MODE D`EMPLOI
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1. 12 7 Effet crochet forte dose L effet crochet forte dose est un ph nom ne dans lequel des chantillons pr sentant une concentration tr s lev e peuvent appara tre dans la plage dynamique du dosage Pour le BIOHIT Active B12 holotranscobalamin EIA aucun effet crochet forte dose na t d tect avec deux chantillons et une concentration d environ 419 et 2 236 pmol L 12 8 R activit crois e Le BIOHIT Active B12 Holotranscobalamin est con u pour un cart maximum de lt 10 de la concentration dholotranscobalamine en pr sence d apotranscobalamine ou d haptocorrine Une tude a t men e sur la base du document EP7 A2 du CLSI Clinical and Laboratory Standards Institute Trois chantillons d holotranscobalamine dans la plage du dosage ont t compl t s avec 500 pmol L dapotranscobalamine ou 5000 pmol L dhaptocorrine L cart maximum de la concentration d holotranscobalamine tait compris entre 5 et 1 12 9 Interf rence Le BIOHIT Active B12 Holotranscobalamin est con u pour un cart maximum de lt 10 de la concentration d holotranscobalamine en pr sence de compos s potentiellement interf rents Une tude a t men e sur la base du document EP7 A2 du CLSI Clinical and Laboratory Standards Institute Des chantillons d holotranscobalamine dans la plage du dosage ont t compl t s avec les composants potentiellement interf rents num r s dans le tableau ci apr2. 5 Il convient de prot ger convenablement toute affection coupure ou raflure cutan e et autres l sions cutan es 6 Les talons les t moins le conjugu le pr traitement et le tampon de lavage concentr contiennent de l azide de sodium Celui ci peut r agir avec les tuyaux en plomb ou en cuivre et former des azides de m tal tr s explosifs Lors de l limination vider avec une grande quantit d eau pour viter toute accumulation d azide 7 La solution d arr t contient de hydroxyde de sodium viter tout contact avec la peau les yeux et les muqueuses Eponger tout d versement avec de grandes quantit s d eau En cas de contact avec la peau ou les yeux asperger abondamment avec de l eau et consulter un sp cialiste imm diatement 8 Les fiches de s curit associ es tous les composants dangereux contenus dans cette trousse sont disponibles sur demande aupr s de Biohit Oyj 9 Ce produit n cessite la manipulation d chantillons et de mat riaux d origine humaine et animale Il est recommand que tous les mat riaux d origine humaine et animale soient consid r s potentiellement infectieux et qu ils soient manipul s conform ment la norme OSHA sur le niveau 2 de bios curit des agents pathog nes diffusion h matog ne ou que d autres pratiques de bios curit appropri es soient utilis es pour les mat riaux qui contiennent ou contiendraient des agents infectieux E Solution R34 Provoque
3. S36 37 39 r cipient qu en prenant toutes les pr cautions d usage S46 Porter un v tement de protection appropri des gants et un dispositif de protection des yeux du visage En cas d ingestion consulter imm diatement un m decin et lui montrer l emballage ou l tiquette 5 CONTENU DE LA TROUSSE 5 1 Solution de conjugu Un flacon de 15 ml d anticorps monoclonal murin marqu la phosphatase alcaline sp cifique la transcobalamine humaine dans un tampon Tris avec stabilisateur de prot ines Conservateur lt 0 1 p v d azide de sodium Pr t l emploi 5 2 Solution substrat 6089 06 O Un flacon de 15 ml de paranitroph ny phosphate pNPP solution tampon Pr t l emploi Ne pas exposer la lumi re pendant la conservation N B NOCIF 5 3 Solution d arr t pror Ed Un flacon de 15 ml d hydroxyde de sodium 1M pH gt 10 Pr t l emploi N B CORROSIF 5 4 Tampon de lavage concentr x Deux flacons de 25 ml de tampon phosphate Conservateur 0 72 p v d azide de sodium Diluer avant l emploi N B NOCIF 5 5 Microplaque Barrettes d tachables de microplaque a 12 x 8 puits enrob es d anticorps monoclonal murin anti holotranscobalamine sous emballage refermable en feuille d aluminium avec dessiccatif 5 6 Solution a blanc BLANK Un flacon d ml de tampon phosphate avec stabilisateur de prot ines bovines 5 7 Etalons CAL 1 5 Cinq flacons
4. s L cart maximum de la concentration dholotranscobalamine tait compris entre 10 et 8 15 Tableau 4 Liste des composants interf rents Substance potentiellement On n a pas d cel d interf rence interf rente la concentration suivante H moglobine 500 mg dL Bilirubine 30 mg dL Triglyc ride solution intralipide 3 000 mg dL Facteur rhumatoide 7 500 IU dL Prot ine totale 9 000 mg dL 13 GARANTIE Biohit est tenu de rem dier a tout d faut d couvert dans un produit quel qu il soit le Produit d fectueux r sultant de l emploi de composants inappropri s ou d une qualit de fabrication n gligente qui emp che le fonctionnement ou l utilisation pr vue du produit y compris mais pas uniquement les fonctions indiqu es parmi les sp cificit s des produits tablies par Biohit CEPENDANT LA PR SENTE GARANTIE N EST PAS APPLICABLE SI LE D FAUT A T CAUSE PAR UNE UTILISATION IMPROPRE OU ABUSIVE DU PRODUIT UN DOMMAGE ACCIDENTEL UNE CONSERVATION INCORRECTE OU ENCORE L UTILISATION DU PRODUIT POUR DES OPERATIONS HORS DES LIMITATIONS OU CARACTERISTIQUES OU CONTRAIRES AUX INSTRUCTIONS FOURNIES PAR CE MODE D EMPLOI La p riode de garantie est d finie dans le mode demploi et prend effet compter de la date d exp dition du Produit par Biohit Ce coffret de diagnostic Biohit a t fabriqu conform ment aux protocoles de gestion de la qualit d finis par la norme ISO 90
5. le nombre de barrettes de microplaque n cessaires pour le dosage en cours et les maintenir dans le support pour barrettes de microplaque Remettre les barrettes en trop dans l emballage refermable en aluminium avec le dessiccatif et conserver celui ci entre 2 et 8 C jusqu la prochaine utilisation V rifier que toutes les barrettes sont bien maintenues dans le support pour barrettes de microplaque II se peut que les utilisateurs souhaitent num roter chaque barrette dans le coin sup rieur pour les aider l identification Garder le support pour barrettes de microplaque en vue d utilisations ult rieures Pr parer chaque chantillon avant le dosage en ajoutant le pr traitement l chantillon dans un rapport de 1 1 par exemple 150 uL d chantillon plus 150 uL de pr traitement Les chantillons pr trait s et munis d un couvercle peuvent tre conserv s entre 2 et 8 C pendant 24 heures avant le dosage 10 2 Protocole de dosage 1 Puits de r f rence pour identification 2 Pipeter 100 uL d talons en double de t moins de la trousse en double et d chantillons patients pr trait s 50 50 en double dans les puits appropri s Ne pas oublier de changer d embouts de pipettes entre les diff rents ajouts Cette tape ne doit pas durer plus de 15 minutes 3 Incuber 60 10 minutes entre 18 et 25 C D canter le contenu des barrettes par inversion rapide au dessus d un vier adapt l limination des mat ri
6. pmol L 11 2 Contr le qualit Veiller ce que l entretien et etalonnage du lecteur de microplaque soient effectu s conform ment aux instructions du fabricant et que la bonne longueur d ondes 405 nm et le bon algorithme d ajustement des courbes r gression lin aire soient appliqu s Les utilisateurs doivent veiller respecter strictement les instructions relatives ce dosage en particulier celles contenues dans les sections Mises en gardes et pr cautions et Remarques relatives la manipulation et l utilisation Avant de communiquer les r sultats des tests des patients l utilisateur doit d montrer qu il peut obtenir des caract ristiques de performance en termes de pr cision et une plage de validit des r sultats de test comparables ceux tablis par le fabricant Les kits de t moins faible et lev pr ts l emploi doivent tre lanc s en double pour tous les dosages afin de suivre la qualit de la proc dure de test En supposant que les sp cifications de pr cision d crites par le fabricant sont respect es si un t moin ne respecte pas les sp cifications des t moins ci dessous le dosage s av re non valable et il ne faut pas communiquer les r sultats du patient L utilisateur peut r p ter le dosage apr s avoir examin sa proc dure ou contact le distributeur fabricant En cas de nouveau dosage pr parer une autre dilution de chaque chantillon Il se peut que les laboratoires souhaitent inclu
7. une nuit lt 16 heures 6 Les chantillons peuvent tre stock s une temp rature comprise entre 2 et 8 C sur caillot pendant un maximum de 3 jours ou hors caillot pendant quatre semaines pour un stockage sur des p riodes prolong es les chantillons doivent tre stock s hors caillot 20 C jusqu 6 mois 7 Pr parer chaque chantillon avant le dosage en ajoutant le pr traitement l chantillon dans un rapport de 1 1 par exemple 150 uL d chantillon plus 150 uL de pr traitement Les chantillons pr trait s et munis d un couvercle peuvent tre conserv s entre 2 et 8 C pendant 24 heures avant le dosage 10 PROC DURE DE TEST 10 1 Pr paration Pr paration au dosage Laisser tous les composants de la trousse y compris les barrettes de microplaque passer entre 18 et 25 C pendant 30 60 minutes avant l emploi M langer les r actifs par une inversion en douceur Lorsqu il est conserv entre 2 et 8 C le tampon de lavage subit une pr cipitation cristaux ventuellement visibles Avant de le diluer dans l eau laisser le tampon atteindre la temp rature ambiante peut tre plac dans un incubateur 37 le cas ch ant pour acc l rer le processus jusqu ce qu AUCUNE pr cipitation ne soit visible l il nu Diluer le r actif suivant et bien m langer R actif Volume Ajouter Tampon de lavage concentr x 8 distill e d sionis e 1 flacon 175 ml d eau Calculer
8. 0 1 8 3 10 0 1 61 2 6 3 6 4 2 58 8 45 8 9 Contr le gt 1 50 3 6 3 8 1 lev 2 50 2 5 9 8 4 7 1 52 2 7 7 9 2 2 50 8 5 8 8 5 14 12 4 Limite du blanc Dans une tude repr sentative les d terminations de la Limite du blanc ont t r alis es l aide de deux chantillons d holotranscobalamine faible niveau et de deux lots de r actifs 120 dosages par lot de r actif ll a t d termin que la Limite du blanc de BIOHIT Active B12 holotranscobalamin EIA tait de 4 9 pmol L arrondie a 1 chiffre apr s la virgule 12 5 Limite de d tection Dans une tude repr sentative les d terminations de la Limite de d tection ont t r alis es l aide de cing chantillons d holotranscobalamine a faible niveau et de deux lots de r actifs 120 dosages par lot de r actif lla t d termin que la Limite de d tection de BIOHIT Active B12 holotranscobalamin EIA tait de 8 1 pmol L arrondie jusqu 1 chiffre apr s la virgule 12 6 Limite de quantification sensibilit fonctionnelle Les d terminations de la Limite de quantification ont t r alis es l aide de cinq chantillons d holotranscobalamine faible niveau et de deux lots de r actifs 120 dosages par lot de r actif Il a t d termin que la Limite de quanti fication de BIOHIT Active B12 holotranscobalamin EIA tait de 8 3 pmol L arrondie 1 chiffre apr s la virgule
9. 01 ISO 13485 En cas de litiges c est la version anglaise du texte qui s applique 14 INFORMATION CONCERNANT LA COMMANDE BIOHIT Active B12 Holotranscobalamin Cat No 602 290 15 DATE DE PUBLICATION BIOHIT Active B12 Holotranscobalamin Version 01 October 2014 16 16 R F RENCES 1 10 11 12 Nexo E Hvas AM Bleie et al Holo transcobalamin is an early marker of changes in cobalamin homeostasis A randomized placebo controlled study Clin Chem 2002 48 10 1768 71 Valente E Scott JM Ueland PM et al Diagnostic accuracy of holotranscobalamin methylmalonic acid serum cobalamin and other indicators of tissue vitamin B12 status in the elderly Clin Chem 201 1 57 6 856 863 Nexo E Hoffmann Lucke E Holotranscobalamin a marker of vitamin B12 status analytical aspects and clinical utility Am J Clin Nutr 201 1 94 1 359S 365S Obeid R Jouma M Hermann W Cobalamin status holotranscobalamin methylmalonic acid and folate as determinants of homocysteine concentration Clin Chem 2002 48 11 2064 5 Herrmann W Schorr H Obeid R et al Vitamin B12 status particularly holotranscobalamin ll and methylmalonic acid concentrations and hyperhomocysteinemia in vegetarians Am J Clin Nutr 2003 78 131 6 Lloyd Wright 2 Hvas A M Moller J et al Holotranscobalamin as an indicator of dietary vitamin B12 deficiency Clin Chem 2003 49 12 2076 8 Refsum H Yajnik CS Gadkari M et al Hyperhomocysteinemia and elevated methyl
10. BIOHIT ACTIVE B12 HOLOTRANSCOBAL AMIN MODE D EMPLOI A REF 602 290 C MODE D EMPLOI Fran ais BIOHIT Active B12 Holotranscobalamin N de cat 602290 ls INDIGATION EE 4 2 INTRODUCTION cn A Port lente ln De dt 4 3 PRINCIPE D DOS ADE rc AT bere muets nono 4 4 MISES EN GARDE ET PR CAUTIONS 5 gt CONTENU DE LA TROUSS Essonne A mena 6 DE SOON AE CO UE ed ee ge 6 B 2 Solution SUbSt iii tn 6 O MS TT 7 5 4 Tampon de lavage CONC EE 7 5 5 MICtOplaque A AA 7 5 6 SOON a blanc aladas 7 A A a ae ease Ras Anantha aie a 7 5 8 T MOINS ssh faints A PAE SO Aes md ed pee Sa Re TRE 7 5 9 Solution EU ss 7 DR DRETTEN H 6 MATERIEL EQUIPEMENT N CESSAIRE MAIS NON FOURNI 7 EN TANDARDISA TON DEE 8 8 CONSERVATION ET STARTE 8 8 1 Stabilit d la trouss ET 8 8 2 Stabilit de la trousse non ouverte EE 8 8 3 Remarques relatives la manipulation et Putilisation 8 8 4 Signes de d t rloration i 2 s sentiment minime AE EENS asie 8 9 RECUEIL ET CONSERVATION DES CHANTILLONS enr 9 10 PROC DURE E ee ie manne tale 9 UN Wee e TEE 9 10 2 Protocole de dOSage EE 10 1i RESULTATS nee eget ca a ae cs un Se 10 IR a ee elle TE 10 11 2 Contr l qualit EE 11 113 Valeurs attendues eau 12 12 CARACT RISTIQUES DE PERFORMANCE eee 12 12 1 Lin arit de li ea deed ait SC de kaos oa ot Ne nn Lo ARE eue 12 12 2 Exactitude t ss22 ste Ai 12 12 3 Bee E 13 12 4 Limit du blanc Sas eee M
11. R EEE ne NE ee te A An ey 15 12 5 Limite de d tection eee etat en NEE ENEE aa EENS 15 12 6 Limite de quantification sensibilit fonctionnelle 2 0 eee eeeseeeeeeeeeseeeeeeeeeeaeeeeaeeseaeeeeaeeeeaeeseaeeseneeseeeeeeed 15 12 7 Effet crochet a forte dose 52 55 urnes nt a EA ergi A 15 12 8 R activit Crois e SLOT 15 RA Rn le 15 IRAETA CR 16 14 INFORMATION CONCERNANT LA COMMANDE inner 16 15 DATE DE PUBLICATIO N KK 16 TO REFERENCES Ps e do ann ter 17 1 INDICATIONS Le test BIOHIT Active B12 Holotranscobalamin est un test immuno enzymatique EIA destin la d termination quantitative de l holotranscobalamine HoloTC dans le s rum humain LHoloTC vitamine B12 li e la transcobalamine est utilis e pour faciliter le diagnostic et le traitement de la carence en vitamine B12 2 INTRODUCTION Trois prot ines de liaison sont impliqu es dans le transport de la vitamine B12 dans l organisme le facteur intrins que Fl la transcobalamine TC et l haptocorrine HC Ces prot ines garantissent la fixation efficace des tr s petites quantit s de vitamine B12 d origine alimentaire Lorsque la TC et HC lient la vitamine B12 les complexes qui en r sultent sont connus sous les noms d holotranscobalamine HoloTC et d holohaptocorrine HoloHC afin de les distinguer des prot ines ne transportant aucune vitamine L HoloHC repr sente 70 90 de la vitamine B12 pr sente dans le sang mais elle est biologiquement iner
12. aux biologiques en gardant l esprit le risque infectieux potentiel des chantillons Bien s cher les barrettes retourn es avec des serviettes en papier Ne pas laver 5 Ajouter 100 uL de conjugu chacun des puits 6 Incuber 35 5 minutes entre 18 et 25 C 7 D canter le contenu des barrettes par inversion rapide au dessus d un vier adapt l limination des mat riaux biologiques Bien s cher les barrettes retourn es avec des serviettes en papier 8 Laver les puits cing fois avec au moins 250 uL de tampon de lavage dilu D canter et s cher apr s chaque ajout de lavage 9 Ajouter 100 uL de substrat chacun des puits 10 Incuber 30 5 minutes entre 18 et 25 C Ne pas d canter 11 Ajouter 100 uL de solution d arr t chacun des puits dans le m me ordre et au m me d bit que le substrat Tapoter doucement les puits pour m langer 12 Lire les barrettes a 405 nm Lire le dosage 120 minutes maximum apr s ajout de la solution d arr t 11 R SULTATS 11 1 Calcul et interpr tation Tracer la valeur moyenne d absorbance de chaque talon sur l axe y par rapport la concentration correspondante en pmol L sur l axe x LES CONCENTRATIONS DES ETALONS SONT INDIQU ES SUR LES TIQUETTES DES FLACONS DES VALEURS DE CONCENTRATION SONT ATTRIBU ES CHAQUE LOT D ETALONS ET PEUVENT VARIER D UN LOT L AUTRE La concentration pmol L de chaque chantillon peut tre calcul e en localisant le point d
13. d 1 ml de tampon phosphate avec stabilisateur de prot ines bovines contenant de HoloTC Conservateur lt 0 1 p v d azide de sodium Pr t l emploi Ne pas exposer la lumi re pendant la conservation VOIR L TIQUETTE DES FLACONS POUR LES CONCENTRATIONS 5 8 T moins CONTROL CONTROL HIGH Un flacon de t moin bas et un flacon de t moin haut 1 ml de tampon phosphate avec stabilisateur de prot ines bovines contenant de l HoloTC Conservateur lt 0 1 p v d azide de sodium Pr t l emploi Ne pas exposer la lumi re pendant la conservation 5 9 Solution de pr traitement Un flacon de 25 mL de tampon citrate Conservateur lt 0 1 p v d azide de sodium Pr t l emploi 5 10 Mode d emploi 6 MAT RIEL QUIPEMENT N CESSAIRE MAIS NON FOURNI 1 Lecteur filtre 405 nm pour barrette microplaque 96 puits 2 Pipette s de pr cision d livrant 100 uL Distributeur 8 canaux ou similaire pour distribuer environ 250 300 uL pour lavage manuel 3 Eprouvette gradu e pied en verre plastique 1x200 ml 4 Eau distill e d sionis e 5 Serviettes en papier 6 Minuteur pour intervalles de 30 35 et 60 minutes 7 STANDARDISATION l heure actuelle il n existe aucune m thode et aucun mat riau de r f rence reconnus l chelle internationale pour la standardisation Les talons BIOHIT Active B12 holotranscobalamin sont conformes aux talons de r f rence internes qui on
14. des br lures d arr t S26 En cas de contact avec les yeux laver imm diatement et abondamment CORROSIF avec de l eau et consulter un sp cialiste S36 37 39 Porter un v tement de protection appropri des gants et un dispositif S45 de protection des yeux du visage En cas d accident ou de malaise consulter imm diatement un m decin si possible lui montrer l tiquette Nocif par inhalation par contact avec la peau et par ingestion Irritant pour la peau R20 21 22 SEENEN R38 Peut entra ner une sensibilisation par contact avec la peau Ne pas respirer les fum es R43 gt lt Bon Eviter tout contact avec la peau Substrat 504 Apr s contact avec la peau laver imm diatement avec beaucoup d eau G Ne pas jeter les r sidus l gout ne se d barrasser de ce produit et de son Geet r cipient ou en prenant toutes les pr cautions d usage Porter un v tement de protection appropri des gants et un dispositif de protection S36 37 39 x uE des yeux du visage En cas d ingestion consulter imm diatement un m decin et lui montrer l emballage NOCIF ou l tiquette Tampon R22 Nocif en cas d ingestion de lavage R32 Au contact d un acide d gage un gaz tr s toxique concentr R52 53 Nocif pour les organismes aquatiques peut entra ner des effets n fastes long x8 terme pour l environnement aquatique S29 35 Ne pas jeter les r sidus l gout ne se d barrasser de ce produit et de son
15. e 2 et 8 C entre chaque utilisation 7 Remettre les barrettes de microplaque en trop inutilis es dans l emballage en aluminium avec le dessiccatif V rifier que l emballage est bien ferm et conserver nouveau entre 2 et 8 C jusqu la prochaine utilisation Ne pas exposer les talons les t moins ou le substrat la lumi re pendant la conservation viter de contaminer les r actifs Utiliser un nouvel embout de pipette jetable lors de chaque manipulation de r actif ou d chantillon 8 4 Signes de d t rioration Le substrat doit tre incolore jaune clair Une couleur jaune fonc est signe de contamination et il faut jeter le r actif Les turbidit s ou pr cipit s de tout composant indiquent une d t rioration et il faut alors jeter le composant 9 RECUEIL ET CONSERVATION DES CHANTILLONS Le dosage est recommand pour utilisation sur le s rum humain dont les tubes avec gel s parateur de s rum Ne pas utiliser d chantillons grossi rement h molys s ou turbides Bien m langer les chantillons d congel s avant dosage et viter de congeler d congeler r p tition E a Les chantillons peuvent subir 3 cycles de cong lation d cong lation Les chantillons d congel s doivent tre centrifug s 210 000g pendant 5 minutes avant le dosage 5 Il convient de ne pas soumettre les chantillons sur ou hors caillot une temp rature sup rieure la temp rature ambiante pendant plus d
16. e corr lation r Pearson IC de 95 0 93 0 90 0 95 12 3 Pr cision 7 chantillons de s rum humain ont t dos s l aide de 3 lots de r actifs Les chantillons ont t dos s par 2 utilisateurs en r alisant huit r plicats une fois par jour pendant 5 jours n total 80 Les donn es de cette tude sont synth tis es dans le tableau suivant 13 Tableau 3 Donn es de pr cision chantillon n Lot Utilisateur e CV intra dosage CV total 1 17 8 7 5 8 2 2 17 5 3 1 9 3 1 20 1 6 0 6 6 de GI 2 20 3 6 9 9 2 3 1 19 1 5 5 8 0 2 18 9 85 11 0 1 21 8 5 5 9 9 2 21 8 3 9 7 5 1 22 6 5 6 8 7 2A St 2 23 5 9 0 10 3 S 1 23 9 7 0 10 2 2 23 2 5 8 8 9 1 28 8 3 8 7 8 2 30 7 4 3 9 6 1 31 0 6 8 8 0 SA 80 2 2 31 4 43 6 1 a 1 31 5 4 5 6 4 2 32 2 4 0 9 2 1 49 3 3 9 74 2 52 6 41 6 7 1 50 8 5 6 10 0 LA CIE 2 51 7 4 7 5 9 a 1 52 6 4 6 4 8 2 55 0 5 5 6 1 P 1 68 4 4 0 7 6 2 73 2 37 7 5 1 74 8 4 3 8 2 Sc SA 2 75 9 46 6 4 S 1 75 1 4 4 7 9 2 76 3 4 9 6 2 F 1 115 9 42 5 9 2 121 1 3 6 7 0 1 123 2 43 10 2 a 804 2 2 124 0 42 6 4 A 1 127 0 48 10 1 2 129 5 32 5 6 1 23 7 94 10 9 2 23 8 5 1 11 5 Contr le 1 20 0 6 0 7 5 faible 2 18 6 5 8 8 5 A 1 20 3 8 3 9 7 2 2
17. e la courbe qui correspond la valeur moyenne d absorbance de l chantillon et en lisant la concentration correspondante en pmol L sur l axe x Cette proc dure peut tre ex cut e manuellement l aide d une feuille millim tr e ou d un lecteur de microplaque dont le logiciel est capable de mener bien des proc dures dajustement de courbe En cas d utilisation d un lecteur de microplaque avec logiciel interne un algorithme d ajustement de courbe par r gression lin aire doit tre utilis Une courbe d talonnage type Figure 1 est illustr e ci dessous des fins de r f rence Elle ne doit pas tre utilis e pour interpr ter des r sultats Les chantillons dont les concentrations sont sup rieures 128 pmol L se situent hors de la plage du dosage et doivent tre enregistr s comme gt 128 pmol L Les r sultats ne doivent pas tre extrapol s Chaque replicat d chantillon d viant de moins de 20 peut tre utilis pour indiquer l acceptabilit du dosage 10 Courbe d talonnage type E un Nu o H S bd Be 2 st 80 100 120 140 160 Concentration des talons pmol L Figure 1 Courbe d talonnage type du test BIOHIT Active B12 holotranscobalamin Unit de mesure L unit de mesure pour le test BIOHIT Active B12 holotranscobalamin est la suivante pmol L Plage de mesure plage de validit La plage de mesure du dosage est la suivante 10 pmol L 128
18. inique et de facteurs g ographiques alimentaires ou environnementaux 12 CARACT RISTIQUES DE PERFORMANCE Donn es repr sentatives les r sultats des diff rents laboratoires peuvent diff rer 12 1 Lin arit de dilution partir d une tude men e sur la base du document EP6 A du CLSI le BIOHIT Active B12 Holotranscobalamin EIA a d montr une lin arit de 5 3 156 0 pmol L arrondie 1 chiffre apr s la virgule les r sultats des diff rents laboratoires peuvent diff rer 12 2 Exactitude Une tude de corr lation a t r alis e sur des chantillons de s rum pr lev s sur des adultes visiblement en bonne sant Tous les chantillons ont t analys s l aide du BIOHIT Active B12 Holotranscobalamin EIA UI Les et un dosage de l holotranscobalamine disponible dans le commerce selon le document EP9 A2 du CLS concentrations des chantillons allaient de 13 8 112 8 pmol L Les valeurs statistiques acquises sont affich es dans le tableau 2 12 Tableau 2 BIOHIT Active B12 holotranscobalamin EIA versus un test disponible dans le commerce BIOHIT Active B12 Holotranscobalamin EIA versus un test disponible dans le commerce Nombre d chantillons 111 Pente de la courbe de r gression r gression de Passing Bablok IC 0 95 0 89 1 01 de 95 Point d intersection avec l axe y r gression de Passing Bablok IC de 8 39 5 73 11 77 95 Coefficient d
19. malonic acid indicate a high prevalence of cobalamin deficiency in Asian Indians Am J Clin Nutr 2001 74 233 41 Refsum H Smith AD Low Vitamin B12 status in confirmed Alzheimer s disease as revealed by serum holotranscobalamin J Neurol Neurosurg Psychiatry 2003 74 959 61 Chen X Remacha AF Sarda MP er al Influence of cobalamin deficiency compared with that of cobalamin absorption on serum holo transcobalamin 11 Am J Clin Nutr 2005 81 110 14 The National Committee for Clinical Laboratory Standards NCCLS Evaluation of the Linearity of Quantitative Measurement Procedures A Statistical Approach Approved Guideline NCCLS document EP6 A Wayne PA NCCLS 2003 The National Committee for Clinical Laboratory Standards NCCLS Method Comparison and Bias Estimation Using Patient Samples Approved Guideline Second Edition NCCLS Document EP9 A2 Wayne PA NCCLS 2002 Clinical and Laboratory Standards Institute CLSI Interference Testing in Clinical Symbols 17 Dispositif m dical de diagnostic in vitro Num ro de r f rence Lot 96 tests Attention Consulter le mode d emploi Prot ger de la lumi re utiliser avant Conserver entre 2 et 8 C Ne pas r utiliser Si ge principal BIOHIT OYJ Laippatie 1 00880 Helsinki Finland Tel 358 9 773 861 Fax 358 9 773 86200 E mail info biohit fi www biohithealthcare com 400920 01 CONTROL LOW CONTROL HIGH BLANK O O Sp 3 EE R us T m
20. oin bas T moin haut Conjugu Substrat Solution d arr t Pr traitement Tampon de lavage concentr x8 T moin talons 1a5 Corrosif Nocif 18
21. r t observ s chez les patients atteints de la maladie d Alzheimer compar s aux taux du groupe t moin 5810 Les taux d HoloTC refl tent le statut de la vitamine B12 ind pendamment de l absorption r cente de la vitamine 3 PRINCIPE DU DOSAGE Les puits de microtitrage sont recouverts d un anticorps monoclonal tr s sp cifique pour la B12 active Holotranscobalamin Au cours de la premi re incubation l holotranscobalamine du s rum se lie sp cifiquement la surface recouverte d anticorps Durant la deuxi me incubation le conjugu se lie l holotranscobalamine captur e On lave ensuite les puits pour liminer les composants non li s L holotranscobalamine li e est d tect e par incubation avec le substrat L ajout de solution d arr t arr te la r action ce qui donne un produit fini color La concentration de l holotranscobalamine en pmol L est directement li e la couleur g n r e et peut tre estim e par interpolation partir d une courbe dose r ponse tablie sur la base d talons 4 MISES EN GARDE ET PR CAUTIONS 1 N utiliser que pour le diagnostic in vitro Pr cautions d emploi 2 Il est imp ratif de se conformer strictement ce mode d emploi en particulier en ce qui concerne la manipulation et les conditions de conservation Ne pas pipeter la bouche Ne pas fumer manger boire ou appliquer de cosm tiques dans les zones o les trousses et les chantillons sont manipul s
22. re des t moins internes chaque cycle de dosage Conserver un tel mat riel de t moin 20 ou moins et viter les cycles de cong lation d cong lation r p tition Les conservateurs tels que l azide de sodium lt 0 1 p v n influent pas sur les r sultats de l chantillon Les plages de r f rence et les seuils appropri s doivent tre calcul s pour les populations sp cifiques couvertes par les utilisateurs 11 Tableau 1 Sp cifications des t moins bas et haut Sp cifications des t moins T moin bas T moin haut Moyenne de double 15 35 pmol L 36 84 pmol L 11 3 Valeurs attendues 135 chantillons s riques issus de donneurs asymptomatiques apparemment sains g s de 18 75 ans comprenant approximativement le m me nombre d hommes n 65 et de femmes n 70 ont t test s avec le BIOHIT Active B12 holotranscobalamin EIA La concentration Active B12 holotranscobalamin globale moyenne pour cette population tait de 72 pmol L plage de 15 a 147 pmol L Sur la base des donn es de cette population de r f rence la plage de r f rence intervalle de confiance a 95 est Plage de r f rence 21 123 pmol L Cette plage de r f rence a seulement valeur de recommandation et chaque laboratoire doit tablir sa propre plage de r f rence susceptible d tre sp cifique la population qu il dessert en fonction des patients de la pratique cl
23. t fait l objet d une assignation de valeur unique 8 CONSERVATION ET STABILIT 8 1 Stabilit de la trousse ouverte Une trousse a t ouverte et r utilis e trois reprises sur une p riode de trois mois sans effet ind sirable sur la performance de la trousse Apr s utilisation les composants doivent tre de nouveau stock s une temp rature comprise entre 2 et 8 C 8 2 Stabilit de la trousse non ouverte Entre 2 et 8 C les composants non ouverts sont stables tant que les conditions indiqu es sur les tiquettes sont maintenues 8 3 Remarques relatives la manipulation et l utilisation 1 Les composants de la trousse doivent tre conserv s une temp rature comprise entre 2 et 8 C Leur utilisation est autoris e jusqu la date de p remption indiqu e sur l tiquette Ne pas utiliser de r actifs dont la date de p remption est d pass e 2 Chaque lot de r actifs et d talons a t normalis pour produire la r action appropri e Ne pas intervertir les r actifs ou les talons entre les lots Les concentrations des talons sont indiqu es sur les tiquettes des flacons et peuvent varier entre les lots Ne pas congeler les trousses Le tampon de lavage concentr doit tre dilu avant l emploi Tous les autres r actifs sont pr ts l emploi 9 OL 25 709 Le tampon de lavage dilu est stable pendant au moins 3 mois en l absence de contamination microbienne Le conserver entr
24. te L HoloTC n en repr sente que 10 30 mais elle est la seule forme de vitamine B12 qui puisse tre absorb e par les cellules de l organisme Seule la prot ine TC transporte la vitamine B12 de son site d absorption dans l il on vers les tissus et les cellules La vitamine est alors internalis e sous forme de complexe HoloTC vitamine B12li e la transcobalamine via une absorption sp cifique m di e par r cepteur Ce processus fournit la vitamine B12 comme co enzyme pour les fonctions cellulaires essentielles telles que la synth se de l ADN tant donn que HoloTC a une demi vie de circulation plus courte que l HoloHC une carence en vitamine B12 se traduira tr s probablement d abord par une diminution du taux s rique de HoloTC La mesure de la vitamine B12 s rique totale comporte certaines limites en particulier la majeure partie de la cobalamine mesur e est li e PHC biologiquement inerte Plusieurs tudes publi es concluent que HoloTC serait un meilleur indicateur du statut de la vitamine B12 que la B12 s rique totale Comme l on pouvait s y attendre les taux d HoloTC sont faibles chez les patients pr sentant des signes biochimiques de carence en vitamine B124 Des valeurs peu lev es ont t rapport es chez les v g tariens les v g taliens et dans les populations o les apports en vitamine B12 sont faibles De faibles taux d HoloTC mais pas de B12 s rique totale ont en particulie
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