HTLV BLOT 2.4 - MP Biomedicals
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1. Diagnostics HTLV BLOT 2 4 TEST PAR WESTERN BLOT CE 0123 DATE DE R VISION 05 05 MAK 0011 FRA 0 trousse de 18 tests 11080 018 trousse de 36 tests 11080 036 NOM ET APPLICATIONS Le test HTLV BLOT 2 4 de MP Diagnostics MPD est un test enzymatique qualitatif destin la d tection in vitro des anticorps anti HTLV I et HTLV II dans le s rum ou le plasma humain II est pr vu pour tre utilis comme test compl mentaire plus sp cifique sur les pr l vements de s rum ou de plasma humain ayant montr une r action positive reproductible aux proc dures de d pistage de type test par immunoadsorption avec enzyme conjugu ELISA INTRODUCTION Les r centes tudes pid miologiques men es aux Etats Unis et en Europe confirment l existence d une pr valence mixte de chacun des deux virus HTLV I et HTLV II au sein de diverses populations risque lev tels que les consommateurs de drogue par voie intraveineuse Les tests de d pistage des virus HTLV I Il sont largement disponibles Les pr l vements montrant une r action positive reproductible aux tests de d pistage doivent tre soumis a des tests compl mentaires plus sp cifiques afin de confirmer leur s ropositivit au HTLV I ou au HTLV II Ces tests compl mentaires doivent tre en mesure d identifier les anticorps dirig s contre les prot ines de la nucl ocapside gag et de l enveloppe env des virus HTLV I et HTLV II Les bandelettes2. A Comparaison a un test LIA 1 Voici les r sultats de la comparaison entre le test HTLV BLOT 2 4 de MPD et un test LIA 1 pour des chantillons positifs acquis aupr s de Boston Biomedica Inc Etats Unis BBI et ProMedDx Test LIA 1 M thode Total NEG IND er 3 BLOT 2 4 POS 0 102 102 de MPD _ Total 3 102 105 Le test HTLV BLOT 2 4 de MPD donne 2 r sultats ind termin s et 1 r sultat n gatif Le test LIA 1 conclut 3 r sultats n gatifs Les deux tests ont tabli les discriminations suivantes pour les 102 chantillons positifs au HTLV Interpr tation M thode I HTLV II HTLV I et Ind ter Total HTLV II min HTLV BLOT 0 102 2 4 de MPD 3 102 kk Apparition des marqueurs sp cifiques la fois au HTLV I et HTLV II indiquant une coinfection Impossible de d terminer les souches HTLV en raison de l absence de marqueurs sp cifiques Les tests HTLV BLOT 2 4 de MPD et LI 1 ont donn des r sultats similaires Les discordances sont dues l utilisation de diff rents antig nes immobilis s et de m thodes diff rentes Le test HTLV BLOT 2 4 de MPD a montr une sensibilit de 97 1 gale celle obtenue par le test LIA 1 B Comparaison un test LIA 2 Un panel anti HTLV I et Il de la Soci t Fran aise de Transfusion Sanguine SFTS 94 compos de 26 chantillons HTLV 1 et 6 chantillons HTLV II a t analys Les r sultats du test HTL
3. un sujet est possible bien que rare et peut galement tre diff renci e d apr s les crit res ci dessus Le profil de bandes d un pr l vement de ce type indiquera une r action positive au HTLV I et au HTLV II Les informations disponibles montrent que la s ropositivit aux rgp46 l et rgp46 Il est respectivement sp cifique au HTLV I et au HTLV II Par cons quent les s rums r actifs aux rgp46 l rgp46 ll GD21 p19 et p24 peuvent tre class s parmi les cas d infection double LIMITES DE LA METHODE Le fonctionnement optimal du test n est possible que dans le respect absolu du mode op ratoire d crit Le non respect de ce mode op ratoire peut entra ner l obtention de r sultats aberrants L obtention d un r sultat N GATIF ne permet pas d exclure la possibilit d une exposition au HTLV I ou au HTLV II ou d une infection par ces virus Les Blots INDETERMINES ne doivent pas tre utilis s comme base pour le diagnostic de l infection par le HTLV I II Une s ropositivite la p19 comme la p24 a galement t observ e au sein de populations non infect es a faible risque bien que les fluctuations li es a la p24 soient relativement rares La sensibilit de la rgp46 l a t valu e a 95 en France a 100 pour les chantillons confirm s par ACP en Jama que et aux tats Unis et 98 chez les donneurs de sang s ropositifs au HTLV I Il a t montr que la sensibilit de la rgp46
4. DE TRAVAIL Remarque Pr parer la solution dans un b cher r cipient en polypropyl ne a La SOLUTION DE CONJUGU DE TRAVAIL doit tre pr par e juste avant utilisation b Pr parer la SOLUTION DE CONJUGU DE TRAVAIL en diluant le CONJUGU 1 1000 dans le TAMPON DE BLOTTING par exemple 10 ul de CONJUGU dans 10 ml de TAMPON DE BLOTTING 4 SOLUTION DE SUBSTRAT pr te l emploi a Verser directement le volume n cessaire depuis la bouteille Utiliser une pipette propre Veiller bien reboucher apr s utilisation PROC DURE Remarque a Aspirer tous les produits chimiques et r actifs utilis s dans un collecteur contenant de lhypochlorite de sodium b Toutes les incubations doivent tre effectu es sur un plateau bascule Attention Certains chantillons entra nent l apparition de marques sombres l endroit ou ils sont d pos s sur la bandelette Pour viter ce probl me veiller proc der comme suit i L chantillon ne doit tre d pos qu une fois le TAMPON DE BLOTTING ajout li Incliner l g rement la plaque en en soulevant l extr mit sup rieure ou inf rieure Le tampon de blotting s coule alors jusqu l extr mit inf rieure de la plaque D poser l chantillon emplacement o le tampon de blotting est recueilli Une fois tous les chantillons d pos s remettre la plaque plat Veiller ce que les bandelettes restent humides en permanence
5. contamination ll est d conseill de r utiliser les plaques d incubation PR CAUTIONS ANALYTIQUES 1 Le fonctionnement optimal du test n est possible que dans le RESPECT ABSOLU du mode op ratoire d crit dans ce mode d emploi Le non respect de ce mode op ratoire peut entra ner l obtention de r sultats aberrants NE PAS MODIFIER OU CHANGER DES R ACTIFS DE TROUSSES DIFFERENTES L assemblage des contr les conjugu et bandelettes de Western Blot est tudi pour un fonctionnement optimal Utiliser uniquement les r actifs fournis avec la trousse Ne pas utiliser les composants de la trousse au del de la date de p remption figurant sur l emballage de la trousse 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 Eviter toute contamination microbienne des r actifs lors de l ouverture des flacons ou bouteilles et de pr l vements de produit Une contamination r duirait la dur e de conservation des trousses et entrainerait l obtention de r sultats erron s Utiliser des proc d s aseptiques notamment les pipettes ou les embouts jetables de pipette lors de pr l vements dans les flacons Les contr les de la trousse doivent tre test s en m me temps que les chantillons des patients chaque cycle de test Afin d viter toute contamination crois e utiliser un nouvel embout de pipette pour chaque nouvel chantillon Pour obtenir des r sultats optimaux verser les r actifs
6. de Western Blot comprenant des antig nes viraux natifs du HTLV constituent l un de ces tests compl mentaires couramment utilis s Toutefois en raison de l absence d antig ne natif de l enveloppe dans le test du Western Blot HTLV I traditionnel il est souvent n cessaire de recourir des m thodes de radio immunopr cipitation pour confirmer plus pr cis ment la pr sence d anticorps anti HTLV I II La discrimination des s ropositifs au HTLV I et HTLV II n cessite l emploi de tests compl mentaires savoir de peptide sp cifique de tests ELISA de r action ACP Il est donc n cessaire de recourir a des tests s rologiques compl mentaires simples et n anmoins sp cifiques et sensibles pour obtenir une confirmation et une diff renciation rapides des chantillons s ropositifs au HTLV I et au HTLV II Le test HTLV BLOT 2 4 de MP Diagnostics a permis d am liorer la sensibilit et la sp cificit de la confirmation comme de la diff renciation des cas de s ropositivit au HTLV I et au HTLV II Ceci a t rendu possible par l int gration de MTA 1 prot ine recombinante unique de l enveloppe du HTLV I rgp46 l de K55 prot ine recombinante unique de l enveloppe du HTLV II rgp46 Il et de GD21 prot ine recombinante de l enveloppe du HTLV I et du HTLV II epitope courant et n anmoins sp cifique Chaque bandelette comporte galement un contr le interne ajout a l chantillon permettant de limiter au max
7. KG Velligan M Chan L Foung SKH Lal RB Enhanced specificity of truncated transmembrane protein for serologic confirmation of HTLV I and HTLV II infection by Western Blot assay containing recombinant envelope glycoproteins J Clin Micro 1995 33 12 3239 3244 Lillehoj EP Alexander SS Dubrule CJ Wiktor S Adams R Thi A Manns CC and Blattner WA Development and evaluation of a human T Cell leukemia virus type serologic confirmatory assay incorporating a recombinant envelope polypeptide J Clin Microbiol 1990 28 2653 2658 Lal RB Brodine SK Coligan JE and Roberts CR Differential antibody responsiveness to p19 gag results in serological discrimination between human T lymphotropic virus type and type Il J Med Virol 1991 1 232 236 Hjelle B Cyrus S Swenson S and Mills R Serologic distinction between human T lymphotropic virus HTLV type and HTLV type Il Transfusion 1991 31 731 736 Madeleine MM Wiktor SZ Goedert JI Manns A Levine PH Biggar RJ Blattner WA HTLV I and HTLV II worldwide distribution reanalysis of 4 832 immunoblot results Inte J Cancer 1993 54 2 255 260 World Health Organization s Global Programme on AIDS WHO Global Programme on AIDS Information Update Virus Information Exchange Newsletter 1990 7 2 54 55 Lal RB Rudolph DL Coligan JE Brodine SK and Roberts CR Failure to detect evidence of human T lymphotropic virus HTLV type a
8. Park Drive 04 01 The Cavendish Singapore Science Park Singapour 118259 T l 65 6775 0008 Fax 65 6775 4536 Courriel enquiry_ap mpbio com Medical Technology Promedt Consulting GmbH EC REP Altenhofstrasse 80 D 66386 St Ingbert Allemagne T l 49 68 94 58 1020 Fax 49 68 94 58 1021 Courriel info mt procons com Bureaux r gionaux MP Biomedicals Suisse S A Halle de Fret Aeroport P O Box 1015 1211 Geneve 5 Suisse T l 4122 788 1908 Fax 4122 788 1986 Courriel mpbiosuisse mpbio com Brevet Etats Unis 5 066 579 5 614 366 5 763 572 5 814 441 5 871 933 5 643 714 Brevet Australie 613350 667189 690540 Brevet Canada 1337799 Brevet Europe 0395634 Brevet Japon 2559482 Le nom et le logo Genelabs sont conc d s sous licence par Genelabs Technologies Inc FIGURE 1 pm Contr le s rique a i mE rgp46 E w HE v E E i rgp46 II E E Binnie F Bandes sp cifiques au virus visualis es laide de a Un s rum double infection par les HTLV I et II b Contr le positif fort r actif au HTLV I uniquement c Contr le positif fort II r actif au HTLV II uniquement d Contr le n gatif
9. Pour les stocker maintenir les bandelettes dans l obscurit INTERPRETATION DES RESULTATS La bande de contr le s rique permet de s assurer du d p t du s rum lors du test Labsence de cette bande signale qu aucun s rum conjugu ou substrat de test n a t d pos sur la bandelette de test ou que d autres erreurs de manipulation ont t commises Localiser et identifier les bandes apparaissant sur les bandelettes portant les contr les positifs forts Ces bandelettes servent ensuite identifier les bandes pr sentes sur les bandelettes portant les pr l vements tester PROFIL DE L ECHANTILLON INTERPR TATION 1 Aucune r activit aux prot ines S RON GATIF sp cifiques du HTLV 2 R activit la prot ine GAG S ROPOSITIF p19 accompagn e ou non de AU HTLV I p24 et deux prot ines ENV GD21 et rgp46 l 3 R activit a la prot ine GAG S ROPOSITIF p24 accompagn e ou non de AU HTLV II p19 et deux prot ines ENV GD21 et rgp46 ll 4 R activit aux prot ines GAG S ROPOSITIF p19 et p24 et ENV GD21 AU HTLV SEROPOSITIVITE AU HTLV I indiqu e par p19 2 p24 S ROPOSITIVIT AU HTLV II indiqu e par p19 lt p24 5 Bandes sp cifiques au HTLV d tect es mais crit res de s ropositivit au HTLV I HTLV Il ou HTLV non remplis Les profils de bandes ind termin s suivants peuvent toutefois tre interpr t s comme indiquant une SERONEGATIVITE Profil HTLV I
10. au cours de l op ration iii Si l utilisateur ne souhaite pas incliner la plaque il lui est galement possible de d poser les chantillons l extr mit sup rieure ou inf rieure du puits Ainsi l apparition ventuelle de marques sombres n emp cherait pas la lecture des r sultats sur la bandelette Marche a suivre RESUME DES PROCEDURES DE TEST 1 A l aide de pinces extraire avec R actifs Quantit s Dur es pr caution le nombre n cessaire de eee AUUE et 16s Clspose Bandelette de nitrocellulose face num rot e vers le haut dans chaque puits Placer des bandelettes pour les Tampon de lavage 2 ml 5 min contr les positif fort positif faible et Tampon de blotting n gatit 2041 60min 2 Ajouter 2 ml de TAMPON DE LAVAGE 2 mi Tampon de lavage 3x2ml 3x5 min DILUE dans chaque puits Conjugu 2 mi 60 min 3 Incuberles bandelettes pendant au moins 5 minutes Tampon de lavage 3 x2 ml 3 X5 min 5 minutes temp rature ambiante 25 D ml 15 mi 3 C sur un plateau a bascule a une gt ene l emploi 2 us vitesse de 12 16 oscillations par minute Eliminer le tampon par aspiration 4 Ajouter 2 ml de TAMPON DE BLOTTING 2 mli dans chaque puits QUANTIT DE R ACTIF N CESSAIRE SELON LE NOMBRE DE BANDELETTES 5 Ajouter 20 ul de s rum du patient ou 20 ul autant de contr le dans les puits NOMBRE DE BANDELETTES UTILISEES appropri s eue Sels 20 27 se 6 Recouvrir la plaque avec le cou
11. azides doivent tre rinc es abondamment afin d viter la formation d azides m tallis s dans les tuyauteries Ci apr s figurent les nonc s des dangers R correspondants R20 21 22 Nocif par inhalation par contact avec la peau et par ingestion Le substrat contient du 5 bromo 4 chloro 3 indolyl phosphate et du nitrobleu de tetrazolium lequel est class comme nocif Xn par les directives applicables de la Communaut Europ enne CEE Ci apr s figurent les nonc s des dangers R correspondants R20 21 22 Nocif par inhalation par contact avec la peau et par ingestion 10 11 12 Eviter toute contamination microbienne des r actifs lors de l ouverture des flacons ou bouteilles et de l extraction d chantillons de produit Ne pas pipeter a la bouche Manipuler les prelevements a tester les bandelettes de nitrocellulose les contr les positifs forts et Il et les contr les n gatifs comme l exigent les agents potentiellement infectieux Porter une blouse de laboratoire et des gants jetables pendant le d roulement du test Jeter les gants dans des sacs poubelle destin s aux mat riaux pr sentant un risque biologique Se laver abondamment les mains par la suite ll est fortement recommand de proc der ce test dans un local pr vu pour les op rations risque biologique Ne pas placer d aliments ni de boissons proximit des produits En cas d accident ou de contact avec les yeu
12. encore froids et les replacer le plus rapidement possible entre 2 C et 8 C pour conservation Il est recommand de nettoyer la verrerie devant tre utilis e avec les r actifs l aide d acide chlorhydrique 2 M et de la rincer abondamment l eau distill e ou d sionis e avant utilisation Utiliser exclusivement de l eau d sionis e ou distill e de qualit r actif pour diluer les r actifs Tous les r actifs doivent tre convenablement m lang s avant utilisation La solution de conjugu de travail le tampon de lavage dilu et le tampon de blotting doivent tre pr par s juste avant utilisation La solution de conjugu de travail doit tre pr par e l aide d un b cher ou d un r cipient en polypropyl ne Ne pas manipuler les r actifs dans une zone contenant un niveau lev de vapeurs d sinfectantes chimiques par exemple les vapeurs d hypochlorite au cours de leur conservation ou de l incubation et ne pas effectuer le test dans une telle zone La mise en contact inhibe la r action de coloration Ne pas exposer non plus les r actifs une forte luminosit ll est pr f rable d effectuer le test temp rature ambiante 25 C 3 C Veiller ce que les bandelettes de test soient dispos es de fa on ce que les num ros inscrits sur les bandelettes soient dirig s vers le haut Pour le test de Western Blot il est important d utiliser un agitateur a bascule et non u
13. GAG par Western Blot ind termin PHGI Pr sence des p19 p26 p28 p32 p36 p53 mais absence de la p24 et de toute prot ine ENV Toute combinaison de prot ines GAG p19 p26 p28 p32 p36 p53 mais absence de la p24 et de toute prot ine ENV Toute prot ine GAG isol e 019 p24 p26 p28 p32 p36 p53 INDETERMINE Les cas de s ropositivit au HTLV dont le type n a pu tre defini peuvent tre r solus l aide de l algorithme de Wiktor et al en l absence des rgp46 et rgp46 Il L efficacit de cet algorithme qui s appuie sur la r activit relative des p19 et p24 dans le cadre de la diff renciation des deux s rotypes a t montr e 11121314 L interpr tation ind termin e est fond e sur les recommandations de l OMS de 1990 Cependant plusieurs tudes ont indiqu que certains profils ind termin s de bandes comme r pertori s pourraient tre interpr t s comme des r sultats s ron gatifs en particulier chez les donneurs de sang sains Par exemple une tude portant sur 37 724 donneurs de sang sains a confirm que les profils PHGI pouvaient tre interpr t s sans risque comme tant s ron gatifs II convient toutefois d tre prudent lorsque des profils ind termin s sont obtenus chez des consommateurs de drogue par voie IV des donneurs de sang issus de zones end miques ou des patients atteints de pathologies neurologiques 7 xx Linfection double du s rum d
14. Il s levait plus de 98 sur les chantillons confirm s par ACP aux tats Unis Le sensibilit globale de chacun des d terminateurs de type rgp46 l et rgp46 Il est estim e sup rieure a 97 Les rares chantillons HTLV I et HTLV II ne r agissant pas la rgp46 ou la rgp46 Il sont r actifs au minimum la GD21 et une ou plusieurs bandes GAG p19 ou p24 et remplissent ainsi les crit res de s ropositivit au HTLV profil 4 ou d ind termination profil 5 Aucune interpr tation faussement n gative n a t relev e Il peut tre utile de proc der un test compl mentaire de type ACP HTLV I et HTLV II afin de dissocier les chantillons s ropositifs au HTLV pour lesquels le test HTLV BLOT 2 4 de MPD n a pu identifier s il s agissait d une infection par le HTLV ou le HTLV II i e profil 4 CARACTERISTIQUES SPECIFIQUES DE FONCTIONNEMENT Les performances du test HTLV BLOT 2 4 de MPD destin a la d tection des anticorps dirig s contre les virus HTLV I et HTLV II ont t valu es l aide de pr l vements s ropositifs et s ron gatifs au HTLV I II puis compar es deux tests de d pistage comprenant des antig nes HTLV et HTLV II prot ines ou peptides recombinants Sensibilit Des pr l vements positifs aux anticorps HTLV I et ou HTLV II d coulant de tests commerciaux ELISA ont t utilis s afin de d terminer la sensibilit des tests HTLV BLOT 2 4 de MPD
15. T Des prot ines virales HTLV 1 issues de particules virales dissoci es inactiv es et natives ainsi que des prot ines con ues g n tiquement sont int gr es aux bandelettes de nitrocellulose Les bandelettes de nitrocellulose sont mises incuber avec les pr l vements plasmatiques ou s riques dilu s et les contr les Les anticorps sp cifiques au HTLV I Il s ils sont pr sents dans le pr l vement se lient alors aux prot ines de HTLV I Il des bandelettes Les bandelettes sont lav es afin d liminer les substances non li es et les anticorps se liant sp cifiquement aux prot ines HTLV peuvent tre visualis es l aide d une s rie de r actions aux anticorps de ch vre anti IgG humaine conjugu s la phosphatase alcaline et du substrat a base de BCIP NBT Cette m thode est suffisamment sensible pour permettre de d tecter des quantit s marginales d anticorps anti HTLV dans le s rum ou le plasma ELEMENTS DE LA TROUSSE Description du contenu BANDELETTES DE eonTROL F A CONTROL LYO STOCK CONJUGATE NITROCELLULOSE Comporte un lysat viral de HTLV I des antig nes d enveloppe recombinants et une bandelette anti IgG humaine de contr le de d p t s rique Conserver au sec et l abri de la lumi re CONTR LE N GATIF S rum humain normal inactiv non r actif aux anti VHC anti VIH 1 2 anti HTLV I II et AgHBs Contient de l azide de sodium et du thiomersa
16. V BLOT 2 4 de MPD obtenus dans le cadre de ce panel ont t compar s un test LIA 2 Les voici Interpr tation M thode HTLV I HTLV II Ind ter Faux Total min s N G HTLV BLOT 26 6 0 0 32 2 4 de MPD LIA 2 21 6 4 1 32 Le test HTLV BLOT 2 4 de MPD a correctement identifi les chantillons positifs au HTLV tablissant une sensibilit sup rieure 99 9 pour ce panel Dans les m mes conditions le kit comparatif LIA 2 a g n r une sensibilit de 96 9 Sp cificit 200 chantillons provenant de donneurs de sang ont t test s R sultat de sp cificit 92 5 15 chantillons n ont pas pu tre d termin s et aucun r sultat faux positif n a t d tect En ajoutant 150 pr l vements cliniques 50 de grossesse 50 potentiellement infectieux 10 pr l vements ict riques h molytiques triglyc ridiques lip miques prot iniques et 73 r activit crois e potentielle TB Helicobactor pylori HEV dengue HBV HCV HIV 1 HIV 2 la sp cificit globale atteint 89 2 461 517 56 chantillons n ont pas pu tre d termin s et aucun r sultat faux positif n a t d tect 6 chantillons ont t confirm s par un autre test comme tant vrais positifs LIMITES DE GARANTIE Le fabricant ne garantit la trousse de test que pour un usage diagnostique in vitro sous r serve que soient respect es les sp cifications et limites d crites dans le mod
17. adharan MG Robert Guroff M Miyoshi I Blayney D Golde and Gallo RC A new subtype of human T cell leukemia virus HTLV II associated with a T cell variant of hairy cell leukemia Science 1982 218 571 573 gt William AE Fang CT Slamon DJ et al Seroprevalence and epidemiological correlates of HTLV I infection in U S blood donors Science 1988 240 643 646 on Lee H Swanson P Shorty VS Zack JA Roseblatt JD and Chen ISY High rate of HTLV II infection in seropositive IV drug abusers in New Orleans Science 1989 244 471 475 10 11 12 13 14 15 16 17 Lipka JJ Bui K Reyes GR Moeckli R Wiktor SZ Blattner WA Murphy EL Hanson CV Shaw GM Shinsky JJ and Foung SKH Determination of a unique immunodominant epitope of HTLV I Infect Dis 1990 162 353 357 Wiktor SZ Alexandra SS Shaw GM et al Distinguishing between HTLV I and HTLV II by Western Blot Lancet 1990 335 1533 Samuel KP Lautenberger JA Jorcyk CL Josephs S Wong Staal F and Papas TS Diagnostic potential for human malignancies of bacterially produced HTLV I envelope protein Science 1984 226 1094 1097 Hadlock KG Goh CJ Bradshaw PA Perkins S Lo J Habbaz RK Kaplan J and Foung SKH Delineation of an immunodominant and highly HTLV specific epitope within the HTLV I transmembrane glycoprotein Blood 1995 68 4 1392 1399 Varma M Rudolph D Knuchel M Switzer W Hadlock
18. arin B Gosselin S de The G and Gessain A HTLV I II infection in a high viral endemic area of Zaire Central Africa Comparative evaluation of serology PCR and significance of indeterminate Western blot pattern J Med Virol 1994 44 104 109 Fujiyama C Fujiyoshi T Matsumoto D Yashiki S Tamashiro H and Sonoda S Re evaluation of anti HTLV I Western blot assay using HTLV I and HTLV II serum panels Clin amp Diag Virol 1995 4 149 161 Rouet F Meertens L Courouble G Herrmann Storck C Pabingui R Chancerel B Abid A Strobel M Mauclere P and Gessain A Serological epidemiological and molecular differences between human T cell lymphotropic virus type seropositive healthy carriers and persons with HTLV I gag indeterminate Western blot patterns from the Caribbean J Clin Microbiol 2001 39 1247 1253 Cesaire R Bera O Maier H Lezin A Martial J Ouka M Kerob Bauchet B Ould Amar AK and Vernant JC Seroindeterminate patterns and seroconversions to human T lymphotropic virus type positivity in blood donors from Martinique French West Indies Transfusion 1999 39 1145 1149 Soldan SS Graf MD WaziriA Flerlage AN Robinson SM Kawaninshi T Leist TP Lehky TJ Levin MC and Jacobson S HTLV I IIl seroindeterminate western blot reactivity in a cohort of patients with neurological disease J Infect Dis 1999 180 685 694 MP Biomedicals Asia Pacific Pte Ltd 85 Science
19. ctifs fourni permet de r aliser 4 cycles PR CAUTIONS D UTILISATION 1 Utilisation r serv e au diagnostic in vitro Utilisation r serv e aux professionnels 3 Consulter l emballage du produit pour conna tre les composants susceptibles de pr senter un risque biologique INFORMATIONS RELATIVES LA S CURIT ET LA SANT ATTENTION Cette trousse contient des substances d origine humaine Aucune technique de test ne permet de garantir totalement que les produits sanguins humains ne sont pas susceptibles de transmettre une infection MANIPULER LES PR L VEMENTS TESTER LES CONTROLES POSITIFS FORTS I ET II ET LES CONTROLES N GATIFS COMME S IL S AGISSAIT D AGENTS POTENTIELLEMENT INFECTIEUX Il est recommand de manipuler les composants et les sp cimens analyser conform ment aux Bonnes Pratiques de Laboratoire Ils doivent galement tre limin s dans le respect des r gles de s curit en vigueur Les contr les positifs forts I et Il et le contr le n gatif contiennent du thiomersal et de l azide de sodium tandis que le tampon concentr de stockage et le tampon concentr de lavage contiennent du thiomersal et le conjugu de l azide de sodium L azide de sodium peut r agir au contact du cuivre et du plomb pr sents dans certaines tuyauteries et former des sels explosifs Les quantit s utilis es dans cette trousse sont limit es Toutefois lors de leur limination les substances contenant des
20. e d emploi du produit et que celui ci soit utilis conform ment aux pr sentes instructions Le fabricant d cline toute responsabilit explicite ou implicite y compris celle implicite ou explicite li e la qualit marchande l aptitude l emploi ou l ad quation implicite une autre fin particuli re Le fabricant ne peut s engager que sur un remplacement ou un remboursement du produit Le fabricant ne peut tre tenu responsable par l acheteur ou toute autre partie d aucune d t rioration blessure ou perte financi re r sultant de l utilisation du produit PROBL MES TECHNIQUES R CLAMATIONS Dans l ventualit d un probleme technique d une r clamation proc der comme suit 1 Noter le num ro de lot de la trousse et la date de p remption 2 Conserver les trousses et et les r sultats obtenus Contacter le bureau MP Biomedicals le plus proche ou votre distributeur local BIBLIOGRAPHIE Towbin H Staehlin T and Gordan J Electrophoretic transfer of proteins from polyacrylamide gels to nitrocellulose sheets procedure and some applications Proc Natl Acad Sci U S A 1976 76 4350 4354 oo h N Poiesz BJ Ruscetti FW Gazdar AF Bonn PA Minna JD And Gallo RC Detection and Isolation of type C retrovirus particles from fresh and cultured lymphocytes of a patient with cutaneous T cell lymphoma Proc Natl Acad Sci U S A 1980 77 12 7415 7419 o Kalyanaraman VS Sarng
21. espondant au contr le du Laver comme indiqu l tape 8 d p t s rique anti IgG humaine doit tre visible 12 Ajouter 2 ml de SOLUTION DE 2 ml SUBSTRAT dans chaque puits 2 CONTROLE POSITIF FORT La bande de contr le du d p t s rique et toutes les bandes HTLV I II pertinentes fonction des poids mol culaires doivent appara tre Les bandes HTLV I pertinentes devant tre 13 Couvrir la plaque et incuber pendant 15 minutes 15 minutes sur le plateau bascule 14 Aspirer le SUBSTRAT et rincer les 3x 2 ml pr sentes sont les bandes p19 p24 gp46 rgp46 l et GD21 bandelettes au moins trois reprises Remarque la bande gp46 est diffuse l aide d eau de qualit r actif afin d arr ter Ion 3 CONTR LE POSITIF FORT II 15 A l aide de pinces placer d licatement les La bande de contr le du d p t s rique et toutes les bandes bandelettes sur du papier absorbant HTLV I Il pertinentes fonction des poids mol culaires doivent Couvrir avec le papier absorbant et apparaitre Les bandes HTLV pertinentes devant tre s cher Il est galement possible de pr sentes sont les bandes p24 GD21 et rgp46 ll laisser les bandelettes s cher dans les cupules de la plaque 16 Fixer les bandelettes sur une feuille de r sultats papier blanc non absorbant Ne pas appliquer de ruban adh sif au niveau des bandelettes r v l es Examiner les bandelettes voir l interpr tation des r sultats et reporter les r sultats
22. imum les risques de faux n gatifs li s aux erreurs de manipulation Le test HTLV BLOT 2 4 de MP Diagnostics est pr vu pour tre utilis comme test anticorps compl mentaire afin d analyser les chantillons ayant montr une r action positive reproductible aux tests de d pistage initiaux du HTLV I II Les profils s rologiques pouvant tre mis en vidence par le test HTLV BLOT 2 4 de MP Diagnostics sont les suivants s ropositif au HTLV s ropositif au HTLV I s ropositif au HTLV II s ron gatif ou ind termin Remarque modifications en surbrillance DESCRIPTION DES SYMBOLES UTILIS S Il s agit des symboles graphiques utilis s sur les produits et emballages des produits diagnostiques de MP Diagnostics Ce sont les symboles apparaissant le plus fr quemment sur les quipements m dicaux et sur leurs emballages Ils sont d crits plus en d tails dans la notice de normalisation British and European Standard BS EN 980 2003 Utiliser avant Equipement Synonyme m dical a usage z Date de p remption diagnostique in vitro Code du lot de fabrication Num ro du Synonymes catalogue LOT Num ro de lot P Num ro de lot de PE i fabrication A N instructions Limites de d utilisation ou Repr sentant abiat ecje saree cane europ enne Contenance suffisante pour lt n gt tests Consulter les instructions d utilisation 2 Ne pas r utiliser dE PRINCIPES CHIMIQUES ET BIOLOGIQUES DU TES
23. l comme conservateurs CONTR LE POSITIF FORT I S rum humain inactiv fort titrage en anticorps anti HTLV et non r actif aux anti VHC anti VIH 1 2 et AgHBs Contient de l azide de sodium et du thiomersal comme conservateurs CONTR LE POSITIF FORT II S rum humain inactiv fort titrage en anticorps anti HTLV Il et non r actif aux anti VHC anti VIH 1 2 et AgHBs Contient de l azide de sodium et du thiomersal comme conservateurs TAMPON DE STOCKAGE LYOPHILISE reconstituer avec de l eau de qualit r actif Tampon Tris avec prot ines animales et non animales inactiv es par la chaleur Contient du thiomersal comme conservateur TAMPON CONCENTRE DE LAVAGE 20x Tris associ au Tween 20 et contenant du thiomersal comme conservateur CONJUGU Anti 1gG humain de ch vre conjugu de la phosphatase alcaline Quantit fournie Disponible par 18 et 36 bandelettes 1 flacon 80 ul 1 flacon 80 ul 1 flacon 80 ul 1 ou2 bouteilles chacune devant tre reconstitu e a hauteur de 100 ml 1 bouteille 70 ml 1 flacon 120 ul SUBSTRAT 1 bouteille Solution de 5 bromo 4 chloro 100 ml 3 indolyl phosphate BCIP et de nitrobleu de t trazolium NBT POUDRE DE BLOTTING 10 sachets Lait cr m d shydrat 1 g chacun Plaques d incubation de 9 puits chacune 2 ou 4 plaques Mode d emploi 1 exemplaire Pinces 1 pi ce Remarque Le volume de r a
24. n agitateur rotatif Dans le cas contraire le fonctionnement de la trousse serait compromis La vitesse et l angle d inclinaison recommand s pour l agitateur sont respectivement de 12 16 cycles par minute et de 5 10 degr s Avant utilisation v rifier que les quipements automatis s S ils sont utilis s sont valid s Veiller ce que l ajout des chantillons se fasse distance des bandelettes La plaque peut tre inclin e et l chantillon tre ajout l emplacement de collecte du tampon l extr mit inf rieure Ceci permet d viter la formation de points sombres li e au d p t de l chantillon sur la bandelette viter de conserver les r actifs et les chantillons dans un cong lateur auto d givrant INSTRUCTIONS DE CONSERVATION 1 Conserver la trousse HTLV BLOT 2 4 de MPD et ses composants entre 2 et 8 C en dehors des p riodes d utilisation 2 Lorsqu ils sont conserv s entre 2 C et 8 C tous les r actifs et toutes les bandelettes restent stables jusqu la date de p remption indiqu e sur la trousse Ne pas congeler les r actifs A Bandelettes antig nes e viter toute exposition inutile des bandelettes antig nes la lumi re B R actifs Les r actifs doivent tre conserv s dans les flacons ou bouteilles d origine dont le bouchon doit tre en place Verser tous les r actifs encore froids et les replacer entre 2 C et 8 C pour conservation d s que p
25. nd type II in blood donors with isolated gag antibodies to HTLV I II Blood 1992 80 544 550 Khabbaz RF Heneine W Grindon A Hartley TM Shulman G and Kaplan J Indeterminate HTLV serologic results in U S blood donors Are they due o HTLV I or HTLV II J Acquir Immune Defic Syndr 1992 5 400 404 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 Lipka JJ Young KK Kwok SY Reyes GR Sninsky JJ and Foung SK Significance of human T lymphotropic virus type indeterminant serological findings among healthy individuals Vox Sang 1991 61 171 176 Zrein M Louwagie J Boeykens H Govers L Hendickx G Bosman F Sablon E Demarquilly C Boniface M and Saman E Assessment of a new immunoassay for serological confirmation and discrimination of human T cell lymphotropic virus infections Clin Diag Lab Immunol 1998 5 45 49 Witt DJ Kuramoto K Kemper M and Holland P Utility of prospective study of donors deferred as HTLV indeterminate Vox Sang 2000 78 130 131 Hayes C G Burans JP and Oberst RB Antibodies to Human T Lymphotropic virus Type in a population from the Philippines Evidence for cross reactivity with Plasmodiun falciparum The J Infect Dis 1990 163 257 262 Gallo D Diggs JL and Hanson CV Evaluation of two commercial Human T Cell Lymphotropic Virus Western blot Immunoblot kits with problem specimens J Clin Microbiol 1994 32 2046 2049 G
26. ossible Un pr cipit peut se former lorsque le substrat est conserv entre 2 C et 8 C Ceci n a aucune incidence sur le fonctionnement la trousse ATTENTION viter toute exposition inutile du substrat la lumi re COLLECTE TRANSPORT ET CONSERVATION DES PRELEVEMENTS Les chantillons s riques ou plasmatiques recueillis dans l EDTA l h parine ou le citrate de sodium peuvent tre utilis s Avant de les stocker v rifier que les caillots sanguins ou les cellules sanguines ont t s par s par centrifugation Les chantillons doivent tre conserv s entre 2 et 8 C si le test est pratiqu dans les 7 jours suivant le pr l vement et congel s 20 C ou temp rature inf rieure si le test est pratiqu apres plus de 7 jours Il est pr f rable d utiliser des pr l vements clairs non h molys s Les chantillons extr mement lip miques ict riques ou contamin s par des particules doivent tre filtres 0 45 um ou centrifug s avant le test Le s rum des patients peut tre inactiv mais ceci n est pas indispensable au fonctionnement optimal du test Pour l inactiver proc der comme suit 1 Retirer le couvercle du r cipient contenant le s rum 2 Chauffer le s rum 56 C pendant 30 minutes au bain marie 3 Laisser refroidir le s rum avant de refermer le couvercle 4 Le s rum peut tre congel pour tre conserv jusqu l analyse Il est d conseill de soumettre le s r
27. um du patient des cycles r p t s de cong lation d cong lation MAT RIEL SUPPL MENTAIRE N CESSAIRE NON FOURNI AVEC LA TROUSSE e Eau d sionis e ou distill e e Gants jetables e Un plateau a bascule offrant une vitesse de basculement allant de 2 a 16 oscillations par minute et un angle d inclinaison de 5 a 10 degr s afin de permettre un lavage homogene des membranes Pipetteurs et embouts de contenance appropri e Aspirateur avec collecteur a lhypochlorite de sodium Bain marie 56 C facultatif Hypochlorite de sodium pour la d contamination PR PARATION DES R ACTIFS 1 TAMPON DE LAVAGE DILU a Le TAMPON DE LAVAGE DILU doit tre pr par juste avant utilisation b Diluer 1 volume de TAMPON DE LAVAGE CONCENTRE 20X dans 19 volumes d eau de qualit r actif Bien m langer 2 TAMPON DE BLOTTING a Reconstituer chaque bouteille de TAMPON DE STOCKAGE LYOPHILISE l aide de 100 ml d eau de qualit r actif Bien m langer pour dissoudre Le TAMPON DE STOCKAGE RECONSTITU ainsi obtenu reste stable pendant 6 semaines s il est conserv entre 2 et 8 C b Le TAMPON DE BLOTTING doit tre pr par juste avant utilisation Ajouter 1 g de POUDRE DE BLOTTING pour chaque volume de 20 ml de TAMPON DE STOCKAGE RECONSTITUE pr par l tape 2 a ci dessus M langer afin de garantir la dissolution totale de la poudre c M langer nouveau avant de verser 3 SOLUTION DE CONJUGU
28. vre plaque 60 minutes Tampon de lavage 100 240 300 400 fourni et incuber pendant 1 heure 1X ml temp rature ambiante 25 3 C sur le Tampon de blotting 20 60 80 100 120 plateau bascule 1X ml 7 Retirer le couvre plaque avec pr caution Conjugu ul 11 de fa on a viter d clabousser ou de Substrat ml 59 m langer les chantillons Incliner la Poudre de blottin 3 4 5 plaque pour aspirer le m lange des puits g 9 EEE e Changer l embout de laspirateur chaque chantillon afin d viter toute contamination crois e CONTR LE DE QUALIT 8 Laver chaque bandelette 3 reprises avec 3x2ml 2ml TAMPON DE LAVAGE DILUE en laissant tremper pendant 5 minutes sur le plateau a bascule entre chaque lavage Il est recommand de recourir au contr le n gatif et aux deux contr les positifs forts chaque test quel que soit le nombre d chantillons test s Pour que les r sultats obtenus l issue 9 Ajouter 2 ml de SOLUTION DE 2 ml d un test soient valables les conditions suivantes doivent tre CONJUGU DE TRAVAIL dans chaque remplies puits 10 Couvrir la plaque et incuber pendant 60 minutes 1 CONTROLE N GATIF 1 heure temp rature ambiante 25 Aucune des bandes virales HTLV I II sp cifiques rgp46 l 3 C sur le plateau bascule rgp46 Il ou GD21 ne doit appara tre sur la bandelette de 11 Aspirer le CONJUGUE dans les puits 3x2ml contr le n gatif La bande corr
29. x rincer imm diatement grande eau et consulter un m decin Consulter imm diatement un m decin en cas d ingestion de substances contamin es ou de mise en contact avec des plaies ouvertes ou autres l sions cutan es Essuyer imm diatement les claboussures de substances potentiellement infectieuses l aide de papier absorbant et nettoyer la zone contamin e l aide d une solution d hypochlorite de sodium 1 avant de reprendre le travail Lhypochlorite de sodium ne peut tre utilis sur les claboussures contenant de l acide que si la zone a pr alablement t essuy e et s ch e l aide de papier absorbant Le mat riel utilis y compris les gants jetables doit tre limin comme les mat riaux susceptibles de pr senter un risque biologique Ne pas autoclaver les mat riaux contenant de l hypochlorite de sodium Autoclaver tous les mat riaux utilis s et contamin s 121 C 15 p s i pendant 30 minutes avant de les vacuer Il est galement possible de d contaminer les mat riaux dans une solution d hypochlorite de sodium 5 pendant 30 a 60 minutes avant de les liminer dans des sacs poubelle pour produits a risque biologique D contaminer tous les produits chimiques et r actifs utilis s en y ajoutant le volume d hypochlorite de sodium n cessaire pour arriver une concentration finale d au moins 1 Laisser en contact pendant 30 minutes pour garantir le succ s de la d
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