Vivaspin 6 et 20 ml
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1. Telephone 49 551 308 0 Fax 49 551 308 3289 www sartorius com Copyright de Sartorius Stedim Biotech GmbH Goettingen Allemagne Tous droits r serv s La r impression ou la transmis sion totale ou partielle de cette documentation sous quelque forme et par quelque moyen que ce soit est interdite sans l accord crit pr alable de Sartorius Stedim Biotech GmbH Les infor mations caract ristiques tech niques et illustrations contenues dans ce manuel sont fournies telles qu elles taient connues a la date indiqu e ci dessous Sartorius Stedim Biotech GmbH se r serve le droit de modifier sans pr avis les technologies fonctions caract ristiques techniques et l aspect du mat riel Date janvier 2014 Sartorius Stedim Biotech GmbH Goettingen Allemagne Imprime en EU sur papier blanchi sans chlore W N de publication SLU6092 f140104 Ver 01 20142. Chloroforme 1 NO Pyridine 100 Dimethylformamide 10 Carbonate de sodium 20 Dimethylsulfoxide 5 OK Desoxycholate de sodium 5 OK Ethanol 70 OK Dod cylsulfate de sodium 0 1 M OK Ac tate d thyle 100 NO Hydroxyde de sodium NO Formald hyde 30 OK Hypochlorite de sodium 200 ppm Acide formique 5 OK Nitrate de sodium 1 0 OK Glyc rine 70 OK Acide sulfamique 5 OK Guanidine HCI 6 M OK T trahydrofuranne 5 NO Hydrocarbures aromatiques NO Toluene 1 NO Hydrocarbures chlor s NO Acide trifluoroac tique 10 OK Acide chlorhydrique 1 M OK Tween 20 0 1 OK Imidazole 500 mM OK Triton X 100 0 1 OK Alcool d isopropyle 70 OK Uree 8 M OK OK Acceptable A tester NO Non recommand 11 Informations de commande Vivaspin 6 Poly thersulfone Conditionnement Ref 3 000 coupures de membrane 25 VS0691 3 000 coupures de membrane 100 VS0692 5 000 coupures de membrane 25 VS0611 5 000 coupures de membrane 100 VS0612 10 000 coupures de membrane 25 VS0601 10 000 coupures de membrane 100 VS0602 30 000 coupures de membrane 25 VS0621 30 000 coupures de membrane 100 VS0622 50 000 coupures de membrane 25 VS0631 50 000 coupures de membrane 100 VS0632 100 000 coupures de membrane 25 VS0641 100 000 coupures de membrane 100 VS0642 300 000 coupures de membrane 25 VS0651 300 000 coupures de membrane 100 VS0652 1 0
3. ext rieur 4 Effectuez la centrifugation aux vitesses recommand es dans le tableau 2 en prenant soin de ne pas d passer la force g maximale variable selon le type de membrane et la coupure de la membrane 5 Des que la concentration souhaitee est atteinte voir les tableaux 3a et 3b pour connaitre les dur es de centrifugation retirez l ensemble et r cup rez l chantillon au fond de la poche de concentr s l aide d une pipette 4 Retrait du corps Vivaspin 6 du tube de filtrat Le fourreau vu depuis l extr mit est ovale dans la coupe transversale Le tube est arrondi dans la coupe transversale pour un meilleur ajustement Pour retirer le tube du fourreau vous devez le pincer pour qu il prenne une forme ovale avant de l enlever par un mouvement de rotation 4 l 1000 000 MWCO Appuyer ici q Appuyer ici 1 gt Tube Fourreau Utilisation de la pression de gaz Vivaspin 20 uniquement 1 Selectionnez la membrane ad quate comme ci dessus 2 Remplissez le concentrateur max 15 ml 3 Ins rez la t te de pression r f VCA200 et serrez manuellement pour que le joint soit tanche Pair 4 l aide du r gulateur de pression d air RPA remplacez le couplage femelle par la vanne de remplissage r f VCA005 sur l ex tension du RPA Augmentez la pression en ins rant la vanne de remplissage dans la vanne d entr e de la t
4. lavage dialfiltration de volume constante de la solution de tampon dans le r servoir a mesure qu elle remplace les solvants et les sels en traversant la membrane d ultrafiltration 1 Introduire 2ml d chantillon dans le concentrateur Les volumes plus lev s peu vent tre dessal s en obtenant d abord une concentration de 2 ml et apres d cantation du filtrat 2 Videz le r servoir de filtrat 3 Introduisez le r servoir de diafiltration dans le concentrateur et ajoutez 10 ml d eau deionisee ou de solution tampon Remettez le couvercle bleu sur le r servoir de diafiltra tion 4 R p tez le processus de concentration plus de 98 de sels seront limin s au cours de cette tape 5 Retirez le r servoir de diafiltration et recueillez l chantillon concentr et purifi 6 Diafiltration Vivaspin 20 Le r servoir de diafiltra tion est rempli avec la solution tampon ref VSAO05 Pendant la concentration le solvant de l chantillon est continuellement rem plac par de la solution tampon fra che Les sels et les contami nants sont progressive ment limin s par la membrane vers le r ser voir de filtrat Caract ristiques techniques Tableau 1 Caract ristiques techniques Vivaspin 6 Vivaspin 20 Capacit du concentrateur Rotor mobile 6 ml 20 ml Rotor a angle fixe 6 ml 14 ml Avec la t te de pression 15 ml Dimensions Longueur tot
5. 00 000 coupures de membrane 25 VS0661 1 000 000 coupures de membrane 100 VS0662 0 2 um 25 VS0671 0 2 um 100 VS0672 Pack starter 5 de chaque 5 K 10 K 30 K 50 K 100 K 25 VS06S1 12 Vivaspin 6 Poly thersulfone Conditionnement Ref 3 000 coupures de membrane 12 VS2091 3 000 coupures de membrane 48 VS2092 5 000 coupures de membrane 12 VS2011 5 000 coupures de membrane 48 VS2012 10 000 coupures de membrane 12 VS2001 10 000 coupures de membrane 48 VS2002 30 000 coupures de membrane 12 VS2021 30 000 coupures de membrane 48 VS2022 50 000 coupures de membrane 12 VS203 1 50 000 coupures de membrane 48 VS2032 100 000 coupures de membrane 12 VS2041 100 000 coupures de membrane 48 VS2042 300 000 coupures de membrane 12 VS2051 300 000 coupures de membrane 48 VS2052 1 000 000 coupures de membrane 12 VS2061 1 000 000 coupures de membrane 48 VS2062 0 2 pm 12 VS2071 0 2 pm 48 VS2072 Pack starter 12 VS20S1 2 de chaque 5 K 10 K 30 K 50 K 100 K 0 2 pm Accessoires du Vivaspin 20 Conditionnement Ref R gulateur de pression d air RPA 1 VCA002 Vanne de remplissage pour la t te de pression 1 VCA005 Reservoirs de diafiltration 12 VSA005 Connecteur femelle 1 VCAO10 Connecteur m le 1 VCAO11 Tube pneumatique OD de 4 mm 3 m 1 VCA012 T te de pression Vivaspin 20 1 VCA200 13 Sartorius Stedim Biotech GmbH August Spindler Strasse 11 37079 Goettingen Allemagne
6. 000 00 3 Sartorius Caract ristiques techniques et mode d emploi Vivaspin 6 et 20 ml A usage in vitro uniquement 5 2 a In 3 E Se E me D t 2 y g uns e 85032 539 16 Vivaspin 6 et 20 ml Introduction Conditions de stockage Dur e de vie Les colonnes a centrifuger d ultrafiltration Vivaspin doivent tre stock es a temp rature ambiante Les dispositifs doivent tre utilis s avant la date d expiration figurant sur l em ballage Introduction Les concentrateurs Vivaspin sont des dispo sitifs d ultrafiltration jetables destin s la concentration et ou la purification des chantillons biologiques Vivaspin 6 convient aux volumes d chantillons de 2 6 ml et le Vivaspin 20 aux volumes d chantillons de 20 ml maximum Les deux mod les int grent deux membranes verticales pour une vitesse in gal e Le Vivaspin 20 comprend un r servoir de diafiltration qui permet le retrait en une seule op ration des sels et autres micromol cules contaminantes ainsi qu un mode pres sion de gaz pour plus de souplesse et de rapidit de traitement Les concentrateurs se distinguent par leur design innovant brevet am ricain n 5 647 990 second brevet en instance leur facilit d utilisation leur rapidit et la r cuperation exceptionnelle du concentr Fonctionnement de la centrifugeuse Les concentrateurs Vivaspin s utilisent sur des rotors mobiles ou a angl
7. ale 122 mm 116 mm 125 mm avec la t te de pression Largeur 17 mm 30 mm Zonre active de la membrane 2 5 cm 6 cm Volume mort de la membrane lt 10 pl lt 20 pl Volume a but e fixe 30 pl 50 pl Mat riaux de construction Corps Polycarbonate Polycarbonate Cuve de filtrat Polycarbonate Polycarbonate Capuchon du concentrateur Polypropylene T te de pression Polypropylene Ac tal aluminium Membrane Tableau 2 Vitesse de centrifugation recommandee xg Poly thersulfone Poly thersulfone Vivaspin 6 Mobile A angle fixe Membrane max max 3 50 000 coupures de membrane PES 4 000 10 000 gt 100 000 coupures de membrane PES 4 000 6 000 Vivaspin 20 Centrifugeuse Pression centrifugation Rotor Mobile angle fixe Mobile 5 bars max Membrane max max max 3 50 000 coupures de membrane PES 5 000 8 000 3 000 gt 100 300 000 coupures de membrane PES 3 000 6 000 2 000 Volume a but e fixe comme dessin dans l outil de fraisage Ce volume peut varier selon P chantillon la concentration de l chantillon la temp rature de fonctionnement et le rotor de la centrifugeuse 7 Conseils d utilisation 1 D bit La vitesse de filtration varie selon plusieurs param tres tels que la coupure de mem brane la porosit la concentration de l chantillon la viscosit la force centrifuge et la temp rature I faut s attendre des dur es de rotation beau
8. coup plus longues pour des solutions initiales de plus de 5 de solides une temp rature de fonctionne ment de 4 C les d bits sont environ 1 5 fois plus lents qu 25 C Les solutions vis queuses comme la glyc rine 50 pren dront jusqu 5 fois plus de temps pour se concentrer que les chantillons dans des solutions tampons 2 Rin age pr alable Les membranes fix es sur les concentrateurs Vivaspin contiennent des traces de glyc rine et d acide de sodium Si ces dernierent affectent l analyse elles peuvent tre limi n es par rin age en remplissant le dispositif concentrateur avec une solution tampon ou de l eau d sionis e et en la faisant traverser par la membrane par centrifugation Elimi nez alors filtrat et concentr avant de traiter l chantillon Si vous ne souhaitez pas utili ser imm diatement le dispositif pr rinc conservez le au r frig rateur la surface de la membrane recouverte de tampon ou d eau Ne laissez PAS la membrane s cher 8 3 St rilisation des membranes en poly thersulfone Les membranes en poly thersulfone ne doivent pas tre auto clav es car les hautes temp ratures vont augmenter fortement les seuils de coupure des membranes Pour les st riliser utilisez une solution d ethanol 70 ou un m lange gazeux st rilisant 4 Compatibilit chimique Les concentrateurs Vivaspin sont destin s tre utilis s avec des fluides biologiques et
9. des solutions aqueuses Pour obtenir plus d informations sur la compatibilit chimique reportez vous au tableau 4 Performances Tableau 3a Performances Vivaspin 6 Temps min pour concentrer jusqu 30x 20 C Concentr r cup r en Rotor Mobile angle fixe de 25 Volume initial 6 ml 6 ml min R c min R c Cytochrome c 0 25 mg ml 12 400 MW 3 000 coupures de membrane PES 90 97 BSA 1 mg ml 66 000 MW 5 000 coupures de membrane PES 20 98 12 98 10 000 coupures de membrane PES 13 98 10 98 30 000 coupures de membrane PES 12 98 9 97 1gG 0 25 mg ml 160 000 MW 30 000 coupures de membrane PES 18 96 15 95 50 000 coupures de membrane PES 17 96 14 95 100 000 coupures de membrane PES 15 91 12 91 Particules de latex 0 004 en DMEM 10 FCS 0 055 pm 300 000 coupures de membrane PES 25 99 Particules de latex 0 004 en DMEM 10 FCS 0 24 pm 1 000 000 coupures de membrane PES 4 99 Levure 1 mg ml S Cerevisiae 0 2 um PES 4 97 3 97 9 Tableau 3b Performances Vivaspin 20 Temps min pour concentrer jusqu 30x 20 C Concentr r cup r en Mode Centrifugeuse Centrifugeuse De table Pression centrifugation Rotor Mobile angle fixe Pression Mobile de 25 Volume initial 20 ml 14 ml 10 ml 10 ml min Rec min Rec min Rec min Rec Cytochrome c 0 25
10. e fixe pouvant accueillir des tubes inferieurs coniques standard En une seule rotation les solutions peuvent tre concentrees a plus de 100 x Les chantillons sont g n ralement concen tr s de 10 30 minutes avec des r cup ra tions macromol culaires de plus de 95 La membrane longitudinale et la chambre de concentration canal troit assurent des conditions optimales pour des coulements crois s m me pour les solutions charg es de particules la force centrifuge cartant les particules et les solides de la membrane et les entra nant vers le fond du dispositif 2 Les macromolecules sont recueillies dans une poche imperm able pour cencentres entiere ment moul e sous la surface de la mem brane liminant ainsi le risque de s chage Fonctionnement par pressurisation Si aucune centrifugeuse ad quate n est dis ponible ou si un seul chantillon doit tre trait le Vivaspin 20 peut tre rempli jusqu 15 ml et mis sous pression pour obtenir une concentration Pour accelerer le traitement la pression peut tre associ e la force cen trifuge La pressionfugation convient particuli rement aux chantillons visqueux comme le s rum au traitement basse temp rature et une dur e de traitement minimale quipement n cessaire A utiliser avec la centrifugeuse 1 Centrifugeuse avec rotor mobile ou angle fixe minimum 25 2 Des pipettes Pasteur ou volume fixe pou
11. mg ml 12 400 MW 3 000 coupures de membrane PES 110 97 180 96 60 96 BSA 1 mg ml 66 000 MW 5 000 coupures de membrane PES 23 99 29 99 50 98 14 98 10 000 coupures de membrane PES 16 98 17 98 32 97 8 97 30 000 coupures de membrane PES 13 98 15 98 32 97 8 97 1gG 0 25 mg ml 160 000 MW 30 000 coupures de membrane PES 27 97 20 95 46 94 13 97 50 000 coupures de membrane PES 27 96 22 95 46 93 13 96 100 000 coupures de membrane PES 25 91 20 90 42 88 12 94 Particules de latex 0 004 en DMEM 10 FCS 0 055 pm 300 000 coupures de membrane PES 20 99 35 99 10 99 Particules de latex 0 004 en DMEM 10 FCS 0 24 pm 1 000 000 coupures de membrane PES 4 99 12 99 4 99 Levure 1 mg ml S Cerevisiae 0 2 um PES 15 95 5 95 20 95 2 95 10 Compatibilit chimique Tableau 4 Compatibilit chimique temps de contact de 2 heures Solutions PES Solutions PES Plage de pH compatible pH 1 9 Plage de pH compatible pH 1 9 Acide ac tique 25 OK Acide lactique 5 OK Ac tone 10 NO Mercapto thanol 10 mM OK Ac tonitrile 10 NO Methanol 60 Hydroxyde d ammonium 5 Acide nitrique 10 OK Hydroxyde d ammonium satur OK Phenol 1 Benzene 100 NO Tampon de phosphates 1 M OK n Butanol 70 OK Glycol polyethylenique 10 OK
12. r le d p t et le retrait de l chantillon Dispositif Support requis 15 ml 17 mm Y 50 ml 30 mm Y Vivaspin 6 Vivaspin 20 B A utiliser avec la pression Vivaspin 20 uniquement 1 T te de pression Vivaspin 20 ref VCA200 2 Vanne de remplissage pour la t te de pression ref VCA005 3 Regulateur de la pression d air R f VCA002 ou r gulateur quivalent utiliser avec la pression et la centrifugeuse 1 L ensemble du mat riel d crit sous les points et B ci dessus Equipement n cessaire Equipement n cessaire Vivaspin 6 Vivaspin 20 Centrifugeuse Type de rotor Mobile angle fixe Mobile A angle fixe Angle minimal du rotor 25 25 Pour des tubes inferieurs coniques de 50 ml 17 mm Cavite du rotor Accessoires de pression en option pour le Vivaspin 20 Pour des tubes inferieurs coniques de 15 ml 30 mm R gulateur de pression d air RPA avec indicateur de pression r gulateur vanne de s curit de surpression connecteur femelle et extension de 1 m tuyaux pneumatiques de 4 mm avec connecteurs m le et femelle et 1 m d un tube d entree de 6 mm Ref VCA002 Vanne de remplissage Ref VCAO05 T te de pression VS20 Ref VCA200 R cup ration du concentr Type de pipette volume fixe ou variable volume fixe ou variable Recommandation Embout fin pour chargement des gels Compatibilit du rotor Remarq
13. te de pression pour que le joint soit tanche Pair 5 Montez l ensemble dans un rack et effec tuez la concentration Ou pour un traitement plus rapide ins rez le concentrateur sous pression et mont dans la centrifugeuse et tournez voir le tableau 1 pour les vitesses de rotation 6 D s que la concentration souhait e est atteinte voir le tableau 3b pour conna tre les dur es de concentration retirez l en semble et diminuez la pression en d vissant le bouchon 7 Retirez le concentr l aide d une pipette Pasteur ou volume fixe Utilisation de la pression gazeuse avec Vivaspin 20 sa ES Mettre sous pression Insertion dans je tack Rotation ssh R cup ration Dessalage Changement de tampon 1 Concentrez l chantillon jusqu au niveau souhaite 2 Videz le reservoir de filtrat 3 Remplissez a nouveau le concentrateur a l aide d un solvant ad quat 4 Concentrez nouveau l chantillon et r p tez le processus jusqu a ce que la r duc tion de la concentration de microsolutes contaminants soit suffisante Habituelle ment trois cycles de lavage vont permettre de reduire de 99 la teneur en sels initiale Dessalage en une seule tape avec Vivaspin 20 Une seule tape suffit pour liminer les sels et les contaminants l aide du r servoir de dia filtration special fourni avec le Vivaspin 20 Cela est d a l action constante de
14. ue le Vivaspin 20 30 mm x 116 mm convient aux rotors pouvant accueillir des tubes inf rieurs coniques Falcon 50 ml tels que Beckman Allegra 25R avec le rotor rotatif TS 5 1 500 quip de godets BUC 5 et d adaptateurs 368327 rotor angle fixe Beckman TA 10 250 25 avec adaptateurs 356966 Heraeus Multifuge 3 S R avec rotor rotatif Heraeus Sorvall 75006445 godets 75006441 et adaptateurs pour les tubes inf rieurs coniques Falcon 50 ml Ces dispositifs ne sont pas con us pour les rotors ne pouvant accueillir que des tubes inf rieurs arrondis de 29 mm x 105 mm tels que le Sorvall SS34 et le Beckman JA 20 Si votre rotor n accepte que des tubes inf rieurs arrondis de 29 mm x 105 mm utilisez le Vivaspin 15 qui convient aussi bien aux tubes centrifugeurs coniques qu aux tubes inf rieurs arrondis Embout fin pour chargement des gels Fonctionnement Dans la centrifugeuse VS6 et 20 1 S lectionnez la coupure la plus ad quate de la membrane pour votre chantillon Pour une r cup ration maximale s lectionnez une coupure de membrane inferieure d au moins 50 a la taille mol culaire de l espere donn e 2 Remplissez le concentrateur jusqu aux volumes maximum indiques dans le tableau 1 V rifiez que le bouchon a vis est bien ferm 3 Ins rez l ensemble du concentrateur dans la centrifugeuse en cas d utilisation de rotors a angle fixe la face imprimee doit tre orient e vers le haut l
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