10Immuno2
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1. L antig ne doit rester en sph res Imprimer On veut mieux observer la zone de jonction entre anticorps et antig ne Pour cela on va r aliser une coupe et un zoom En s lectionnant Trans Zoom les actions sur les curseurs sont interpr t es comme des translations selon l un des trois axes Cela permet de centrer l observation sur la zone de contact entre anticorps et antig ne Exploiter des r sultats La fonction de coupe est command e par un petit tableau situ en centre de la barre exp rimentaux inf rieure front et fl che droite pour une coupe frontale Qu2 Indiquer ce que vous constatez en ce qui concerne les rapports anticorps antig ne et qui explique les r sultats observ s dans l exp rience d Ouchterlony http lewebpedagogique com bouchaud 2 Analyser un diagramme en b tons Compl ter un sch ma Interpr ter un document en microscopie lectronique par transmission MET Pour la suite on observe le document 2 page 244 Doc1 Analyse exp rimentale du r le des diff rentes r gions de l anticorps Belin TS 2002 Qu3 Analyser et interpr ter chaque exp rience Compl ter le sch ma r alis avec RasTop et le l gender partir de vos interpr tations Document 3 page 245 Doc2 Les caract ristiques des sites de reconnaissance antig nique Les fl ches indiquent les acides amin s faisant partie du site de fixation de l antig ne Belin TS 2002 page 245 Qu4 Pr lever2. fr quemment H pour cha ne lourde L pour l g re P ou Y pour les antig nes Seule la partie terminale des anticorps est mod lis e quand 1l ne s agit pas de la mol cule enti re ZOOM shift tenu bouton gauche de la souris enfonc avancer la souris Zoom avant e 2 Observation d une mol cule en profondeur L ic ne front et les deux fl ches juxtapos es droite assurent un d placement en avant et en arri re de la mol cule par rapport l cran http lewebpedagogique com bouchaud 6
3. le lymphocyte B s lectionn R aliser une synth se Bilan R pondre au probl me pos en introduction Cl s Lymphocyte B LB plasmocyte anticorps immunoglobuline complexe immun r cepteur partie variable partie constante phagocytose macrophage antig ne virus VIH Hors TP immunit acquise immunit inn e http lewebpedagogique com bouchaud 5 UTILISATION DU LOGICIEL RASTOP affichage du affichage en s lectionner en cliquant dessus nouvelle fichier dela mA i fen tre mol cule boules et effacer ce qui de MaS ieit a yen mosa que de toiles b tormnets est s lectionn a plusieurs l cran fen tres sph res A1 de fer lts o es R organiser ter b tonnets rubans chaine hss wo VANAAZ ZE MREHHMMIAAGE H m g F nd fEl ments Propri t s i Utiisateu ri rj CH ri l affiche la tout choisit un ou choisir le choix alette de s lectionner l ment une s affiche i z d s SORME P i t s lectionner ce choix couleurs affiche la dteurde ls propri t dans le Se tir nt liste dans la liste cadre gr ce l ic ne s lection commande Nouvelle s lection en cours Expression S lection et choix de la repr sentation de la partie s lectionn e dans la fen tre active avec l diteur de commandes avec les pictogrammes de choix s lectionne l ensemble des cha nes affich es dans la S lectionner 1 atome en cliquant fen tre permet
4. visibles La s lection des seuls atomes de soufre se fait dans la liste d roulante l ments Une fois l l ment choisi la s lection n est effective qu en actionnant le bouton a situ droite Les atomes de soufre seront alors affich s en utilisant l ic ne Boules et B tonnets La s lection d une couleur pour les atomes dans la palette termine la mise en vidence des ponts disulfures Une fois ces op rations faites afficher la palette de couleur et colorer le fond en blanc puis R aliser un sch ma imprimer simplification des structures validit du sch ma et des Qul partir de ces donn es r aliser un sch ma de la mol cule d anticorps avec uniquement l gendes les ponts SS intercha nes soin titre pertinent On veut d sormais tudier la formation des complexes immuns en gros l association entre l anticorps et l l ment tranger ou antig ne avec Rastop Le fichier IGG LYS PDB contient la repr sentation des extr mit s des cha nes lourdes et l g res voir votre sch ma pr c dent associ es l antig ne constitu par une mol cule de lysozyme Utiliser l affichage en sph re puis la coloration par cha ne pour distinguer l antig ne en rouge l extr mit de la cha ne lourde en bleu et celle de la cha ne l g re en vert couleurs par d faut S lectionner par la suite les cha nes de l anticorps et les repr senter en Boules et B tonnets
5. 1 7 Immunologie i os agents du maintien de l int grit du milieu extracellulaire Au cours de l infection par le virus VIH des anticorps anti VIH apparaissent dans le sang Ce sont ces anticorps qui sont recherch s dans les tests de s ropositivit ELISA et Western blot Comment se d roule la r ponse immunitaire base d anticorps Activit 1 Mise en vidence de la sp cificit d une r action antig ne anticorps Utilisation de la m thode d Ouchterlony ou test d immunodiffusion La m thode repose sur immunodiffusion les solutions sont d pos es dans des puits et diffusent de fa on homog ne dans toutes les directions autour du puits Deux aur oles de diffusion de deux puits diff rents peuvent donc entrer en contact lorsqu elles ont suffisamment progress Cette zone de contact reste invisible s il n y a pas de r action entre les deux solutions En revanche elle se traduit par un arc de pr cipitation visible il nu lorsque les deux solutions r agissent Sch ma des arcs livre page 242 document 1 On veut montrer qu un anticorps ici l anticorps anti BSA est sp cifique d un antig ne Pour cela on formule 3 hypoth ses H1 L anticorps anti BSA est capable de reconna tre toutes les mol cules d albumine il est sp cifique de l albumine H2 L anticorps anti BSA reconna t les albumines du lait de vache et du s rum de b uf il est sp cifique de l albumine bovine H
6. 3 L anticorps anti BSA ne reconna t que l albumine de s rum de b uf il en est sp cifique On teste ces trois hypoth ses par la m thode d immunodiffusion ou test d Ouchterlony Mat riel une bo te de P tri contenant de l agar deux bo tes de P tri vides petite feuille de papier noir lecture des r sultats la s ance suivante un emporte pi ce s rum de lapin contenant des anticorps anti BSA Albumine de S rum de B uf S rouge diff rents antig nes s rum de ch vre H rose albumine de lait de vache L mauve albumine de s rum de b uf B blanc albumine de s rum de cheval C gris eau distill e E noir 1 compte gouttes 1 marqueur pour plastique pour marquer la bo te de P tri R aliser un tableau deux entr es 1 Faire un tableau des cons quences v rifiables de chaque hypoth se concernant les r sultats les 3 hypoth ses et chaque possibles des r actions entre le s rum S et les diff rents antig nes arc ou non antig ne apparaissent distinctement aux deux entr es du tableau la pr sence ou non d un arc de a A Pa i R pr cipitation indiqu e 2 Pr parer le gel d Agar 2 couler dans votre bo te de P tri pour l exp rience titre adapt exactitude des A Peser dans un papier 0 2g d Agar pr lev l aide de la spatule tarer la balance avant contenus B Verser 10 mL d eau distHH e puis l Agar dans le B cher et dissoudre
7. aussi d annuler toute s lection plus dessus serr e marne L s lectionne la cha ne L Ft 114 s lectionne l acide amin n 114 de toutes les cha nes B 20 75 s lectionne les acides amin s du n 20 au n 75 L H s lectionne les cha nes L et H E S lectionner 1 cha ne Afficher ce qui est s lectionn recliquer pour revenir l affichage standard L and 20 75 s lectionne les acides amin s de 20 75 de la cha ne avec les pictogrammes affichage as ei Sph res afficher la s lection sous ms Palette de couleurs permet le choix d une couleur qui M forme de sph res affectera la s lection et une couleur de fond choisir fond blanc pour P Rubans afficher la s lection sous l impression P la forme d un ruban Quelques d tails des menus Fichier ouvrir affiche l cran la mol cule s lectionn e Fichier Imprimer imprime la mol cule affich e ou celle qui est s lectionn e Editer s lectionner Expression m me fonction que l diteur de commande cf pictogramme Atomes Repr sentation rayon fixe permet de fixer le diam tre des sph res Rubans permet d afficher la mol cule en ruban sous la forme du squelette carbon notamment Fen tres Mosa que permet d afficher plusieurs mol cules si plusieurs fichiers ont t ouverts Informations sur les mol cules Le nom des cha nes est donn au bas de l cran en passant le curseur de souris sur la cha ne
8. des souris dont l immunit propre est supprim e Les lymphocytes B poss dent leur surface des r cepteurs membranaires les anticorps qui ne sont pas libres dans le sang dans ce cas l Analyser une exp rience NB la rate est un organe lympho de elle contient de nombreux lymphocytes GRM Globules Rouges de Mouton GRP Globules Rouges de Poulet Traitement supresseur de r actions immunitaires souris normale cellules de la rate cellules de la rate amp h y a Ac anti GRM 0 Ac anti GRP Doc6 Une tude exp rimentale Didier TS 2002 Qus Analyser l exp rience et montrer que des lymphocytes sp cifiques d un antig ne existent avant tout contact avec cet antig ne Note pour le bilan Les nombreux clones de lymphocytes B distincts par leurs anticorps membranaires sp cifiques pr existent avant tout contact avec un antig ne Apr s leur formation dans la moelle osseuse ils migrent dans les ganglions lymphatiques et la rate r servoirs de cellules immunitaires Dans ces organes en pr sence d un les lymphocytes B portant les r cepteurs sp cifiques sont s lectionn s prolif rent formant un clone de m me sp cificit antig nique c est la s lection clonale Ensuite ces cellules se diff rencient en RE qui s cr tent des Circulants de m me sp cificit antig nique que les anticorps port s par
9. ille du t tanos les ganglions lymphatiques s hypertrophient Un pr l vement dans un tel ganglion r v le la pr sence de lymphocytes B et de plasmocytes sp cifiques du bacille du t tanos Chez un individu non infect un pr l vement ne r v le que la pr sence de lymphocytes B la suite de l entr e d un antig ne dans l organisme certains lymphocytes B se diff rencient en plasmocytes Les plasmocytes ne se divisent pas et ont une faible dur e de vie noyau mitochondrie r ticulum endoplasmique portant des ribosomes Doc5b Un plasmocyte en microscopie lectronique Didier TS 2002 Remarque ces cellules poss dent galement un appareil de Golgi non visible ici Qu7 Comparer les deux cellules et donner le r le des organites pr sents dans les plasmocytes Pr ciser alors le r le des plasmocytes lien avec les documents pr c dents http lewebpedagogique com bouchaud 4 Afin de mettre en vidence comment s effectue la s lection des lymphocytes B des cultures de cellules sont r alis es Des lymphocytes de souris normale sont mis en pr sence de globules rouges de mouton GRM ou de globules rouges de poulet GRP Une faible proportion d entre eux se fixe sur les GRM ou GRP formant des rosettes Les cellules sont ensuite d pos es dans un tube et centrifug es Les globules rouges et les rosettes forment un culot au fond du tube Seuls les lymphocytes libres surnagent Ils sont inject s
10. les informations et interpr ter ce document Indiquer notamment la relation existant entre sites de reconnaissance et variabilit des acides amin s Compl ter alors le sch ma pr c dent Prot ine gp120 Doc3 Mode d action des anticorps Exemple du virus VIH Hatier TS 2002 Qu5 On parle de complexe immun lorsque des anticorps se lient un antig ne Pr ciser le r le de ce complexe abord dans ce document Cytoplasme membrane plasmique bact rie en cours de digestion bact rie phagocyt e 4 dans une v sicule de phagocytose KE 7 M 5 M F M M pe Se mito h chondrie v sicule de dose chniesant 5 4 bact rie non d truite Fa PB au bact rie en cours de nombreuses bact ries de digestion en cours de digestion o C bact rie dig r e KE Se j E p Mia a a Doc4b Complexe immun et cellule phagocytaire o http svt ac dijon fr schemassvt article php3 id_article 442 http lewebpedagogique com bouchaud 3 Interpr ter un document en microscopie lectronique par transmission MET Qu6 Donner une d finition la phagocytose Interpr ter le r le des anticorps dans la phagocytose Relier au document 3 VIH Compl ter les l gendes manquantes Compl ter le sch ma effectu en Qul avec les nouvelles informations On cherche maintenant d terminer comment sont produits les anticorps lors d une r action immunitaire Chez un individu infect par le bac
11. soigneusement l Agar avec la spatule R aliser une manipulation d apr s C Chauffer le m lange en remuant la spatule jusqu ce que le m lange devienne limpide et un protocole arr ter au tout d but de l bullition pr paration et coulage de la _ D Retirer l aide du chiffon ou de la pince en bois et attendre quelques secondes pour goa A manipuler le b cher sans se br ler i ealni Honte o PE E Pipeter 5 mL de gel d Agar chaud et fluide et le verser dans une bo te de P tri rep rage efficace et non j F Egaliser le niveau et supprimer rapidement les bulles ambigu des puits et des j i i produits G Ne pas remuer les bo tes pendant dix minutes au moins prise de l Agar Les manipulations suivantes doivent se faire sur un plan de travail propre et bien d barrass utilisation judicieuse du mat riel une pipette par produit d p ts soign s 2 Creuser les puits dans la g lose selon les indications ci dessous R aliser un sch ma Creuser les puits avec l emporte pi ce selon le conformit avec l observation s n mod le ci contre En cas de probl me quelques _ l gende compl te et exacte bo tes suppl mentaires sont votre disposition travail clair et soign Eviter surtout les fissures et les bords non nets Eliminer ventuellement les disques de g lose Adopter une d marche explicative avec un cure dent observation des r sultats valida
12. t s en couleur Utiliser un logiciel de visualisation Rechercher le nombre de cha nes d acides amin s qui constituent cet anticorps Pour cela de mod les mol culaires aller dans le menu atome puis colorer par cha ne Noter vos observations Utilisation des fonctionnalit s Remarque la partie en rouge correspond un glucide qui est hors programme Vous du logiciel pouvez l effacer en le s lectionnant et en l effa ant Obtention de r sultats On veut maintenant visualiser les liaisons entre les diverses cha nes Pour cela il faut Fermeture du logiciel en fin de changer de mode de repr sentation On fait tout d abord appara tre le squelette carbon n pour cela aller dans le menu ruban squelette carbon Par la suite il faut effacer les atomes dans atomes repr sentation effacer Pour visualiser les liaisons il faut d sormais les faire appara tre et notamment celles qui sont int ressantes il s agit de ponts disulfures liaison covalente entre deux atomes de soufre de deux acides amin s cyst ine Pour faire appara tre les liaisons liaisons ponts disulfures afficher Vous devez les distinguer mais tr s mal Pour les mettre en vidence il est possible de les colorer sp cifiquement L utilisation de la palette de coloration doit vous aider Il faut juste choisir Ponts disulfures dans la liste d roulante puis une couleur Ils sont un peu plus
13. tion de la bonne hypoth se 3 R fl chir emplacement des diff rents produits s rum et anticorps puis marquer sur la bo te de P tri leur disposition permettant de r v ler la r action de l anticorps tudi avec les diff rents antig nes propos s marquage sous la bo te ou sur la tranche surtout pas sur le http lewebpedagogique com bouchaud l couvercle Appeler pour v rification avant de passer au 4 4 R aliser les d p ts des substances propos es dans les puits de la bo te pr par e en s aidant des consignes ci dessous La solution pr lev e dans le tube avec une pipette propre doit tre d pos e dans le puits sans d bordement ni bulles et sans endommager le gel d Agar On attend au moins 24 heures avant de voir les r sultats 5 Faire un sch ma de la bo te de r sultats 6 Expliquer laquelle des 3 hypoth ses propos es est valid e par ces r sultats en les confrontant votre tableau 1 Activit 2 r le des anticorps dans la r ponse immunitaire Docl Structure d un anticorps Liill Il est possible d observer la structure d un anticorps pas le logiciel Ras Top mode d emploi voir TP procr ation 6 _ Ouvrir Rastop S lectionner la s quence IGG TOTAL pdb dans le r pertoire bankmol 12 immunologie Appara t alors l cran une mol cule d anticorps circulant anti lysozyme Repr senter la mol cule d anticorps en sph res avec les atomes repr sen
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