Protocole standardisé d`échantillonnage, de conservation
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1. PHYTOPLANCTON_ PROTOCOLE_STANDARDISE v3 3 1_2009 09 28 doc Fm C Cemagref Sciences eaux amp territoires Direction g n rale Parc de Tourvoie BP 44 92163 Antony cedex T l 01 40 96 61 21 Fax 01 40 96 62 25 www cemagref fr2. Dans le cas de comptage de transects la surface d un champ correspond la surface d un transect gt Choix de l objet compt cel cellule col colonie fil filament par 100um de long PHYTOPLANCTON_ PROTOCOLE_STANDARDISE V3 3 1_2009 09 28 doc 40 44 Cemagref Protocole standardis phytoplancton septembre 2009 Choix de l objet compt cel cellule col colonie fil filament par 100um de long PHYTOPLANCTON_ PROTOCOLE_STANDARDISE V3 3 1_2009 09 28 doc 41 44 Protocole standardis phytoplancton septembre 2009 Cemagref Annexe 8 Tableau type de rendu du r sultat d un comptage phytoplanctonique Ce document peut subir des modifications voir le site Internet du Cemagref http www hydrobio dce cemagref fr pour disposer de la derni re version PHYTOPLANCTON_ PROTOCOLE_STANDARDISE v3 3 1_2009 09 28 doc 42 44 Protocole standardis phytoplancton septembre 2009 Relev phytoplanctonique en plan d eau V331 Cemagref R sultats comptage du phytoplancton m thode Uterm hl Septembre 2009 PHYTOPLANCTON_ PROTOCOLE_STANDARDISE v3 3 1_2009 09 28 doc Protocole standardis phytoplancton septembre 2009 Cemagref
3. Pascher A Vischer W 1939 Dr L Rabenhorst s Kryptogamen Flora 11 Heterokonten New York USA Johnson reprint corporation 1092 p Pentecost A 1984 Introduction to freshwater algae Richmond GBR Richmond Publishing Co 247 p Popovsky J Pfiester L A 1990 Susswasserflora von Mitteleuropa 6 Dinophyceae Dinoflagellida Stuttgart Gustav Fischer Verlag 272 p Prescott G W Bicudo C E d M Vinyard W C 1982 A synopsis of north american desmids part Il Desmidiaceae Placodermae section 4 Lincoln USA University of Nebraska press 700 p Prescott G W Hannah T Croasdale H T et al 1975 A synopsis of north american desmids part Il Desmidiaceae Placodermae section 1 Lincoln USA University of Nebraska Press 275 p Prescott G W Hannah T Croasdale H T et al 1977 A synopsis of north american desmids part Il Desmidiaceae Placodermae section 2 Lincoln USA University of Nebraska Press 413 p Prescott G W Hannah T Croasdale H T et al 1981 A synopsis of north american desmids part Il Desmidiaceae Placodermae section 3 Lincoln USA University of Nebraska press 720 p Ramanathan K R 1964 Ulotrichales New Delhi IND Indian council of agricultural research 188 p Randhawa M S 1959 Zygnemaceae New Delhi IND Indian council of agricultural research 478 p Reichardt E 1999 conographia diatomologica vol 8 Z i mur revision der gattung
4. Une seule station de mesure est requise localis e la verticale du point de plus grande profondeur et pour les retenues artificielles en dehors de la zone d influence du barrage souvent mat rialis e par une ligne de bou e Une carte bathym trique pr cise du plan d eau permet le rep rage de la zone la plus profonde En l absence de carte bathym trique un relev au sondeur pour rep rer cette zone profonde est n cessaire Dans ce cas une carte topographique au 1 25 000 peut faciliter le rep rage de la zone du plan d eau susceptible d h berger la zone profonde afin de gagner du temps dans cette prospection avec le sondeur Une fois localis e cette station doit tre positionn e au GPS afin de pouvoir tre retrouv e chaque campagne Un document reprenant le descriptif de cette station Voir en Annexe 2 un exemple de fiche descriptive doit tre labor 3 PRELEVEMENTS ET PARAMETRES MESURES 3 1 Physico chimie de terrain Sur cette station doivent tre r alis es diverses mesures de physico chimie de terrain indissociables de l tude du phytoplancton II s agit de la transparence valu e au moyen du disque de Secchi EN ISO 7027 2000 elle permet de calculer la profondeur du pr l vement int gr des profils verticaux de la surface jusqu un m tre au dessus du fond de la temp rature du pH de la conductivit et de l oxyg ne dissous mg l et mesur s tous les m tres voire 50 cm si le p
5. de campagne de mesure informatif Ce document peut subir des modifications voir le site Internet du Cemagref http www hydrobio dce cemagref fr pour disposer de la derni re version PHYTOPLANCTON_ PROTOCOLE_STANDARDISE v3 3 1_2009 09 28 doc 26 44 Protocole standardis phytoplancton septembre 2009 Cemagref Relev phytoplanctonique en plan d eau V331 DONNEES GENERALES CAMPAGNE Septembre 2009 Plan d eau Date Station ou n d chantillon Code lac Organisme op rateur R f dossier STATION Coordonn es de la station relev es sur LJ GPS U carte IGN Lambert 93 syst me fran ais en m X altitude WGS 84 syst me international donn es GPS en dms N altitude Profondeur m vent Q nu U faible Q moyen LY fort m t o Olsoleil Qfaiblement nuageux Litres nuageux LI pluie fine LI pluie forte Clcr puscule Conditions d observation Surface de Peau L lisse U faiblement agit e I agit e I tr s agit e Hauteur des vagues m Bloom algal U oui Q non niveau des eaux par rapport la Marnage Q oui non v g tation de ceinture pour les plans d eau marnant Remarques PRELEVEMENTS Heure d but de relev Heure de fin de relev Q phytoplancton CI bouteille int gratrice Mat riel employ Q chlorophylle en CI bouteille Van Dorn U eau Q pompe Volume filtr pour la chlorophylle Pr l vem
6. gt Hat R u zz 7 f Principe de fonctionnement de la cloche INRA 1 Cloche vide la surface 2 Cloche se remplissant au cours de la descente clapet ouvert 3 Fin de la descente 4 Remont e de la cloche clapet ferm 5 Cloche remplie en surface PHYTOPLANCTON_ PROTOCOLE_STANDARDISE v3 3 1_2009 09 28 doc Protocole standardis phytoplancton septembre 2009 Cemagref Annexe 4 Sch ma descriptif du systeme et du fonctionnement du pr leveur int gr utilisant un tuyau Version simple u A Buchen Tuyau gradu diam 25 mm o Le tuyau est descendu lentement dans la colonne d eau jusqu la profondeur maximale de pr l vement souhait e fin de la zone euphotique e Le bouchon est plac sur le sommet du tuyau En tirant sur la corde le tuyau est ramen la surface en partant du fond L chantillon ainsi pr lev est transf r dans un r cipient propre type seau pour y tre homog n is avant prise de sous chantillons N B un tuyau translucide type cristal est requis pour s assurer du maintien en tat de propret de l int rieur Un diam tre de 25 mm et une longueur de 10 m peut convenir tout d pend du volume d chantillon final souhait Cet appareil doit tre stock l abri de la lumi re pour viter les d veloppements algaux intempestifs dans le tuyau PHYTOPLANCTON_ PROTOCOLE_STANDARDISE v3 3 1_2009 09 28 doc 33 44 Protocole standardis
7. phytoplancton septembre 2009 Cemagref Introduction Ce document vise a proposer un cadre pour l chantillonnage la conservation l observation et le d nombrement des communaut s phytoplanctoniques dans le cadre de la mise en uvre de la Directive Cadre sur l Eau DCE et un cadre d acquisition des l ments physico chimiques obligatoirement associ s II est le r sultat des exp riences acquises au cours des 500 relev s de phytoplancton r alis s sur plus de cent lacs du territoire fran ais stock s dans la base Plan d eau du Cemagref obtenus pour partie dans le cadre de relev s types Diagnose Rapide Cemagref 2003 ainsi que de l int gration des exigences de la DCE et de la norme europ enne NF EN 15204 2006 Ce protocole s applique a l ensemble des plans d eau fran ais qu ils soient profonds ou de faibles profondeurs stratifi s ou non Une uniformisation de la collecte des donn es est indispensable afin d assurer la bancarisation des informations sur le phytoplancton dans le cadre de la mise en uvre de la DCE sur les plans d eau et la mise en place des R seaux de Contr le et de Surveillance RCS et de R f rence RR Une base de donn es coh rente l chelon national contenant des donn es comparables est galement indispensable pour tre en mesure de faire voluer l indice planctonique de la Diagnose Rapide et le rendre DCE compatible Ce travail est le fruit de la collaboration entre l unit
8. phytoplancton septembre 2009 Cemagref Version am lior e Tuyau gradu diam 25 mm Raccord m tallique Cr pine m tallique avec clapet o Apr s fermeture de la vanne du fond le tuyau est descendu lentement dans la colonne d eau jusqu la profondeur maximale de pr l vement souhait e fin de la zone euphotique La vanne quart de tour de surface est ferm e Le tuyau est ramen la surface comme il a t descendu sans coup important L chantillon ainsi pr lev est transf r en ouvrant la vanne du fond dans un r cipient propre type seau pour y tre homog n is avant prise de sous chantillons N B La cr pine doit tre munie d un clapet anti retour dont on enl ve le ressort de rappel Un tuyau translucide type cristal est requis pour s assurer du maintien en tat de propret de l int rieur Un diam tre de 25 mm et une longueur de 10 m peut convenir tout d pend du volume d chantillon final souhait Cet appareil doit tre stock l abri de la lumi re pour viter les d veloppements algaux intempestifs dans le tuyau PHYTOPLANCTON_ PROTOCOLE_STANDARDISE v3 3 1_2009 09 28 doc 34 44 Protocole standardis phytoplancton septembre 2009 Cemagref Annexe 5 Pr paration des fixateurs PHYTOPLANCTON_ PROTOCOLE_STANDARDISE v3 3 1_2009 09 28 doc 35 44 Protocole standardis phytoplancton septembre 2009 Cemagref SOLUTIONS DE FIXATION DES ECHANTILLONS 1
9. 1 Teil Naviculaceae Berlin Allemagne Specktrum Akademischer Verlag GmbH Heidelberg 876 p Krammer K Lange Bertalot H 2000 Susswasserflora von Mitteleuropa 2 Bacillariophyceae Part 5 English and french translation of the keys Berlin DEU Spektrum 311 p Krammer K Lange Bertalot H 2000 Diatoms of europe vol 1 the genus Pinnularia Ruggell GER A R G Gantner Verlag K G 703 p Krammer K Lange Bertalot H 2001 Diatoms of europe vol 2 Navicula sensu stricto 10 genera separated from Navicula sensu lato Frustulia Ruggell GER A R G Gantner Verlag K G 526 p Krammer K Lange Bertalot H 2002 Diatoms of europe vol 3 Cymbella Ruggell GER A R G Gantner Verlag K G 584 p Krammer K Lange Bertalot H 2003 Diatoms of europe vol 4 Cymbopleura Delicata Navicymbula Gomphocymbellopsis Afrocymbella Ruggell GER A R G Gantner Verlag K G 530 p Krammer K Lange Bertalot H 2004 Susswasserflora von Mitteleuropa 2 Bacillariophyceae 4 Teil Achnanthaceae Kritische erg nzungen zu Achnanthes s l Bavicula s str Gomphonema Berlin DEU Spektrum 468 p Krammer K Lange Bertalot H 2007 Susswasserflora von Mitteleuropa 2 Bacillariophyceae 2 Teil Bacillariaceae Epithemiaceae Surirellaceae Munich DEU Elsevier 610 p PHYTOPLANCTON_ PROTOCOLE_STANDARDISE v3 3 1_2009 09 28 doc 21 44 Protocole standardis phytoplancton septembre 2009 Cemagref Krieger W 1937
10. Cette liste ne constitue pas une bibliographie exhaustive sur le phytoplancton mais pr sente les documents utilis s actuellement a des degr s divers pour la d termination des taxons phytoplanctoniques dans le cadre de l application de relev en plan d eau Les r f rences de base consid rer comme n cessaires une application en routine sont indiqu es par un ast risque Anagnostidis K Komarek J 1985 Modern approach to the classification system of Cyanophytes 1 Introduction Archiv fur Hydrobiologie Suppl 71 1 2 291 302 Anagnostidis K Komarek J 1988 Modern approach to the classification system of cyanophytes 3 Oscillatoriales Archiv fur Hydrobiologie suppl 80 1 4 327 472 Anagnostidis K Komarek J 1990 Modern approach to the classification system of Cyanophytes 5 Stigonematales Archiv f r Hydrobiologie Suppl 86 Algological Studies 59 1 73 Barber H G Haworth E Y 1981 Scientific publication N 44 A guide to the morphology of the Diatom Frustule Ambleside GBR Freshwater biological association 112 p Bornet E Flahault C 1959 R vision des Nostocac es h t rocyst es contenues dans les principaux herbiers de France Weinheim DEU J Cramer 262 p Bourrelly P 1966 Les algues d eau douce Initiation la syst matique Tome Les algues vertes N Boub e amp Cie ed Paris Boub e 511 p Bourrelly P 1968 Les algues d eau douce Initiation la
11. de Recherche R seaux Epuration et Qualit des Eaux du Cemagref de Bordeaux et l INRA de Thonon les Bains laquelle s est ajout e la contribution de Maria Leitao du bureau d tude Bi Eau PHYTOPLANCTON_ PROTOCOLE_STANDARDISE v3 3 1_2009 09 28 doc 5 44 Protocole standardis phytoplancton septembre 2009 Cemagref 1 CAMPAGNES DE PRELEVEMENT Le choix des p riodes de pr l vement est le premier l ment crucial dans l analyse des communaut s phytoplanctoniques Leur mauvais positionnement dans l ann e entra ne des biais manque de certains cort ges algaux dans l interpr tation des donn es collect es 4 campagnes de pr l vement sont pr conis es durant l ann e dont 3 durant la p riode estivale soit entre mai et octobre et plac es de la mani re suivante la premi re entre mi f vrier et fin mars fin de l hiver correspondant la p riode de brassage et la toute premi re phase de croissance du phytoplancton c est parfois la seule dans les milieux tr s oligotrophes la deuxi me entre mi mai et fin juin durant la mise en place de la thermocline si une thermocline est pr sente sur le plan d eau consid r correspondant la phase printani re de croissance du phytoplancton faudra viter autant que possible la phase des eaux claires pr sentes sur certains types de plan d eau caus e par un maximum de broutage par le zooplancton transition entre les communaut s printani re et est
12. de collecte employ a cette date sur le plan d eau ainsi que la nomenclature utilis e pour identifier l chantillon voir document informatif type en Annexe 1 3 3 Pr l vement pour la mesure de chlorophylle a Pour chacune des campagnes de mesures un sous chantillon issu du pr l vement int gr cf paragraphe 3 2 pour analyse des pigments chlorophylliens au laboratoire est requis Ainsi de m me que pour le phytoplancton l analyse de la chlorophylle a et des ph opigments sera r alis e sur l chantillon int gr sur la zone euphotique Un litre d eau stock dans un flacon propre est en g n ral n cessaire et suffisant quel que soit le niveau de trophie du plan d eau Dans la mesure du possible l chantillon doit tre filtr sur le terrain d faut le soir m me au laboratoire l aide d une pompe vide manuelle ou lectrique apr s homog n isation de l chantillon sur un filtre en fibre de verre ou en ac tate de cellulose de 0 7 um de pores type GF F de Whatman Le volume filtrable d pend de la nature et de la quantit de mati res en suspension pr sentes dans l eau On filtre alors si possible 1000 ml sinon un volume inf rieur noter imp rativement en s assurant que la dur e de filtration n exc de pas 10 minutes et que la d pression n cessaire la filtration est la plus faible possible NF T 90 117 1999 Le filtre est alors plac dans un tube centrifugation de 15 ml usage uni
13. donn es de l outil de comptage ne sont pas disponibles pour le taxon observ ou si elles ne correspondent pas a ce qui est observ dans l chantillon ces biovolumes doivent tre calcul s par des mesures r alis es par l op rateur la suite du comptage Dans ce cas les mesures seront r alis es sur une trentaine d individus si possible pour obtenir un biovolume moyen Si le taxon est tr s peu repr sent dans l chantillon moins de 30 individus il sera pr f r l emploi des dimensions moyennes propos es dans la litt rature pour calculer le biovolume L outil informatique propos en t l chargement permet aussi l export des donn es pour bancarisation 6 ARCHIVAGE DES DONNEES Afin de permettre l utilisation ult rieure des donn es acquises sur le compartiment phytoplanctonique des plans d eau l archivage des donn es brutes minimales doit tre sous forme informatique et de la forme suivante un tableau ou document reprenant les donn es g n rales sur le plan d eau et la station de mesure caract ristiques localisation GPS Annexe 2 un tableau des campagnes avec le nom du plan d eau les dates les conditions m t orologiques observ es le nombre et le type de param tres mesur s et d chantillons pr lev s Annexe 1 un tableau r capitulatif des valeurs de physico chimie par campagne valeur de Secchi paisseur de la zone euphotique profils de temp rature pH conductivit oxyg ne d
14. eau Rapport Cemagref Lyon Agence de l eau Rh ne M diterran e Corse 24 p Circulaire surveillance DCE 2006 16 13 juillet 2006 Document de cadrage pour la constitution et la mise en uvre du programme de surveillance contr le de surveillance contr les op rationnels contr les d enqu te et contr les additionnels pour les eaux douces de surface cours d eau canaux et plans d eau Direction de l eau Minist re de l Ecologie et du D veloppement Durable 39 p NF EN ISO 7027 2000 Qualit de l eau D termination de la turbidit AFNOR 25 p NF EN 15204 2006 Qualit de l eau Norme guide pour le d nombrement du phytoplancton par microscopie invers e m thode Uterm hl AFNOR 39 p NF T 90 117 1999 Qualit de l eau Dosage de la chlorophylle a et d un indice ph opigments AFNOR 11 p NF T 90 354 2007 Qualit de l eau D termination de l Indice Biologique Diatom es IBD AFNOR 79 p Pelletier J P amp Orand A 1978a Appareil de pr l vement d un chantillon dans un fluide Brevet d invention 76 08579 Pelletier J P amp Orand A 1978b Bouteille pr l vement int gr Mode d emploi INRA Thonon 9 p Uterm lh H 1958 Zur vervollkommnung der quantative phytoplanktonmethodik Mitt Int Ver Limnol vo 9 1 38 PHYTOPLANCTON_ PROTOCOLE_STANDARDISE v3 3 1_2009 09 28 doc 17 44 Protocole standardis phytoplancton septembre 2009 Cemagref Ouvrages de taxinomie
15. es sous forme de cellules isol es Dans ce cas l individu compt est la cellule Les taxons identifi s lors d une premi re prospection de l chantillon comme recommand dans la norme NF EN 15204 non observ s par la suite lors du comptage peuvent tre mentionn s dans le relev mais sans abondance Ainsi ils participeront la richesse du peuplement observ Les r sultats seront donn s en abondance exprim e en nombres de cellules par millilitre d chantillon et en biovolume exprim en millim tre cube par litre correspondant Cela afin de permettre une comparaison avec les donn es de la litt rature et des autres pays europ ens Le Cemagref et l INRA mettent disposition des utilisateurs un outil de comptage informatique voir le site du Cemagref http www hydrobio dce cemagref fr conforme ces pr conisations facilitant les saisies des noms d esp ces et calculant directement les abondances et les biovolumes correspondants issus de calculs ou disponibles dans la litt rature Dans le cas de comptage sans l aide d un ordinateur l Annexe 7 pr sente une tableau type de saisie au laboratoire contenant l ensemble des informations n cessaires l expression des r sultats souhait s PHYTOPLANCTON_ PROTOCOLE_STANDARDISE v3 3 1_2009 09 28 doc 15 44 Protocole standardis phytoplancton septembre 2009 Cemagref En ce qui concerne les biovolumes des valeurs types sont propos s pour un grand nombre de taxons Si les
16. on the occasion of his 65 th birthday Ruggell A R G Gantner Verlag Kommanditgesellschaft 633 p Jahn R Meyer B Preisig H R 1997 Nova Hedwigia vol 65 n 1 4 Microalgae aspects of diversity and systematics Stuttgart J Cramer 452 p John D M Brook A J Whitton B A 2002 The Freshwater Algal Flora of the British Isles An Identification Guide to Freshwater and Terrestrial Algae Cambridge University Press ed Cambridge 702 p Kadlubowska J Z 1984 Susswasserflora von Mitteleuropa 16 Chlorophyta VIII Conjugatophyceae Zygnemales Jena DEU VEB Gustav Fischer Verlag 531 p Kargupta A N Jha R N 2004 Algal flora of Bihar Zignemataceae Dehra Dun Bishen Singh Mahendra Pal Singh 237 p Kolkwitz R Krieger H 1971 Dr L Rabenhorsts Kryptogamen Flora 13 2 Abteilung Zygnemales Lieferung 1 4 New York USA Johnson reprint corporation 163 p Komarek J Anagnostidis K 1986 Modern approach to the classification system of Cyanophytes 2 Chroococcales Archiv fur Hydrobiologie Suppl 73 2 157 226 Komarek J Anagnostidis K 1989 Modern approach to the classification system of Cyanophytes 4 Nostocales Archiv fur Hydrobiologie Suppl 82 3 247 345 PHYTOPLANCTON_ PROTOCOLE_STANDARDISE v3 3 1_2009 09 28 doc 20 44 Protocole standardis phytoplancton septembre 2009 Cemagref Komarek J Anagnostidis K 1999 Susswasserflora von Mitteleuropa 19 Cyanoprokaryot
17. tre respect es en raison d impr vus constat s en cours d chantillonnages mentionner clairement la date de la campagne posant probl me afin qu elle soit facilement identifi e comme telle En cas de vent soutenu partir de force 3 petite brise soit partir d environ 12 km h tr s petites vagues inf rieures a 0 6 m les cr tes commencent d ferler les moutons apparaissent la campagne ne doit pas tre r alis e mais doit tre report e une date ult rieure PHYTOPLANCTON_ PROTOCOLE_STANDARDISE v3 3 1_2009 09 28 doc 6 44 Protocole standardis phytoplancton septembre 2009 Cemagref Pour chaque campagne de mesure et ou de pr l vement une fiche g n rale de campagne donnant les principaux l ments signal tiques g n raux de la campagne nom du plan d eau identit des pr leveurs dates heures de d but et de fin conditions m t orologiques le cas ch ant variations m t orologiques susceptibles d influer sur les mesures et chantillonnages couleur de la colonne d eau bloom algal points particuliers signaler notamment marnage constat nature des chantillonnages r alis s doit tre remplie Voir document informatif type en Annexe 1 2 CHOIX DE LA STATION DE PRELEVEMENT Le site d chantillonnage doit tre a une distance suffisante de la berge pour s affranchir des contaminations par les algues p riphytiques et par les efflorescences accumul es sur les berges par les vents
18. 1972 Die binnengewasser band XVI Das phytoplankton des susswassers systematik und biologie 6 teil Chlorophyceae Grunalgen ordnung Tetrasporales E Schweizerbart sche verlagsbuchhandlung ed Stuttgart DEU 150 p Geissler U Hakansson H Miller U et al 1990 Beihefte zur Nova Hedwigia heft 100 Contributions to the knowledge of microalgae particularly diatoms Berlin DDR J Cramer 300 p Gemeinhardt K 1971 Dr L Rabenhorst s Kryptogamen Flora 12 Chlorophyceae 4 Abteilung Oedogoniales New York USA Johnson reprint corporation 453 p Gemeinhardt K Schiller J 1971 Dr L Rabenhorst s Kryptogamen Flora 10 Flagellatae 2 Abteilung Silicoflagellatae Coccolithineae New York USA Johnson reprint corporation 589 p Germain H 1981 Faunes et flores actuelles Flore des diatom es Diatomophyc es eaux douces et saum tres du Massif Armoricain et des contr es voisines d Europe occidentale Soci t Nouvelle des Editions Boub e ed Paris 444 p Guiry M D Guiry G M 2008 AlgaeBase version 4 2 World wide electronic publication National University of Ireland ed Galway http www algaebase org PHYTOPLANCTON_ PROTOCOLE_STANDARDISE v3 3 1_2009 09 28 doc 19 44 Protocole standardis phytoplancton septembre 2009 Cemagref Guttinger W 1991 Collection of sem micrographs Series 5 Diatoms Pura CH Guttinger W 57 p Hintz G 1990 Cryptogamica helvetica Diatomeen aus der umge
19. Dr L Rabenhorst s Kryptogamen Flora 13 Conjugatae 1 Abteilung Die desmidiaceen 1 Teil New York USA J ohnson reprint corporation 808 p Krieger W 1939 Dr L Rabenhorst s Kryptogamen Flora 13 1 Abteilung Die desmidiaceen 2 Teil Lieferung 1 New York USA Johnson reprint corporation 163 p Kristiansen J Preisig H R 2007 Susswasserflora von Mitteleuropa 1 Chrysophyte and haptophyte algae Part 2 Synurophyceae 2 ed Berlin DEU Spektrum Akademisher Verlag 252 p Kumano S 2002 Freshwater Red Algae of the World Biopress Limited ed Bristol Biopress Ltd 375 p Kylin H 1956 Die gattungen der rhodophyceen Lund DEU Cwk Gleerups F rlag 673 p Lange Bertalot H 1993 Bibliotheca diatomologica band 27 85 neue taxa und ber 100 weitere neu definierte taxa erg nzend zur S sswasserflora von Mitteleuropa vol 2 part 1 4 Berlin DEU Cramer 454 100 env p Lange Bertalot H Krammer K 1987 bibliotheca diatomologica band 15 Bacillariaceae Epithemiaceae Surirellaceae STUTTGART J CRAMER BERLIN 289 p Lange Bertalot H Krammer K 1989 Achnanthes eine monographie der gattung Berlin Stuttgart J Cramer 393 p Lange Bertalot H Metzeltin D 1996 conographia diatomologica vol 2 ndicators of oligotrophy Konigstein DEU Koeltz Scientific Books 390 p Leitao M Cout A 2005 Fau et Sant Guide pratique des Cyanobact ries planctoniques du Grand Ouest de
20. Gomphonema die arten um G affine insigne G angustatum microspus G acuminatum sowie gomphonemoide diatomeen aus dem oberoligoz n in b hmen Rugell ARG 203 p Rieth A 1980 Susswasserflora von Mitteleuropa 4 Xanthophyceae 2 Teil Stuttgart DEU Gustav Fischer Verlag 147 p Ruck E C Kociolek J P 2004 Bibliotheca diatomologica band 50 Preliminary phylogeny of the family Surirellaceae Bacillariophyta Berlin DEU Cramer 236 p Ruzicka J 1977 Die desmidiaceen mitteleuropas band 1 1 Lieferung Stuttgart DEU E Schweizerbart sche verlagsbuchhandlung 337 p Ruzicka J 1981 Die desmidiaceen mitteleuropas band 1 2 Lieferung Stuttgart DEU E Schweizerbart sche verlagsbuchhandlung 809 p Schiller J 1933 Dr L Rabenhorsts Kryptogamen Flora 10 Flagellatae 3 Abteilung Dinoflagellatae Peridineae in monographischer behandlung 1 Teil New York USA Johnson reprint corporation 617 p PHYTOPLANCTON_ PROTOCOLE_STANDARDISE v3 3 1_2009 09 28 doc 23 44 Protocole standardis phytoplancton septembre 2009 Cemagref Schiller J 1937 Dr L Rabenhorsts Kryptogamen Flora 10 Flagellatae 3 Abteilung Dinoflagellatae Peridineae in monographischer behandlung 2 Teil New York USA Johnson reprint corporation 589 p Siver P A Hamilton P B Stachura Suchoples K et al 2005 conographia diatomologica vol 14 Diatoms of North America the freshwater flora of Cape Cod Ruggell Allema
21. ISE v3 3 1_2009 09 28 doc 9 44 Protocole standardis phytoplancton septembre 2009 Cemagref 4 CONSERVATION DES ECHANTILLONS 4 1 Pour analyse de la chlorophylle A d faut d une filtration sur le terrain l chantillon pour analyse de la chlorophylle est stock dans un flacon d un litre en poly thyl ne PE st rile usage unique et conserv l abri de la lumi re dans une glaciere a 4 C jusqu au transfert au laboratoire d analyse La conservation en glaci re permet aussi de prot ger de la lumi re l chantillon sur filtre destin au dosage de la chlorophylle L chantillon sur filtre peut tre congel pour analyse ult rieure 12 mois maximum Le reste du document ne concerne plus que l tude du phytoplancton en laboratoire l analyse de la chlorophylle et des ph opigments se faisant suivant les protocoles d crits dans la norme NF T 90 117 1999 Les chlorophylles a b et c c2 peuvent tre aussi d termin es et apporter des informations compl mentaires l aide des formules modifi es de Jeffrey amp Humphrey Arar 1997 4 2 Pour analyse du phytoplancton L chantillon de phytoplancton est fix sur le terrain l aide d une solution de Lugol alcalin du commerce ou pr par e voir d tail en Annexe 5 afin d obtenir une concentration finale d environ 0 5 dans l chantillon soit environ 8 gouttes pour 100 ml ou 2 5 ml pour un flacon de 500 ml Cette concentration finale peut s appr cier
22. La solution iodo iodur e de Lugol alcalin o lode en paillettes 10 g o lodure de potassium 20 g o Ac tate de sodium 20g o Eau distill e 200 ml Broyer au mortier l iode l2 et l iodure de potassium IK avec un peu d eau Compl ter en eau distill e Agiter jusqu compl te dissolution Puis ajouter 20 g d ac tate de sodium CH3COO Na Lorsque la solution est proche de la saturation il Lovie 2 UTILISATION ajouter a l eau de l chantillon pour une concentration finale de 0 5 soit 8 gouttes pour 100ml afin d obtenir une couleur brun clair whisky Si perte de cette couleur dans le temps alors ajouter quelques gouttes de plus IDENTIFICATION DES DANGERS Produit non consid r comme dangereux selon la Directive 67 548 CEE 2 La solution de glutarald hyde o glutarald hyde 50 o cacodylate de sodium Tamponner la solution de glutarald hyde avec le cacodylate de sodium a pH neutre UTILISATION ajouter l eau de l chantillon pour une concentration finale de 0 5 IDENTIFICATION DES DANGERS Nocif en cas d ingestion Toxique par inhalation Provoque des br lures Peut entrainer une sensibilisation par inhalation et par contact avec la peau Tr s toxique pour les organismes aquatiques 3 La solution de formol Solution de formol du commerce a 37 de formald hyde UTILISATION ajouter l eau de l chantillon pour une concentration finale de 5 en volume IDENTIFICATION DES DANGERS Toxique par in
23. Protocole standardise d echantillonnage de conservation d observation et de denombrement du phytoplancton en plan d eau N pour la mise en uvre de la DCE Version 3 3 1 Septembre 2009 Christophe Laplace Treyture Jacques Barbe Alain Dutartre Cemagref Unit de Recherche R seaux Epuration et Qualit des Eaux 50 avenue de Verdun F 33612 Cestas cedex Jean Claude Druart Fr d ric Rimet Orlane Anneville INRA UMR Carrtel 75 av de Corzent BP 511 F 74203 Thonon les Bains cedex P Cemagref Sciences eaux amp territoires Protocole standardis phytoplancton septembre 2009 SOMMAIRE INTRODUCTION I CAMPAGNES DE PRELEVEMENT 2 CHOIX DE LA STATION DE PRELEVEMENT Io PRELEVEMENTS ET PARAMETRES MESURES 3 1 PHYSICO CHIMIE DE TERRAIN 3 2 PRELEVEMENT DE PHYTOPLANCTON 3 3 PRELEVEMENT POUR LA MESURE DE CHLOROPHYLLE A 3 4 PRELEVEMENT POUR LES MESURES CHIMIQUES EN LABORATOIRE 4 CONSERVATION DES ECHANTILLONS 4 1 POUR ANALYSE DE LA CHLOROPHYLLE 4 2 POUR ANALYSE DU PHYTOPLANCTON 5 ANALYSE DU PHYTOPLANCTON 5 1 PREPARATION ET CALIBRAGE DU MATERIEL 5 1 1 MATERIEL NECESSAIRE 5 1 2 CALIBRAGE DU MATERIEL 5 2 PREPARATION DE L ECHANTILLON 5 3 IDENTIFICATIONS 5 4 COMPTAGES 6 ARCHIVAGE DES DONNEES PHYTOPLANCTON_ PROTOCOLE_STANDARDISE v3 3 1_2009 09 28 doc Cemagref 10 10 10 11 11 12 13 14 16 4 144 Protocole standardis
24. a 1 Teil Chroococcales Gustav Fischer ed Stuttgart Gustav Fischer 548 p Komarek J Anagnostidis K 2005 Susswasserflora von Mitteleuropa 19 Cyanoprokaryota 2 Teil Oscillatoriales Elsevier SpeKtrum Akademischer Verlag ed M nchen Elsevier 759 p Komarek J Fott B Huber Pestalozzi G 1983 Die binnengewasser band XVI Das phytoplankton des susswassers systematik und biologie 7 teil 1 Halfte Chlorophyceae Grunalgen ordnung Chlorococcales E Schweizerbart sche verlagsbuchhandlung ed Stuttgart DEU 1044 p Krammer K 1997 Bibliotheca diatomologica band 36 Die cymbelloiden diatomeen eine monographie der weltweit bekannten taxa teil 1 allgemeines und Encyonema part Berlin DEU J Cramer 382 p Krammer K 1997 Bibliotheca diatomologica band 37 Die cymbelloiden diatomeen eine monographie der weltweit bekannten taxa teil 2 Encyonema part Encyonopsis and Cymbellopsis Berlin Allemagne J Cramer 469 p Krammer K Lange Bertalot H 1985 bibliotheca diatomologica band 9 Naviculaceae neue und wenig bekannte taxa neue kombinationen und synonyme sowie bemerkungen zu einigen gattungen Stuttgart J Cramer 230 p Krammer K Lange Bertalot H 1991 Susswasserflora von mitteleuropa 2 Bacillariophyceae 3 Teil Centrales Fragilariaceae Eunotiaceae Stuttgart Gustav Fischer Verlag 576 p Krammer K Lange Bertalot H 1999 Susswasserflora von mitteleuropa 2 Bacillariophyceae
25. ait vertical de la zone euphotique afin de disposer de suffisamment de mat riel pour faciliter certaines identifications taxinomiques qualitatif Le concentr est r cup r dans un flacon et fix au lugol au glutarald hyde ou au formol voir paragraphe 4 2 pour les concentrations Un aliquote de l chantillon venant de la bouteille int gratrice du tuyau ou du seau est pr lev et conserv dans un flacon large col en verre ou en polypropyl ne PP transparent et propre d une contenance de 500 mil Le poly thyl ne PE est d conseill car il absorbe l iode contenu dans le fixatif employ Lugol Les flacons color s sont viter car ils masquent la couleur de la fixation au Lugol Le remplissage du flacon ne doit pas se faire jusqu en haut pour permettre une bonne homog n isation de l chantillon avant la prise de sous chantillon pour comptage Tl peut tre employ un tuyau d arrosage translucide de 25 mm de diam tre lest au bout avec cr pine et vanne quart de tour et d une longueur de 10 m voir sch ma en Annexe 4 PHYTOPLANCTON_ PROTOCOLE_STANDARDISE v3 3 1_2009 09 28 doc 8 44 Protocole standardis phytoplancton septembre 2009 Cemagref D autre part une fiche mesures et chantillonnages sp cifique a chaque campagne permettra de recenser par crit les r sultats des mesures physico chimiques r alis es sur le terrain et de r capituler le d tail de l chantillonnage y compris le moyen
26. bung von zermatt Vol 17 Gen ve CH Conservatoire et Jardin Botaniques 175 p Huber Pestalozzi G 1969 Die binnengewasser band XVI Das phytoplankton des susswassers systematik und biologie 4 teil Euglenophyceen E Schweizerbart sche verlagsbuchhandlung ed Stuttgart DEU 606 p Huber Pestalozzi G 1976 Die binnengewasser band XVI Das phytoplankton des susswassers systematik und biologie 2 teil 1 Halfte Chrysophyceen farblose flagellaten heterokonten E Schweizerbart sche verlagsbuchhandlung ed Stuttgart DEU 365 p Huber Pestalozzi G Fott B 1968 Die binnengewasser band XVI Das phytoplankton des susswassers systematik und biologie 3 teil Cryptophyceae Chloromonadophyceae Dinophyceae 2 Auflage E Schweizerbart sche verlagsbuchhandlung ed Stuttgart DEU 322 p Huber Pestalozzi G Thienemann A 1942 Die binnengewasser band XVI Das phytoplankton des susswassers systematik und biologie 2 teil 2 Halfte Diatomeen Stuttgart DEU E Schweizerbart sche verlagsbuchhandlung 549 p Huber Pestalozzi G Thienemann A 1974 Die binnengewasser band XVI Das phytoplankton des susswassers systematik und biologie 5 teil Chlorophyceae Gr nalgen ordnung Volvocales E Schweizerbart sche verlagsbuchhandlung ed Stuttgart DEU 1300 p Jahn R Kociolek J P Witkowski A et al 2001 Lange bertalot festschrift studies on diatoms dedicated to prof dr dr h c horst lange bertalot
27. de s dimentation de 10 50 ml de capacit et d un diam tre de 25 mm environ Les chambres de 100 ml seront viter en raison du fort risque de s dimentations non homog nes a De l eau du robinet contenant du lugol une concentration identique a celle des chantillons 0 5 coloration orange pour r aliser les dilutions si n cessaire m Des prouvettes de 250 ou 100 ml pour les concentrations des chantillons ayant de faibles densit s algales eaux tr s oligotrophes m Des pipettes gradu es de 1 10 ml ou plus pour mesurer les volumes pour les dilutions et concentrations PHYTOPLANCTON_ PROTOCOLE_STANDARDISE v3 3 1_2009 09 28 doc 11 44 Protocole standardis phytoplancton septembre 2009 Cemagref 5 1 2 Calibrage du mat riel Chaque chambre de comptage doit tre identifi e par une marque unique et doit porter l indication de sa surface Cette derni re est calcul e en mesurant 5 fois le diam tre l aide d un pied coulisse par exemple Le diam tre moyen est alors pris pour calculer la surface avec la formule xr De m me chaque colonne de s dimentation doit tre identifi e par une marque unique et doit porter l indication de son volume associ une chambre de comptage donn e Le volume de chacune des chambres doit tre mesur pr cis ment par exemple une chambre de 5 ml peut varier de 4 7 5 2 ml Pour mesurer le volume de la chambre il faut tout d abord la peser vide mais co
28. en t l chargement sur le site Internet du Cemagref Le nom de la personne ayant r alis e ces identifications sera associ la liste des d terminations 5 4 Comptages Un examen rapide de la chambre au plus faible grossissement x4 ou x10 permet de choisir la strat gie de comptage et de v rifier que la r partition des algues est homog ne Si la r partition n est pas homog ne un nouvel chantillon doit tre pr par Le comptage est ensuite r alis soit sur des transects soit sur plusieurs champs choisis al atoirement dans l ensemble de la chambre de comptage voire l ensemble de la chambre habituellement a un grossissement de x400 Dans le premier cas 1 4 transects peuvent tre n cessaires Dans le deuxi me cas un nombre de 30 champs minimum est pr conis Le d placement d un champ un autre doit se faire sans regarder dans les oculaires afin de ne pas biaiser le relev La m thode des champs s av re tre la plus rapide et la plus pr cise En plus des r gles g n rales de comptage NF EN 15204 dans des champs avec ou sans grille de comptage il est entendu que tout filament par longueur de 100 um colonie ou coenobe compte pour un individu http sandre eaufrance fr http www hydrobio dce cemagref fr PHYTOPLANCTON_ PROTOCOLE_STANDARDISE v3 3 1_2009 09 28 doc 14 44 Protocole standardis phytoplancton septembre 2009 Cemagref Ainsi compte pour un individu un coenobe de Sce
29. ents r alis s L s diment Q macrophytes Q oligoch tes Volume de Lugol ajout pour le phytoplancton Q autres pr ciser Remarques observations PHYTOPLANCTON_ PROTOCOLE_STANDARDISE v3 3 1_2009 09 28 doc 27 44 Protocole standardis phytoplancton septembre 2009 Cemagref Relev phytoplanctonique en plan d eau DONNEES PHYSICO CHIMIQUES Septembre 2009 Plan d eau Date Station ou n d chantillon Code lac Organisme op rateur R f dossier Moyen utilis mesures in situ chaque prof J mesures en surface dans un r cipient Echantillon Prof m Conductivit Chlorophylle phytoplancton 25 C uS cm ug l Int gr NY A A A O N e S pi pi p pi N pi 0 gt pi EN _ un pi pi SI pi pi D D pi 22 PHYTOPLANCTON_ PROTOCOLE_STANDARDISE v3 3 1_2009 09 28 doc 28 44 Protocole standardis phytoplancton septembre 2009 Echantillon Conductivit a phytoplancton 25 C uS cm Chlorophylle ug l Cemagref PHYTOPLANCTON_ PROTOCOLE_STANDARDISE v3 3 1_2009 09 28 doc 29 44 Protocole standardis phytoplancton septembre 2009 Cemagre
30. es au comptage r alis es au microscope droit entre lame et lamelle afin d tablir la liste floristique Une pr paration de lame de diatom es en parall le cf NF T90 354 est aussi n cessaire lorsque les diatom es sont abondantes sup rieure environ 20 en nombre d individus dans l chantillon et non identifiables sans pr paration particuli re Toutes les identifications taxinomiques sont r alis es au niveau sp cifique ou en cas de difficult s ou d incertitudes un niveau moindre genre classe l aide des ouvrages de d termination disponibles Il est important de se rappeler qu il vaut mieux une bonne d termination un niveau taxinomique moindre qu une mauvaise un niveau sup rieur Les ouvrages peuvent tre ceux de Bourrelly 1981 1986 1990 Comp re de 1986 2002 John et al 2002 Komarek amp Anagnostidis 1999 2005 Komarek et al 1983 et Leitao et al 2005 pour les principaux mais aussi d autres plus anciens comme la collection Die Binnengewasser Das Phytoplankton des Susswassers Systematik und Biologie ou la L Rabenhorst s Kryptogamen Flora Une liste plus compl te de ces ouvrages figure en bibliographie La liste taxinomique de r f rence comportant les noms utilis s des synonymes et la phylog nie des esp ces ainsi que la codification SANDRE sera utilis e comme r f rence pour nommer les taxa rencontr s elle est accessible au sein d un outil de comptage
31. est toxique par inhalation et par ingestion et provoque des brulures PHYTOPLANCTON_ PROTOCOLE_STANDARDISE v3 3 1_2009 09 28 doc 10 44 Protocole standardis phytoplancton septembre 2009 Cemagref 5 ANALYSE DU PHYTOPLANCTON L analyse du phytoplancton dans ce cadre se fait conform ment aux recommandations de la norme guide pour le d nombrement du phytoplancton par microscopie invers e norme NF EN 15204 2006 de d cembre 2006 correspondant a la m thode d Uterm hl 1958 adopt e au niveau europ en Quelques pr cisions sont cependant n cessaires pour homog n iser l acquisition des donn es 5 1 Pr paration et calibrage du mat riel 5 1 1 Mat riel n cessaire Il faut disposer m d un microscope invers comprenant des oculaires de x10 ou x12 5 poss dant pour l un un microm tre oculaire et pour l autre un r ticule quadrill indispensable dans le cas de comptage en transect des objectifs x10 x20 et x40 poss dant des distances de travail importantes et une ouverture num rique sup rieure 0 5 Des objectifs x60 ou x100 sont aussi recommand s pour l identification et les mesures de biovolume des petites esp ces un syst me de contraste de phase et ou contraste interf rentiel Normarski DIC un syst me de prise de vue cam ra ou appareil photo peut s av rer tr s utile pour des validations d identifications prises de mesures constitution d algoth que m de chambres
32. f Annexe 2 Document type de caract risation du plan d eau et de la station de mesure informatif Ce document peut subir des modifications voir le site Internet du Cemagref http www hydrobio dce cemagref fr pour disposer de la derni re version PHYTOPLANCTON_ PROTOCOLE_STANDARDISE v3 3 1_2009 09 28 doc 30 44 Protocole standardis phytoplancton septembre 2009 Relev phytoplanctonique en plan d eau DONNEES GENERALES PLAN D EAU STATION Plan d eau Cemagref V33 Septembre 2009 Date Station Organisme op rateur LOCALISATION PLAN D EAU Code lac Commune Q oui Q non Lac Marnant Superficie du bassin versant km Superficie du plan d eau ha Profondeur maximale m Profondeur moyenne m Carte extrait IGN 1 25 000 me STATION Indiquer le Nord relev es sur Q GPS Q carte IGN Coordonn es de la station Lambert 93 syst me fran ais en m X WGS 84 syst me international donn es GPS en dms N altitude altitude Profondeur Photos du site indiquer l angle de prise de vue sur la carte Remarques et observations PHYTOPLANCTON_ PROTOCOLE_STANDARDISE v3 3 1_2009 09 28 doc 31 44 Cemagref Protocole standardis phytoplancton septembre 2009 Annexe 3 Sch ma descriptif du syst me et du fonctionnement de la bouteille de pr l vement int gr INRA IT TE F
33. gne A R G Gantner Verlag K G 463 p Starmach K 1974 Flora Slodkowodna Polski Cryptophyceae Dinophyceae Raphidophyceae Warszawa Krakow 520p Starmach K 1977 Flora slodkowodna polski tom 14 Phaeophyta Rhodophyta with keys for the identification of fresh water brown and red algae mentioned in the volume Kradow POL Instytut botaniki 445 p Starmach K 1980 Flora Slodkowodna Polski Chrysophyceae Warszawa Krakow 775p Starmach K 1985 Susswasserflora von Mitteleuropa 1 Chrysophyceae und haptophyceae Jena DEU VEB Gustav Fischer Verlag 515 p Tanaka H 2007 Bibliotheca diatomologica band 53 Taxonomic studies of the genera Cyclotella K tzing Br bisson Discostella Houk et Klee and Puncticulata Hakansson in the family Sephanodiscaceae Glezer et Makarova Bacillariophyta in Japan Berlin DEU J Cramer 205 p Vivier P Hartley B Barber H G et al 1996 An atlas of british diatoms Bristol GBR Biopress Limited 601 p Wehr J D Sheath R G 2003 Freshwater algae of North America ecology and classification Amsterdam NLD Academic press 918 p Werum M Lange Bertalot H 2004 conographia diatomologica vol 13 Ecology hydrogeology taxonomy Ruggell Allemagne A R G Gantner Verlag K G 480 p PHYTOPLANCTON_ PROTOCOLE_STANDARDISE v3 3 1_2009 09 28 doc 24 44 Protocole standardis phytoplancton septembre 2009 Cemagref ANNEXES Annexe 1 Document type de relev
34. halation par contact avec la peau et par ingestion Provoque des br lures Toxique danger d effets irr versibles tr s graves par inhalation par contact avec la peau et par ingestion Effet canc rog ne suspect preuves insuffisantes Peut entra ner une sensibilisation par contact avec la peau PHYTOPLANCTON_ PROTOCOLE_STANDARDISE v3 3 1_2009 09 28 doc 36 44 Protocole standardis phytoplancton septembre 2009 Cemagref Annexe 6 Tableau d aide au choix du volume de s dimentation La pr conisation suivante bas e sur la transparence mesur e au disque de Secchi lors de la campagne de mesure peut servir de base pour le choix du volume a s dimenter Valeur du Secchi m Volume de la chambre ml Oooo oo Oe RES OR lt 10 ou dilution PHYTOPLANCTON_ PROTOCOLE_STANDARDISE v3 3 1_2009 09 28 doc 37144 Protocole standardis phytoplancton septembre 2009 Cemagref Annexe 7 Tableau type de saisie des donn es du comptage phytoplanctonique Ce document peut subir des modifications voir le site Internet du Cemagref http www hydrobio dce cemagref fr pour disposer de la derni re version PHYTOPLANCTON_ PROTOCOLE_STANDARDISE v3 3 1_2009 09 28 doc 38 44 Protocole standardis phytoplancton septembre 2009 Cemagref Relev phytoplanctonique en plan d eau V33 Comptage du phytoplancton m thode Uterm hl Septembre 2009 r 0 oui O non si oui facteur de dilution d
35. issous chlorophylle ventuellement avec les heures de mesures Annexe 1 un tableau contenant le r sultat de l observation nom de l op rateur date et du comptage phytoplanctonique codes Sandre des taxons codes 6 lettres des taxons noms des taxons avec leurs noms d auteurs nombres de cellules compt es ainsi que les biovolumes des taxons identifi s Voir l Annexe 8 pour un document informatif type ou l outil de comptage sur le site internet www hydrobio dce cemagref fr L chantillon doit tre conserv pour une dur e minimale de 2 ans afin de permettre d ventuelles v rifications d identifications Si sa fixation a t faite dans un premier temps par du lugol une deuxi me fixation au glutarald hyde ou au formol pour permettre la conservation sur les 2 ans est imp rative Pour faciliter ces v rifications des photographies des diff rents taxons rencontr s dans l chantillon peuvent tre prises PHYTOPLANCTON_ PROTOCOLE_STANDARDISE v3 3 1_2009 09 28 doc 16 44 Protocole standardis phytoplancton septembre 2009 Cemagref BIBLIOGRAPHIE Ouvrages g n raux Arar E 1997 Method 446 0 In vitro determination of chlorophylls a b C and pheopigments in marine and freshwater algae by visible spectrophotometry Revision 1 2 National Exposure Research Laboratory Office of Research and Development U S EPA Ohio 26 p Cemagref 2003 Protocole actualis de la diagnose rapide des plans d
36. ivale la troisi me en juillet ou en ao t en plein t quand la thermocline est bien install e correspondant la deuxi me phase de croissance du phytoplancton et la quatri me entre septembre et mi octobre en fin de stratification estivale avant que la temp rature ne baisse et que la stratification ne disparaisse A cette p riode l pilimnion a une paisseur maximale Pour les plans d eau dont les eaux peuvent tre gel es en hiver les p riodes de campagnes doivent tre adapt es comme suit la toute premi re doit se faire d s la sortie de l hiver mais pas avant mi f vrier apr s la d glaciation cela peut aller jusqu en mai la seconde doit se faire en juin la troisi me en juillet ou en ao t et la derni re en septembre Cette adaptation des p riodes de campagne permet de tenir compte de la pr sence d une p riode v g tative plus courte en altitude Un intervalle minimum de 3 semaines doit tre respect entre chaque campagne afin de bien couvrir l ensemble de la p riode de v g tation et de ne pas disposer de campagnes trop rapproch es Aucune campagne de pr l vement ne doit tre r alis e en dehors de ces p riodes pour ne pas fausser l homog n it et la repr sentativit des donn es collect es au cours des quatre campagnes Ceci implique aussi que toutes les campagnes doivent tre effectu es au cours du m me cycle annuel Dans le cas o ces consignes ne peuvent pas
37. la France DEPEE DLM Honfleur ed Honfleur Agences de l Eau Seine Normandie 64 p Lenzenweger R 1996 Bibliotheca phycologica band 101 Desmidiaceenflora von Osterreich Teil 1 Berlin DEU Cramer 162 p Lenzenweger R 1997 Bibliotheca phycologica band 102 Desmidiaceenflora von Osterreich Teil 2 Berlin DEU Cramer 216 p Lenzenweger R 1999 Bibliotheca phycologica band 104 Desmidiaceenflora von Osterreich Teil 3 Berlin DEU Cramer 218 p Lenzenweger R 2003 Bibliotheca phycologica band 111 Desmidiaceenflora von Osterreich Teil 4 Berlin DEU Cramer 87 p Mrozinska T 1985 Susswasserflora von Mitteleuropa 14 Chlorophyta VI Oedogoniophyceae Oedogoniales Jena DEU VEB Gustav Fischer Verlag 624 p Nagumo T 2003 Bibliotheca diatomologica band 49 Taxonomic studies of the subgenus Amphora Cleve of the genus Amphora Bacillariophyceae in Japan Berlin Allemagne J Cramer 265 p Ognjanova Rumenova N Manoylov K 2006 Advances in phycological studies festschrift in honour of Prof Dobrina Temniskova Topalova Sofia RUS Pensoft 383 p PHYTOPLANCTON_ PROTOCOLE_STANDARDISE v3 3 1_2009 09 28 doc 22 44 Protocole standardis phytoplancton septembre 2009 Cemagref Pascher A Schiller J Migula W 1925 Die s sswasser flora Deutschlands sterreichs und der Schweiz heft 11 Heterokontae Phaeophyta Rhodophyta Charophyta Jena DEU Verlag von Gustav Fischer 250 p
38. la couleur brun clair orang e whisky que doit avoir l chantillon En fonction du type de milieu acidit de l eau par exemple la couleur orang e peut tre obtenue avec un nombre nettement sup rieur de gouttes Une d coloration peut se produire avec le temps et ou la lumi re dans ce cas rajouter quelques gouttes de Lugol pour maintenir la fixation de l chantillon Le volume de conservateur ajout doit tre not car il participe au volume final de l chantillon L chantillon ainsi fix peut tre conserv au maximum 3 semaines l obscurit avant analyse ou 12 mois s il est maintenu au froid et l obscurit entre 1 et 4 C Pour une conservation de plus longue dur e une fixation compl mentaire s impose glutarald hyde ou formol Ce dernier pr sente l inconv nient de d colorer les cellules et d entrainer la perte des flagelles de cellules fragiles avec le temps L utilisation du glutarald hyde est alors pr f r e elle se fait une concentration finale dans l chantillon de 0 5 L utilisation du formol doit se faire une concentration finale de 5 dans l chantillon Voir d tail des pr parations des solutions m res en Annexe 5 Ces deux produits sont manipuler avec pr caution car dangereux pour la sant Le formol est toxique par inhalation par ingestion et par contact avec la peau est class depuis 2004 dans les substances canc rig nes toxique de cat gorie C Le glutarald hyde
39. lan d eau est tr s peu profond inf rieur 5 m dans la mesure du possible Pour les lacs ayant une profondeur maximale sup rieure 20 m une mesure tous les 5 m au dela de 20 m s av re suffisante N B un profil vertical de la chlorophylle a mesur in situ l aide d un capteur optique sp cifique sonde multi param tres par exemple apporte galement de pr cieux compl ments d information De m me des profils verticaux des formes de l azote et du phosphore peuvent aider l interpr tation des r sultats de phytoplancton PHYTOPLANCTON_ PROTOCOLE_STANDARDISE v3 3 1_2009 09 28 doc 7144 Protocole standardis phytoplancton septembre 2009 Cemagref Le profil de temp rature permettra d identifier la pr sence d une thermocline Tous les profils physico chimiques r alis s faciliteront l interpr tation des donn es phytoplanctoniques L ensemble des donn es sera consign sur un document type identique pour chaque plan d eau voir document informatif type en Annexe 1 3 2 Pr l vement de phytoplancton L chantillon de phytoplancton est pr lev lors de chaque campagne dans la zone euphotique Zu correspondant la tranche d eau comprise entre la surface et 2 5 fois la profondeur de disparition du disque de Secchi est alors pris sous la forme d un pr l vement int gr sur cette profondeur Lorsque la Zu est sup rieure a la profondeur le pr l vement int gr est r alis de la surface jusqu 1 m au dessus d
40. llon et la chambre de s dimentation doivent tre mis la m me temp rature ambiante en g n ral afin de permettre une s dimentation al atoire du phytoplancton dans la chambre de s dimentation Cela est d autant plus n cessaire que l chantillon tait conserv au froid L chantillon est alors doucement agit pendant au moins une minute afin d homogeneiser son contenu quelques minutes peuvent s av rer n cessaires lorsque des agglom rats subsistent dans l chantillon puis un sous chantillon est vers dans la chambre de s dimentation Des chambres de 50 25 ou 10 ml sont g n ralement suffisantes Les chambres de 25 ou de 50 ml s av rent indispensables pour des plans d eau tr s oligotrophes concentrations algales tr s faible de l chantillon et celles de 1 ml par exemple type Kolkwitz 10 ml conviendront pour des plans d eau m so eutrophes hyper eutrophe La consigne est de disposer de suffisamment de mat riel biologique s diment sans qu une concentration trop lev e ne provoque des chevauchements des individus nuisant a leur identification et a leur comptage suivant la m thode d crite ci apr s La r gle g n rale est d atteindre environ 4 individus par champ un grossissement de x400 On peut s aider du tableau de l Annexe 6 pour choisir le volume s dimenter Si une dilution ou une concentration est op r e elle devra tre pr cis e pour en tenir compte lors des calculs pr alables au rendu du
41. merican desmids part II Desmidiaceae Placodermae section 5 the filamentous genera Lincoln USA University of Nebraska press 117 p Czurda V 1932 Die Susswasser flora Mitteleuropa heft 9 Zygnemales Jena DEU Verlag von Gustav Fischer 232 p Dillard G E 1999 Common freshwater algae of the United States an illustrated key to the genera excluding the diatoms Berlin DEU J Cramer 173 p Dillard G E 2000 Bibliotheca phycologica band 106 Freshwater algae of the Southeastern United States Part 7 Pigmented Euglenophyceae Berlin DEU Cramer 176 p Drouet F 1973 Revision of the Nostocaceae with cylindrical trichomes New York USA Hafner Press 292 p Ettl H 1978 Susswasserflora von Mitteleuropa 3 Xanthophyceae 1 Teil Stuttgart DEU Gustav Fischer Verlag 530 p Ettl H 1983 Susswasserflora von Mitteleuropa 9 Chlorophyta I Phytomonadina Stuttgart DEU Gustav Fischer Verlag 807 p Ettl H Gartner G 1988 Susswasserflora von Mitteleuropa 10 Chlorophyta Il Tetrasporales Chlorococcales Gloeodendrales Stuttgart DEU Gustav Fischer Verlag 807 p F rster K Huber Pestalozzi G 1982 Die binnengewasser band XVI Das phytoplankton des susswassers systematik und biologie 8 teil 1 halfte Conjugatophycae Zygnematales und Desmidiales excl Zygnemataceae e schweizebart sche verlagsbuchhandlung nagele u obermiller ed Stuttgart 543 p Fott B Huber Pestalozzi G
42. mplete chambre de comptage avec lamelle colonne d un volume donn lame de fermeture en verre Puis il faut la remplir d eau distill e et la repeser Le poids en grammes est quivalent au volume en millilitre R p ter ces op rations trois fois et relever la valeur moyenne du volume Il est entendu que l ensemble de ces op rations diam tre et volume ne sont faire qu une seule fois mais pour chaque couple chambre de comptage colonne d un volume x par exemple chbrel colonne 10ml chbrel colonne 25 ml chbre2 colonne 10 ml Il est alors important de bien identifier ces couples par des marquages uniques Les oculaires avec microm tre et r ticule gradu ainsi que les diff rents objectifs doivent tre calibr s l aide d une lame microm trique par exemple 100 um divis s en 10 divisions de 10 um poser sur la platine porte objet Les dimensions et les surfaces des champs de comptage des transects et de la chambre enti re si n cessaire doivent tre calcul es pour chacun des grossissements employ s PHYTOPLANCTON_ PROTOCOLE_STANDARDISE v3 3 1_2009 09 28 doc 12 44 Protocole standardis phytoplancton septembre 2009 Cemagref 5 2 Pr paration de l chantillon Les diff rents l ments constituant la chambre de s dimentation support colonne lames de verre doivent tre propres et sec Pour cela un nettoyage l thanol et un s chage entre deux utilisations est n cessaire L chanti
43. nedesmus compos de 4 cellules une colonie d Asterionella formosa souvent compos e de 8 10 cellules ou un Cryptomonas compos d une seule cellule dans le cas de filaments ils sont compt s par unit de 100 um de long Ainsi un filament de Planktothrix de 230 um de long compte pour 3 individus De la m me fa on un filament dont la longueur est inf rieure 100 um compte aussi pour un individu L effort de comptage porte sur une surface connue transects champs sur laquelle 400 individus minimum doivent tre compt s tous taxons confondus sur l chantillon Dans le cas d un comptage sur des champs al atoires en pr sence d une r partition proche de 4 individus par champ il faudra alors compt s environ 100 champs Si le nombre de 400 individus n a pas pu tre atteint une justification pr cise devra tre fournie Le nombre de champs ou de transects n cessaires est not Au sein de ces individus le nombre de cellules par individu sera compt directement par l op rateur sur l chantillon pendant le comptage lorsque l observation le permet Dans le cas d organismes pluricellulaires dont les cellules sont difficilement distinguables ou trop nombreuses Aphanizomenon ou Microcystis le nombre de cellules pourra tre estim par individu Pour les diatom es seules les frustules avec plastes cellules vivantes sont compt s Certaines esp ces habituellement coloniales comme Microcystis aeruginosa peuvent se rencontr
44. que pour viter toute contamination puis stock imm diatement au froid a 4 degr s et l obscurit jusqu l extraction ou cong lation au laboratoire Sont inscrits sur le tube le nom du plan d eau la date et le volume filtr Ces informations sont aussi inscrites sur la fiche donn es g n rales de la campagne Rappel il ne faut en aucun cas toucher les filtres avec les doigts mais utiliser des pinces pour les manipuler risque de d t rioration par l acidit des mains 3 4 Pr l vement pour les mesures chimiques en laboratoire Comme il est pr conis par ailleurs dans la circulaire surveillance DCE 2006 16 de juillet 2006 un chantillon d eau issu du pr l vement int gr doit tre fait pour r aliser des analyses chimiques en laboratoire Ces analyses comportent entres autres les formes de l azote nitrate nitrite et azote Kjeldahl et du phosphore phosphore total et orthophosphates contribuant l interpr tation des donn es phytoplanctoniques La liste compl te des param tres a analyser est contenue dans la circulaire surveillance Pour ce faire un volume de 1 2 litres d eau est requis dans des flacons propres tiquet s du nom du plan d eau de la date et de la profondeur de la zone chantillonn e Leur conservation doit se faire 4 C et l obscurit jusqu l analyse au laboratoire qui doit d buter le plus t t possible apr s le pr l vement PHYTOPLANCTON_ PROTOCOLE_STANDARD
45. r sultat de comptage voir les d tails de la pr paration et l utilisation de la chambre de s dimentation dans la norme NF EN 15204 Si une grande quantit de cyanobact ries flottantes en surface est pr sente dans l chantillon il peut tre ajout 5 10 gouttes d acide ac tique glacial directement dans l chantillon avant homog n isation La chambre ainsi remplie doit tre laiss e l obscurit temp rature ambiante et dans un lieu sans vibration afin de permettre une s dimentation correcte de l chantillon La r gle pour le temps de s dimentation est de 4 heures par cm de hauteur de colonne de s dimentation pour un chantillon d eau douce fix au Lugol Ainsi un chantillon plac dans une chambre de 50 ml dont la colonne ferait 9 cm de haut devra s dimenter 36 heures 16 heures pour 25 ml Pour les chambres de volume compris entre 1 et 5 mlil est pr conis d attendre 2 heures par pr caution Pour les chambres de plus de 1 ml a la fin de cette phase de s dimentation faire glisser la partie sup rieure de la chambre la colonne et placer une fine lame en verre sur la chambre de comptage pour la fermer Il faudra viter d emprisonner des bulles d air qui peuvent g ner le comptage PHYTOPLANCTON_ PROTOCOLE_STANDARDISE v3 3 1_2009 09 28 doc 13 44 Protocole standardis phytoplancton septembre 2009 Cemagref 5 3 Identifications Les d terminations requi rent parfois des observations pr alabl
46. syst matique Tome Il Les algues jaunes et brunes Chrysophyc es Ph ophyc es Xanthophyc es et Diatom es N Boub e amp Cie ed Paris Boub e 438 p Bourrelly P 1970 Les algues d eau douce Initiation la syst matique Tome III Les algues bleues et rouges Les Eugl niens P ridiniens et Cryptomonadines N Boub e amp Cie ed Paris Boub e 512 p Comp re P 1986 Flore pratique des algues d eau douce de Belgique t 1 Cyanophyceae Meise BEL J ardin Botanique National de Belgique 120 p Comp re P 1989 Flore pratique des algues d eau douce de Belgique t 2 Pyrrhophytes Cryptophyceae Dinophyceae Raphidophytes Raphidophyceae Euglenophytes Euglenophyceae Meise BEL J ardin Botanique National de Belgique 208 p Compere P 1991 Flore pratique des algues d eau douce de Belgique t 3 Rhodophytes Meise BEL J ardin Botanique National de Belgique 55 p Comp re P 2001 Flore pratique des algues d eau douce de Belgique t 5 Desmidiees 1 Mesotaeniaceae Gonatozygaceae Peniaceae Closteriaceae Meise BEL Jardin Botanique National de Belgique 69 p PHYTOPLANCTON_ PROTOCOLE_STANDARDISE v3 3 1_2009 09 28 doc 18 44 Protocole standardis phytoplancton septembre 2009 Cemagref Cox E J 1996 Identification of freshwater diatoms from live material London GBR Chapman amp Hall 158 p Croasdale H Bicudo C E d M Prescott G W 1983 A synopsis of north a
47. u fond Pour ce faire une bouteille int gratrice mod le commercial ou type INRA Pelletier Brevet INRA 1978 mont e sur un cordage gradu ou sur un treuil avec compteur peut tre utilis e Annexe 3 A d faut la technique du tuyau d crite dans la norme NF EN 15204 d taill e en Annexe 4 ou une bouteille de type Van Dorn ou encore une pompe peuvent tre employ es Dans les deux derniers cas un volume donn 0 5 ou 1 est pr lev au minimum tous les m tres ou tous les 0 5 m si la profondeur du plan d eau est faible pour tre m lang dans un plus grand r cipient type seau dans lequel le pr l vement de phytoplancton sera r alis II sera imp ratif alors de bien veiller ne pas conserver ce seau sous une insolation ou une pluie directe pouvant modifier la qualit de l chantillon et homog n iser le contenu du seau imm diatement avant le pr l vement du sous chantillon Les pr l vements avec des bouteilles int gratrices ou la technique du tuyau ont l avantage de donner un chantillon d un volume cons quent homog ne repr sentatif de l ensemble de la zone euphotique chantillonn e Il est important dans tous les cas que le moyen de pr l vement soit associ a un syst me fiable et pr cis de la mesure de la profondeur d chantillonnage cordage gradu treuil avec compteur centim trique En compl ment il est fortement pr conis de faire un pr l vement au filet 30 um de maille sur un tr
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