Monolisa™ HBs Ag ULTRA 1 plaque - 96 tests 72346 5 - Bio-Rad
Contents
1. Ha G 2 GB FR ES IT DE PT SE DK GR PL LT HU EE SK c2 NO RO BG Storage temperature limitation Limites de temp ratures de stockage Temperatura l mite Limiti di temperatura di conservazione Lagertemperatur Limites de temperatura de armazenamento Temperaturbegr nsning Temperaturbegraensning oro kevams Temperatura przechowywania Saugojimo temperat riniai apribojimai T rol si h m rs kleti hat rok Piirangud s ilitustemperatuurile Skladovacia teplota od do Teplotn rozmez od do Oppbevaringstemperatur Limitele de temperatur la stocare GB Consult Instruction for use X FR Consulter le mode d emploi ES Consulte las instrucciones de uso IT Consultare le istruzioni per uso DE Siehe Gebrauchsanweisung PT Consulte o folheto informativo SE bruksanvisningen DK Seinstruktion for brug GR SwpBovrevierte ris onyues Xpnons PL Sprawd instrukcj LT Ie kokite informacijos vartojimo instrukcijoje HU Olvassa el a haszn lati utas t st EE Kasutamisel vaata instruktsiooni SK Katal gov slo CZ Viz n vod k pou it NO Se bruksanvisninger RO Consultati pro2. temp rature ambiante 18 30 C Lors de cette incubation ne pas utiliser de film adh sif N B La distribution de la solution de r v lation qui est color e en rose peut tre contr l e visuellement ce stade de manipulation Il y a une diff rence de coloration significative entre une cupule vide et une cupule contenant la solution de r v lation ros e se reporter au paragraphe 14 pour la v rification automatique V RIFICATION SPECTROPHOTOM TRIQUE DU D P T DES CHANTILLONS ET DES R ACTIFS Ajouter 100 ul de la solution d arr t R10 en adoptant la m me s quence et le m me rythme de distribution que pour la solution de r v lation Homog n iser le m lange r actionnel N B La distribution de la solution d arr t qui est incolore peut tre contr l e visuellement ce stade de la manipulation La coloration du substrat ros e pour les chantillons n gatifs ou bleu pour les chantillons positifs dispara t des cupules qui deviennent incolores pour les chantillons n gatifs ou jaunes pour les chantillons positifs apr s addition de la solution d arr t 11 Essuyer soigneusement le dessous des plaques Attendre au moins 4 minutes la distribution de la solution d arr t avant la lecture et dans les 30 minutes qui suivent l arr t de la r action lire la densit optique 450 620 nm a l aide d un lecteur de plaques 12 S assurer avant la transcription des r sultats de la concord
3. R6 R7 Taper doucement le flacon de conjugu lyophilis R7 sur la paillasse pour d tacher toute substance pouvant adh rer au bouchon de caoutchouc Ouvrir le flacon de conjugu lyophilis R7 et y transvaser le contenu d un flacon de diluant pour conjugu R6 Reboucher et laisser reposer 10 minutes en homog n isant de temps en temps pour faciliter la dissolution Solution de r v lation enzymatique R8 R9 Diluer le r actif R9 dans le r actif R8 au 1 11 me exemple 1 ml de r actif R9 dans 10 ml de r actif R8 sachant que 10 ml sont n cessaires et suffisants pour traiter 12 barrettes Cette solution reste stable 6 heures l obscurit Homog n iser 9 CONSERVATION VALIDIT Conserver la trousse 2 8 C avant utilisation Chaque l ment de la trousse Monolisa HBs Ag ULTRA conserv 2 8 C peut tre utilis apr s une premi re ouverture jusqu la date de p remption indiqu e sur le coffret sauf indication sp cifique R1 Apr s ouverture du sachet sous vide les barrettes conserv es 2 8 dans leur sachet d origine referm avec soin sont stables pendant 1 mois R2 La solution de lavage dilu e peut tre conserv e 2 30 C pendant 2 semaines La solution de lavage concentr e R2 peut tre conserv e 2 30 R6 R7 La solution de conjugu stock e 2 8 est utilisable pendant 1 mois et est utilisable temp rature ambiante 18 30 pendant 8 heures R8
4. 1 Distribution des chantillons et des s rums de contr le dans les cupules de la microplaque Cette distribution peut tre contr l e visuellement en effet il y a une nette diff rence de coloration entre une cupule vide et une cupule contenant un chantillon Elle peut tre aussi contr l e par lecture spectro photom trique 490 620 700 nm optionnel 2 Distribution du conjugu Cette distribution peut tre galement contr l e visuellement en effet apr s rajout du conjugu initialement rouge la cupule se colore en rouge Elle peut tre contr l e par lecture spectrophotom trique 490 620 700 nm optionnel la distribution des chantillons peut aussi tre contr l e ce stade de la manipulation par lecture spectrophotom trique 490 620 700 nm 3 Apr s incubation pendant une heure et demi 37 le conjugu non li est limin par lavage 4 Distribution de la solution de r v lation de l activit enzymatique Cette distribution peut tre galement contr l e visuellement il y a une nette diff rence de coloration entre une cupule vide et une cupule contenant le substrat de couleur rose Elle peut tre contr l e par lecture spectrophotom trique 490 optionnel 5 Apr s 30 minutes d incubation en pr sence du substrat l obscurit et t mp rature ambiante 18 30 la pr sence du conjugu est r v l e par un changement de couleur 6 Distribution de la solution d arr t C
5. LEE H DROUET J MULLER A and CANAVAGGIO M 1983 Monoclonal antibodies against HBs antigen Bulletin Biotest vol 4 353 358 WANDS J P CARLSON R L SCHOEMAKER H ISSELBACHER K J and ZURAWSKI 1981 Immunodiagnosis of hepatitis B with high affinity IgM monoclonal antibodies Proc Nat Acad Sci 78 2 1214 1218 M CANAVAGGIO A M COUROUCE M PERE LEE Sp cificit d anticorps monoclonaux dirig s contre le d terminant a de l Ag HBs 1985 Nouvelle Revue Fran aise d Immunoh matologie Springer International 27 2 134 J DROUET G CHARRIER A M COUROUCE M PERE J F DELAGNEAU J ROISIN 1985 Nouveaux r actifs de d pistage de l Ag HBs et de dosage de l anticorps anti HBs Nouvelle Revue Fran aise d Immunoh matologie Springer International 27 2 134 11 CE GB CE marking European directive 98 79 CE on in vitro diagnostic medical devices JA FR Marquage CE Directive europ enne 98 79 CE relative aux dispositifs m dicaux de diagnostic in vitro ES Marcado CE Directiva europea 98 79 CE sobre productos sanitarios para diagn stico in vitro IT Marchiatura CE Direttiva europea 98 79 CE relativa ai dispositivi medico diagnostici in vitro DE CE Konformit tskennzeichnung Europ ische Richtlinie 98 79 EG ber n vitro Diagnostika PT Marca o CE Directiva europeia 98 79 CE relativa aos dispositivos m dicos de diagn stico in vitro SE CE m rkning E
6. rifier la pr sence de la solution de r v lation ros e par lecture automatique 490 une cupule contenant la solution de r v lation doit avoir une densit optique sup rieure 0 100 une DO plus faible indique une mauvaise distribution de la solution de r v lation 15 PERFORMANCES Les performances de Monolisa HBs Ag ULTRA ont t d termin es partir de tests r alis s sur des chantillons de donneurs de sang non s lectionn s des chantillons de patients hospitaliers atteints d H patite B aigue d H patite B chronique des chantillons de patients pr sentant diverses pathologies sans relation avec le virus de l H patite B des chantillons commerciaux ainsi que des panels de s roconversion Le seuil de sensibilit a t valu partir du panel fran ais de la SFTS et de l talon de l OMS Sp cificit La sp cificit chez 9894 donneurs de sang non s lectionn s provenant de 3 sites diff rents a t estim e a 99 94 9887 9893 Une r action r p t e d un chantillon a t confirm e positive pour l Ag HBs L tude de sp cificit clinique a t effectu e dans un laboratoire hospitalier Centre d H pathologie Sur 200 chantillons hospitaliers test s 2 chantillons ont t trouv s r actifs r p tables un a t trouv douteux en premi re intention ratio 20 97 positif 1 87 apr s retest le 2 me avec des ratios de 2 29 et 1 99 289 patients pr sentant des pathologie
7. R9 Apr s reconstitution la solution de r v lation est utilisable 6 heures l obscurit temp rature ambiante 18 30 10 CHANTILLONS Pr lever un chantillon de sang selon les pratiques en usage Les tests sont effectu s sur des chantillons non dilu s de s rum ou de plasma collect s avec des anticoagulants comme l EDTA l h parine le citrate l ACD Extraire le s rum ou le plasma du caillot ou des globules rouges d s que possible pour viter toute h molyse Une h molyse tr s prononc e peut affecter les performances du test Les chantillons pr sentant des agr gats doivent tre clarifi s par centrifugation avant le test Les particules ou agr gats de fibrine en suspension peuvent donner des r sultats faussement positifs Les chantillons seront conserv s a 2 8 C si le d pistage est effectu dans les 7 jours ou peuvent tre conserv s congel s a 20 C pour plusieurs mois Eviter les cong lations d cong lations r p t es Les chantillons ayant t congel s et d congel s plus de 3 fois ne doivent pas tre utilis s Si les chantillons doivent voyager les emballer selon la r glementation en usage pour le transport des agents tiologiques et les transporter pr f rablement congel s NE PAS UTILISER DE SERUMS CONTAMINES HYPERLIPEMIQUES OU HYPERHEMOLYSES REMARQUE Aucune interf rence n a t mise en vidence sur des chantillons contenant jusqu 90 g l d albumine 100 mg
8. de solution de lavage R2 identifi 20X en vert sur l tiquette de tampon substrat R8 identifi buf en bleu de chromog ne R9 identifi 11X en violet et de solution d arr t R10 identifi 1N en rouge que ceux fournis dans la trousse sous r serve d utiliser un seul et m me lot de ceux ci au cours d un m me essai Ces r actifs peuvent tre utilis s avec d autres produits de Bio Rad De plus la solution de lavage R2 identifi 20X en vert sur l tiquette peut tre m lang e avec l une des deux autres solutions de lavage inclues dans les diff rents kits r actifs Bio Rad R2 identifi 10X en bleu ou 10X en orange sur l tiquette correctement reconstitu es condition qu un seul m lange soit utilis pour une m me manipulation donn e Contacter nos services techniques pour obtenir des informations d taill es Avant utilisation attendre 30 minutes que les r actifs s quilibrent la temp rature ambiante 18 30 et une heure pour la solution de lavage dilu e R2 Reconstituer soigneusement les r actifs en vitant toute contamination Ne pas r aliser le test en pr sence de vapeurs r actives acides alcalines ald hydes ou de poussi res qui pourraient alt rer l activit enzymatique du conjugu Utiliser une verrerie parfaitement lav e et rinc e l eau distill e ou de pr f rence du mat riel usage unique Ne pas laisser la microplaque s cher entre la fin du la
9. diagn stico in vitro SE n vitro diagnostik DK n vitro diagnose GR Tua in vitro 8voyvoo ue xpnon PL Do stosowania in vitro LT in vitro diagnostikai HU Csak in vitro diagnosztikai alkalmaz sra EE n vitro diagnostiliseks kasutamiseks SK Na diagnostiku in vitro CZ Pro diagnostiku in vitro NO Til in vitro diagnostikk RO Pentru diagnostic in vitro 86 GB Catalogue number FR R f rence catalogue ES Numero de catalogo IT Numero di catalogo DE Bestellnummer PT Numero de cat logo SE Katalognummer DK Katalognummer GR Ap pos PL Numer katalogu LT Katalogo numeris HU Cikksz m EE Katalooginumber SK Katal gov slo CZ Katalogov slo NO Katalognummer RO Num r de catalog BG GB Manufacturer FR Fabricant ES Fabricante IT Produttore DE Hersteller PT Fabricante SE Tillverkad av DK Fremstillet af GR PL Producent EC REP LT Gamintojas HU Gy rt EE Tootja SK Vyrobca CZ V robce NO Produsent RO Produc tor BG GB Authorised Representative FR Repr sentant agr ES Representante autorizado IT Distributore autorizzato DE Bevollmachtigte
10. l de bilirubine ainsi que sur des chantillons lip miques contenant jusqu 36 g l de triol ine et sur des chantillons h molys s contenant jusqu 1 g l d h moglobine 11 MODE OP RATOIRE Suivre strictement le protocole propos Utiliser les contr les positif R4 et n gatif R3 pour chaque s rie de d terminations pour valider les r sultats du test Suivre les bonnes pratiques de laboratoire 1 Etablir soigneusement le plan de distribution et d identification des chantillons 2 Pr parer la solution de lavage R2 cf chapitre 8 3 4 Sortir de l emballage protecteur le cadre support et le nombre de barrettes n cessaires R1 Remettre les Pr parer la solution de conjugu R6 R7 cf chapitre 8 barrettes non utilis es dans l emballage et refermer ce dernier 5 Distribuer dans les cupules dans l ordre suivant plan de plaque conseill o Cupules A1 B1 C1 et D1 100 ul de contr le n gatif R3 e Cupule 51 100 yl de contr le positif R4 Cupule F1 100 ul du premier chantillon tester si cette cupule n est pas utilis e comme cupule t moin pour la validation du d p t des chantillons et du conjugu optionnel Cupules G1 H1 etc 100 pl d chantillons tester En fonction du syst me utilis il est possible de modifier la position ou l ordre de distribution des t moins NB La distribution des chantillons peut tre contr l e ce stade de la manipulation en eff
11. p t Conservateurs Ciprofloxacine 10 pg ml ProClin 300 0 1 96 R7 CONJUGU 1 flacon 2 flacons Anticorps monoclonaux anti HBs de souris et anticorps qsp 8 ml qsp 2 x 18 ml polyclonaux anti HBs de ch vre coupl s la peroxydase Lyophilis R8 TAMPON SUBSTRAT DE LA PEROXYDASE 1 flacon 2 flacons Solution d acide citrique et d ac tate 60 ml 2 x 60 de sodium pH 4 0 contenant 0 015 d H O et 4 de dim thylsulfoxyde DMSO R9 CHROMOGENE color en rose 1 flacon 2 flacons solution contenant du t tram thyl benzidine TMB 5 ml 2x5ml R10 SOLUTION D ARR T 1 flacon 3 flacons Solution d acide sulfurique 1 N 28 ml 3 x 28 5 PRECAUTIONS La qualit des r sultats d pend du respect des bonnes pratiques de laboratoire suivantes e Le nom du test ainsi qu un num ro d identification sp cifique du test sont mentionn s sur le cadre de chaque microplaque Ce num ro d identification sp cifique figure galement sur chaque barrette Monolisa HBs Ag ULTRA Num ro sp cifique d identification 51 Cette identification doit tre v rifi e avant chaque utilisation Toute barrette dont le num ro de test est absent ou diff rent de celui correspondant au test r alis ne doit pas tre utilis e Ne pas utiliser des r actifs dont la validit est expir e Ne pas m langer des r actifs de lots diff rents au cours d un m me essai REMARQUE Il est possible d utiliser d autres lots
12. pr sence des chantillons dans les cupules peut tre v rifi e avant la distribution du conjugu par lecture spectrophotom trique 490 620 700 nm une cupule contenant un chantillon pr sente une DO comprise entre 0 050 et 0 900 REMARQUE il y a une nette diff rence de coloration entre une cupule vide transparente et une cupule contenant un chantillon 2 V rification du d p t du conjugu Lorsque la pr sence des chantillons a t v rifi e spectrophotom triquement comme d crit pr c demment l ajout de conjugu peut alors tre contr l par une lecture spectrophotom trique 490 620 700 nm une cupule contenant du conjugu pr sente alors une DO sup rieure 1 100 REMARQUE Les cupules contenant les chantillons sont jaun tres et deviennent rouges apr s ajout du conjugu color 3 V rification du d p t des chantillons et du conjugu simultan ment technique uniquement spectro photom trique Quand la pr sence des chantillons n a pas t v rifi e par lecture automatique comme d crit ci dessus la pr sence simultan e des chantillons et du conjugu dans les cupules peut tre v rifi e par lecture automatique 490 620 700 nm condition d avoir une cupule avec le conjug seul Le delta de leurs DO doit tre sup rieure 0 35 comme ci apr s DO chantillon conjugu DO conjugu seul gt 0 35 V rification du d p t de la solution de r v lation est possible de v
13. ERENCES BIBLIOGRAPHIQUES 1 10 COUROUCE A M LEE H DROUET J CANAVAGGIO M and SOULIER J P 1983 Monoclonal antibodies to HBs Ag a study of their specificities for eight different HBs subtypes Developments in Biological Standardization 54 527 534 COUROUCE A M PLANCON A and SOULIER J P 1983 Distribution of HBs Ag subtypes in the world Vox Sang 44 197 211 DAVID G S PRESENT W MARTINIS J WANG R BATHOLOMEW R DESMOND W and SEVIER E D 1981 Monoclonal antibodies in the detection of hepatitis infection Medical Laboratory Sciences 38 341 348 DROUET J COUROUCE A M KALIL J LEE H and FELLOUS M 1981 Monoclonal antibodies to HBs Ag produced by murine hybridomas In viral hepatitis edited by Szmuness W Alter H J Maynard J E The Franklin Institute Press 706 FIELDS H A DAVID C L BRADLEY D W and MAYNARD J E 1983 Experimental conditions affecting the sensitivity of enzyme linked immunosorbent assay ELISA for detection of hepatitis B surface antigen HBs Ag Bulletin of the World Health Organization 61 1 135 142 LEE H H COUROUCE A M PERE M CANAVAGGIO M DROUET J and SOULIER J P 1983 Monoclonal antibodies to HBs Ag a study of their specificities against HBs Ag subtypes and their utilization in ELISA International Association of Biological Standardization International Symposium on Monoclonal Antibodies Paris France SOULIER J P COUROUCE A M
14. Monolisa HBs Ag ULTRA 1 plaque 96 tests 72346 5 plaques 480 tests 72348 TROUSSE POUR LA D TECTION DE L ANTIG NE DE SURFACE DU VIRUS DE L H PATITE B PAR TECHNIQUE IMMUNO ENZYMATIQUE DANS LE SERUM OU LE PLASMA HUMAIN Contr le de qualit du fabriquant Tous les produits fabriqu s et commercialis s par la soci t Bio Rad sont plac s sous un syst me d assurance qualit de la r ception des mati res premi res jusqu la commercialisation des produits finis Chaque lot du produit fini fait l objet d un contr le de qualit et n est commercialis que s il est conforme aux crit res d acceptation La documentation relative la production et au contr le de chaque lot est conserv e par notre soci t TABLE DES MATI RES 1 BUT DU DOSAGE 2 INT R T CLINIQUE 3 PRINCIPE DU TEST Monolisa HBs Ag ULTRA 4 COMPOSITION DE LA TROUSSE Monolisa HBs Ag ULTRA 5 PR CAUTIONS 6 CONSIGNES D HYGI NE ET DE S CURIT 7 MAT RIEL N CESSAIRE MAIS NON FOURNI 8 PR PARATION DES R ACTIFS 9 CONSERVATION VALIDIT 10 CHANTILLONS 11 MODE OP RATOIRE 12 ADAPTATION 13 CALCUL ET INTERPR TATION DES R SULTATS 14 V RIFICATION SPECTROPHOTOM TRIQUE DU D P T DES CHANTILLONS ET DU CONJUGU 15 PERFORMANCES 16 LIMITES DU TEST 17 R F RENCES BIBLIOGRAPHIQUES 1 BUT DU DOSAGE Monolisa HBs Ag ULTRA est une technique immuno enzymatique de type sandwich en 1 temps pour la d t
15. ance entre la lecture et le plan de distribution et d identification des plaques et des chantillons 12 ADAPTATION LAVAGE est indispensable de respecter les proc dures de lavage afin d obtenir les performances maximales du test Pour certains laveurs il peut tre n cessaire d optimiser la proc dure de lavage augmentation du nombre de cycle de lavage et ou du volume de tampon de lavage pour chaque cycle temps de trempage pour obtenir un niveau acceptable de bruits de fond DO pour les chantillons n gatifs Nous consulter pour les proc dures sp cifiques et les adaptations 13 CALCUL ET INTERPRETATION DES RESULTATS 1 Calcul de la densit optique moyenne du contr le n gatif DO Exemple Contr le n gative R3 DO 1 0 030 2 0 031 3 0 032 4 0 027 Total DO R3 0 120 Total DO R3 4 0 030 moyenne DO R3 2 Calcul de la valeur seuil Pour chaque plaque la valeur seuil est gale DO R3 0 050 Exemple DO R3 0 030 Valeur seuil VS 0 030 0 050 0 080 3 Conditions de validation du test Toutes les valeurs du contr le n gatif doivent tre inf rieures ou gales a 0 080 unit de densit optique La valeur du contr le positif DO R4 doit tre sup rieure ou gale 1 000 Si la valeur du contr le n gatif ne respecte pas la norme ou est sup rieure de plus de 40 par rapport la moyenne des contr les n gatifs DO R3 liminer la et refaire le calcul de la moyenne de contr le n
16. de e Pipettes automatiques ou semi automatiques r glables ou fixes pouvant distribuer 50 ul 100 pl 1000 pl et 10 ml Eprouvettes gradu es de 100 ml et 1000 ml Conteneur de d chets contamin s e ou incubateur sec pouvant tre thermostat 37 C x 1 e Syst me de lavage automatique semi automatique ou manuel pour microplaque Appareil de lecture pour microplaques quip s de filtres 450 490 et 620 700 nm Papier absorbant Nous consulter pour une information pr cise concernant les appareils valid s par nos services techniques 8 PR PARATION DES R ACTIFS Avant utilisation des r actifs de la trousse Monolisa HBs Ag ULTRA les laisser s quilibrer temp rature ambiante 18 30 C 1 R actifs pr ts l emploi R actif 1 R1 Microplaque Chaque support cadre contenant 12 barrettes est conditionn en sachet aluminium scell Couper le sachet l aide de ciseaux ou scalpel 0 5 1 cm au dessus de la soudure Ouvrir le sachet et sortir le cadre Replacer dans le sachet les barrettes inutilis es Refermer le sachet soigneusement et le replacer 2 8 R actif 3 R3 Contr le N gatif R actif 4 R4 Contr le Positif R actif 10 R10 Solution d arr t 2 R actifs reconstituer Solution de lavage concentr e 20X R actif 2 R2 Diluer au 1 20 la solution de lavage R2 dans de l eau distill e Pr parer 800 ml pour une microplaque de 12 barrettes Conjugu
17. ection de l antig ne de surface du virus de l H patite Ag HBs dans le s rum ou le plasma humain INTERET CLINIQUE La pr sence de l Ag HBs dans le s rum t moigne d une infection par le virus de l H patite Il est le premier marqueur appara tre et peut pr c der de 2 3 semaines les signes cliniques et biologiques de la maladie Sa pr sence peut tre tr s br ve quelques jours ou tr s longue plusieurs ann es Au del de 6 mois de persistence de l Ag HBs l H patite est qualifi e de chronique L existence de nombreux porteurs chroniques asymptomatiques fait que l H patite B repr sente un risque transfusionnel important La pr vention de la transmission repose sur la d tection de l Ag HBs chaque don de sang PRINCIPE DU TEST Monolisa HBs Ag ULTRA Monolisa HBs Ag ULTRA est une technique immuno enzymatique de type sandwich en 1 temps utilisant des anticorps monoclonaux et des anticorps polyclonaux s lectionn s pour leur capacit se lier aux diff rents sous types de l Ag HBs actuellement reconnus par l OMS et la plupart des souches variantes de l h patite B La phase solide de Monolisa HBs Ag ULTRA est sensibilis e avec des anticorps monoclonaux Les conjugu s de Monolisa HBs Ag ULTRA sont bas s sur l utilisation des anticorps monoclonaux de souris et des anticorps polyclonaux de ch vre contre l Ag HBs Ces anticorps sont coupl s la peroxydase Le dosage comprend les tapes suivantes
18. et il y a une nette diff rence de coloration entre une cupule vide et une cupule contenant de l chantillon cf paragraphe 14 pour la v rification automatique VALIDATION SPECTROPHOTOM TRIQUE DU DEPOT DES CHANTILLONS ET DU CONJUGUE Secouer la solution du conjugu avant utilisation Homog n iser Distribuer rapidement 50 pl de la solution reconstitu e de conjugu R6 R7 dans toutes les cupules Homog n iser le m lange r actionnel NB La distribution des chantillons peut aussi tre contr l e visuellement ce stade de la manipulation tout comme la distribution du conjugu peut galement tre contr l e visuellement apr s rajout du conjugu les cupules contenant des chantillons se colorent en rouge cf paragraphe 14 pour la v rification automatique VALIDATION SPECTROPHOTOMETRIQUE DU D P T DES CHANTILLONS ET DU CONJUGU 7 Lorsque cela est possible recouvrir d un film adh sif et incuber pendant 1 heure et 30 5 minutes 37 1 C 8 Retirer le film adh sif aspirer le contenu de chaque cupule et laver au moins 5 fois Veillez ce que le 10 volume r siduel n exc de pas 10 ul ventuellement s cher la plaque par retournement sur une feuille de papier absorbant Distribuer rapidement dans toutes les cupules 100 ul de la solution de r v lation de l activit enzymatique R8 R9 pr alablement pr par e Laisser la r action se d velopper l obscurit pendant 30 5 minutes
19. ette distribution peut tre galement contr l e visuellement La coloration du substrat ros e pour les chantillons n gatifs ou bleu pour les chantillons positifs disparait des cupules qui deviennent incolores pour les chantillons n gatifs ou jaunes pour les chantillons positifs apr s addition de la solution d arr t 7 Lecture des densit s optiques 450 620 700 nm et interpr tation des r sultats 4 COMPOSITION DE LA TROUSSE Monolisa HBs Ag ULTRA Tous les r actifs sont destin s exclusivement pour le diagnostic in vitro ETIQUETAGE NATURE DES REACTIFS PRESENTATION 72346 72348 R1 MICROPLAQUE 12 barrettes de 8 cupules sensibilis es 1 microplaque 5 microplaques avec des anticorps monoclonaux anti HBs souris R2 SOLUTION DE LAVAGE concentr e 20X 1 flacon 1 flacon Tampon tris NaCI pH 7 4 70 ml 235 ml Conservateur ProClin 300 0 04 R3 CONTR LE N GATIF 2 flacons 2 flacons Tampon Tris HCI contenant de la SAB 2x2 5ml 2x2 5ml Conservateur ProClin 300 0 1 96 R4 CONTR LE POSITIF Humain 1 flacon 1 flacon Tampon Tris contenant de SAB additionn d un 2 5 ml 2 5 ml m lange d Ag HBs purifi s des sous types ad et ay humains Conservateur ProClin 300 0 1 96 R6 DILUANT CONJUGU Tampon Tris pH 7 4 additionn 1 flacon 2 flacons de BSA de Tween 20 d immunoglobulines de boeuf et 8 ml 2x18ml de souris et d un indicateur color t moin de d
20. gatif sur les 3 autres valeurs Une seule valeur peut tre limin e Dans le cas de bruit de fond tr s bas pour le contr le n gatif R3 moyenne des valeurs n gatives R3 inf rieures 0 010 ne pas utiliser le crit re de rejet pour le contr le n gatif R3 Le test est recommencer si tous les contr les sont hors de l intervalle des valeurs ci dessus 4 Calcul des ratios Pour chaque chantillon calculer le ratio chantillon 5 Interpr tation des r sultats Les chantillons dont le ratio est inf rieur 1 sont consid r s n gatifs d apr s le test Monolisa HBs Ag ULTRA Les chantillons dont le ratio est compris entre 0 9 et 1 doivent tre interpr t s avec prudence Il est conseill de retester les chantillons correspondants en double lorsque les syst mes utilis s et les proc dures du laboratoire le permettent Les chantillons dont le ratio est gal ou sup rieur 1 sont consid r s comme initialement positifs et doivent tre retest s en double avant l interpr tation finale Si apr s r p tition de l essai pour un chantillon le ratio des 2 doublets est inf rieur 1 le r sultat initial est non reproductible et l chantillon est d clar n gatif selon le test Monolisa HBs Ag ULTRA Pour les chantillons initiaux r actifs ou douteux 0 9 ratio 1 apr s r p tition de l essai si au moins un ratio des 2 doublets est gal ou sup rieur 1 le r sultat initial est reproductib
21. ge du diagnostic in vitro Porter des gants usage unique lors de la manipulation des r actifs et des chantillons et se laver les mains soigneusement apr s leur manipulation Ne pas la bouche Le contr le positif R4 contient de l Ag HBs de sous type ad et ay purifi partir de plasmas humains n gatifs en anticorps anti VIH1 et 2 et anticorps anti VHC et inactiv s par la chaleur Du fait qu aucune m thode ne peut garantir de facon absolue l absence des virus VIH VHB VHC ou d autres agents infectieux consid rer les r actifs d origine humaine ainsi que les chantillons de patients comme potentiellement infectieux et les manipuler avec les pr cautions d usage Consid rer le mat riel directement en contact avec les chantillons et les r actifs d origine humaine ainsi que les solutions de lavage comme des produits contamin s Eviter les claboussures d chantillons ou de solutions les contenant Les surfaces souill es seront nettoy es par de l eau de javel dilu e 1096 Si le liquide contaminant est un acide les surfaces souill es seront neutralis es au pr alable avec du bicarbonate de soude puis nettoy es l aide de l eau de javel et s ch es avec du papier absorbant Le mat riel utilis pour le nettoyage devra tre jet dans un conteneur sp cial pour d chets contamin s Les chantillons les r actifs d origine humaine ainsi que le mat riel et les produits contamin s se
22. il est recommand de tester d autres marqueurs anticorps sp cifique de l Ag HBs ou si possible ADN viral amplifi pour un diagnostic final de l infection Afin de v rifier la sp cificit de la r action tout chantillon trouv positif selon les crit res d interpr tation du test Monolisa HBs Ag ULTRA devrait tre confirm par une technique de neutralisation des Ag HBs ventuellement pr sents dans l chantillon test Monolisa HBs Ag confirmation r f rence 72208 La m thode colorim trique de v rification du d p t des chantillons et ou des conjugu s et ou de la solution de r v lation ne permet pas de v rifier l exactitude des volumes distribu s mais seulement de montrer la pr sence d chantillons et ou de conjugu Le taux de r ponses erron es obtenues avec cette m thode est li e la pr cision du syst me utilis des CV cumul s de pipetage et de lecture sup rieurs 1096 peuvent d grader significativement la qualit de cette v rification e Dans le cas d un lavage inefficace apr s l tape d incubation du conjugu la v rification automatique de la distribution de la solution de r v lation par lecture 490 nm des densit s optiques des cupules peut donner des r sultats erron s avec des densit s optiques sup rieures 0 100 en l absence de solution de r v lation Cependant ce ph nom ne n a pas t observ durant les valuations conduites sur 939 chantillons test s 17 REF
23. le et l chantillon est d clar positif selon le test Monolisa HBs Ag ULTRA en tenant en compte des limites du test d crites ci apr s Les chantillons qui ont t retest s en double et trouv s n gatifs selon le test Monolisa HBs Ag ULTRA mais pour lesquels une des valeurs est proche de la valeur seuil ratio entre 0 9 et 1 devraient tre consid r s avec prudence Il est conseill de retester ces patients avec une autre m thode ou sur un autre pr l vement Dans le cas de DO tr s basses pour les chantillons test s DO n gative et quand la pr sence des chantillons ainsi que des r actifs est contr l e les r sultats peuvent tre interpr t s comme n gatifs Pour v rifier la sp cificit de la r action tout chantillon positif selon les crit res d interpr tation du test Monolisa HBs Ag ULTRA devrait tre confirm par une technique de neutralisation de l Ag HBs Les r actions non r p tables sont souvent caus es par e Lavage des microplaques inad quat Contamination des chantillons n gatifs du s rum ou du plasma avec une concentration forte en Ag HBs Contamination de la solution de r v lation par des agents oxydants eau de javel ions m talliques etc Contamination de la solution d arr t 14 V RIFICATION SPECTROPHOTOM TRIQUE DU D P T DES CHANTILLONS ET DU CONJUGU V rification du d p t des chantillons et du conjugu 1 V rification du d p t des chantillons La
24. r PT Representante Autorizado SE Auktoriserad representant DK Autoriseret repraesentant GR EgovovodotHpEvos avrimpoowmos PL Upowazniony Przedstawiciel LT Jgaliotasis atstovas HU Meghatalmazott K pvisel EE Volitatud esindaja SK Autorizovany z stupca CZ Zplnomocn ny z stupce NO Autorisert representant RO Reprezentant autorizat BG GB Batch code FR Code du lot ES C digo de lote IT Codice del lotto DE Chargen Bezeichnung PT C digo do lote SE Batchnr DK Batchkoden GR Kwdtkas mapr as PL Numer serii LT Serijos numeris HU Gy rt si sz m EE Partii kood SK Cislo amp arze CZ slo ar e NO Partikode RO Num r de lot BG GB Expiry date YYYY MM DD FR Date de peremption AAAA MM JJ ES Estable hasta AAAA MM DD IT Da utilizzare prima del AAAA MM G DE Verwendbar bis JJJJ MM TT PT Data de expira o AAAA MM DD SE Utg ngsdatum AAAA MM DD DK Anvendes for AAAA MM DD GR Hpepopnria An ns YYYY MM DD PL Data wa no ci YYYY MM DD LT Galioja iki YYYY MM DD HU Szavatossagi id EEEE HH NN EE Aegumist htaeg AAAA KK PP SK Pou ite n do RRRR MM DD CZ Datum exspirace RRRR MM DD NO Utlopsdato AAAA MM DD RO Data expirarii AAAA LL ZZ BG
25. ront limin s apr s d contamination Soit par trempage dans de l eau de javel la concentration finale de 596 d hypochlorite de sodium 1 volume d eau de javel pour 10 volumes de liquide contamin ou d eau pendant 30 minutes soit par autoclavage 121 C pendant 2 heures minimum L autoclave est la meilleure m thode pour inactiver les virus VIH et VHB ATTENTION NE PAS INTRODUIRE DANS L AUTOCLAVE DES SOLUTIONS CONTENANT DE L HYPOCHLORITE DE SODIUM Ne pas omettre de neutraliser et ou d autoclaver les solutions ou effluents de lavage ou tout liquide contenant des chantillons biologiques avant de les jeter dans l vier La fiche de donn es de s curit est disponible sur demande La manipulation et l limination des produits chimiques doivent tre effectu es selon les bonnes pratiques de laboratoire Eviter tout contact du tampon substrat du chromog ne et de la solution d arr t avec la peau et les muqueuses toxicit irritation ou br lure Certains r actifs contiennent du ProClin 300 0 04 0 1 96 et ou 0 5 Xi Irritant R43 peut entrainer une sensibilisation par contact avec la peau S28 37 Apr s contact avec la peau se laver imm diatement et abondamment avec de l eau et du savon Porter des gants appropri s La fiche de donn es de s curit est disponible sur demande 7 MAT RIEL N CESSAIRE MAIS NON FOURNI Eau distill e Hypochloride de sodium Eau de javel et bicarbonate de sou
26. s ou des tats sans relation avec l H patite B femme enceinte facteur rhumatoide Ig anti nucl aires lg souris ou autres infections virales ou bact riennes ont t test s avec Monolisa HBs Ag ULTRA 11 chantillons trouv s positifs r p tables ont t contr l s avec un test EIA commercial et galement l aide d un test de neutralisation 10 des 11 chantillons positifs r p tables en Monolisa HBs Ag ULTRA ont t obtenus positifs avec ce test Ag HBs EIA commercial Un chantillon a t trouv non interpr table avec le test de neutralisation et a t retir du calcul final 2 chantillons n ont pas t neutralis s l un provenant d un chantillon positif IgG HSV l autre d un chantillon de my lome galement trouv positif avec le test EIA commercial utilis en comparaison conduisant une sp cifict de 99 2896 276 278 Les 9 autres chantillons positifs IgG HSV et les 9 chantillons de my lome ont t trouv s n gatifs avec Monolisa HBs Ag ULTRA Sensibilit Analytique Le seuil de sensibilit du test a t estim inf rieur 0 06 ng ml d Ag HBs partir du panel francais SFTS 2001 et inf rieur 0 050 IU ml pour l talon OMS Les sous types suivants du panel SFTS 2001 adw2 adw4 adr ayw1 ayw2 ayw3 ayw4 ayw5 et ayr ont tous t trouv s positifs avec un ratio sup rieur 5 avec le test Monolisa HBs Ag ULTRA 9 Sensibilit Les tudes de sensibilit effectu es sur 428 chan
27. s tableaux suivants Tableau 1 R p tabilit intra essai n 30 chantillon 1 chantillon 2 chantillon 3 chantillon 4 moyenne des ratios 0 38 3 17 8 92 14 63 d viation standard SD 0 04 0 12 0 34 0 91 CV ratios 10 59 3 83 3 77 6 19 Tableau 2 Reproductibilit inter essai n 40 chantillon 1 chantillon 2 chantillon 3 chantillon 4 moyenne des ratios 0 48 3 06 8 02 13 85 d viation standard SD 0 087 0 251 0 751 1 471 CV ratios 18 1 8 2 9 36 10 63 16 LIMITES DU TEST 10 Un r sultat n gatif signifie que l chantillon contr l ne contient pas d Ag HBs d tectable par le test Monolisa HBs Ag ULTRA Toutefois dans la mesure o des taux tr s faibles en Ag HBs peuvent ne pas tre d tect s un tel r sultat n gatif n exclut pas la possibilit d une infection par le virus de l h patite B De plus plusieurs auteurs ont signal dans la litt rature des cas d h patite B aigu ou chronique dans lesquels de l ADN viral peut tre d tect en l absence d antig ne de surface patients Ag HBs n gatifs Ces profils anormaux quoique rares sont la cons quence de mutations g n tiques possibles soit au niveau des g nes S et pr S entrainant la non reconnaissance de l Ag par certains r actifs immunologiques soit g n ralement au niveau des g nes X et pol induisant une faible r plication virale Dans ces cas tr s particuliers
28. spectul de utilizare BG ul Bio Rad 3 bd Raymond Poincar 0459 92430 Marnes la Coquette France T l 33 1 47 95 60 00 01 2009 Fax 33 1 47 41 91 33 Code 883567
29. tillons positifs provenant du suivi des patients atteints d H patite B chronique d H patite B aig e ont d montr une sensibilit de 100 Un panel de 15 prot ines recombinantes mimant les plus importantes mutations en s quences d acides amin s de l Ag HBs a t test et a t enti rement d tect avec Monolisa HBs Ag ULTRA Un total de 60 panels de s roconversions commerciaux d H patite B 293 chantillons a t test et compar des tests immunoenzymatiques disponibles sur le march Monolisa HBs Ag ULTRA a montr des r sultats quivalent Monolisa HBs Ag Plus dans 29 s roconversions Monolisa HBs Ag ULTRA a d tect les seroconversions avec 1 pr l vement d avance dans 28 s roconversions avec 2 pr l vements d avance pour 2 s roconversions et avec 5 pr l vements d avance dans 1 s roconversion Pr cision La pr cision du test Monolisa HBs Ag ULTRA a t d termin e par l analyse de 4 chantillons 1 chantillon n gatif 2 chantillons positifs en Ag HBs ch 2 et 3 et un chantillon fortement positif en Ag HBs La r p tabilit intra essai a t valu e par l analyse de ces 4 chantillons qui ont t test s 30 fois au cours de la m me manipulation La reproductibilit inter essai a t valu e par l analyse de ces 4 m mes chantillons qui ont t test s en double pendant 20 jours raison de 2 essais ind pendants chaque jour Les r sultats sont regroup s dans e
30. uropeiskt direktiv 98 79 EG om medicintekniska produkter f r in vitro diagnostik DK CE m rkningen Europa direktiv 98 79 EF om medicinsk udstyr til in vitro diagnostik GR CE evpwtrarky o nyua 98 79 CE repr in vitro LATPUKES PL CE oznaczenie Dyrektywa unijna 98 79 CE dotycz ca produkt w medycznych do bada in vitro LT CE enklas Europos s jungos direktyva 98 79 CE d l in vitro diagnostikos medicinos prietais HU CE jelz s 98 79 CE Eur pai Ir nyelv az in vitro orvosi diagnosztikai eszk z kr l EE CE m rgistus Euroopa direktiiv 98 79 CE in vitro diagnostikameditsiiniseadmete kohta SK CE ozna enie o zhode Eur pska direkt va 98 79 CE pre in vitro diagnostick zdravotn cke postupy CZ CE zna ka Evropsk direktiva 98 79 CE o diagnostick ch zdravotnick ch prost edc ch in vitro NO CE merking EU direktiv 98 79 CE om medisinsk utstyr til in vitro diagnostikk RO Marca CE Directiva europeana 98 79 CE pentru dispozitive medicale de diagnostic in vitro BG 98 79 GB For in vitro diagnostic use FR Pour diagnostic in vitro ES Para diagn stico in vitro IT Per uso diagnostico in vitro DE n vitro Diagnostikum PT Para uso em
31. vage et la distribution des r actifs La r action enzymatique est tr s sensible tous m taux ou ions m talliques En cons quence aucun l ment m tallique ne doit entrer en contact avec les diff rentes solutions contenant le conjugu ou la solution substrat La solution de r v lation tampon substrat chromog ne doit tre color e en rose L apparition d une autre coloration dans les minutes suivant la reconstitution indique que le r actif est inutilisable et doit tre remplac Pour cette pr paration utiliser de pr f rence des r cipients et du mat riel de distribution en plastique usage unique ou de la verrerie pr alablement lav e l acide chlorhydrique 1N rinc e l eau distill e et s ch e Conserver cette solution l abri de la lumi re Utiliser un c ne de distribution neuf pour chaque s rum Le lavage des cupules est une tape essentielle de la manipulation respecter le nombre de cycles de lavages prescrits et s assurer que toutes les cupules sont compl tement remplies puis compl tement vid es Un mauvais lavage peut entra ner des r sultats incorrects Ne jamais utiliser le m me r cipient pour distribuer le conjugu et la solution de r v lation V rifier l exactitude et la bonne pr cision des pipettes et le bon fonctionnement des appareils utilis s Ne pas changer le protocole op ratoire CONSIGNES D HYGI NE ET DE S CURIT Tous les r actifs de la trousse sont destin s l usa
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