Analyse d`un produit par C.C.M Chromatographie sur Couche Mince
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1. Il existe de nombreux types de chromatographies selon la nature des phases en pr sence Analyse d un produit par C C M Chromatographie sur Couche Mince W IN Plaques de CCM AN we Produits a analyser n cessaire a C C M chromatographie de partage liquide liquide par exemple sur papier Whatman ayant fix de l eau chromatographie sur couche mince CCM chromatographie en phase vapeur CPV chromatographie sur colonne chromatographie liquide haute performance HPLC La chromatographie peut avoir un but preparatif notamment pour purifier un produit de ses impuret s un but analytique la s paration des constituants d un m lange est alors la premiere tape pour d terminer la composition de ce m lange Les phases en pr sence en CCM a La phase stationnaire La phase stationnaire est une fine couche de gel de silice poudre blanche d pos e sur un support plastique PETE m tallique Al ou encore en verre Remarques la silice est la surface la plus utilis e mais on rencontre galement parfois des plaques recouvertes d alumine Al2O3 Rem la silice contient galement une petite quantit d un additif qui a la propri t d tre fluorescent dans PUV ce qui est utile pour l tape de r v lation voir plus loin r v lation Le gel de silice est de la silice SiOz amorphe non cristallis e C est une vari t de silice que Pon utili2. s sont incolores on ne voit alors aucune tache sur la plaque il faut la r v ler Il existe pour cela deux m thodes r v lation avec une lampe UV on rappelle que le sulfure de zinc additionn la silice rend la plaque fluorescente lorsqu on la place sous une lampe UV les entourer au crayon que certaines plaques de CCM contiennent un indicateur fluorescent permettant une r solution dans l UV UV proche 366nm ou lointain 254nm L indicateur UV 54 est un silicate de zinc active au manganese dont le maximum d absorption est a 254nm ll pr sente une fluorescence verte L indicateur UVsss est galement un pigment min ral avec un maximum d absorption 366nm Il pr sente une fluorescence bleue Si les taches sont opaques l UV la plaque ne sera pas fluorescente ces endroits et on verra les taches r v lation chimique on pulv rise sur la plaque un r actif sp cifique qui r agit avec les taches pour donner un produit color Variante il est aussi fr quent de placer les plaques dans des vapeurs de diiode ce dernier ayant beaucoup d affinit pour les cycles aromatiques BPrincipe de la CCM Soit un constituant d pos sur la ligne de base Lorsque l luant arrive sur la ligne de base A est entra n et migre avec lui le long des grains de silice Mais en g n ral A migre moins vite que l luant ce qui est d a deux facteurs encomp tition battraction de A par la silice polaire forces de Van d
3. er Waals dip le dip le liaisons hydrog ne Lorsqu un corps est retenu par une surface on dit qu il est adsorbe sur cette surface entra nement de A par l luant on choisit une polarit de l luant plus proche de celle de A si on veut que migre davantage plus loign e dans le cas contraire Un luant polaire a galement pour effet d tre lui m me adsorb par la silice ce qui chasse les mol cules de et provoque sa migration par d placement En g n ral avec un luant peu polaire si A est apolaire il migre fortement avec l luant et est peu retenu par la silice on le retrouve donc en haut de la plaque proche du front de l luant lors de la r v lation si est polaire il migre plus ou moins selon sa polarite selon sa capacit a faire des liaisons hydrog ne on le retrouve entre la ligne de base et le front de l eluant si A est un ion il reste sur la ligne de base car les ions sont tr s fortement adsorb s sur la silice interaction ion dip le Analyse des plaques Comme on l a dit pr c demment chaque constituant d pos sur la ligne de base melangeA B C migre plus ou moins en fonction de ses affinit s pour la silice et l luant Le param tre caract risant la migration d un constituant A vis vis d un luant donn est le rapport frontal c est dire la distance parcouru par A rapport e la distance parcourue par l luant Le rapport frontal tant re
4. isser d empreinte digitale sur la partie ou migrera l luant 2 Pr paration de la cuve dans un bocal avec couvercle introduire une petite quantit d luant hauteur 0 5 cm puis fermer le couvercle et attendre quelques minutes cela permet de saturer l atmosph re en vapeurs d eluant afin d viter que celui ci ne s vapore apartir de la plaque pendant l lution On peut galement placer un morceau de papier filtre imbib d luant le long des parois internes du pot afin d acc l rer la saturation de l atmosph re en vapeurs d eluant 3 D p t de la goutte sur la plaque avec un capillaire d poser sur la ligne de base de la plaque une petite goutte du m lange analyser il est possible de r p ter le d p t plusieurs fois afin d augmenter la quantit d esp ces chimiques d pos es sans largir les taches I faut dans ce cas attendre que le solvant s vapore entre chaque d p t 4 L elution placer la plaque dans l eluant attention aux vagues ne pas d placer le bocal et refermer imm diatement le couvercle L luant monte alors lentement par capillarite Attendre que l luant atteigne les 2 3 ou les 3 4 de la hauteur de la plaque puis retirer cette derni re et marquer imm diatement au crayon la position du front de l luant avant qu il ne s che On peut alors s cher la plaque pour viter tout talement des taches 5 R v lation le plus souvent les produits que l on a s par
5. productible d une CCM l autre bien entendu avec une plaque et un luant identiques il permet d attribuer les taches issues d un m lange si on a pris le soin de faire au pr alable des CCM de r f rence A ou B ou C seuls t Front de eluant progression de l luant visible on retire la plaque avant que le front de l luant n atteigne le sommet de la plaque On rep re alors ce front avant que l luant vapor ait disparu Exemple de plaque r v l e sous lumi re UV 254 nm
6. se en chromatographie en raison de sa grande porosit Au niveau microscopique elle est constitu e de micrograins de formuleSiOz pr sentant en surface des liaisons O H Si O H partie tres polaire rik tablissement de liaison hydrog ne En raison de l lectron gativit plus grande de l oxyg ne par rapport au silicium ou l hydrog ne les liaisons Si O et O H pr sentes en surface sont polarisees le gel de silice fait partie des phases stationnaires de polarit lev e b La phase mobile Il sagit d un solvant qui migre sur la plaque de silice Un solvant qui se d place est appel en chromatographie un luant De nombreux eluants peuvent tre utilis s selon la polarit souhait e Solvants apolaires hexane ther de p trole m lange d alcanes 5 7 atomes de carbone F Solvants polaires ther thanol Le choix de l eluant est le point crucial pour r ussir une bonne s paration en CCM ll depend de la polarit amp des constituants que l on a a s parer Lors de la mise au point on essaie couramment divers eluants purs ou en melange Mode d emploi On fournit en general des plaques de dimension 5x10 cm 1 Pr paration de la plaque tracer un trait fin au crayon a papier a 1cm d un des bords et bien parallele a celui ci Attention ne pas trop appuyer avec le crayon pour ne pas endommager la surface de silice Ptoujours tenir la plaque par le haut afin de ne pas la
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