ETUDE DE CINETIQUE ENZYMATIQUE PAR OXYMETRIE
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1. Ajouter un titre Titre Cin tique Enzymatique variation de O2 en fonctior v Afficher a A dr 1 Annoter une courbe Courbe annoter Ajouter un commentaire Commentaire Page 51 sur 85 4 Exploitation des r sultats 4 1 Construction de la courbe vi f substrat Cette courbe peut tre obtenue en utilisant aussi bien les courbes de d croissance de la concentration en substrat ou les courbes d apparition du produit Nous allons pouvoir construire la courbe vi f Substrat avec Vi vitesse initiale d P dt qui correspond la pente de la droite dans les premiers temps de la r action une fois l injection de la GOD substrat qui correspond la concentration en substrat Cliquer sur l ic ne traitement des donn es IN E S lectionner l onglet courbe param trique Donn es Valeur e Mesure sur le graphe Valeur du param tre ww Nouvelle courbe abscisse ordonn e Tracer D riv e Courbe param trique Portion Lissage Calculs pour les ST Page 52 sur 85 S lectionner l aide de l ascenseur pente comme mode de d termination pour pouvoir mesurer directement les pentes vitesses initiales des diff rentes courbes acquises Does D but 133 1 Fin 48 5 Mesure sur le graphe Valeur du param tre Nouvelle courbe abscisse ordonn e Tracer Le choix des valeurs des cases D but et Fin se fait dire2. 0 1 mol lsoit 13 6 g i Saccharose f 0 5 mol fsoit 171 gl Mettre ces trois produits dans une fiole de 1 L Dissoudre dans de l eau distill e Compl ter la fiole jusqu au trait de jauge Il est utile de pr parer une solution double concentration et de pr parer la solution simple concentration en diluant celle ci de moiti Solution oxydante La solution doit tre pr par e juste avant son utilisation et plac e dans un flacon en verre marron craint la lumi re Ferricyanure de potassium F K3 Fe CN 6 0 2 mol soit 3 29 g 50 ml Page 28 sur 85 2 2 Pr paration de la suspension de chloroplastes A Pr parer la suspension de chloroplastes juste avant d effectuer les mesures Broyer 80 g de feuilles d pinard refroidies dans le broyeur fines herbes ou dans un mortier avec un peu de sable dans un peu de tampon simple concentration ajouter et m langer le reste des 100 mli de milieu tampon simple concentration pH 6 5 Filtrer sur un tampon de gaze pour liminer les gros d bris dans un erlenmeyer NB vous pouvez galement utiliser une centrifugeuse r partir le filtrat dans les tubes de centrifugation et centrifuger pendant 5 min 1500 g Conserver les tubes contenant les suspensions de chloroplastes dans le bac de polystyr ne contenant de la glace pil e Les en sortir au moins 15 min avant l exp rimentation de mani re d bloquer les r actions enzymatiques
3. Echanges respiratoires Mesure du m tabolisme On peut soit travailler avec une sonde O soit avec une sonde CO ou les deux en m me temps Dans le cas pr sent on ne va utiliser qu une sonde O Mat riel Caurn tre Ventilation C m tre NN Pas d adaptateur Page 69 sur 85 Etalonnage de la sonde O2 Mettre la sonde dans l air Cliquer sur le bouton r glage puis sur le bouton suite Mat riel Caym tre Ventilation CO 2 m tre Etalonnage de la sonde oxym trique Etape n 1 Tournez le bouton de pente au masiman 2 Taux d osyg ne mesur T Positionner le bouton z ro rep r par le symbole D de l adaptateur oxym tre en milieu de course R gler le bouton pente rep r par le symbole ia de fa on obtenir 20 9 l cran Cliquer sur le bouton Fermer Page 70 sur 85 Lancement de l acquisition Cliquer sur l onglet Echanges respiratoires Cocher la case IR si vous souhaitez faire appara tre l Intensit Respiratoire sans oublier de renseigner les cases Masse et Intervalle Cliquer sur le bouton d marrer Echange atoires IR IR moy GR 3 Mesures Donn es r n igner Temps 00 00 min g AS o ko O2 exp 0 2 J20 ES z T A mervat 2 lt Donn es fournies O2 ins 20 9
4. PQ Temps ES Manuelle II Ethanal Calibre Grandeur Mesure Affichage Etalonnage Calibre 3 Cliquer sur l onglet mesure pour visualiser en temps r el le taux d thanol Positionner le bouton pente rep r par le symbole D du capteur Ethanol de fa on obtenir 0 sur l onglet mesure en laissant la sonde dans l air EE Grandeur Mesure Affichage Page 20 sur 85 4 Param trage de la mesure S lectionner le mode liquide dans l onglet calibre pour l adaptateur oxym tre Ge fOxym tre Ca jCO2 D Directe Directe A Manuelle lOxym tre Calibre Grandeur Mesure Mfichage Etalonnage Fonctions Remarque sur le logiciel l ic ne Oxym tre va dispara tre de laxe des ordonn es cette fonctionnalit est pr vue pour viter les changements de calibre non voulus la s lection du calibre de la sonde tant d terminante pour la mesure de l O dissout dans l eau Replacer l ic ne Oxym tre sur l axe des ordonn es Directe FO Temps Kf Manuele Page 21 sur 85 De m me avec l adaptateur CO2 Cu l Oxym tre Ca f CO2 Q Ethanol Directe Kf Manuele f CO2 Calibre Grandeur Mesure Affichage Etalonnage Fonctions iquide S lectionner le mode liquide pour la sonde thanol ainsi que le calibre 1 g L pour l adaptateur Ethanol Cr l Oxym tre Ca f CO2 Q iii
5. 1 Objectif Montrer la sp cificit de substrat et d action d un enzyme et faire l tude des facteurs influen ant la r action enzymatique Substrat temp rature pH 2 Oxydation du glucose par la glucose oxydase GOD La glucose oxydase est une enzyme catalysant l oxydation a robie du D glucose Cette oxydation consomme de l oxyg ne et produit du gluconolactone qui se transforme spontan ment en acide gluconique et du peroxyde d hydrog ne D glucose O2 HO Acide D gluconique H20 CoHi206 O2 H20 R CeH 207 H20 On va donc mesurer la disparition de l oxyg ne en fonction du temps vitesse d une r action enzymatique Calcul de la vitesse de la r action enzymatique elle correspond la vitesse de disparition d un des substrats ici l O2 Dans ce TP on mesurera l influence de la concentration en substrat glucose sur la vitesse _ dO2 VE dT de la r action enzymatique pour une concentration en enzyme constante cette valeur correspond la pente de la courbe tudi e 3 Protocole exp rimental 3 1 Mise en vidence de l influence de la concentration en substrat sur la vitesse de r action enzymatique 3 1 1 Pr paration des solutions e Pr parer des solutions de glucose de concentrations diff rentes ex 0 001 0 1 0 5 et 1M e Pr parer une solution d enzyme une pointe de scalpel dans 10 ml d eau il n est pas possible de donner une concentration exacte car la GOD n est p
6. CO2 ins 000 Calculs IR mo gogo lhko GR D00 Mesure du m tabolisme Echanges respiratoires Mat riel cia Dur e totale mi Suivre les instructions l cran Page 71 sur 85 2 Exemple de r sultat 08l A D O F S E 0 8 0 5 0 4 0 3 0 2 0 1 t min s 9 0 0 00 0 12 1 34 0 35 0 45 1 00 1 12 1 24 REMARQUES est important de v rifier que le taux d O2 soit de 20 7 ou 20 8 dans l enceinte avant de d marrer la mesure voir talonnage de la sonde Le logiciel fait la soustraction 20 9 taux mesurer dans l enceinte il est donc important de ne pas r gler 20 9 car la mesure n est pas forc ment stable et peut basculer 21 ce ui entrainera un graphique invers n gatif D o l int r t de r gler 20 7 ou 20 8 pour pallier ce probl me ventuel l est indispensable de bien a rer l enceinte de respiration humaine entre 2 exp riences pour tre de nouveau 20 7 ou 20 8 Bien v rifier le branchement du clapet anti retour voir photo du montage Bien fixer la turbine dans le capteur respiro l aide du manchon en plastique fourni voir photo du montage Page 72 sur 85 ANNEXE 1 SONDE O2 Mode d emploi Pour d marrer rapidement 1 Mettre en place l ensemble du mat riel sonde 02 Adaptateur Oxym tre Interface ExAO et lancer votre logiciel d acquisition 2 Remplir la t te de sonde avec l lectrol
7. en position verticale dans un b cher par exemple ou tube essai avec de l eau distill e IMPORTANT veillez toutefois changer l lectrolyte toutes les semaines si votre s rie de TP s tale dans le temps Cela vous permettra de v rifier l tat d oxydation de la partie en argent de la sonde ainsi que l tat de la membrane de la t te de sonde gt Votre s rie de TP ou vous avez besoin de la sonde O2 est termin e D visser la t te de sonde Vider l lectrolyte et stocker les t tes de sonde dans un pot avec de l eau distill e cela vous permettra de conserver la t te de sonde dans les meilleurs conditions de conservation en conservant la membrane en milieu humide Conserver les sondes de pr f rence verticalement sec en prot geant le corps de la sonde tr s fragile avec un morceau de tuyau coup ou le capuchon fournit Page 77 sur 85 gt Une fois par an L lectrode de la sonde tant en argent des t ches noires d oxydation peuvent appara tre Pour y rem dier nettoyer en frottant l g rement l lectrode d argent l ammoniaque 0 1 M l aide d un chiffon doux puis rincer l eau distill e Electrode oxyd e Nettoyage l ammoniaque 0 1 M Electrode apr s nettoyage ATTENTION Ne pas plonger directement l lectrode dans l ammoniaque Eviter le contact avec l extr mit en verre de l lectrode Page 78 sur 85 6 TRUCS ET ASTUC
8. Astuces Maintenir au froid le bol du broyeur la cuve du bior acteur les tampons ainsi que les feuilles de v g tal jusqu au moment de la r alisation de l exp rience l est possible d utiliser d autres tissus v g taux que l pinard pour r aliser l extraction des chloroplastes tels le poireau le cresson l ortie l oseille sauvage Rumex L injection de ferricyanure peut tre augment e mais des injections trop importantes gt 2 ml semblent bloquer parfois tout le fonctionnement Les 500 mi de tampon double concentration r alis s au d part permettent de disposer de solutions tampons simple et double concentration pour une s ance de TP avec 9 postes de travail R partir les solutions tampons d s leur pr paration dans des flacons 5 ml flacon pour le tampon double concentration et 100 mi flacon pour le tampon simple concentration R partir la solution oxydante dans des flacons bruns 10 ml flacon En d but de s ance s assurer que la centrifugeuse tourne avec toutes les gaines remplies ceci permet 5 postes de travail de disposer rapidement d au moins deux tubes avec culot de chloroplastes La r alisation de cette exp rience depuis l extraction des chloroplastes par les l ves est possible avec la dur e des s ances de TP de 2 heures en TS sp cialit SVT Par ailleurs la r alisation de la suspension de chloroplastes concr tise la r alisation de la technique de s paration par ce
9. Gaz on peut visualiser directement sur l adaptateur la led verte correspondant au calibre s lectionn Q lOxym tre Directe Gi Directe fi Directe FO Temps Manuelle l Oxym tre Calibre Grandeur Mesure fichage Etalonnage 3 Fonctions Cliquer sur l onglet mesure pour visualiser en temps r el le taux d O2 fOxym tre Calibre Grandeur Mesure Affichage Etalonnage Mettre la sonde dans l air Positionner le bouton z ro rep r par le symbole D d du capteur oxym tre en milieu de course R gler le bouton pente rep r par le symbole a de fa on obtenir 20 9 sur l onglet mesure Calibre Grandeur Mesure Affichage Etalonnage Page 7 sur 85 Etalonnage de la sonde CO Cliquer sur l ic ne CO2 sur l axe des ordonn es Cliquer ensuite sur l onglet Calibre et s lectionner Gaz on peut visualiser directement sur l adaptateur la led verte correspondant au calibre s lectionn Directe Gi Directe Manuelle CO2 Calibre Grandeur Mesure fichage Etalonnage 3 Fonctions Cliquer sur l onglet mesure pour visualiser en temps r el le taux de CO2 CO2 Calibre Grandeur Mesure Affichage Etalonnage Mettre la sonde CO dans l air Positionner le bouton pente rep r par le symbole D du capteur CO m tre au maximum R gler le bouton z ro rep r par
10. de fa on obtenir 20 9 sur l onglet mesure Calibre Grandeur Mesure Affichage Etalonnage Page 32 sur 85 j Param trage de la mesure S lectionner le mode liquide dans l onglet calibre lOxym tre Calibre Grandeur Mesure Fonctions 2 Remarque sur le logiciel l ic ne Oxym tre va dispara tre de l axe des ordonn es cette fonctionnalit est pr vue pour viter les changements de calibre non voulus la s lection du calibre de la sonde tant d terminante pour la mesure de l O dissout dans l eau Replacer l ic ne Oxym tre sur l axe des ordonn es Ce fOxym tre Si Directe jo dei jii Directe Directe FO Temps eruele Page 33 sur 85 Param trer la dur e d acquisition sur 10 min en cliquant sur l ic ne Temps sur l axe des abscisses Cr fOxym tre ji Directe Si Directe fi Directe Dre 1 Temps Fonction du temps pass Dur e d acquisition Nombre de points 201 Acquisition continue C Te 2 00s NB on peut prolonger ventuellement l acquisition en cours de manipulation en se pla ant sur l axe des abscisses le curseur change d aspect double fl che il suffit alors de d placer la souris vers la gauche Page 34 sur 85 2 4 R alisation de l exp rience Pour r cup rer les chloroplastes au fond des tubes de centrifugation jeter l essentiel du Surnageant en c
11. et la diriger vers la fen tre du bior acteur puis ouvrir les volets Mettre un rep re sur l axe des temps en appuyant sur la barre d espace afin de marquer le changement de condition de lumi re Laisser se d rouler l exp rience environ 5 min la lumi re puis refermer les volets Laisser se d rouler l exp rience environ 5 min l obscurit puis ouvrir nouveau les volets Multiplier les alternances lumi re obscurit Pour afficher les courbes sur deux graphiques diff rents afin de pouvoir modifier les chelles il AE suffit de cliquer sur l ic ne affichage S lectionner la courbe CO et puis faire un clic droit cliquer ensuite sur Afficher en bas LC Manipulation 1 z O2 t Points k Liaisons k Epaisseur b Couleur Afficher en bas Suppression Propri t s Stopper la mesure en cliquant sur la croix rouge D Acquisition en cours Page 12 sur 85 2 3 Exemple de r sultats attendus Ateher Scientifique Photosynth se 02 C02 lab 1 fey Fichier Edition Acquistion Insertion Affichage Outils Compte Rendu Fen tre 7 lj x Ba RU NE E a CN OOD a e a a ERA M 0 m 18 FL ig E 16 4 2 ME 14 46 a PH E ofa mr S 25 T G 2 0 LLI 1 5 4 1 0 tih minj 0 5 0 12 0 24 0 36 12 1 24 11 wF mg a alo j 7 5 m 5 4 3 z t h min 0 12 24 36 48 1 00 1 12 1 24 IE Graphique Compte Rendu Afficheur Aid
12. Ethanol Directe CO rrs A Manuelle iii Ethanol Fonctions g z liquide Page 22 sur 85 Param trer la dur e d acquisition 10 min en cliquant sur l ic ne Temps sur l axe des abscisses Ce Oxym tre fi Directe o PI Temps Fonction du temps Synchronisation Dur e d acquisition Nombre de points 301 Acquisition continue C Te 2 00s NB on peut prolonger ventuellement l acquisition en cours de manipulation en se pla ant sur l axe des abscisses le curseur change d aspect double fl che il suffit alors de d placer la souris vers la gauche Page 23 sur 85 5 R alisation de l exp rience a Remplir la cuve du bior acteur au 3 4 avec la solution de levure de fa on ce que cela d borde une fois le couvercle positionn pour viter une interface d air b Positionner les 3 sondes sur le couvercle du bior acteur Positionner de pr f rence la sonde thanol au centre car elle est moins sensible l agitation NB Les sondes ne doivent pas toucher le fond de la cuve du bior acteur c Fermer les trous non utilis s gr ce aux bouchons pr vus cet effet d Brancher le bior acteur et lancer l agitation Acquisition ancer la mesure en cliquant sur le feu vert Page 24 sur 85 Lancement de l acquisition Nom de la manipulation Apr s 4 5 minutes on peut proc der une injection de glucose vi
13. Nombre de points 301 s 1 Acquisition continue Te 333 345 Cliquer sur l onglet synchronisation et param trer comme ci dessous y j Electronhy filtre y f Electraphy non fi Directe Si Directe Directe FO Temps A Manuelle Temps Fonction du temps Synchronisation Mesure Synchronisation Ba nn Niveau CESR Croissant D croissant Le r glage de la synchronisation va permettre de d marrer l acquisition automatiquement d s qu on aura tap avec le martoreflex Page 65 sur 85 Lancer la mesure en cliquant sur le feu vert puis en cliquant sur le bouton Lancer Lancement de l acquisition Nom de la manipulation Le logiciel se met alors en attente de synchro et l acquisition d marra d s qu on tapera avec le martoreflex sur le talon d Achille dans le cas du r flexe achill en Attente de synchro Page 66 sur 85 3 R sultat obtenu Atelier Scientifique refmyo 1 l 1 x E Fichier Edition Acquisition Insertion Affichage Outils Compte Rendu Fen tre l x DHBRlkDaelP RE emna 110 Tension m 100 g0 80 70 60 50 40 30 20 10 t ms o N 40 60 80 100 120 Q Y ss 10 20 30 labscisse 0 gt 0 15 ls Tension lordonnie 0 1159 gt 0 03066 1 Taa Graphique Tableau A Compte Rendu Afficheur A Aide Ordonn es bscisse t al 4 Probl mes possibles TR
14. environ 1 min la lumi re Au temps 3 min injecter l aide d une seringue de 1 mi munie d un cath ter 0 5 ml de ferricyanure de potassium dans la cuve du bior acteur NB un petit orifice est pr vu cet effet dans le couvercle du bior acteur ce qui vite d ouvrir le couvercle Mettre un rep re sur l axe des temps en appuyant sur la barre d espace puis laisser se d rouler l exp rience pendant 2 min puis refermer les volets Laisser se d rouler l exp rience environ 2 min l obscurit puis ouvrir les volets Laisser se d rouler l exp rience la lumi re pendant 2 min Au temps 8 min injecter une nouvelle dose de ferricyanure de potassium Terminer la lumi re Stopper la mesure en cliquant sur la croix rouge Be a e B Acquisition en cours Page 36 sur 85 2 5 Variations du protocole Les tubes de centrifugation contenant les chloroplastes qui ont s diment peuvent tre fournis d j pr ts aux l ves dans ce cas la manipulation d bute Pour r cup rer les chloroplastes Les p riodes de mesures la lumi re et l obscurit peuvent tre allong es si les variations attendues ne sont pas constat es est possible de terminer la mesure l obscurit Il est pr f rable d afficher en d but de manipulation une dur e de mesure sup rieure 10 min Attention cependant ne pas faire durer trop longtemps la mesure la lumi re en pr sence de ferric
15. 0 3 0 9 1 0 1 1 La vitesse initiale Vi de la r action enzymatique est d autant plus lev e que la concentration en substrat est forte Peu peu Vi tend vers une vitesse maximale pour une concentration en substrat optimale La courbe Vi f Substrat montre l existence d une relation de proportionnalit entre la vitesse de la r action bio catalys e et les faibles concentrations en substrat Page 61 sur 85 ETUDE DU REFLEXE MYOTATIQUE Niveau lyc e 1ere S Physiologie Fiche professeur 1 Protocole exp rimental Brancher l adaptateur Electrophy sur l interface VISIO Connecter le cordon ECG EMG sur l adaptateur Electrophy Coller 3 lectrodes adh sives et relier le cordon ECG EMG comme indiqu sur le sch ma ci dessous Remarque Les lectrodes adh sives ont une dur e de vie qui est indiqu e sur le paquet ou une date de fabrication dans le cas de la date de fabrication les lectrodes sont valables 2 ans S agissant de mat riel m dical des lectrodes ayant pass cette date de quelques mois restent valables Il faut n anmoins veiller ne pas utiliser d lectrodes trop anciennes Dans tous les cas on veillera bien v rifier la pr sence de gel sur ces lectrodes avant de les coller sur la peau Remarque 2 je conseille de mettre la masse sur la mall ole c ble avec partie violette Ce qui vite les inversions avec les autres c bles rouge et jaune Page 62 sur 85 Branche
16. 2 iii Ethanol OE Directe Temps PO z ktg Manuelle Placer l adaptateur oxym tre sur l axe des ordonn es en cliquant sur l ic ne Oxym tre puis en d pla ant la souris en maintenant ce clic Les 6 points d accroche sur laxe des ordonn es tant quivalents vous pouvez donc placer l adaptateur oxym tre sur celui de votre choix Q lOxym tre Ga CO Q jjiEthanol Directe Crm fOxym tre Page 16 sur 85 De m me positionner les capteurs CO m tre et Ethanol sur l axe des ordonn es Q FOxym tre Ea ico Directe FO Temps gt Menuelle Positionner l ic ne Temps sur l axe des abscisses Ce lOxym tre Ca fCO2 Q iii Ethanol Directe COT KP enuele Temps Page 17 sur 85 Etalonnage de la sonde O Cliquer sur l ic ne Oxym tre sur l axe des ordonn es Cliquer ensuite sur l onglet Calibre et s lectionner Gaz on peut visualiser directement sur l adaptateur la led verte correspondant au calibre s lectionn Q f Oxym tre Ce CO Q if Ethanol fs Directe FO Temps P Fa Manuelle fOxym tre Calibre Grandeur Mesure Affichage Etalonnage Fonctions g z Cliquer sur l onglet mesure pour visualiser en temps r el le taux d O2 fOxym tre Calibre Grandeur Mesure Affichage Etalonnage Mettre la sonde dans l air Positionner le bouton z r
17. ES L lectrolyte pour sonde O2 est une solution de phosphate de sodium Na3PO4 50 g L Hors de la sonde on peut le conserver plusieurs ann es dans les conditions normales de temp rature et d humidit Avant son utilisation v rifier n anmoins qu il soit bien totalement translucide et qu il ne pr sente pas avec de reflets jaun tres lectrolyte p rim La sonde O2 est livr e avec des capuchons tr s utiles durant le transport en protection m canique Il est fortement d conseill de les utiliser quand la sonde est en service avec la t te de sonde Conserver les sondes directement dans un b cher avec un fond d eau distill e car les surpressions et d pressions cr es chaque fois qu on ins re ou qu on retire la sonde fragilisent la membrane de la t te de sonde NE PAS UTILISER POUR STOCKER QUANT IL Y A PRESENCE DE LA T TE DE SONDES Ce Capuchon est utiliser lors des p riodes ou la sonde ne sert pas en protection m canique du corps de la sonde partie en argent et verre La t te de sonde doit tre chang e une fois par an en moyenne dans des conditions normales d utilisation Il est important de ne pas laisser connecter en permanence la sonde et l adaptateur l interface ExAO si celle ci est aliment e par une alimentation externe observation d un d p t noir dans la t te de sonde et diminution de la dur e de vie de la sonde Page 79 sur 85 ANNEXE 2 SONDE CO2 Mo
18. JEULIN PROTOCOLES EXAO LOGICIEL ATELIER SCIENTIFIQUE POUR LES SVT CONSOLE ESAO VISIO PAGE 3 LA PHOTOSYNTHESE module g n raliste PAGE 14 MISE EN EVIDENCE DU METABOLISME CELLULAIRE DES LEVURES module g n raliste PAGE 26 LA REACTION DE HILL module g n raliste PAGE 41 ETUDE DE CINETIQUE ENZYMATIQUE PAR OXYMETRIE LA GLUCOSE OXYDASE module g n raliste PAGE 60 ETUDE DU REFLEXE MYOTATIQUE module g n raliste PAGE 66 ETUDE DU METABOLISME HUMAIN module d di PAGE 71 LA SONDE O2 MODE D EMPLOI PAGE 77 LA SONDE CO2 MODE D EMPLOI Page 2 sur 85 LA PHOTOS YNTHESE Niveau lyc e sup rieur Classe Terminale S Fiche professeur 1 Objectifs et principes Mise en vidence des changes gazeux chez la plante en pr sence et en absence de lumi re Montrer que les v g taux chlorophylliens utilisent l nergie lumineuse ainsi que le CO pour transformer la mati re min rale en mati re organique CO H O e gt CH 0 O avec CH 0 glucides L intensit photosynth tique est mise en vidence par la mesure de la concentration en O gt et en CO du milieu ici la cuve du bior acteur Il qui donnera par calcul la consommation production de ces gaz au cours des phases sombres et phases claires de l exp rimentation On alternera phase sombre respiration et phase claire photosynth se en ouvrant ou fermant les volets du bior acteur Cette exp rimentation se f
19. UCS ET ASTUCES e Les lectrodes se d collent d graisser la peau l alcool avant de coller les lectrodes ou utiliser des lectrodes permanentes e V rifier la date limite d utilisation des lectrodes adh sives e Sile trac appara t trop tass augmenter le gain laide du potentiom tre de l adaptateur Electrophy e La ligne de base du trac n est pas horizontale le trac est perturb par l activit d autres muscles e Si vous poss dez une ancienne version du capteur lectrophy avec pile il est primordial que la pile soit suffisamment neuve ou charg e 80 minimum tension sup 8 4 V IMPORTANT veiller ce que les l ves ne soient pas en d s quilibre sur des tabourets trop hauts la mesure serait fauss e car les muscles ne seraient pas d contract s Page 67 sur 85 ETUDE DU METABOLISME HUMAIN Niveau lyc e Fiche professeur 1 Protocole exp rimental Brancher l adaptateur chronowin sur l interface VISIO Faire le montage ci dessous JE 86 ma 1 x EE E kd x 2 a a A a pa PA A NL w o J h Es Lancer l Atelier Scientifique pour les SVT seun Page 68 sur 85 Double cliquer sur lic ne correspondante au module Les changes gazeux respiratoires chez l homme Cliquer sur suite Etude des changes gazeux respiratoires chez l homme Choix des modules Valeurs Num riques
20. V rification V rifier que les chloroplastes ne sont pas compl tement d truits et que la chlorophylle n est pas en solution ce qui entrainerait une fluorescence de la suspension Observer au microscope la pr sence de chloroplastes et l absence de cellules enti res La dur e de vie des chloroplastes tant tr s limit e dans le temps pr parer la suspension de chloroplastes juste avant l emploi 2 3 Montage a Brancher la sonde O sur l adaptateur oxym tre b Connecter l adaptateur oxym tre sur l une des 4 entr es de l interface VISIO Sokrtion de chloroplastes Solution de ferricyanure de DORASSAINM Page 29 sur 85 c Lancer l Atelier Scientifique pour les SVT Atelier Scientifique pour les SVT La s lection de l activit est r alis e lors du clic sur l image ASSOCICE Une fois le choix r alis cliquez sui le bouton permettant ae demarrer l activit Visio Visio Plus d V rifier que l interface s lectionn e en bas gauche est bien la console VISO ou choix automatique e Double cliquer sur l ic ne correspondante au module G n raliste pour les SVT f Dans la fen tre qui s ouvre vous pouvez faire appara tre le nom des adaptateurs connect s votre interface en positionnant la souris droite des capteurs jusqu l apparition d une double fl che Faire un clic gauche et d placer la souris vers la droite en maintena
21. a l orifice pr vu cet effet sur le bior acteur N B La quantit de glucose injecter d pend de la qualit et de la quantit de levure pr sente dans l enceinte Apr s une premi re injection de 1ml si le changement de pente n est pas significatif il ne faut pas h siter ajouter davantage de glucose Mettre un rep re sur l axe des temps en appuyant sur la barre d espace afin de marquer l injection on met en vidence l apparition d thanol apr s la disparition du dioxy g ne Pour afficher les courbes sur deux graphiques diff rents afin de pouvoir adapter les chelles il FA Ei suffit de cliquer sur l ic ne affichage s lectionner la courbe thanol par exemple puis faire un clic droit Cliquer ensuite sur Afficher en bas D Manipulation 1 COZ t en mg l Ont e Points Liaisons Epaisseur Couleur Afficher en bas Suppression Propri t s Stopper la mesure en cliquant sur la croix rouge D 2 cQuisition en cours Page 25 sur 85 6 Exemple de r sultats obtenus Le m tabolisme cellulaire des levures Fa 8 mg Rupture de pente injection de glucose mi O2 02 mg timin s 4 00 AUO 8 00 10 00 12 00 1400 16 00 0 60 0 55 0 50 Ethanol g L 0 4 0 40 0 35 0 30 0 25 0 20 0 15 0 10 t min s 0 05 2 00 4 00 6 00 5 00 10 00 12 00 14 00 16 00 NB Le palier observ sur le taux de CO2 correspond au
22. a portion l origine Remplacer Tracer NNS D riv e Courbe param trique Lissage Calculs pour les SYT On obtient alors sur le graphique un d calage l origine de la courbe rouge Cin tique enzymatique variation de O2 en fonction de substrat taux 02 02mg t min s 500 5 30 6 00 6 30 Page 57 sur 85 On proc de de la m me fa on avec les autres courbes pour obtenir le graphe suivant Cin tique enzymatique variation de 02 en fonction de substrat Ozma j taux _ 02 0 001M t min s Retourner sur l onglet courbe param trique et s lectionner Pente Donn es D but Fin Mesure sur le graphe Valeur du param tre Nouvelle courbe abscisse ordonn e D riv e Courbe param trique Portion Lissage Calculs pour les SVT Tracer Page 58 sur 85 Comme pr cisl pr c demment le choix des valeurs des cases D but et Fin se fait directement sur le graphique l aide de l outil intervalle il suffit d aller sur le graphique pour voir appara tre une ligne verticale bleue correspondant au d but de l intervalle s lectionn Une fois le d but valid en faisant un clic gauche sur la souris vous pouvez s lectionner la fin de l intervalle en faisant de nouveau un clic gauche On s lectionne un intervalle qui convient l ensemble des courbes Les valeurs tableau Cin tique enzymatique variation
23. ait dans l eau Mode op ratoire Dur e de pr paration 20 min Dur e de r alisation en classe 30 min 2 Mode op ratoire 2 1 Protocole exp rimental a Pr paration du mat riel biologique On utilisera de pr f rence de la Cabomba vigoureuse que l on aura pris soin de placer quelques jours avant dans un aquarium sous un clairage important On peut galement utiliser du C ratophylle ou encore des Elod es attention la vari t sauvage pr lev e en milieu naturel en hiver sera en tat de vie ralentie et ne permettra pas une mise en vidence nette de la photosynth se Un morceau de plante environ deux feuilles sera n cessaire pour chaque poste exp rimental 2 feuilles Page 3 sur 85 b Montage exp rimental Brancher la sonde O sur l adaptateur oxym tre Connecter l adaptateur oxym tre sur l une des 4 entr es de l interface VISIO Brancher la sonde CO sur l adaptateur COm tre Connecter l adaptateur CO m tre sur l une des entr es de l interface VISIO fN CA AN EUX di D gt RORTTATEUTECT LETI rA T Lancer l Atelier Scientifique pour les SVT DA Y Atelier Scientifique pour les SVT m s cS E gt L La s lection de l activii esi r alis e lors du clic sur l imaae Une fois le choix r alise cliquez sui le Douton permettant de demarrer l activit raz L JeULin V rifier que l interface s lectionn e en bas gauc
24. as pure il ny a pas proportionnalit entre la masse de GOD et le nombre d unit s d enzyme La couleur finale de la solution ressemble celle du blanc d uf cru 3 1 2 Param trage de l acquisition a Brancher la sonde O sur l adaptateur oxym tre b Connecter l adaptateur oxym tre sur l une des 4 entr es de l interface VISIO Page 42 sur 85 La s lection de l activit est r alis e lors du clic sur l image ass0ocIee Une fois le choix r alis cliquez sui le DOUION Def mettant de demarrer l activit d V rifier que l interface s lectionn e en bas gauche est bien la console VISO ou choix automatique e Double cliquer sur l ic ne correspondante au module G n raliste pour les SVT Page 43 sur 85 f Dans la fen tre qui s ouvre vous pouvez faire appara tre le nom des adaptateurs connect s votre interface en positionnant la souris droite des capteurs jusqu l apparition d une double fl che Faire un clic gauche et d placer la souris vers la droite en maintenant ce clic Cr f Oxym tre fi Directe fi Directe Directe FO Temps B Manuelle g Placer l adaptateur oxym tre sur l axe des ordonn es en cliquant sur l ic ne Oxym tre puis en d pla ant la souris en maintenant ce clic Les 6 points d accroche sur laxe des ordonn es tant quivalents vous pouvez donc placer l adaptateur oxym tre sur celui de votre choix Cr fOxym tre Direc
25. bscisses le curseur change d aspect double fl che il suffit alors de d placer la souris vers la gauche Page 10 sur 85 2 2 R alisation de l exp rience a Remplir la cuve du bior acteur au 2 3 avec de l eau temp rature ambiante attention ne pas utiliser d eau distill e les plantes ont besoin de min raux Prendre de l eau de l aquarium dans lequel les plantes sont maintenues ou de l eau du robinet qu on aura laiss temp rature ambiante b Couper des fragments de Cabomba en petits morceaux de 2 3 mm et les d poser dans la cuve du bior acteur c Placer les sondes par les emplacements situ s dans le couvercle du bior acteur en vitant l emplacement sous lequel se trouve l agitateur NB La sonde O2 et CO2 ne doivent pas toucher le fond de la cuve du bior acteur d Fermer les trous non utilis s gr ce aux bouchons pr vus cet effet e Fermer les volets du bior acteur f Brancher le bior acteur et lancer l agitation NB On peut ajouter un thermom tre et un luxm tre afin de v rifier que la temp rature est bien rest e constante La mesure de la lumi re permet de rep rer les p riodes d clairement ou d obscurit Acquisition ancer la mesure en cliquant sur le feu vert Page 11 sur 85 Lancement de l acquisition Mom de la manipulation anipulation 1 Apr s 3 4 minutes l obscurit Allumer la lampe la placer une dizaine de cm du bior acteur
26. ctement sur le graphique l aide de l outil intervalle il suffit d aller sur le graphique pour voir appara tre une ligne verticale bleue correspondant au d but de l intervalle s lectionn Une fois le d but valid en faisant un clic gauche sur la souris vous pouvez s lectionner la fin de l intervalle en faisant de nouveau un clic gauche N B le calcul de la pente se faisant simultan ment pour l ensemble des courbes il est indispensable que l intervalle s lectionn corresponde des d croissances strictes des diff rentes courbes Page 53 sur 85 L intervalle s lectionn n est pas adapt car la courbe bleue 0 1M n est pas strictement d croissante sur cet intervalle t min s 500 5 20 6 00 d 02 02mg O 5 D Fe D D R LA 3 lt 0 0 ER O 2 ex D O N M 2 O 2 O Er O O D w o n 0 Mm ta L intervalle s lectionn n est pas adapt car les courbes rose 0 5M et jaune 1M ne sont pas strictement d croissantes sur cet intervalle t min s 00 00 3 oi 3 2 134 99 Fy 4 00 4 20 5 00 5 30 6 00 Pour faciliter le traitement on va donc au pr alable faire correspondre le temps correspondant l injection du glucose au temps t 0 et cela pour chaque courbe S lectionner l onglet Portion puis le nom de la premi re courbe 0 001M Page 54 sur 85 Portion de T Portion Lissage Calculs pour l
27. d passement de la plage de mesure de la sonde CO2 dans un liquide ce d passement n endommage en rien la sonde Page 26 sur 85 LA REACTION DE HILL Niveau lyc e sup rieur Classe Terminale S Fiche professeur 1 Objectifs et principes Lors de la photosynth se il y a d gagement d O2 issu de l eau et le CO2 est r duit Cette r duction se d roule dans le chloroplaste et n cessite de l nergie L nergie lumineuse capt e par les pigments chlorophylliens est convertie en nergie chimique et il y a acquisition d un pouvoir r ducteur par les cellules La pr sence d un accepteur d lectrons oxyd qui serait r duit par les lectrons provenant de l eau en pr sence de lumi re peut tre envisag e Cette exp rience r action de Hill a pour but de v rifier l existence de cette phase photochimique ou phase claire de la photosynth se Dans les chloroplastes l accepteur d lectrons physiologique est le NADP Lors du broyage destin extraire les chloroplastes ces derniers sont l s s et le NADP diffuse dans le milieu et dispara t La cha ne r actionnelle est donc bloqu e L adjonction d un accepteur d lectrons ici le ferricyanure de potassium r tablit la cha ne r actionnelle et donc le d gagement d O2 lors de l ilumination Cette exp rience r alis e pour la premi re fois par Hill d montre la r alit des processus d oxydo r duction li s la conversion de l nergie lumineuse en nergi
28. de O2 en fonction de substrat j 0 001M 5 i iM 4 0 1M 3 Z 0 5M L t min s 0 D ei 2 00 2 30 3 00 2 30 UE correspondantes aux diff rentes pentes apparaissent automatiquement dans le v Donn es D but 4 13 Fin 15 14 Mesure sur le graphe Valeur du param tre 0 039500 0 502500 0 159553 0 272500 Pour chaque valeur dans le tableau on peut retirer le signe de la colonne Mesure sur le graphe si on souhaite obtenir des vitesses positives Page 59 sur 85 Dans la colonne Valeur du param tre il faut taper au clavier la valeur de la concentration en substrat correspondante Notez le point de couleur qui appara t c t de la case s lectionn e permettant de retrouver sur le graphe la courbe associ e Pente np Donn es D but 413 Fin 15 14 Mesure sur le graphe Valeur du param tre Concentration du substrat associ e Le Rep re correspondant la couleur de la courbe Suppression du signe Dans la partie Nouvelle courbe entrez les param tres qui seront repr sent s en abscisse et en ordonn e ainsi que leurs unit s Cliquer sur Tracer Houvelle courbe abscisse ordonn e unit mol yi mol lfs commentaire Tracer Page 60 sur 85 4 2 R sultat obtenu Cin tique enzymatique variation de 02 en fonction de substrat 0 001M w us E 0 15 0 10 Concentration mobil 0 05 0 1 0 2 0 3 0 4 0 5 0 6 0 7
29. de d emploi Pour d marrer rapidement 4 Mettre en place l ensemble du mat riel sonde C02 Adaptateur CO2m tre Interface ExAO et lancer votre logiciel d acquisition 1 Remplir la t te de sonde avec l lectrolyte pour sonde CO2 de telle sorte que l lectrolyte d borde lorsque la t te de sonde est viss e sur le corps de la sonde Cette manipulation aura 2 effets Etre sure qu il n y a pas de bulle d aire V rifier l tanch it de la membrane et l absence de fuite 5 Visser la t te de sonde rincer l eau distill e et laisser le syst me se stabiliser pendant quelques minutes dans l air la valeur affich e doit alors tre constante 4 Positionner le bouton pente situ droite du CO2m tre au maximum et r gler le bouton z ro situ gauche pour obtenir 0 00 dans Pair Calibre Grandeur Mesure Affichage Etalonnage VOTRE SONDE CO2 EST PRETE A L EMPLOI Page 80 sur 85 1 Mise en service de la sonde C02 Corps de la sonde D Electrode de verre T te de sonde Membrane Remplir la t te de sonde avec l lectrolyte pour sonde CO2 de telle sorte que l lectrolyte d borde lorsque la t te de sonde est viss e sur le corps de la sonde ce qui vitera la pr sence de bulles d air NE PAS CONFONDRE LES FLACONS D ELECTROLYTE ET D ACIDE CITRIQUE Pa
30. disques thylako des du chloroplaste alors que la phase sombre se d roule dans le stroma Ils ont clair des chloroplastes en l absence de CO et laiss se former de grandes quantit s de NADPH et d ATP avec production concomitante d oxyg ne Ils ont ensuite cass les chloroplastes et s par le stroma des lamelles qu ils ont jet es A l obscurit le stroma a t aliment en CO radioactif et les enzymes pr sentes ont effectu l assimilation du CO aboutissant aux m mes glucides que les chloroplastes entiers et les feuilles vertes intactes Page 40 sur 85 14 CO fix coups par minute Stroma l obscurit 2 Stroma l obscurit grana la lumi re 3 Stroma l obscurit ATP 43000 4 Stroma l obscurit NADPH ATP 07000 96000 TABLEAU Fixation du gaz carbonique l obscurit et la lumi re dans les chloroplastes par le stroma matrice jaun tre et par les granas membranes vertes contenant de la chlorophylle Ces exp riences ont tr s clairement montr que tous les transporteurs et enzymes n cessaires la formation des compos s r duits NADPH et d ATP au cours des transports des lectrons sous l action de la lumi re sont li s aux membranes du chloroplaste Les enzymes responsables de la fixation proprement dite du CO sont quant elles situ es dans le stroma amorphe et jaun tre Page 41 sur 85 ETUDE DE CINETIQUE ENZYMATIQUE PAR OXYMETRIE
31. duit vient de l eau et non du gaz carbonique En 1937 la seconde observation importante fut r alis e par R Hill de l universit de Cambridge Il s para les particules photosynth tiques de feuilles vertes chloroplastes des particules respiratoires mitochondries par centrifugation diff rentielle d un homog nat de tissus de feuilles Une fois clair s seuls les chloroplastes de Hill ne produisirent pas d oxyg ne peut tre parce qu ils avaient t endommag s par la s paration par contre lorsque des accepteurs d lectrons oxydants comme le ferrioxalate de potassium ou le ferricyanure de potassium furent ajout s la suspension il y eut production d O raison d une mol cule pour quatre quivalents d oxydant r duits photochimiquement Cependant les chloroplastes ne parvenaient pas r duire le CO2 qui est l accepteur d lectrons naturel de la photosynth se Ce ph nom ne connu maintenant sous le nom de r action de Hill consiste en un transfert d lectrons sous l action de la lumi re de l eau vers des oxydants non physiologiques r actifs de Hill contre le gradient de potentiel chimique L int r t de la r action de Hill est de d montrer que la production d oxyg ne par la photosynth se se fait s par ment de la r duction du gaz carbonique En 1941 Ruben et Kamen en Californie prouv rent que l oxyg ne produit au cours de la photosynth se provenait de la d composition de l eau lls ont plac des cel
32. e rdonn es A Page 13 sur 85 MISE EN EVIDENCE DU METABOLISME CELLULAIRE DES LEVURES CO 1 Objectif Montrer que les levures respirent et montrer que les levures produisent de l thanol en milieu ana robie On place une solution de levure dans un faible volume herm tique avec des sondes dioxyg ne a dioxyde de carbone et thanol Rappel e La levure est un micro organisme champignon unicellulaire de forme variable capable d utiliser diverses mol cules organiques en particuliers des glucides pour en tirer de l nergie par respiration ou fermentation gr ce un quipement enzymatique sp cifique e La RESPIRATION est la d gradation compl te du glucose CoH 60h gt BCD Ha 2860 KT e La FERMENTATION alcoolique est la d gradation incompl te du glucose avec production d thanol et de dioxyde de carbone en absence de dioxyg ne Ca is Ca SO AC 2 Protocole v Pr paration des levures Diluer environ 10 g de levures fra ches dans 1 litre d eau Placer le r cipient sur un agitateur magn tique avec un bulleur au minimum 48H les levures doivent tre affam es mais bien vivantes Il est important d utiliser un agitateur magn tique pour garder un milieu homog ne en levure et viter ainsi un pr l vement en surface qui contiendrait finalement peu de levure NB avec des levures lyophilis es 1 2 sachet par litre Attention si la concentration de levure est trop importan
33. e chimique La mesure de l volution du taux de O production de O activit photosynth tique dans une suspension de chloroplastes se fait en pr sence ou en absence d un accepteur d lectrons le ferricyanure de potassium Fe Fe et en alternant des phases d clairement et d obscurit Page 27 sur 85 2 Mode op ratoire Dur e de pr paration de la s ance 2 h pour la mise en place du mat riel des postes de travail la pr paration des solutions chimiques le r glage des sondes les tests Dur e de r alisation en classe TP l ve 1 h 30 pour la r alisation et 0 h 30 pour l exploitation des r sultats AAAAAAAAAAAAAAAAA mportant Tout le mat riel doit tre refroidi r frig rateur au moins 2 heures avant l extraction le bol du mortier la cuve du bior acteur les tampons ainsi que les feuilles de v g tal puis remis au froid jusqu au moment de la r alisation de l exp rience de mani re ralentir la d gradation de la chlorophylle apr s extraction AAAAAAAAAAAAAA AAA 2 1 Pr paration des solutions chimiques A pr parer par le personnel de laboratoire avant la s ance et maintenir au froid jusqu l utilisation Solution d extraction des chloroplastes concentration finale simple concentration Tampon phosphate pH 6 5 saccharose pour la pression osmotique compos comme suit Hydrog nophosphate disodique 4 F NaHPO 12H20 a 0 2 mol Jsoit 71 6 g l
34. er en frottant l g rement l lectrode en verre l thanol 95 l aide d un chiffon doux pr alablement imbib et laisser s vaporer Remplir la t te de sonde avec de l lectrolyte Revisser la t te de sonde sur le corps de la sonde Conserver les sondes verticalement dans un b cher Au niveau de la t te de sonde Il se peut que vous observiez par transparence un halot graisseux l int rieur de la t te de sonde Pour d coller ce halot utilisez un coton tige imbib d thanol 95 en tournant le coton tige mais en faisant attention de ne pas transpercer la membrane Ce halot va se d coller facilement mais ne restera peut tre pas sur le coton tige Dans ce cas utilisez une pissette d eau distill e pour vacuer ce halot Page 84 sur 85 6 TRUCS ET ASTUCES L lectrolyte pour sonde CO2 est une solution d thyl ne glycol Hors de la sonde on peut le conserver plusieurs ann es dans les conditions normales de temp rature et d humidit Avant son utilisation v rifier n anmoins qu il soit bien totalement translucide et qu il ne pr sente pas avec de reflets jaun tres lectrolyte p rim La sonde CO2 est livr e avec des capuchons tr s utiles durant le transport pour prot ger les membranes des t tes de sonde Il est fortement d conseill de les utiliser par la suite conserver les sondes directement dans un b cher avec un fond d eau distill e car les sur
35. es sv taux_O2 t en O2mg L Manipulation 1 Intervalle de 179 8 357 3 en s Portion Mom Manipulation 1_P _ D caler la portion l origine Remplacer Tracer D riv e Courbe param trique Le choix de l intervalle se fait directement sur le graphique s lectionner l outil intervalle en faisant un clic droit sur la courbe 1117 i u n 0 L n L S Cin tique enzymatique variation de 02 en fonction de substrat 10 c a ne ol mg 8 7 m 0 001M Normal Pointeur Droite 4 Zoom Tangente Gomme 2 Fr quence Annotation 1 t min s Repr sentation g 10 90 0 39 1 00 1 30 200 2 30 GE Page 55 sur 85 positionner la premi re droite verticale au niveau de l injection puis faire un clic gauche Positionner la seconde droite verticale la fin de la courbe Cin tique enzymatique variation de O2 en fonction de substrat taux 02 02magli 0 001M t min s D00 5 30 G 0i EM Fin de la courbe Injection de la GOD Les valeurs correspondantes cet intervalle apparaissent automatiquement dans les cases Intervalle Cocher les cases D caler la portion l origine et remplacer puis Tracer Page 56 sur 85 Portion de taux_O2 t en O2mg L Manipulation 1 Intervalle Valeurs correspondantes ri RRG l intervalle choisi Fortion Nom Manipulation 1_P D caler l
36. ge 81 sur 85 Remarque La pr sence d une grosse bulle peut tre d tect e en observant la valeur renvoy e par la sonde positionn e successivement t te en haut puis t te en bas la valeur fluctue si il y a une bulle Dans ce cas l d visser la t te de sonde compl ter avec de l lectrolyte puis revisser lentement Pas de pr sence de bulles d air gt valeurs identiques dans les 2 cas 2 Polarisation de la sonde La polarisation de la sonde CO2 permet d obtenir une valeur du taux de CO2 qui soit stabilis e Pour polariser votre sonde CO2 il suffit de connecter l ensemble de votre mat riel sonde CO2 CO2m tre interface ExAO et de laisser le syst me se stabiliser quelques minutes dans l air la valeur du taux de CO2 observ e doit alors tre constante Remarque Lors de 2 s ances de TP successives il est inutile de polariser de nouveau la sonde 3 Etalonnage de la sonde CO2 Pourquoi talonner une sonde CO2 L talonnage de la sonde permet d obtenir une valeur absolue du taux de CO2 Il n est par cons quent pas n cessaire d talonner une sonde CO2 de fa on rigoureuse utilisation du m lange acide citrique et hydrog nocarbonate de sodium lorsqu on cherche mettre en vidence des variations du taux de CO2 ce qui est le cas pour les TP suivants e La photosynth se e La r action de HILL e Etude de cin tique enzymatique par oxym trie e Etude du m tabolisme h
37. he est bien la console VISIO ou choix automatique Page 4 sur 85 Double cliquer sur l ic ne correspondante au module G n raliste pour les SVT Dans la fen tre qui s ouvre vous pouvez faire appara tre le nom des adaptateurs connect s votre interface en positionnant la souris droite des capteurs jusqu l apparition d une double fl che Faire un clic gauche et d placer la souris vers la droite en maintenant ce clic Q lOxym tre Ca ff CO2 Directe Directe FO Temps A Manuelle Placer l adaptateur oxym tre sur l axe des ordonn es en cliquant sur l ic ne Oxym tre puis en d pla ant la souris en maintenant ce clic Les 6 points d accroche sur laxe des ordonn es tant quivalents vous pouvez donc placer l adaptateur oxym tre sur celui de votre choix Ce lOxym tre Ca ico Directe Directe FO Temps gt Manuele lOxym tre Page 5 sur 85 De m me positionner l adaptateur CO m tre sur l axe des ordonn es Q lOxvym tre Ca Jkco2 si di jii Directe Directe Temps G venuele i CO2 Positionner l ic ne Temps sur l axe des abscisses Q lOxym tre Co f Co2 Directe Directe FO Temps gt Menuele Temps Page 6 sur 85 Etalonnage de la sonde O Cliquer sur l ic ne Oxym tre sur l axe des ordonn es Cliquer ensuite sur l onglet Calibre et s lectionner
38. le symbole D de fa on obtenir 0 00 sur l onglet mesure Calibre Grandeur Mesure Affichage Etalonnage Page 8 sur 85 Param trage de la mesure S lectionner le mode liquide dans l onglet calibre pour l adaptateur oxym tre Si Directe SD Directe FO Temps A Manuelle lOxym tre Calibre Grandeur Mesure fichage Fonctions Remarque sur le logiciel l ic ne Oxym tre va dispara tre de laxe des ordonn es cette fonctionnalit est pr vue pour viter les changements de calibre non voulus la s lection du calibre de la sonde tant d terminante pour la mesure de l O dissout dans l eau Replacer l ic ne Oxym tre sur l axe des ordonn es Cr f Oxym tre Ga iico Directe Directe FO Temps F A Manuelle Page 9 sur 85 De m me avec l adaptateur CO2 Ce lOxym tre Co iico Directe Directe FO Temps A Manuelle f CO2 Caibe Grandeur Fonctions Param trer la dur e d acquisition sur 10 min en cliquant sur l ic ne Temps sur l axe des abscisses Cu Oxym tre Ca f CO2 Q Directe Directe o venues Temps Fonction du temps Synchronisation Dur e d acquisition 301 Nombre de points Acquisition continue C Te 2 00s NB on peut prolonger ventuellement l acquisition en cours de manipulation en se pla ant sur l axe des a
39. lules photosynth tiques dans de l eau enrichie en oxyg ne O isotope de l oxyg ne L oxyg ne d gag avait la m me composition isotopique que l oxyg ne de l eau et cette composition n tait pas celle de l oxyg ne du gaz carbonique utilis CO 2 H O U_ O2 CH20 H2O Kamen et Ruben ont galement d couvert le carbone 14 C isotope radioactif du carbone qui a servi Bassham Benson et Calvin en Californie pour suivre le cheminement du carbone dans la photosynth se Calvin et ses collaborateurs ont montr que la r duction du gaz carbonique en glucides tait le fait de r actions enzymatiques sombres et que pour r duire une mol cule de CO il fallait deux mol cules de pyridine nucl otide r duit NADPH RH et trois mol cules d ATP Le r le des pyridines nucl otides et de l ATP dans la respiration cellulaire tait d j tabli l poque En 1951 trois laboratoires mirent en vidence la r duction photosynth tique de NADP en NADPH par des chloroplastes isol s avec production simultan e d O En 1954 Arnon Allen et Whatley ont r alis une photosynth se sans cellule c est dire l assimilation de CO et la production d O par des chloroplastes d pinard isol s En 1958 Arnon et ses collaborateurs d montr rent en s parant physiquement les deux phases que la phase claire de la r action globale de fixation et de r duction du CO en glucides se produit dans les lamelles granaires ou
40. ns utiliser d nergie lumineuse par chimiosynth se En effectuant une tude comparative des photosynth ses v g tale et bact rienne le microbiologiste hollandais C B Van Niel montra que certaines bact ries pouvaient assimiler le gaz carbonique la lumi re sans produire d oxyg ne et qu en l absence d un substrat donneur d hydrog ne la photosynth se de ces bact ries tait stopp e Selon Van Niel la photosynth se pouvait tre repr sent e par l quation g n rale suivante o H2 A est le substrat oxydable lumi re COz HA TU NOM0 0 2A D LS Van Niel sugg ra que la photosynth se des plantes et algues vertes constituait un cas particulier o HA tait H2O et o 2A tait O Dans la photosynth se v g tale l op ration fondamentale serait le fractionnement de l eau en un oxydant OH et un r ducteur H Le r ducteur H servirait alors la r duction du CO pour aboutir aux constituants de la cellule cependant que l oxydant OH serait limin par une r action o il y aurait lib ration d oxyg ne et formation d eau H20 Selon Van Niel l quation globale de la photosynth se des plantes vertes est donc eooo O amie COr 4H0 gt NOkO 310 0 D LS Page 39 sur 85 Cette quation est la somme de trois tapes distinctes suivantes A oo 0o mo gt koa pigments verts O Po S COO 4 OH La s quence des r actions montre clairement que l oxyg ne pro
41. nt ce clic Gr fOxym tre h Directe Gi Directe fe Directe OTs KP Manuele Page 30 sur 85 g Placer l adaptateur oxym tre sur laxe des ordonn es en cliquant sur lic ne Oxym tre puis en d pla ant la souris en maintenant ce clic Les 6 points d accroche sur laxe des ordonn es tant quivalents vous pouvez donc placer l adaptateur oxym tre sur celui de votre choix Q fOxym tre Directe Directe Directe A Manuelle fOxym tre h De m me positionner l ic ne Temps sur l axe des abscisses Ce fOxym tre Q Directe Directe i Directe Or KP Manuele Temps Page 31 sur 85 i Etalonnage de la sonde Cliquer sur l ic ne Oxym tre sur l axe des ordonn es Cliquer ensuite sur l onglet Calibre et s lectionner Gaz on peut visualiser directement sur l adaptateur la led verte correspondant au calibre s lectionn Q f Oxym tre M Directe Si Directe Directe FO Temps Manuelle l Oxym tre Calibre Grandeur Mesure Affichage Etalonnage 3 Fonctions Cliquer sur l onglet Mesure pour visualiser en temps r el le taux d O2 lOxym tre Calibre Grandeur Mesure fichage Etalonnage Mettre la sonde dans l air Positionner le bouton z ro rep r par le symbole D du capteur oxym tre en milieu de course R gler le bouton pente rep r par le symbole D
42. ntrifugation souvent voqu e en biologie cellulaire au cours d une s ance o diverses capacit s de manipulation sont mises en uvre Cette s ance peut prendre sa place apr s la d couverte de l organisation et du r le des chloroplastes et la pr sentation des exp riences de Ruben et Kamen Avec l observation des chloroplastes cette exp rience permet de bien tablir la relation entre structure et fonction phase claire au niveau des thylako des et phase sombre au niveau du stroma du chloroplaste 2 7 Probl mes ventuels Si la production d O en pr sence de lumi re et de ferricyanure est insuffisante utiliser plusieurs culots de chloroplastes Le volume de la cuve est de 10 ml et dans ce cas le volume total de liquide provoquera des d bordements sans cons quence lors de la mise en place du couvercle du bior acteur Eviter l injection trop brutale du ferricyanure de potassium qui risquerait de provoquer un art fact au niveau du trac de la courbe d O Cet art fact peut galement s observer si bulles d air dans le cath ter plac l extr mit de la seringue de 1 ml n ont pas t vacu es Page 38 sur 85 3 Un peu d histoire Vers 1900 l tat des connaissances sur la photosynth se pouvait tre repr sent par l quation CS SSS CO Bg CH20 F suivante AG 115 kcal H O O AG 5 kcal C CS r action endergonique qui ne peut tre r alis e que par l apport d nergie lumine
43. o rep r par le symbole ia d du capteur oxym tre en milieu de course R gler le bouton pente rep r par le symbole D de fa on obtenir 20 9 sur l onglet mesure Calibre Grandeur Mesure Affichage Etalonnage Page 18 sur 85 Etalonnage de la sonde CO Cliquer sur l ic ne CO2 sur l axe des ordonn es Cliquer ensuite sur l onglet Calibre et s lectionner Gaz on peut visualiser directement sur l adaptateur la led verte correspondant au calibre s lectionn Cu fOxym tre ee jco2 Directe FO Temps Manuelle f CO2 Calibre Grandeur Mesure Affichage Etalonnage Fanctions monea gaz Cliquer sur l onglet mesure pour visualiser en temps r el le taux de CO2 CO2 Calibre Grandeur Mesure Affichage Etalonnage Mettre la sonde CO dans l air Positionner le bouton pente rep r par le symbole D du capteur CO m tre au maximum R gler le bouton z ro rep r par le symbole D de fa on obtenir 0 00 sur l onglet mesure Calibre Grandeur Mesure Affichage Etalannage Page 19 sur 85 Etalonnage de la sonde thanol Cliquer sur l ic ne Ethanol sur l axe des ordonn es Cliquer ensuite sur l onglet Calibre et s lectionner Gaz on peut visualiser directement sur l adaptateur la led verte correspondant au calibre s lectionn Q l Oxym tre Ca CO2 Q iii Ethanal Gi Directe
44. olarisation de la sonde La polarisation de la sonde O2 permet d obtenir une valeur du taux d O2 qui soit stabilis e Pour polariser votre sonde O2 il suffit de connecter l ensemble de votre mat riel sonde O2 oxym tre interface ExAO et de laisser le syst me se stabiliser quelques minutes dans Pair la valeur du taux d O2 observ e doit alors tre constante Remarque Lors de 2 s ances de TP successives il est inutile de polariser de nouveau la sonde Pas de pr sence de bulles d air gt valeur identique dans les 2 cas 3 Etalonnage de la sonde O2 e Pourquoi talonner une sonde O2 L talonnage de la sonde permet d obtenir une valeur absolue du taux d O2 Il n est par cons quent pas n cessaire d talonner une sonde O2 de fa on rigoureuse utilisation de la solution z ro lorsqu on cherche mettre en vidence des variations du taux d O2 ce qui est le cas pour les TP suivants e La photosynth se e La r action de HILL e Etude de cin tique enzymatique par oxym trie e Etude du m tabolisme humain e Physiologie de l effort L utilisation de l talonnage avec la solution z ro n est pr conis que quelque fois par an une 2 Remarque Pour l tude de la respiration des levures il peut s av rer judicieux d talonner la sonde O2 avec la solution z ro pour viter d obtenir une valeur l g rement n gative du taux d 02 une fois tout oxyg ne consomm pa
45. onserver un peu au fond du tube pour remettre en suspension les chloroplastes du culot l aide d une pointe de pipette effil e Faire tomber le contenu du tube de centrifugation ou de la d cantation dans la cuve du bior acteur qui contient 5 ml d eau distill e ainsi qu un turbulent pour l agitation Le choc osmotique fait clater les chloroplastes et l accepteur d lectron biologique pr sent se trouve ainsi tr s dilu ce qui quivaut sa disparition Ajouter 5 ml de tampon double concentration pour r tablir la pression osmotique de d part Fermer le bior acteur qui doit tre rempli compl tement de liquide Faire attention de ne pas laisser de bulles d air l int rieur de l enceinte Placer la sonde 02 dans l enceinte par l un des emplacements situ s dans le couvercle du bior acteur Eviter d utiliser l emplacement central sous lequel se trouve l agitateur NB La sonde O2 ne doit pas toucher le fond de la cuve du bior acteur Brancher le bior acteur lancer l agitation et fermer les volets pour laisser la pr paration l obscurit Page 35 sur 85 Lancer la mesure en cliquant sur le feu vert puis en cliquant sur le bouton Lancer Lancement de l acquisition Nom de la manipulation Laisser se d rouler l exp rience pendant environ 1 min l obscurit Allumer la lampe la placer une dizaine de cm du bior acteur puis ouvrir les volets Laisser se d rouler l exp rience
46. pressions et d pressions cr es chaque fois qu on ins re ou qu on retire la sonde fragilisent la membrane de la t te de sonde NE PAS UTILISER POUR STOCKER LES SONDES Si la valeur affich e est 0 12 avec le symbole DEB pour d bordement qui clignote proc der de la fa on suivante Grandeur Mesure Affichage Mettre les boutons pente et z ro du CO2m tre au minimum D visser la t te de sonde et rincer l lectrode de verre Peau distill e jusqu ne plus observer le symbole DEB e Nettoyer l lectrode de verre P thanol 95 l aide d un chiffon doux et laisser s vaporer Nettoyer la t te de sonde avec un coton tige imbib d thanol 95 e Remettre de l lectrolyte neuf dans la t te de sonde puis revisser tr s lentement Changer la t te de sonde si DEB appara t toujours La t te de sonde doit tre chang e une fois par an en moyenne dans des conditions normales d utilisation Page 85 sur 85
47. r Page 48 sur 85 Au temps 1 min injecter l aide d une seringue de 1 mi munie d un cath ter 0 1 mi de GOD dans la cuve du bior acteur NB un petit orifice est pr vu cet effet dans le couvercle du bior acteur ce qui vite d ouvrir le couvercle Mettre un rep re sur l axe des temps en appuyant sur la barre d espace Stopper la mesure en cliquant sur la croix rouge g Acquisition en cours t CL J N B une fois l exp rience termin e enlever le couvercle de l enceinte et rincer tr s soigneusement l eau distill e la sonde l agitateur le couvercle et la cuve Il faut en effet enlever toute trace de GOD Utiliser le m me protocole que pr c demment pour les diff rentes concentrations de glucose tester Manipuler dans le sens croissant des concentrations Pour chaque exp rience choisir la superposition de la courbe aux pr c dentes S lectionner une manipulation Remplacer les donn es d j a acquises dans Manipulation 1 Nouvelle manipulation Manipulation 2 2 Page 49 sur 85 3 2 R sultats obtenus Cin tique enzymatique variation de 02 en fonction de substrat 0 001M Page 50 sur 85 t min s On prendra soin d annoter les diff rentes courbes en cliquant sur l ic ne Annotation d une courbe Information Pour cr er un titre une annotation ou un amp commentaire remplissez le champ correspondant avec le texte souhait
48. r le martoreflex sur les entr es synchro de la console VISIO Em al Je DATE K gt vw Ou e 5 S La s lection de l activit esi lIs e lors du CIC sur l Image Une fois le choix r alise cliquez sul le bouton permettant de demarrer l activit V rifier que l interface s lectionn e en bas gauche est bien la console VISIO ou choix automatique Double cliquer sur l ic ne correspondante au module G n raliste pour les SVT Page 63 sur 85 2 Param trage de l acquisition Positionner l adaptateur Electrophy non filtr sur axe des ordonn es et le temps sur l axe des abscisses y fElectrophy filtre fe Q fElectrophy non Directe Directe Directe FO Temps K Menele Temps Pour r gler l adaptateur Electrophy positionner le bouton a en milieu de course REMARQUE Si le signal mesur appara t trop petit une fois acquisition effectu e on augmentera le gain en tournant le bouton vers 0 5 par d finition du gain Si le signal mesur appara t satur on diminuera le gain en tournant le bouton vers 5 Page 64 sur 85 Param trer la dur e d acquisition sur 100 ms en cliquant sur l ic ne Temps sur l axe des abscisses y fElectrophy filtre y l Electrophy non Si Directe E Directe si j Directe 1 A Manuelle Temps Fonction du temps Synchronisation Dur e d acquisition F
49. r les levures e Comment talonner la sonde O2 Positionner la sonde O2 dans l air R gler le bouton z ro rep r par le symbole D de l oxym tre en milieu de course Ajuster le bouton pente rep r par le symbole Da pour obtenir 20 9 Calibre Grandeur Mesure Affichage Etalonnage LL 1 Page 75 sur 85 4 Test de la sonde Param trer une acquisition sur 1 ou 2 minute Poser la sonde sur le bord de la paillasse ou sur une potence pour viter toutes interf rences li e aux mouvements du c ble Avoir un sac plastique non trou dans lequel on pourra souffler Vous devez obtenir une courbe qui pr sente ce type d allure Liz 3 Retour 20 9 Emprisonnement de la sonde dans le sachet plastique dans lequel on aura souffl au pr alable Si la courbe obtenue pr sente un aspect diff rent proc der de la fa on suivante Nettoyer l lectrode d argent Pammoniaque 0 1 M l aide d un chiffon doux puis rincer l eau distill e Remettre de l lectrolyte neuf dans la t te de sonde puis revisser lentement Changer la t te de sonde si la nouvelle courbe obtenue n est toujours pas correcte Page 76 sur 85 5 Entretien et conservation gt Vous avez besoin de votre sonde O2 pour une s rie de TP Vous pouvez conserver les sondes 02 avec l lectrolyte l int rieur de la t te de sonde
50. te Directe Directe ren Kp Menuele lOxym tre h De m me positionner l ic ne Temps sur l axe des abscisses Q lOxym tre Sh Directe E Directe Directe FO Temps A Manuelle Temps Page 44 sur 85 i Etalonnage de la sonde Cliquer sur l ic ne Oxym tre sur l axe des ordonn es Cliquer ensuite sur l onglet Calibre et s lectionner Gaz on peut visualiser directement sur l adaptateur la led verte correspondant au calibre s lectionn Q f Oxym tre M Directe Si Directe Directe FO Temps Manuelle l Oxym tre Calibre Grandeur Mesure Affichage Etalonnage 3 Fonctions D gaz Cliquer sur l onglet mesure pour visualiser en temps r el le taux d O2 lOxym tre Calibre Grandeur Mesure Affichage Etalonnage Mettre la sonde dans l air Positionner le bouton z ro rep r par le symbole D du capteur oxym tre en milieu de course R gler le bouton pente rep r par le symbole D de fa on obtenir 20 9 sur l onglet mesure Calibre Grandeur Mesure Affichage Etalonnage Page 45 sur 85 j Param trage de la mesure S lectionner le mode liquide dans l onglet calibre l Oxym tre Calibre Grandeur Mesure Fonctions 2 Remarque sur le logiciel l ic ne Oxym tre va dispara tre de l axe des ordonn es cette fonctionnalit est pr vue pour
51. te cela risque d obturer la membrane de la sonde O2 v Pr paration du glucose Pr parer une solution de glucose 50g L Page 14 sur 85 3 Mise en place de l exp rimentation Brancher la sonde O sur l adaptateur oxym tre Connecter le capteur oxym tre sur l une des 4 entr es de l interface VISIO Brancher la sonde CO sur le capteur CO m tre Connecter l adaptateur CO m tre sur l une des entr es de l interface VISIO Brancher la sonde thanol sur le capteur Ethanol Connecter l adaptateur Ethanol l une des entr es de l interface VISIO Lancer l Atelier Scientifique pour les SVT 7 Atelier Scientifique pour les SVT D VS s TA So AS 5 Choisissez une activit La s lection de l activit esi r alis e lors du clic sur l Imaae ASSOCICeE Une fois le choix r alise cliquez sul te DOUION permettant de d marrer l activit O Peun A V rifier que l interface s lectionn e en bas gauche est bien la console VISIO ou choix automatique Page 15 sur 85 Double cliquer sur l ic ne correspondante au module G n raliste pour les SVT Dans la fen tre qui s ouvre vous pouvez faire appara tre le nom des adaptateurs connect s votre interface en positionnant la souris droite des adaptateurs jusqu l apparition d une double fl che P Faire un clic gauche et d placer la souris vers la droite en maintenant ce clic j Oxym tre ei fCO
52. umain e Physiologie de l effort e Etude de la respiration des levures Page 82 sur 85 e Comment talonner la sonde CO2 Positionner la sonde CO2 dans l air R gler le bouton pente rep r par le symbole du CO2m tre au maximum Ajuster le bouton z ro rep r par le symbole D 4 pour obtenir 0 00 Calibre Grandeur Mesure Affichage Etalonnage 4 Param trer une acquisition sur 3 minutes Tenir la sonde entre les mains et souffler dessus Vous devez obtenir une courbe qui pr sente ce type d allure Test de la sonde CO2 On pose la sonde sur la table QE On comment souffler 0 8 0 4 0 2 Si la courbe obtenue pr sente un aspect diff rent proc der de la fa on suivante Nettoyer l lectrode de verre l thanol 95 l aide d un chiffon doux et laisser s vaporer Remettre de l lectrolyte neuf dans la t te de sonde puis revisser lentement Changer la t te de sonde si la nouvelle courbe obtenue n est toujours pas correcte Page 83 sur 85 5 Entretien et conservation gt Durant toute l ann e Il faut TOUJOURS conserver la sonde CO2 avec l lectrolyte l int rieur de la t te de sonde Il est recommand de la positionner verticalement dans un b cher sec gt Une fois par an D visser la t te de sonde Vider l lectrolyte de la t te de sonde Rincer la t te de sonde l eau distill e Nettoy
53. use capt e par la chlorophylle D s 1905 un chercheur britannique en physiologie v g tale F F Blackman interpr tait la forme des courbes de saturation lumineuse plateau de la courbe de l IP en fonction de l clairement au del de 10 000 Lux en mettant l hypoth se que la photosynth se est un m canisme deux tapes comportant une r action photochimique ou r action claire et une r action non photochimique ou r action sombre La r action sombre est enzymatique et plus lente que la r action claire ceci a pour cons quence qu aux intensit s lumineuses lev es la vitesse de la photosynth se d pend enti rement de la vitesse de la r action sombre La r action claire est peu ou pas sensible la temp rature contrairement la r action sombre cette sensibilit la temp rature est caract ristique des r actions enzymatiques Il faut bien comprendre que la r action dite sombre peut se produire aussi bien la lumi re qu l obscurit Avant 1930 nombre de chercheurs pensaient que la r action fondamentale de la photosynth se tait un fractionnement du gaz carbonique en carbone et oxyg ne sous l action de la lumi re et que le carbone tait ensuite r duit par l eau en glucides au cours d une autre s rie de r actions Deux d couvertes importantes modifient cette id e vers 1930 La premi re d couverte mit en vidence que certaines bact ries assimilaient le gaz carbonique et synth tisaient des glucides sa
54. viter les changements de calibre non voulus la s lection du calibre de la sonde tant d terminante pour la mesure de l O dissout dans l eau Replacer l ic ne Oxym tre sur l axe des ordonn es Q lOxym tre j Drecte de fhDirecte Cirecte rene K Menuele Page 46 sur 85 Param trer la dur e d acquisition sur 5 min en cliquant sur l ic ne Temps sur l axe des abscisses D lOxym tre Directe Si Directe Directe Temps Fonction du temps Synchronisation Dur e d acquisition 301 Nombre de points Acquisition continue C Te 1 00 NB on peut prolonger ventuellement l acquisition en cours de manipulation en se pla ant sur l axe des abscisses le curseur change d aspect double fl che il suffit alors de d placer la souris vers la gauche Page 47 sur 85 3 1 3 R alisation de l exp rience Remplir la cuve du bior acteur avec la solution de glucose 0 001 M de fa on faire d border la cuve une fois le couvercle positionn e Brancher le bior acteur et lancer l agitation Placer la sonde 02 dans l enceinte par l un des emplacements situ s dans le couvercle du bior acteur Eviter d utiliser l emplacement central sous lequel se trouve l agitateur NB La sonde O2 ne doit pas toucher le fond de la cuve du bior acteur Lancer la mesure en cliquant sur le feu vert puis en cliquant sur le bouton Lancer Lance
55. yanure de potassium car le d gagement d O2 peut saturer le milieu et provoquer le blocage de la sonde La r action de Hill peut tre r alis e dans l ancien bior acteur Dans ce cas le volume de l enceinte est r gler 2 5 ml Le volume d eau mis dans l enceinte au d part est de 1 5 ml et la pression osmotique initiale est r tablie en ajoutant 1 5 ml de tampon double concentration Une injection de 0 2 ml de ferricyanure de potassium suffit pour observer un d gagement d O2 Au d part une l g re baisse du taux d O l obscurit est g n ralement observ e et elle se poursuit la lumi re La remont e du taux d O un peu apr s l injection du ferricyanure de potassium s interrompt lorsqu on passe de la lumi re l obscurit 2 6 Exemple de r sultats attendus AE Taux de 02 O2 02mgL taux _O timin s Page 37 sur 85 Explication et interpr tation de ces r sultats L augmentation de la concentration en dioxyg ne dans les phases d clairement et de pr sence d accepteur d lectrons correspond l activit photosynth tique phase claire Une diminution de la concentration en dioxyg ne dans les phases d obscurit ou d absence d accepteurs d lectrons correspond l activit respiratoire En r alit l activit photosynth tique plus importante masque l activit respiratoire Les mitochondries pr sentes dans le culot assurent en permanence l activit respiratoire
56. yte pour sonde O2 de telle sorte que l lectrolyte d borde ondoz ESAO JE teneur mini lorsque la t te de sonde est viss e sur le corps de la i sonde Cette manipulation aura 2 effets Etre sure qu il n y a pas de bulle d aire V rifier l tanch it de la membrane et l absence de fuite 3 Visser la t te de sonde rincer l eau distill e et laisser le syst me se stabiliser pendant quelques minutes dans l air la valeur affich e doit alors tre constante 4 Positionner le bouton z ro situ droite de loxym tre en milieu de course et r gler le bouton pente situ gauche pour obtenir 20 9 dans Pair Calibre Grandeur Mesure Mfichage VOTRE SONDE O2 EST PRETE A L EMPLOI Page 73 sur 85 1 Mise en service de la sonde 02 Corps de la sonde T te de sonde FN Membrane Remplir la t te de sonde avec l lectrolyte pour sonde O2 de telle sorte que l lectrolyte d borde lorsque la t te de sonde est viss e sur le corps de la sonde ce qui vitera la pr sence de bulles d air Remarque La pr sence d une grosse bulle peut tre d tect e en observant la valeur renvoy e par la sonde positionn e successivement t te en haut puis t te en bas la valeur fluctue si il y a une bulle Dans ce cas l d visser la t te de sonde compl ter avec de l lectrolyte puis revisser lentement Page 74 sur 85 2 P
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