Glose Rose-Gal BCIG BK142
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1. BIOKAR DIAGNOSTICS G lose rose Gal BCIG DOMAINE D UTILISATION La g lose rose Gal BCIG est un milieu s lectif utilis pour le d nombrement simultan et sp cifique des Escherichia coli et des coliformes thermotol rants dans l eau le lait les produits laitiers et les autres produits alimentaires HISTORIQUE La classification des coliformes est traditionnellement fond e sur leur capacit fermenter le lactose avec production d acide La fermentation du lactose fait intervenir successivement deux enzymes d abord une perm ase responsable de la p n tration du sucre dans la bact rie puis une f galactosidase qui le scinde en glucose et galactose entrant dans le processus de fermentation proprement dit D s 1962 Le Minor et Ben Hamida ont d montr les avantages de la recherche de la f galactosidase sur celle de la fermentation du lactose pour le diagnostic bact riologique des ent robact ries Des souches lactose lent ou lactose n gatif sont recens es parmi toutes les esp ces de coliformes Les milieux traditionnels ignorent ces biotypes B galactosidase positive mais perm ase n gative qui pourtant sont de m me signification hygi nique En 1989 Leclerc et Mossel ont donc propos que la pr sence d une f galactosidase chez les coliformes soit utilis comme crit re de leur classification L utilisation d un substrat synth tique chromog ne insensible aux variations dans la perm abilit au lactose permet de2. T l 33 0 3 44 14 33 33 Fax 33 0 3 44 14 33 34
3. articulier des Enterobacteriaceae Annales de l Institut Pasteur Paris 102 267 277 KILIAN M and B LOW P 1976 Rapid diagnosis of Enterobacteriaceae Detection of bacterial glycosidases Acta Pathologica et Microbiologica Scandinavica Sect B 84 245 251 ADAMS M R GRUBB S M HAMER A and CLIFFORD M N 1990 Colorimetric enumeration of Escherichia coli based on glucuronidase activity Applied and Environmental Microbiology 56 2021 2024 MANAFI M KNEIFEL W and BASCOMB S 1991 Fluorogenic and chromogenic substrates used in bacterial diagnostics Microbiological Reviews 55 335 348 COIFFIER O 1992 Les bact ries coliformes p 303 323 dans les groupes microbiens d int r t laitier CEPIL Paris XP CEN ISO TS 11133 2 V 08 104 2 Janvier 2004 Microbiologie des aliments Guide pour la pr paration et la production des milieux de culture Partie 2 Guide g n ral pour les essais de performance des milieux de culture Les mentions port es sur l tiquette sont pr dominantes sur les formules ou les instructions d crites dans ce document Les informations et les sp cifications contenues dans cette fiche technique ont t tablies la date du 2007 07 24 Elles sont susceptibles d tre modifi es tout moment sans pr avis Code document BK142 F 2000 12 5 5 5 BIOKAR Diagnostics Rue des Quarante Mines ZAC de Ther Allonne B P 10245 F60002 Beauvais Cedex France
4. dase n gative Enterobacter cloacae ATCC 13047 PR gt 50 colonies roses Klebsiella pneumoniae ATCC 23357 PR gt 50 colonies roses Enterococcus faecalis ATCC 29212 inhib e Staphylococcus aureus ATCC 25923 inhib e STOCKAGE CONSERVATION Milieu d shydrat 2 25 C La date de p remption est mentionn e sur l tiquette Milieu de base pr par en flacons ou en tubes 1 mois 2 8 C l abri de la lumi re titre indicatif PRESENTATION Code Milieu d shydrat Flacon de 100 g BK142HM Flacon de 500 g BK142HA 4 5 BIOKAR Diagnostics Rue des Quarante Mines ZAC de Ther Allonne B P 10245 F60002 Beauvais Cedex France T l 33 0 3 44 14 33 33 Fax 33 0 3 44 14 33 34 SUPPORT PHOTO R f rence produit BK142HA HM Utilisation D nombrement simultan et sp cifique des Escherichia coli et coliformes thermotol rants Escherichia coli coliformes thermotol rants G lose rose Gal BCIG R f BK142HA Incubation 24 heures 44 C Caract ristiques colonies violettes E coli Mise en vidence simultan e des glucuronidase B galactosidase colonies roses coliformes thermotol rants Mise en vidence uniquement de f galactosidase REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES LE MINOR L et BEN HAMIDA F 1962 Avantages de la recherche de la galactosidase sur celle de la fermentation du lactose en milieu complexe dans le diagnostic bact riologique en p
5. es pr sentent des colonies roses Les colonies d Escherichia coli sont violettes Les autres ent robact ries capables de cultiver 44 C sont blanches 3 5 BIOKAR Diagnostics Rue des Quarante Mines ZAC de Ther Allonne B P 10245 F60002 Beauvais Cedex France T l 33 0 3 44 14 33 33 Fax 33 0 3 44 14 33 34 FORMULE TYPE pouvant tre ajust e de fa on obtenir des performances optimales Pour 1 litre de milieu PONBSPIONE Lie etes er ee ent NEES 8 00 g Extrait autolytique de levure 3 00 g Sels DIlAIr S seen nn E EEEE EET 0 80 g Chlorure de SOdILIM 28 552 fannifrn ne Le Rides 1 00 g Phosphate dibotassiQque 128 ia eee 0 60 g Phosphate monopotassique 2 entretiennent el 0 20 g Sulfate de magn sium sensssoosseeeeseeeresortrrorrtrnrrsttresorrnnnrernereeenne 0 20 g BOIG D 0 05 g Rose gal ctopyranosid 2ss ste han 0 15g Agar agar bact riologique ss esesseneesssrrnteerrtesstrrnsrrnnrerrrereeene 10 00 g pH du milieu pr t l emploi 25 C 7 2 0 2 CONTR LE QUALITE Milieu d shydrat poudre blanc cr me fluide et homog ne Milieu pr par g lose blanch tre R ponse culturale typique apr s 24 heures d incubation 44 C Croissance RIN Escherichia ATCC 25922 PR gt 50 colonies violettes Escherichia coli ATCC 15224 PR gt 50 colonies violettes Escherichia coli ATCC 43895 PR gt 50 colonies roses B glucuroni
6. mettre en vidence cette enzyme par une r action color e Le 6 chloro 3 indolyl B D galactopyranoside rose galactopyranoside est un de ces substrats Hydrolys par la B galactosidase il produit une coloration rose Buehler et al en 1949 furent les premiers relever la pr sence d une B D glucuronidase chez Escherichia coli Depuis des tudes ont montr que 94 97 des Escherichia coli poss dent une f D glucuronidase et qu elle n est que tr s rarement retrouv e chez d autres esp ces on l a d tect e chez un nombre r duit de souches de Citrobacter d Enterobacter de Klebsiella de Salmonella de Shigella et de Yersinia En 1990 Restaino a utilis avec succ s un substrat chromog ne le 5 bromo 4 chloro 3 indolyl B D glucuronate BCIG qui incorpor dans une g lose lui a permis d effectuer en 24 heures la num ration des Escherichia coli pr sents dans les produits carn s PRINCIPES La pr sence simultan e de deux substrats chromog nes permet la d tection des deux activit s enzymatiques sp cifiques la B galactosidase et la B glucuronidase 1 5 BIOKAR Diagnostics Rue des Quarante Mines ZAC de Ther Allonne B P 10245 F60002 Beauvais Cedex France T l 33 0 3 44 14 33 33 Fax 33 0 3 44 14 33 34 Les bact ries appartenant au groupe des coliformes se distinguent par la production d une f galactosidase f gal Cette enzyme r agit avec le rose galactopyranoside po
7. s optimales des r actions enzymatiques Le chlorure de sodium et le sulfate de magn sium facilitent le d veloppement de la coloration NOTA Les souches d Escherichia coli B glucuronidase n gative et aussi le s rotype ent roh morragique 0157 H7 cultivent sur le milieu en pr sentant des colonies roses Les autres bact ries Gram n gatif capables de cultiver 44 0 0 5 C telles que les salmonelles sont blanches PREPARATION Mettre en suspension 24 0 g de milieu d shydrat BK142 dans un litre d eau distill e ou d min ralis e Porter lentement le milieu bullition sous agitation constante et ly maintenir durant le temps n cessaire sa dissolution __R partir en tubes ou en flacons __ St riliser l autoclave 121 C pendant 15 minutes NOTA Une liqu faction partielle de lagar entra nera in vitablement une alt ration significative de la consistance du gel du milieu solidifi apr s st rilisation et refroidissement MODE D EMPLOI __Refroidir et maintenir le milieu 44 47 C Transf rer 1 mL de produit analyser et de ses dilutions d cimales successives dans des bo tes de Petri st riles Couler 12 mL de milieu Homog n iser parfaitement Laisser solidifier sur une surface froide Couler nouveau 4 mL de fa on former une deuxi me couche Laisser solidifier __Incuber 44 0 1 0 C pendant 18 24 heures LECTURE Les coliform
8. ur former un pr cipit de couleur rose selon le m canisme suivant O galactopyranoside OH galactopyranoside H B galactosidase H Dim risation oxydative O H GI N NT H O Pr cipit rose CI Toutes les souches d Escherichia coli poss dent une f galactosidase et 94 97 d entre elles poss dent galement une f glucuronidase GUD Cette enzyme clive le BCIG pour produire un compos de couleur bleue selon la r action suivante CI Br CI O glucuronate Br OH i B glucuronidase 4 glucuronate H N H Dim risation oxydative Br S O H N N H O Br CI Pr cipit bleu de dichloro dibromo indigo L action simultan e des deux enzymes fait appara tre les colonies d Escherichia coli en violet Ph notype typique Coloration des colonies Escherichia coli GUD B gal violette Coliformes non Escherichia coli GUD B gal rose Autres bact ries Gram n gatif GUD B gal blanche 2 5 BIOKAR Diagnostics Rue des Quarante Mines ZAC de Ther Allonne B P 10245 F60002 Beauvais Cedex France T l 33 0 3 44 14 33 33 Fax 33 0 3 44 14 33 34 La polypeptone favorise l excellente croissance des coliformes extrait autolytique de levure est une source de vitamines du groupe B Les sels biliaires inhibent la croissance des bact ries Gram positif Les phosphates agissent comme substances tampon afin de se placer dans les condition
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