D.1.2.3.12 Title of deliverable: SOP for biochemi
Contents
1. 7 African Food Tradition rEvisited by Research ll FP7 n 245025 Deliverable D 1 2 3 12 SOP for biochemical and nutritional analysis for Group 2 Proc dure pour le dosage des TBARS dans les produits carn s SOP Anti Nutri Meatfish 002 fr Date 04 07 2011 Version 1 Ecrit par Val rie SCISLOWSKI ADIV Pour plus d information sur ce SOP contactez e Val rie SCISLOWSKI valerie scislowski adiv fr e Ce document a t approuv par Partenaire Noms des personnes l ayant approuv Date DD MM YY CIRAD UAC CSIR ADIV V Scislowski 04 07 2011 UT UCAD INRA Page 1 sur 4 Dosage des TBARS dans les produits carn s SOP Anti Nutri Meatfish 002 fr Date 04 07 2011 Version 1 Table des mati res 1 Domaine et application eeeRKRER KE KERKRER KEREN KE RER KEE RER nnn 3 SN E S lee EE 3 Ay Gelle EE 3 5 Rea blesseiert ee deeg eene E 6 Appareillage consommable e eeKRKERKER KR RKE RENE RER KE ER EK Een 4 7 Proc dure EE 4 7 1 Pr paration des solutions d extraction cocococonueonouos 4 7 2 Pr paration des solutions de dosage mmmmnmmmennemnnnnte 4 7 3 Dosage des chantillons smmmmmermnnenemnnenennennnes 5 8 Expression des r sultats ccocooncoouonoooneononnnonnun 6 8 1 Mode de calcul et formules mmssnmmmnnmnnmanmnnnennnnnennenmnnnennnn 6 82. Deliverable D 1 2 3 12 SOP for biochemical and nutritional analysis for Group 2 Proc dure pour la d termination de 4 HAP dans les produits carn s fum s Benzo a Anthrac ne Chrys ne Benzo b Fluoranth ne Benzo a pyr ne SOP Anti Nutri Meatfish 001 fr Date 21 06 2011 Version 2 Ecrit par Joel GRABULOS Pour plus d information sur ce SOP contactez e Joel GRABULOS grabulos cirad fr e Elodie Arnaud elodie arnaud cirad fr Ce document a t approuv par Partenaire Noms des personnes avant approuv Date DD MM YY CIRAD UAC CSIR ADIV UT UCAD INRA T Goli E Arnaud M Rivier 21 06 2011 Page 1 sur 4 D termination de 4 HAP dans les produits carn s fum s SOP Anti Nutri Meatfish 001 fr Date 19 05 2011 Version 2 Table des matieres 1 Domaine et application mssnsmmrmemenennennennnnennnnnnnennnnns 3 2 EE 3 Su le E 3 4 Principe cvcci E RENAR RE ENAR Rede 4 5 R actifs 2 2 72224 ne ns nes ne een 4 e CEET lu RE 4 5 2 Extraction liquide liquide smmmmmnmemanmnnannmnnmennenennns 4 5 3 D termination des HAP par HPLC nn nnnssssssmnenennnente 5 5 3 1 EE 5 5 3 2 Solutions talons de HAP ccccccerecccrecsoosessooccosoecaneosoneenonas 5 6 Appareillage consommable msnsnmmemnenemnnnennenannennens 6 6 1 Pr paration chantillonN ccccccccoccco
3. Chromatographe en phase liquide haute performance avec d tection d tecteur fluorescence Une colonne Lichospher 100 C18 4 6 x 150 mm 5 um Un hachoir viande AFTER FP7 n 245025 Deliverable D 1 2 3 12 SOP Number Anti Nutri MeatFish 004 fr Page 4 sur 8 Procedure for biogenic amines in fish Number Anti Nutri MeatFish 004 fr Date of creation 30 11 2010 Date of revision Hounhouigan 17 10 2011 Unmixeur grande vitesse entre 8000 et 45000 tours min Unsyst me de filtration rapide avec des filtres de diam tre 150 mm Des membranes filtrantes de 0 45 um de porosit ou papier filtre Whatman No 1 Papier aluminium Micropipette de 50 5000 uL avec des c nes correspondants Une seringue d injection de 50 uL Un chronom tre Entonnoir en verre un par chantillon Pole de 10 1000mL B cher de 50mL et de 500mL Tubes essai de 10 mL d 10mm un par talon et par chantillon R cipient pour stockage des chantillons broy s 7 PROCEDURE Pr paration des chantillons Extraction Hacher un chantillon repr sentatif de la chair environ 100g pr lev e trois 3 endroits diff rents du poisson Pr lever 50g de la chair broy e dans un grand b cher Ajouter 100 mL d acide trichlorac tique ATC a 10 M langer avec un mixeur pendant 2 mn Filtrer avec papier filtre Whatman No 1 NB Garder le filtrat dans un flacon en pla
4. B I The laboratory can t make the analysis I impossible or sub contracting The WPL decides the end of the validation step He accepts the final SOP version He completes the table with the last revision date D1 2 3 12 SOPs for Biochemical and nutritional analysis for Group 2 Min ralisation par chauffage avec l acide sulfurique concentr en pr sence d un catalyseur Alcalinisation distillation de l ammoniac lib r qui recueilli dans une solution d acide borique est titr par une Protein NF V 04407 e Deeg Nutri MeatFish 001 fr solution d acide sulfurique D termination de la teneur en azote calcul de la teneur en prot ines en Nutrional factors multipliant par le facteur conventionnel de 6 25 Folch method Folch J Lees M Sloane Stanley 2 A Lipid G H S EE Nutri MeatFish 002 fr J Biol Chem 9 i 1957 226 497 509 Anti nutrional Polycyclic eoa Amare M thode CIRAD HPLC Anti Nutri MeatFish 001 fr Hydrocarbon PAH Page 1 sur 4 M thode interne Les produits d oxydation secondaire des huiles et graisses font r action avec l acide 2 thiobarbiturique formant des TBARS ADIV produits de condensation L absorbance AI EAEE de ceux ci est mesur e 530 nm correspondant absorption maximum Ababouch L H 1995 Assurance qualit en industrie Apr s d prot inisation de l chantillon halieutique l acide perchlorique on proc de la e Ee
5. fan food tradition revisited by research Project coordinator Cirad www after fp7 eu 7 B African Food Tradition rEvisited by Research FP7 n 245025 Start date of project 01 09 2010 Duration 45 months Deliverable number D 1 2 3 12 Title of deliverable SOP for biochemical and nutritional analysis for Group 2 Deliverable type Report Prototype Demonstration Other Report Dissemination level PU PP RE CO PU Contractual date of delivery February 2011 Actual date of delivery October 2011 Work package contributing to the deliverable WP1 Organisation name of lead contractor for this deliverable ADIV Authors are indicated on the appropriate SOPs This document has been send to The coordinator by WP Leader Date September 2011 To the Commission by the Coordinator Date October 2011 PU Public PP Restricted to other programme participants including the Commission Services RE Restricted to a group specified by the consortium including the Commission Services CO Confidential only for members of the consortium including the Commission Services AFTER G A n 245025 Deliverable 1 2 3 12 Title of deliverable SOP for biochemical and nutritional analysis for Group 2 Methodology for the development of SOPs for this deliverable This deliverable consists of several SOPs SOPs related to biochemical and nutritional analysis for one Group of product The SOP s come fr
6. Anti Nutri MeatFish 003 fr Date of creation 30 11 2010 Date of revision Hounhouigan 24 10 2011 11 ENREGI STREMENT DES REVISIONS Date Personne responsable Description de la modification AFTER FP7 n 245025 Deliverable D 1 2 3 12 SOP Number Anti Nutri MeatFish 003 fr Page 7 sur 7 7 African Food Tradition rEvisited by Research else FP7 n 245025 Deliverable D 1 2 3 12 SOP for biochemical and nutritional analysis for Group 2 Proc dure pour la d termination des amines biog nes histamine cadaverine putrescine dans le poisson et les produits base de poisson SOP Number Anti Nutri MeatFish 004 fr Date of creation 30 11 2010 Revision 1 Anihouvi Victor 17 10 2011 Written by Opportune Akpo Janvier Kindossi Revision 1 Victor Anihouvi For information on this SOP please contact e Victor Anihouvi anihvic yahoo fr WP3 member UAC B nin This document has been approved by Partner Name of the person who approved Date DD MM YY CIRAD UAC Victor Anihouvi Joseph Hounhouigan 30 11 2010 CSIR ADIV Val rie Scislowski 05 10 2011 UT UCAD INRA Page 1 sur 4 Procedure for biogenic amines in fish Number Anti Nutri MeatFish 004 fr Date of creation 30 11 2010 Date of revision Hounhouigan 17 10 2011 Table des matieres 1 Domaine et application cccsscseesseseesecsee
7. Date Personne Description de la responsable modification 12 ANNEXES AFTER FP7 n 245025 Deliverable D 1 2 3 12 sop Anti Nutri MeatFish 002 fr Page 7 sur 7 African Food Tradition rEvisited by Research FP7 n 245025 KE TER Deliverable D 1 2 3 12 SOP for Biochemical and nutritional analysis for Group 2 D termination de la teneur en azote basique volatile total dans le poisson et les produits base de poisson SOP Number Anti Nutri MeatFish 003 Date de cr ation 30 11 2010 R vision 01 Victor Anihouvi 12 12 2010 Ecrit par Janvier Kindossi V rifi par Victor Anihouvi Pour plus d information sur ce SOP contactez e Victor Anihouvi anihvic yahoo fr WP3 member UAC Benin Ce document a t approuv par Partenaire Noms des personnes ayant approuv Date DD MM YY CIRAD UAC CSIR ADIV UT UCAD INRA Victor Anihouvi Val rie Scislowski 30 12 2010 10 11 2011 Page 1 sur 4 Procedure de d termination de la teneur en azote basique volatile total dans le poisson Number Anti Nutri MeatFish 003 fr Date of creation 30 11 2010 Date of revision Hounhouigan 24 10 2011 Table des matieres 1 Domaine et application sssss 2 5 5 3 2 R ferenceS eege dee 3 3 Debbie EES E wll 3 5 gt gt e x CN 3 6 Apparelllag
8. dit e selon la norme NF V 04 407 2 REFERENCES Cette analyse est d crite dans divers documents normatifs Norme ISO 17025 Norme AFNOR NF V 04 407 NF EN ISO 04 416 NF EN ISO 3696 et sa description est largement tomb dans le domaine de la litt rature publique 3 DEFINITIONS La m thode de Kjeldahl est applicable pour le dosage de l azote de diff rents compos s azot s tels les amines et les sels d ammonium quaternaires Elle ne permet pas le dosage direct des nitrates nitrites nitrosyles cyanures qu il faut d abord r duire en ammoniac 4 PRINCIPE La d termination des prot ines par la m thode Kjeldahl s effectue en trois tapes e Min ralisation du produit par chauffage avec de l acide sulfurique concentr en pr sence d un catalyseur e Alcalinisation des produits de la r action distillation de l ammoniac lib r qui recueilli dans une solution d acide borique est titr par une solution d acide sulfurique e D termination de la teneur en azote calcul de la teneur en prot ines en multipliant par le facteur conventionnel de 6 25 AFTER FP7 n 245025 Deliverable D 1 2 3 12 SOP Number Nutri MeatFish 001 fr Page 3 sur 11 Dosage de l azote total par la m thode Kjeldhal et calcul de la teneur en prot ines SOP Number Nutri MeatFish 001 fr Date of creation 16 05 201116 5 2011 Date of revision 5 REACTIFS catalyseur de min ralisation en pastilles 5 g K S0 0 15 g
9. p tabilit L analyse doit tre effectu e en double elle est jug e correcte si la diff rence entre deux d terminations obtenues sur le m me chantillon ne d passe pas 2 mg N 100g 9 POINTS CRITIQUES ET NOTE SUR LA PROCEDURE Le tube de sortie du distillat doit bien immerger dans la solution d acide borique 2 pour viter des pertes d ions d ammonium Il faut imp rativement utiliser une solution standard de H2SO0 pour la titration 10 RAPPORT D ESSAI Le rapport d essai doit indiquer le nom de l chantillon en pr cisant sa nomenclature et le type d chantillon la date de l analyse et le nom de I op rateur la m thode utilis e ici SOP N Anti Nutri MeatFish 003 fr les r sultats obtenus AFTER FP7 n 245025 Deliverable D 1 2 3 12 SOP Number Anti Nutri MeatFish 003 fr Page 5 sur 7 Procedure de d termination de la teneur en azote basique volatile total dans le poisson Number Anti Nutri MeatFish 003 fr Date of creation 30 11 2010 Date of revision Hounhouigan 24 10 2011 En outre seront d taill s toute condition op ratoire non indiqu e dans le SOP ou optionnelle et les circonstances particuli res qui auraient pu affecter les r sultats AFTER FP7 n 245025 Deliverable D 1 2 3 12 SOP Number Anti Nutri MeatFish 003 fr Page 6 sur 7 Procedure de d termination de la teneur en azote basique volatile total dans le poisson Number
10. 10ml de m lange Folch qui sera ajout au filtrat 7 Verser les 3 filtrats r cup r s dans une ampoule d canter de 250 ml et compl ter 150 ml suivant la marque du feutre avec le m lange de Folch 8 Ajouter 37 ml de solution NaCl 0 73 Agiter fortement et laisser reposer une nuit temp rature ambiante 9 Apr s quilibration compl te des phases soutirer la phase inf rieure PI qui contient les lipides dans un ballon de 250ml pierre ponce pr alablement tar muni d un entonnoir contenant un filtre s parateur de phase 1SP d lipid 24h dans du chloroforme AFTER FP7 n 245025 Deliverable D 1 2 3 12 SOP Number Nutri MeatFish 002 fr Page 6 sur 9 Dosage des lipides totaux par la m thode de Folch SOP Number Nutri MeatFish 002 fr Date of creation 16 05 2011 Date of revision 31 8 2011 10 Ajouter dans l ampoule contenant seulement la phase sup rieure 30 ml de PI pr par e la veille chloroforme m thanol eau sal e 0 58 8 4 3 vol vol vol Agiter vigoureusement puis laisser les phases se r quilibrer environ 1h soutirer la phase inf rieure contenant les lipides dans le m me ballon qu au point 9 11 Evaporer le solvant l vaporateur rotatif sous vide et une temp rature inf rieure 40 C 12 Effectuer une 1 re vaporation 13 Resolubiliser les lipides avec 10ml de m lange de Folch 14 Re vaporer sec et prolonger l vapo
11. CuSO 5 H 0 0 15 g Ti O billes de verre ventuellement acide sulfurique d 1 84 g ml eau oxyg n e 20 volumes acide borique 4 lessive de soude 32 solutions d indicateurs bleu de m thyl ne 0 1 et rouge de m thyl 0 2 dans thanol 96 ou vert de bromocr sol 0 2 solution A et rouge de m thyl 0 2 dans thanol solution B l indicateur est compos de 5 volumes de et de un volume B HCI N Normalit exacte HC10 1 N normalit exacte 0 001 N pr s sulfate d ammonium de puret connue conserver l abri de l humidit ou s cher en tuve 2 h 104 3 C tryptophane de puret connue conserver l abri de l humidit ou s cher en tuve 2h 104 3 C eau distill e papier peser ou nacelle de pes e 6 APPAREILLAGE balance analytique au mg digesteur type Biichi 435 distillateur auxiliaire de pipetage AFTER FP7 n 245025 Deliverable D 1 2 3 12 SOP Number Nutri MeatFish 001 fr Page 4 sur 11 Dosage de l azote total par la m thode Kjeldhal et calcul de la teneur en prot ines SOP Number Nutri MeatFish 001 fr Date of creation 16 05 201116 5 2011 Date of revision pipettes 20 ml et 5 ml pipette de 50 ml jaug e burette de 25 ml pr cise 0 05 ml ballons ou Erlen Meyer de 250 ml tubes en verre du digesteur et du distillateur prouvette de 50 ml flacons en plastique ou en ver
12. centrifuger 2 Ajouter 40 uL de BHT lug uL dans l thanol 80 uL d EDTA 0 1M et 10 mL de TCA 5 3 Homog n iser 2 fois 15 secondes ultra turax 8000 rpm 4 Centrifuger 3000 g pendant 3 minutes 5 R cup rer le surnageant en le filtrant sur filtre Whatman n 1 dans un tube de 10 mL Le filtrat doit tre limpide 6 Conserver l extrait 4 C l obscurit avant dosage Etapes de dosage 7 Pr parer le bain marie a 70 C 8 Dans un tube essai introduire 3 mL d extraits ou 3 mL de TCA pour le blanc ajouter 3 mL de TBA 55 5 mM Boucher les tubes 9 Vortexer 10 Laisser incuber 20 minutes 70 C au bain marie 11 Laisser refroidir 30 minutes dans l eau glac e AFTER FP7 n 245025 Deliverable D 1 2 3 12 sop Anti Nutri MeatFish 002 fr Page 5 sur 7 Dosage des TBARS dans les produits carn s SOP Anti Nutri Meatfish 002 fr Date 04 07 2011 Version 1 12 Lire les absorbances 532 nm contre le blanc 8 EXPRESSION DES RESULTATS 8 1 Mode de calcul et formules mg quivalent MDA kg d chantillon 0 72 1 56 x A532 nm X Vsolvant X Vf PE avec 0 72 1 56 prise en compte du coefficient d extinction mol culaire du complexe TBA MDA de 1 56 10 Mem et du poids mol culaire du MDA de 72 g mol A 532 nm Absorbance lue au spectro Vsolvant Volume de la solution de dilution TCA BHT EDTA en mL Vf volume de filtrat pr lev PE masse de la prise d e
13. homog n isation de l chantillon se reporter la SOP Prep MeatFish 001 fr e respect du temps de min ralisation e appr ciation de la zone de virage e Les r actifs les produits chimiques doivent tre de qualit analytique Si ces conditions sont respect es l influence des r actifs et consommables peuvent tre consid r es comme n gligeable L acide chlorhydrique est achet pr t l emploi avec une normalit garantie A chaque nouveau lot de r actifs utilis pour la min ralisation un essai a blanc est effectu e L chantillon La prise d essais s effectue sur un broyat initialement pr par dont l homog n it est assur e par la qualification et l habilitation des techniciennes e Le Min ralisateur L influence est insignifiante si le mode op ratoire est bien observ D autre part un controle de rendement tryptophane est r alis au minimum 2 fois par mois afin de s assurer de son bon fonctionnement e Le Distillateur L influence est insignifiante si le mode op ratoire est bien observ D autre part un contr le de rendement tryptophane ou sulfate d ammonium est r alis par semaine e Les Tubes de distillation Ils doivent tre de bonne qualit et en bon tat afin d viter les ventuelles fuites AFTER FP7 n 245025 Deliverable D 1 2 3 12 SOP Number Nutri MeatFish 001 fr Page 9 sur 11 Dosage de l azote total par la m thode Kjeldhal et ca
14. les constituants d un m lange et repose sur l utilisation d une phase mobile et d une phase stationnaire La HPLC repose sur la circulation d un fluide phase mobile dans une colonne phase stationnaire Apr s extraction des amines biog nes histamine cadaverine putrescine par une solution d acide trichlorac tique on proc de leur d rivation par l O phtalald hyde OPA et on s pare par chromatographie liquide phase invers e en utilisant l ac tonitrile et le Sodium dihydrogen ortho phosphate comme phase mobile Le dosage de l histamine se fait par d tecteur fluorescence de HPLC 5 REACTIFS Sodium dihydrog ne ortho phosphate NaH PO H2O 2 5 mM 0 39 g par litre d eau distill e Acide trichloroac tique ATC 10 en pesant 10 g dans 100 ml d eau distill e Solution m re d histamine 1g l en pesant 0 1656 g de chlorhydrate d histamine dans 100 ml de solution d acide trichlorac tique 10 Solutions talon 2 pr par es comme suit o Etalon de 0 005 g ml 5mg kg Sppm 0 5ml de la solution m re dans 100 ml de ATC 10 o Etalon de 0 010 g ml 10 mg kg 10 ppm 1ml de la solution m re dans 100 ml de ATC 10 Solution d Ophtalaldehyne OPA en pesant 1 g dans 100 ml de m thanol Solution de NaOH 1N dissoudre 4 g dans 100 ml d eau distill e Solution de HCI 3N en pr levant 25 ml d une solution d HCI 37 12N dans 100 ml d eau distill e 6 APPAREILLAGE
15. n 245025 Deliverable D 1 2 3 12 SOP Number Nutri MeatFish 002 fr Page 2 sur 9 Dosage des lipides totaux par la m thode de Folch SOP Number Nutri MeatFish 002 fr Date of creation 16 05 2011 Date of revision 31 8 2011 1 DOMAINE ET APPLICATION Ce mode op ratoire d crit comment d terminer la teneur en lipides totaux des tissus animaux selon la m thode d crite par Folch et al 1957 Elle s applique tous types de tissus animaux dont les muscles le gras les abats 2 REFERENCES Folch J Lees M Sloane Stanley G H S 1957 A simple method for the isolation and purification of total lipids from animal tissues J Biol Chem 226 497 509 3 DEFINITIONS 4 PRINCIPE L chantillon est trait par un m lange Folch constitu de deux solvants chloroforme CHCH et m thanol CH30H 2vol 1vol Le m thanol est utilis pour rompre les liaisons lipides prot ines alors que le chloroforme solubilise les lipides Les substances non lipidiques solubles dans le m lange sont limin es en lavant l extrait avec de l eau sal e Le sel diminue la dissociation des lipides acides ces derniers restent sous forme non dissoci e dans la phase solvant chloroforme De plus la pr sence d eau sal e bien miscible dans le m thanol permet de s parer la phase chloroformique phase inf rieure contenant les lipides de la phase m thanolique phase sup rieure contenant les produits hydrophiles glucides pr
16. se durcir l avenir en prenant en compte un groupe plus important de mol cules dont les trois autres prises en compte dans le pr sent SOP Il n y a pas de limite au nombre de noyaux accol s et le nombre d isom res augmente consid rablement avec le nombre de cycles aromatiques De plus ils peuvent tre alkyl s Il existe donc un nombre infini de HAP dont les propri t s sont tr s variables suivant leur taille et leur forme AFTER FP7 n 245025 Deliverable D 1 2 3 12 sop Anti Nutri Meatfish 001 fr Page 3 sur 11 D termination de 4 HAP dans les produits carn s fum s SOP Anti Nutri Meatfish 001 fr Date 19 05 2011 Version 2 Le choix de doser les 4 HAP num r s en 1 repose sur un avis du comit EFSA Polycyclic Aromatic Hydrocarbons in Food Scientific Opinion of the Panel on Contaminants in the Food Chain Question N EFSA Q 2007 136 The EFSA Journal 2008 724 1 114 Dans cet article il a t conclu que ce groupe appel HAP4 est le mieux corr l avec le risque de sant pour le consommateur en lien avec la consommation d aliments fum s 4 PRINCIPE A partir d un broyat une tape de saponification la soude thanolique 1 M est r alis e dans un bain marie a 80 C sous agitation Une extraction liquide liquide au cyclohexane permet de r cup rer les HAP pr sents La s paration par chromatographie liquide haute performance HPLC est r alis e sur une colonne C18
17. verre le surnageant c est dire la phase organique l aide de la pipette Pasteur Pour cela pr lever avec pr caution la phase en laissant une portion de 1 mm de phase organique cyclohexane HAP afin de ne pas r cup rer de phase aqueuse R aliser ensuite l tape de nettoyage pour finir de r cup rer le maximum de HAP 2 fois de suite ajouter 2 mL de cyclohexane dans le tube de saponification vortexer fortement et centrifuger 5 min a 3000 rpm R cup rer a chaque fois le surnageant comme pr c demment et l additionner aux pr c dents Au final un volume compris entre 6 et 7 mL est r cup r dans le tube en verre Evaporer a sec le surnageant sous flux d azote en r glant le bain sec aux environs de 40 C 7 4 D termination de la teneur en HAP par HPLC Ajouter 1 mL d ac tonitrile dans l extrait sec vortexer nergiquement transvaser le tout dans une seringue munie d un filtre PTFE 0 2 um et filtrer dans un vials HPLC 6 4 Le dosage s effectue par HPLC dans les conditions d crites en 6 4 L identification et la quantification sont r alis es partir de la gamme talon apr s l injection des solutions S3 S7 5 3 2 Les temps de r tention des compos s sont relev s sur les chromatogrammes des solutions talons sachant que l ordre des pics est respectivement le suivant B a A Ch B b F et B a P Les temps de r tention ainsi d termin s sont utilis s pour l identification de chaque co
18. 0 40 mesurer a l prouvette 600 mL d ac tonitrile puis 400 mL d eau ultrapure Le solvant B est 100 Ac tonitrile 5 3 2 Solutions talons de HAP B a P Benzo a pyrene 200 ug mL dans chlorure de m thyl ne Supelco r f 4 8665 ampoule I mL B a A Benz alanthracene 200 ug mL dans chlorure de m thyl ne Supelco r f 4 8651 ampoule 1mL B b F Benzo b fluoranthene 200 ug mL dans m thanol Supelco r f 4 8637 ampoule 1mL Ch Chrysene 200 pg mL dans chlorure de m thyl ne Supelco r f 4 8650 ampoule 1mL A partir de ces solutions talons commerciales pr parer une solution d un m lange de ces 4 talons 10 ug mL de chaque HAP appel S1 Pour cela pr lever 250uL de B a P 250uL de B a A 250uL de B b F 250uL de Ch 4 mL d ac tonitrile A partir de la solution S1 pr parer une solution 200 ng mL appel e S2 Pour cela pr lever 100 uL de S1 4 9 mL d ac tonitrile A partir de la solution S2 pr parer la gamme talon comme suit Quantit s solution S2 Quantit s ac tonitrile S3 40 ng mL S4 20 ng mL S5 8 ng mL S6 4 ng mL S7 2 ng mL AFTER FP7 n 245025 Deliverable D 1 2 3 12 sop Anti Nutri Meatfish 001 fr uL 200 100 40 20 20 uL 800 900 960 980 1880 Page 5 sur 11 D termination de 4 HAP dans les produits carn s fum s SOP Anti Nutri Meatfish 001 fr Date 19 05 2011 Version 2 6 APPAREILLAGE CONSO
19. 2 E Eh EE 6 9 Points critiques et Note sur la procedure 6 10 Rapport eenzege eege ees Eege gege eege eg 6 11 Enregistrement des R VISIONS cccucocococoooononononnnnun 7 T2 ET 7 AFTER FP7 n 245025 Deliverable D 1 2 3 12 sop Anti Nutri MeatFish 002 fr Page 2 sur 7 Dosage des TBARS dans les produits carn s SOP Anti Nutri Meatfish 002 fr Date 04 07 2011 Version 1 5 DOMAI NE ET APPLI CATI ON Ce protocole d crit une m thode spectrophotom trique de mesure des substances r actives l acide thiobarbiturique TBARS contenus dans les produits carn s Cet indice est tr s utilis pour mesurer l oxydation des lipides dans les produits carn s REFERENCES Buege J A and S D Aust 1978 Microsomal Lipid Peroxidation In Methods of Enzymology Fleischer S and L Packer Eds Academic Press New York pp 302 310 DEFI NI TI ONS L indice TBARS repr sente la teneur en substances r actives l acide thiobarbiturique TBA tel que le malondiald hyde ainsi que d autres produits secondaires d oxydation des lipides tels que les alkadi nals PRINCI PE Le principe consiste une lecture spectrophotom trique apr s incubation chaud de l chantillon totale sans extraction pr alable des mati res grasses en pr sence de TBA puis extraction du chromophore REACTIFS Acide trichloroac tique TCA 99 2 6 di tert butyl 4 m thylph
20. A PROCEDURE Ne pas conserver les chantillons de produits carn s fum s au contact de mati res plastiques privil gier le verre ou le papier aluminium Les vials HPLC chantillons apr s extraction gammes talons peuvent tre conserv s 20 C La limite de d tection est de 2 ppb pour chaque compos de HAP LORAPPORT D ESSAI Indiquer pour le document de suivi de l analyse AFTER FP7 n 245025 Deliverable D 1 2 3 12 sop Anti Nutri Meatfish 001 fr Page 10 sur 11 D termination de 4 HAP dans les produits carn s fum s SOP Anti Nutri Meatfish 001 fr Date 19 05 2011 Version 2 Le rapport d essai doit inclure tous les d tails n cessaires une identification pr cise de l chantillon r f rences nature toutes observations relatives l tat de l chantillon si celui ci tait ou paraissait suspect avant analyse la date de l analyse et le nom de l op rateur la m thode utilis e ici SOP N Anti Nutri MeatFish 001 fr les r sultats obtenus En outre seront d taill s toute condition op ratoire non indiqu e dans le SOP ou optionnelle et les circonstances particuli res qui auraient pu affecter les r sultats 11 ENREGI STREMENT DES REVISIONS Date Personne responsable Description de la modification AFTER FP7 n 245025 Deliverable D 1 2 3 12 sop Anti Nutri Meatfish 001 fr Page 11 sur 11
21. MMABLE 6 1 Pr paration chantillon Broyeur m nager a h lice type broyeur a viande Pots de pr l vement en verre pouvant contenir l chantillon broy environ 10 g Spatule 6 2 Saponification Agitateur magn tique multipostes 6 ou 15 postes en forme de plaque adaptable sous cuve bain marie de type Variomag Fisher Bioblock Cuve bain marie 15 litres sur lev e Thermostat a immersion type Polystat 36 Fisher Bioblock Flacon en verre a fond plat de 16 mL 21 x 73 mm avec joint caoutchouc T flon R f 7857F Fisher Bioblock Barreau aimant 15x6 mm Pipette automatique a volume variable 1 5 mL Balance de pr cision 0 01 mg 6 3 Extraction liquide liquide Centrifugeuse de laboratoire acceptant un rotor pour des flacons de 16 mL 21 x 73 mm et avec un r glage de la vitesse et du temps de centrifugation 3000 rpm 5 min Pipette Pasteur avec poire de pr l vement Tube en verre de 12 mL avec bouchon Poste d vaporation sous flux d azote Poste compos d un bain a sec chauffant avec un portoir pour tube type tube h molyse un plateau r partiteur de gaz ou l on positionne plusieurs aiguilles Le tout plac sous hottes afin d vacuer le solvant AFTER FP7 n 245025 Deliverable D 1 2 3 12 sop Anti Nutri Meatfish 001 fr Page 6 sur 11 D termination de 4 HAP dans les produits carn s fum s SOP Anti Nutri Meatfish 001 fr Date 19 05 2011 Version 2 6 4 D
22. SEX Manuels distillation de l ABVT la vapeur puis sa eer nage i Scientifiques et Techniques Ed Actes pp72 91 neutralisation par l acide chlorhydrique Amines biog nes histamine cadaverine putrescine Ababouch 1995 AFTER FP7 n 245025 Deliverable D 1 2 3 2 9 et 12 Apr s extraction des amines biog nes histamine cadaverine putrescine par une solution d acide trichlorac tique on proc de leur d rivation par l O phtalald hyde OPA et on s pare par chromatographie liquide phase invers e d tecteur fluorescence Page 2 sur 2 Anti Nutri MeatFish 004 fr 7 African Food Tradition rEvisited by Research E Des FP7 n 245025 Deliverable D 1 2 3 12 SOP for biochemical and nutritional analysis for Group 2 Proc dure de dosage de l azote total par la m thode Kjeldhal et calcul de la teneur en prot ines SOP Number Nutri MeatFish 001 fr Date of creation 16 05 2011 Revision Written by Val rie SCISLOWSKI ADIV For information on this SOP please contact e Val rie SCISLOWSKI valerie scislowski adiv fr This document has been approved by Partner Name of the person who approved Date DD MM YY CIRAD UAC CSIR ADIV Val rie SCISLOWSKI 16 05 2011 UT INRA Page 1 sur 4 Dosage de l azote total par la m thode Kjeldhal et calcul de la teneur en prot ines SOP Number Nutri Me
23. UCAD INRA Proc dure pour la pr paration des chantillons produits carn s viandes et poissons pour les analyses physicochimiques SOP Number Prep MeatFish 001 fr Date of creation 18 05 2001 Date of revision Table des mati res Domaine et application ek RKERERKERK RER KEREN KEE EK RER KEREN 3 eerste E Norme AFNOR NF V04 416 D cembre 1999 Viandes et produits base de viande Pr paration de l chantillon en vue de l analyse de COMPOSITION eene eege Eau 3 3 D fINItIONS ege eege SEELEN 3 4 elle EE 3 D R CITS eege 3 6 Appareillage et consommables sek KERKRREK KEREN KENE KE KR EE KE en 3 7 Proc d re E 4 7 1 Pr paration de l chantillon cccecccocccocooooonooonoonnoonnonnnnnn 4 7 2 te E LEE 4 7 3 Conservation des chantillons ccccecocoocoocooononnnonnunnnua 4 8 Expression des r sultats coocoocooooonooooonnoaneonnua 5 8 1 M thode de calcul et formules sssssssnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnn 5 8 2 Rebeet 5 9 Points critiques et notes sur la proc dure 5 10 Rapport essai See eege 5 11 Enregistrement des r visions ss ssmmmmmemnmemmmnnenns 5 12 ANNOXC EN 5 AFTER FP7 n 245025 Deliverable D 1 2 3 9 SOP Number Prep MeatFish 001 fr Page 2 sur 5 Proc dure pour la pr paration des chantillons produits carn s viandes et poissons pour les analyses physicoch
24. atFish 001 fr Date of creation 16 05 201116 5 2011 Date of revision 8 EXPRESSION DES RESULTATS 8 1 M thode de calcul et formule La teneur en azote total exprim e en pourcentage en masse est gale V1 V0 xTx14x100 VI VO xT x 1 4 m x 1000 7 m prot ines Azote X 6 25 d azote Vo Volume de la solution d HCI 0 1 N utilis pour l essai blanc en millilitres V1 Volume de la solution d HCI 0 1 N utilis pour l chantillon en millilitres m Masse de la prise d essai en g T Titre de l acide en Normalit Calculer le en masse de prot ines dans l chantillon Prot Azote X 6 25 Coefficient de la masse molaire de l azote 14 6 25 coefficient de conversion de N en prot ines animales Exprimer le pourcentage d azote avec 2 d cimales vraies Si le troisi me chiffre est inf rieur a 5 le chiffre pr c dent n est pas modifi Si le troisi me chiffre est sup rieur ou gal 5 le chiffre pr c dent est augment d une unit Exprimer le pourcentage de prot ines avec 1 d cimale 8 2 R p tabilit AFTER FP7 n 245025 Deliverable D 1 2 3 12 SOP Number Nutri MeatFish 001 fr Page 8 sur 11 Dosage de l azote total par la m thode Kjeldhal et calcul de la teneur en prot ines SOP Number Nutri MeatFish 001 fr Date of creation 16 05 201116 5 2011 Date of revision 9 POINTS CRITIQUES OU NOTE SUR LA PROCEDURE e qualit du broyage et
25. atFish 001 fr Date of creation 16 05 201116 5 2011 Date of revision Table des mati res 1 Domaine et application eeeRKRER KE KERKRER KEREN KE RER KEE RER nnn 3 Sat EE E Se EE E 74 OW a o Telo EE 3 D R actifs ee 4 6 ET UE E 4 F lt Ge DEE 5 7 1 Prise d essai ccoccccc00000000nnnnnnonnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnun 5 7 2 Min ralisation c ccccco cossos nenen ENkee eeu LAR daune aana aai aiai 5 Z214 EE Ee 5 7 2 2 e EE 6 7 2 3 DISUNaUON EE 6 7 2 4 EE 7 8 Expression des r sultats ccocconconuono0nuononnnonnun 8 8 1 M thode de calcul et formule cccccccecoconooocooncoonoonnunnn 8 5 2 REENEN 8 9 Points critiques ou Note sur la procedure 9 10 Rapport d analyse ssnnsnsmemmnnanmennennnnennnnnnnennnnnnnennte 10 11 Enregistrement des r eiSiONs smmmmmmenemmmnmmmnnnns 10 12 Tue E 11 AFTER FP7 n 245025 Deliverable D 1 2 3 12 SOP Number Nutri MeatFish 001 fr Page 2 sur 11 Dosage de l azote total par la m thode Kjeldhal et calcul de la teneur en prot ines SOP Number Nutri MeatFish 001 fr Date of creation 16 05 201116 5 2011 Date of revision 1 DOMAINE ET APPLICATION Ce mode op ratoire a pour objet de formaliser la m thode de dosage de l azote total selon la m thode Kjeldhal pour calculer la teneur en prot ines des produits carn s Cette analyse est accr
26. avec une d tection en fluorim trie des longueurs d ondes sp cifiques a chaque HAP L identification est r alis e d apr s le temps de r tention et la quantification est calcul e au moyen d une solution talon 5 REACTIFS Tous les r actifs utilis s sont de qualit analytique ou HPLC Les noms de marque sont donn s titre indicatif Tout autre r actif quivalent peut tre utilis apr s avoir v rifi l absence des HAP recherch s dans ces r actifs 5 1 Saponification Solution de Potasse thanolique 1 M Hydroxyde de potassium en pastilles pour analyse KOH r f 105021 Merck Ethanol absolu qualit analyse Pour 100 mL de Potasse thanolique pesez exactement 5 6 g de KOH dissoudre avec 5 mL d eau distill e et compl ter avec 100 mL d thanol absolu 5 2 Extraction liquide liquide Cyclohexane r f 34855 Sigma Chromasolv AFTER FP7 n 245025 Deliverable D 1 2 3 12 sop Anti Nutri Meatfish 001 fr Page 4 sur 11 D termination de 4 HAP dans les produits carn s fum s SOP Anti Nutri Meatfish 001 fr Date 19 05 2011 Version 2 Eau distill e sur syst me de purification Rios 5 Millipore 5 3 D termination des HAP par HPLC 5 3 1 Phases mobiles Ac tonitrile qualit HPLC Eau ultrapure obtenue par r sine changeuse d ions a partir d un syst me type MilliQ Millipore Pour 1 litre de phase mobile solvant A Ac tonitrile Eau 6
27. ccoooonnoonononoonnennnennnnnn 6 6 2 SaponiIficatioNn EE 6 6 3 Extraction liquide liquide ssmmmmammnnennnnnmenenmennennen 6 6 4 D termination des HAP par HPLC cccccceccoccoocococonouonuuon 7 7 Ge E E E 8 7 1 Pr paration des chantillonSs cccccocccccooocc0n00no00ue0nnonnnnnn 8 Kr dn e e ON WEE 8 7 3 Extraction liquide liquide cccccccococononono0anenononnnnnnnnnnn nnn 8 7 4 D termination de la teneur en HAP par HPLC corcoas 9 8 Expression des r sultats ccocconcoouooooonoanennnonnun 9 8 1 Mode de calcul et formules mmssnmmmnnmnnmanmennennnnnnnnenmnnnennnn 9 8 2 IREDESTADINN EG is Bee nn pen de sin rage ed 10 9 Points critiques et Note sur la procedure 10 10 Rapport essais en end es eh en 10 11 Enregistrement des R VisioNS ccccococoonocononoanonnn 11 AFTER FP7 n 245025 Deliverable D 1 2 3 12 sop Anti Nutri Meatfish 001 fr Page 2 sur 11 D termination de 4 HAP dans les produits carn s fum s SOP Anti Nutri Meatfish 001 fr Date 19 05 2011 Version 2 1 DOMAINE ET APPLICATION La pr sente note a pour objet de d crire une m thode d analyse de quatre hydrocarbures aromatiques polycycliques HAP dans des produits carn s fum s Il s agit de quantifier le Benzo a pyrene le Chrys ne le Benzo a anthrac ne et le Be
28. dans le digesteur pr chauffer au thermostat 2 3 chauffer fortement au thermostat 8 quand la solution est devenue limpide continuer l bullition pendant 2 heures Arr ter la min ralisation en amenant le thermostat 4 0 laisser refroidir les tubes et les regrouper dans un panier m tallique Remarques e la r gulation de la puissance de chauffe varie selon le type d chantillon pour les produits gras il est n cessaire de chauffer plus doucement et pendant un temps plus long e ne pas surchauffer on risquerait de provoquer une perte d azote avec la vapeur acide e encas de cristallisation recommencer l analyse 7 2 3 Distillation e Pr parer les erlens Les identifier par le num ro de r f rence Ajouter 25 ml d acide borique 4 Ajouter 4 gouttes d indicateur color Voir le mode d emploi du distillateur e mettre l appareil sous tension et l alimenter en eau AFTER FP7 n 245025 Deliverable D 1 2 3 12 SOP Number Nutri MeatFish 001 fr Page 6 sur 11 Dosage de l azote total par la m thode Kjeldhal et calcul de la teneur en prot ines SOP Number Nutri MeatFish 001 fr Date of creation 16 05 201116 5 2011 Date of revision e Passer un tube de digestion vide et un ballon vide afin de v rifier le bon fonctionnement de l appareil e Passer 1 t moin n gatif Utiliser 1 tube de digestion contenant 50 ml d eau distill e et r cup rer le distillat dans un ballo
29. e 55 scs dece acade deep dcn enean e Cnn aana ennan 4 7 Procedure cccccciacccconitceicta Rehne eaaa arinn ERa ranana rann Eiras 4 8 Expression des resultats cccccocoooooooonononononnnnnonuun 5 8 1 M thode de calcul et formule cccccccocccocecoconooonooononnnonnnnnn 5 E TE 5 9 Points critiques et Note sur la proc dure acoacos 5 10 Rapport VE EE 5 11 Enregistrement des revisiONS cecececoononononnonunun 7 AFTER FP7 n 245025 Deliverable D 1 2 3 12 SOP Number Anti Nutri MeatFish 003 fr Page 2 sur 7 Procedure de d termination de la teneur en azote basique volatile total dans le poisson Number Anti Nutri MeatFish 003 fr Date of creation 30 11 2010 Date of revision Hounhouigan 24 10 2011 1 DOMAINE ET APPLICATION Cette m thode est appliqu e pour le dosage de l azote basique volatile total ABVT dans les produits halieutiques 2 REFERENCES Ababouch L H 1995 Assurance qualit en industrie halieutique Manuels Scientifiques et Techniques Ed Actes pp72 91 3 DEFINITIONS L azote basique volatile total ABVT repr sente l ensemble des compos s basiques volatils r sultant de la d gradation des prot ines sous l action des enzymes endog nes du poisson et de l activit des microorganismes pr sents dans la chair du poisson 4 PRINCIPE Apr s d prot inisation de l chantillon l acide perc
30. eeeenseeeeeeneeneneeaseeeeaas 3 SA 3 3 DERNITIONS 22ers ass re en eaeerince esti See eee ee 3 A PRINGIDG EE 4 Ee d CN 4 6 Appareillag E 4 7 J a 07 e EEN 5 8 Expression des r sultats cccocconcoooonooonoanonnnonnun 6 8 1 M thode de calcul et formule ccccccccecoconooonoonooonnonnnunn 6 8 2 R petabilite a a aaa nan 7 9 Points critiques et note Sur la procedure 7 10 Rapport d esSsariccconccccn ee EE eege 8 11 Enregistrement des revisions EE KERK ERR ERKEKKEK RER KEE KEREN 8 AFTER FP7 n 245025 Deliverable D 1 2 3 12 SOP Number Anti Nutri MeatFish 004 fr Page 2 sur 8 Procedure for biogenic amines in fish Number Anti Nutri MeatFish 004 fr Date of creation 30 11 2010 Date of revision Hounhouigan 17 10 2011 1 DOMAINE ET APPLICATION Cette m thode de dosage des amines biog nes est applicable tous les produits de la p che quel que soit leur mode de pr sentation ou de pr paration Cette m thode de chromatographie liquide haute performance HPLC est retenue dans le reglement communautaire 2073 2005 de l union europ enne 2 REFERENCES Ababouch L H Assurance de la qualit en industries halieutiques manuels scientifiques et techniques de pages 104 106 Actes Editions Rabat 1995 ISBN 9981 801 12 7 ProStar 220 230 240 Solvent Delivery Module Operation manual Varian Analytical Instruments 2700 Mi
31. fr Page 4 sur 9 Dosage des lipides totaux par la m thode de Folch SOP Number Nutri MeatFish 002 fr Date of creation 16 05 2011 Date of revision 31 8 2011 Spatules Ballons rod s fond plat de 250ml 1 ech Evaporateur rotatif 7 PROCEDURE L chantillon de tissu pr lev est pr par selon la SOP Prep MeatFish 001 fr L chantillon ainsi rendu homog ne est conserv 20 C 7 1 Pr paration des solutions 1 Solution de Folch m lange chloroforme m thanol 2volumes 1 volume 600 ml CHCl 300 ml CH30H 2 Solution aqueuse de NaCl 0 73 7 3 g de NaCl compl t 1L avec de l H20 distill e 3 Solution aqueuse de NaCl 0 58 5 8 g de NaCl compl t 1L avec de l H20 distill e 4 Solutions de rin age des phases m langer CHCl3 CH30H H20 sal e 0 58 vol vol vol dans les proportions 8 4 3 Apr s agitation et repos 1 nuit dans une ampoule a d canter de 21 le m lange se s pare en deux phases Phase sup rieure PS Phase inf rieure PI qui sont chacune conserv es a temp rature ambiante en bouteille herm tique de 11 5 Filtre s parateur de phase 1SP doivent tre d lipid mettre le nombre de filtre utiliser dans un plateau recouvert de chloroforme pendant 24h 7 2 Protocole 1 Peser pr cis ment environ Xg d chantillon voir tableau ci dessous dans le pot de broyeur sur une balance de pr cision de classe A dont la r soluti
32. hlorique on proc de la distillation de l ABVT la vapeur puis sa neutralisation par l acide chlorhydrique 5 REACTIFS Solution d acide perchlorique 6mg 100 ml Solution de soude 20 mg ml Solution talon d acide chlorhydrique 0 05 N Solution d acide borique 3 g litre Solution de ph nolphtal ine 1 g 100 ml d thanol 96 Solution d indicateur de Tashiro pr par e en dissolvant 2 g de rouge de m thyle et 1 g de vert de bromocr sol dans 100 ml d thanol 95 AFTER FP7 n 245025 Deliverable D 1 2 3 12 SOP Number Anti Nutri MeatFish 003 fr Page 3 sur 7 Procedure de d termination de la teneur en azote basique volatile total dans le poisson Number Anti Nutri MeatFish 003 fr Date of creation 30 11 2010 Date of revision Hounhouigan 24 10 2011 Antimousse base de silicone 6 APPAREI LLAGE Balance analytique de pr cision a 0 0001g Distillateur de Kjeldahl Agitateur magn tique Burette de 50 ml Broyeur couteau 7 PROCEDURE e Peser 10 g d chantillon finement broy e Ajouter 90 ml d acide perchlorique 6 mg 100 ml homog n iser le m lange dans un mixeur pendant 2 mn puis filtrer e Pr lever 50 ml de filtrat dans un matras de Kjeldahl puis ajouter plusieurs gouttes de la solution de ph nolphtal ine 6 5 ml de soude 20 g litre et quelques gouttes d agent d anti moussant e Introduire parall lement 100 ml d ac
33. ide 3 g 100ml et 3 5 gouttes d indicateur de Tashiro dans un erlenmeyer de 250 ml le tube de sortie du distillat doit bien immerger dans la solution d acide borique e Placer le matras de Kjeldahl contenant l extrait et l erlenmeyer contenant la solution d acide borique dans l appareil de distillation e Distiller et recueillir 100 ml de distillat dans la solution acide borique au bout de 10 minutes e Arr ter la distillation apr s 10 min retirer le tube de sortie du distillat et le rincer a l eau distill e dans l erlenmeyer contenant le distillat e Titrer le distillat par la solution d acide chlorhydrique 0 05 N le pH du virage doit tre de 5 0 0 1 Noter le volume Ve de l acide sulfurique 0 05N utilis e Faire un essai a blanc dans les m mes conditions AFTER FP7 n 245025 Deliverable D 1 2 3 12 SOP Number Anti Nutri MeatFish 003 fr Page 4 sur 7 Procedure de d termination de la teneur en azote basique volatile total dans le poisson Number Anti Nutri MeatFish 003 fr Date of creation 30 11 2010 Date of revision Hounhouigan 24 10 2011 8 EXPRESSION DES RESULTATS 8 1 M thode de calcul et formule La teneur en ABVT de l chantillon est gale a ABVT mg N 100 g Ve Vp x0 14x2 x100 M Ve volume de la solution de H2SO 0 1N utilis e pour titrer l chantillon ml V volume de la solution de H2SO 0 1N utilis e pour titrer le blanc ml M poids de l chantillon 8 2 R
34. imiques SOP Number Prep MeatFish 001 fr Date of creation 18 05 2001 Date of revision 1 DOMAINE ET APPLI CATI ON Cette proc dure d crit le protocole de pr paration des chantillons de produits carn s viandes et poissons pour les analyses physico chimiques 2 R F RENCES Norme AFNOR NF V04 416 D cembre 1999 Viandes et produits base de viande Pr paration de l chantillon en vue de l analyse de composition 3 DEFINITIONS 4 PRINCIPE Obtention par broyage de 200g de viande afin d obtenir une pr paration repr sentative et la plus homog ne possible 5 R ACTIFS 6 APPAREILLAGE ET CONSOMMABLES Planche d couper Couteaux Broyeur type Grindomix ou robot m nager Pots Spatules R frig rateur 0 4 C AFTER FP7 n 245025 Deliverable D 1 2 3 9 SOP Number Prep MeatFish 001 fr Page 3 sur 5 Proc dure pour la pr paration des chantillons produits carn s viandes et poissons pour les analyses physicochimiques SOP Number Prep MeatFish 001 fr Date of creation 18 05 2001 Date of revision Cong lateur 20 C 7 PROC DURE 7 1 Pr paration de l chantillon Avant le broyage amener l chantillon une temp rature proche de 0 C Pour cela les chantillons sont stock s au frigo ou les produits sont d congel s au frigo une nuit avant le jour d analyse Oter les parties non consommables t te et ar tes des poissons D couper au moins 200g de
35. lcul de la teneur en prot ines SOP Number Nutri MeatFish 001 fr Date of creation 16 05 201116 5 2011 Date of revision LORAPPORT D ANALYSE Indiquer pour le document de suivi de l analyse le nom de l chantillon en pr cisant sa nomenclature et le type d chantillon la date de l analyse et le nom de l op rateur la m thode utilis e ici SOP N Nutri MeatFish 001 fr toutes observations relatives l tat de l chantillon si celui ci tait ou paraissait suspect avant analyse la masse de la prise d essai le r sultat du titrage V1 le r sultat final la valeur de titrage du t moin n gatif VO la valeur des t moins toutes observations relatives au d roulement de la m thode si son application venait a tre probl matique 11 ENREGI STREMENT DES REEI SI ONS Date Responsible person Description of change AFTER FP7 n 245025 Deliverable D 1 2 3 12 SOP Number Nutri MeatFish 001 fr Page 10 sur 11 Dosage de l azote total par la m thode Kjeldhal et calcul de la teneur en prot ines SOP Number Nutri MeatFish 001 fr Date of creation 16 05 201116 5 2011 Date of revision 12 ANNEXE AFTER FP7 n 245025 Deliverable D 1 2 3 12 SOP Number Nutri MeatFish 001 fr Page 11 sur 11 7 African Food Tradition rEvisited by Research E Des FP7 n 245025 Deliverable D 1 2 3 12 SOP for biochemical and nutritional analy
36. mpos sur le chromatogramme de l chantillon analys 8 EXPRESSION DES RESULTATS 8 1 Mode de calcul et formules Les diff rentes aires des solutions talons S3 S7 sont relev es pour tablir une droite d talonnage en portant les valeurs des aires de pic obtenues en fonction de la concentration des solutions et ceci pour chaque compos Etablir la droite d talonnage sous la forme suivante C a A b O AFTER FP7 n 245025 Deliverable D 1 2 3 12 sop Anti Nutri Meatfish 001 fr Page 9 sur 11 D termination de 4 HAP dans les produits carn s fum s SOP Anti Nutri Meatfish 001 fr Date 19 05 2011 Version 2 a et b sont les coefficients de la droite d talonnage Ae est l aire du pic chromatographique du HAP consid r C est la quantit du compos de HAP en ng mL Grace la courbe d talonnage calculer la quantit de chaque compos de HAP Qnap en pg kg pour chaque chantillon La quantit Qnap va tre exprim e sous la forme suivante QH c ap m Qhap est la teneur en ug kg ppb V est le volume en mL de reprise de extrait sec par l ac tonitrile m est la masse en g d chantillon analys e 8 2 R p tabilit L analyse sera r p t e deux fois a partir du broyat homog ne pr par en 6 1 Le coefficient de variation cart type rapport la moyenne des d terminations ne devra pas d passer 5 9 POINTS CRITIQUES ET NOTE SUR L
37. n identifi Ce distillat est ensuite utilis pour valuer le blanc de la distillation e Conduite de la distillation Dans le tube de digestion refroidi ajouter avec pr caution environ 50 ml d eau distill e agiter par rotation et laisser refroidir disposer le tube de digestion dans le distillateur ajouter 45 ml de NaOH dans l erlen levier du distillateur l alimenter si n cessaire poursuivre chaque distillation pendant 7 mn environ obtenir au moins 200 ml de distillat Rincer l embout par lequel arrive le distillat apr s chaque utilisation en recueillant les eaux de rin age dans l erlen de l analyse en cours 7 2 4 Titrage Titrer les chantillons et le t moin n gatif apr s la distillation il convient d effectuer le titrage aussi rapidement que possible une fois la distillation termin e Titrer l aide de l HCI 0 1 N utiliser une burette de 25 ml Remplir la burette d HCI Arr ter l coulement quand l indicateur devient rose violet passage de la base a l acide Noter le r sultat du dosage sur le document de suivi de l analyse indiquer le r sultat a 2 chiffres apr s la virgule Nettoyer la burette quand les titrages sont termin s la rincer l eau distill e AFTER FP7 n 245025 Deliverable D 1 2 3 12 SOP Number Nutri MeatFish 001 fr Page 7 sur 11 Dosage de l azote total par la m thode Kjeldhal et calcul de la teneur en prot ines SOP Number Nutri Me
38. nol BHT gt 99 Acide thyl ne diamine tetraac tique EDTA 0 5 M pH8 liquide Acide thiobarbiturique TBA 98 poudre Malonaldehyde bis diethylacetal TEP 95 liquide Eau distill e Ethanol absolu 100 HCIO IN AFTER FP7 n 245025 Deliverable D 1 2 3 12 sop Anti Nutri MeatFish 002 fr Page 3 sur 7 Dosage des TBARS dans les produits carn s SOP Anti Nutri Meatfish 002 fr Date 04 07 2011 Version 1 6 APPAREILLAGE CONSOMMABLE Fioles jaug es 25 mL 50 mL 100 mL 200 mL Tubes essai en verre de 20 mL vis avec bouchons joint t flon Pipettes de 2 mL 10 mL P200 P1000 P5000 Filtres plats Whatman n 1 diam 185 mm Entonnoirs en verre diam 80 mm tige courte 3 cm env Balance de pr cision spatule Broyeur m nager ultraTurrax diam t te 18 mm Spectrophotometre UV Visible cuves polystyr ne cristal usage unique Centrifugeuse et tubes en polypropyl ne de 50 mL fond conique Bain marie 70 C 7 PROCEDURE 7 1 Pr paration des solutions d extraction Solution de TCA 5 0 3M dans l eau distill e ex 10g TCA qsq 200 mL Solution thanolique de BHT 1 ug uL dans l thanol ex 25 mg BHT qsq 25 mL Solution d EDTA 0 1M dans l eau distill e ex 10 mL EDTA 0 5M qsq 50 mL 7 2 Pr paration des solutions de dosage Solution de TBA 55 5 mM preparer extemporan ment o Pe
39. nzo b fluorenth ne 2 REFERENCES Protocole de pr paration de l chantillon SOP Prep MeatFish 001 fr La m thode d extraction s inspire de la m thode d crite par P Mottier et al J Agric Food Chem 2000 48 1160 1166 ceci pr s que l HPLC est la technique de d tection et de quantification choisie comme pr conis dans la norme NF EN ISO 15302 pour la d termination de la teneur en benzo a pyrene Ce protocole a t modifi par le CIRAD pour r duire les volumes de r actifs tr s co teux et polluants Elle a t valid e en interne au CIRAD et fait l objet de validations p riodiques dans le cadre du r seau interlaboratoires Fapas 3 DEFINITIONS Les HAP constituent une large classe de compos s organiques form s de deux cycles aromatiques condens s ou plus Ils sont surtout form s une temp rature sup rieure 500 C par la combustion incompl te ou la pyrolyse de mati re organique qui intervient dans un certain nombre de proc d s industriels Dans le cas du fumage une combustion directe de biomasse la proximit des aliments a fumer avec le foyer de combustion et une forte temp rature de pyrolyse m nent a une forte production d HAP Un certain nombre d entre eux tel que le benzo a pyr ne sont reconnus canc rig nes et mutag nes au del d un seuil d fini dans une Directive de l Union Europ enne qui pour le moment ne prend en compte que le Benzo a pyr ne La r glementation devrait
40. om four sources 1 22 a 4 The literature by searching the analysis method for similar components we want to determine in the African fermented and functional products In this case several articles are combined according to their precisions Standards from the international Organization Standardization ISO or AACC the International Approved methods In this case the method is used like that or after minor modifications And the modifications are then precised in the document with the ISO or AACC joined in the annex To be in agreement with intellectual property rules the project coordination purchased and distributed to partners all the standards referenced in SOP The SOP s can come from the laboratory that developed the methods for the specific analysis Case of the kit enzymatic method developed by the vendors of the kit materials After writing the SOP s are approved by the Work Package Leader WPL related to the group of product concerned Group 1 WP2 Group 2 WP3 Group 3 WP4 The WPL is in charge to send the SOP s to the concerned partners for validation Each partner according to his laboratory facilities validates the method and informs one of the following alternatives in his laboratory R The laboratory makes the analysis in routine R codification in the table joined P The laboratory is able to make this analysis possible P B The laboratory can make the analysis after buying equipment
41. on affichage minimale est de 0 1mg AFTER FP7 n 245025 Deliverable D 1 2 3 12 SOP Number Nutri MeatFish 002 fr Page 5 sur 9 Dosage des lipides totaux par la m thode de Folch SOP Number Nutri MeatFish 002 fr Date of creation 16 05 2011 Date of revision 31 8 2011 Tissus Prise d essai Muscle 4g Tissu adipeux 0 05g 2 Mesurer 150 mL de m lange Folch dans une prouvette gradu e Verser le volume dans une ampoule d canter de 250 ml et marquer au feutre le volume Remettre le liquide dans l prouvette Cette tape sert marquer le volume sur l ampoule et v rifier l absence de fuites de l ampoule d canter au niveau du robinet 3 A temp rature ambiante ajouter environ 45 ml de Folch dans le pot de broyeur et l quivalant d une spatule d hyflosupercel poudre abrasive de diatom e facilitant l extraction des lipides 4 Broyer 3 fois une minute 18 000 tours min en laissant reposer 1 2 minutes entre chaque broyage 5 Filtrer l homog nat sur un entonnoir muni d un verre fritt de porosit N 2 recouvert d une fine couche d hyflosupercel plac sur une fiole vide de 250ml branch e sous vide 6 Apr s compl te filtration r cup rer le r sidu du filtre et le r introduire dans le pot de broyeur extraire 2 fois suppl mentaires de la m me fa on sans ajouter d hydrosupercel rincer le pot du broyeur et le verre fritt avec 5
42. ot ines Les lipides totaux sont ensuite r cup r s apr s vaporation du chloroforme La teneur est d termin e apr s pes e des lipides a secs 5 REACTIFS Chloroforme technique distill au labo M thanol RP CH30H AFTER FP7 n 245025 Deliverable D 1 2 3 12 SOP Number Nutri MeatFish 002 fr Page 3 sur 9 Dosage des lipides totaux par la m thode de Folch SOP Number Nutri MeatFish 002 fr Date of creation 16 05 2011 Date of revision 31 8 2011 Hyflosupercel Silice extraite de diatom s Chlorure de sodium Nonadecanoic acid 6 APPAREILLAGE Broyeur type ultraturax Pot de broyeur verre type MSE ou Virtis volume 50ml 3 prouvettes gradu es de 1 litre 1 prouvette gradu e de 500m1 1 prouvette gradu e de 250ml 2 prouvettes gradu es de 50ml Ampoule a d canter forme sph rique 250ml 1 ech Ampoule a d canter forme sph rique 500ml 1 ech Entonnoir en verre 1 ech Entonnoir a poudre 1 ech Entonnoir filtrant cylindrique verre fritt porosit N 2 diam tre 65mm contenance 125ml 1 ech Fioles vide 250ml 1 ech Pierre ponce Filtre s parateur de phase 1SP Sartorius disque 150mm de diam tre grade 480 Joint conique en caoutchouc Coupelle en aluminium Dessiccateur en verre Pissette plastique Pipette pasteur en verre Poire en caoutchouc Potences AFTER FP7 n 245025 Deliverable D 1 2 3 12 SOP Number Nutri MeatFish 002
43. produit au couteau en petits d s 7 2 Broyage Broyer les d s d chantillon Adapter la dur e du broyage la nature du produit afin que le produit broy se pr sente autant que possible sous une forme homog ne Dans le cas de broyages successifs dans le m me r cipient s assurer que celui est propre et sec 7 3 Conservation des chantillons A l aide d une spatule mettre le broyat dans un des pot s identifi s Conserver le broyat jusqu au moment de l analyse au frigo pour la mesure de la teneur en eau et de l activit en eau et pour les autres analyses au frigo si les analyses vont tre r alis es rapidement de 24h ou au cong lateur 20 C apr s conditionnement en emballage tanche sous vide AFTER FP7 n 245025 Deliverable D 1 2 3 9 SOP Number Prep MeatFish 001 fr Page 4 sur 5 Proc dure pour la pr paration des chantillons produits carn s viandes et poissons pour les analyses physicochimiques SOP Number Prep MeatFish 001 fr Date of creation 18 05 2001 Date of revision 8 EXPRESSION DES RESULTATS 8 1 M thode de calcul et formules 8 2 R p tabilit 9 POINTS CRITI QUES ET NOTES SUR LA PROCEDURE LORAPPORT D ESSAI 11 ENREGI STREMENT DES REVISIONS Date Personne responsable Description de la modification 12 ANNEXE AFTER FP7 n 245025 Deliverable D 1 2 3 9 SOP Number Prep MeatFish 001 fr Page 5 sur 5
44. r 11 D termination de 4 HAP dans les produits carn s fum s SOP Anti Nutri Meatfish 001 fr Date 19 05 2011 Version 2 2 excitation A mission HAP Temps min nm nm B a A 0 29 270 385 Ch B b F 29 34 270 420 B a P 34 60 381 405 o Logiciel de pilotage et de retraitement des donn es chromatographiques comme par exemple Chromeleon 7 PROCEDURE 7 1 Pr paration des chantillons Les chantillons sont pr par s selon la proc dure d crite dans le SOP Prep MeatFish 001 fr Ils peuvent tre alors congel s 7 2 Saponification Peser environ exactement g de broyat dans flacon en verre 6 2 ajouter un barreau aimant 6 2 et 3 mL de potasse thanolique 5 1 Placer le tube avec son bouchon dans le bain marie a 80 C au dessus de l emplacement de l agitateur magn tique 6 2 La saponification dure 30 min Sortir le tube et le laisser refroidir 7 3 Extraction liquide liquide Ajouter 3 mL de cyclohexane et replacer le tube au bain marie a 80 C sous agitation durant 5 min Sortir le tube et rajouter 2 mL d eau ultrapure AFTER FP7 n 245025 Deliverable D 1 2 3 12 sop Anti Nutri Meatfish 001 fr Page 8 sur 11 D termination de 4 HAP dans les produits carn s fum s SOP Anti Nutri Meatfish 001 fr Date 19 05 2011 Version 2 Centrifuger 5 min 3000 rpm 6 3 r cup rer dans un tube en
45. ration 10min suppl mentaire afin de s assurer d tre d barrass des derni res traces de solvants 15 Peser balance au 1 10mg jusqu obtenir un poids constant reprendre l vaporation si n cessaire et noter la valeur Remarque Les lipides totaux pr sents l tat sec dans le ballon sont remis en solution avec un volume fixe fiole jaug e de chloroforme afin d viter toute d naturation pendant sa conservation ult rieure au cong lateur 20 C 8 EXPRESSION DES RESULTATS 8 1 M thode de calcul et formule Teneur en lipides totaux en g 100g de viande Y X x 1000 m Avec m masse initiale de la prise d essai d chantillon Y masse des lipides pes s tare du ballon de 250 mL X tare du ballon de 250 mL AFTER FP7 n 245025 Deliverable D 1 2 3 12 SOP Number Nutri MeatFish 002 fr Page 7 sur 9 Dosage des lipides totaux par la m thode de Folch SOP Number Nutri MeatFish 002 fr Date of creation 16 05 2011 Date of revision 31 8 2011 100 facteur de conversion pour une expression des lipides totaux en g pour 100 g de produit 8 2 R p tabilit 9 POINTS CRITIQUES OU NOTE SUR LA PROCEDURE La pr paration de l chantillon doit tre de qualit afin que la pes e initiale soit r alis e sur un produit homog ne L vaporation finale du solvant avant pes e des lipides extraits doit tre totale Renouveler les op rations d vaporation tan
46. re tanche bouchon viss fioles de 100 ml 500 ml et 2 000 ml paniers ou portoirs m talliques pour tubes digestion et distillation distributeur automatique type Optifix r gl 25 ml agitateur magn tique et barreau pissette 1 000 ml spatule 7 PROCEDURE 7 1 Prise d essai tarer tube du digesteur identifi sur la balance peser entre 0 5 et 2 g de l chantillon broy le disposer dans le fond du tube Noter la masse pour les produits riches en viande ex saucissons pr lever 1 g pour les produits pauvres en viande ex lasagne farce plats pr par s pr lever 1 5 g Remarque Par rapport la teneur pr sum e en azote du produit il est possible d adapter la prise d essai 7 2 Min ralisation 7 2 1 Pr paration Ajouter dans le tube de digesteur AFTER FP7 n 245025 Deliverable D 1 2 3 12 SOP Number Nutri MeatFish 001 fr Page 5 sur 11 Dosage de l azote total par la m thode Kjeldhal et calcul de la teneur en prot ines SOP Number Nutri MeatFish 001 fr Date of creation 16 05 201116 5 2011 Date of revision Un comprim de catalyseur 12 5 ml d acide sulfurique avec 1 auxiliaire de pipetage 2 5 ml d H2O gt avec 1 auxiliaire de pipetage Remarque Pour les produits tr s gras mettre 15 ml d acide sulfurique en raison de l vaporation 7 2 2 Digestion Voir le mode op ratoire du digesteur Placer les tubes
47. ser 809 05 mg et completer qsp 100 mL avec NaOH 0 05N Standard MDA o Solution de dilution du standard TCA5 BHT 0 004 ug uL EDTA 0 8 mM Dans une fiole de 200 mL ajouter 10 g TCA 99 800 uL BHT 1 ug uL et 1600 uL EDTA 0 1M et completer qsp 200 mL avec de l eau distill e Solution m re de MDA AFTER FP7 n 245025 Deliverable D 1 2 3 12 sop Anti Nutri MeatFish 002 fr Page 4 sur 7 Dosage des TBARS dans les produits carn s SOP Anti Nutri Meatfish 002 fr Date 04 07 2011 Version 1 o Pr parer une solution de TEP 1 mg mL dans l HCI 0 1 N ex 57 25 uL TEP et completer qsp 50 mL avec HCl 0 1 N Homog n iser transvaser dans un tube vis boucher le tube et incuber 5 minutes au bain marie 100 C puis refroidir sous l eau courante Cette solution de TEP hydrolyse est stable 1 mois 4 C 7 3 Dosage des chantillons Attention gt R aliser syst matiquement deux essais par chantillon gt Pour le traitement d une s rie d chantillons extraire chaque chantillon s par ment imm diatement apr s le broyage et le conserver 4 C en attendant d extraire les autres chantillons de la s rie r aliser mais pendant moins d une heure maximum gt Pr parer les chantillons avant l analyse en suivant la proc dure SOP Prep MeatFish 001 fr permettant une parfaite homog n isation des produits Etapes d extraction 1 Peser 2 g d chantillon dans un tube essai
48. seront d taill s toute condition op ratoire non indiqu e dans le SOP ou optionnelle et les circonstances particuli res qui auraient pu affecter les r sultats le r sultat avec son unit d expression en mentionnant les valeurs des r p titions et la moyenne toutes observations relatives l tat de l chantillon si celui ci tait ou paraissait suspect avant analyse toutes observations relatives au d roulement de la m thode si son application venait a tre probl matique L 1ENREGI STREMENT DES REVISIONS Date person responsible Description des modifications AFTER FP7 n 245025 Deliverable D 1 2 3 12 SOP Number Anti Nutri MeatFish 004 fr Page 8 sur 8 African Food Tradition rEvisited by Research T FP7 n 245025 Deliverable 1 2 3 9 SOP for Chemical analysis for Group 2 Proc dure pour la pr paration des chantillons de produits carn s viandes et poissons pour les analyses physicochimiques SOP Prep MeatFish 001 fr Date 10 05 2011 Version Ecrit par Elodie ARNAUD Pour plus d informations sur ce SOP contactez e Elodie ARNAUD elodie arnaud cirad fr e Julien RICCI julien ricci cirad fr e Thierry GOLI thierry goli cirad fr Ce document a t approuv par Partenaire Noms des personnes ayant Date approuv DD MM YY CIRAD Julien RICCI UAC CSIR ADIV Val rie Scislowski 12 09 2011 UT
49. sis for Group 2 Proc dure de dosage des lipides totaux par la m thode de Folch SOP Number Nutri MeatFish 002 fr Date of creation 16 05 2011 Revision 31 8 2011 Written by Val rie SCISLOWSKI ADIV For information on this SOP please contact e Val rie SCISLOWSKI valerie scislowski adiv fr This document has been approved by Partner Name of the person who approved Date DD MM YY CIRAD UAC CSIR ADIV Val rie SCISLOWSKI 16 05 2011 UT INRA Page 1 sur 4 Dosage des lipides totaux par la m thode de Folch SOP Number Nutri MeatFish 002 fr Date of creation 16 05 2011 Date of revision 31 8 2011 Table des matieres 1 Domaine et application ssnmmmrmemmemennennennnnennennnnennnnne 3 2 Referentes eege 3 Wu tel LEE 3 A ele EE 3 e CN 3 6 Appareillage nnnm 4 J Ge e DE 5 7 1 Pr paration des solutions ssmmnnennnmnmnnnnnnnnnne 5 7 2 Ge EN 5 8 Expression des r sultats ccocconooouono00nuononnnonnun 7 8 1 M thode de calcul et formule cccceccecoconooonoonooonoonnunnn 7 8 21 R p tabilit il h iris aiaa oaia aa aa a 8 9 Points critiques ou Note sur la procedure 8 10 Rapport datelegzssxeseesssusesaggeees ege ke Sege eebe Eege ed ug eg Se 8 11 Enregistrement des r visions smmmmmremmmnmmmnnnnes 9 12 E le css AGRA denses denssuscuonese 9 AFTER FP7
50. ssai en g 8 2 R p tabilit Deux r p titions du m me chantillon est n cessaire 9 POINTS CRITIQUES ET NOTE SUR LA PROCEDURE La peroxydation des lipides est tr s influenc e par les conditions de temp rature et de lumi re Pour r duire toute oxydation en cours d analyses les tapes du protocole doivent tre r alis es le plus vite possible en pla ant les chantillons au maximum dans des conditions d obscurit et des temp ratures faibles Si la temp rature ambiante venait augmenter pr voir de maintenir les chantillons dans des bacs glace LORAPPORT D ESSAI Indiquer pour le document de suivi de l analyse les d tails n cessaires une identification pr cise de l chantillon r f rences nature AFTER FP7 n 245025 Deliverable D 1 2 3 12 sop Anti Nutri MeatFish 002 fr Page 6 sur 7 Dosage des TBARS dans les produits carn s SOP Anti Nutri Meatfish 002 fr Date 04 07 2011 Version 1 toutes observations relatives l tat de l chantillon si celui ci tait ou paraissait suspect avant analyse la date de l analyse et le nom de l op rateur la m thode utilis e ici SOP N Anti Nutri MeatFish 002 fr les r sultats obtenus En outre seront d taill s toute condition op ratoire non indiqu e dans le SOP ou optionnelle et les circonstances particuli res qui auraient pu affecter les r sultats 11ENREGI STREMENT DES REVI SI ONS
51. stique au r frig rateur pour la d termination Mise en condition de l appareil HPLC Pompe HPLC Une pression maximale de 400 atm et minimale de 6 atm Un d bit de 1 mL minute de d termination La dur e de l op ration est de 10 mn Le volume injecter 20 uL boucle d injection 20 uL Phase mobile Lasolution A d Ac tonitrile 40 AFTER FP7 n 245025 Deliverable D 1 2 3 12 SOP Number Anti Nutri MeatFish 004 fr Page 5 sur 8 Procedure for biogenic amines in fish Number Anti Nutri MeatFish 004 fr Date of creation 30 11 2010 Date of revision Hounhouigan 17 10 2011 La solution B de Sodium dihydrogen orthophosphate NaH2PO4 2H20 2 5mM 60 D tecteur de fluorescence La d tection est faite au fluorim tre de type 0800 1 volt La longueur d onde d excitation est 360 nm La longueur d onde d mission est 450 nm D rivation de la pr colonne Prot ger les tubes utiliser de la lumi re du jour avec de papier aluminium et les annoter Pr lever exactement 130 ul de l talon ou de la solution chantillon analyser dans un tube Ajouter 1870 pl d eau distill e Ajouter 400ul de NaOH 1N et bien m langer avec vortex Ajouter ensuite 100 ul de OPA et bien m langer aussi Attendre 4 mn de r action Stopper la r action en ajoutant 200 ul d HCI 3N et bien homog n iser au vortex Injecter 20 ul de cette sol
52. t que le poids constant n est pas atteint Lors de l tape finale d vaporation des solvants bien surveiller le syst me afin que les lipides ne soient pas aspir s par le vide LORAPPORT D ANALYSE Indiquer pour le document de suivi de l analyse le nom de l chantillon en pr cisant sa nomenclature et le type d chantillon la date de l analyse et le nom de l op rateur la m thode utilis e ici SOP N Nutri MeatFish 002 fr toutes observations relatives l tat de l chantillon si celui ci tait ou paraissait suspect avant analyse les r sultats masse de la prise d essai tare du ballon tare du ballon contenant les lipides apr s vaporation sec des solvants teneur en lipides totaux calcul s en g 100 g d chantillon toutes observations relatives au d roulement de la m thode si son application venait tre probl matique AFTER FP7 n 245025 Deliverable D 1 2 3 12 SOP Number Nutri MeatFish 002 fr Page 8 sur 9 Dosage des lipides totaux par la m thode de Folch SOP Number Nutri MeatFish 002 fr Date of creation 16 05 2011 Date of revision 31 8 2011 L 1ENREGI STREMENT DES REVISIONS Date Responsible person Description of change 12 ANNEXE AFTER FP7 n 245025 Deliverable D 1 2 3 12 SOP Number Nutri MeatFish 002 fr Page 9 sur 9 FROCR AMMA African Food Tradition rEvisited by Research FP7 n 245025
53. tchell Drive Walnut Creek CA 94598 1675 USA ProStar 363 Fluorescence detector Operation manual Varian Analytical Instruments 2700 Mitchell Drive Walnut Creek CA 94598 1675 USA 3 DEFINITIONS Les amines biog nes dans les aliments sont produites par la d carboxylation microbienne des acides amin s Les amines biog nes correspondent aux amines non volatiles Les plus tudi es sont au nombre de 7 amines aliphatiques putrescine cadaverine spermidine spermine amines aromatiques histamine tryptamine tyramine tr s important dans les aliments particuli rement dans les poissons et les produits de poissons montr es comme source potentiel de toxicit histaminique L histamine r sulte de la d carboxylation de la L histidine libre par une enzyme d origine principalement bact rienne mais aussi tissulaire Apr s la mort du poisson et dans certaines conditions de stockage notamment partir de 2 5 C les bact ries produisant histidine d carboxylase peuvent se multiplier conduisant a la formation d histamine Cette formation peut tre parfois tr s rapide a partir de 10 C AFTER FP7 n 245025 Deliverable D 1 2 3 12 SOP Number Anti Nutri MeatFish 004 fr Page 3 sur 8 Procedure for biogenic amines in fish Number Anti Nutri MeatFish 004 fr Date of creation 30 11 2010 Date of revision Hounhouigan 17 10 2011 4 PRINCIPE Comme toutes les chromatographies cette m thode vise s parer
54. termination des HAP par HPLC Vials pour HPLC 2 mL avec bouchon 8 mm compatibles avec le syst me HPLC du laboratoire Filtre seringue type Minisart SRP4 en PTFE dia 4 mm seuil 0 22 um non st rile Seringue sans aiguille en plastique avec embout pour filtre de 1 ou 2 mL Pipette automatique 1 mL Chaine HPLC comme par exemple un quipement type ULTIMATE 3000 de chez DIONEX avec d tecteur Fluorim tre RF 2000 Cet quipement doit comprendre o Des r servoirs solvant voir 5 3 1 o Une pompe gradient HPG r gl un d bit de 1mL min et un gradient comme suit Temps min Solvant A Solvant B 0 100 0 5 100 0 40 0 100 45 0 100 50 100 0 60 100 0 o Une colonne analytique de caract ristique semblable une Uptisphere 300 avec des particules de 5 um d une longueur de 250 mm et de diam tre 4 6 mm Interchim o Un injecteur compos d une boucle de 10 uL 10 uL sont inject s pour la gamme talon et les chantillons o Un four colonne pouvant maintenir une temp rature de 30 C o Un d tecteur Fluorim tre capable de changer en cours de gradient de longueur d onde Pour la d tection des 4 HAP les longueurs d ondes d excitation et d mission sont param tr es comme indiqu dans le tableau ci dessous et suivi d un auto z ro pour la ligne de base AFTER FP7 n 245025 Deliverable D 1 2 3 12 sop Anti Nutri Meatfish 001 fr Page 7 su
55. uret des r actifs utilis s Effectuer r guli rement des essais d tanch it de tous les conduits d alimentation Ne jamais d connecter un conduit de solvant ou une vanne sous pression Arr ter la pompe et laisser la pression aller z ro Renouveler une fois le mois la solution m re des talons de m me que les standards et POPA par semaine V rifier p riodiquement la r p tabilit la reproductibilit de m me que le temps de d tection par les standards Le complexe OPA histamine donne un pic qui apparait au bout de 6 416 minutes avec une limite de r p tabilit de 0 04 pour l histamine Le domaine de lin arit de cette m thode est compris entre 10 et 15 ppm l injection La limite inf rieure de d tection est de 0 01 pg par AFTER FP7 n 245025 Deliverable D 1 2 3 12 SOP Number Anti Nutri MeatFish 004 fr Page 7 sur 8 Procedure for biogenic amines in fish Number Anti Nutri MeatFish 004 fr Date of creation 30 11 2010 Date of revision Hounhouigan 17 10 2011 20 uL inject s La reproductibilit est de 5 Le taux de r cup ration est de 94 Le complexe OPA histamine est stable pendant 24 heures LORAPPORT D ESSAI Le rapport d essai doit indiquer le nom de l chantillon en pr cisant sa nomenclature et le type d chantillon la date de l analyse et le nom de I op rateur la m thode utilis e ici SOP N Anti Nutri MeatFish 004 fr En outre
56. ution HPLC pour le dosage Faire un blanc en rempla ant la solution de l chantillon ou les solutions standard par la solution ATC Veiller la pression autour de 150 atm et le temps de d tection autour de 8 9mn 8 EXPRESSION DES RESULTATS 8 1 M thode de calcul et formule Soit W mg kg la teneur en histamine exe 2T00 jo MEECRR 27 A surface balay e par le pic Area de I talon B surface balay e par le pic Area du blanc AFTER FP7 n 245025 Deliverable D 1 2 3 12 SOP Number Anti Nutri MeatFish 004 fr Page 6 sur 8 Procedure for biogenic amines in fish Number Anti Nutri MeatFish 004 fr Date of creation 30 11 2010 Date of revision Hounhouigan 17 10 2011 D surface balay e par le pic Area de I chantillon C concentration de l talon utilis en mg l 2700 27 SE SC facteur de dilution 10 pour amener de mg 100g en mg kg La formule finale de calcul de dosage de l histamine est Eupen _ 27 W mg kg ou mg l Fas XS 8 2 R p tabilit La diff rence absolue entre deux r sultats individuels ind pendants obtenus a l aide de la m me m thode sur un mat riau identique soumis a l essai dans le m me laboratoire par le m me op rateur utilisant le m me appareillage et dans l intervalle de temps le plus court ne d passera pas la valeur de r p tabilit r dans plus de 5 des cas 9 POINTS CRITIQUES ET NOTE SUR LA PROCEDURE V rifier la p
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