Brucella Agglutinating Sera [FR]
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1. Le titre de s rum est la derni re dilution pr sentant une agglutination positive Un titre galant ou approchant le titre inscrit sur le flacon doit indiquer une homologie 9 LIMITES DE LA METHODE Des antig nes communs ceux de Brucella ont t d crits dans Yersinia enterocolitica Vibrio cholerae et des esp ces de salmonelles Les tests s rologiques utilis s seuls ne fournissent rien de plus qu une identification pr somptive et un test de confirmation biochimique doit tre r alis Les souches de Brucella pr sentent une r activit crois e dans les tests d agglutination en tube bien qu il existe une diff rence de r activit 10 RESULTATS ATTENDUS Agglutination visible en pr sence d antig nes homologues 11 CARACTERISTIQUES SPECIFIQUES Brucella abortus ZM01 R30164801 et Brucella melitensis ZM02 R30164901 pr sentent une agglutination visible dans les tests d agglutination en tube avec respectivement la suspension color e de Brucella abortus SS14 R30855501 et la suspension color e de Brucella melitensis SS15 R30953501 12 BIBLIOGRAPHIE 1 Corbel M J and Brinley Morgan W J 1975 Proposal for minimal standards for descriptions of new species and biotypes of the genus Brucella Int J Syst Bact 25 83 2 Wilson G S and Miles A A 1975 Topley and Wilson s Principles of Bacteriology Virology and Immunity 6th ed London E Arnold Pages 1063 1065 3 Alton G G J2. DURE MATERIEL FOURNI Voir le paragraphe Composition du coffret MATERIEL NECESSAIRE MAIS NON FOURNI 1 Les suspensions color es de Brucella sont disponibles dans des flacons de 5 ml de liquide R f SS14 R30855501 R f SS15 R30953501 Brucella abortus Brucella melitensis S rum physiologique 0 85 Anse bact riologique et bec bunsen Source de lumi re sur fond sombre Tubes essai et portoir Bain marie r gl 37 C Chronom tre Pipettes de 100 ul 1 000 ul S rum physiologique additionn de ph nol 0 5 PROCEDURE DU TEST RU OR A Agglutination en tube culture inconnue Etape 1 Mettre en suspension une fraction de culture pure dans du s rum physiologique additionn de ph nol 0 5 raison d environ 5 ml par inclinaison Chauffer la suspension 60 C pendant une heure afin d inactiver les organismes et apr s refroidissement ajuster l opacit de la suspension l aide de s rum physiologique additionn de ph nol de fa on obtenir environ 2 x 10 organismes par ml Pr parer une rang e de dilutions de s rum pour chaque test par exemple une rang e de s rum B abortus et une rang e de s rum B melitensis pour chaque organisme inconnu voir tableau 1 en utilisant du s rum physiologique 0 85 comme diluant M langer le contenu du tube 1 et transf rer 0 5 ml dans le tube 2 puis m langer et transf rer 0 5 ml dans le tube 3 et ainsi de suite jusqu au tube 8 non
3. S rums d agglutination de Brucella R30164801 E R30164901 1 DOMAINE D APPLICATION Les s rums d agglutination de Brucella Brucella abortus et Brucella melitensis sont destin s tre utilis s dans des tests quantitatifs d agglutination en tube pour l identification s rologique des cultures de Brucellat des fins pid miologiques et diagnostiques On peut galement les utiliser comme antis rums t moins pour les suspensions color es de Brucella SS14 R30855501 et SS15 R30953501 Les antis rums fournissent uniquement une identification s rologique l identification compl te d un organisme doit se faire uniquement en association avec un test biochimique 2 RESUME ET EXPLICATION DU TEST Les antig nes de surface de Brucella sont r partis en deux cat gories A et M La plupart des souches de Brucella abortus et B suis ont un rapport antig nes A antig nes M lev contrairement la plupart des souches de B melitensis Les antis rums sont pr par s partir de souches homog nes repr sentatives de B abortus et B melitensis et sont absorb s de fa on ce que le premier r agisse plus intens ment avec les souches forte proportion d antig ne A et le second avec les souches forte proportion d antig ne M La r activit diff rentielle peut tre d tect e au moyen de tests d agglutination en tube utilisant chacun des deux s rums dirig s contre une suspension du type d orga
4. cependant tre clarifi s par centrifugation ou par filtration travers une membrane 0 45 um avant l emploi Les s rums fortement troubles sont n cessairement contamin s et doivent tre jet s 5 PRECAUTIONS ET RESTRICTIONS D EMPLOI Destin exclusivement au diagnostic in vitro R serv exclusivement un usage professionnel S il vous pla t se r f rer la fiche de donn es de s curit et l tiquetage du produit pour obtenir des informations sur les composants potentiellement dangereux INFORMATIONS DE SECURITE 1 Manipuler les cultures de Brucella conform ment aux directives appropri es en vigueur 2 L quipement non jetable doit tre st rilis en utilisant une proc dure appropri e apr s l emploi bien que la m thode la plus appropri e soit la st rilisation par autoclave pendant au moins 15 minutes 121 C Le mat riel usage unique doit tre st rilis par autoclave ou incin r 3 Les claboussures de mat riaux potentiellement infectieux doivent tre limin es imm diatement l aide d un papier absorbant et les surfaces contamin es doivent tre nettoy es avec un d sinfectant anti bact rien standard ou de l alcool 70 Le mat riel utilis pour le nettoyage des claboussures y compris les gants doit tre limin comme s il s agissait de d chets biologiquement dangereux 4 Ne pas effectuer de pipetages la bouche Pour manipuler les chantillons et effect
5. ecture des r sultats Etape 4 Observer l apparition ventuelle d une agglutination Il n est pas n cessaire d utiliser un clairage de fond puissant 8 RESULTATS Agglutination en tube culture inconnue Dans une r action positive une agglutination granulaire manifeste doit appara tre Il peut se produire un claircissement du liquide et un s diment qui monte sous forme de masse granulaire puis se red pose au fond du tube lorsqu on donne une chiquenaude celui ci Dans le cas d une r action n gative ainsi que pour le s rum physiologique t moin l aspect de la suspension doit rester inchang et le s diment doit se remettre en suspension quand on donne une chiquenaude au tube Une agglutination dans le tube t moin indique une suspension de type R rugueux qui n est pas appropri e pour le test Agglutination en tube suspension color e En cas d agglutination dans le tube contr le la suspension doit tre limin e Les antis rums ne sont pas des s rums standard le titre obtenu n est pas toujours le titre inscrit sur le flacon mais il doit s en approcher CONTROLE DE QUALITE Il est recommand de tester les s rums r guli rement selon la m thode recommand e avec des suspensions connues comme tant positives et n gatives suspensions color es de Brucella ou suspensions pr par es partir de cultures de Brucella compl tement identifi es INTERPRETATION DES RESULTATS
6. inclus terminer en liminant 0 5 ml du tube 7 Tableau 1 2 3 a 5 6 S rum physiologique m Dilutions en s rie de 0 5 m A finale vA 1 40 1 80 1 160 1 320 1 640 1 1280 Introduire 0 5 ml de la suspension dans chaque tube Bien m langer le contenu des tubes et laisser incuber 37 C pendant 24 heures avant la lecture des r sultats Observer l apparition ventuelle d une agglutination et lire sur un fond sombre Agglutination en tube suspension color e Cette m thode peut tre utilis e pour contr ler l activit des antis rums ou en tant que contr le de l activit des suspensions lors d un test de Widal Etape 1 Pr parer une rang e de dilutions de s rum pour chaque test voir tableau 2 en utilisant du s rum physiologique 0 85 comme diluant M langer le contenu du tube 1 et transf rer 1 ml dans le tube 2 puis m langer et transf rer 1 ml dans le tube 3 et ainsi de suite jusqu au tube 8 non inclus terminer en liminant 1 ml du tube 7 Tableau 2 Tube N 1 2 3 4 5 6 7 8 S rum physiologique 1 9 m Dilutions en s rie de 1 ml gt A finale TA 1 40 1 80 1 160 1 320 1 640 1 1280 Etape 2 Agiter la suspension y compris l ventuel contenu du compte gouttes Distribuer une goutte de la suspension dans chaque tube Etape 3 Bien m langer le contenu des tubes et laisser incuber 37 C pendant 24 heures avant la l
7. nismes test s Normalement il devrait y avoir une diff rence d au moins le quadruple entre les titres obtenus avec les deux antis rums 3 PRINCIPE DE LA METHODE Les tests s rologiques sont bas s sur le fait que les anticorps contenus dans le s rum produits en r ponse l exposition des antig nes bact riens agglutinent visiblement les bact ries portant les antig nes homologues 4 REACTIFS COMPOSITION DU COFFRET S rums d agglutination de Brucella 1 flacon compte gouttes 2 ml Brucella abortus ZM01 R30164801 Brucella melitensis ZMO2 R30164901 DESCRIPTION PREPARATION ET CONDITIONS DE CONSERVATION RECOMMANDEES Voir galement le paragraphe Pr cautions et restrictions d emploi 8C 2 C Les s rums doivent tre conserv s entre 2 et 8 C pour maintenir leur activit au moins jusqu la date inscrite sur le flacon AGGLUTINATING SERUM S rums d agglutination de Brucella Il sagit de s rums de lapin contenant des anticorps anti Brucella abortus ZMO1 R30164801 et anti Brucella melitensis ZM02 R30164901 Conservateur Ph nol 0 5 Chaque flacon dot d une t tine et d un compte gouttes contient 2 ml de liquide et est fourni pr t l emploi Lors de leur conservation il arrive que certains s rums se troublent l g rement Ceci n indique pas n cessairement leur d t rioration et ne provoque normalement pas d interf rences avec les r sultats les s rums peuvent
8. ones L M et al 1975 Laboratory Techniques in Bruccellosis 2nd ed W H O Monograph Series No 55 4 Corbel M J 1975 The serological relationship between Brucella spp Yersinia enterocolitica serotype IX and Salmonella serotypes of Kauffmann White group N J Hyg Camb 75 151 5 Feeley J C 1969 Somatic O antigen relationship of Brucella and Vibrio cholerae J Bacteriol 99 645 13 CONDITIONNEMENT ZMOI R OIGA O i naan aAA A 2ml ZMO2 R30164901Lrreerrerrnennnns 2 mi L gende des symboles R f rence de catalogue Dispositif m dical de diagnostic in vitro Consulter le mode d emploi Limite temp rature temp rature EE ea Code de lot num ro de lot A utiliser avant date de p remption Derni re dilution montrant une agglutination positive a Fabricant FU X7815 GB Imprim au Royaume Uni r vis e Novembre 2013 Remel Europe Ltd Clipper Boulevard West Crossways Dartford Kent DA2 6PT UK Pour tout support technique contacter le distributeur local
9. uer le test porter des gants usage unique et une protection des yeux Une fois le test termin se laver soigneusement les mains 5 Ces r actifs contiennent du ph nol Bien que sa concentration soit faible le ph nol est connu comme tant toxique par ingestion et par contact avec la peau Ne pas avaler les r actifs Si l un d entre eux entre en contact avec la peau ou les yeux laver la surface en rin ant imm diatement et abondamment l eau 6 Conform ment aux bonnes pratiques de laboratoire il est fortement recommand de traiter les chantillons et r actifs comme s ils taient potentiellement infectieux et de les manipuler avec toutes les pr cautions n cessaires PRECAUTIONS D ANALYSE 1 Ne pas utiliser les antis rums au del de la date de p remption indiqu e Eviter la contamination microbiologique des antis rums ceci pouvant provoquer des r sultats erron s et r duire la dur e de vie du produit 2 Ne pas modifier la proc dure du test ni le temps d incubation ou les temp ratures 3 Apr s emploi replacer les s rums la temp rature de conservation recommand e 6 PRELEVEMENT TRANSPORT ET CONSERVATION DES ECHANTILLONS Pour l utilisation de cultures de Brucella s assurer que les cultures sont r centes et proviennent de milieux non s lectifs En cas d utilisation de s rums comme t moins pour les suspensions color es de Brucella les conserver entre 2 et 8 C 7 PROCE
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