Gélose au Dichloran Rose Bengale Chloramphénicol
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1. Bacteriology 36 723 727 KORBURGER J A amp RODGERS M F 1978 Single or multiple antibiotic amended media to enumerate yeasts and moulds Journal of Food Protection 41 367 369 KING A D HOCKING A D amp PITT J I 1979 Dichloran Rose Bengal medium for enumeration and isolation of molds from foods Applied and Environmental Microbiology 37 959 964 BEUCHAT L R 1992 Media for detecting and enumerating yeasts and moulds International Journal of Food Microbiology 17 145 158 XP CEN ISO TS 11133 2 V 08 104 2 Janvier 2004 Microbiologie des aliments Guide pour la pr paration et la production des milieux de culture Partie 2 Guide g n ral pour les essais de performance des milieux de culture NF ISO 21527 1 V 08 040 1 Novembre 2008 2 tirage Microbiologie des aliments M thode horizontale pour le d nombrement des levures et des moisissures Partie 1 Technique par comptage des colonies dans les produits activit d eau sup rieure 0 95 Les mentions port es sur l tiquette sont pr dominantes sur les formules ou les instructions d crites dans ce document Les informations et les sp cifications contenues dans cette fiche technique ont t tablies la date du 2010 01 12 Elles sont susceptibles d tre modifi es tout moment sans pr avis Code document BK198 F 2009 01 2 5 5 Biokar Diagnostics Rue des Quarante Mines ZAC de Ther Allonne B P 10245 F600022. milieu Parall lement Koburger et Rodgers 1978 montrent l efficacit de la combinaison du chloramph nicol et de la chlort tracycline pour l inhibition de la flore bact rienne Enfin en 1992 sur la base de travaux comparatifs sur les m thodes de recherche et de d nombrement Beuchat pr conise que l ensemencement en surface doit tre privil gi par rapport l ensemencement en profondeur pour le d nombrement des levures et des moisissures PRINCIPES La peptone et le glucose assurent la croissance des levures et des moisissures Le dichloran et le rose bengale ralentissent le d veloppement des bact ries et pr viennent l envahissement des bo tes de Petri par les moisissures en limitant leur prolif ration Le rose bengale assimil par les levures facilite leur d nombrement en colorant les colonies en rose La pr sence de chloramph nicol antibiotique thermostable et de chlort tracycline permet de renforcer la s lectivit du milieu vis vis de la plupart des bact ries contaminantes Le zinc et le cuivre pr sents sous forme de sulfates am liorent la production de pigments par les moisissures Le tergitol limite la prolif ration des Mucoraceae 1 5 Biokar Diagnostics Rue des Quarante Mines ZAC de Ther Allonne B P 10245 F60002 Beauvais Cedex France T l 33 0 3 44 14 33 33 Fax 33 0 3 44 14 33 34 www biokar diagnostics fr PREPARATION Mettre en suspension 30 g
3. 1 mL du produit analyser et de ses dilutions d cimales successives dans des bo tes de Petri st riles Couler 10 15 mL de milieu Homog n iser parfaitement Laisser solidifier sur une surface froide __Incuber 25 1 C pendant 2 et 5 jours l obscurit NOTE 3 Dans le cas des d nombrements r alis s par inclusion l quivalence des r sultats doit tre valid e par rapport l ensemencement en surface NOTE 4 Eviter l exposition du milieu la lumi re car les produits de d composition cytotoxiques peuvent causer la sous valuation de la mycoflore dans les chantillons 2 5 Biokar Diagnostics Rue des Quarante Mines ZAC de Ther Allonne B P 10245 F60002 Beauvais Cedex France T l 33 0 3 44 14 33 33 Fax 33 0 3 44 14 33 34 www biokar diagnostics fr LECTURE Lire les bo tes entre deux jours et cinq jours d incubation S lectionner les bo tes contenant moins de 150 germes et compter ces germes Si l on observe un envahissement rapide des bo tes retenir les comptages obtenus apr s deux jours puis de nouveau apr s cinq jours d incubation Si n cessaire d nombrer s par ment les levures et les moisissures Les colonies de levures apparaissent en rose en raison de l assimilation du rose bengale Les colonies de levures et de bact ries non inhib es pouvant tre confondues il peut tre n cessaire de r aliser un test de confirmation la lo
4. Beauvais Cedex France T l 33 0 3 44 14 33 33 Fax 33 0 3 44 14 33 34 www biokar diagnostics fr
5. G lose au Dichloran Rose Bengale Chloramph nicol DRBC DOMAINE D UTILISATION La g lose au Dichloran Rose Bengale Chloramph nicol DRBC est recommand e pour le d nombrement des levures et des moisissures viables dans les produits destin s l alimentation humaine et animale susceptibles d en contenir dont l activit en eau est sup rieure 0 95 conform ment la m thode pr conis e dans la norme NF ISO 21527 1 d cembre 2008 HISTORIQUE Les premiers milieux s lectifs destin s au d nombrement des levures et des moisissures pr sentaient un pH acide afin de limiter la croissance des bact ries En 1962 les travaux r alis s par Mossel sur la recherche des levures et des moisissures dans les aliments d montrent la sup riorit des milieux pH neutre contenant un agent antibact rien sur ceux dont le syst me s lectif est bas sur un pH acide En 1973 Jarvis d crit la g lose rose bengale chlort tracycline dans laquelle la combinaison du pigment et de l antibiotique diminue la croissance des bact ries et limite la sporulation des moisissures Suite ces travaux en 1979 King et ses collaborateurs montrent que l introduction du dichloran et la r duction de la concentration en rose bengale permettent la r cup ration d un plus grand nombre d esp ces de moisissures Les r sultats obtenus par ces m mes auteurs montrent aussi que la limitation de la sporulation des moisissures tait meilleure pH 5 6 sur ce
6. TION Milieu d shydrat 2 8 C La date de p remption est mentionn e sur l tiquette Milieu pr par en flacons 3 mois 2 8C l abri de la lumi re titre indicatif Milieu pr par en bo tes 7 jours 2 8C l abri de la lumi re titre indicatif Milieu pr t liqu fier Stocker entre 2 et 8 C l abri de la lumi re La date de p remption est mentionn e sur l tiquette Milieu pr coul en bo tes de Petri Stocker entre 2 et 8 C l abri de la lumi re La date de p remption est mentionn e sur l tiquette PRESENTATION Code Milieu d shydrat Flacon de 500 g BK198HA Milieux pr ts liqu fier Pack de 10 flacons de 100mL BM14908 Pack de 10 flacons de 200 mL BM14208 Milieu pr coul en bo tes de Petri 90 mm Coffret de 20 bo tes BM14308 4 5 Biokar Diagnostics Rue des Quarante Mines ZAC de Ther Allonne B P 10245 F60002 Beauvais Cedex France T l 33 0 3 44 14 33 33 Fax 33 0 3 44 14 33 34 www biokar diagnostics fr REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES MOSSEL D A A VISSER M amp MENGERINK W J H 1962 comparison of media for the enumeration of moulds and yeasts in foods and beverages Laboratory Practrice 11 109 112 JARVIS B 1973 Comparison of an improved rose bengal chlortetracycline agar with other media for the selective isolation and enumeration of moulds and yeasts in food Journal of Applied
7. de milieu d shydrat BK198 dans 1 litre d eau distill e ou d min ralis e Porter lentement le milieu bullition sous agitation constante et ly maintenir durant le temps n cessaire sa dissolution R partir raison de 100 mL par flacon __ St riliser l autoclave 121 C pendant 15 minutes Si le conditionnement pr t liqu fier est utilis BM149 ou BM142 faire fondre la g lose pendant le minimum de temps n cessaire sa reliqu faction totale Refroidir et maintenir 44 47 C NOTE 1 Une liqu faction partielle de lagar entra nera in vitablement une alt ration significative de la consistance du gel du milieu solidifi apr s st rilisation et refroidissement MODE D EMPLOI D nombrement par ensemencement en surface Couler en bo tes de Petri st riles Laisser solidifier sur une surface froide Faire s cher les bo tes l tuve couvercle entrouvert Transf rer 0 1 mL de l chantillon analyser ou de ses dilutions d cimales la surface des bo tes pr par es ou pr coul es BM143 __Etaler l inoculum en surface l aide d un taleur st rile __Incuber 25 1 C pendant 2 5 jours l obscurit NOTE 2 Ne pas retourner les bo tes pendant l incubation et entre les lectures afin d viter le r ensemencement des spores de moisissures pendant les manipulations D nombrement par ensemencement par inclusion Transf rer
8. upe binoculaire ou au microscope FORMULE TYPE pouvant tre ajust e de fa on obtenir des performances optimales Pour 1 litre de milieu SON BSD a ed 5 0 g GUCIS Eks A a R 10 0 g Phosphate monopotassique 1 09 MgSO4 H 0 EU PO EEEE AEren 0 5 g DiChIOraA N sisiane anaa aa a aa NENT aAa 2 0 mg Rose Bengale 25 0 mg Chloramph nicol sisi dressent 50 0 mg Chlorhydrate de chlort tracycline 50 0 mg VA 0 ES On OR 10 0 mg CuSO 5H20 SR 5 0 mg ET ErOtOl ee a E 1 mL Agar agar bact riologique 12 49 pH du milieu pr t l emploi 25 C 5 6 0 2 CONTR LE QUALITE Milieu d shydrat poudre cr me ros tre fluide et homog ne Milieu pr par g lose rose R ponse culturale f Croissance Rapport de productivit Pa Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763 PR gt 50 Candida albicans typique apr s 5 jours d incubation 25 C ATCC 10231 Pr 2 50 Aspergillus brasiliensis DSM 1988 PR gt 50 Escherichia coli Bacillus subtilis Biokar Diagnostics ATCC 25922 inhib e score 0 ATCC 6633 inhib e score 0 3 5 Rue des Quarante Mines ZAC de Ther Allonne B P 10245 F60002 Beauvais Cedex France T l 33 0 3 44 14 33 33 Fax 33 0 3 44 14 33 34 www biokar diagnostics fr STOCKAGE CONSERVA
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