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Note sur un nouvel appareil d`électrophorèse horizontale pour

1. Trente fentes sont pratiqu es en face des trente rep res l aide d une micro spatule pour pes e et 30 morceaux de papier What man n 3 de dimension 10 X 10 mm sont d pos s sur les trous borgnes Le multiapplicateur muni de trente pipettes Pasteur permet de pr lever directement dans leurs tubes les 30 chantillons et de les d poser sur les 30 papiers qui s en imbibent Jls sont intro duits ensuite dans les fentes du gel l aide d une paire de pinces 8 3 Migration lectrophor tique Le couvercle est install en prenant garde ce que des bulles d air ne soient pas emprisonn es dans les trous des murs le r servoir tampon est raccord au goutte goutte la goutti re de trop plein est raccord e la bonbonne de r cup ration le r frig rant est mis en circulation et les lectrodes sont branch es On met alors le contact au redresseur de courant qui indique 120 volts pour 200 ma soit une d d p de 4 5 volts par centim tre de gel Apr s trente minutes de migration les papiers ayant servi APPAREIL D LECTROPHOR SE HORIZONTALE POUR GEL D AMIDON 1 RARE nn noces Eee RER RSR RS RSR E ES 3 ee RS Re AREE RA E Planche I A Disposilif d lectrophor se B Accessoires C Inclusion des 30 ehanlillons D Mise en place du toit Glissernent du gel sur la glissi re L gende 1 redresseur de courant 2 appareil d lectrophor se 3 r se
2. t l objet de divers perfectionnements et de nombreuses adapta tions ont t r alis es selon les besoins des chercheurs Citons titre d exemple les modifications techniques apport es par FINE WASCZENKO LOEB et MouLLec 3 ou encore la technique de micro lectrophor se en gel d amidon mise au point par Mouray MORETTI et Fine 6 La technique classique d lectrophor se en gel d amidon illustr e par d excellentes photographies a t d crite par Fine et MorETTI 2 et reprise r cemment dans le livre Techniques d lectro phor se de zones de J M FINE et C RoPaRTz 4 D une fa on g n rale l amidon est coul dans un support donnant un gel d une vingtaine de centi Le descriptif de cet appareil est paru en juin 1971 sous forme d une note multigraphi e 3 pages et 2 figures au Centre O R S T O M de Dakar R f rence n 1981 JCB ac Cah O R S T O M s r Oc anogr vol X n 3 1972 251 262 252 J C m tres de long et environ 8 cm de large permettant d tudier en moyenne 3 s rums L unit de travail constitu e par 2 cuves lectrodes permet de traiter un maximum de 15 chantillons au cours d une m me lectrophor se 5 gels en parall les On constate couramment que les distances parcou rues par les diff rents constituants d un m me chantillon sont variables d un gel l autre au cour d une m me lectrophor se de 5 gels en parall le Ceci n est pa
3. des murs 1 2 3 du 2 3 3 M che de 7 mm 30 trous dans la plaque sup rieure du multiapplicateur 2 8 4 M che de 8 mm 30 trous borgnes sur la r glette rep re sur laquelle on a trac les divers rep res 2 3 5 M che de 10 mm les trous correspondant aux tubes de 10 mm 2 trous sur le mur 1 1 2 1 6 trous sur le mur 1 1 2 2 2 4 Finition des pi ces d tach es D couper les diverses encoches des pi ces les poncer au lapidaire et la lime puis au papier de verre et au papier de carrossier sauf les bords desti n s au collage 2 5 Assemblage Les diverses pi ces sont coll es dans l ordre suivant l aide de chloroforme a Sur le plateau de base coller les 4 murs et les 7 cloisons V rifier tanch it des bacs tampon b Ajuster le plateau horizontal et les deux rebords Coller les tubes du r frig rant boucher les trous de vidange et v rifier l tanch it de l enceinte r frig rante c Coller les diverses cales d R aliser le couvercle les cadres et les accessoires 3 MODE D EMPLOI 8 1 Coulage du gel Une bulle d air introduite dans l enceinte r frig rante permet de v rifier l horizontalit du plateau sur lequel est coul le gel Le cadre gel est ensuite Cah O R S T O M s r Oc anogr vol X n 3 1972 251 262 BARON fix sur ce plateau bloqu contre les d crochements des murs et l tanch it est r alis e par 4 bandes ad
4. diane 462 x 45 Pour la glissi re 2 rebords 490 x 10 et 1 rebord 140 x 10 En 4 mm Pour le cadre papier 4 pieds 490 x25 La r glette rep re 550 x50 Pour le multiapplicateur 2 murs 470 x 80 2 murs de 80x37 et un fond 470 x 37 En mm Le plateau de base 520 x330 2 murs 1 1 1 510x70 2 murs 1 1 2 330 x 70 2 cloisons 1 1 8 510 x35 cloisons 1 1 4 510 x35 1 support gel 1 1 8 1 520 x 140 2 rebords 1 1 8 2 510 x20 Pour le cadre papier 2 bords et 1 s paration 180 X 20 Quatre cales 1 1 7 1 45 x 10 Pour la glissi re un plateau 490 x160 Pour le chevalet 2 triers 70 X55 et une barre 170 x 20 En 9 mm Pour le cadre gel 2 bords 180 x 15 15x 15 L25 x20 11 7 1 1 1 7 2 11 7 3 SUPPORT A GEL COUVERCLE CLOISONS E T T E gt CADRE Fig 2 Pi ces d tach es de l appareil 256 J C 2 2 5 En 10 mm 6 cales 1 1 6 15X10 4 cales 1 1 7 2 25 x45 4 cales 1 1 7 3 50 x 45 2 2 6 En 15 mm Les deux pieds du cadre gel 490 x 10 2 2 7 Tube de 10 mm 2 pour le goutte goutte 60 2 pour le r frig rant 25 1 pour la goutti re 30 et 2 pour les trop pleins 2 2 8 Tube de 20 mm 30 cm pour la goutti re 2 3 Per age 2 3 1 M che de 3 5 mm 30 trous dans la plaque inf rieure du multiapplicateur 2 3 2 M che de 4 5 mm couvercle trous
5. rang es quidistantes de 8 mm el reposent au fond des bacs 1 8 Cadres Deux sortes de cadres sont utilis s un cadre pour le coulage des gels et un cadre pour l lectrophor se pr parative sur papier 1 3 1 Le cadre gel est constitu par un cadre pro prement dit 520X180X9 d limitant une fen tre 490 X160xX9 et reposant sur deux pieds 490x15x10 Il est bloqu contre les d crochements des murs 1 1 2 Ce cadre d limite avec le plateau gel un volume d environ 705cm et avec les rebords un volume d environ 75 cm soit un total arrondi 254 1 3 2 J C BARON de 780 cm correspondant un gel d amidon de 9 mm d paisseur Le cadre papier 520 X180 X25 repose sur le plateau par 2 bords 180X20X5 et une s paration mitoyenne 180 X20 X5 d limitant deux fen tres de migration de 230 mm de large Il s appuie en outre sur les rebords 1 1 8 2 par 4 pieds 490 X25 X4 d limitant les deux fen tres de migration 140 mm de large et quatre fen tres de tension 230 X 10 Bloqu contre les d crochements des murs 1 1 2 ce cadre sous tend deux feuilles de papier Whatmann n 3 280 x 230 1 4 Accessoires 1 4 1 1 4 2 1 4 3 1 4 4 1 4 5 1 4 6 Cah O R S T O M s r Oc anogr vol X n 8 1972 251 262 La r glelle rep re 550 X50 x4 Le bord sup rieur est gradu laissant une garde de 30 mm chaque extr mit plus 22 5 mm pour tenir compte des effet
6. 1 15 pour le passage de la fiche de l lectrode 1 1 2 Deux murs 330X70X5 dont la hauteur est r duite 50 mm 95 mm des extr mit s la suite de deux d crochements de 15 puis de 5 mm 1 1 2 1 Un mur est perc de 2 trous pour la fixa tion des tubes trop plein se d versant APPAREIL D LECTROPHOR SE HORIZONTALE POUR GEL D AMIDON I 253 dans la goutti re et qui assurent une hauteur minimum de tampon de 46 mm Ces tubes sont reli s l un la base l autre au plafond de la goutti re inclin e 300 diam tre 20 qui se termine par un tube de 30 mm de long 1 1 2 2 L autre mur est perc de 6 trous Deux trous pour la fixation des tubes de goutte goutte 60 d bordant de 25 mm vers l ext rieur eb de 30 mm vers l int rieur o l extr mit est biseaut e Deux trous pour la circulation du r frig rant dans lesquels sont fix s deux tubes 25 Deux trous pour la vidange du r frig rant 1 1 3 Deux cloisons verticales 510 X35 X5 d limi tant les bacs tampons d une largeur de 70 mm 1 1 4 Deux cloisons verticales 510 X50 X5 suppor tant le plateau gel avec une fen tre 15 X 35 permettant le passage du r frig rant 1 1 5 Trois cloisons en chicane 495 X50X3 qui distantes 1 1 6 Trois cales 15 X 10 x 10 sont r parties au fond de chacun des bacs pour sur lever les lec trodes Apelab CT 50 de 10 mm B SUR LES MURS ET LES CLOISONS SONT SOLD S 12 CAL
7. 5 23 9 2 26 5 19 23 4 17 5 18 7 8 1 32 3 Limites 26 5 14 10 7 4 5 40 3 normales 28 7 15 2 11 7 5 5 42 3 4 3 lectrophor se pr parative sur papier Deux lectrophor ses pr paratives sur papier Whatman n 3 ont t effeclu es la premi re avec un s rum de poisson Coryphaena hippurus qui est trait ensuite en lectrophor se bidimensionnelle en gel d amidon et la seconde avec un s rum humain permettant de juger de la s paration obtenue photo graphie B planche IH Les conditions d exp rience sont les suivantes 8 h 30 9 v cm Lampon pH 8 7 V ronal sod 17 52 g v ronal acide 2 76 g lactate de Calcium 0 768 g eau distill e 2 litres 4 4 lectrophor se bidimensionnelle en gel d amidon A la suite de l lectrophor se pr parative sur papier du s rum de Coryphaena hippurus les diverses fractions prot iques sont r cup r es apr s un d cou page parliculier du papier et mises migrer en gel d amidon perpendiculairement au premier sens de migration sur papier photographie C planche II 9 DISCUSSION Le nouvel appareil pr sent ici ne pr tend pas rivaliser avec les nombreux appareils tr s perfec BARON tionn s que l on peut acheter dans le commerce Cependant pour un prix modique il r pond un besoin particulier qui est de traiter c te c te un nombre important d chantillons par lectrophor se en gel d amidon Ce substrat a gar
8. ES ET 1 SUPPORT A GEL EN 3 PI CES 1 1 7 Trois sortes de cales verticales sont soud es aux murs 1 1 2 pour bloquer les lectrodes les murs du couvercle et les cadres 1 1 7 1 quatre cales 5 x10 h 45 1 1 7 2 quatre cales 25x 10 h 45 1 1 7 3 quatre cales en forme d querre 45 gt 10 h 30 1 1 8 Le support du gel est form par I plateau horizontal et 2 rebords horizontaux qui d li mitent en m me temps l enceinte r frig rante 1 1 8 1 Le plateau 520 x140 x5 est soud par dessus les murs 1 1 2 les cloisons 1 1 4 et les chicanes 1 1 5 1 1 8 2 Chacun des rebords 510X20X5 est soud par dessus la cloison 1 1 3 et au flanc de la cloison 1 1 4 1 2 Couvercle Le couvercle de 3 mm d paisseur est constitu d un toit deux pentes de 2 pignons et de 2 murs plongeant dans le tampon Cah O R S T 0 M s r Oc anogr vol X n 3 1972 251 262 COUVERCLE a CADRE A GEL PLATEAU DE BASE Fig 1 Repr sentation sch matique de l appareil d lectrophor se 1 2 1 Le loil a 2 pentes d environ 121 mm de large chacune pour 510 mm de long Il est soud par dessus les pignons 1 2 2 Les pignons ont une hauteur au sommet de 30 mm et 15 mm aux extr mit s pour une largeur de 240 mm Ils reposent sur le plateau gel lorsque le cadre est t 1 2 3 Les murs 504 X70 X3 sont perc s de trous de 4 5 mm de diam tre r partis en quinconce sur des
9. ION DE L APPAREIL L appareil est r alis en Altuglass l aide d une colle au chloroforme fabriqu e partir des d chets de coupe Les lectrodes lin aires de platine mod le CT 50 Apelab sont directement utilis es mais on peut aussi bien les fabriquer soi m me Une pompe assure la circulation du r frig rant en circuit ferm En circuit ouvert on peut relier l enceinte sur le robinet d eau froide 2 1 Mat riel n cessaire 2 1 1 2 1 2 Mati re premi re Trois plaques d Altuglass d paisseurs 3 mm 4 mm et 5 mm Vingt centi m tres de tuyau d Altuglass de 10 mm de diam tre et 30 cm de 20 mm de diam tre Un litre de chloroforme Les paisseurs d Altuglass de 9 mm 10 mm et 15 mm sont obtenues par collage 4 5 5 5 et 5 5 5 Outillage Un ensemble polyrex bloc moteur scie circulaire lapidaire perceuse un tau des serre joints Une scie m taux deux limes une queue de rat un r glet une querre une pointe s che un compte gouttes un pinceau Du papier de verre et du papier de carrossier n 320 et 400 2 2 D coupage 2 2 1 2 2 2 2 2 3 2 2 4 En 3 mm Trois cloisons 1 1 5 495 x50 Le couvercle comprenant 1 toit 2 1 2 fois 510 x 122 2 pignons 2 2 240 x30 et 2 murs 2 3 504x70 La plaque de recouvrement 520 x 180 Pour le multiapplicateur 1 plaque inf rieure 455 x20 plaque sup rieure 490 x 30 2 murs 455 X 25 1 cloison m
10. NOTE SUR UN NOUVEL APPAREIL D LECTROPHOR SE HORIZONTALE POUR GEL D AMIDON J C BARON Oc anographe biologiste de l O R S T O M Dakar S n gal R SUM Un nouveau lype d appareil pour lectrophor se est pr sent ici Con u el r alis par l auteur pour trailer en s rie 30 s rums en gel d amidon il peut aussi tre ulilis avec des gels d agarose de polyacrylamide ou des gels mixtes ainsi que pour l leclrophor se pr paralive sur papier ou aulre substrat Le contact entre le gel et le tampon est direct le syst me r frig rant est incorpor l appareil el le couvercle plonge dans le tampon ABSTRACT A new apparalus for electrophoresis allowing lo analyse 30 samples of sera through starch gel in the same run has been conceived and developed by the author Different other substrates such as paper agar polyacrylamide can also be used The contact between gel and buffer is direct the cooling device is incorporated in the apparatus and the cover plunges in the buffer INTRODUCTION La recherche de groupes s riques chez les poissons nous a amen uliliser les techniques d lectro phor se et en particulier l lectrophor se en gel d amidon qui permet de s parer les diff rents consti tuants d un s rum selon leurs charges lectriques mais aussi selon leurs dimensions mol culaires gr ce la trame du gel jouant un r le de filtre D crite par Smiries en 1955 7 cette technique a
11. ctrophor se sur gel d amidon 1 modifications techniques Rev d Hemalo logie 12 p 698 4 Fine J M 1968 lectrophor se en gel d amidon in Techniques d lectrophor se de zones ditions de la Tourelle St Mand 283 p Cah O R S T O M s r Oc anogr vol X n 8 1972 251 262 5 GrouLape J 1968 lectrophor se sur papier in Tech niques d lectrophor se de zones ditions de la Tourelle St Mand 283 p 6 Mouray H MoreTTI J Fine J M 1961 Une technique de micro lectrophor se en gel d amidon Bull Soc Chimie Biologique Tome XLIII 7 8 993 1903 7j Suirgies 0 1955 Zone lectrophoresis in starch gels group variation in the serum proteins of normal human adults Biochem J 1955 61 629 641
12. d de nombreux adeptes malgr l apparition sur le march de nou veaux supports d un maniement plus facile mais qui n apportent pas toujours un pouvoir de s paration suffisant Le temps perdu par la migration en gel d amidon qui est de l ordre de plusieurs heures est compens par le nombre d chantillons trait s En outre l utilisation possible de l appareil pour d autres gels tel que l agarose ou des gels mixtes amidon agarose est int ressante eL il est adaptable aux lectrophor ses pr paratives sur papier 2 migrations la fois ou en gel d amidon L lectrophor se pr pa rative sur bloc de Pevikon n a pas t essay e mais peut s effectuer dans les m mes conditions qu avec l appareil construit par MANUEL SILBERZAHN et RicHaRD 1 Les diff rences essentielles de notre appareil par rapport ce dernier sont les suivantes ensemble monobloc cuve et bacs non mobiles cadre t lors de l lectrophor se permettant une bonne r traction du gel couvercle d limitant une enceinte ferm e et vitant la retomb e d eau sur le gel cuves tampon de grande capacit et renouvellement continu du tampon gel de 49 em de front au lieu de 28 cm el de 9 mm d paisseur au lieu de 6 mm permettant d effectuer 3 r actions diff rentes sur 30 chantillons 5 1 lectrophor se en gel d amidon Les lectrophor ses obtenues par la migration de 30 fois le m me chantillon de s rum huma
13. e de 2 cm de large est pr lev e pour tre color e Les diff rentes fractions sont alors extraites de diverses mani res ou laiss es en place sur le papier qui est conserv congel pour un usage ult rieur La deuxi me migration est effectu e en gel d amidon soit par inclusion directe de bandes de papiers pro venant de l lectrophor se pr parative soit par inclu sion d extraits Les d tails techniques sont affaire de chacun et seule l exp rimentation permet de trouver des solu tions personnelles aux probl mes que l on rencontre en cours de manipulation Dans le cas de l lectro phor se sur papier par exemple o l vaporation joue un r le important les pignons du couvercle sont appliqu s sur une bandelette de p te modeler qui augmente l tanch it de l enceinte L important ensuite est de se fixer un protocole que l on r p te d une exp rience sur l autre en se servant du m me appareil dans les m mes conditions Manuscrit re u au S C D le 11 avril 1972 BIBLIOGRAPHIE 1 Crevssez R 1968 Appareillage simple d lectropho r se pr parative sur support in Techniques d lectro phor se de zones d de la Tourelle St Mand 283 p 2 Fine J M Moretri J M 1961 L lectrophor se en gel d amidon Principe Technique Application Le Pharmacien Biologiste 4 345 355 31 Fine J M Waszczenko E Lors J Mourec J 1957 Groupes s riques et le
14. epose dans le tampon r alisant un joint hydraulique au niveau des bacs et qui d termine une enceinte de faible volume au dessus du gel Le toit en pente de ce couvercle vite la retomb e de gouttelettes d eau sur le gel Ensuite par une r frig ration sous jacente l aide d un circuit d eau r frig r e circulant sous le gel L ensemble de ces dispositions permet d aug menter la tension donc de diminuer le temps de migration sans augmenter le risque de d naturation des prot ines Par ailleurs la r partition du courant est homo g n is e par les murs du couvercle qui sont perc s de nombreux trous et dont la r sistance fixe r duit les variations de l intensit et limite les variations de pH aux bornes variations minimis es en outre gr ce au renouvellement du tampon par un syst me de goutte goutte et de trop plein Dans l lectrophor se classique les contacts entre le gel et le tampon sont r alis s avec du papier Cah O R S T O M s r Oc anogr vol X n 3 1972 251 262 BARON d amiante corraM et selon la mani re de disposer ces contacts la migration obtenue est plus ou moins grande pour un m me temps d lectrophor se La r alisation d un contact direct entre le gel et le tampon apporte donc une simplification qui supprime en outre la discontinuit entre le gel et le tampon g n ratrice d irr gularit s Notons aussi que le support du gel tant solidaire des bacs et le cadre ge
15. h sives Un gel d amidon de 780 cm concentr 12 est r alis selon la m thode classique dans un erlen meyer de 2 litres et vers dans le cadre Le gel recouvert d une plaque d Altuglass de 3 mm refroi dit une demi heure la temp rature du laboratoire puis 1 heure en chambre froide ou au frigidaire Apr s solidification il est d coll du cadre l aide d un grattoir papier et le cadre est t Si l on d sire garder le gel pour le lendemain le cadre est laiss le gel est recouvert de papier filtre imbib de tampon et le couvercle est pos pour former une chambre humide Pour le gel d agarose une plaque de verre est d pos e sur le support et 600 cm d agarose 1 5 sont coul s dans le cadre 8 2 Insertion des chantillons Divers essais nous ont fait abandonner pour les travaux de routine l inclusion par des r servoirs pratiqu s l emporte pi ce En effet la ligne des r servoirs repr sente un point faible du gel et des cassures se forment son niveau de plus l utilisation d amidon soluble lors de l inclusion est d licate et pose des probl mes de standardisation concernant la temp rature et le rapport amidon soluble s rum L emploi de morceaux de papier imbib s de s rum donne d aussi bons r sultats et offre plus de r gularit dans l emploi La r glette servant au d p t des chan tillons est pos e sur le gel appuy e contre les d cro chements des murs
16. in ou la migration de s rums de mammif res Planche II donnent une id e des performances de l appareil Nous avons trait en outre divers extraits de Lissus el effectu des r v lations enzymatiques sur des s rums de sardinelles Si les essais de migralions en chambre froide 5 60C indiquent une tendance du gel se craquer par contre la migration la temp rakure du laboratoire 230 m me en absence de r frig ration est excellente On peut aussi se passer d un renouvellement continu de tampon par le goutle goutte sans influer notablement sur les r sullats Le redresseur de courant ST3B Apelab nous limile par son miiliamp rage de 200 ma el pour celle intensit maximum on n obtient qu une diff rence de potentiel de 4 5 volts cm de gel Il est vident qu un redresseur ayant d autres caract ristiques doit permettre d obtenir un voltage sup rieur et une r duction du temps de migration APpeLag J C MonNTAGN 35 rue des coles 92 Bagneux propose la construction de l appareil d crit ici pour 4 500 F hors taxes en date du 4 octobre 1971 Cah O R S T O M s r Oc anogr vol X n 3 1972 251 262 APPAREIL D LECTROPHOR SE HORIZONTALE POUR GEL D AMIDON I 261 chevaux chiens vaches ch vre humain s rum B 2 Planche II A lectrophor se en gel d agarose S rums humains pathologiques 1a 101 et s rums de mammif res B lectrophor
17. l tant bloqu en position fixe les gels ont toujours la m me configuration et la m me position par rapport aux caract ristiques de l appareil et en particulier la distance entre l lectrode et l interface tampon gel est constante alors que la distance lectrode papier corram est variable Un aspect non n gligeable dans le traitement des chantillons est leur prix de revient par unit Dans le cas courant d une lectrophor se de 3 s rums migrant sur 15 mm de large et 120 mm de long seul 1 3 du gel d amidon est le si ge d un transport de prot ines alors qu avec notre appareil la moiti du gel est r ellement fonctionnel Il constitue une unit de travail permettant de traiter 30 chan tillons la fois donc de doubler le rendement Enfin l appareil et ses accessoires peuvent tre fabriqu s tr s peu de frais au laboratoire 1 DESCRIPTIF La description de l appareil est donn e en quatre parties les bacs et l enceinte r frig rante le cou vercle les cadres et les accessoires Chaque pi ce est identifiable par un num ro de plusieurs chiffres Les dimensions sont donn es en millim tres les trous mesurent 10 mm et les tubes ont un diam tre ext rieur de 10 mm pour une lumi re de 8 mm 1 1 Bacs et enceinte r frig rante A SUR UN PLATEAU DE BASE 520 X330 X5 sont SOUD S 4 MURS EXT RIEURS 7 CLOISONS VERTI CALES ET 6 CALES 1 1 1 Deux murs 510X70X5 avec une encoche h 20
18. papier et la photographie A planchelII repr sente les migrations en gel d agarose obtenues avec notre appareil 1 Les s rums humains nous ont t aimablement fournis par l Institul Pasteur de Dakar ainsi que les r sultats d lectrophor se sur papier concernant les 10 s rums de malades 2 En provenance du Laboratoire National de Recherches V t rinaires de Dakar Hann Cah O R S T O M s r Oc anogr vol X n 3 1972 251 262 Planche II lectrophor se en gel d amidon A S rum humain r p tition du m me s rum B S rums de mammif res 7 chiens 8 10 chevaux il 16 vaches 17 et I8 ch vres 19 ei 20 moutons 8 H pour s rum humain G et D S rums de sardinelies r v lation des esterases sur la Lranehe inf rieure du gel C et coloration des prot ines totales sur la tranche moyenne D E extraits de muscles de poissons muscles blancs 1 10 el muscles rouges ll 20 d anchois Museles blancs de mugil 21 30 260 J C TABLEAU L Pourcentages des diverses fraclions obtenues par leciro phor se sur papier de 10 s rums humains africains malades S rums N Yy 8 a al ti mine 1 16 9 12 8 8 6 33 4 2 28 3 15 4 10 3 6 3 39 7 3 29 2 15 12 8 35 8 4 29 6 15 1 11 3 7 4 36 6 5 38 11 7 11 2 10 6 28 5 6 31 5 12 7 17 5 33 8 7 32 4 12 2 9 6 8 2 37 6 8 26 8 11 6 14 9 9 1 37 6 9 26 8 14
19. rait s en laissant les papiers d inclusion 15 mm de large pendant toule la dur e de la migration ce qui ne per turbe pas l lectrophor se On peut voir les lectrophor grammes obtenus sur la photo graphie B planche II 4 1 3 S rums de poissons Les s rums de 27 Sardi nella aurila p ch es Dakar le 22 juin 1971 Lot 28 sont analys s avec le nouvel appareil La tranche moyenne est color e au noir amido pour une r v lation des prot ines totales photographie D planche II et la tranche inf rieure subit une r v lation sp cifique des est rases photographie C planche Il La contiguit des divers chantillons permet une comparaison coh rente des 27 s rums la fois 4 1 4 Exirails de tissus Des extraits de muscles blancs d anchois Anchoviella guinensis et de mullets Mugil ainsi que des extraits de muscles rouges d anchois ont subi une lectro phor se en gel d amidon La ligne d inclusion des chantillons est alors plus loign e dela cathode que pour des s rums La photographie x 4 3 planche H illustre cette lectrophor se 4 2 Electrophor se en gel d agarose Nous avons trait de celle fa on 10 s rums humains d africains malades 1 en pr sence d un s rum normal t moin europ en el 9 s rums de mammif res Les inclusions ont t effectu es dans des r servoirs de 15 mm de large Le tableau 1 rend compte des r sultats obtenus par lectrophor se classique sur
20. rvoir tampon 4 tuyau de goutte goutte 5 goutti re de trop plein 6 r cup ration du tampon 7 r frig ration 8 branchement des lectrodes 9 bouchon de vidange du r frig rant 10 cou verele en toit 11 mur du couvercle perc de trous 12 gel d arnidon 13 papiers d inclusion 14 glissi re gel 15 chevalet 16 r gletie rep re 17 scie couper le gel 18 et 19 mulliapplieateur et son bac de lavage 20 cadre papier 21 bande adh sive Cah O R S T O M s r Oceanogr vol X n 3 1972 251 262 258 J C l inclusion sont t s et l lectrophor se se poursuit durant 6 heures au m me voltage Le tampon utilis d riv du tampon de Ashton mais de force ionique plus faible est un tampon discontinu borate lithium tris citrique La solution tampon pour les bacs de pH 8 4 est la suivante Hydroxyde de lithium 5 244 g et acide borique 30 920 g pour 5 litres d eau distill e La solution utilis e pour le gel comprend 1 volume de la solution pr c dente pour 9 volumes de tampon tris citrique Tris 12 1 g et acide citrique 3 2 g pour 2 litres d eau distill e 8 4 R v lation des prot ines L lectrophor se termin e le couvercle est t le tampon des bacs est siphon en partie et les pieds du gel sont coup s et enlev s On passe alors un fil m tallique entre le gel eL son support pour supprimer les adh rences possibles Le chevalet et la glissi re l g rement h
21. s de bord Les 445 mm restant sont divis s en 30 espaces de 10 mm num rot s de 1 30 et s par s les uns des autres par des plages sombres de 5 mm La partie inf rieure comporte trente trous borgnes de 8 mm de diam tre perc s 4 m du bord en face des trente num ros Le multiapplicateur Il comprend un portoir pipettes et une cuve de rin age Le portoir est constitu par une plaque sup rieure 490 X 30 X 4 perc e de 30 trous de 7 mm espac s de 8 mm et d une plaque inf rieure 455 X 20 x3 perc e de 30 trous de 35 mm espac s de 11 5 mm Les deux plaques sont s par es par 2 murs 455x25X3 les petits trous tant videmment en face des grands trous La cuve de rin age 470 X80 x 45 fabriqu e avec de l altuglass de 4 mm comporte une cloison m diane de 45 mm de haut d limitant deux compartiments l un de lavage l autre de rin age Le chevalet Il s adapte sur le mur 1 1 2 2 et sert soutenir la glissi re Il est constitu de deux triers 70 X55 x5 solidaires d une barre transversale 170 x20 X5 et repose d une part sur les rebords 1 1 8 2 et d autre part sur la paillasse La glissi re comprend un plateau 490 x 160 x 5 avec deux rebords lat raux 490 x 10 x3 et un rebord de blocage 140 X10 X3 Les bacs de coloration Leurs dimensions per mettent de recevoir la glissi re La plaque de recouvrement est d pos e sur le gel apr s le coulage 520 x 180 X3 2 R ALISAT
22. s tr s important lorsqu il s agit d un mat riel bien connu comme le s rum humain par exemple mais entra ne des incertitudes dans la comparaison des diff rentes bandes lorsqu il s agit de s rum peu connu comme celui des sardinelles actuellement l tude dans notre laboratoire Ainsi les est rases de ce s rum se r v lent en plusieurs bandes qu il est difficile de comparer d un gel l autre du fait m me d un manque de contigu t entre les chantillons Une solution simple consiste alors relier entre eux les 5 gels pour n en faire qu un seul de grande dimension comme dans l lectrophor se pr parative et il devient ais de comparer de proche en proche les diff rents chantillons Comme le dit CREYssEL 1 La condition fon damentale d une s paration lectrophor tique sur substrat est l homog n it des conditions physiques capables d influencer le d placement des particules charg es dans le champ lectrique Or le passage du courant provoque un effet Joule et la quantit de chaleur d gag e par effet Joule Q RI t j entra ne une variation thermique dont l un des effets est de provoquer une vaporation difficilement contr lable entra nant une distorsion des fronts de migration et une augmentation de la force ionique du tampon Nous avons donc cherch limiter cette vapo ration et la standardiser au maximum tout d abord par l usage d un couvercle original qui r
23. se pr parative sur papier 1 papiers en place sur l appareil 2 r sultats lectrophor ramme de s rum humain et bande t moin de s rum de coryph ne C lectrophor se bidimensionnelle en gel d amidon Migration des divers extraits obtenus partir de la pr paralive sur papier de s rum de coryph ne Cah O R S T 0 M s r Oc anogr vol X no 3 1972 231 202 262 J C Notons qu il est possible de laisser les papiers d inclusion pendant toute l lectrophor se ou de mouler des r servoirs d inclusion lors du coulage du gel Enfin la garde de gel pr vue pour les effets de bord est suffisante pour autoriser l inclusion ven tuelle d un chantillon suppl mentaire de r f rence 5 2 lectrophor se pr parative sur papier Les performances sont ordinaires et ne valent pas celles obtenues dans les appareils tr s labor s comme celui de J GROULADE par exemple 5 Cependant il est possible de r aliser de bonnes s parations sur papier Whatman n 3 comme on peut le constater sur la photographie B planche III Le cadre permet de tendre 2 feuilles de papier de 280 mm de long sur 230 mm de large et de r aliser ainsi 2 lectrophor ses la fois On peut d poser jusqu 0 8 ml de s rum sur un agitateur de verre plac sur le papier 2 cm du bord cathodique ou directement la pipette Apr s 10 mn de migration l agitateur est l BARON L lectrophor se termin e une bandelette m dian
24. umect e sont mis en place et le gel est pouss sur la glissi re A l aide du fil m tallique on coupe le gel dans le sens de la longueur La tranche sup rieure 6 mm est t e et d pos e dans une seconde glissi re la tranche inf rieure de 3 mm reste au fond de la premi re glissi re qui est immerg e dans un bain r v lateur moins que l on ne badi geonne la surface du gel avec le r v lateur Deux tranches de 3 mm sont encore disponibles pour 2 r v lations diff rentes On peut ainsi r v ler 2 enzymes et effectuer la coloration g n rale des prot ines au noir amido sur les 30 chantillons ou encore rechercher la m me enzyme avec 2 substrats diff rents par exemple naphtylac tate et B naphtylbutyrate ainsi que sa sensibilit un inhibiteur par exemple l s rine 4 R SULTATS 4 1 Electrorhor se en gel d amidon 4 1 1 S rum humain 1 Nous avons effectu un essai de r p tition en faisant migrer 30 chan BARON tillons du m me s rum c te c te Gomme on peut le constater sur la photographie Planche II A la migration se fait selon un front tr s peu distordu et la r p tition est parfaite d un bord l autre de l lectrophor gramme une prot ine particuli re pouvant tre suivie de proche en proche m me si la ligne est l g re ment sinueuse 1 2 S rums de mammif res 2 Les s rums de chiens 3 chevaux 6 vaches 2 ch vres et 2 moutons ont t t

Note sur un nouvel appareil d`électrophorèse horizontale pour

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