 d eau Millipore et le pH t ajust a la valeur d sir e avec de l acide phosphorique concentr a 85 de lot 90071016 de Siegfried Handel 4800 Zofingen Il est ensuite filtr sous vide sur des filtres de 0 45um lot H2CN11546 de Millipore Corporation Bedford MA 01730 La phase mobile est pr par e en m langeant 50 0 d ac tonitrile et 50 de tampon phosphate a pH 2 5 puis d gaz e sous vide et dans un bain a Ultrasons 16 11 1 2 Instruments e Le syst me de chromatographie liquide a haute performance HPLC est le mod le Hitachi D 7000 constitu par une pompe L 7100 un injecteur automatique L 7200 un detecteur diode array L 7455 le tout provenant de la maison Merck e La colonne s parative utilis e est une colonne C18 Nucleodur gravity 125x4 5um sp ciale base e Le bac ultrasons est un Bransonic MT CE de VWR international e Le pH est r gl grace au pH metre Metrohm 691 e La lampe UV pour l tude de d gradation ac
46. ions filles a 0 1 mg ml ou solutions d analyse a injecter sont pr par es en diluant les seringues dans du G5 selon le sch ma du tableau ci dessous 64 Tableau 31 mode de pr paration des solutions d analyse pour les lots D E F Concentration de la Volume de solution Volume final de la Concentration exacte solution mere mere a pr lever ul solution fille ml obtenue mg ml mg ml 0 6 500 3 0 100 5 400 20 0 100 9 375 215 20 0 101 12 5 160 20 0 100 18 75 110 20 0 103 25 400 100 0 100 V 3 3 Partie 3 1 Mode de pr paration des m langes Tableau 32 plan d chantillonnage et pr paration des dilutions M lange n M dicament M dicament Mode de pr paration des solutions M et 2M Y S rie A ou B Cordarone Perlinganit M quantit n cessaire de la solution pure de Ca OU Cg Perlinganit 1mg ml selon la s rie Pour ce m dicament il n y a pas de solution 2M idem Actrapid M 0 5 ml d Actrapid 49 5 ml de NaCl 0 9 2 2M 1 ml d Actrapid 49 5 ml de NaCl 0 9 idem KCI 14 9 M 30 ml de KCI 30 ml de Glucose 5 3 Braun 2M 60 ml de KCI 30 ml de Glucose 5 idem Art r nol M 5 ml d Art r nol ad 50 ml de Glucose 5 4 5mg 2M 10 ml d Art r nol ad 50 ml de Glucose 5 idem Art r nol M 10 ml d Art r nol ad 50 ml de Glucose 5 5 10mg 2M 20 ml d Art r nol ad 50 ml de Glucose 5 idem Art r nol M 25 ml d Art r n
47. l air 56 gt Stabilite des solutions La stabilit des differents m langes a t valu e visuellement Les r sultats obtenus sont regroup s dans le tableau suivant Tableau 25 r sultats des tests de compatibilit S rie A S rie B Principe actif Y Concentration M X Cordarone X Cordarone 0 6 mg ml 25 mg ml Visuellement compatible pendant 24h aucune coloration Visuellement compatible nitroglycerine 1 mg ml ni precipitation pendant 24h ni production de gaz ni opalescence Visuellement compatible pendant 5 min pour la insuline 1 u ml idem solution 2M puis apparition d une opalescence incompatible Visuellement incompatible 1 mmm mn des to opalescence immediate pendant 24h Visuellement incompatible noradr naline 200 ug ml idem des to opalescence imm diate Visuellement incompatible noradr naline 500 ug ml idem des to opalescence imm diate Visuellement compatible pendant 5 min dobutamine 10 mg ml idem puis apparition d une opalescence a toutes les dilutions incompatible midazolam 10 mg ml idem des to opalescence imm diate Visuellement compatible fentanyl 10 ug ml idem pendant 5 min puis apparition d une opalescence incompatible 57 Commentaires Tous les m langes de la s rie A sont compatibles aucune modification des solutions n appara t quelque soit la dilution des m langes Par contre plusieurs changements sont observ s dans la s rie B L opales
48. le est compatible avec tous les m dicaments test s utilis s fr quemment aux SIM Ceux ci peuvent donc tre administr s simultan ment selon la pratique du service Par contre il est d conseill de faire de m me si la Cordarone n est dilu e qu a 25 mg ml notamment pour l insuline le KCI la noradrenaline a 200 et 500 ug ml la dobutamine le midazolam et le fentanyl Ce m langes apparaissent en effet incompatibles IV PERSPECTIVES Le travail pourrait se poursuivre en proposant le dosage analytique des neuf m langes visuellement compatibles tudi s pour observer et quantifier une ventuelle perte en amiodarone malgr l aspect positif des solutions Selon le temps imparti il serait indispensable de faire plusieurs nouvelles solutions des lots D E F et de proc der au dosage avec des injections plus nombreuses A laide de la litt rature et diff rentes techniques analytiques coupl es il serait aussi possible de proc der l identification des produits de d gradation engendr s par la lumi re 59 V ANNEXES V 1 INTRODUCTION M thode HPLC formules Les equations mathematiques permettant de calculer les parametres chromatographiques definis dans la th orie 33 sont donn es ci dessous gt Facteur de r tention _ tr t0 10 k avec tr temps de retention du compose tO temps de r tention nul correspondant l coulement du solvant pour parcourir la colonne gt Nombre de plateau
49. le de pouvoir stocker ces seringues le plus longtemps possible sans avoir de d gradation On tolere une perte de 10 de principe actif au cours de la dur e d exp rience fix e pour autant que les ventuels compos s de d gradation ne soient pas toxiques Pratiquement deux distinctions sont faites lors de l tude des chantillons e Tout d abord les ph nom nes physiques sont observ s Ainsi pour chaque lot des le d but a lieu une observation visuelle des solutions sur fond blanc et sur fond noir a la lumi re polaris e et aussi la lumi re indirecte Les moindres changements d gagement gazeux changement de coloration apparition d un trouble ou d un pr cipit sont notes Le t moin de r f rence est une ampoule de Cordarone conserv e dans les conditions optimales selon le fabricant c est a dire temp rature ambiante et l abri de la lumi re L ampoule est fra chement ouverte chaque intervalle de temps 21 e Puis les ph nom nes chimiques sont valu s en prenant premi rement une mesure du pH de la solution La comparaison est toujours effectu e a l aide de la m me ampoule de r f rence Et dans un deuxi me temps en dosant quantitativement par HPLC l amiodarone presente dans les seringues avec observation de l apparition d ventuels produits de d gradation sans identification de ceux ci 1 3 2 Pr paration des lots d chantillons et des dosages Comme il a t dit plus haut l tu
50. les chromatogrammes obtenus et de calculer un certain nombre de facteurs importants en analyse HPLC 83 34 Ainsi apres l injection d un produit celui ci sera lu de la colonne apres un certain temps correspondant au temps de r tention tr qui est propre a chaque compos pour une colonne donn e et dans des conditions sp cifiques fix es Ce temps permet de calculer differents autres parametres tels que gt le facteur de r tention k qui renseigne sur la retention d un compos mais en permettant de s affranchir des param tres g om triques de la colonne sa valeur est id alement comprise entre 1 et 10 Des faibles valeurs de k indiquent que le compos est peu retenu et inversement le nombre de plateaux th oriques N correspondant l efficacit de la colonne c est dire son pouvoir de s paration ainsi plus N est lev plus la colonne est efficace Il se calcule avec des formules diff rentes si le pic est de forme gaussienne ou non toutefois si on veut s affranchir de la g om trie de la colonne il faut utiliser la hauteur quivalente de plateaux th oriques HEPT qui divise la longueur de la colonne par le nombre de plateaux le facteur d asym trie f renseignant sur l allure et la sym trie du signal obtenu ainsi si le pic est parfaitement sym trique f 1 mais on tol re une certaine marge car les pics sont g n ralement toujours de forme asym trique cause des interactions suppl mentaires e
51. m me pic au m me endroit que celui observ avec l injection du blanc Il est vrai que l chelle est zoom e et les quantit s sont certainement n gligeables mais cela laisse sugg rer qu il y a peut tre un probleme de rincage du systeme entre les injections et que la colonne mal rincee pourrait ainsi sous l influence du tween relacher de faibles quantit s d amiodarone Afin de verifier ce point la solution de rincage de l appareil qui tait constitu es d eau a 100 est remplac e par de la phase mobile Les r sultats nous confirment qu apres 5 injections successives de blanc le pic d amiodarone r siduelle qui tait observ dispara t peu a peu Le m me ph nom ne est observ lors d injections successives de Tween A une sensibilit habituelle de d tection 0 048 les pics ne sont plus d tectables et ne sont m me plus int gr s sur le chromatogramme Conclusion Il ne serait pas n cessaire de changer de longueur d onde de d tection car le pic observ lors de l injection du Tween n est pas du au a l excipient lui m me mais a ses propri t s tensioactives qui permettent de retirer des restes d amiodarone accroch e sur la colonne du a un mauvais rincage de celle ci Toutefois il semblerait plus prudent dor navant de r gler la longueur d onde de detection a 206 nm laquelle l amiodarone est d tect e son maximum mais le tween n a plus d influence Ainsi plus aucune interaction n est observ e Finalement
52. n Neuf syst mes de composition diff rente sont tudi s afin d observer l influence de la quantit d acetonitrile vari e entre 40 et 70 et le pH du tampon phosphate vari entre 2 55 et 7 Apr s observation des param tres chromatographiques Rt k N et Asymetrie des pics d amiodarone les conditions optimales pour la composition de la phase mobile sont 50 0 d ac tonitrile 50 de tampon phosphate 26 5 mM a pH 2 5 11 4 1 2 Recherche des conditions analytiques optimales gt Influence de la longueur d onde de d tection Differentes longueurs d ondes de d tection ont t test es 206 241 244 et 270 nm et il ressort que 206nm est la meilleure condition de detection car a cette longueur d onde le tween n est pratiquement plus d tect 29 gt Influence du d bit de la phase mobile Ce param tre est valu avec les variations suivantes 1 1 2 et 1 5 ml min Avec un d bit sup rieur 1 5 ml min on observe un gain d efficacit au niveau du temps de r tention de l amiodarone qui devient beaucoup plus court qui se traduit par une l gere perte de plateaux th oriques qui n est pas significative Par contre il y a aussi un gain au niveau de l asymetrie du pic qui devient plus fin Cf tableau 35 en annexe p69 Conclusion Les conditions analytiques optimales sont les suivantes La phase mobile se compose de 50 d ac tonitrile 50 de tampon phosphate 26 5 mM dont le pH est ajust
53. n d crit en annexe 27 Les m dicaments entrant dans l tude sont les suivants Tableau 3 identification des principes actifs test s et de leurs concentrations Principe actif Nom de sp cialit Concentrations M test es dul sd filial 1 mg ml Chlorure de potassium 14 9 1 mmol ml Braun Art r nol 100 200 500 ug mi dobutamine Dobutrex 10 mg ml midazolam Dormicum 10 mg ml fentanyl Fentanyl HUG 10 ug ml La pr paration des diff rentes solutions des principes actifs Y ainsi que les references de chaque produit sont reportees en annexe p66 gt Etude des chantillons La stabilit des m langes est valu e de fa on visuelle a l il nu sous lumi re polaris e et lumi re indirecte aux temps t 0 5min 30min 1h et 24h Le pH des solutions 2M est galement mesur a to et ton Vu le temps imparti il n est pas possible de proc der a un dosage analytique 28 11 4 RESULTATS ET DISCUSSION 11 4 1 Mise au point de la m thode Un travail de recherche de conditions optimales est commenc en se basant sur la m thodologie classique de mise au point d une m thode en phase invers e 33 Cette phase d optimalisation est effectu e en mode manuel sur une autre chaine HPLC Modele Hitachi D 6000 comprenant une pompe L 6200 un d tecteur diode array L 4500 et un injecteur manuel 1 4 1 1 Recherche de composition de la phase mobile gt Influence du pourcentage d ac tonitrile et du pH du tampo
54. ngues pr tes l emploi de 50 mg ml d amiodarone sont donc visuellement stables sur une p riode de 30 jours gt Variation du pH Variation du pH en fonction du temps pour les lots A B C 5 4 R f rence gs Ajoun o a B frigo 0 C abri lumi re 0 1 2 4 14 21 30 Temps jours Figure 5 Variation du pH mesur pour les lots A B et C 48 Commentaires La variation de pH en fonction du temps l int rieur de chaque lot est environ de 1 unit de pH alors que la difference observ e entre les chantillons et la r f rence au cours du temps est inf rieure l unit Cette diff rence tend a augmenter au cours du temps Les l g res diff rences observ es entre les trois lots ne sont pas significatives donc tous les lots sont stables du point de vue du pH pendant la p riode observ e gt Dosage par HPLC Variation de la teneur en amiodarone des lots A B C en fonction du temps 110 4 105 100 Lot A m LotB 95 a Lot C Pourcentage retrouve 0 5 10 15 20 25 30 35 Temps j Figure 6 r sultats de dosage des lots A B C Commentaires Les trois courbes possedent le m me profil g n ral l gere d croissance jusqu a 14 jours puis croissance jusqu 30 jours Toutefois en consid rant la valeur du ty comme tant le 100 la variation de 10 autoris e Aucun
55. nserver au frais l abri de la lumi re car la temp rature et la lumi re provoquent trop de d gradation et de perte du principe actif On remarque aussi que la concentration de 0 6 mg ml recommand e par le fabricant et conserv e temp rature ambiante et l abri de la lumi re s avere tre la concentration la moins stable et n cessite une administration rapide Dans ces conditions on peut imaginer que le fabricant recommande cette concentration d un point de vue de la tol rance clinique plut t que de la stabilit 55 Nos r sultats d montrent que les concentrations lev es non recommand es par le fabricant mais utilis es en pratique aux SIM sont stables pour une dur e de 24h 1 4 5 3 Partie 3 tude des incompatibilit s gt Variation du pH Chaque solution mere M et 2M de chaque principe actif est pr par e avant d effectuer les m langes avec la Cordarone La variation du pH des solutions de concentration 2M M pour le Perlinganit est valu e sur une p riode de 24h Les r sultats sont report s dans le tableau suivant Tableau 24 variation du pH des solutions meres sur 24h Toutes les solutions sauf le Perlinganit subissent une elevation de pH sur 24h Ce ph nom ne est certainement d a une absorption du CO2 de l air qui dissout apporte des carbonates la solution qui devient un peu plus basique car par m garde les solutions n ont pas t conserv es de fa on herm tique a
56. ntre le compos et la phase stationnaire sur laquelle il reste quelques groupes silanols libres malgr un greffage avec des cha nes C18 ou encore des problemes de solubilit ou de distribution non lin aire entre les deux phases cf th orie la s lectivit a repr sente la s paration entre deux compos s sur une colonne donn e Elle est le rapport entre leur facteurs de r tention respectifs pour obtenir une bonne s paration la s lectivit doit tre sup rieure 1 Ce param tre entre dans la d finition de la r solution la r solution Rs d pendant de trois facteurs a k et N indiquant a quel degr deux produits sont s par s et distincts sur le chromatogramme une r solution sup rieure 1 5 indique une s paration compl te entre les deux analytes Voir les formules en annexe p60 12 I 4 BIBLIOGRAPHIE 1 P J Kudenchuk and coll Amiodarone for resuscitation after out of hospital cardiac arrest due to ventricular fibrillation The new England Journal of Medicine 341 871 79 1999 2 M Hughes A Binning Intravenous amiodarone in intensive care time for reappraisal Intensive Care Med 26 1730 39 2000 3 AHFS Drug Information G K McEvoy Bethesda 2003 4 Sanofi Cordarone l antiarythmique complet Information scientifique du fabricant 5 L C Hadaway Anatomy and physiology related to intravenous therapy In J Hankins amp coll Infusion therapy in clinical practice 2nd edition
57. obile bas e sur des affinit s physico chimiques entre les trois 33 De plus la commercialisation d un grand choix de colonnes et la multitude des phases mobiles possibles rendent cette technique tres selective Contrairement a la chromatographie en phase gazeuse il n existe pas de d tecteur universel en HPLC Souvent ce sont des spectrophotometres UV vis qui sont couples aux colonnes chromatographiques notamment des appareils a barrettes de diodes qui permettent d obtenir le spectre complet du compos analys 34 10 La chromatographie en phase inverse est bas e sur l inversion de polarit des phases Ainsi la phase stationnaire est g n ralement constitu e de silice greff e Pr cis ment la silice Si l origine un mat riau tr s polaire gr ce a ses groupements silanols subit une reaction de silanisation l aide de groupements apolaires hydrophobes de diff rentes longueurs possibles Toutefois la silice ne peut pas tre greff e 100 il reste donc toujours certains silanols polaires libres environ 20 dont la polarit d pend directement du pH de la phase mobile et qui engendrent des interactions secondaires non d sir es avec le compos selon la nature de celui ci La phase mobile est un m lange hydro organique de nature plus polaire que la phase stationnaire Selon ce principe en chromatographie en phase inverse les compos s polaires seront lu s en premier L analyse d une base est assez d
58. ol ad 50 ml de Glucose 5 25mg 2M quantit n cessaire de l ampoule pure idem Dobutrex M 20 ml de Dobutrex 5 ml de Glucose 5 7 2M 20 ml de Dobutrex 2 5 ml de Glucose 5 idem Dormicum Mz 10 ml de Dormicum ad 50 ml de Glucose 5 2M 20 ml de Dormicum ad 50 ml de Glucose 5 idem Fentanyl HUG M 10 ml de Fentanyl ad 50 ml de Glucose 5 2M 20 ml de Fentanyl ad 50 ml de Glucose 5 65 2 R f rences des m dicaments utilis s pour l tude de la troisi me partie Tableau 33 r f rences et caract ristiques des medicaments utilis s Principe Sp cialit Proprit t s Num ro Date Distributeur actif de lot d expiration nitroglycerine Perlinganit Vasodilatateur 4379804 01 2006 Pharmacia coronarien pour le AG traitement intensif de 8600 infarctus et de D bendorf l insuffisance cardiaque gauche aig e insuline Actrapid Insuline humaine NW 03 2005 Novo Nordisk HM d action rapide et de 50356 Pharma AG courte dur e CH 8700 Antidiab tique K snacht KCI 14 9 Apport potassique 3032C34 12 2005 B Braun Braun substitutif en cas Medical AG d alcalose m tabolique CH 6020 Emmenbrucke noradrenaline Art r nol 40A059 08 2005 Aventis Pharma Vasoconstricteur Deutschland sympathomim tique GmbH D 65926 Frankfurt dobutamine Dobutrex Cardiotonique inotrope Z27277 10 2003 Eli Lilly S A et chronotrope positif Vernier Ge B1 sympathomim tique midazolam Dormicum Hypnoti
59. ors que le spectre UV ne permet pas de les apercevoir ni de les identifier Toutefois il n est pas demand dans notre travail de proc der a l identification des ces produits secondaires La m thode HPLC apparait donc comme beaucoup plus pr cise et sp cifique que la spectrom trie UV vis Chrom Type Fixed WL Chromatogram 206 nm c 0 25 Ww a n 0 20 U g A 0 15 H g E E 0 10 i o 9 0 05 Do y E gt 3 00 E x 0 00 Aga qna DE A IAN AR cdas BLAN ADA GE A Ud RS ES TEN 0 1 2 3 4 5 6 7 Retention Time min Figure 3 chromatogramme HPLC de Cordarone HCI 32 Chrom Type Fixed WL Chromatogram 206 nm 5 f a 0 y e A h 0 li O 3 A o a o Ji zi el es E f A Mig O z 4 ne tt S ee E PTT ER E RO TT rf Te ah Soe poe 7 T FrTTTTTTTA TT A IAEA T A 1 2 3 4 5 6 T Retention Time min Figure 4 chromatogramme HPLC de Cordarone H202 D autre part apr s avoir laiss une ampoule de Cordarone un mois au bord de la fen tre le spectre UV et le chromatogramme suivants ont t r alis s afin de prouver qu il y a effectivement une photod gradation Cf figures 20 et 21 en annexe p 70 1 4 2 2 Etude de sp cificit sur la forme m dicamenteuse M thode Afin de voir l influence des autres constituants de la Cordarone sur le pic de l amiodarone les diff rents constituants de l ampoule sont inject s s pa
60. que breve B1125 10 2007 Roche dur e d action destin Pharma AG a la premedication 4153 Reinach la s dation l induction et au maintien de l anesth sie fentanyl Fentanyl Analg sique opiac 200 06 2003 Pharmacie 0 05mg ml Geneve Chlorure de NaCl Utilis ici comme 1510303 03 2006 Labo Bichsel sodium diluant Interlaken glucose Glucose Utilis ici comme 03012010 01 2006 Bioren S A 5 0 diluant Couvet NE 66 V 4 RESULTATS V 4 1 Mise au point de la m thode Recherche de composition de la phase mobile Influence du pourcentage d ac tonitrile et du pH du tampon Certains chiffres du tableau diff rent norm ment d une formulation l autre mais ils ont pourtant t report s directement des chromatogrammes Voir les exemples pages suivantes figures 13 16 pp 67a 67d 67 Tableau 34 r sultats de l tude des 9 syst mes TTT IS 0 81 min min minutes minutes abandon abandon 12 11 13 95 11277 1 58 2 86 minimum minimum 11 12 12 73 8336 O N Un Un 2 78 ee 68 gt Influence du d bit de la phase mobile Tableau 35 optimalisation du d bit Systemes a PA TO 0 87 0 74 0 6 min Rt 8 75 5 92 4 75 min K 9 05 7 6 91 N 3447 2567 2359 Asym 1 85 1 62 1 58 TO 87 0 74 min Rt min aaa N 2157 2123 2070 D bit ml min 1 1 2 1 5 Cf Quelques exemples de chromatogrammes pages suivantes figures
61. r ment On pr pare pour cela des solutions de concentrations identiques celles de la formulation commerciale dilu e afin de v rifier la provenance des pics chromatographiques observ s lorsque l on injecte de la Cordarone Les diff rents composants suivants sont inject s 33 1 Tween 1ug ml alcool benzylique 0 2 mg ml Cordarone 0 1 mg ml phase mobile amiodarone 0 1 mg ml m lange Tween amiodarone 10 90 N O OF fF W N m lange Tween Cordarone 10 90 Pour l tude de sp cificit de la Cordarone les diff rents excipients sont dilu s de fa on a entrer dans le domaine d analyse ainsi on injecte une solution de Tween a 0 1 mg ml une solution d alcool benzylique a 0 2 mg ml une solution de Cordarone a 0 1 mg ml R sultats Aucune interference avec la phase mobile ni avec l alcool benzylique qui sort tres t t n est observee Par contre le Tween semble poser un probleme en effet il sort a peu pres au m me endroit que le principe actif amiodarone Ce qui amene la problematique du tween et effet m moire 1 4 2 3 Tween et effet m moire recherche de l influence du polysorbate 80 A plusieurs reprises et notamment lors de la phase d tude d optimalisation et de sp cificit avec les 9 syst mes il a t remarqu lors de l injection du polysorbate 80 son pic sortait exactement au m me temps de retention que le principe actif amiodarone La qu
62. r le pH La plus forte variation de pH est de 0 3 unite donc insignifiante Concernant le parametre du pH F semble tre la meilleure condition de stockage ce qui correspond aux recommandations du fabricant Conclusion La variation de pH est insignifiante sur 48h et la concentration des solutions n a pratiquement pas d influence sur celui ci La conservation temp rature ambiante et l abri de la lumi re semble tre ici conseill e gt Dosage par HPLC Variation de concentrations obtenues pour diff rentes dilutions du lot D SS 120 ce D 100 e dilution a 2 s dilution b 5 80 dilution c 60 gt lt dilution d amp 40 dilution e c PE e dilution f z 20 reference a 0 0 10 20 30 40 50 Temps h Figure 10 variation de la teneur en principe actif en fonction du temps pour le lot D 53 Variation de concentrations obtenues pour differentes dilutions du lot E Q 120 4 ae 6 dilution a V 100 oa 3 s dilution b 5 80 dilution c o 60 gt dilution d O S 40 dilution e e dilution f e 20 po 5 r f rence 2 o0 0 10 20 30 40 50 Temps h Figure 11 variation de la teneur en principe actif en fonction du temps pour le lot E Variation de concentrations obtenues pour differentes dilutions du lot F e dilution a a dilution b
63. rait par adsorption sur le mat riel La perte est de 25 en 24 h temp rature ambiante L activit pharmacologique pr dominante de la substance tudi e est celle d agent antiarythmique de la classe lll de Vaughan Williams c est a dire ralentissement de la conduction et augmentation des periodes refractaires en prolongeant la dur e du potentiel d action de la fibre cardiaque Mais l amiodarone a aussi un effet bradycardisant et adr no freinateur et reduit la consommation d oxygene du myocarde par allegement de son travail 8 14 Elle agit aussi au niveau des canaux en ralentissant les courants sodiques et calciques a un effet vasodilatateur et augmente le debit coronarien Elle repr sente donc un antiarythmique tres complet Ses possibilit d emploi sont par cons quent assez nombreuses 15 La dose habituellement prescrite peut tre de 5mg kg dans 250 ml de glucose 5 G5 renouvelables 2 a 3 fois par heure lors d un traitement de charge de 10 a 20 mg kg dans 250 ml de G5 pour un traitement preventif Il est aussi possible de faire une i v d de 5mg kg sur 3 min minimum 4 8 mais cette voie est contre indiqu e en cas d hypotension d insuffisance respiratoire s v re et d insuffisance cardiaque o un risque d aggravation existe 15 De part sa nature tres lipophile la substance a un profil pharmacocin tique caract ristique Celui ci pr sente une grande variabilit interpatient une large distribution tissulaire
64. rmulation reconstitu e de Cordarone de composition identique a celle des ampoules La preparation de toutes les solutions de validation est detaillee en annexe p 61 a 63 18 1 2 2 Robustesse L tude de la robustesse d une m thode permet de d finir les variations admissibles des parametres operatoires critiques qui sont sans effet sur la validit des r sultats fournis L etude se fait grace a la technique des plans factoriels qui permet de faire varier plusieurs parametres en m me temps et d observer aussi les interactions entres eux Dans la pr sente tude un plan 2 est utilis permettant de tester trois param tres A B C et leurs interactions deux a deux 1 2 2 1 Param tres variables Les trois parametres variables choisis sont le pH du tampon phosphate A le pourcentage d acetonitrile B la concentration molaire du tampon phosphate C Tableau 1 Valeurs cod es des mm Valeur haute 45 Point central 0 i ny 5 Valeur basse 24 La variation appliqu e est de 10 pour chaque parametre 19 1 2 2 2 Plan d exp riences complet a trois variables Ce plan tudie la variation de trois param tres ce qui repr sente huit essais 2 Tableau 2 Parametres tudi s Systemes Parametres ACN Conc Tampon 1 A B C 2 7 55 29 Point central AO BO CO 2 5 50 26 5 2 A B C 2 7 55 24 3 A B C 2 7 45 24 Point central AO BO CO 2 5 50 26 5 4 A B C 2 3 55 29
65. s de 0 ni diff rentes entre elle au risque de 5 Les pentes ne sont pas significativement diff rentes au risque de 5 Les deux droites sont donc superposables Les tests de F et F2 sont accept s par contre les variances ne sont pas homog nes Cela est du un seul point tres diff rent le 150 du jour 3 Mais pour des raisons de tableur il ne peut tre supprim c Conclusion concernant la lin arit Le mod le lin aire est adapt mais celui ci d pend du bruit de fond qui est ici tr s important d ce fameux point A priori le dosage pourrait se faire avec un talon externe 100 1 4 3 2 Exactitude a R sultats et calculs pour l exactitude Tableau 13 r sultats obtenus partir d un seul talon externe a 100 un par jour Essai i j Concentration Pourcentage i jour j retrouv e Recouvrement Variance th orique j groupe mg ml S2j groupe std std B 1 2 0 0750 0 0720 95 96 groupe 2 2 2 0 0750 0 0749 99 83 3 811 3 2 0 0750 0 0738 98 35 97 15 groupe 3 101 91 20 522 92 86 100 75 groupe 5 104 21 47 66 114 07 Recouvrement moyen 98 84 Coefficient de d termination r 0 9800 40 Tableau 14 r sultats obtenus partir de la droite de r gression une par jour Essai i j Concentration Pourcentage i jour Concentratio retrouvee Recouvrement Variance th orique j groupe mg ml mg ml groupe std std 98 15 groupe 1 101 72 10 373 104 58 96 5
66. s il n y a pas de d gradation visuelle pas de formation de produits de degradation toxiques ni une perte sup rieure a 10 du principe actif sur la duree escompt e Si le moindre changement visuel apparait on considere que le melange est incompatible pour des raisons de s curit Il faut toujours favoriser la prudence en cas d absence de donn es ou de r ponses ambigues Les cons quences de tous ces ph nom nes peuvent tre une obstruction des catheters une perte d efficacit du traitement la formation de d riv s toxiques un risque d embolie potentiellement mortelle voire le d p t de cristaux dans certains organes Tout ceci pouvant tre dommageable pour le patient I 3 UNE METHODE HPLC La chromatographie liquide a haute performance HPLC constitue l une des m thodes s paratives largement employees dans le domaine de l analyse pharmaceutique La chromatographie liquide a connu un d veloppement consid rable depuis la mise au point du proc d initial par Tswett en 1906 notamment depuis l apparition des pompes a haute pression Cette methode permet la separation et la quantification de composes en solution elues a travers une colonne chromatographique a l aide d une phase mobile liquide elle m me percol e grace a une pression lev e Les ph nom nes de s paration mis en jeu sont tres divers partage adsorption et il existe une r elle interaction triple entre l analyte la phase stationnaire et la phase m
67. t poss de une marge de 85 115 selon les normes de la pharmacop e concernant les solutions injectables 9 et n est donc pas tenu de mettre 100 00 d amiodarone dans les ampoules Donc si l on retrouve 108 cela ne veut pas forcement dire que notre standard surdose les r sultats mais c est que le fabricant a effectivement lui m me surdose ces ampoules de 8 de produit De toute facon c est cette valeur qui servira a calculer le 100 de d part Les chantillons des seringues des lots A B et C sont dilu s de la m me facon une premi re fois en solution mere 0 5 mg ml puis en solution fille d analyse a 100 ug ml Cf annexe p64 1 3 2 2 Partie 2 La deuxieme partie ne contenant pas de restriction au niveau du volume et de la nature du conditionnement on proc de a une tude classique de stabilit et de dosage de six dilutions diff rentes sur 48h dans trois conditions de stockage diff rentes Ainsi un volume n cessaire a l etude sur deux jours est conditionne dans des seringues de 60 ml a partir desquelles sont effectues les prelevements de 3ml a chaque jour de dosage et d observation La concentration initiale est unique a l int rieur d un m me lot Le probleme abord ici est celui de la dilution de la solution injectable de Cordarone En effet selon le fabricant la solution injectable doit tre dilu e de la fa on suivante deux ampoules de 3ml a 150mg ml dans 500ml minimums de glucose 5 ce qui correspond une conc
68. t resume la preparation de ces solutions fid lit pour la validation Tableau 29 mode de pr paration des solutions fid lit Concentration de la Volume de solution mere Volume d ac tonitrile a solution fid lit ug ml de 0 5 mg ml a pr lever ul ajouter ul 100 200 63 V 3 PARAMETRES DE L ETUDE DE STABILITE Pr parations des chantillons de dosage V 3 1 Partie 1 Pr paration des solutions Les solutions meres a 0 5 mg ml sont pr par es en diluant 500 ul de chaque seringue a 50 mg ml dans 50 ml d eau puis les solutions filles d analyse a 0 1 mg ml sont pr par es en diluant 200 ul de ces solutions meres dans 1ml ac tonitrile V 3 2 Partie 2 1 Pr paration des seringues des lots D E F Par dilution d ampoules de Cordarone a 50mg ml dans du G5 six solutions meres de 50ml chacune aux six concentrations n cessaires sont r alis es Pour les trois lots D E F cela repr sente au total 18 seringues Tableau 30 mode de pr paration des solutions meres Volume de solution Concentration de la de Cordarone a solution mere pr lever ml et a desiree mg ml diluer dans 50 ml de G5 0 6 0 6 5 5 9 375 9 375 12 5 12 5 18 75 18 75 25 25 2 Pr paration des solutions de dosage Lors du dosage les solutions meres contenues dans les seringues doivent tre dilu es afin d tre dans le domaine d tude a la concentration du 100 valant 0 1 mg ml Ainsi les solut
69. tion des produits de d gradation qui apparaissent par exemple apres une exposition a la lumi re du jour Donc d un point de vue qualitatif d j HPLC est plus performante que la spectrom trie UV vis A l aide de cette technique de choix une m thode sp cifique a l tude de l amiodarone a t d velopp e puis valid e l intervalle de confiance des r sultats est de 5 56 Le dosage des solutions de 50 mg ml d amiodarone a permis de conclure que ces seringues pr tes l emploi sont stables physiquement et chimiquement durant 30 jours Elles peuvent tre conditionn es dans des seringues transparentes et tre expos es a la lumi re du jour c est a dire qu elles peuvent absolument avoir leur place sur un chariot d urgence des SIM Toutefois il serait souhaitable de les conserver au frais et l abri de la lumi re pour ralentir la d gradation in vitable et la perte en amiodarone Le fait d administrer de fortes concentrations comme il est d usage aux SIM ne pose apparemment pas de probl me d instabilit physique ni chimique si les dilutions sont administr es directement Dans le cas contraire la m me pr caution de conservation que les seringues pr tes l emploi est applicable pour les seringues de concentrations inf rieures dilu es dans le G5 dont la limite d utilisation se situe entre 24 et 48 h dans ces conditions de conservation Par ailleurs si la Cordarone est dilu e dans du G5 la concentration de 0 6 mg ml el
70. tion du premier ordre n est observ e e Coefficients des facteurs sur la surface du pic Les facteurs n ont aucune influence significative sur les surfaces du pic d amiodarone Aucune interaction du premier ordre n est observ e d Conclusion sur la robustesse Parmi les facteurs variables tudi s seul le pourcentage d ac tonitrile dans la phase mobile agit de fa on significative sur k et sur l asym trie du pic d amiodarone Toutefois les r sultats qualitatifs ne sont que l gerement modifi s Des lors il est indispensable de fixer le pourcentage d ac tonitrile dans la phase mobile de mani re tr s pr cise 50 0 La stabilit de la m thode du point de vue quantitatif a t d montr e gr ce l tude de robustesse Toutefois il se peut qu il y ait une l g re modification de l asym trie des pics et du facteur de r tention k si le pourcentage d acetonitrile n est pas fix avec pr cision 47 114 5 Etude de stabilit 11 4 5 1 Partie 1 tude des lots A B C gt Stabilit physique Cette stabilit est valu e en fonction de l aspect visuel des solutions observ es Aspect de la solution t liquide sirupeux limpide jaune p le identique la r f rence Aucun cristaux ni trouble ni pr cipit Evolution de l aspect au cours du temps Aucun changement n est apparu jusqu tz Les solutions conservent un aspect visuel identique la solution de d part to Les seri
71. ure celle pour la phase aqueuse Dans le syst me chromatographique le solute amiodarone a une affinit diff rente pour les chaines alkyles C18 de la phase stationnaire et pour la phase mobile ce qui definit son temps de r tention Ces affinit s sont influenc es par la composition de la phase mobile autrement dit par la proportion de modificateur organique Par consequent dans notre cas plus on augmentera le pourcentage d ac tonitrile dans la phase mobile plus l amiodarone sera lu e rapidement De plus par sa structure chimique on voit qu elle est formee d une grosse partie hydrophobe 3 cycles sur laquelle est greffee une petite chaine alkyle se terminant par deux groupements thyle amine NEt 2 Mais le fait qu elle soit sous forme neutre ou protonn e n influence pas du tout la s paration car la partie hydrophobe l emporte Donc sur une colonne C18 ou la phase est hydrophobe l amiodarone sera fortement retenue il faut donc ajouter un solvant organique pour la d crocher La stabilit de l amiodarone est d crite dans diff rents ouvrages 3 12 qui indiquent que les injectables doivent tre conserv es temp rature ambiante 15 25 C l abri de la lumi re et de la chaleur excessive Selon L A trissel 13 lamiodarone HCI 0 6 mg ml dans G5 est stable 5 jours a temperature ambiante II faut tout de m me ajouter que si cette solution est stock e dans un contenant a base de PVC une perte de substance appa
72. ux concentrations utilis es aux Soins intensifs et d valuer les incompatibilites physico chimiques ventuelles entre les differents principes actifs et lamiodarone I 2 UNE SUBSTANCE AMIODARONE D un point de vue chimique le chlorhydrate d amiodarone de formule C25H29l2NO3 HCI est un d riv benzofurane di iod contenant une cha ne alkyle avec une amine tertiaire di thyl e 8 Cf figure C est une poudre cristalline blanche insoluble en milieu aqueux mais soluble dans ethanol 3 9 10 pris OCH gt CH gt N C2Hs HC C4Ho Figure 1 Formule d velopp e de l amiodarone Le chlorhydrate d amiodarone est un sel donc en solution aqueuse il se dissocie et donne amiodarone protonn e une amine tertiaire de forme R NH son contre ion dans l eau est Panion CI L amiodarone possede un pKa de 9 4 11 qui regit l quilibre entre la forme protonn e de la base et la forme neutre Ce qui signifie que si pH lt 7 4 pKa 2 on a l amiodarone principalement sous forme R3 NH donc acide si pH gt 11 4 amiodarone sera principalement sous forme R3 N donc neutre Ce qui fait sa particularit analytique est sa nature tres lipophile En effet elle possede un log D 5 49 D 10 11 Ce qui signifie qu il y a environ 10 mol cules dans la phase organique pour 1 mol cule dans la phase aqueuse lors d une extraction liquide liquide Donc Paffinit de l amiodarone pour la phase hydrophobe est tr s sup rie
73. x th oriques ar Was AE 2 1 25 B avec A et B demi largeurs du pic non gaussien 10 de sa hauteur A gt B en minutes gt R solution tr2 tr Rs 2 W2 W1 avec o largeur du pic la base 60 gt Facteur d asym trie S Il by gt gt S lectivite k 2 a k i V 2 VALIDATION Pr paration des solutions gt solutions standard reconstitu es Std 1 5 La composition d une ampoule de Cordarone donn e par le fabricant est pour 1 ml 50 mg de chlorhydrate d amiodarone 20 mg d alcool benzylique 100 mg de polysorbate 80 eau pour injectable en quantit suffisante pour 1 ml Ceci constitue la solution originale de FM qu il faut diluer 100 fois pour obtenir les solutions m res d analyse donc la composition d une solution m re est de 0 5 mg ml d amiodarone 0 2 mg ml d alcool benzylique 1 mg ml de tween eau pour injectable ad 1ml 61 50 ml de solution mere a 0 5 mg ml d amiodarone sont constitues selon le tableau suivant Tableau 26 constituants utilis s pour la fabrication de solution m re Std Composition pour 50 ml de Std mere Amiodarone 25 mg Alcool benzylique non dilu 10 ul Solution de tween a 1 5 ml Eau Millipore Ad 50 ml Tableau 27 masse d amiodarone pes e pour la pr paration des solutions meres de Std Jour de validation Masse d amiodarone pes e mg Cette solution mere est dilu e de facon a o
74. y 42 2679 2683 1985 18 Y V Pramar Chemical stability of amiodarone hydrochloride in intravenous fluids International Journal of Pharmaceutical Compounding vol 1 No 5 347 8 1997 19 S Campbell P E Nolan Jr M Bliss R Wood and M Mayersohn Stability of amiodarone hydrochloride in admixtrures with other injectable drugs American Journal of Hospital Pharmacy 43 917 20 1986 20 N Hanioka and coll High performance liquid chromatographic assay for amiodarone N deethylation activity in human liver microsomes using solid phase extraction Journal of chromatography B Analytical Technologies in the Biomedical and Life Sciences 74 1 105 13 2002 21 M C Nahata Stability of amiodarone in an oral suspension stored under refrigeration and at room temperature The Annals of Pharmacotherapy 31 851 2 1997 22 T A Plomp and coll Simultaneous determination of amiodarone and its major metabolite deethylamiodarone in plasma urine and tissues by high performance liquid chromatography Journal of Chromatography 273 379 392 1983 23 L J Lesko and coll High pressure liquid chromatography of amiodarone in biological fluids Journal of Pharmaceutical Sciences vol 70 No 12 1981 24 A M Di Pietra V Cavrini R Gatti and M A Raggi Determination of amiodarone hydrochloride in pharmaceutical formulations by derivative UV spectrometry and High performance liquid chromatography Pharmaceutical R

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