Wellcolex Colour Shigella [FR]
Contents
1. l aide d un b tonnet d chantillonnage jetable diff rent pour chaque contr le positif Etape 4 Placer la carte sur un agitateur m canique et agiter pendant deux minutes 150 5 tr mn Ceci fait l agglutination doit tre visible sur les quatre cercles de r action Etape 5 Mettre les cartes de r action au rebut selon la m thode appropri e La couleur du latex agglutin avec le r actif 1 et avec le r actif 2 doit correspondre celle du contr le positif bleu ou rouge Des cultures d esp ces connues de Shigella en stock peuvent se substituer au contr le positif Proc dure pour les contr les n gatifs Recommencer la proc dure de test en utilisant du s rum physiologique la place d un chantillon de test Aucune agglutination significative ne doit tre observ e 11 INTERPRETATION DES RESULTATS Un r sultat positif agglutination color e indique la pr sence de Shigella et identifie les diff rentes esp ces pr sentes dans l chantillon comme d crit dans le tableau suivant Couleur R actif de du fond 1 2 l agglutination Rouge Bleu Shigella Shigella sonnei dysenteriae Bleu Rose Shigella Shigella flexneri boydii Aucune Violet N gatif Violet Clair Non interpr table proc dures d isolement compl mentaires n cessaires Les r actifs permettent de d tecter Shigella sonnei formes et ll Shigella flexneri s rotypes 1 6 et variants X et Y Shigella dysenteriae2. Wellcolex Colour Shigella R30858401 50 Tests 1 DOMAINE D APPLICATION Wellcolex Colour Shigella est une m thode qualitative simple et rapide de d tection et d identification des esp ces de Shigella pr sentes sur des milieux de culture solides Le test Wellcolex Colour Shigella a t classifi comme tr s complexe par le CLIA 2 RESUME ET EXPLICATION DU TEST Les micro organismes du genre Shigella sont responsables de la dysenterie bacillaire l une des pathologies diarrh iques les plus r pandues dans le monde Les sympt mes caract ris s par des douleurs abdominales aigu s et une diarrh e sanguinolente sont associ s l invasion de la muqueuse gastrique par les micro organismes une p n tration syst mique par la suite tant inhabituelle La dose infectieuse peut n tre que de 10 organismes elle provoque la diss mination rapide de l infection la suite d une contamination f cale de l environnement Dans la plupart des cas l infection est relativement l g re et ne n cessite qu un traitement d appoint mais certains cas s v res peuvent tre fatals si une antibioth rapie appropri e n est pas prescrite Il est important d identifier de mani re pr cise et aussi rapidement que possible les micro organismes responsables de fa on administrer une antibioth rapie adapt e qui est indispensable la r duction de la pr valence des souches multi r sist
3. tre r alis e sous une hotte de s curit microbiologique adapt e 6 1 2 L quipement non jetable doit tre st rilis en utilisant une proc dure appropri e apr s l emploi bien que la m thode la plus recommand e soit la st rilisation par autoclave pendant 15 minutes 121 C le mat riel usage unique doit tre st rilis par autoclave ou incin r Les claboussures de mat riaux potentiellement infectieux doivent tre essuy es imm diatement l aide d un papier absorbant et les surfaces de travail contamin es doivent tre nettoy es avec un d sinfectant efficace Le mat riel utilis pour le nettoyage des claboussures y compris les gants doit tre limin comme s il s agissait de d chets potentiellement dangereux Ne pas autoclaver le mat riel contenant de l hypochlorite de sodium 6 1 3 Ne pas effectuer de pipetages la bouche Pour manipuler les chantillons et effectuer le test porter des gants usage unique une blouse et des lunettes de protection Une fois le test termin se laver soigneusement les mains 6 1 4 Si l un des r actifs entre en contact avec la peau ou les yeux laver imm diatement la zone concern e avec beaucoup d eau 6 1 5 Ne pas avaler les r actifs 6 2 PRECAUTIONS D ANALYSE 6 2 1 Ne pas utiliser les r actifs au del de la date de p remption indiqu e 6 2 2 Une contamination microbiologique des r actifs doit tre vit e car e
4. 1 R actif Latex 1 1 flacon compte gouttes bouchon blanc 1 flacon compte gouttes bouchon blanc 1 flacon compte gouttes bouchon rouge 1 flacon compte gouttes bouchon bleu 2 R actif Latex 2 3 Contr le positif rouge 4 Contr le positif bleu 5 B tonnets d chantillonnage jetables 2 paquets 6 Cartes de r action jetables 1 paquet 7 Distributeurs d chantillons jetables 2 paquets 8 Tubes de suspension jetables 1 paquet 9 Notice d utilisation 1 10 Guide de lecture 1 5 DESCRIPTION DES REACTIFS PREPARATION POUR UTILISATION ET CONDITIONS DE CONSERVATION RECOMMANDEES Voir galement la section Pr cautions et restrictions d emploi amp cC 2C Sauf indication contraire tous les l ments doivent tre conserv s entre 2 et 8 C pour conserver leurs propri t s actives jusqu la date de p remption indiqu e sur le coffret LATEX REAGENT R actif Latex 1 1 flacon compte gouttes contenant une suspension violette de particules de latex polystyr ne dans du tampon contenant 0 05 de Bronidox comme conservateur Les particules de latex sont recouvertes d un anticorps de lapin pr sentant les sp cificit s suivantes Latex rouge Shigella sonnei formes I amp Il Shigella flexneri types 1 6 X amp Y Latex bleu R actif Latex 2 1 flacon compte gouttes contenant une suspension violette de particules de latex polystyr ne dans du tampon contenant 0 05 de Bronidox comme conser
5. p t en utilisant une goutte de s rum physiologique de 40 yl Il ne doit pas y avoir d agglutination visible Cette image doit tre utilis e comme base pour la comparaison Etape 7 Jeter les cercles de r action utilis s selon les r gles de s curit appropri es V rifier que les r actifs latex ont bien t remis au r frig rateur 9 RESULTATS LECTURE DES RESULTATS Se r f rer au guide de lecture Wellcolex Colour Shigella Positif Un changement de couleur du produit d l agglutination de l une des suspensions color es de latex dans le m lange se produit au cours de la r action induisant un changement de contraste dans la couleur du fond figures 1 et 2 G n ralement l agglutination est d une seule couleur pour un r actif latex mais avec une culture mixte de Shigella on peut n anmoins observer l agglutination de 2 couleurs pour un r actif latex dans ce cas il faut entreprendre des proc dures d isolement compl mentaires ou d une seule couleur pour les 2 r actifs Ces divers cas de figure se distinguent sans difficult En cas de r actions diff rentes de celles pr sent es aux figures 1 et 2 v rifier et ajuster si n cessaire la vitesse de l agitateur N gatif Aucun r actif latex ne s agglutine et l aspect violet homog ne demeure pratiquement inchang tout au long du test figure 3 Noter cependant que de faibles traces de granularit peuvent tre d tect es dans le
6. almonella ZC50 R30858301 8 PROCEDURE MATERIEL FOURNI Le test Wellcolex Colour Shigella ZC51 R30858401 contient suffisamment de r actifs pour la r alisation de 50 tests Voir la section Contenu du coffret MATERIEL NECESSAIRE MAIS NON FOURNI 1 S rum physiologique st rile 0 85 2 Le test doit tre r alis l aide l un agitateur rotatif plan dont le diam tre orbital est gal 38 mm 1 5 in 32 mm 1 25 in et la vitesse de fonctionnement environ 150 tr mn La vitesse et le diam tre de rotation sont essentiels la bonne r alisation du test Aucun autre mat riel ou quipement n est n cessaire PROCEDURE DU TEST ATTENTION Prendre toutes les pr cautions requises pour la manipulation de cultures vivantes au cours du test Identification des colonies Etape 1 Distribuer environ 200 ul de s rum physiologique dans un tube suspension Il est possible d utiliser le distributeur d chantillon jetable qui est gradu environ 200 ul Etape 2 Apr s une nuit de culture pr lever de la plaque de culture 1 ou 2 colonies de taille moyenne 1 2 mm pr sum es de Shigella avec l extr mit plate du b tonnet d chantillonnage et les mettre en suspension avec pr caution dans le s rum physiologique Si les colonies sont petites en pr lever davantage recouvrir l extr mit du b tonnet d chantillonnage Jeter le b tonnet selon les r gles de s curit appropri es Etape 3 R
7. antes et au contr le des pid mies 5 Les souches de Shigella sont class es en 4 esp ces Shigella boydii Shigella dysenteriae Shigella flexneri et Shigella sonnei Ce groupage peut tre obtenu par des tests s rologiques fond s sur les antig nes O cellulaires qui permettent de subdiviser les esp ces en types s rologiques Wellcolex Colour Shigella est une m thode s rologique simple et rapide d identification des esp ces de la majorit des s rotypes de Shigella rencontr s en bact riologie clinique 3 PRINCIPE DE LA M THODE Dans le test Wellcolex Colour Shigella une suspension de bact ries r agit avec 2 r actifs compos s d un m lange de particules de latex rouges et bleues Chaque latex color est recouvert d anticorps sp cifiques des diff rentes esp ces de Shigella En pr sence d antig nes homologues l une des couleurs du m lange va s agglutiner et l identit de l antig ne est indiqu e par la couleur des particules agglutin es qui s accompagne d une modification contrast e de la couleur du fond Chaque combinaison se distingue facilement des autres et d un r sultat n gatif pour lequel les particules restent en suspension homog ne de couleur violette et des r sultats non sp cifiques occasionnels pour lesquels toutes les particules s agglutinent en agr gats violets sur un fond clairci 4 REACTIFS COMPOSITION DU COFFRET Wellcolex Colour Shigella 50 tests ZC51 R30858401
8. artir de chaque chantillon f cal chacun des laboratoires a effectu des tests sur 1 ou plusieurs des chantillons suivants T Colonies n gatives pour le lactose directement partir des g loses primaires s lectives MacConkey XLD DCA SS et Hektoen 2 Colonies n gatives pour le lactose directement partir des sous cultures de bouillon d enrichissement sur g loses s lectives 3 Sous cultures pures de colonies n gatives pour le lactose sur g lose nutritive L agitateur rotatif a t utilis pour lint gralit du test Les r sultats sont pr sent s dans le tableau 1 La performance du test Wellcolex Colour Shigella a t d termin e par comparaison avec les r sultats obtenus par des analyses bact riologiques classiques des chantillons Dans cette tude la sensibilit du test Wellcolex Colour Shigella tait de 98 9 88 89 partir de cultures primaires sur g lose de 100 58 58 partir de sous cultures de bouillon d enrichissement et de 100 299 299 partir de cultures pures voir le tableau 1 La sp cificit du test Wellcolex Colour Shigella dans cette tude tait de 99 4 521 524 partir de cultures primaires sur g lose de 100 320 320 partir de sous cultures de bouillon d enrichissement et de 95 2 60 63 partir de cultures pures La valeur pr dictive d un r sultat positif partir de cultures sur g lose tait de 98 7 445 451 et celle d un r sult
9. at n gatif de 99 9 901 902 L incidence de Shigella dans les chantillons tudi s tait de 33 0 446 1353 La fr quence des r actions non sp cifiques avec le test Wellcolex Colour Shigella tait de 3 0 19 632 pour les cultures primaires sur g lose de 2 1 8 385 pour les sous cultures de bouillon d enrichissement et de 1 8 7 385 pour les cultures pures Ces chantillons ont t exclus du tableau 1 Les autres germes test s avec Wellcolex Colour Shigella et trouv s n gatifs comprenaient Escherichia coli Proteus spp Salmonella spp Campylobacter jejuni Enterobacter spp et Citrobacter freundlii De plus 208 cultures de r f rence de Shigella incluant jusqu 5 souches de chacun des s rotypes de chaque esp ce de Shigella ont t test es lors d une tude ind pendante Wellcolex Colour Shigella a correctement identifi 195 cultures et a donn le r sultat n gatif attendu avec 13 isolats de Shigella boydii des s rotypes 16 18 REMARQUE Pour plus de d tails sur les m thodes de tests s rologiques et biochimiques d identification de Shigella se r f rer au manuel de EWING W H 1986 Edwards and Ewing s Identification of Enterobacteriaceae 4th Ed Elsevier Science Publishing Co Inc New York Tableau 1 Identification de Shigella partir de cultures sur g lose Wellcolex Colour Shigella Examen de R sultat routine Positif N gatif Total Cultur
10. e Positif 88 3e 91 pamaus N gatif 14 521 522 Sous culture Positif 58 0 58 AP bouillon N gatif 0 320 320 Sous cultur Positif 299 3b 302 pure N gatif 0 60 60 Total 446 907 1353 a 33 Shigella boydii 15 Shigella dysenteriae 247 Shigella flexneri et 151 Shigella sonnei b 2 Plesiomonas shigelloides 1 r action Shigella boydii et 1 r action Shigella sonnei Hafnia alvei r action Shigella boydii Shigella sonnei z comprend 7 cultures pour lesquelles les Shigella ont t isol es partir de la culture primaire sur g lose uniquement t Escherichia coli r action Shigella dysenteriae E comprend Escherichia coli Proteus spp Salmonella spp Campylobacter jejuni Enterobacter spp et Citrobacter freundii BIBLIOGRAPHIE 4 Advisory Committee on Dangerous Pathogens 1984 Categorisation of Pathogens According to Hazard and Categories of Containment H M S 0 London E Ewing W H 1986 Edwards and Ewing s Identification of Enterobacteriaceae 4th Ed Elsevier Science Publishing Co Inc New York Pages 166 167 i Isenberg H D Washington J A et al 1985 Manual of Clinical Microbiology 4th Ed Edited by Lennette E H Balows A Hausler W J and Shadomy H J American Society for Microbiology Washington D C Pages 73 98 i Kelly M T Brenner D J et al 1985 Manual of Clinical Microbiology 4th Ed Edited by Lennette E H Balows A Hausler W J and Shadomy H J American Society
11. emettre en suspension les r actifs latex 1 et 2 en les agitant vigoureusement pendant quelques secondes Le flacon tenu verticalement distribuer une goutte de chacun des r actifs latex dans un cercle diff rent de la carte de r action pos e plat Eliminer les bulles d air avec l extr mit du b tonnet Etape 4A l aide d un distributeur d chantillon jetable tenu verticalement laisser tomber d elle m me une goutte 40 pl de suspension bact rienne dans chacun des 2 cercles Eviter la formation de bulles d air Jeter le distributeur selon les r gles de s curit appropri es Etape 5 A l aide d un b tonnet d chantillonnage m langer le contenu de chaque cercle en l talant sur toute la surface du cercle Le m me b tonnet peut tre utilis pour les 2 cercles le jeter ensuite selon les r gles de s curit appropri es Etape 6 Placer la carte sur un agitateur rotatif sur plateau et agiter pendant 2 minutes 150 5 tr mn voir le paragraphe Pr cautions d analyse Eteindre l appareil et observer l apparition ventuelle d une agglutination sans retirer la carte de l agitateur La carte doit tre observ e directement du dessus une distance normale de lecture 25 35 cm Ne pas utiliser de loupe Les images obtenues sont franches et peuvent tre reconnues facilement dans des conditions normales d clairage S il y a des doutes sur la pr sence d agglutination le test doit tre r
12. for Microbiology Washington D C Pages 263 277 5 WHO Scientific Working Group 1980 Bulletin of the World Health Organisation 58 519 537 Donn es sur fichier CONDITIONNEMENT REF 7C51 R30858401 L gende des symboles 50 tests REF R f rence de catalogue IVD Dispositif m dical de diagnostic in vitro CT Consulter le mode d emploi J Limite de temp rature temp rature de conservation Code de lot num ro de lot A utiliser avant date d expiration Fabricant a ce Bronidox est une marque d pos e de Cognis UK Ltd Marque de commerce IFU X7798 R vis ao t 2012 ed Remel Europe Ltd Clipper Boulevard West Crossways Dartford Kent DA2 6PT Royaume Uni Pour tout support technique contacter le distributeur local
13. lle peut r duire la dur e d utilisation du produit et provoquer des r sultats erron s 6 2 3 Amener tous les r actifs et les chantillons temp rature ambiante 18 30 C avant l emploi Replacer les r actifs la temp rature de conservation recommand e imm diatement apr s emploi Les r actifs latex montrant des signes d agr gation lors de leur premi re utilisation peuvent avoir t congel s et ne doivent pas tre utilis s 6 2 4 Conserver les r actifs latex entre 2 et 8 C en position verticale Apr s une conservation prolong e quelques agr gats o un ass chement du haut du flacon peuvent se produire Dans ce cas les agiter vigoureusement pendant quelques secondes jusqu ce que la resuspension soit compl te 6 2 5 Les personnes atteintes de troubles de la vision des couleurs devraient tre capables de voir les agglutinations mais pourraient avoir des difficult s diff rencier les r actions color es dans ce cas la lecture devra tre confi e une personne ayant une vision normale des couleurs 6 2 6 Il est important de tenir les flacons compte gouttes verticalement et que la goutte se forme l extr mit de l embout Si l embout du compte gouttes est mouill un volume incorrect se forme autour de l extr mit et non pas la pointe si cela se produit s cher l embout avant de continuer 6 2 7 L utilisation d un agitateur rotatif mont sur un plateau est indi
14. n pas des r actions crois es on peut les diff rencier sur la base de tests biochimiques Beaucoup de ces esp ces mais pas toutes fermentent le lactose 12 3 Certaines souches de Shigella portent des antig nes d enveloppe inhibant l agglutination O des suspensions Ceci ne s est pas produit lors des essais des r actifs mais l enveloppe peut tre inactiv e si n cessaire en chauffant la suspension 100 C pendant 2 heures Si un isolat bien caract ris sur le plan biochimique ne r agit toujours pas avec les r actifs il doit tre envoy un laboratoire de r f rence pour des tudes compl mentaires 12 4 La qualit de l image d agglutination obtenue d pend de la vitesse et du diam tre orbital de l agitateur rotatif ainsi que de l utilisation d une carte de r action bien plane 13 RESULTATS ATTENDUS Les souches appartenant aux s rotypes communs S sonnei S flexneri S dysenteriae et S boydii produisent une agglutination rouge ou bleue avec le composant correspondant du r actif latex 1 ou 2 14 CARACTERISTIQUES SPECIFIQUES Evaluation externe Une tude effectu e dans plusieurs centres faisant intervenir un laboratoire de sant publique au Royaume Uni trois laboratoires hospitaliers aux Etats Unis deux dans la p ninsule Arabique et trois en Asie du Sud Est a t r alis e pour valuer le test Wellcolex Colour Shigella sur des cultures de routine pour Shigella A p
15. s rotypes 1 12 et Shigella boydii s rotypes 1 15 Un r sultat n gatif indique que les germes test s ne font pas partie des s rotypes de Shigella couverts par les r actifs Si n cessaire ils peuvent tre identifi s par des m thodes conventionnelles Des croissances mixtes de germes ne fermentant pas le lactose tant souvent pr sentes dans les coprocultures il peut s av rer n cessaire en cas de r sultat n gatif de r p ter le test sur une autre s lection de colonies n gatives pour le lactose avant de consid rer la culture comme n gative En cas de r action non sp cifique le r sultat n est pas interpr table il faut employer des m thodes d identification conventionnelles 4 12 LIMITES DE LA METHODE 12 1 Wellcolex Colour Shigella identifie les isolats de Shigella jusqu au niveau de l esp ce Si l on d sire proc der l identification s rologique compl te des types au sein des esp ces il faut utiliser des m thodes conventionnelles la s lection des antis rums appropri s peut tre facilit e par les r sultats du test Wellcolex 12 2 Le genre Shigella est tr s proche d autres membres de la famille des ent robact ries et beaucoup d antig nes somatiques sont partag s avec des organismes provenant d autres esp ces en particulier Escherichia coli mais aussi Hafnia alvei Plesiomonas shigelloides et d autres esp ces Ceux ci repr sentent des antig nes communs et no
16. s images n gatives selon l acuit visuelle de l op rateur Non sp cifique Toutes les particules s agglutinent donnant des amas violets sur un fond clairci figure 4 Il est possible que quelques amas violets apparaissent lors d une r action positive ou n gative Si ceci se produit avec un net changement de couleur au cours du test ou si le fond reste violet uniform ment il ne faut pas tenir compte de ces agr gats violets 10 CONTROLE QUALITE Inspection visuelle Toujours v rifier que les r actifs latex ne produisent pas d aggr gation lorsqu ils sont distribu s sur les cercles de r action En cas d agglutination avant l ajout de l chantillon de culture ou de la suspension bact rienne ne pas utiliser le r actif Proc dures pour les contr les Les tests de contr le qualit doivent tre r alis s sur chaque kit la r ception du num ro de lot de kit Chaque laboratoire doit appliquer les r glementations nationales et locales Proc dure pour les contr les positifs Les contr les positifs fournis permettent de valider la performance des r actifs latex Etape 1 Distribuer deux gouttes de r actif latex 1 et deux gouttes de r actif latex 2 sur quatre cercles de r action diff rents 1 goutte par cercle Etape2 Ajouter une goutte de contr le positif dans deux des cercles de r action l un contenant le r actif latex 1 et l autre le r actif latex 2 Etape3 M langerles r actifs
17. spensable Pour obtenir des performances optimales s assurer que l agitateur rotatif est l horizontale et que sa vitesse a t calibr e sur 150 5 tr mn 6 2 8 Ne pas toucher les surfaces de r action des cartes Il est important de s assurer que les cartes de r action sont parfaitement plat sur le plateau de l agitateur sinon les agglutinations seront difficiles voir 6 2 9 S assurer que les contr les positifs sont remis en suspension en les agitant ou en les passant vigoureusement au Vortex pendant 10 secondes NE PAS passer au Vortex les r actifs latex 7 PRELEVEMENT DES ECHANTILLONS ET PREPARATION DES CULTURES Pour de plus amples informations sur le pr l vement des chantillons et la pr paration des cultures se r f rer un manuel classique de bact riologie Le test peut tre pratiqu sur des colonies ne fermentant pas le lactose poussant en culture primaire sur des milieux s lectifs par exemple g lose MacConkey g lose ent rique Hektoen ou g lose xylose lysine d soxycholate en sous culture sur ces milieux dans un bouillon d enrichissement ou en culture pure par exemple g lose nutritive plat ou inclin e S il est n cessaire de confirmer les r sultats du test la suspension bact rienne utilis e pour le test color peut tre remise en culture pour identification ult rieure la m me suspension peut galement tre utilis e pour l analyse avec le test Wellcolex Colour S
18. vateur Les particules de latex sont recouvertes d un anticorps de lapin pr sentant les sp cificit s suivantes REAGENT 2 Latex rouge Shigella dysenteriae types 1 12 Shigella boydii types 1 15 Latex bleu Contr le positif rouge Suspension bact rienne de germes tu s repr sentatifs de Shigella sonnei et Shigella dysenteriae contenant 0 05 de Bronidox et 0 5 de formald hyde comme conservateurs RED CONTROL Contr le positif bleu Suspension bact rienne de germes tu s repr sentatifs de Shigella flexneri et Shigella boydii contenant 0 05 de Bronidox et 0 5 de formald hyde comme conservateurs BLUE CONTROL Une fois ouvert cartes de r action doit tre conserv temp rature ambiante 18 30 C Ne touchez pas les zones de r action sur les cartes 6 PRECAUTIONS ET RESTRICTIONS D EMPLOI Destin exclusivement au diagnostic in vitro R serv exclusivement un usage professionnel Pour des informations sur les composants potentiellement dangereux se r f rer aux fiches de s curit fournies par le fabricant et aux tiquettes du produit 6 1 INFORMATIONS DE SECURITE 6 1 1 Conform ment aux bonnes pratiques de laboratoire il est fortement recommand de manipuler tous les chantillons cliniques et les r actifs comme s ils taient potentiellement infectieux et de les utiliser avec toutes les pr cautions n cessaires Id alement la proc dure doit
Download Pdf Manuals
Related Search