Leica Bond OracleTM HER2 IHC System
Contents
1. Grossissement x40 Grossissement x40 16 Guide d interpr tation du kit Bond Oracle HER2 IHC System Carcinome mammaire invasif 1 Un marquage faible peine perceptible de la membrane est d tect dans plus de 10 des cellules tumorales Les cellules ne sont marqu es que sur une partie de leur membrane E Cas n 3 i ne k 5 4 a it m Ca 4 TH Se 0 si ee Grossissement x40 LL a i TR Ph ET TI aa PES c i ger pe ti E ACC r ha bzs L t9 4 r i A F ra e i Ni qr HN P A tps C dy r Foy A e RL a r min W 4 al Es m i a 3 TP F pe P L PN L is Ms la 5 Rs x 4 e ai P to STe Ses LL d f he x Aa Ts P ri 9 Cr amp i j 5 P Tir amp b ri IATE T pa F T a s A AR Col E T a T a eu eue e INOA Ve ns D EC esep e a LL n 4 14 Fa a t _ re m e PES L y T LE T F es 2 na es KR y ais i PF d t f bs ii E FT 3 a Grossissement x40 117 Carcinome mammaire invasif 2 Un marquage faible mod r de toute la membrane est observ dans plus de 10 des cellules tumorales E Cas n 6 Grossissement x40 18 Guide d interpr tation du kit Bond Oracle HER2 IHC System Carcinome mammaire invasif 3 Un fort marquage complet de la membrane est observ dans plus de 10 des cellules tumorales E Cas n 7 E Cas n 8 Grossissement x40 Grossissement x40 19 M Artefa2. Leica Bond Oracle HER2 IHC System Guide d interpr tation Tissu mammaire Leica Bond Oracle HER2 IHC System Guide d interpr tation Destin au syst me de marquage Immunohistochimie Leica BOND de Leica Bisosystems enti rement automatis Ce produit Code de produit TA9145 est con u pour la r alisation de 60 tests 150 lames 60 lames test avec l anticorps primaire HER2 60 lames test avec le contr le n gatif HER2 15 lames de contr le HER2 avec l anticorps primaire HER2 15 contr les tissulaires positifs en interne avec l anticorps primaire HER2 Pour plus d informations interactives et exercices d apprentissage connectez vous www LeicaBiosystems com TA9145 elearning Introduction s0000000aannnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnn nnmnnn eee eee e eee nnana n nnana 2 KitLeica Bond Oracle HER2 IHG SSI eme a rien 2 DONNEES 08 COCOON ana a EASO TRAE ED EE IO mn 2 Guide d interpr tation du kit Leica Bond Oracle HER2 IHC System ssseseseeseressiersrerrersrrrnerrnrnsrsrsrsrsrrrerrrerennennns 2 ADECCO FRENZ See ee a em dan ion 3 Algorithme de test HER2 ir eninenrsrnennennenneeeneneenesnesneenesnesneenesnenneeneenennnnes 4 Expression de l oncoprot ine HER2 d termin e par immunohistochimie s eseseseseesereseneriererenereerersrererenrsrerernsesas 5 Statut du g ne HER2 d termin par hybridation in situ ini 5 Composants du kit Leica Bond Oracle
3. cifique de DAB entre les surfaces r tract es Chaque laboratoire effectuant des tests avec le kit Leica Bond Oracle HER2 IHC System doit surveiller son taux de positivit Si le taux de positivit est en dehors de la plage de 10 20 un examen des proc dures et techniques d interpr tation doit tre entrepris Examen des donn es Oracle afin de d terminer le nombre de cas positifs 10 20 de positifs ioui gt Continuer de tester avec Oracle et de surveiller les r sultats DE Retirer les cas r currents et r analyser l ensemble de donn es Est ce que cela Qui gt donne une moyenne de 10 20 de positifs Revoir le nombre de cas obtenir des chiffres provenant d autres sites pour cr er une m ta Qui analyse d une vaste population Est ce que cela donne 10 20 Examen en interne des proc dures EE Pr analytique e Temps de fixation e Dur e de la fixation e Type de fixation e M thode de traitement des tissus Analytique e Validit du test e talonnage des instruments e Utilisation de m thodes de laboratoire automatis es e valuation de la formation et de la comp tence du personnel e Type de rep rage d antig nes e R actifs de test e Utilisation de mat riel de contr le standardis s e Utilisation de m thodes de laboratoire automatis es Post analytique e Crit res d interpr tation e Utilisation de l analyse d image
4. e l ments rapporter e Proc dures d assurance qualit e Accr ditation des laboratoires e Test d aptitude e valuation des comp tences du pathologiste 23 Nom du Stagiaire Institution quipement de formation Q Leica Bond Oracle HER2 IHC System Q R actifs auxiliaires et consommables Leica BOND Leica BOND ER1 Leica BOND Wash Leica BOND Dewax Leica BOND Universal Covertiles DODDO Q Mode d emploi du Leica Bond Oracle HER2 IHC System Q Guide d interpr tation du Leica Bond Oracle HER2 IHC System Q Directives de notation du Leica Bond Oracle HER2 IHC System Ceux ci peuvent tre t l charg s partir du site Web www LeicaBiosystems com TA9145 IFU Q Quantit suffisante de tissu de statut HER2 connu pour la formation la proc dure et l interpr tation Avant la formation Q Le stagiaire aura achev le module d e Learning du Leica Bond Oracle HER2 IHC System www LeicaBiosystems com TA9145 elearning Num ro du certificat Q Version du logiciel de l instrument Leica BOND Q Date de la derni re MP de l instrument Leica BOND Q L instrument Leica BOND est quip d une sonde FTP propre nouvelle Q Un programme de nettoyage existe pour l instrument Leica BOND Stockage des r actifs Q Stockage du Leica Bond Oracle HER2 IHC System 2 8 C Q V rifiez le stockage des r actifs en vrac Q ER 2 8 C Q Leica BOND Wash 2 8 C Q Dewax 2 26 C Q Le labo utilise H 0 d sionis e Mani
5. 800 248 0123 Assistance commerciale et client le Asie Pacifique Australie 1800 625 286 Chine 85 2 2564 6699 Japon 81 3 5421 2804 Cor e su Sud 82 2 514 65 43 Nouvelle Z lande 0800 400 589 Singapour 65 6779 7823 Assistance commerciale et client le en Europe Pour obtenir les coordonn es d taill es sur les bureaux de vente ou distributeurs europ ens veuillez visitez notre site Web etca BIOSYSTEMS SOLUTIONS COMPL TES DE R ACTIFS Kit Leica HER2 FISH System pour Leica BOND Le kit Leica HER2 FISH System automatise enti rement les sondes PathVysion Dual HER2 FISH permettant une valuation facile efficace et pr cise du statut HER2 dans le cancer du sein _ Facilit R duction des erreurs et diminution des repasses Efficacit Flux de travail optimis pour une productivit maximale et un co t minimal e Pr cision Permet une fiabilit du diagnostic Novocastra Reference Range Reference Range est un groupe de produits de qualit sup rieure s lectionn s et organis s pour aider les pathologistes et les scientifiques dans le choix des anticorps id aux pour un marquage optimal des tissus Les marqueurs mammaires Reference Range comprennent Cytok ratine 20 clone RW31 R cepteur des strog nes clone 6F11 Antig ne Ki67 clone MM1 Prot ine P53 DO 7 clone DO 7 Prot ine P63 clone 7JUL Leica Biosystems fournit la fois les produits la qualit et l
6. Ce niveau de contr le est essentiel la r alisation d une validation pr cise du test HER2 et de la performance continue des lots Image 3D de taches de lign e cellulaire de contr le Oracle HER2 sur une lame de verre g n r e par interf rom trie en lumi re blanche Cette technique procure une m thode pr cise pour lames de contr les Oracle HER2 coh rentes qui se colorent de fa on reproductible Donn es de caract risation des lign es cellulaires Les lign es cellulaires de contr le Oracle HER2 ont t enti rement caract ris es pour un profil Immunohistochimique le statut du g ne HER et la charge en r cepteur HER2 Kit Leica Bond Charge du r cepteur Statut d amplification g nique HER2 Lign e cellulaire Oracle HER2 IHC HER2 Proportion g nique p Nombre de copies HER2 System Profile par cellule HER2 Chr17 SK BR 3 3 4 3 x 10 13 35 3 55 MDA MB 453 2 1 4 x 10 5 73 2 05 MDA MB 175 1 6 3 x 10 3 33 1 20 MDA MB 231 0 9 3 x 10 3 15 1 13 Analyse de la charge en r cepteur HER2 valu e par cytom trie en flux Statut d amplification g nique HER 2 valu par sonde double HER2 et chromosome 17 FISH Vysis PathVysion R f rences 1 Barker C et al Non destructive quality control of HER2 control cell line sections the use of interferometry for measuring section thickness and implications for HER interpretation on breast tissue Accept pour publication le 27
7. HER2 IHC System 6 Lames de Contr les Oracle HER2 nn 7 Profils des Lames de Contr les Oracle HER2 nn 7 Reproductibilit exceptionnelle lames de contr le s esesesesseseneneseensrnnereniinnererunirnnurarannnnururunannnrarannnnnrnrurennnrnrnrnnnnne 8 Donn es de caract risation des lign es cellulaires s esesessesesesesesierenerenininneneruninrnnerarivnsnunuraninnnnarannnnnnenurennsrnrnrnnnnno 8 Contr les tissulaires en N E aa sans naar es cie ann 9 Contr le tissulaire positif SIMS AR a ea nn 9 Contr le tissulaire n gatif en interne inner 9 Consid rations techniques et recommandations anansnsnnnnnnennnnennnnnnnnenennnnnnnnnnennnnnnnnenennnnnnnnnn 10 Manipulation des chantillons ssesesesesnenenenenenesrunenunnsnurunurunennunurananrunuraruninnunnrannnnunuranannnnununannnunananunnnnennnannnnnnannnnnnns 10 Fixation traitement et inclusion iii iurceeerereerersereesereeseeeeeneneneennes senc eseneeeenee sense 10 Pr paration des coupes de tISSUS iris 10 Param tres par d faut du protocole rennes 10 Interpr tation du marquage Oracle HER2 IHC a annnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnenennnnnnnnnnennnnnnnnnnennnnnnnnnn 12 Directives de notation du Leica Bond Oracle HER2 IHC eessosennenenenessenensnennenensrnenenunurnnnnnenersnnunersnsennnnrsrsrenrnrersnns 12 Concernant les directives A SCO CAP aa ai iaa 12 Expression de HER2 dans des tissus normaux nn 13 Atlas des marquages Leica Bond Oracle HER2 IHC nnnnnnnnn
8. HER2 conduit une activation excessive de ces voies et peut contribuer une croissance plus agressive associ e ces cellules tumoralesf Une surexpression de la prot ine HER2 est associ e un mauvais pronostic dont la r duction de la survie sans maladie et la r sistance certains agents chimioth rapeutiques La Transduction du signal R f rences 1 Pawlowski V Revillion F Hebbar M et al Prognostic value of the Type growth factor receptors in a large series of human primary breast cancers quantified with a real time reverse transcription polymerase chain reaction assay ClinCancer Res 2000 Nov 6 4217 4225 2 Lonardo F Di Marco E King CR et al The normal erbB 2 product is an atypical receptor like tyrosinase kinase with constitutive activity in the absence of a ligand New Biologist 1990 2 992 1003 3 Walker RA Bartlett JMS Dowsett M Ellis 10 Hanby AN Jasani B Miller K and Pinder SE HER2 Testing in the UK Further Update To Recommendations Journal of Clinical Pathology 2008 4 Piccart Gebhart MJ Procter M Leyland Jones B et al Trastuzumab after adjuvant chemotherapy in HER2 positive breast cancer N Engl J Med 2005 Oct 20 353 16 1652 4 5 Yarden Y Sliwkowski MX Untangling the ErbB signalling network Nat Rev Mol Cell Biol 2001 Feb 2 2 127 37 6 Graus Porta D Beerli RR Daly JM Hynes NE ErbB 2 the preferred heterodimerization partner of all ErbB receptors is a mediator of lateral signa
9. associ e l automatisation compl te Bond Leica a permis l am lioration des normes d uniformit de fabrication de lot lot et la pr cision des dosages voir le mode d emploi du kit Leica Bond Oracle HER2 IHC System pour une utilisation des donn es de pr cision et de reproductibilit des fins cliniques quoi comparer Oracle Kit Leica Bond Oracle Automates compar s Dako Herceplest HER2 IHC System CB11 Ventana Pathway CB11 Ventana Pathway 4B5 Produits utilis s hs Dako Herceplest Ventana Pathway CB11 Taille des chantillons 548 OO woo 450 321 Concordance 2x2 78 6 92 4 89 4 Concordance 3x3 69 2 88 4 80 7 Les caract ristiques de performance 2X2 0et1 n gatif 2 et3 positif 3x3 0 et 1 n gatif 2 quivoque 3 positif Guide d interpr tation du kit Leica Bond Oracle HER2 IHC System Ce document est fourni titre indicatif pour aider les scientifiques et les pathologistes obtenir des r sultats pr cis coh rents et reproductibles Le Guide d interpr tation vous familiarisera avec les exigences concernant les notations des carcinomes mammaires marqu s avec le kit Leica Bond Oracle HER2 IHC System et l interpr tation des lames contr les Oracle HER 2 Le Guide d interpr tation comprend e Des conseils techniques pour garantir la haute qualit de marquage HER2 et un d bit efficace dans votre laboratoire e Un synopsis du mode d emploi du kit Leica Bond Oracle HER2 I
10. cellulaire MDA MB 453 2 MDA MB 453 Le 3 oo m 3 Pr sence d un marquage de forte intensit O T 9 brun complet de la membrane cellulaire Q dans la lign e cellulaire SK BR 3 3 i SK BR 3 o e Remarque importante l une des caract ristiques de la lign e cellulaire MDA MB 175 1 est un mod le de croissance distinct dans lequel les cellules forment des groupes a Ces groupes donnent lieu une r gion aspect de bordure en brosse luminale continue travers l amas de cellules Le maruage de cette bordure en brosse est plus fort que pour le reste de la membrane cellulaire C est le marquage faible peine perceptible incomplet de la membrane cellulaire qui est le motif de marquage correct pour l oncoprot ine HER2 1 7 Lames de contr le exceptionnellement reproductibles Les lames contr les Oracle HER2 fournissent une m thode compl te de contr le pour valuer la coh rence de la performance des dosages en utilisant un syst me unique de quatre lign es cellulaires L ajout d une lign e cellulaire 2 procure une confiance suppl mentaire par un contr le plus proche du potentiel de variation du test Chaque lames contr les Oracle HER2 fait l objet d un test de CQ non destructif utilisant un syst me brevet d interf rom trie en lumi re blanche Ce processus unique signifie qu une paisseur de coupe pr cise est maintenue et contr le le marquage des lames de fa on coh rente
11. f v 2009 AIMM 8 Guide d interpr tation du Bond Oracle HER2 IHC System W Contr les tissulaires en interne Les contr les tissulaires en interne doivent tre e Inclus dans chaque cycle de marquage e Une biopsie ou des chantillons chirurgicaux de statut HER2 connu fix s trait s et inclus de la m me fa on que les chantillons de patients Contr le tissulaire positif en interne Valide la pr paration correcte des tissus et la techniques de marquages de ces derniers Une coupe de contr le positif id ale doit faire appara tre un faible marquage afin de pouvoir d finir les changements subtils de la sensibilit de l anticorps primaire Les composants tissulaires du contr le positif connus ne doivent tre utilis s que pour le contr le de performance correct des tissus trait s avec les r actifs du test et NON comme une aide pour formuler une interpr tation sp cifique des chantillons du patient Si le tissu de contr le positif ne parvient pas faire appara tre un marquage appropri les r sultats obtenus avec les chantillons du patient doivent tre consid r s comme non valides Contr le tissulaire n gatif en interne Valide la sp cificit de l anticorps primaires et renseigne sur le marquage non sp cifique dit bruit de fonds La vari t des diff rents types de cellules pr sents dans la plupart des coupes tissulaires offre des sites de contr les n gatifs internes v rifier par l util
12. pass dans l alcool apr s la fixation primaire e Temps de traitement temp rature pression et produits chimiques utilis s e Stockage des blocs de paraffine e Stockage des sections coup es Fixation traitement et inclusion Il est recommand de pr parer les tissus dans des fixateurs base de formol de les traiter en routine et de les inclure dans de la paraffine Par exemple les sp cimens d ex r se doivent tre bloqu s dans une paisseur de 3 4 mm et fix s pendant 18 24 heures dans 10 de formol tamponn neutre Les tissus doivent ensuite tre d shydrat s dans une s rie d alcools puis claircis au xyl ne et enfin impr gn s de paraffine liquide et maintenus une temp rature ne d passant pas 60 C Pr paration des coupes de tissus Une pr paration appropri e des tissus est essentielle pour une performance uniforme du kit Leica Bond Oracle HER2 IHC System Les sp cimens de tissus inclus doivent tre coup s une paisseur comprise entre 3 et 5 um Un r chauffement excessif des tissus pendant l inclusion ou les coupes durant le s chage peut tre pr judiciable l immunohistochimie et doit donc tre vit Les lames n cessaires pour la v rification des tumeurs H amp E et l valuation de l oncoprot ine HER 2 Leica Bond Oracle HER2 IHC System doivent tre pr par es en m me temps Afin de pr server l antig nicit les coupes tissulaires dispos es sur les lames Leica Biosystems Plus Sl
13. s de marquage de 0 1 2 et 3 Les cellules sont habituellement trait es au moyen de la technologie de traitement Leica PeloristM pour garantir une fabrication constante d un lot l autre Les lign es cellulaires t moins HER2 ont t con ues comme contr les de la proc dure pour confirmer la fiabilit de la proc dure du kit Leica Bond Oracle HER2 IHC System Elles valident e _L optimisation des r actifs et la performance du dosage e L application correcte du protocole e Les performances de l instrument Leica BOND 6 Guide d interpr tation du Bond Oracle HER2 IHC System TN IN 5 s L f nl A a i z f N dA B N L ML NU ATA LL RE LA AJ p o 4 A NJ EN Le LL KJ il B_J S VW am Oracle profils des Lames Contr les HER2 Les niveaux d expression de la prot ine HER2 et leurs intensit de marquage associ s pour les lign es cellulaires de contr le HER2 sont repr sent s ci dessous La lign e cellulaire MDA MB 231 0 repr sente le niveau quivalent de l expression trouv e dans l pith lium canalaire normal e Aucun marquage dans la lign e cellulaire gt LD MDA MB 231 0 eo MDA MB 231 1 Pr sence d un marquage faible peine perceptible brun incomplet de la membrane cellulaire dans la lign e cellulaire MDA MB 175 MDA MB 175 2 Pr sence d un marquage faible mod r brun complet de la membrane cellulaire dans la lign e
14. un nouveau Covertile Leica BOND Universal pour chaque lame L utilisation d un nouveau Covertile Leica BOND Universal code de produit S21 2001 110 chaque fois aidera assurer la coh rence de ce test semi quantitatif Le syst me Covertile permet une application douce et un d bit uniforme de r actif travers les coupes pour un traitement in gal des tissus L utilisation de covertiles Leica BOND Universal qui ont t pr c demment utilis s soit pour le marquage immunohistochimique ou l hybridation in situ n a pas t valid e pour ce test 11 M Interpr tation du marquage avec le Kit Oracle HER2 Pour la d termination de la surexpression de l oncoprot ine HER2 seul le motif de marquage de la membrane et l intensit doivent tre valu s Un pathologiste doit effectuer l valuation de la lame l aide d un microscope lumi re vive Pour l valuation du marquage immunohistochimique et la notation un objectif de grossissement x10 est ad quat Un objectif de grossissement x20 x40 doit tre utilis pour confirmer le r sultat Le marquage cytoplasmique doit tre consid r comme non sp cifique et ne doit pas tre inclus dans l valuation de l intensit de marquage de la membrane Pour aider la diff renciation entre les marquages de 0 1 2 et 3 reportez vous l Atlas du Kit Leica Bond HER2 IHC Staining pour des images repr sentatives des intensit s de marquage Seuls les chantillons provenant de patien
15. 100 avec le FISH pour des cas dans la population critique de positifs n gatifs mis en surbrillance AUCUN cas de g ne amplifi n a t identifi dans ce sous groupe Technologie Compact Polymer Le syst me de d tection Compact Polymer utilis dans le kit Leica Bond Oracle HER2 IHC System fait partie d une famille de nouvelles technologies de polym risation contr l e qui ont t sp cifiquement d velopp es pour pr parer des conjugu s polym res d anticorps li s HRP Comme la gamme de produits Oracle int gre cette technologie polym re le probl me de marquage la biotine endog ne non sp cifique constat avec les syst mes de d tection la streptavidine biotine n appara t pas ici Visualisation DAB Chromog ne et tampon de substrat se combinent dans une r action catalys e par les enzymes polym ris es pour produire un pr cipit brun qui est visualis par microscopie a fond clair H matoxyline La contre coloration nucl aire l h matoxyline pour l valuation IHC de l expression de HER doit tre l g re une contre coloration excessive peut masquer les r sultats de marquage et rendre l interpr tation difficile Lames Contr les HER2 Une des pierres angulaires du kit Leica Bond Oracle HER2 IHC System les Oracle HER2 lames de contr les contiennent quatre lign es cellulaires de cancer du sein fix es au formol et incluses dans de la paraffine et exprimant l oncoprot ine HER2 des intensit
16. ATLAS d interpr tation du kit Leica Bond Oracle HER2 IHC Profil HER2 du Kit Oracle dans les tumeurs Les niveaux d expression de HER et l intensit de marquages associ s dans des cellules tumorales sont repr sent s ci dessous L pith lium canalaire b nin normal fournit un niveau de r f rence 0 de contr le interne de l oncoprot ine HER2 dans le tissu tumoral Les tumeurs qui ne surexpriment pas l oncoprot ine HER2 auront un niveau similaire d expression de HER 2 3 2 IINA N a a 1 s re E L _ ji zs Cag at i a w F N Bi UE a E de A DCE H Li nS P a k me ai peen x he a j mil 4 r i F 1 gi as e se f Ti EF a m Pi 1e Fr La Cr ai Du x a nr a w i sh i iy S apt gt ss z 7 T e A r A ai aE Le Set a Pi me ss de per F 4 a ei m a ve T p AES et so LWZ P o S ts wo See T J J z Ko a Ta z C uL F Er 14 Guide d interpr tation du Bond Oracle HER2 IHC System Profils des tumeurs Marquage ne pas interpr ter pith lium non n oplasique E Cas n 1 i 7 Eenh Un pith lium b nin normal non associ exprime rarement HER2 Ra Fir ein Cependant un marquage occasionnel d un pith lium canalaire A r has X 4 Ani normal peut tre observ At A d 1 ne AE pe o e La sensibilit du kit Leica Bond Oracle HER2 IHC System p E ra d Le PR Fik i A ri m a t opt
17. Ce 49 er a z D i i aot P 5 ja i J Pe j w E Le i E PTO 1 P ki E CES Grossissement x20 Tumeur mammaire Lame marqu e avec le kit Oracle HER2 IHC illustrant un marquage cytoplasmique sp cifique en l absence de marquage de la membrane Score HER de 0 Artefact thermique Sur la dissection des tissus cet artefact se pr sente sous forme de tissu dur souvent dans les marges p riph riques du sp cimen r s qu Causes Un artefact thermique peut tre consid r comme le r sultat de l utilisation de techniques bas es sur de hautes temp ratures laser au cours d une s rie de proc dures chirurgicales et histologiques Conseils pour l interpr tation Des dommages cellulaires induits par la chaleur peuvent tre observ s en cours d valuation H amp E et se pr sentent sous forme d un marquage condens et acidophile avec une perte des d tails cellulaires L interpr tation du marquage immunohistochimique dans ces zones doit tre vit e 4 Grossissement x20 Tumeur mammaire Le sp cimen montre un marquage acidophile accentu en p riph rie produisant un marquage augment avec le colorant acide osine Le sp cimen montre galement une faible affinit pour l h matoxyline avec peu ou pas de d tails nucl aires visibles Grossissement x20 Tumeur mammaire Le sp cimen montre des dommages thermiques de l oncoprot ine HER2 la p riph rie de l chantillon cette zone de
18. HC System e Des directives pour l interpr tation des lames contr les Oracle HER2 e Des exemples des divers niveaux d expression de la prot ine HER2 dans les cancers du sein humains Une consultation et un examen continu du Guide d interpr tation du kit Leica Bond Oracle HER2 IHC System procurent une base solide pour valuer les lames marqu es au moyen du kit Leica Bond Oracle HER2 IHC System Herceptin est une marque d pos e de Genentech Inc 2 Guide d interpr tation du Bond Oracle HER2 IHC System Pr sentation de la prot ine HER2 La prot ine HER2 cod e par le g ne c erb B2 est l une des quatre oncoprot ines appartenant la famille des r cepteurs humains du facteur de croissance pidermique HER1 4 des tyrosines kinases et est surexprim e dans 10 20 des cas de cancers du sein invasifs Les membres de la famille HER des r cepteurs forment des homo et h t ro dim res par l interm diaire de ligands dont HER est le partenaire privil gi pour la dim risation La dim risation des r cepteurs de la famille HER initie des cascades d autophosphorylation qui activent leur tour plusieurs voies de signalisation cellulaire y compris les cascades Ras Raf MAPK et P13K Akt Il a t d montr que la modification des voies de transcription des g nes qui en r sulte affecte des processus aussi divers que la division l angiogen se la motilit et l adh sion cellulaires La surexpression de la prot ine
19. Polymer en plusieurs tapes Visualisation DAB Mol cules de peroxydase de raifort polym ris es D tection Compact Polymer Anticorps secondaire de liaison Post Primary Link Antibody Anticorps primaire HER2 Tissu FFPE Statut du g ne HER2 d termin par hybridation in situ Les cas jug s quivoques 2 faiblement positif par le kit Leica Bond Oracle HER2 IHC System peuvent encore tre valu s pour le statut du g ne HER2 par hybridation in situ HIS Les techniques d HIS utilisent des sondes HER2 marqu es d tect es par fluorescence ou gr ce une visualisation chromog ne pour valuer le statut d amplification g nique ne num ration des signaux du chromosome 17 pour permettre un rapport du g ne HER2 est galement r alis e en utilisant ces techniques de marquage base de fluorescence base de chromog ne Visualisation DAB ar D tection Compact Polymer Mol cules de peroxydase de raifort polym ris es AN Anticorps secondaire de liaison Secondary Linking Antibody Sonde HER2 Chr17 conjugu e un D Sonde HER2 conjugu e un fluorophore j j hapt ne G ne HER2 G ne HER2 o Tissu FFPE Tissu FFPE 5 Blocage au peroxyde Un blocage au peroxyde est utilis dans les techniques IHC pour bloquer les peroxydases endog nes pr sentes au sein des tissu sur la coupe Ceci est important car les peroxydases endog nes peuvent provoquer un b
20. atient contr le n gatif HER2 5 Tissu du patient Anticorps primaire HER2 12 Guide d interpr tation du Bond Oracle HER2 IHC System Expression de HER2 dans les tissus normaux Tissu de type normal Motif de marquage Anticorps Primaire HER2 Contr le n gatif d HER2 Surr nale N gatif N gatif Enc phale cervelet N gatif N gatif Enc phale cerveau N gatif N gatif Sein N gatif N gatif Moelle osseuse N gatif N gatif C lon N gatif N gatif sophage N gatif N gatif eil N gatif N gatif C ur N gatif N gatif Hypophyse Marquage cytoplasmique mod r N gatif observ dans des cellules hypophysaires 1 3 Rein N gatif N gatif Larynx N gatif N gatif Foie N gatif N gatif Poumon N gatif N gatif M soth lium N gatif N gatif Ovaire N gatif N gatif Pancr as N gatif N gatif Parathyro ide N gatif N gatif Nerf p riph rique N gatif N gatif Prostate N gatif N gatif Glande salivaire N gatif N gatif Peau N gatif N gatif Intestin gr le N gatif N gatif Rate N gatif N gatif Estomac Marquage faible cytoplasmique observ N gatif dans les glandes gastriques 2 3 Muscle stri N gatif N gatif Testicule N gatif N gatif Thymus N gatif N gatif Thyro de N gatif N gatif Amygdale N gatif N gatif Col de l ut rus N gatif N gatif Ut rus N gatif N gatif 13 M
21. cts de marquage Artefacts de bord Artefact de bord en rapport avec la fixation Marquage augment au niveau du bord du tissu ou marquage diminu observ e dans des r gions tumorales plus centrales Causes Souvent caus par une fixation inad quate des chantillons au cours de la phase pr analytique cet artefact peut s observer dans des pr parations H amp E et IHC La fixation et ou le traitement inad quats d chantillons mal pr par s peuvent se manifester par un marquage sous optimal dans les parties centrales du tissu par rapport la p riph rie Le marquage sous optimal zonal insuffisamment trait s peut tre interpr t comme un faux n gatif Conseils pour l interpr tation Un marquage accrue sur les bords d un chantillon peut tre du une dessiccation avant la fixation Un marquage limit ou une amplification de signal seulement la p riph rie de l chantillon doivent tre interpr t es avec prudence Un marquage diminu dans des endroits centraux peut tre du une mauvaise fixation Des zones appropri es pour l interpr tation doivent tre valu es en conjonction avec une coupe correspondante color e H amp E Grossissement x20 Tumeur mammaire Si un sp cimen montre un profil HER2 IHC augment dans des r gions tumorales proximit de la p riph rie de l chantillon il est probable que cela soit d une diffusion insuffisante du fixateur aux r gions centrales de la t
22. de bord li s la manipulation Coupe marqu e HER2 IHC illustrant des noyaux cras s et une morphologie endommag e du tissu conjonctif Noter un certain pi geage de DAB dans des noyaux se chevauchant suite l crasement des tissus Marquage cytoplasmique ou artefact en points Marquage sp cifique du cytoplasme Causes Des l ments de marquage cytoplasmique HER2 peuvent tre observ s lorsque e Le sp cimen montre des niveaux lev s d expression de l oncoprot ine HER2 Un marquage cytoplasmique faible est couramment observ elorsque l intensit de la membrane est 3 e Des cas de marquage cytoplasmique sp cifique ou un marquage en points peuvent s observer Ce motif de marquage peut tre pr sent en l absence de marquage de la membrane Conseil pour l interpr tation Une corr lation entre une r ponse de marquage cytoplasmique et un traitement l Herceptin n a pas t d termin e Seul le composant membranaire du marquage immunohistochimique d HER2 doit tre interpr t Les zones appropri es pour l interpr tation doivent tre valu es en conjonction avec une coupe correspondante color e H amp E E st Mig E Eae F im 4 k F B E M F Jia j L Li Fo j f F o i ahs is Li As e rke ie gp Pr T J a r p sde T f F j i au LE rs E a 3 p E z i LT Bn E Tai i T LL P i ba i A 4 F i r iE YAN pe e z 2 F T F e Le i L a
23. e support offrant ainsi une solution compl te qui vous permet d obtenir des flux de travail avanc s des diagnostics plus clairs et surtout le plus important un meilleur suivi des patients PathVysion est une marque d pos e d Abbott Molecular Inc Tous droits r serv s Utilisation sous licence Ce produit n est pas destin la vente aux tats Unis
24. ides r f S21 2113 doivent tre color es dans un d lai de 4 6 semaines apr s la coupe et stock es temp rature ambiante 20 25 C Apr s avoir effectu les coupes les lames doivent tre incub es pendant 12 18 heures une nuit 37 C Les coupes qui requi rent davantage d adh rence peuvent tre incub es 60 C pendant une heure de plus Param tres par d faut du protocole Le kit Leica Bond Oracle HER2 IHC System et le syst me enti rement automatis de marquage Bond Leica fournissent un d masquage d pitopes r guli re et coh rente et des incubations contr l es de r actifs permettant des r sultats reproductibles Les param tres par d faut suivants sont utilis s avec le kit Leica Bond Oracle HER2 IHC System e _ D paraffinage bord Dewax e D masquage d pitopes avec r gulation HIER 25 min avec ER1 97 e Incubations de r actifs contr les IHC Protocol H Pour plus de d tails sur le protocole du kit Leica Bond Oracle HER2 IHC System veuillez consulter le document du mode d emploi 10 Guide d interpr tation du Bond Oracle HER2 IHC System Formol 10 neutre Processus de routine par Inclure dans de la tamponn FNT pendant alcools xyl ne et paraffine 6 48 heures selon paraffine l chantillon Stockage lt lt STEEL LE lt lt Coupes Tr marquage Incuber les coupes Coupes entre 3 et 5 ym sous 4 6 semaines UNE NUIT 37 C puis 1 h 60 C Utiliser
25. imis e pour marquer les pith liums canalaires Le vu normaux une intensit de 0 1 Mas g E e Sil pith lium canalaire normal montre un marquage gt 1 le 1 si PR 7 ir F L ke a Cr dosage doit tre r p t A Fa sh r e Les cellules qui subissent des changements en colonne TaT FLE peuvent exprimer HER2 un niveau lev F i Grossissement x20 B Epith lium mammaire normal Carcinome canalaire in situ CCIS E Cas n 2 L valuation initiale des carcinomes invasifs versus CCIS par H amp E est une tape essentielle dans un dosage efficace d HER2 Malgr un pourcentage lev de cas de marquages CCIS positive pour HER2 ils ne doivent pas tre rapport s pour l immunoth rapie avec Herceptine Grossissement x10 Tumeur mammaire CCIS E Cas n 3 Pour les cas qui contiennent la fois des composants CCIS et invasifs seul le composant invasif doit tre interpr t et rapport pour l immunoth rapie avec Herceptine CCIS avec composants invasifs Grossissement x10 E Tumeur mammaire avec CCIS et composants invasifs 15 Profils des tumeurs Marquage interpr ter Carcinome mammaire invasif 0 Aucun marquage n est observ ou un marquage de la membrane est observ dans moins de 10 des cellules tumorales E Cas n 1 LS ss o TDF ra aP E e a G i d a2 i o E Le CLR GE nU 26 Foon 4 Grossissement x20
26. ire de contr le 1 Interpr tation des lames de test 1 Invasif ou CCIS 2 Quel pourcentage de marquage tumoraux 3 Quelle est l intensit 4 Des artefacts Voir mode d emploi guide d interpr tation et Guide de notation Sign au nom de Leica Biosystems Formateur A EEE E Signature a E ETE Nom et titre Sign par l utilisateur final Stagiaire E A EE E AE EEE AE E TTE Signature POTEO PE E E E EEE Nom et titre Veuillez garder une copie de cette liste de contr le et le certificat d e Learning pour chaque stagiaire dans vos dossiers de formation 25 www LeicaBlosystems com LEICA BIOSYSTEMS Leader mondial de solutions de gestion du flux de travail Leica Biosystems offre aux laboratoires et instituts de recherche sp cialis s en histopathologie une gamme compl te de produits performants dans le domaine de l anatomo pathologie Avec des syst mes d histologie complets int grant des solutions d automatisation innovantes les r actifs Novocastra et les consommables Surgipath Leica Biosystems propose pour chaque t che sp cifique en histopathologie le produit ad quat et pour l ensemble du laboratoire des solutions de gestion de flux de travail hautement productives Leica Biosystems une soci t internationale dot e d un solide r seau de service apr s vente dans le monde entier Assistance commerciale et client le Am rique du Nord Am rique du Nord
27. isateur Les canaux galactophores normaux n tant pas associ s une tumeur peuvent constituer une r f rence pour la validit du test En cas de marquage sp cifique dans le tissu de contr le n gatif interne les r sultats des chantillons du patient doivent tre consid r s comme non valides Grossissement x20 Le contr le positif en interne illustr est une tumeur mammaire invasive quivoque 2 Grossissement x20 Le composant de contr le n gatif en interne utilis dans ce cas est adipeux avec des cellules stromales adjacentes la tumeur mammaire invasive Les cellules adipeuses et les cellules stromales ne sont pas marqu es d montrant l absence de r activit crois e avec ces composants cellulaires normaux Un bloc de contr le multitissulaire contenant des tumeurs et repr sentant les quatre degr s de HER2 peut galement tre utilis de fa on efficace comme un mat riel de contr le interne appropri 9 Manipulation des chantillons Des carts des proc dures relatives la manipulation des chantillons et au traitement peuvent compromettre les performances du dosage HER2 Les variables qui peuvent alt rer les performances du dosage sont les suivantes e S chage des sp cimens avant la fixation e Type de fixateur e Temp rature ge stockage et pH du fixateur e Dur e de la fixation taille de l chantillon par rapport au volume de fixateur taille de l chantillon lui m me e Temps
28. la tumeur ne doit pas tre interpr t e Le reste de la tumeur montre une bonne conservation de la prot ine HER2 et est interpr t comme 3 21 Artefact de retraction Un artefact de r traction est la s paration des lots tumoraux du tissu stromal environnant ce qui entra ne l agr gation ou la liaison non sp cifique du chromog ne aux surfaces cellulaires d tach es Causes Un artefact de r traction est g n ralement caus par une fixation et un traitement inappropri s de l chantillon de tissu Toutefois cet artefact doit tre interpr t avec prudence Dans des cas particuliers une perte d adh rence cellulaire due une pathologie sous jacente par exemple la perte ou la r gulation n gative des mol cules d adh sion cellulaire peut entrainer la s paration de la tumeur des structures environnantes imitant cet artefact Conseil pour l interpr tation Dans les coupes color es par IHC les artefacts de r traction se pr sentent souvent comme de grands d p ts diffus adh rant aux surfaces des cellules stromales et tumorales adjacentes 22 Guide d interpr tation du kit Bond Oracle HER2 IHC System Grossissement 40x Tumeur mammaire Coupe color e H amp E montrant des artefacts de r traction noter le d tachement des cellules tumorales des surfaces stromales environnantes F E i F kN Grossissement 40x Tumeur mammaire Marquage Kit Oracle HER2 IHC montrant une agr gation non sp
29. lling EMBO J 1997 Apr 1 16 7 1647 55 7 Perez EA Suman VJ Davidson NE et al HER2 testing by local central and reference laboratories in specimens from the North Central Cancer Treatment Group N9831 intergroup adjuvant trial J Clin Oncol 2006 Jul 1 24 19 3032 8 3 Algorithme de test du HER2 L valuation de premi re ligne des chantillons de patients au moyen du kit Leica Bond Oracle HER2 IHC System est utilis e pour d terminer les niveaux d expression de l oncoprot ine HER2 par l interm diaire de l intensit de marquage immunopathologique IHC 0 1 2 et 3 Les cas pr sentant des marquages faiblement positifs 2 peuvent tre consid r s comme quivoques et renvoy s un test d hybridation in situ HIS Interpr tation des r sultats HER2 IHC 0 1 2 3 N gatif N gatif quivoque Fortement positif faiblement positif HER2 HIS N gatif Positif Non amplifi Amplifi Rapport l quipe d oncologie comme positif pour envisager un traitement l Herceptine 4 Guide d interpr tation du Bond Oracle HER2 IHC System Expression de l oncoprot ine HER2 d termin e par immunohistochimie Les tests HER2 utilisant l IHC ciblent l oncoprot ine HER situ e sur la membrane cellulaire Le kit Leica Bond Oracle HER2 IHC System utilise un anticorps primaire sp cifique de la cible pour marquer la prot ine HER2 Cet anticorps est ensuite visualis l aide d un syst me de d tection Compact
30. nnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnennnnnnnnnnnn 14 Oracle HER2 Profiling dans des HIMBUrRS aie aransasinre ss sense nets era 14 Profils des tumeurs Marquage ne pas rapporter sisi 15 Profils des tumeurs Marquage rapporter iii 16 A CL REC LS de marae aa aan ae a a E de E EAA 20 Syst me de suivi des dONN ES enr eenininsnen ner nee se nnsesnensne seen Ennen nenna 23 Kit Leica Bond Oracle HER2 IHC System Liste de contr le s snsnenenunununnnnnnnnununununnnnnnununennnnnna 24 Kit Leica Bond Oracle HER2 IHC System Le kit Leica Bond Oracle HER2 IHC System est un dosage semi quantitatif immunohistochimique qui permet de d terminer le statut des oncoprot ines HER2 r cepteur 2 du facteur de croissance pidermique humain dans les tissus de cancer du sein humain pr par s pour une valuation histologique Le kit Leica Bond Oracle HER2 IHC System est indiqu comme aide l valuation des patients pour lesquels un traitement l Herceptin trastuzumab est envisag voir la notice de l Herceptin Les d cisions relatives au traitement l Herceptin doivent tre prises dans le contexte des ant c dents cliniques du patient Le kit Leica Bond Oracle HER2 IHC System contient les composants n cessaires la r alisation d une proc dure de marquage immunohistochimique pour des tissus fix s au formol et inclus dans de la paraffine Selon l incubation avec l anticorps primaire HER2 clone CB11 ce syst me a
31. pplique la technologie Compact Polymer pr te l emploi La conversion enzymatique du chromog ne ajout par la suite la formation d un produit de r action visible sur le site antig nique Les coupes de tissus sont contre color es d shydrat es lav es et mont es Les r sultats sont interpr t s en utilisant la microscopie fond clair Des lames de contr le comprenant quatre lign es cellulaires de cancer du sein humain fix es au formol et incluses dans de la paraffine sont fournies pour valider les marquages Les quatre lign es cellulaires montrent l expression de l oncoprot ine HER2 aux intensit s 0 1 2 et 3 L intensit de marquage de ces lign es cellulaires a t corr l e la fois la charge du r cepteur de l oncoprot ine HER2 par cellule et au statut du g ne du HER2 Donnees de concordance Des donn es cliniques fiables coh rentes etsemi quantitatives du HER2 n cessitent un dosage hautement reproductible r alis avec pr cision et qui forme un syst me complet L valuation de la qualit en externe au niveau de l immunohistochimie du HER2 confirme les avantages de l utilisation d un syst me standardis sur une alternative d analyse d velopp e en interne De nombreux tests durant les cycles entre les processus entre laboratoires et entre observateurs ont montr des taux exceptionnellement lev s de reproductibilit pour le kit Leica Bond Oracle HER2 IHC System La fabrication compl te des composants
32. pulation fixation et traitement des tissus Q Calendrier appropri e de fixation au formol et de traitement voir IFU Q Coupes de 3 5 um Q S chage et adh rence suffisants 24 Guide d interpr tation du kit Bond Oracle HER2 IHC System Procedure DU LU O V rifier les r actifs en vrac les d chets dangereux et non dangereux Enregistrer les composants du Leica Bond Oracle HER2 IHC System sur Leica BOND Configurer les profils d tiquettes Configurer un cas Configuration optimale des lames et de la disposition pour l utilisation la plus efficace du syst me de r f rence Tableau 3 Leica Bond Oracle IHC System IFU Contr le de la qualit ODO L importance des composants de contr le positifs et n gatifs L importance des contr les de tissus en interne L importance de l utilisation de lign es cellulaires de contr le soulignant les lign es cellulaires 1 et 2 L importance de toujours utiliser des nouveaux Covertiles Leica BOND Universal Interpr tation Utiliser des lames color es dans le cycle de formation sur un ensemble pr color D Justification de l ordre d interpr tation des lames l ordre dans lequel les lames doivent tre interpr t es voir IFU Examen du tableau 4 IFU Interpr tation du marquage HER2 Que peut on attendre des lames des cellules de contr le du Leica Bond Oracle HER2 IHC System Q Attention particuli re marquage de la bordure en brosse de la lign e cellula
33. ruit de fond non sp cifique par l association de la peroxydase de raifort HRP avec des composants polym res du syst me de d tection Contr le n gatif d HER2 Le kit Leica Bond Oracle HER2 IHC System contient une IgG de souris pr te l emploi la m me concentration que l anticorps primaire HER2 Il est important d utiliser un anticorps de contr le n gatif pour chaque patient afin de confirmer l absence de r activit crois e du syst me de d tection avec des cellules composants cellulaires sp cifiquement cibl s Anticorps Primaire HER2 Le kit Leica Bond Oracle HER2 IHC System contient l anticorps monoclonal de souris anti HER2 clone CB11 purifi par affinit sous un format enti rement optimis et pr t l emploi Le Clone CB11 d velopp l origine par Corbett et al fabriqu exclusivement par Leica Biosystems Newcastle Ltd est dirig contre le domaine interne de l oncoprot ine HER2 Le suivi des performances du kit Leica Bond Oracle HER2 IHC System dans un essai clinique conforme la FDA a montr un degr lev de concordance avec le kit Dako HercepTest en utilisant les directives d interpr tation commerciales recommand es R sultat du Dako 2x2 R sultat de l Oracle 2x2 N gatif 269 292 La concordance du kit Leica Bond Oracle HER2 IHC System pour le statut d amplification g nique de l HER 2 tel qu valu par hybridation fluorescente in situ Vysis PathVysion a montr une concordance
34. tes atteintes de cancer du sein invasif doivent tre not s Dans les cas de carcinome in situ et de carcinome invasifs trouv s dans le m me chantillon seule la composante invasive doit tre not e Directives de notation du Leica Oracle HER2 IHC Intensit de marquage immunohistochimique Score valuation Aucun marquage n est observ ou un marquage de la membrane est observ dans moins de 10 N gatif des cellules tumorales 0 ega Un marquage faible peine perceptible de la membrane est d tect dans plus de 10 des cellules tumorales 1 N gatif Les cellules ne sont marqu es que sur une partie de leur membrane Un marquage de faible mod r de toute la membrane est observ dans plus de 10 des cellules 24 quivoque tumorales faible positif Un marquage de forte intensit de la membrane est observ e dans plus de 10 des cellules a 3 Fortement positif tumorales Le kit Leica Bond Oracle HER2 IHC System n est pas con u pour fournir des pronostics au patient ou au m decin et n a pas t valid pour cette fonction Pour chaque valuation de marquage les lames doivent tre examin es dans l ordre pr sent ci dessous afin de d terminer la validit du processus de marquage et de permettre une valuation semi quantitative de l intensit de marquage du tissu de l chantillon Lames de Contr les HER2 Contr le positif en interne 1 2 3 Contr le n gatif en interne 4 Tissu du p
35. umeur r sultant en une fixation sous optimale des prot ines Cet artefact doit tre interpr t avec prudence car une perte d expression HER2 au centre de la tumeur peut galement tre associ e une r gulation cellulaire n gative de l oncoprot ine HER2 associ e la croissance tumorale E Artefact de bord en rapport avec la manipulation Une mauvaise morphologie cellulaire au bord des tissus produit des motifs de marquage qui sont difficiles interpr ter Causes Souvent caus par une mauvaise manipulation des chantillons au cours de la phase pr analytique ce qui est le plus fr quent lors des microbiopsies st r otaxiques au trocart cet artefact peut tre observ la fois dans des pr parations H amp E et IHC Conseils pour l interpr tation S assurer que l interpr tation et l valuation sont effectu es sur les r gions tumorales montrant une morphologie optimale Eviter les zones qui pr sentent des noyaux cras s et des dommages cellulaires 20 Guide d interpr tation du kit Bond Oracle HER2 IHC System Artefacts de bord li s la manipulation Coupe marqu e H amp E illustrant des noyaux cras s et une morphologie endom mag e du tissu conjonctif Noter le d p t intense d h matoxy line dans des noyaux se chevauchant suite l crasement des tissus a na zl z i L i i n E j i ms 4 Re NS UT PA f Grossissement x20 Tumeur mammaire Artefacts
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