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104001 OXOID LEAFLET V2:91693_OXOID LEAFLET

1. Die Spezifit t betrug 100 von Caseinpepton Sojamehlpepton CASO Agar mit Schafblut und 98 von Mueller Hinton Agar Ein ausreichendes Inokulum war schwieriger von Mueller Hinton Agar zu erhalten Das zweite Labor testete 212 Methicillin resistente und 203 Methicillin 26 1 11 08 22 Page 2 sensible St mme mit einer Sensitivit t von 99 5 und einer Spezifit t von 99 5 von Columbia Agar mit Schafblut 4 Reproduzierbarkeit 10 verschiedene gut charakterisierte S aureus St mme 3 MRSA 3 MSSA 3 BORSA und 1 MODSA wurden an 3 Laboratorien in verschiedenen Regionen verschickt Hierbei erhielt jedes Labor jeden Stamm 5 Mal als codiertes anonymisiertes Isolat Alle 150 Ergebnisse erbrachten das erwartete Resultat f r 100 Reproduzierbarkeit Die 3 mecA positiven St mme ergaben bei jedem Test ein positives Ergebnis 45 45 Tests Die 3 MSSA sowie die 3 BORSA ergaben bei jedem Test ein negatives Ergebnis 90 90 Tests Der MODSA Stamm mit einer MHK von 16ug ml Oxacillin ergab jedesmal das erwartete negative Ergebnis mit dem Oxoid Latex Test 15 15 Tests FR TEST LATEX PLP Test au latex pour la d tection des Prot ines Liant la P nicilline PLP2 DRO900 Ce kit d tecte les PLP ou PBP2a sur les isolats de Staphylococcus pour l identification des Staphylococcus aureus r sistants la p nicilline SARM et pour les staphylocoques coagulase n gative m ticilline r sistant PRINCIPE DU TEST Les Staphylocoques sont une c
2. Le test PLP doit tre utilis uniquement sur les staphylocoques cocci gram Une coagulase ou un test quivalent doit tre fait pour d terminer s il s agit d un S aureus ou d une autre esp ce de staphylocoque Pr paration de l inoculum Pour aureus le test peut tre fait partir de colonies isol es sur la premi re bo te d isolation si la pousse est suffisante ou partir d une subculture Les autres micro organismes pr sents sur la bo te n ont pas montr d interf rences avec le test Pour les staphylocoques coagulase n gative une induction est n cessaire pour avoir une production suffisante de PLP 1 Pr parer un bouillon du germe tester quivalent 1 McFarland et ensemencer en nappe sur une g lose Tryptone soja au sang Columbia au sang ou Mueller Hinton Une autre possibilit est d ensemencer la bo te en 4 quadrants 2 Placer un disque d oxacilline 1ug ml sur la bo te l endroit o il y a le plus de germes pour la m thode des quadrants 3 Incuber 37 C pendant au moins 24h mais pas plus de 48h Attention Pour viter d avoir de faux n gatifs ne pas faire le test si inoculum est trop faible MODE DEMPLOI Extraction des PLP 1 Ajouter 4 gouttes de r actif d extraction 1 dans un microtube 2 Environ 1 5x10 3 5yl cellules doivent tre test es Il est possible d utiliser une oese st rile de 5ul et d en remplir le diam tre int rieur avec les colonies Il est aussi possib
3. aureus provenienti da tre diverse aree geografiche Tre laboratori hanno esaminato un gruppo di ceppi problematici di S aureus collezionati precedentemente e hanno confrontato i risultati ottenuti con il test PBP con quelli forniti dai metodi standard NCCLS per la determinazione degli MRSA Sono stati saggiati in totale 724 ceppi a partire da TSA con sangue La sensibilit di PBP Test Oxoid stata del 98 5 e la specificit pari al 100 La sensibilit del test con agar screen e la determinazione della MIC risultata rispettivamente del 98 7 e del 99 2 la specificit rispettivamente del 90 0 e dell 88 7 Sono stati esaminati separatamente anche due ceppi MODSA entrambi hanno fornito risultato negativo al test di agglutinazione al lattice 3 Saggio di stafilococchi coagulasi negativi Due laboratori hanno saggiato ceppi di stafilococchi coagulasi negativi dopo induzione con il disco di oxacillina Un laboratorio ha esaminato 115 ceppi meticillino resistenti e 45 meticillino sensibili inclusi 58 isolamenti clinici freschi La sensibilit risultata pari al 96 5 per i ceppi isolati su TSA Sangue e del 95 6 per quelli cresciuti su Mueller Hinton La specificit stata del 100 per i ceppi isolati su TSA sangue e del 98 per quelli cresciuti su Mueller Hinton L ottenimento di un inoculo pesante risultato pi difficoltoso su Mueller Hinton Agar ll secondo laboratorio ha esaminato 212 ceppi meticillino resistenti e 203 cep
4. considered methicillin resistant regardless of the PBP assay results PERFORMANCE CHARACTERISTICS 1 The Oxoid Penicillin Binding Protein Latex Agglutination Test has been evaluated in four geographically diverse laboratories with fresh clinical isolates of Staphylococcus aureus 201 isolates were tested with NCCLS methods and with the Oxoid PBP test from each of three media One weak false positive Oxoid Latex reaction negative on repeat was found from TSA with blood All positive reactions were strong except 3 weak but positive reactions from Mueller Hinton Agar The sensitivity of the Latex test in detecting MRSA on each medium was 100 the specificity was 99 for TSA with blood and 100 for tests from all other media Results of testing of 201 fresh clinical isolates of S aureus from 4 laboratories MRSA BORSA MSSA No tested 68 3 130 Growth on Oxacillin Salt Agar NCCLS 68 0 0 MIC gt 4ug ml NCCLS 68 0 0 Positive Latex from TSA Blood 68 0 1 1 Positive Latex from Columbia Blood 68 0 0 Positive Latex from Mueller Hinton 68 3 0 0 A MICs were 2ug ml and mecA was negative Number of weak reactions shown in parentheses 2 Testing of challenge strains of S aureus in three geographically distinct areas Three laboratories each examined a set of previously collected challenge strains of S aureus and compared the PBP results to the NCCLS methods of determination of MRSA A total of 724 strains were tested from TSA with
5. 90 C y deje que se caliente durante tres minutos 4 Saque el tubo y permita que se atempere 5 A ada una gota de Reactivo de Extracci n 2 y mezcle bien 6 Centrifugue a 1 500 G durante cinco minutos p e 3 000rpm con un radio de rotaci n de 15cm o 4 500 rpm con un radio de rotaci n de 4 5cm Utilice el sobrenadante para la prueba Procedimiento de la Aglutinaci n de L tex 1 Para cada prueba a realizar marque un c rculo de la tarjeta de reacci n para el L tex Reactivo y otro para el L tex de Control 2 Coloque 50ul de sobrenadante en el c rculo correspondiente y a ada una gota del L tex Reactivo Mezcle bien con un palito mezclador 3 De la misma manera coloque 50ul de sobrenadante en el otro c rculo correspondiente al control y a ada una gota del L tex de Control M zclese bien con un palito mezclador 4 Imprima un movimiento giratorio a la tarjeta durante tres minutos y observe la aparici n de aglutinaci n en condiciones normales de iluminaci n 5 Deseche la tarjeta de acuerdo con las normas de bioseguridad en un recipiente con desinfectante LECTURA E INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS Aglutinaci n en 3 minutos con el L tex Reactivo PBP2 Positivo MRSA y no con el L tex de Control No Aglutinaci n con ninguno de los L tex en 3 minutos Aglutinaci n en 3 minutos s lo con el L tex de Control PBP2 Negativo MSSA Indeterminado Intensidad de la reacci n de aglutinaci n Negativa s
6. acid Avoid direct contact by wearing suitable protective equipment If the material comes into contact with the skin mucous membranes or eyes immediately wash the area by rinsing with plenty of water STORAGE Store the kit at 2 8 C Under these conditions the reagents will retain their reactivity until the expiry date shown on the box CONTROL PROCEDURES For each new lot of the kit and weekly thereafter the following control procedures must be performed 1 Positive Control Use a known MRSA strain such as ATCC 43300 Oxoid Culti Loops CL9022 Follow the method given in the test procedure Ensure that agglutination occurs within 3 minutes 2 Negative Control Use a known Methicillin Sensitive Staphylococcus aureus MSSA strain such as ATCC 25923 or ATCC 26 1 11 08 22 Page 1 29213 Oxoid Culti Loops CL7010 or CL7011 Follow the method given in the test procedure Ensure that no agglutination occurs within 3 minutes Do not use the test if reactions with the control organisms are incorrect 3 Do not use kits beyond their expiry date IMPORTANT PROCEDURE NOTE Do not allow the reagents to become contaminated by allowing the dropper tip to touch the specimen on the reaction card Ensure that the caps are securely fitted after use to prevent contamination and drying out of the reagents After use return the kit to the refrigerator ensuring that the bottles are stored in an upright position PREPARATION OF CULTURE Colonies may
7. aglutinaci n de l tex para detectar PBP tambi n denominada PBP2a en aislados de Staphylococcus dise ado para la identificaci n de Staphylococcus aureus meticilin resistentes y estafilococos coagulasa negativos meticilin resistentes PRINCIPIOS DE LA PRUEBA Los estafilococos son una de las causas m s frecuentes de infecciones nosocomiales y extrahospitalarias en todo el mundo En muchos hospitales entre el 25 y el 50 de los aislados de aureus y el 75 de los de estafilococos coagulasa negativos son resistentes a meticilina Los MRSA suponen un problema sanitario especialmente importante debido a la facilidad con la que determinadas razas epid micas se extienden y colonizan pacientes debilitados El tratamiento de los aislados sensibles con penicilinas resistentes a la penicilinasa PRP es de elecci n puesto que los antibi ticos betalact micos tienen una buena distribuci n a los tejidos producen menos complicaciones terap uticas y no seleccionan microorganismos resistentes a vancomicina La identificaci n correcta y fiable de la resistencia a meticilina es por tanto de capital importancia Las razas de S aureus con sensibilidad reducida a las PRP se clasifican en las siguientes categor as i S aureus meticilin resistente MRSA del ingl s methicillin resistant S aureus que produce la prote na fijadora de penicilina de baja afinidad PBP2 codificada por el gen mecA ii S aureus de resistencia incierta a met
8. blood The sensitivity of the Oxoid PBP test was 98 5 and the specificity was 100 Sensitivities of the agar screen and MIC methods were 98 7 and 99 2 and specificities were 90 0 and 88 7 Two strains of MODSA were also tested separately both strains gave a negative result with the Latex test 3 Testing Coagulase negative staphylococci Two laboratories tested coagulase negative staphylococci for PBP after induction with oxacillin discs One laboratory tested 115 methicillin resistant strains and 45 methicillin susceptible strains including 58 fresh clinical isolates The sensitivity was 96 5 for testing from TSA blood and 95 6 for Mueller Hinton Agar The specificity was 100 from TSA blood and 98 from Mueller Hinton Agar Obtaining a good inoculum was more difficult with Mueller Hinton Agar The second laboratory tested 212 methicillin resistant strains and 203 methicillin susceptible strains with a sensitivity of 99 5 and specificity of 99 5 using growth on Columbia Agar for the inoculum 4 Reproducibility Ten different well characterised S aureus strains 3 MRSA 3 MSSA 3 BORSA and 1 MODSA were sent to three geographically diverse laboratories with each strain submitted 5 times in a coded and blinded fashion All 150 test results agreed with the expected results for 100 reproducibility The three mecA positive strains were positive each time they were tested 45 45 tests The three MSSA and the three BORSA strains gave nega
9. borderline methicillin resistant S aureus BORSA la cui resistenza generalmente attribuita alla iperproduzione di beta lattamasi di tipo A e iii ceppi con PBP modificata in seguito ad alterate capacit di legare la penicillina o alla iperproduzione di PBP MODSA ceppi MODSA sono stati isolati solo raramente e la loro risposta clinica al trattamento con beta lattamici non e stata ancora ben studiata Da ci si evince che per le applicazioni cliniche a parte alcune eccezioni la presenza di PBP responsabile della resistenza alla meticillina nel trattamento delle infezioni sostenute da S aureus e da stafilococchi coagulasi negativi metodi tradizionali di identificazione dei ceppi MRSA che sono basati sui test standard di sensibilit agli antibiotici spesso si rivelano inaffidabili a causa della variabilit delllespressione fenotipica della resistenza in vitro L accuratezza della valutazione della resistenza alla meticillina pu infatti subire delle variazioni a seconda delle dimensioni dell inoculo dei tempi e della temperatura di incubazione del pH e della concentrazione di sali nel terreno e da altri fattori Inoltre questi metodi colturali richiedono 24 ore di incubazione per ottenere risultati accurati Gli stafilococchi coagulasi negativi spesso producono quantit di PBP inferiori e richiedono di essere indotti con esposizione ad una delle PRP al fine di produrre una quantit sufficiente di proteina che
10. ne consenta la rilevazione La metodica di rilevazione del gene mecA grazie alla sua accuratezza considerata il gold standard per la determinazione della resistenza alla meticillina risulta tuttavia laboriosa e dal costo elevato Il test di agglutinazione al lattice PBP Oxoid ha il vantaggio di rilevare direttamente la proteina PBP in tempi rapidi e con minimo sforzo Il test pu risultare potenzialmente anche pi accurato della rilevazione del gene mecA perch evita il rischio di risultati falsi positivi forniti da ceppi che possiedono il gene ma non sono in grado di sintetizzare la proteina Il test PBP Oxoid stato precedentemente valutato in tutto il mondo dimostrando le sue elevate caratteristiche di sensibilit e specificit Le particelle di lattice sensibilizzate con un anticorpo monoclonale specifico per la PBP reagiscono in maniera specifica con ceppi di stafilococco resistenti alla meticillina determinando un agglutinazione visibile ad occhio nudo MATERIALI COMPRESI NEL KIT DRO901 Test Latex Reagente al lattice sensibilizzato con anticorpo monoclonale specifico per la PBP2 DR0902 Control Latex Reagente al lattice di controllo sensibilizzato con un anticorpo monoclonale della stessa sottoclasse IgG specifico per una proteina umana non reattivo nei confronti di S aureus DR0903 Extraction Reagent 1 Reagente per la prima estrazione DRO0904 Extraction Reagent 2 Reagente per la seconda es
11. o de ebullici n o bloque t rmico Centr fuga 1500 x G Tubos de microcentrifuga con cierre de seguridad Desinfectante de laboratorio adecuado PRECAUCIONES Este producto es para uso in vitro exclusivamente El tiempo de calentamiento debe ser de tres minutos Por encima de cinco minutos disminuye la sensibilidad Si es de un minuto o menos se pueden producir aglutinaciones inespec ficas Al recoger el sobrenadante para la prueba tras la centrifugaci n se debe evitar aspirar o recoger con la punta de la pipeta material s lido del fondo del tubo ya que ste podr a producir aglutinaciones inespec ficas Los reactivos de l tex se deben agitar hasta conseguir una suspensi n homog nea antes de su uso Los reactivos contienen un 0 095 de azida s dica como conservante La azida s dica es t xica y puede reaccionar con las ca er as de plomo o cobre y producir azidas met licas que son explosivas por detonaci n de contacto Para evitar la acumulaci n de azidas en las ca er as de los desag es se debe dejar correr un volumen abundante de agua tras el vertido del material de desecho Puesto que las muestras pueden contener microorganismos pat genos se deben manipular con las precauciones adecuadas El procedimiento de extracci n puede no matar a las bacterias y por tanto el extracto se debe manipular con las mismas precauciones Los Reactivos de Extracci n 1 y 2 contienen un irritante ligero y un cido d bil Se debe ev
12. 010 ou CL7011 Suivre la m thode mentionn e dans la section Mode d emploi S assurer qu aucune agglutination n appara t en 3 minutes 3 Ne pas utiliser le test si les r actions de contr le sont incorrectes 4 Ne pas utiliser les coffrets apr s la date de p remption NOTE IMPORTANTE Ne pas contaminer le r actif en touchant l chantillon sur la carte de r action avec embout du compte gouttes S assurer que les bouchons sont bien viss s apr s utilisation pour pr venir toute contamination ou dess chement des r actifs Apr s utilisation replacer le coffret au r frig rateur en position verticale Recueil et pr paration des chantillons Le test doit tre r alis partir de colonies isol es sur l un des milieux g los s suivants G lose Columbia 5 de sang de mouton Mueller Hinton Tryptone soja 5 de sang de mouton Il est recommand d utiliser des cultures fra ches 18 24 heures N anmoins des cultures de 24h 48h peuvent tre test es si n cessaire Les performances indiqu es dans cette notice faisant partie de la validation FDA ont t g n r es partir de ces milieux D autres donn es montrent que le test est galement valide avec des colonies de aureus cultiv s sur Tryptone soja et Columbia 5 de sang de cheval g lose Iso Sensitest et DSTA Ces milieux sont couramment utilis s en Europe mais pas en Am rique du Nord ou ont t g n r es les tudes relatives aux performances
13. 104001 OXOID LEAFLET V2 91693 OXOID LEAFLET PENICILLIN BINDING PROTEIN PBP2 LATEX AGGLUTINATION TEST DRO900 EN ES DE FR IT CS esk n vod k pou it je k dispozici na webov ch str nk ch spole nosti Oxoid na adrese www oxoid com V sti N vody k pou it zadejte k d X podrobn daje naleznete na t tku l hve M ete se t obr tit na m stn ho distributora DA Der f s en dansk brugervejledning p Oxoids webside www oxoid com afsnittet Instructions For Use indtastes X koden se flaskens etiket vedr rende detaljer Alternativt kontaktes den lokale distribut r EL O1 Odny ec xp ons ornv c nvik yAwooa iat evta i OTNV 1I0TOOE MODA TnG Oxoid www oxoid com 2Tnv ev rnTa Instructions For Use Odny ec Xp on TTANKTPOAOYAOTE TOV KWOIK X AVATP TE OTNV EEWTEPIKA ouvokevac a YIA Aerrrop pelec EVadAaKTIK ETIKOIVWV OTE ME TOV TOTTIK DIQVOH G NO Norsk brukerveiledning er tilgjengelig p Oxoids nettsted www oxoid com Legg inn X koden under Instructions For Use se flaskeetiketten for flere opplysninger Alternativt kan du kontakte din locale forhandler PL Polska instrukcja dost pna jest na stronie internetowej Oxoid www oxoid com W cz ci Instrukcja u ycia wprowad kod X informacje szczeg towe podano na etykiecie butelki Alternatywnie nale y skontaktowa si z lokalnym dystrybutorem PT P
14. 4500rpm at 4 5cm rotation radius Use the supernatant for the test Latex Agglutination Procedure 1 For each supernatant to be tested label one circle of the test card for testing with Test Latex and another for testing with Control Latex 2 Mix the Latex reagents well by inversion several times and add one drop of Test Latex or Control Latex to each labelled circle 3 Place 50ul of supernatant on the Test circle and the Control circle being careful to avoid the pellet Mix the latex and supernatant in each circle thoroughly with a mixing stick 4 Pick up and rock the card for up to three minutes and look for agglutination under normal lighting conditions Record the results of the test and control reactions 5 Dispose of reaction card safely into disinfectant or infectious waste READING AND INTERPRETATION OF RESULTS Agglutination is seen with Test but not Control Latex within 3 minutes No agglutination in either Latex Reagent within 3 minutes Agglutination is seen with the Control Latex within 3 minutes O O1 BR PBP2 Positive MRSA PBP Negative MSSA Indeterminate Strength of agglutination reaction Negative a homogeneous suspension of particles with no visible clumping Weak positive small but definite clumps against a clouded background Strong positive large and small clumps against a slightly clouded background or large clumps against a very clear background NB Occasionally negative reactions
15. INATION TEST DRO900 APPLICAZIONI Il kit consente di evidenziare la presenza della proteina penicillin binding protein PBP nota anche come PBP2a in Staphylococcus spp fornendo un criterio per l identificazione sia di Staphylococcus aureus resistente alla meticillina MRSA Methicillin Resistant Staphylococcus aureus sia degli stafilococchi coagulasi negativi resistenti alla meticillina PRINCIPIO DEL TEST Gli stafilococchi sono tra le principali cause di infezioni ospedaliere e di comunit in tutto il mondo In molti istituti una percentuale variabile tra il 25 ed il 50 dei ceppi di S aureus e una percentuale di circa il 75 dei ceppi di stafilococchi coagulasi negativi risulta resistente alla meticillina Un fattore particolarmente preoccupante la facilit con cui alcuni ceppi MRSA si diffondono e colonizzano i pazienti debilitati Per il trattamento dei ceppi sensibili alla meticillina preferibile usare le penicilline resistenti alla penicillinasi PRP perch sono assorbite pi facilmente nei fluidi e tessuti corporei causano minori complicanze terapeutiche ed evitano di selezionare ceppi resistenti alla vancomicina E quindi evidente l importanza della corretta identificazione dei ceppi resistenti alla meticillina ceppi di S aureus con ridotta sensibilit alle PRP sono suddivisi come segue i S aureus meticillino resistente MRSA che produce PBP a bassa affinit codificata dal gene mecA ii
16. Latex Testreagenz aber nicht des Kontrollreagenz innerhalb 3 Minuten Keine Agglutination in beiden Reagenzien Innerhalb 3 Minuten Agglutination mit dem Kontrollreagenz innerhalb 3 Minuten O O1 ag PBP2 Positiv MRSA oder MR KNS PBP2 Negativ MSSA oder MS KNS Nicht auswertbar Anmerkung Negative Reaktionen k nnen gelegentlich leicht feink rnig oder f dig erscheinen In diesen F llen sollte das Aufklaren des Hintergrundes als Entscheidungskriterium herangezogen werden Ein opaker Hintergrund weist auf eine negative Reaktion ein Aufklaren des Hintergrundes auf eine positive Reaktion hin TESTBESCHR NKUNGEN 1 Nicht auswertbare Ergebnisse sollten mit einem frischen Extrakt erneut getestet werden Tritt erneut eine nicht auswertbare Reaktion auf muss die Methicillin Resistenz mit einer anderen Methode bestimmt werden 2 Eine nicht ausreichende Menge an Koloniematerial kann zu einem falsch negativen Ergebnis f hren In diesem Fall sollte der Test mit ausreichend Koloniematerial wiederholt werden 3 Richtig positive Ergebnisse zeigen im allgemeinen einen starken Reaktionsausfall Falsch positive Ergebnisse wurden bislang selten beobachtet und wiesen generell eher schwache Reaktionen auf Solche Reaktionsausf lle k nnen durch einen erneuten Test einer frischen Kultur verifiziert werden 4 S aureus mit einer berproduktion an PBP s MODSA und Borderline resistente St mme von S aureus BORSA besitzen kein PBP und reagieren n
17. SA Anzahl getesteter St mme 68 3 130 Wachstum auf Oxacillin Salt Agar NCCLS 68 0 0 MHK gt 4ug ml NCCLS 68 0 0 Positiver Latex Test von CASO Agar mit Blut 68 0 1 1 Positiver Latex Test von Columbia Agar mit Blut 68 0 0 Positiver Latex Test von Mueller Hinton Agar 68 3 0 0 A MHK betrug 2ug ml und mecA war negativ 8 Anzahl der schwachen Reaktionen in Klammern 2 Untersuchung von S aureus St mmen in 3 geographisch unterschiedlichen Regionen Drei Laboratorien untersuchten zuvor gesammelte St mme von S aureus und verglichen die Ergebnisse des PBP2 Latex Test mit den NCCLS Methoden zur Bestimmung von MRSA Insgesamt wurden 724 St mme von Caseinpepton Sojamehlpepton CASO Agar mit Schafblut getestet Die Sensitivit t und Spezifit t des Oxoid PBP2 Latex Test betrug 98 5 und 100 Die Sensitivit ten der Agar Screen und MHK Methode betrugen 98 7 und 99 2 w hrend die Spezifit ten mit 90 0 und 88 7 ermittelt wurden Zus tzlich wurden 2 MODSA St mme untersucht Beide erbrachten ein negatives Ergebnis mit dem Latex Test 3 Untersuchung von koagulasenegativen Staphylokokken Zwei Laboratorien testeten koagulasenegative Staphylokokken auf PBP nach Induktion mit Oxacillin Testbl ttchen Ein Labor testete 115 Methicillin resistente und 45 Methicillin sensible St mme inklusive 58 frischer klinischer Isolate Die Sensitivit t betrug 96 5 von Caseinpepton Sojamehlpepton CASO Agar mit Schafblut und 95 6 von Mueller Hinton Agar
18. T As Instru es de Utiliza o est o dispon veis em Portugu s no website da Oxoid em www oxoid com Na sec o das Instru es de Utiliza o insira o c digo X consulte o r tulo do frasco para obter mais informa es Em alternativa contacte o distribuidor local SV En svensk bruksanvisning r tillg nglig p Oxoids webbplats www oxoid com Skriv in X koden i f ltet Bruksanvisning se flaskans etikett f r n rmare information Alternativt kan du kontakta din lokala distribut r BR PT As instru es em portugu s est o dispon veis no site da Oxoid www oxoid com Na se o Instru es de uso insira o c digo X consulte a embalagem externa para obter mais detalhes Como alternativa entre em contato com o seu distribuidor local EN PENICILLIN BINDING PROTEIN PBP2 LATEX AGGLUTINATION TEST DR0900 INTENDED USE This test is a rapid latex agglutination assay detecting PBP also called PBP2a in isolates of Staphylococcus as an aid in identifying methicillin resistant Staphylococcus aureus MRSA and methicillin resistant coagulase negative staphylococci PRINCIPLES OF THE TEST Staphylococci are a leading cause of nosocomial and community acquired infections worldwide In many institutions approximately 25 to 50 of S aureus strains and 75 of coagulase negative staphylococci CoNS are resistant to methicillin MRSA are of particular concern because of the ease
19. XOID PLP2 apr s induction avec un disque d oxacilline Un laboratoire a test 115 souches r sistant la m ticilline et 45 souches sensibles la m ticilline en incluant 58 souches issues de patients La sensibilit est de 96 5 avec le milieu Tryptone soja au sang et 95 6 avec le milieu Mueller Hinton La sp cificit est de 100 partir du Tryptone soja au sang et 98 avec le Mueller Hinton Obtenir un bon inoculum est plus difficile avec une g lose Mueller Hinton Le second laboratoire a test 212 souches r sistant la m ticilline et 203 souches sensibles la m ticilline avec une sensibilit de 99 5 et une sp cificit de 99 5 en utilisant une g lose Columbia pour la culture 4 Reproductibilit 10 souches diff rentes de S aureus bien caract ris es 3 SARM 3 SASM 3 BORSA et 1 MODSA ont t envoy es 3 laboratoires situ s dans 3 zones g ographiques diff rentes Chaque souche cod e a t test e en aveugle 5 fois L ensemble des 150 r sultats obtenus correspondaient ceux attendus avec une reproductibilit de 100 Les 3 souches MecA positive ont donn un r sultat positif chaque fois 45 45 tests Les 3 souches SASM et les 3 souches BORSA ont donn un r sultat n gatif chaque fois 90 90 tests La souche MODSA qui avait une CMI de 16ug ml Poxacilline a donn un r sultat n gatif avec le latex OXOID PLP2 comme attendu 15 15 tests IT PENICILLIN BINDING PROTEIN PBP2 LATEX AGGLUT
20. a auf diesen Platten konnte bisher nicht beobachtet werden Bei koagulasenegativen Staphylokokken muB vor Durchf hrung des Tests eine ausreichende Produktion des PBP induziert werden 1 Herstellen einer Suspension mit McFarland Standard von 1 und Ausstrich auf Caseinpepton Sojamehlpepton CASO Agar mit Schafblut Columbia Agar mit Schafblut oder Mueller Hinton Agar Alternativ k nnen die Platten auch mit mehreren Einzelkolonien in vier Quadranten ausgestrichen werden 2 Auflegen eines Oxacillin Testbl ttchens 1ug an einer Position an der rasenf rmiges Bakterienwachstum erwartet werden kann 3 Inkubation bei 37 C f r mindestens 24 aber nicht mehr als 48 Stunden Achtung um falsch negative Ergebnisse zu vermeiden kann der Test erst durchgef hrt werden wenn ausreichend Koloniematerial vorhanden ist F r den Test immer Kolonien verwenden die nahe um das Testbl tichen gewachsen sind DURCHF HRUNG Extraktionsverfahren 1 Jeweils 4 Tropfen Extraktionsreagenz 1 in ein Reaktionsgef B geben 2 F r den Test sollten ungef hr 1 5 x 10 3 5yl Zellen verwendet werden Hierf r mit einer sterilen 5ul Impf se so viel verd chtiges Koloniematerial vom N hrboden abnehmen da der Ring Loop der Impf se gef llt ist Alternativ eine sterile 1ul Impf se verwenden mit der 3 Portionen verd chtiges Koloniematerial der Ring der Impf se sollte jeweils gef llt sein abgenommen werden Koloniematerial im Extraktionsreagenz homo
21. agenzien gut gesch ttelt werden bis jeweils homogene Suspensionen entstehen 4 Die Latexreagenzien enthalten zur Konservierung 0 095 Natriumazid Natriumazid ist giftig und kann in blei und kupferhaltigen Rohren zu explosiven Gemischen f hren Zur Vermeidung einer Akkumulation sollten R ckst nde mit reichlich flieBendem Wasser nachgesp lt werden 5 Da das Probenmaterial pathogene Keime enthalten kann sollten die entsprechenden VorsichismaWBnahmen eingehalten werden Pathogene Bakterien werden w hrend der Extraktion ggf nicht vollst ndig abget tet Der Extrakt sollte daher den gleichen VorsichtsmafBnahmen unterliegen 6 Die Extraktionsreagenzien 1 und 2 DR903 und DR904 enthalten leicht reizende Agenzien und eine schwache S ure Vermeiden Sie direkten Kontakt mit Haut Schleimh uten und Augen durch das Tragen geeigneter Schutzkleidung Bei Kontakt mit Haut Schleimh uten oder Augen ist der betroffene Bereich mit reichlich flieBendem Wasser zu sp len LAGERUNG UND HALTBARKEIT Lagerung bei 2 8 C Bei Einhaltung dieser Bedingungen bleibt die Aktivit t der Reagenzien bis zum angegebenen Verfallsdatum unbeeintr chtigt KONTROLLVERFAHREN Vor dem erstmaligen Gebrauch des Tests sowie anschlieBend w chentlich sollten die Reagenzien wie nachfolgend beschrieben berpr ft werden Positiv Kontrolle Als Positiv Kontrolle ist ein eindeutig Methicillin resistenter Stamm von Staphylococcus aureus einzusetzen Dazu kann z B Staphylococ
22. atamente con uno degli appositi bastoncini forniti con il kit 3 Deporre 50pl di sovranatante sull area destinata al controllo e aggiungere 1 goccia di Control Latex Mescolare accuratamente con uno degli appositi bastoncini forniti con il kit 4 Ruotare il cartoncino per 3 minuti e osservare in condizioni di luce normali se interviene agglutinazione 5 Eliminare il cartoncino di reazione immergendolo in una opportuna soluzione disinfettante LETTURA ED INTERPRETAZIONE DEI RISULTATI Agglutinazione del Test Reagent e non del Control Reagent Assenza di agglutinazione con entrambi i reagenti Agglutinazione solo con il Control Reagent o 01 Il ceppo saggiato positivo per la PBP MRSA Il ceppo saggiato negativo per la PBP MSSA Risultato non interpretabile Forza della reazione di agglutinazione Reazione negativa sospensione omogenea delle particelle di lattice senza formazione di agglutinazione visibile Reazione debolmente positiva piccole ma definite agglutinazioni su sfondo torbido Reazione fortemente positiva grandi e piccole agglutinazioni su sfondo torbido o agglutinazioni di grandi dimensioni su sfondo molto chiaro Nota Occasionalmente le reazioni negative possono presentare aspetto finemente granulare o reazione fibrose In questi casi il grado di chiarificazione dello sfondo pu essere usato per l interpretazione del risultato Un fondo opaco indica un risultato negativo un fondo chiaro pu indicare
23. ause majeure d infections nosocomiales et communautaires dans le monde Dans un grand nombre d institutions environ 25 50 des souches de aureus et 75 des staphylocoques coagulase n gative CoNS sont r sistants la m ticilline Les SARM sont consid rer particuli rement dans la mesure ou certaines souches pid miques diss minent facilement et colonisent les patients Le traitement de choix des souches sensibles est une p nicilline r sistant aux p nicillinases car les lactamines diffusent facilement dans le corps humain pr sentent peu d effets secondaires et ne s lectionnent pas de souches vancomycine r sistantes Une identification pr cise de la r sistance la m ticilline est donc n cessaire Les souches de S aureus de sensibilit r duite aux p nicillines sont class es comme suit i S aureus m ticilline r sistant SARM produisant une PLP d affinit r duite pour les p nicillines et cod e par le g ne MecA ii S aureus r sistant border line la m ticilline BORSA r sistance g n ralement consid r e comme tant du une hyperproduction de lactamase de classe A et iii des souches porteuses de PLPs modifi es avec une capacit de liaison aux p nicilllines modifi e ou une hyperproduction de PLPs MODSA Les MODSA ont rarement t isol s et leur r ponse clinique aux lactamines n est pas encore bien connue En clinique de rares exceptions pr s la pr sen
24. be tested from any of the following culture media Tryptone Soya Agar Tryptic Soy Agar with 5 sheep blood TSA blood Columbia Agar with 5 sheep blood Mueller Hinton Agar The use of fresh 18 24 hours cultures is recommended However cultures 24 48 hours old may be tested if necessary to obtain sufficient growth The performance data quoted in this leaflet were generated using these media as part of the submission to the North American Food and Drugs Administration Data on file show that the test is also effective with colonies of S aureus from Tryptone Soya Agar and Columbia Agar with 5 horse blood Iso Sensitest Agar and DSTA These media are commonly used in Europe but not in North America and so they were not used in the trials used to generate the data shown in the Performance Characteristics section Special requirements The PBP test should be performed only on Staphylococcus species Gram positive cocci A coagulase or equivalent test must be performed in order to determine if the isolate is S aureus or another species of Staphylococcus Inoculum preparation For S aureus the test can be performed from well isolated colonies on the primary isolation plate if there is sufficient growth or from a subculture of the isolate Other microbiota that are present on the plate have not been shown to interfere with the assay For coagulase negative staphylococci an induction is needed for the production of sufficient PBP2 1 Pr
25. ce de PLP est responsable de la r sistance la m ticillline pour le traitement des infections S aureus et CoNS Le ph notype de r sistance la m ticilline peut tre h t rog ne rendant le diagnostic difficile par les m thodes conventionnelles d antibiogramme La pr cision de ces m thodes est alt r e par la taille de l inoculum le temps et la temp rature d incubation le milieu le pH la concentration en sel et d autres facteurs De plus ces m thodes de culture n cessitent 24 heures d incubation pour des r sultats fiables Les CoNS produisent souvent des quantit s moindres de PLP et n cessitent une induction pr alable par exposition une p nicilline de fa on produire une quantit suffisante de PLP pour tre d tect e La mise en vidence du g ne MecA est consid r e comme le gold standard dans la d termination de la r sistance la m ticilline mais cette m thode n cessit du temps et reste on reuse Le latex PLP2 a l avantage d tre une m thode directe et rapide de d tection de la prot ine PLP avec un temps de manipulation r duit Cette m thode peut parfois tre plus pr cise que la d tection du g ne MecaA car il ny a pas de risque d avoir des faux positifs avec les souches poss dant le g ne MecA mais incapables de produire la prot ine De plus le test ne d tecte pas les souches qui sont hyperproductrices de lactamases ou de PLPs Le test OXOID PLP a t val
26. cilina de bajo nivel o en casos raros producir PBP2 en peque as cantidades pudiendo en ambos casos producir resultados falsos negativos Debido a las limitaciones de sensibilidad y especificidad de los m todos del CLSI de estudio de sensibilidad en estafilococos coagulasa negativos especialmente para especies distintas de Staphylococcus epidermidis los resultados de la prueba de la PBP pueden no coincidir con los de las pruebas est ndares de estudio de sensibilidad Las razas con una CMI gt 0 5ug ml se deben considerar resistentes a meticilina con independencia del resultado de la prueba de la PBP2 CARACTERISTICAS DE FUNCIONAMIENTO 1 El Oxoid Penicillin Binding Protein Latex Agglutination Test ha sido evaluado por cuatro laboratorios de diversas localizaciones geogr ficas con aislados cl nicos frescos de Staphylococcus aureus Se estudiaron 201 aislados a partir de cada uno de los tres medios de cultivo con el m todo NCCLS y con el test PBP de Oxoid Se observ una reacci n falsa positiva d bil con el l tex de Oxoid negativa al repetir la prueba en un aislado a partir de Agar sangre TSA Todas las reacciones positivas fueron intensas excepto 3 d biles pero positivas en aislados a partir de Agar Mueller Hinton La sensibilidad de la prueba de l tex para detectar MRSA en cada medio fue del 100 y la especificidad fue del 99 para el TSA con sangre y del 100 para los otros medios Resultados del estudio de 201 ai
27. cl nicos frescos La sensibilidad fue del 96 5 a partir de TSA con sangre y del 95 6 a partir de Agar Mueller Hinton La especificidad fue del 100 a partir de TSA con sangre y del 98 a partir del Agar Mueller Hinton La obtenci n de un buen in culo fue m s dif cil con Agar Mueller Hinton El segundo laboratorio estudi 212 razas resistentes a meticilina y 203 sensibles a meticilina con una sensibilidad del 99 5 y una especificidad del 99 5 utilizando Agar Columbia para la preparaci n del in culo 4 Reproducibilidad Se remitieron 10 razas diferentes bien caracterizadas de S aureus 3 MRSA 3 MSSA 3 BORSA y 1 MODSA a tres laboratorios de localizaciones geogr ficas diversas un total de 5 veces cada raza con una codificaci n ciega Todos los 150 resultados coincidieron con los esperados lo que supone una reproducibilidad del 100 Las tres razas mecA positivas fueron siempre positivas 45 45 Las tres razas MSSA y las tres razas BORSA fueron siempre negativas 90 90 El aislado MODSA ten a una CMI a oxacilina de 16ug ml y di un resultado negativo como corresponde en el Oxoid L tex Test en todos los an lisis 15 15 DE PBP2 LATEX TEST DRO900 VERWENDUNGSZWECK Der PBP2 Latex Test ist ein Latex Agglutinationstest zum Nachweis des Penicillin bindenden Proteins PBP2 auch als PBP2a bezeichnet von Staphylokokken und dient zur Identifizierung von Methicillin resistenten Staphylococcus aureus MRSA sowie von Meth
28. cus aureus ATCC 43300 als Culti Loop Art Nr CL9022 verf gbar verwendet werden Befolgen Sie die Anweisungen wie unter Durchf hrung beschrieben Eine Agglutination des Kontrollstammes mit dem Latex Testreagenz DR901 sollte innerhalb von 3 Minuten eintreten Negativ Kontrolle Als Negativ Kontrolle ist ein eindeutig Methicillin sensitiver MSSA Stamm von Staphylococcus aureus einzusetzen Dazu kann z B Staphylococcus aureus ATCC 25923 odor ATCC 29213 als Culti Loop Art Nr CL7010 odor CL7011 verf gbar verwendet werden Befolgen Sie die Anweisungen wie unter Durchf hrung beschrieben Es darf innerhalb von 3 Minuten keine Agglutination zwischen dem Kontrollstamm und dem Latex Testreagenz DR901 eintreten Verwenden Sie den Test nicht wenn die Kontrollen anders als hier beschrieben reagieren Den Test nicht nach Ablauf des Verfallsdatums verwenden WICHTIGER HINWEIS Vermeiden Sie eine Kontamination der Reagenzien durch Kontakt mit Probenmaterial Stellen Sie sicher da die Spitze des Tropfverschlusses nicht in Probenmaterial welches sich bereits auf der Reaktionskarte befindet 104001 OXOID LEAFLET V2 91693 OXOID LEAFLET eingetaucht wird VerschlieBen Sie nach Gebrauch die Tropffl schen sorgf ltig um die Reagenzien vor Kontamination und Austrocknung zu sch tzen Legen Sie die Testpackung nach Gebrauch zur ck in den K hlschrank oder K hlraum Probenmaterial F r den Test k nnen Kolonien von nachf
29. data di scadenza IMPORTANTI NOTE PROCEDURALI Per prevenire la contaminazione dei reagenti evitare accuratamente di toccare i campioni sui cartoncini di reazione con la punta del contagocce dei flaconi e chiudere accuratamente i flaconi stessi Dopo l uso riporre il kit in frigorifero accertandosi che i flaconi siano in posizione verticale PREPARAZIONE DELLA COLTURA Per la coltura si pu utilizzare uno qualsiasi dei seguenti terreni Tryptone Soya Agar Cod CM0131B addizionato con sangue 5 SR0051 Columbia Blood Agar Base Cod CM0331B SR0051 Mueller Hinton Agar Cod CM0337B Si raccomanda di utilizzare colonie provenienti da colture recenti 18 24 ore E tuttavia possibile saggiare colture di 24 48 ore qualora fosse necessario ottenere crescita sufficiente dati relativi alle caratteristiche del kit riportati in questo foglio istruzioni e sottoposti al North America Food and Drug Administration sono stati ottenuti usando i terreni elencati in precedenza Dati di archivio Oxoid mostrano che comunque il test funziona anche saggiando colonie isolate su Tryptone Soya Agar e Columbia Agar addizionati con sangue di cavallo Iso Sensitest Agar e DSTA Questi terreni sono comunemente usati in Europa ma non in Nord America e quindi non sono stati utilizzati nelle prove che hanno generato i dati presentati nel capitolo Caratteristiche Richieste speciali Il test PBP deve essere eseguito esclusivamente su specie di Staphylococc
30. do si eliminano i residui campioni devono essere manipolati con le opportune precauzioni riservate ai materiali potenzialmente patogeni Poich la procedura di estrazione non uccide i batteri anche l estratto deve essere maneggiato con le stesse precauzioni due reagenti per l estrazione contengono una sostanza lievemente irritante e un acido debole Si raccomanda di evitare il contatto diretto indossando opportune protezioni guanti camice ecc In caso di contatto diretto con la cute con le mucose o con gli occhi lavare immediatamente e a lungo con acqua CONSERVAZIONE Il kit deve essere conservato a 2 8 C In queste condizioni i reagenti mantengono inalterata la loro attivit fino alla data di scadenza indicata sulla confezione CONTROLLI Le procedure di controllo descritte di seguito devono essere eseguite tutte le volte che si usa il kit 1 Controllo positivo utilizzare un ceppo MRSA noto ad esempio ATCC 43300 Culti Loop Oxoid Cod CL9022 Seguire le istruzioni ed accertarsi che l agglutinazione intervenga entro 3 minuti 2 Controllo negativo utilizzare un ceppo di Staphylococcus aureus sensibile alla meticillina ad esempio ATCC 25923 oppure ATCC 29213 Culti Loop Oxoid Cod CL7010 oppure CL7011 Seguire le istruzioni ed accertarsi che non intervenga agglutinazione entro i primi 3 minuti Non utilizzare il kit se le reazioni con i ceppi di controllo sono diverse da quelle attese 3 Non usare il kit dopo la
31. epare a broth suspension of the organism equivalent to a 1 McFarland standard and streak a lawn on TSA with blood Columbia Blood Agar or Mueller Hinton Agar Alternatively inoculate the agar plate with several colonies and streak in four quadrants 2 Place an oxacillin disc 1ug ml onto the lawn of organisms or in the main inoculum quadrant 3 Incubate at 37 C for at least 24 hours but not more than 48 hours Caution To avoid false negative results do not perform the test unless sufficient inoculum is available Always harvest organisms from close to the disc TEST METHOD PBP Extraction Procedure 1 Add four drops of Extraction Reagent 1 into a microcentrifuge tube 2 Approximately 1 5 x 10 3 5ul cells should be tested This may be achieved by using a sterile Sul loop to remove sufficient growth to fill the internal diameter of the loop Alternatively a sterile 1ul loop may be used to remove several colonies and scoop up a heaped loopful 1mm high covering the external diameter of the loop Suspend the test culture in the microcentrifuge tube Vortex if clumps are present A very turbid suspension should be visible Place the tube into boiling water or heating block OVER 95 C and heat for three minutes Remove the microcentrifuge tube and allow it to cool to room temperature Add one drop of Extraction Reagent 2 into the tube and mix well Centrifuge at 1500 x g for five minutes i e 3000rpm at 15cm rotation radius or
32. etecci n del gen mecA se ha considerado como el gold standard en la determinaci n de la resistencia a meticilina debido a su exactitud pero es un m todo de realizaci n compleja y de alto coste econ mico El Oxoid PBP Latex Test tiene la ventaja de la detecci n directa de la PBP2 de manera r pida y con un trabajo m nimo Puede ser incluso m s exacta que la detecci n del gen mecA puesto que no dar resultados positivos en aquellos aislados que poseen el gen pero que no producen la proteina Adem s no detecta aquellos aislados que simplemente sean hiperproductores ya sea de betalactamasa o de PBPS El Oxoid PBP Test ha sido evaluado a nivel mundial habiendo demostrado una gran sensibilidad y especificidad Las part culas de l tex sensibilizadas con una anticuerpo monoclonal contra la PBP2 reaccionar n especificamente con los estafilococos meticilin resistentes y producir n una aglutinaci n visible a simple vista COMPONENTES DEL EQUIPO DRO901 L tex Reactivo sensibilizado con un anticuerpo monoclonal contra la PBP2 DRO902 L tex de control sensibilizado con un anticuerpo monoclonal de la misma subclase de IgG sin reactividad con prote nas de S aureus DR0903 Reactivo de Extracci n 1 DR0904 Reactivo de Extracci n 2 Tarjetas de Reacci n Palitos mezcladores Prospecto de instrucciones Material necesario no suministrado Micropipeta y puntas 504 Asas microbiol gicas 5ul 1 ul Ba
33. gen suspendieren Reaktionsgef B in einem kochenden Wasserbad oder Heizblock BER 95 C f r 3 Minuten inkubieren Reaktionsgef f aus dem Wasserbad oder Heizblock nehmen und auf Raumtemperatur abk hlen 1 Tropfen Extraktionsreagenz 2 zuf gen und gut mischen Ansatz f r 5 Minuten bei 1 500 g zentri fugieren Dies entspricht 3 000 rpm bei einem Rotor Radius von 15cm oder 4 500 rpm bei einem Radius des Rotors von 4 5cm Den berstand f r den Test einsetzen Agglutinationsverfahren 1 Je zu untersuchender Probe werden 2 Felder einer Reaktionskarte ben tigt Ein Feld ist zur Durchf hrung des Tests das zweite f r die Durchf hrung der Negativ Kontrolle erforderlich Felder bitte entsprechend beschriften z B TEST und KONTROLLE 2 Je 50ul berstand aus dem Reaktionsgef B entnehmen und auf je ein Feld der Reaktionskarte auftragen 1 Tropfen Latex Testreagenz DR901 auf das mit TEST beschriftete Feld auftropfen berstand und Latex Testreagenz mit einem R hrst bchen gut mischen 3 1 Tropfen Latex Kontrollreagenz DR902 auf das mit KONTROLLE beschriftete Feld auftropfen berstand und Latex Kontrollreagenz mit einem neuen R hrst bchen gut mischen 4 Die Reaktionskarte vorsichtig schwenken und auf Agglutination innerhalb von 3 Minuten pr fen Dazu keine Vergr Berungshilfe benutzen 5 Reaktionskarte in einem geeigneten Desinfektionsmittel entsorgen AUSWERTUNG UND INTERPRETATION DER ERGEBNISSE Agglutination des
34. icht mit diesem Test 5 Manche St mme weisen eine low level Methicillin Resistenz bzw geringe Mengen an PBP auf und k nnen falsch negative Ergebnisse zeigen 6 Bedingt durch die Einschr nkungen der Spezifit t und Sensitivit t der CLSI Methode zur Empfindlichkeitspr fung koagulasenegativer Staphylokokken insbesondere f r St mme die nicht der Spezies S epidermidis angeh ren k nnen die Ergebnisse des PBP2 Latex Tests von denen der Standard Empfindlichkeitspr fung abweichen St mme mit einer MHK 0 5ug ml sollten unabh ngig vom PBP2 Ergebnis als Methicillin resistent angesehen werden LEISTUNGSMERKMALE 1 Der PBP2 Latex Test wurde in 4 unterschiedlichen Laboratorien mit frischen klinischen Isolaten von S aureus evaluiert 201 Isolate wurden mit der NCCLS Methode und dem Oxoid PBP2 Latex Test von 3 unterschiedlichen Medien getestet Eine schwach falsch positive Latexagglutination negativ bei erneuter Testung wurde mit Caseinpepton Sojamehlpepton CASO Agar mit Schafblut beobachtet Alle positiven Reaktion waren deutlich bis auf 3 schwache aber positive Reaktionen von Mueller Hinton Agar Die Sensitivit t des Latex Tests bez glich der Detektion von MRSA betrug 100 auf allen getesteten Medien Die Sensitivit t betrug 99 f r Caseinpepton Sojamehlpepton CASO Agar mit Schafblut und 100 f r die brigen Medien Ergebnisse der Untersuchung von 201 klinischen Isolaten von S aureus in 4 Laboratorien MRSA BORSA MS
35. icilina BORSA del ingl s borderline methicillin resistant S aureus que habitualmente se debe a hiperproducci n de beta lactamasa tipo A y iii razas con PBPs modificadas debido a una capacidad alterada de fijaci n de la penicilina o a hiperproducci n de PBPs MODSA del ingl s modified S aureus Los MODSA se han aislado en raras ocasiones y su respuesta cl nica a la terapia con betalact micos no ha sido bien estudiada Por tanto a efectos cl nicos la resistencia a meticilina en el tratamiento de infecciones por S aureus o estafilococos coagulasa negativos se debe con raras excepciones a la presencia de PBP2 El fenotipo meticilin resistente puede ser muy heterog neo lo que hace dif cil su detecci n mediante los m todos convencionales de estudio de la sensibilidad antimicrobiana tales como la Concentraci n Inhibidora M nima CIM o los m todos de criba en agar o con disco La exactitud de estos m todos se ve afectada por la densidad del in culo temperatura y tiempo de incubaci n medio utilizado pH concentraci n de sales y otros factores Adem s todos estos m todos basados en el cultivo necesitan un periodo de 24 horas de incubaci n para obtener resultados fiables Los estafilococos coagulasa negativos producen con frecuencia concentraciones bajas de PBP y pueden necesitar de una inducci n por exposici n a una de las PRPs para producir una cantidad suficiente que pueda ser detectada La d
36. icillin resistenten koagulase negativen Staphylokokken TESTPRINZIP Staphylokokken z hlen weltweit zu den f hrenden Erregern nosokomialer und allgemein erworbener Infektioner In vielen Einrichtungen sind ungef hr 25 50 der S aureus St mme und 75 der koagulase negativen Staphylokokken KNS Methicillin resistent Hierbei sind insbesondere MRSA von Bedeutung da bestimmte epidemische St mme sich leicht verbreiten und anf llige Patienten kolonialisieren k nnen Zur Therapie gegen sensible St mme werden bevorzugt Penicillinase resistente Penicilline PRP eingesetzt da Beta Lactam Antibiotika gute Wirkkonzentrationen in K rperfl ssigkeiten und Geweben erreichen wenig Nebenwirkungen aufweisen und keine Selektion hinsichtlich Vancomycin resistenter St mme erfolgt Somit ist die Detektion der Methicillin Resistenz von gro er Bedeutung MRSA St mme mit verminderter Empfindlichkeit gegen ber PRP werden wie folgt kategorisiert i Methicillin resistente S aureus MRSA die ein mecA codiertes PBP2 mit niedriger Bindungsaffinit t produzieren ii Borderline Methicillin resistente S aureus BORSA die als Folge einer ber produktion einer Typ A Beta Lactamase angesehen werden und iii St mme mit modifizierten PBP s durch verringerte Penicillin Bindungskapazit t oder berproduktion von PBP s MODSA MODSA sind bislang nur selten isoliert worden und die Wirksamkeit einer Beta Lactam Therapie ist nicht ausreichend un
37. itar el contacto directo mediante el uso del equipo protector adecuado Si se produce un contacto con la piel membranas mucosas u ojos se debe lavar inmediatamente el rea afectada con agua corriente abundante CONSERVACI N El equipo se debe conservar a 2 8 C En esas condiciones los reactivos mantendr n su actividad hasta la fecha de caducidad indicada en la caja PROCEDIMIENTOS DE CONTROL Para cada equipo que se empiece de un nuevo lote y una vez a la semana mientras dure se deben seguir los siguientes procedimientos de control 1 Control Positivo utilicese una raza conocida de MRSA como la ATCC 43300 Oxoid Culti Loop CL9022 S gase el m todo indicado en el prospecto de instrucciones La aglutinaci n se debe producir en un plazo de tres minutos 2 Control Negativo utilicese una raza conocida de Staphylococcus aureus sensible a meticilina MSSA como la ATCC 25923 Oxoid Culti Loop CL7010 Sigase el m todo indicado en el prospecto de instrucciones No se debe producir aglutinaci n en un plazo de tres minutos Si las reacciones obtenidas con los microorganismos de control no son correctas el equipo no debe utilizarse 3 No se debe utilizar el equipo m s all de la fecha de caducidad NOTA IMPORTANTE Se debe evitar la contaminaci n de los reactivos por contacto de la punta del gotero con la muestra en la tarjeta de reacci n Una vez se ha terminado de usar el equipo los tapones de los goteros se deben recoloca
38. le d utiliser une oese de 1ul et de pr lever plusieurs colonies de fa on remplir l oese et recouvrir de 1mm le diam tre ext rieur de l oese Mettre en suspension ces colonies dans le microtube Vortexer si des agr gats sont visibles La suspension doit tre tr s trouble Placer le tube dans un bain marie bouillant ou un bloc chauffant 100 C pendant 3 minutes Sortir le tube et le laisser revenir temp rature ambiante Ajouter une goutte de r actif d extraction 2 dans le tube et bien m langer Centrifuger 1500g pendant 5 minutes c est dire 3000rpm avec un rayon de rotation de 15 cm ou 4500rpm avec un rayon de rotation de 4 5cm Utiliser le surnageant pour le test Proc dure d agglutination 1 Pour chaque surnageant tester identifier un cercle de la carte de r action pour le latex test et un autre cercle pour le latex de contr le 2 Bien m langer les latex en retournant les flacons plusieurs fois et d poser une goutte de latex test ou de latex contr le dans chaque cercle 3 D poser 50ul de surnageant sur le cercle test et sur le cercle contr le en vitant de toucher le culot Bien m langer le latex et le surnageant dans chaque cercle avec un stick 4 Imprimer un mouvement de rotation la carte pendant 3 minutes et observer l agglutination dans des conditions de lumi re normale 5 Eliminer la carte de r action dans un d sinfectant LECTURE ET INTERPR TATION DES R SULTATS Aggluti
39. may have a finely granular appearance or reactions can be stringy In such cases the degree of background clearing should be used to interpret the result An opaque background indicates a negative result and a clear background should be interpreted as a positive result LIMITATIONS Indeterminate results should be re tested with a fresh extract If upon retesting the result is again indeterminate the methicillin resistance must be determined by other methods False negative results can occur if insufficient culture is used for testing In such cases the test should be repeated with sufficient culture True positive results generally have strong reactions False positive reactions have been known to occur rarely but are generally limited to weak reactions Such results can be verified by retesting with a fresh culture Modified S aureus MODSA and borderline resistant strains of S aureus BORSA do not possess PBP2 and are not expected to react in this assay Some organism strains may have a low level methicillin resistance or in rare cases produce PBP in low amounts and give a false negative result Because of limitations in sensitivity and specificity of the CLSI susceptibility test methods for coagulase negative staphylococci particularly for strains other than Staphylococcus epidermidis the results with the PBP2 assay may not agree with the results of standard susceptibility testing Strains with MICs of z0 5ug ml should be
40. me and temperature medium pH salt concentration and other factors In addition these culture methods require 24 hours incubation for accurate results CONS often produce lower amounts of PBP2 and require induction by exposure to one of the PRPs to produce sufficient product to be detected Detection of the mecA gene has been considered the gold standard in the determination of methicillin resistance because of its accuracy but this method is labour intensive and expensive to perform The Oxoid PBP Latex Test has the advantage of direct detection of the PBP protein performed in a rapid timeframe with minimal labour It has the potential for being even more accurate than the detection of the mecA gene as false positive results will not occur with strains that possess mecA but are unable to produce the protein product of the gene In addition the assay does not detect strains that are hyperproducers of either beta lactamase or PBPs The Oxoid PBP2 test has previously been evaluated worldwide demonstrating its high sensitivity and specificity Latex particles sensitised with a monoclonal antibody against PBP2 will specifically react with methicillin resistant staphylococci to cause agglutination visible to the unaided eye COMPONENTS OF THE KIT DR0901 Test Latex sensitised with a monoclonal antibody against PBP2 DR0902 Control Latex sensitised with a monoclonal antibody of the same IgG subclass showing no reactivity with proteins
41. nation avec le latex test mais pas avec le latex de contr le en 3 minutes Pas d agglutination avec le latex test et contr le en 3 minutes Agglutination avec le latex de contr le en 3 minutes Non interpr table ogn ag PLP SARM PLP SASM Intensit de l agglutination N gative Suspension homog ne sans agr gat visible Positif faible Petits agr gats visibles sur un fond trouble Positif fort Petits et gros agr gats sur un fond trouble ou gros agr gats sur un fond clair NB Occasionnellement des r actions n gatives peuvent avoir une apparence granuleuse tr s fine ou certaines r actions peuvent tre filamenteuses Dans ce cas le r sultat doit tre interpr t en fonction du degr d claircissement du fond Un fond opaque indique que la r action est n gative tandis qu un claircissement du fond indique que la r action est positive LIMITES 1 En cas de r sultat ininterpr table la souche doit tre re test e sur un nouvel extrait frais Si le r sultat est toujours ininterpr table d terminer la r sistance la m ticilline par une autre technique 2 Des faux n gatifs peuvent tre observ s si une quantit insuffisante de culture est test e Dans ce cas le test doit tre r p t avec suffisamment de germes 3 Les r sultats vrais positifs produisent g n ralement des r actions fortes Les r actions faussement positives sont rares et sont g n ralement de faible i
42. ntensit Ces r sultats peuvent tre v rifi s avec des cultures fra ches 4 Les S aureus de type MODSA et BORSA ne poss dent pas de PLP et ne doivent donc pas r agir avec ce test 5 Certaines souches peuvent avoir un bas niveau de r sistance la m ticilline ou dans de rares cas produire des quantit s de PLP en faible quantit et donner des r sultats faussement n gatifs 6 A cause des limitations de sensibilit et sp cificit des tests d antibiogramme CLSI pour les staphylocoques coagulase n gative sp cialement pour les souches autres que S epidermidis les r sultats du test PLP peuvent ne pas tre en accord avec les r sultats de l antibiogramme standard Les souches avec des CMI gt 0 5ul ml doivent tre consid r es comme r sistantes la m ticillline quels que soient les r sultats du test PLP PERFORMANCES 1 Le test d agglutination au latex PLP d OXOID a t valu dans 4 laboratoires situ s dans des zones g ographiques diff rentes avec des souches cliniques fra ches de S aureus 201 chantillons ont t test s avec les techniques d antibiogramme NCCLS et avec le test OXOID PLP partir de 3 types de milieux Une r action faible faussement positive avec le test latex OXOID PLP2 retest n gatif a t trouv sur Tryptone soja au sang Toutes les r actions positives ont t fortes except 3 faibles r actions mais positives sur milieu Mueller Hinton La sensibilit du te
43. of S aureus DR0903 Extraction Reagent 1 DR0904 Extraction Reagent 2 Test Cards Mixing Sticks Instruction Leaflet Materials required but not provided Micropipette and tips 50ul Microbiological loops 5ul 1 ul Boiling water bath or heating block Centrifuge 1500 x g Microcentrifuge tubes safe lock Suitable laboratory disinfectant PRECAUTIONS This product is for in vitro diagnostic use only The heating time should be three minutes Heating for more than five minutes may lead to a decrease in sensitivity Heating for only one minute or less may lead to non specific agglutination When removing the supernatant for use in the test following centrifugation withdraw the pipette carefully to avoid solid material at the bottom of the tube Carry over of solid material may cause non specific agglutination Shake the Latex Reagents well to form a homogeneous suspension before use Reagents contain 0 095 sodium azide as a preservative Sodium azide is toxic and may react with lead or copper plumbing to produce metal azides which are explosive by contact detonation To prevent azide accumulation in plumbing flush with copious amounts of water immediately after waste disposal As specimen materials may contain pathogenic organisms handle with appropriate precautions The extraction procedure may nat kill bacteria therefore the extract must be handled with the same precautions Extraction Reagents 1 and 2 contain a mild irritant and a weak
44. olgend aufgef hrten N hrb den eingesetzt werden Es sollten frische Kulturen nach einer Bebr tung von 18 24 Stunden verwendet werden jedoch k nnen auch 24 48 Stunden alte Kolonien getestet werden sofern dies zum Erhalt ausreichender Mengen an Koloniematerial notwendig sein sollte Die in dieser Packungsbeilage aufgef hrten Daten zur Leistungscharakteristik wurden mit nachstehenden Medien und im Rahmen der FDA Zulassung des Tests erhoben Columbia Agar mit Schafblut Mueller Hinton Agar Caseinpepton Sojamehlpepton CASO Agar mit Schafblut Interne Daten zeigen da der Test ebenso mit S aureus Kolonien von Columbia Agar mit Pferdeblut Caseinpepton Sojamehlpepton CASO Agar mit Pferdeblut DST und Isosensitest Agar durchgef hrt werden kann Diese Medien sind in Europa nicht aber den USA gebr uchlich und somit wurden sie nicht in den Untersuchungen zu den in Abschnitt Leistungsmerkmale aufgef hrten Daten eingesetzt Besondere Hinweise Der PBP2 Latex Test sollte nur mit Staphylokokken Spezies durchgef hrt werden Ein Koagulase oder hnlicher Test muss durchgef hrt werden um die Identit t des Isolates als S aureus oder andere Staphylokokken Spezies festzustellen Herstellen des Inokulums Im Falle von S aureus kann der Test direkt mit einzelnen Kolonien einer Prim rplatte oder gegebenenfalls Subkultur durchgef hrt werden sofern ausreichendes Wachstum vorliegt Eine BeeinfluBung des Tests durch Wachstum von Begleitflor
45. onsiderati meticillino resistenti a prescindere dai risultati con PBP test CARATTERISTICHE 1 Saggio di ceppi MRSA Il test di agglutinazione PBP2 Oxoid stato valutato in quattro laboratori dislocati in diverse aree geografiche che hanno saggiato ceppi clinici di S aureus di fresco isolamento Sono stati esaminati 201 ceppi sia con il metodo standard NCCLS sia con PBP Oxoid preparando gli inoculi a partire da TSA Sangue Columbia Agar Sangue e Mueller Hinton Il test al lattice ha evidenziato un falso positivo su TSA con sangue il test ripetuto risultato negativo Tutte le reazione positive hanno evidenziato forte agglutinazione ad eccezione di tre reazioni deboli ma comunque positive evidenziate su Mueller Hinton Agar La sensibilit del test al lattice per la rilevazione degli MRSA su ciascun terreno e risultata pari al 100 la specificit pari al 99 per il TSA con sangue e del 100 sugli altri terreni Risultati ottenuti da 4 diversi laboratori su 201 ceppi di S aureus isolati di fresco da campioni clinici MRSA BORSA MSSA Numero di test 68 3 130 Crescita su Oxacillin Salt Agar NCCLS 68 0 0 MIC gt 4ug ml NCCLS 68 0 0 Lattice positivo su TSA Sangue 68 0 1 1 Lattice positivo su Columbia Sangue 68 0 0 Lattice positivo su Mueller Hinton 68 3 0 0 A Le MIC erano di 2 ug ml ed i ceppi mecA negativi 8 numero di reazioni debolmente positive evidenziato in parentesi 2 Saggio di ceppi problematici di S
46. pi meticillino sensibili ottenendo una sensibilit del 99 5 e una specificit del 99 5 impiegando Columbia Agar per Pinoculo 4 Riproducibilit Dieci ceppi di S aureus ben caratterizzati 3 MRSA 3 MSSA 3 BORSA ed 1 MODSA sono stati inviati a tre laboratori appartenenti a tre differenti aree geografiche Ciascun ceppo stato inviato 5 volte usando una codifica in cieco Tutti i 150 test hanno concordato con i risultati attesi fornendo una riproducibilit del 100 Tre ceppi positivi per il gene mecA sono risultati positivi tutte le volte che sono stati saggiati 45 45 test tre ceppi di MSSA e i tre ceppi di BORSA hanno fornito risultati negativi tutte le volte che sono stati saggiati 90 90 test ceppi di MODSA che presentavano una MIC di 16 ug ml per l oxacillina hanno fornito come atteso risultato negativo al test al lattice s ATCC Licensed The ATCC Licensed Derivative Emblem the ATCC Licensed Derivative word mark Derivative and the ATCC catalogue marks are trademarks of ATCC Oxoid Limited is licensed to use these trademarks and to sell products derived from ATCC cultures X6555B February 2011 o
47. r con firmeza a fin de evitar la contaminaci n y el resecado de los reactivos El equipo se debe volver a refrigerar inmediatamente con los viales en posici n vertical PREPARACI N DE LA MUESTRA Se puede analizar colonias obtenidas de los siguientes medios de cultivo Agar Tryptone Soya Tryptic Soy Agar con 5 de sangre de carnero Agar sangre TSA Agar columbia con 5 de sangre de carnero Agar Mueller Hinton Se recomienda la utilizaci n de cultivos frescos 18 24 horas pero se puede utilizar cultivos de 24 48 horas si es necesario para obtener crecimiento suficiente Los datos de las caracter sticas de funcionamiento que aparecen en este prospecto se obtuvieron utilizando los medios indicados como parte de la documentaci n remitida a la Food and Drugs Administration de los EE UU Se dispone de datos que indican que la prueba tambi n puede realizarse con colonias de S aureus aisladas en Agar Tryptone Soya y Agar Columbia con 5 de sangre de caballo agar Iso Sensitest y Agar DST Estos medios son de uso frecuente en Europa pero no en Norteam rica por lo que se utilizaron en los ensayos que generaron los datos que se muestran en la secci n Caracter sticas de Funcionamiento Requerimientos especiales La prueba de PBP se debe realizar s lo con bacterias del g nero Staphylococcus cocos grampositivos Se debe realizar una prueba de coagulasa o equivalente a fin de determinar si el aislado es un aureus u otra especie de e
48. slados cl nicos frescos de S aureus en 4 laboratorios MRSA BORSA MSSA N mero de aislados estudiados 68 3 130 Crecimiento en Oxacillin Salt Agar NCCLS 68 0 0 CMI gt 4ug ml NCCLS 68 0 0 L tex Positivo TSA Sangre 68 0 1 1 L tex Positivo Columbia Sangre 68 0 0 L tex Positivo Mueller Hinton 68 3 0 0 A CMIs de 2ug ml y mecA negativo e Entre par ntesis se indica el n mero de reacciones d biles 2 Estudio con razas conocidas de S aureus en tres localizaciones geogr ficas distintas Se llev a cabo un estudio con razas ya aisladas y conocidas de S aureus en tres laboratorios en el que se compararon los resultados de la detecci n de PBP con los de los m todos NCCLS de detecci n de MRSA Se estudiaron un total de 724 razas a partir de cultivos en TSA con sangre La sensibilidad del Oxoid PBP2 Test fue del 98 5 y la especificidad del 100 Las sensibilidades de los m todos de criba en agar agar screen y de CMI fueron 98 7 y 99 2 y las especificidades 90 0 y 88 7 respectivamente Tambi n se estudiaron por separado dos razas de MODSA y ambas dieron un resultado negativo en la Prueba de L tex 3 Estudio con estafilococos coagulasa negativos Dos laboratorios hicieron un estudio de la detecci n de PBP en estafilococos coagulasa negativos tras inducci n con discos de oxacilina Un laboratorio estudi 115 razas resistentes a meticilina y 45 sensibles a meticilina entre las cuales se inclu an 58 aislados
49. sodium comme conservateur L azide de sodium est toxique et peut r agir avec la tuyauterie en plomb ou en cuivre pour former des azotures m talliques hautement explosifs Pour pr venir une accumulation dans la tuyauterie liminer avec un grand volume d eau Les chantillons peuvent contenir des germes pathog nes manipuler avec pr caution La proc dure d extraction peut ne pas tuer les germes donc l extrait doit tre manipul avec les m mes pr cautions Les r actifs d extraction 1 et 2 contiennent un composant l g rement irritant et un acide faible Eviter le contact direct en portant des v tements appropri s En cas de contact avec la peau les muqueuses ou les yeux laver imm diatement avec une grande quantit d eau CONSERVATION Le coffret doit tre conserv 2 8 C Dans ces conditions les r actifs sont valables jusqu la date d expiration indiqu e sur le coffret PROC DURES DE CONTR LE Pour chaque nouveau lot de r actif et ensuite une fois par semaine les proc dures de contr le suivantes doivent tre tablies 1 Contr le positif utiliser une souche SARM connue telle que ATCC 43300 Culti Loops OXOID CL9022 Suivre la m thode mentionn e dans la section Mode d emploi S assurer que l agglutination appara t en 3 minutes 2 Contr le n gatif utiliser une souche de Staphylococcus aureus sensible la m ticilline SASM telle que ATCC 25923 ou ATCC 29213 Culti Loops OXOID CL7
50. st latex OXOID PLP pour d tecter les SARM sur chaque milieu est de 100 La sp cificit est de 99 sur Tryptone soja au sang et 100 sur les autres milieux R sultats des 201 souches cliniques fra ches de S aureus des 4 laboratoires SARM BORSA SASM Nombre test 68 3 130 Pousse sur milieu sal l oxacilline NCCLS 68 0 0 CMI gt 4ug ml NCCLS 68 0 0 Latex positif sur milieu Tryptone soja au sang 68 0 1 1 Latex positif sur Columbia au sang 68 0 0 Latex positif sur Mueller Hinton 68 3 0 0 A Les CMI sont 2ug ml et le g ne MecA est n gatif 8 Nombre de r actions faibles entre parenth ses 2 Tests sur des souches de S aureus de 3 zones g ographiques distinctes 3 laboratoires ont examin s chacun un panel de souches de S aureus collect es et caract ris es pr c demment et compar s les r sultats du PLP avec la m thode du NCCLS pour la d termination de la r sistance la m ticilline Un total de 724 souches ont t test es partir de Tryptone soja au sang La sensibilit du test OXOID PLP2 est de 98 5 et la sp cificit de 100 Les sensibilit s des 2 m thodes de r f rence NCCLS sont de 98 7 et 99 2 et les sp cificit s de 90 et 88 7 2 souches de MODSA ont t test es s par ment Les 2 souches ont donn des r sultats n gatifs avec le latex OXOID PLP2 3 Test sur les staphylocoques coagulase n gative 2 laboratoires ont test les staphylocoques coagulase n gative avec le test O
51. stafilococo Preparaci n del in culo Para S aureus la prueba se puede realizar a partir de colonias bien aisladas de la placa de aislamiento primario si hay crecimiento suficiente o a partir de un subcultivo No se ha observado que la presencia de otros microorganismos en la placa cultivo interfiera con los resultados de la prueba Para los estafilococos coagulasa negativos es necesario un paso previo de inducci n a fin de obtener una producci n suficiente de PBP2 1 Prepare una suspensi n del microorganismo en caldo equivalente a un McFarland 1 y haga una siembra en s bana en una placa de TSA con sangre Agar columbia con sangre o agar Mueller Hinton Alternativamente haga un subcultivo en cuatro cuadrantes a partir de unas cuantas colonias 2 Coloque un disco de oxacilina 1ug ml sobre la superficie de la placa inoculada Si ha utilizado una siembra en cuatro cuadrantes coloque el disco en el primer cuadrante m xima densidad de in culo 3 Incube a 37 C durante un m nimo de 24 h pero no m s de 48 h Precauci n a fin de evitar resultados falsos negativos no realice la prueba si no dispone de crecimiento suficiente M TODO DE LA PRUEBA Procedimiento de extracci n de la PBP 1 A ada cuatro gotas del Reactivo de Extracci n 1 a un tubo de microcentrifuga 2 Con un asa est ril se toman 5 10 colonias y se suspenden en el tubo de microcentrifuga 3 Coloque el tubo en agua hirviendo o en bloque t rmico m s de
52. t mit monoklonalen Antik rpern gegen PBP2 beladene wei e Latexpartikel Diese reagieren spezifisch mit dem Protein PBP2 von Methicillin resistenten Staphylokokken unter Bildung gut sichtbarer Agglutinate BESTANDTEILE DES TESTS DRO901 Latex Testreagenz Wei e Latexpartikel die mit monoklonalen Antik rpern gegen PBP2 beladen sind DR0902 Latex Kontrollreagenz ee Wei e Latexpartikel die mit monoklonalen Antik rpern IgG der gleichen Subklasse gegen ein humanes Protein beladen sind Diese Antik rper zeigen keine Reaktion mit den Proteinen von Staphylococcus aureus DRO0903 Extraktionsreagenz 1 DR0904 Extraktionsreagenz 2 Reaktionskarten R hrst bchen Gebrauchsanleitung Zus tzlich ben tigte Materialien Variable oder Fixvolumen Pipette 50pl Impf sen 5ul oder 1ul Wasserbad oder Heizblock gt 95 C Mikrozentrifuge 1 500 x g Reaktionsgef fe optimal mit Deckelverriegelung f r mind 200yl Geeignetes Desinfektionsmittel z B Natrium Hypochloritl sung gt 1 3 w v VORSICHTSMABNAHMEN In vitro Diagnosticum 1 Die Erhitzungszeit sollte exakt 3 Minuten betragen Eine Dauer von 5 Minuten kann zur Abnahme der Sensitivit t des Tests f hren Eine zu kurze Erhitzungsdauer von einer Minute oder weniger kann zu unspezifischen Reaktionen f hren 2 Nach erfolgter Zentrifugation sollten bei der Entnahme des berstandes keine festen Bestandteile berf hrt werden 3 Vor dem Gebrauch sollten alle Latexre
53. tersucht F r klinische Zwecke ist somit von wenigen Ausnahmen abgesehen das Vorliegen von PBP die Ursache f r eine Methicillin Resistenz bei der Behandlung von Infektionen durch S aureus und KNS Der Ph notyp der Methicillin Resistenz kann sehr heterogen vorliegen und erschwert die Detektion durch konventionelle Methoden der Empfindlichkeitspr fung wie Minimale Hemmkonzentration MHK Testbl ttchen oder Agardilutionsmethoden Die Genauigkeit dieser Methoden ist von Inokulum Inkubationsdauer und temperatur Medium pH Wert Salzkonzentration und weiteren Faktoren abh ngig Dar ber hinaus ben tigen diese Methoden einen zeitlichen Aufwand von 24 Stunden um genaue Ergebnisse zu erbringen Viele KNS produzieren nur wenig PBP und man ben tigt die Induktion durch PRP s um ausreichend Protein zum Nachweis zu erhalten 2 Der Nachweis des mecA Gens wurde aufgrund seiner Genauigkeit als Goldstandard zur Detektion der Methicillin Resistenz angesehen jedoch ist die Methode arbeits und kostenintensiv Der Oxoid PBP2 Latex Test bietet dem gegen ber den Vorteil einer direkten und zeitnahen Detektion des PBP bei geringem Arbeitsaufwand Falsch positive Ergebnisse bei St mmen die entweder Beta Lactamase oder auch PBP s berproduzieren sind im Gegensatz zu konventionellen Verfahren ausgeschlossen Der Oxoid PBP2 Latex Test wurde weltweit evaluiert und zeigte dabei eine hohe Sensitivit t und Spezifit t Der Test verwende
54. tive results each time the test was performed 90 90 tests The MODSA strains had an MIC of 16ug ml to oxacillin and gave a negative result in the Oxoid Latex Test as expected each time the test was performed 15 15 tests REFERENCES 1 Bignardi G E Woodford N Chapman A et al 1996 J Antimicrobiol Chemother 37 53 63 Chambers H F 1997 Clin Microbiol Rev 10 781 791 Gerberding J L Miick C Liu H H et al 1991 Antimicrob Agents Chemother 35 2574 2579 Hussain Z Stoakes L Garrow S et al 2000 J Clin Microbiol 38 2051 2054 Louie L Matsumura S O Choi E et al 2000 J Clin Microbiol 38 2170 2173 Murakami K Minamide W Wada K et al 1991 J Clin Microbiol 29 2240 2244 Nakatomi Y and Sugiyama J 1998 Microbiol Immunol 42 739 743 National Committee for Clinical Laboratory Standards 2000 Approved Standard Fifth Edition M7 A5 National Committee for Clinical Laboratory Standards Wayne Pa 9 Tenover F C Jones R N Swenson J M et al 1999 J Clin Microbiol 37 4051 4058 10 Thornsbury C and McDougal L 1983 J Clin Microbiol 18 1084 1091 11 Yamazumi T Marshall S A Wilke W W et al 2001 J Clin Microbiol 39 53 56 12 York M K Gibbs L Chehab F et al 1996 J Clin Microbiol 34 249 253 Y O O1 BR CO ND ES PENICILLIN BINDING PROTEIN PBP2 LATEX AGGLUTINATION TEST DRO900 UTILIDAD Esta prueba es un ensayo r pido de
55. trazione Cartoncini di reazione Bastoncini per mescolare i reagenti sul cartoncino di reazione Materiali occorrenti non compresi nel kit Micropipetta e puntali 50pl Ansa batteriologica 5ul 1 pul Bagno con acqua bollente o blocco riscaldante Centrifuga 1500 x g Provette da microcentrifuga con chiusura di sicurezza Idoneo disinfettante PRECAUZIONI Il prodotto da utilizzarsi esclusivamente per uso diagnostico in vitro Durante la fase di riscaldamento del campione si raccomanda di rispettare il tempo di tre minuti Se il riscaldamento viene prolungato oltre 5 minuti si pu verificare una diminuzione della sensibilit del test Se i tempi di riscaldamento vengono ridotti ad 1 minuto o meno si possono verificare agglutinazioni non specifiche Quando dopo la centrifugazione si recupera il sovranatante da utilizzare per il test evitare di prelevare il materiale solido presente sul fondo della provetta La presenza di questo materiale potrebbe causare agglutinazioni aspecifiche Prima dell uso agitare accuratamente i reagenti al lattice fino a quando le sospensioni non risultano perfettamente omogenee reagenti contengono sodio azide 0 095 come conservante La sodio azide tossica e pu reagire con il piombo o con il rame eventualmente presenti nelle tubature producendo azidi metalliche esplosive Per prevenire l accumulo di sodio azide nelle tubature si raccomanda di lasciar scorrere a lungo l acqua nel lavandino quan
56. u dans le monde entier d montrant une excellente sensibilit et sp cificit Les particules de latex sensibilis es avec un anticorps monoclonal contre les PLP vont r agir sp cifiquement avec les staphylocoques r sistant la m ticillline et provoquer une agglutination visible l il nu COMPOSITION DU COFFRET DR0901 Latex sensibilis par un anticorps monoclonal dirig contre les PLP2 DRO0902 Latex de contr le sensibilis par un anticorps monoclonal de la m me sous classe d lg Gne montrant aucune r activit avec les prot ines de S aureus DRO0903 R actif d extraction 1 DR0904 R actif d extraction 2 Cartes test Sticks Notice Mat riel n cessaire mais non fourni Micropipettes et embouts 50pl Oeses 5ul ou 1ul Bain marie bouillant ou bloc chauffant Centrifugeuse 1500g Microtubes centrifuger D sinfectant de laboratoire PR CAUTIONS Pour diagnostic in vitro uniquement Le temps de chauffage est de 3 minutes Un chauffage au del de 5 minutes peut conduire une baisse de sensibilit Un chauffage inf rieur 1 minute peut conduire des agglutinations non sp cifiques Quand on pr l ve le surnageant apr s centrifugation pour effectuer le test viter de pr lever des particules au fond du tube Ceci pourrait conduire des agglutinations non sp cifiques Bien m langer les r actifs au latex de fa on obtenir une suspension homog ne Les r actifs contiennent 0 095 d azide de
57. un risultato positivo LIMITAZIONI Per i campioni che hanno fornito risultati indeterminati si raccomanda di ripetere il test saggiando un estratto fresco Se anche dopo questa ripetizione si ottenesse ancora un risultato indeterminato si suggerisce di utilizzare un metodo alternativo Si possono verificare risultati falsi negativi se si saggia una quantit insufficiente di coltura In questi casi il test deve essere ripetuto con una quantit sufficiente di coltura I risultati veri positivi presentano solitamente reazioni di agglutinazione fortemente positive E stato evidenziato che reazioni false positive si verificano raramente ma sono generalmente limitate a reazioni di debole agglutinazione Questi risultati possono essere verificati ripetendo il test su coltura fresca ceppi Modified S aureus MODSA e i ceppi BORSA non possiedono PBP e quindi si attende che non reagiscano al test Alcuni microrganismi possono avere un basso livello di resistenza alla meticillina o in rari casi producono PBP2 in basse quantit e forniscono risultati falsi negativi A causa delle limitazioni di sensibilit e specificit nella metodica del test di sensibilit CLSI per gli stafilococchi coagulasi negativi in particolare per i ceppi diversi da Staphylococcus epidermidis i risultati ottenuti con PBP2 possono non essere in accordo con quelli forniti dal test di sensibilit standard Ceppi con valori di MIC gt 0 5ug ml devono essere c
58. una sufficiente quantit di microrganismo nell immediata vicinanza del disco di oxacillina TECNICA Estrazione della PBP2 1 Introdurre 4 gocce di Extraction Reagent 1 in una provetta da microcentrifuga 2 Il test richiede di saggiare approssimativamente 1 5x10 cellule 3ul 5ul La quantit adeguata di cellule batteriche pu essere ottenuta con un ansa sterile calibrata da 5pl prelevando una quantit sufficiente di microrganismo per colmare il diametro interno dell ansa In alternativa possibile usare un ansa sterile calibrata da 1ul e prelevare 3 porzioni di crescita batterica colmando ogni volta il diametro dell ansa Risospendere quindi le cellule batteriche nella provetta da microcentrifuga 3 Porre la provetta per 3 minuti in acqua bollente o in un apposito blocco riscaldante la temperatura deve essere superiore a 95 C 4 Rimuovere la provetta da microcentrifuga e lasciarla raffreddare a temperatura ambiente Aggiungere nella provetta 1 goccia di Extraction Reagent 2 ed agitare accuratamente Centrifugare per 5 minuti a 1500xg 3000 rpm con raggio di rotazione di 15 cm oppure 4500rpm con raggio di rotazione di 4 5cm Eseguire il test sul sovranatante Test di agglutinazione 1 Contrassegnare sul cartoncino di reazione un cerchio di reazione per il Test Latex e un cerchio di reazione per il Control Latex 2 Deporre 50pl di sovranatante sull area destinata al test e aggiungere 1 goccia di Test Latex Mescolare accur
59. us Cocchi Gram positivi Si raccomanda di eseguire il test della coagulasi o equivalente al fine di determinare se il ceppo isolato S aureus o appartenente ad un altra specie di stafilococco Preparazione dell inoculo Per S aureus se la crescita sufficiente il test pu essere eseguito a partire da colonie ben isolate sulla piastra di primo isolamento o a partire da sottocolture dell isolato Non stato evidenziato che eventuali altri microrganismi presenti sulla piastra possano interferire con il saggio Per gli stafilococchi coagulasi negativi necessario eseguire l induzione per ottenere quantit sufficienti di PBP 1 Preparare una sospensione del microrganismo in brodo con torbidit pari a 1 Standard McFarland e seminarla per striscio sulla superficie di TSA pi sangue oppure di Columbia Blood Agar o di Mueller Hinton Agar al fine di ottenere una crescita confluente In alternativa inoculare le piastre di terreno agarizzato con un inoculo pesante del microrganismo ed eseguire lo striscio lungo i quattro quadranti della piastra 2 Deporre un disco di oxacillina 1ug ml sulla superficie della semina confluente o sul quadrante che contiene Pinoculo pi pesante 3 Incubare a 37 C per almeno 24 ore ma non pi di 48 ore Attenzione Per evitare risultati falsi negativi non eseguire il test se l inoculo insufficiente 4 Al fine di saggiare solo le cellule batteriche sicuramente indotte si raccomanda di prelevare
60. uspensi n homog nea de las part culas sin ninguna agregaci n visible Positivo d bil agregados peque os pero bien definidos contra un fondo turbio Positivo agregados grandes y peque os contra un fondo ligeramente turbio o agregados grandes contra un fondo claro Nota Algunas reacciones negativas pueden tener una apariencia granular fina o se pueden formar hebras o cordones En estos casos se debe utilizar el grado de aclaramiento del fondo para interpretar el resultado Un fondo opaco indica un resultado negativo y un fondo claro se debe interpretar como un resultado positivo LIMITACIONES Los resultados indeterminados deben repetirse con un extracto fresco Si el resultado sigue siendo indeterminado la resistencia a meticilina se debe determinar por otros m todos Se pueden producir resultados falsos negativos si se utiliza una cantidad insuficiente de cultivo para la prueba En tales casos la prueba debe repetirse con una cantidad suficiente de cultivo Los resultados positivos aut nticos suelen mostrar reacciones intensas Raramente se pueden producir resultados falsos positivos pero habitualmente muestran reacciones d biles Tales resultados se pueden verificar repitiendo la prueba con cultivos frescos Los Staphylococcus aureus modificados MODSA y los aislados resistentes a meticilina borderline BORSA no poseen PBP2 y por tanto no reaccionan en esta prueba Algunas razas pueden tener una resistencia a meti
61. with which certain epidemic strains spread and colonise debilitated patients Treatment of sensitive strains with penicillinase resistant penicillins PRP is preferred as beta lactam drugs are more easily absorbed into body fluids and tissues cause fewer complications from treatment and do not select for vancomycin resistant organisms Reliable identification of methicillin resistance is therefore important Strains of S aureus with reduced susceptibility to PRP are categorised as follows i methicillin resistant S aureus MRSA which produce the low affinity penicillin binding protein PBP2 encoded by the mecA gene ii borderline methicillin resistant S aureus BORSA generally considered to be due to hyperproduction of type A beta lactamase iii strains with modified PBPs due to altered penicillin binding capacity or hyper production of PBPs MODSA MODSA have only rarely been isolated and their clinical response to beta lactam therapy has not been well studied Thus for clinical purposes with rare exceptions the presence of PBP2 is responsible for methicillin resistance in the treatment of infections with S aureus and CoNS The methicillin resistant phenotype can be highly heterogeneous making it difficult to detect by conventional anti microbial susceptibility test methods such as Minimum Inhibitory Concentration MIC disc and agar screen The accuracy of these methods is affected by inoculum size incubation ti

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