Legionella Latex Test [FR]
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1. 9 Refermer les flacons et les placer de nouveau au r frig rateur 11 LECTURE ET INTERPR TATION DES R SULTATS R sultat positif Un r sultat est positif si agglutination des particules de latex bleu appara t en 1 minute et s il n y a pas d agglutination dans le cercle de contr le Une r action positive indique la pr sence des antig nes du serogroupe de Legionella correspondant dans l chantillon R sultat negatif Un r sultant n gatif est obtenu si aucune agglutination n appara t en 1 minute et si la suspension reste homog ne R sultat non interpr table Un test est ininterpr table si le r actif de contr le montre une agglutination Cela indique que la culture entra ne une autoagglutination R action granuleuse ou filamenteuse Des r actions granuleuses ou filamenteuses peuvent appara tre occasionnellement compte tenu de la nature particuli re du mat riel test Quand de telles r actions apparaissent elles doivent tre interpr t es selon les crit res suivants Le r sultat est positif quand il y a claircissement visible du fond bleu Le r sultat est n gatif quand il n y a pas d claircissement notable du fond bleu 12 LIMITES DU TEST 1 Le test d agglutination au latex est un diagnostic pr somptif Confirmer les r sultats positifs en utilisant des tests biochimiques 2 Un test d agglutination au latex n gatif ne signifie pas que la culture n est pas une Legionella2. le s rogroupe 15 de Legionella pneumophila ATCC 35251 ainsi que les s rogroupes 1 14 de L pneumophila et d autres souches pathog nes de Legionella autres que L pneumophila Cependant puisque seule une souche du s rogroupe 15 est disponible pour le test il n a pas t jug appropri de renommer le r actif de latex des s rogroupes 2 14 d apr s les r sultats d un isolat unique Les Oxoid Legionella kits permettent aux utilisateurs de classer les chantillons en trois groupes s rogroupe 1 de L pneumophila s rogroupes 2 15 de L pneumophila avec r actif 2 14 et d autres Legionella species gr ce une proc dure d analyse rapide et simple o j Oxoid Serologie Nombre E La sensibilit globale du Legionella Latex Test OXOID est de 99 La sp cificit globale du Legionella Latex Test OXOID est de 100 ATTENTION Ce produit contient d azoture de sodium Nocif en cas d ingestion 14 REFERENCES 1 Sedgwick A K and Tilton R C 1983 J Clin Microbiol 17 365 368 2 Ciesielski C A Blaser M J and Wang W L 1986 Infect Immun 51 397 404 3 Dennis P J L 1988 Isolation of Legionellae from Environmental Specimens p 31 44 In Harrison T G and Taylor A G eds A Laboratory Manual for Legionella John Wiley amp Sons Ltd Chichester UK 4 Dournon E 1988 Isolation of Legionellae from Clinical Specimen p 13 30 In Harrison T G a
3. 47 667 678 12 L ck P C et al DNA Polymorphisms in Strains of Legionella pneumophila Serogroups 3 and 4 Detected by Macrorestriction Analysis and Their Use for Epidemiological Investigation of Nosocomial Legionellosis Applied and Environmental Microbiology 1995 61 2000 2003 13 Helbig J H 2003 Personal Communication L gende des symboles R f rence de catalogue Dispositif m dical de diagnostic in vitro Consulter le mode d emploi Limite de temp rature Code de lot A utiliser avant Fabricant Er E gt ER CE X5057C Avril 2013 OXOID Limited Wade Road Basingstoke Hampshire RG24 8PW UK
4. DR805 ne doit pas montrer d agglutination en 1 minute Ne pas utiliser le test si les r actions avec les suspensions de contr le sont incorrectes 8 NOTES IMPORTANTES Ne pas toucher l chantillon avec le compte gouttes de fa on ne pas contaminer les r actifs S assurer que les capuchons soient bien viss s afin d viter toute contamination et vaporation des r actifs Apr s utilisation remettre le coffret dans le r frig rateur en s assurant que les flacons soient plac s bien droits 9 RECUEIL ET PR PARATION DES CHANTILLONS Les souches provenant d chantillons de l environnement ou d chantillons cliniques peuvent tre cultiv es sur des milieux de culture Legionella non s lectifs ou s lectifs Des sch mas d isolement typique sont donn s aux paragraphes 3 et 4 Les Legionella n cessitent en isolement primaire du chlorydrate de L cyst ine Pour s assurer que la souche est une Legionella il est necessaire de montrer qu elle ne peut pas pousser sur un milieu ne contenant pas de chlorydrate de L cyst ine Legionella Agar sans cysteine CM655 SR175 Cette confirmation peut tre pratiqu e avant ou apr s le test au latex Les milieux et suppl ments Oxoid suivants peuvent tre utilis s pour la culture des Legionella avant l utilisation du test au latex BCYE CM655 SR110 BPMAa CM655 SR110 SR111 MWY CM655 SR110 SR118 GVPC CM655 SR110 SR152 Pour plus de d tails sur ces
5. avec l antig ne Legionella pneumophila s rogroupe 1 Chaque coffret contient le r actif en quantit suffisante pour 50 tests DR802 r actif test pour Legionella pneumophila s rogroupes 2 14 Consiste en des particules de latex bleu sensibilis es par des anticorps de lapin sp cifiques r agissant avecl antig ne Legionella pneumophila s rogroupes 2 14 Chaque coffret contient le r actif en quantit suffisante pour 50 tests DR803 r actif test Legionella spp Consiste en des particules de latex bleu sensibilis es par des anticorps de lapin sp cifiques r agissant avec les esp ces et les s rotypes suivants L longbeachae 1 et 2 L bozemanii 1 et 2 L dumoffii L gormanii L jordanis L micdadei L anisa Chaque coffret contient le r actif en quantit suffisante pour 50 tests DR804 Suspension de contr le positif Une suspension polyvalente de Legionella dans un tampon pour 25 tests DR805 Suspension de contr le n gatif Une suspension de L spiritensis dans un tampon ne r agissant pas avec le r actif test pour 25 tests DR806 Latex de contr le Consiste en des particules de latex bleu sensibilis es par des anticorps de lapin non r actifs pour 50 tests DR807 Tampon PBS pH 7 3 DR500 Cartes de r action 50 cartes de r action usage unique sont fournies dans le coffret Mode d emploi 4 MAT RIEL N CESSAIRE Le mat riel suivant est n cessaire mais non fourni dans le
6. produits veuillez contacter votre distributeur local e Les cultures peuvent tre test es n importe quel stade de la croissance condition que les colonies soient de taille suffisante Cependant des cultures plus anciennes peuvent produire des r actions filamenteuses qui rendent l interpr tation plus difficile 10 METHODES Deux m thodes peuvent tre utilis es Les deux m thodes directe ou en tube donnent des r sultats fiables Si une souche a une consistance filamenteuse il est recommand d utiliser la m thode en tube A Test direct 1 Ramener les r actifs au latex temp rature ambiante M langer vigoureusement les suspensions de latex Expulser tout le latex de la pipette compte gouttes 2 D poser 1 goutte de chaque r actif au latex sur 4 cercles de la carte de r action Les d poser pr s du bord du cercle 3 Ajouter 1 goutte de suspension tampon chacun des 4 cercles S assurer que le tampon et le latex ne se m langent pas ce stade 4 En utilisant une oese pr lever une colonie d au moins 1 mm 2 ou plusieurs si les colonies sont plus petites et mulsionner soigneusement dans le tampon Pour des r sultats optimaux s assurer que la suspension est homog ne R p ter l op ration avec des colonies similaires pour chaque r actif 5 M langer les r actifs au latex et les suspensions de fa on couvrir toute la zone de r action Flamber l oese 6 Imprimer la carte un mo
7. s non trait s peut tre abaiss si la maladie est diagnostiqu e rapidement et une th rapie antimicrobienne appropri e mise en place rapidement On a montr que Legionella pneumophila est la cause majeure d une pneumonie et d une maladie f brile aigu appel e la Fi vre de Pontiac Les souches de L pneumophila et autres esp ces de Legionella sont isol es partir de patients ayant une pneumonie ou partir de l environnement principalement l eau Quelques rares isolements ont aussi t signal s dans des cas autres qu une pneumonie tels que des blessures Le r servoir majeur des esp ces de Legionella appara t tre les sites d eau fra che les appareils air conditionn et les diverses installations de plomberie L pneumophila est la plus commune des causes de maladies du L gionnaire Aujourd hui 14 s rotypes diff rents existent dont L pneumophila s rogroupe 1 qui repr sente 90 des cas Le Legionella Latex Test Oxoid utilise des particules de latex bleu sensibilis es par des anticorps qui agglutinent en pr sence des antig nes de paroi de Legionella formant des agr gats bien visibles Cela permet un d pistage simple et rapide des esp ces et s rotypes pr dominants de Legionella pathog nes 3 COMPOSITION DU COFFRET DR801 r actif test pour Legionella pneumophila serogroupe 1 Consiste en des particules de latex bleu sensibilis es par des anticorps de lapin sp cifiques r agissant
8. Cela indique seulement que la culture n est pas une Legionella pneumophila s rogroupes 1 14niune L longbeachae 1 et 2 L bozemanii L dumoffii L gormanii L jordanis L micdadei L anisa 3 Une r action crois e peut se produire entre L pneumophila s rogroupe 1 et s rogroupe 9 Si une souche de Legionella agglutine avec les 2 r actifs au latex s rogroupes 1 et 2 14 cette r action crois e do t tre suspect e 4 Des r actions crois es entre le r actif test pour Legionella sp et certains s rotypes d autres legionella e g L parisiensis L sainthelensi L steigerwaltii L wadsworthii L santicrucis L tusconensis L gratiana L cincinatiensis ont t signal es 5 Le test est con u pour s parer les diff rentes esp ces et les s rotypes de Legionella Il est donc necessaire de s assurer que les colonies test es sont bien des bacilles Gram n gatif et qu elles ne se d veloppent pas sur des milieux ne contenant pas de cyst ine 13 PERFORMANCES Les r actifs du Legionella Test Kit Oxoid ont t test s pour d tecter d ventuelles r actions crois es avec les micro organismes cit s ci dessous Aucune r action crois e n a t observ e L cherri L birminghamensis L rubrilucens L maceachernii L oakridgensis L erythra L feelei L fairfieldensis L brunensis L spiritensis Pseudomonas fluorescens Pseudomonas cepacia Pseudomonas aeruginosa Aeromonas hydr
9. Legionella Latex Test FR DRO800M 50 tests 1 DOMAINE D APPLICATION Le Legionella Latex Test est un test d agglutination au latex pour l identification des esp ces pr dominantes de Legionella partir de colonies sur milieu g los chez des patients suspect s de Legionellose ou partir de l environnement Le Legionella Latex Test Oxoid permet l identification s par e de Legionella pneumophila s rogroupe 1 et s rogroupes 2 14 ainsi que la d tection de sept autres esp ces de Legionella qui sont l origine de maladies humaines 2 INTRODUCTION La maladie du L gionnaire ainsi nomm e suite son apparition en 1976 la Convention de la L gion am ricaine est d e Legionella pneumophila et d autres esp ces de Legionella Elle est caract ris e par une maladie respiratoire f brile aigu allant de l infection benigne la pneumonie fatale Il a t reconnu que la maladie appara t la fois sous la forme pid mique et end mique et que les sympt mes cliniques ne permettent pas de diff rencier facilement les cas sporadiques d autres infections respiratoires On estime que mondialement 25 000 cas des Legionellose apparaissent chaque ann e Les facteurs de risques connus comprennent l immunod pression l abus de tabac et d alcool et toutes maladies pulmonaires associ es Le taux de mortalit qui peut atteindre jusqu 25 dans le cas de patients immunod prim
10. coffret une oese microbiologique et un Bec Bunsen solution saline pour la m thode en tube facultative d sinfectant de laboratoire appropri par exemple solution l hypochlorite de sodium gt 1 3 pds vol 5 PR CAUTIONS Pour usage in vitro uniquement Ne pas congeler Les r actifs contiennent 0 1 d azoture de sodium comme agent de conservation L azoture de sodium peut r agir avec la tuyauterie en plomb ou en cuivre pour former des azotures metalliques hautement explosifs Pour pr venir une accumulation d azoture dans la tuyauterie vacuer avec un grand volume d eau Les chantillons peuvent contenir des pathog nes manipuler avec pr caution micro organismes La formation d a rosol doit tre vit e un soin pariculier doit tre pris durant l homog n isation au Vortex Pour toute information sur les composants potentiellement dangereux veuillez vous r f rer la fiche de donn es de s curit du fabricant et l tiquette du produit en R22 Nocif par ingestion 6 CONSERVATION Ce coffret doit tre conserv 2 8 C 7 PROC DURE DE CONTR LE Les suspensions de contr le fournies devraient tre utilis es pour v rifier le bon fonctionnement des r actifs au latex chaque jour avant les tests de routine La suspension de contr le positif DR804 doit montrer une agglutination avec le r actif au latex en 1 minute La suspension de contr le n gatif
11. nd Taylor A G eds A Laboratory Manual for Legionella John Wiley amp Sons Ltd Chichester UK 5 Cowan and Steel s Manual for the identification of Medical Bacteria 3rd Ed Barrow G I and Feltham R K A eds 1993 p 161 163 University Press London 6 Harrison T G and Taylor A G 1988 Identification of Legionellae by Serological Methods In Harrison T G and Taylor A G eds A Laboratory Manual for Legionella John Wiley amp Sons Ltd Chichester UK 7 Data on file Oxoid Ltd 8 Brenner et al Legionella pneumophila Serogroup Lansing 3 Isolated from a Patient with Fatal Pneumonia and Descriptions of L pneumonia subsp pneumophila subsp nov L pneumophila subsp fraseri subsp nov and L pneumophila subsp pascullei subsp nov Journal of Clinical Microbiology 1988 26 1695 1703 9 Helbig J H etal Pan European Study on Culture Proven Legionnaires Disease Distribution of Legionella pneumophila Serogroups and Monoclonal Subgroups European Journal of Clinical Microbiology and Infectious Disease 2002 21 710 716 10 L ck C etal Isolation of a Legionella pneumophila Strain Serologically Distinguishable from all known Serogroups Zentralblatt fuer Bakteriologie 1995 282 35 39 11 Fry N K and Harrison T G An evaluation of intergenic rRNA gene sequence length polymorphism analysis for the identification of Legionella species Molecular Identification and Epidemiology 1998
12. ophila L hackeliae L israeliensis L jamestowniensis L quinlivanii L moravica Stenotrophomonas maltophilia Bacillus subtilis Citrobacter freundii Eschericia coli Serratia marcescens Le Legionella Latex Test a t valu dans un laboratoire clinique et d hygi ne Un total de 40 souches cliniques et 279 de souches issues de l environnement ont t test es couvrant les Legionella pneumophila s rogroupe 1 14 et les Legionella non pneumophila Chaque souche a t confirm e par s rologie La performance du coffret Oxoid a t aussi compar e d autres coffrets de r actif au latex Legionella disponibles dans le commerce Les r sultats des essais sont r sum s ci dessous Le s rogroupe 15 de L pneumophila n a pour l heure pas t isol des chantillons cliniques ou environnementaux en Europe et n a t isol qu une seule fois aux Etats Unis Le s rogroupe le plus r cemment d crit ne contient qu une seule souche Lansing 3 ATCC 35251 partir de l tude de l isolat du Jena 11 1 un 16 me s rogroupe a t propos mais des analyses compl mentaires ont montr que la souche ne constituait pas un s rogroupe unique mais faisait partie du s rogroupe 4 de L pneumophila groupe monoclonal Portland 1 121 Des donn es internes suppl mentaires ont t r colt es et d montrent qu Oxoid Legionella Latex Kit DRO800M DRO801M DRO802M et DRO803M est capable de d tecter
13. uvement de rotation circulaire et observer l agglutination Ne pas d passer 1 minute et ne pas utiliser une loupe pour lire le r sultat 7 Une fois l op ration termin e liminer la carte de r action dans un d sinfectant appropri 8 Refermer les flacons et les placer de nouveau au r frig rateur B M thode en tube 1 Ramener les reactifs au latex temp rature ambiante M langer vigoureusement les suspensions de latex Expulser tout le latex de la pipette compte gouttes 2 Identifier les tubes de fa on appropri e et delivrer 0 4 ml de solution saline 0 85 dans chaque tube 3 S lectionner l aide d une oese 4 10 colonies d apparence similaire et mulsionner dans la solution saline 4 M langer l aide d un Vortex pendant 5 secondes Cf Paragraphe Pr cautions 5 D poser 1 goutte de chaque r actif au latex 3 r actifs tests et le r actif de contr le sur 4 cercles de la carte de r action Les d poser pr s du bord du cercle 6 A l aide d une pipette Pasteur ajouter 1 goutte de suspension de cellules sur chacun des 4 cercles et les m langer aux r actifs au latex Couvrir toute la zone de r action 7 Imprimer la carte un mouvement de rotation circulaire et observer l agglutination Ne pas d passer 1 minute et ne pas utiliser une loupe pour lire le r sultat 8 Une fois l op ration termin e liminer la carte de r action dans un d sinfectant appropri
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