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PROGENSA PCA3 Assay Package Insert

1. F r die Reproduzierbarkeit wurde ein Testpanel mit 8 Elementen die gepoolte Proben 1 bis 3 und verd nntes in vitro RNA Transkript 4 bis 8 umfassten hergestellt Drei Bediener testeten das Panel in 18 L ufen ber 3 Tage unter Einsatz einer einzigen Kalibrator und Kontrollencharge 3 Reagenzchargen und 3 Ger tes tzen In Tabellen 11 und 12 werden die Gesamtpr zision Pr zision innerhalb eines Laufs und zwischen L ufen Bediener Ger te und Chargenpr zision des Progensa PCA3 Assays f r Analyt c mL und f r den PCA3 Score zusammengefasst Die Variabilit t innerhalb eines Laufs zwischen Bedienern und zwischen L ufen waren in absteigender Reihenfolge die gr ten beitragenden Faktoren zur Assay Gesamtvarianz Die Reagenzcharge und die Ger te trugen wenig zur Assay Gesamtvarianz bei Diese Ergebnisse zeigen dass der Progensa PCAS3 Assay eine reproduzierbare Leistung hat und dass die prim re Variationsquelle Zufallsfehler ist innerhalb eines Laufs Progensa PCA3 Assay 40 501377DE Rev 001 Proge nsa PCA3 Leistungsmerkmale Tabelle 11 Reproduzierbarkeit des Progensa PCA3 Assays Kopie mL Analyse VK Panel Gemessene Gesamt MMer A NR NR AR Analyt n halb zwischen zwischen zwischen zwischen probe cmi VK eines L ufen Bedienern Ger ten Chargen Laufs 1 36 248 27 24 7 15 11 0 2 36 7021 11 6 9 9 0 0 3 36 31 469 8 6 5 9 0 4 PCA3 4 36 1469 15 13 7
2. C f r die Dauer von 5 2 Minuten transferieren Entfernen Sie w hrend der St nder im Wasserbad ist vorsichtig die Abdeckfolie und geben Sie mit dem Wiederholungspipettierer 25 uL des rekonstituierten Enzymreagenzes zu jeder der Reaktionsmischungen hinzu Alle Reaktionsmischungen sollten nun orangefarben sein Bedecken Sie die R hrchen sofort mit einer frischen Abdeckfolie nehmen Sie den St nder aus dem Wasserbad und mischen Sie die Reaktionsl sungen schnell indem Sie den St nder vorsichtig von Hand sch tteln Hinweis Der St nder sollte nur eine m glichst kurze Zeitspanne aus dem Wasserbad entfernt werden damit die R hrchen sich nicht abk hlen Inkubieren Sie den St nder 60 5 Minuten bei 42 C 1 C Il Post Amplifikation Der bei der Hybridisierung und Selektion verwendete Wiederholungspipettierer sollte nur f r diese Schritte verwendet werden siehe Warnhinweise und Vorsichtsma nahmen Die Umgebung f r die Schritte nach der Amplifikation einschlie lich Detektion muss eine Temperatur von 15 C bis 30 C haben Bei Verwendung des SB100 Dry Heat Bath Vortexers siehe die SB100 Anwendungshinweise 1 Hybridisierung a Entfernen Sie den St nder aus dem Pr amplifikationswasserbad und berf hren Sie ihn in den Bereich f r die Schritte nach der Amplifikation Geben Sie mit dem Wiederholungspipettierer 100 uL des rekonstituierten analytspezifischen Sondenreagenzes hinzu Alle Reaktionsmischungen sollten je
3. bersicht listet m glicherweise keine Ausnahmen auf In diesen F llen sind keine weiteren Ma nahmen erforderlich Wenn in der Ausnahmen bersicht eine Probe bzw Proben f r aufeinanderfolgende L ufe in denen beide Analytl ufe g ltig sind aufgelistet werden schlagen Sie weitere Anweisungen in Tabelle 4 nach F r einzelne Analytl ufe schlagen Sie in Auswertung von Status und Analysecodes nach In aufeinanderfolgenden L ufen bei denen ein Analytlauf ung ltig ist wiederholen Sie den Test des ung ltigen Laufs n here Informationen siehe Wiederholungstest und behandeln die Ergebnisse so als ob einzelne Analytl ufe durchgef hrt worden w ren Eine manuelle Anpassung ist dann erforderlich Eine Probe kann als ung ltig ausgewiesen werden obwohl die einzelnen R hrchen Replikate als g ltig ausgewiesen sein k nnen Die Probenvalidit t wird durch das kombinierte Ergebnis der Replikate bestimmt und eine gro e Differenz zwischen Replikaten macht eine Probe ung ltig weitere Informationen siehe Qualit tskontrollverfahren Progensa PCA3 Assay 31 501377DE Rev 001 Interpretation der Ergebnisse Progensa PCA3 Tabelle 4 Bedingungen f r Ausnahme bersicht f r Progensa PCA3 Assay PCA3 Ergebnis PSA Ergebnis Aufgef hrter Weitere Malnahmelkammentar Analysecode Analysecode PCA3Score Tests PR PSA Wiederholungstest durchf hren m Bereich Ung ltig Ja siehe Wiederholungstest und die
4. d o 1 5E 06 2 5 S 8 u 8 1 0E 06 g y 0 9663x 27 393 fo y 0 9523x 79 762 5 0E 05 R 0 9973 R 0 9999 A Urin A Urin 0 0E 00 r r l i 0 0E 00 5 0E 05 1 0E 06 1 5E 06 2 0E 06 2 5E 06 3 0E 06 0 0E 00 3 0E 04 6 0E 04 9 0E 04 1 2E 05 Erwartete c ml PCA3 Erwartete c mI PSA Abbildung 4 Linearit t des Progensa PCA3 Assays f r PCA3 und PSA Analyte Progensa PCA3 Assay 39 501377DE Rev 001 Leistungsmerkmale Progensa PCA3 5 Pr zision Die Pr zision des Progensa PCA3 Assays wurde gem CLSI EP5 A2 2004 beurteilt 9 Wiederholbarkeit ist Pr zision unter Bedingungen minimaler Variabilit t und Reproduzierbarkeit ist Pr zision unter Bedingungen maximaler Variabilit t F r die Wiederholbarkeit wurde ein Testpanel mit 3 Proben das aus verd nntem in vitro RNA Transkript bestand hergestellt Ein Bediener an einem Pr fzentrum testete das Panel in 20 L ufen von 5 Replikaten ber 20 Tage unter Verwendung einer eines einzigen Kalibrator und Kontrollencharge Reagenzcharge und Ger tesatzes Tabelle 10 zeigt die Wiederholbarkeitspr zision des Progensa PCA3 Assays bei verschiedenen Testkonzentrationsniveaus Tabelle 10 Wiederholbarkeit des Progensa PCA3 Assays Analyt Panel Durchschnitt Wiederholbarkeit Wiederholbarkeit probe c mL SD VK 1 1228 145 12 PCA3 2 12 020 809 7 3 61 108 2489 4 1 48 091 3715 8 PSA 2 484 457 41 026 8 3 2 001 430 131 554 7
5. kein Code A B E H oder I Ergebnisse manuell anpassen unter zul ssigem Ung ltig PSA Wiederholungstest durchf hren Wertebereich A B E H oder l Ja siehe Wiederholungstest und die 9 u Ergebnisse manuell anpassen er PCA3 Wiederholungstest durchf hren Ung lig Im Bereich Ja siehe Wiederholungstest und die a b e h oder i kein Code Ergebnisse manuell anpassen 1 Manuell anpassen um den lt Berechneten PCA3 Score zu erhalten ODER ber zul ssigem 2 Probe in Probenverd nner verd nnen Im Bereich Wertebereich lt Berechneter optional siehe Verd nnung von Proben oberhalb kan Code F an des zul ssigen Bereichs PSA Wiederholungstest durchf hren und Ergebnisse manuell anpassen wenn ein PCA3 Score erforderlich ist 1 Manuell anpassen um den gt Berechneten PCA3 Score zu erhalten ber zul ssigem j ODER rn Im Bereich gt Berechneter Optional 2 Probe in Probenverd nner verd nnen f KEIN Soda PERESEDTEN PCA3 Wiederholungstest durchf hren und Ergebnisse manuell anpassen wenn ein PCA3 Score erforderlich ist ae ne Im Bereich lt Berechneter Nei Manuell anpassen um den lt Berechneten er a kein Code PCA3 Score on PCA3 Score zu erhalten m a lt Berechneter Nein Manuell anpassen um den lt Berechneten 9 PCA3 Score F I PCA3 Score zu erhalten Eine vollst ndige Liste der Analysecodes finden Sie in der Bedienungsanleitung der Progensa PCA3 Assay Software Gilt
6. lt 5 Lithiumlaurylsulfat PC PSA Positivkontrollen 2x1 7mL Nicht infekti se PSA Nukleins ure in Phosphatpufferl sung mit lt 5 Lithiumlaurylsulfat Blatt mit Konzentrationsinformationen f r PSA 1 Blatt Progensa PCA3 Assay 6 501377DE Rev 001 Progensa PCA3 Im Lieferumfang enthaltene Reagenzien und Materialien Aptima Assayfl ssigkeiten Lagerung bei 15 C bis 30 C 2 Packungen vom Empfang bis zum angegebenen Verfallsdatum Symbol Komponente Menge WwW Waschl sung 1 x 402 mL HEPES gepufferte L sung mit lt 2 Natriumdodecylsulfat DF Puffer f r Deaktivierungsfl ssigkeit 1 x 402 mL Bicarbonatpufferl sung 0 lreagenz 1x 24 6 mL Silikon l Hinweis Alle Materialien die im Progensa PCA3 Assay Kit enthalten sind sind auch separat erh ltlich n here Einzelheiten im Abschnitt Materialien Progensa PCA3 Assay 7 501377DE Rev 001 Materialien Progensa PCA3 Materialien Hinweis Informationen zu eventuell mit den Reagenzien verbundenen Gefahren und Vorsichtshinweisen finden Sie in der Sicherheitsdatenblatt Sammlung Safety Data Sheet Library unter www hologic com sds Hinweis Materialien die von Hologic erh ltlich sind sind mit der Katalognummer aufgef hrt Erforderliche jedoch nicht im Lieferumfang enthaltene Materialien Best Nr Progensa PCAS3 Transportkit f r Urinproben 302352 Leader HC Luminometer 104747 Hologic Target Capture System TCS 104555 Aptim
7. dass die TCS Waschflasche mit der Waschl sung gef llt ist und die Absaugvorrichtung an der Vakuumpumpe angeschlossen ist Siehe die Bedienungsanleitung des Target Capture Systems Target Capture System Operator s Manual B Reagenzrekonstitution und vorbereitung Die Reagenzrekonstitution sollte vor Beginn des Probentransfers durchgef hrt werden 1 Kombinieren Sie zur Rekonstitution von Amplifikations Enzym und Sondenreagenz jeweils die Flasche mit gefriergetrocknetem Reagenz mit der Rekonstitutionsl sung Lassen Sie ggf gek hlte Rekonstitutionsl sungen vor Gebrauch auf Raumtemperatur kommen N a 1 Abbildung 2 Rekonstitutionsverfahren a Paaren Sie die entsprechende Rekonstitutionsl sung mit dem getrockneten Reagenz Best tigen Sie dass die Fl schchen bereinstimmende Etikettenfarben aufweisen um sicherzustellen dass sie richtig gepaart wurden b ffnen Sie das Fl schchen mit dem getrockneten Reagenz und stecken Sie das gekerbte Ende des Rekonstitutionsverbindungsst cks fest in die Fl schchen ffnung Abbildung 2 Schritt 1 Progensa PCA3 Assay 17 501377DE Rev 001 Testverfahren Progensa PCA3 c ffnen Sie die entsprechende Rekonstitutionsl sung und legen Sie den Deckel auf eine saubere abgedeckte Arbeitsfl che Halten Sie die Flasche mit der L sung auf dem Labortisch fest und stecken Sie das andere Ende des Rekonstitutionsverbindungsst cks fest
8. r die Menge der prostataspezifischen Ribonukleins ure RNA in molekularen Testproben verwendet werden Die Durchf hrbarkeit von quantitativen PCA3 basierten Molekulartests mit Urinsedimenten 2 und Vollurin 3 wurde nachgewiesen Der Progensa PCA3 Assay verwendet Vollurin der im Anschluss an eine digitale rektale Untersuchung DRE mit drei Druckanwendungen pro Lappen gesammelt wurde Bei der digitalen Rektaluntersuchung werden Prostatazellen durch das Prostata Gangsystem in den Harntrakt freigesetzt wo sie im Erststrahlurin gesammelt werden k nnen Der Urin wird durch Zugabe von Urintransportmedium UTM verarbeitet das die Zellen Iysiert und das RNA stabilisiert PCA3 und PSA RNA werden quantifiziert und der PCA3 Score wird auf der Grundlage des Anteils an PCA3 PSA RNA ermittelt Zus tzlich zur Normalisierung des PCA3 Signals dient die Messung von PSA RNA auch zur Best tigung dass die Ausbeute von prostataspezifischer RNA ausreichend ist um zu einem g ltigen Ergebnis zu f hren H here PCA3 Scores korrelieren mit einer h heren Wahrscheinlichkeit einer positiven Prostatabiopsie Testprinzip Der Progensa PCA3 Assay besteht aus zwei quantitativen Nukleins ure Amplifikationstests Der Progensa PCA3 Assay verbindet die Technologien Target Capture transkriptionsvermittelte Amplifikation Transcription Mediated Amplification TMA und Hybridisierungsschutzassay Hybridization Protection Assay HPA zur Rationalisierung der Urinprobe
9. schchen Wiederholen Sie diesen Vorgang f r die Zugabe der Kontrollen und Proben Eventuelle Probenreste abdecken und aufheben und bei 8 C oder darunter lagern falls Wiederholungstests erforderlich sein sollten n here Informationen siehe Probenentnahme transport und lagerung Bedecken Sie die TTUs mit Abdeckfolien und sch tteln Sie den St nder vorsichtig von Hand Nicht mit dem Vortex Mischer mischen Den St nder bei 62 C 1 C in einem Wasserbad f r die Dauer von 30 5 Minuten inkubieren Entfernen Sie den St nder aus dem Wasserbad und tupfen Sie den Boden der R hrchen auf saugf higem Material ab Stellen Sie sicher dass die Abdeckfolien fest angelegt sind Ersetzen Sie sie ggf durch neue Abdeckfolien und versiegeln Sie die TTUs fest Mischen Sie den St nder 60 Sekunden mit dem Vortex Mischer f r mehrere R hrchen siehe Verfahrenshinweise Beginnen Sie mit dem Mischen mit dem Vortex Mischer innerhalb von 2 Minuten nach der Entnahme des St nders aus dem Wasserbad Inkubieren Sie den St nder mit angelegten Abdeckfolien bei Raumtemperatur f r 30 5 Minuten Setzen Sie den St nder 5 bis 10 Minuten mit dem Schild mit der Aufschrift VORDERSEITE auf den magnetischen Sockel des TCS Beladen Sie den TTC St nder mit TTCs Entl ften Sie die Pumpleitungen der Dispensierstation indem Sie Waschl sung durch die Dosiervorrichtung pumpen Pumpen Sie ausreichend Fl ssigkeit durch das System sodass keine Luftblasen in
10. Assay 33 501377DE Rev 001 Interpretation der Ergebnisse Progensa PCA3 D Wiederholungstest 1 Richtlinien f r Wiederholungstests a Obwohl es nicht unbedingt erforderlich ist dass beide Analyte im gleichen Lauf getestet werden m ssen die Ergebnisse von beiden Analyten aus dem gleichen Probenfl schchen kommen damit der PCA3 Score berichtet werden kann Alle ung ltigen L ufe m ssen wiederholt werden und alle ung ltigen Proben aus g ltigen L ufen m ssen erneut getestet werden F hren Sie die Wiederholungstests der Proben mit einem neuen Satz Kalibratoren und Kontrollen durch Die richtige Lagerung von Probenresten vor dem Wiederholungstest ist sehr wichtig weitere Informationen siehe Probenentnahme transport und lagerung Eine manuelle Anpassung von PCA3 und PSA Analyten kann erforderlich sein um den PCA3 Score zu ermitteln n here Informationen siehe Manuelle Anpassung 2 Verd nnung von Proben oberhalb des zul ssigen Bereichs a Wenn eine Probenkonzentration innerhalb eines g ltigen Laufs ber dem Kalibrator 5 extrapoliert wird ist das Ergebnis oberhalb des zul ssigen Bereichs und das Ergebnis wird mit dem Analysecode f oder F in den Laufberichten ausgewiesen Die Konzentration wird als gt Kalibrator 5 Konzentration ausgedr ckt Drehen Sie die behandelte Urinprobe um um sie vor der Probenverd nnung zu vermischen Eine empfohlene jedoch nicht erforderliche Verd nnung
11. EMERGO EUROPE Molenstraat 15 2513 BH Den Haag Niederlande Hologic Aptima DTS Leader Progensa und SB100 sind Marken und oder eingetragene Marken von Hologic Inc und oder seinen Tochterunternehmen in den Vereinigten Staaten und oder anderen L ndern eppendorf stilisiert und REPEATER sind Marken der Eppendorf AG RAININ ist eine Marke von Rainin Instrument LLC TECAN und FREEDOM EVO sind Marken der Tecan Group AG Alle anderen Marken die m glicherweise in dieser Packungsbeilage erscheinen geh ren dem jeweiligen Eigent mer 2006 2014 Hologic Inc Alle Rechte vorbehalten 501377DE Rev 001 2014 11 Progensa PCA3 Assay 42 501377DE Rev 001
12. Lagerung und Vorbereitung zur Verwendung gesch tzt werden D Der Reagenzien nicht einfrieren E Die Reagenzien oder Fl ssigkeiten nicht nach dem Verfallsdatum verwenden F Progensa PCA3 und PSA Kalibratoren und Kontrollen sind Fl schchen f r einen Lauf und m ssen nach der Verwendung entsorgt werden G Ver nderungen des physischen Erscheinungsbildes des gelieferten Reagenzes k nnen ein Anzeichen von Instabilit t oder Verfall dieser Materialien sein Wenn Ver nderungen des physischen Erscheinungsbildes der Reagenzien nach der Resuspension beobachtet werden z B offensichtliche Ver nderungen der Reagenzfarbe oder Tr bung die auf mikrobielle Kontamination hinweist nehmen Sie vor der Verwendung mit dem technischen Kundendienst von Hologic Kontakt auf H Entsorgen Sie rekonstituierte Reagenzien nach 30 Tagen oder nach dem Verfallsdatum ausschlaggebend ist das zuerst eintretende Datum Progensa PCA3 Assay 13 501377DE Rev 001 Lagerungs und Handhabungsbedingungen Progensa PCA3 Il Ge ffnete oder rekonstituierte Restreagenzien k nnen in anschlie enden Assays verwendet werden wenn sie nach dem ersten Gebrauch ordnungsgem gelagert wurden Das Restreagenz kann mit frisch zubereitetem oder anderem brig gebliebenen Reagenz der gleichen Charge gepoolt werden Reagenzien aus Kits mit verschiedenen Chargennummern nicht austauschen vermischen oder kombinieren siehe Warnhinweise und Vorsichtsma nahmen Keine Kompon
13. Progensa PCAS3 Assay enthalten sind sind nachstehend aufgef hrt Die Symbole zur Identifikation der Reagenzien sind neben dem Reagenznamen angegeben Progensa PCA3 Assay Kit 2 x 100 Reaktionen Best Nr 302355 8 Packungen Progensa PCA3 100 Reaktionen Kit Progensa PCA3 gek hlter Beh lter Lagerung bei 2 C bis 8 C vom Empfang bis zum angegebenen Verfallsdatum Symbol Komponente Menge A PCA3 Amplifikationsreagenz 1 Fl schchen Nicht infekti se Nukleins uren getrocknet in HEPES gepufferter L sung mit lt 10 F llstoff E PCA3 PSA Enzymreagenz 1 Fl schchen Reverse Transkriptase und RNA Polymerase getrocknet in HEPES gepufferter L sung mit lt 10 F llstoff P PCA3 Sondenreagenz 1 Fl schchen Nicht infekti se chemilumineszente DNA Sonden getrocknet in sukzinatgepufferter L sung mit lt 5 F llstoff und lt 5 Lithiumlaurylsulfat Progensa PCA3 Beh lter mit Raumtemperatur Lagerung bei 15 C bis 30 C vom Empfang bis zum angegebenen Verfallsdatum Symbol Komponente Menge AR PCA3 Amplifikationsrekonstitutionsl sung 1x 9 3 mL W ssrige L sung mit Konservierungsmitteln lt 1 Parabene ER PCA3 PSA Enzymrekonstitutionsl sung 1x 3 3 mL HEPES gepufferte L sung mit einer oberfl chenaktiven Substanz 10 Triton X 100 und 20 Glycerol PR PCA3 PSA Sondenrekonstitutionsl sung 1x 12 4 mL Sukzinatgepufferte L sung mit lt 5 Lithiumlaurylsulfat S PCA3 PSA Selektion
14. RNA 21 Tage lang stabil bei 30 C 5 Tage lang Die bei 20 C und 70 C gelagerten Proben zeigten bis zu 90 Tage PCA3 und PSA RNA Stabilit t Einfrier Auftau Stabilit t Die Proben wurden 6 mal einem Zyklus zwischen 37 C und 70 C unterworfen Es wurden keine verringerten Spiegel von PCA3 oder PSA RNA Kopien beobachtet B Analytische Ergebnisse 1 Analytische Sensitivit t Ein analytisches Sensitivit tspanel das aus verd nntem in vitro RNA Transkript bestand wurde zur Beurteilung der Assaysensitivit t verwendet Ein Bediener testete das Panel in 12 L ufen mit f nf Replikaten unter Einsatz einer einzigen Reagenzcharge Die Nachweisgrenze und Quantifizierungsgrenze wurden gem CLSI EP17 A 2004 berechnet 5 Die Nachweisgrenze des PCA3 Analyten betrug 80 c mL und f r den PSA Analyten 1438 c mL Die Quantifizierungsgrenze beider Analyten war Kalibrator 2 2 Analytische Spezifit t a Ungesplei tes Transkript Der Progensa PCA3 Assay wurde zum ausschlie lichen Nachweis der prostatakrebsspezifischen Exon 3 Exon 4 gesplei ten PCAS RNA entwickelt 2 Der Assay erzielte keine Detektion von 1 Million c mL ungesplei ter PCAS RNA signifikant ber dem Hintergrund Prostataspezifit t von PCA3 RNA im Urin Proben von Probanden n 97 die eine radikale Prostatektomie hinter sich hatten wurden mit dem Progensa PCA3 Assay getestet und die PCA3 RNA Spiegel wurden mit denen von Probanden n 464 vor der Biopsie v
15. TTUs aus dem Luminometer und setzen Sie diese TTUs in den Beh lter mit Deaktivierungsfl ssigkeit Belassen Sie die TTUs vor der Entsorgung mindestens 15 Minuten im Beh lter Der Laborleiter muss die richtigen Handhabungs und Entsorgungsverfahren festlegen Verfahrenshinweise A Probenvorbereitung 1 Wenn die Proben suspendierte Pr zipitate enthalten diese bis zu 5 Minuten lang auf 37 C erw rmen und danach vorsichtig umdrehen Wenn das Pr zipitat nicht wieder in L sung geht stellen Sie sicher dass das Pr zipitat nicht die Abgabe der Probe verhindert Gefrorene Proben m ssen bei Raumtemperatur aufgetaut werden 15 C bis 30 C Verwendung von Wasserbad zul ssig W hrend des Auftauens gelegentlich umdrehen um die Bildung eines unl slichen St psels zu verhindern Vermischen Sie Progensa PCA3 Assay 23 501377DE Rev 001 Testverfahren Progensa PCA3 die Fl schchen durch vorsichtiges Umdrehen wenn das Eis im Fl schchen ausreichend aufgetaut ist so dass es sich gel st hat und sich frei bewegen kann Setzen Sie die Erw rmung fort bis die Probe vollst ndig aufgetaut ist und mischen Sie die Fl schchen erneut durch vorsichtiges Umdrehen a Wenn sich ein St psel bildet und Proben mit dem TECAN Freedom EVO 100 4 Ger t pipettiert werden gefrieren Sie die Probe erneut wiederholen Sie das Auftauverfahren und stellen Sie sicher dass sich keine St psel bilden Wenn sich der St psel nicht eliminieren l sst
16. Wenn der berichtete PCA3 Score unter dem Grenzwert liegt ist das Ergebnis als NEGATIV auszulegen Wenn der PCA3 Score dem Grenzwert entspricht oder dar ber liegt ist das Ergebnis als POSITIV auszulegen Der Laborleiter legt den Grenzwert fest n here Einzelheiten siehe Leistungsmerkmale Unter manchen Umst nden wird ein PCA3 Score Bereich gt Berechneter PCA3 Score oder lt Berechneter Score ausgegeben Wenn lt Berechneter PCA3 Score unter dem Grenzwert liegt ist das Ergebnis als NEGATIV auszulegen Wenn gt Berechneter PCA3 Score ber dem Grenzwert liegt ist das Ergebnis als POSITIV auszulegen Wenn ein numerischer Wert erforderlich ist kann durch Probenverd nnung und Wiederholungstest ein PCA3 Score anstatt eines PCA3 Score Bereichs generiert werden siehe Wiederholungstest Verd nnung von Proben oberhalb des zul ssigen Bereichs Auswertung von Status und Analysecodes Die Statusspalte im Laufbericht mit Rohdaten und dem Bericht mit Verh ltnisdaten listet die Informationen im Format s a auf Laufspezifische Statuscodes s werden vor dem links vom Doppelpunkt und analytspezifische Analysecodes a werden nach dem rechts vom Doppelpunkt aufgelistet Analytspezifische Codes werden in Kleinbuchstaben f r PCA3 Ergebnisse und in Gro buchstaben f r PSA Ergebnisse aufgef hrt Jeder Bericht enth lt Beschreibungen der Status und Analysecodes die in diesem Bericht erscheinen Zum Beispiel k nnen die Co
17. der Leitung vorliegen und alle zehn D sen einen stetigen Fl ssigkeitsstrom abgeben Schalten Sie die Vakuumpumpe ein und trennen Sie die Absaugvorrichtung am ersten Anschluss zwischen der Absaugvorrichtung und der Auffangflasche Vergewissern Sie sich dass das Vakuummessger t die Spezifikation des Lecktests erf llt Eventuell dauert es 15 Sekunden bis dieser Messwert zur Verf gung steht Schlie en Sie die Vorrichtung wieder an und stellen Sie sicher dass das Progensa PCA3 Assay 20 501377DE Rev 001 Progensa PCA3 Testverfahren Vakuummessger t die Spezifikation des Vakuumniveaus erf llt Lassen Sie die Vakuumpumpe eingeschaltet bis alle Target Capture Schritte abgeschlossen sind und die Schl uche der Absaugvorrichtung trocken sind Beziehen Sie sich auf das Vakuumspezifikationsblatt f r das Target Capture System hinten in der Bedienungsanleitung des Target Capture Systems oder nehmen Sie mit dem Technischen Kundendienst von Hologic Kontakt auf 11 Setzen Sie die Absaugvorrichtung fest auf dem ersten Satz Spitzen auf Lassen Sie die Spitzen in die erste TTU herab bis die Spitzen den Fl ssigkeitsspiegel ber hren Halten Sie bei der Abw rtsbewegung die Spitzen weiterhin in Kontakt mit dem Fl ssigkeitsspiegel bis die Spitzen kurz den Boden der R hrchen ber hren Klopfen Sie mit den Spitzen leicht auf den R hrchenboden bis die verbleibende Fl ssigkeit restlos entfernt wurde Die Spitzen nicht l nger mit dem R hrchenb
18. ist 1 10 mit dem Progensa PCA3 Specimen Diluent Kit Geben Sie in ein entsprechendes Fl schchen 1800 uL Probenverd nner und 200 uL Probe Verschlie en Sie das R hrchen und drehen Sie es 5 mal um um es vollst ndig zu vermischen Der Verd nnungsfaktor ist 10 in der Arbeitsliste des Laufs Wenn ein Wiederholungstest beider Analyte erfolgen soll verdoppeln Sie die Volumen 3600 uL Probenverd nner und 400 uL Probe N here Anweisungen finden Sie in der Packungsbeilage des Progensa PCA3 Specimen Diluent Kit Testen Sie die verd nnte Probe mit dem Assay Wenn nach dem Wiederholungstest das Probenergebnis wieder oberhalb des zul ssigen Bereichs liegt ist eine weitere Verd nnung erforderlich bis das Probenergebnis innerhalb des Kalibratorbereichs f llt Eine weitere Verd nnung der anf nglichen 1 10 Verd nnung ist zul ssig vorausgesetzt die anf ngliche 1 10 Verd nnung wurde vorschriftsm ig gelagert n here Informationen siehe Probenentnahme transport und lagerung Progensa PCA3 Assay 34 501377DE Rev 001 Progensa PCA3 Einschr nkungen Einschr nkungen A Der Progensa PCA3 Assay sollte nicht f r Patienten verwendet werden die Medikamente mit bekannter Auswirkung auf die Serum PSA Konzentrationen einnehmen z B Finasterid Proscar Propecia Dutasterid Avodart und Antiandrogentherapie Lupron Die Wirkung dieser Medikamente auf die PCA3 Genexpression wurde noch nicht beurteilt Bestimmte therapeutis
19. muss die Probe manuell pipettiert werden b Wenn sich ein St psel bildet und die Proben mit einem Mikropipettierer manuell pipettiert werden sind keine weiteren Ma nahmen erforderlich Stellen Sie lediglich sicher dass der St psel die Abgabe der Probe nicht verhindert B Pipettieren von Kontrollen Kalibratoren und Proben 1 Der Kalibrator die Kontrolle oder die Probe die zur TTU hinzugegeben wird sollte ein Volumen von 400 uL haben Um sicherzustellen dass das richtige Volumen transferiert wurde wird eine Sichtkontrolle des in die TTU pipettierten Volumens empfohlen Um genaue Ergebnisse zu erhalten muss das richtige Volumen verwendet werden Stellen Sie sicher dass die Pipettenspitze richtig auf dem Pipettierer sitzt berpr fen Sie auch dass die Volumeneinstellung richtig ist Es wird empfohlen die Volumeneinstellung am Ende jeder TTU alle 10 R hrchen einer Sichtpr fung zu unterziehen Lassen Sie den Pipettenkolben beim Abziehen einer Probe langsam und stetig los um Schaum und Luftblasenbildung zu vermeiden C Reagenzien 1 In der Sondenrekonstitutionsl sung kann sich w hrend der Lagerung ein Niederschlag bilden Erw rmen Sie die L sung 1 bis 2 Minuten auf 62 C 1 C Nach diesem Erw rmungsschritt kann die Sondenrekonstitutionsl sung auch dann verwendet werden wenn noch Niederschlagsreste vorhanden sind Nach der Resuspension das Fl schchen durch vorsichtiges Umdrehen vermischen Beim Pipettieren
20. nur f r ung ltige Proben innerhalb eines g ltigen Laufs F r Werte au erhalb des zul ssigen Bereichs wird der berechnete PCA3 Score unter Verwendung des Kopien Niveaus f r den n chstgelegenen Positivkalibrator berechnet Progensa PCA3 Assay 32 501377DE Rev 001 Progensa PCA3 Interpretation der Ergebnisse 4 Auswertung der Ergebnisse im Bericht mit Verh ltnisdaten Wenn eine Probe im Bericht mit Verh ltnisdaten mit einem PCA3 Score aufgelistet wird ist das Ergebnis ein berichtf higer PCA3 Score und keine weiteren Ma nahmen sind erforderlich Wenn kein PCA3 Score aufgelistet wird was als in der PCA3 Score Spalte ausgedr ckt wird schlagen Sie weitere Anweisungen in Tabelle 5 nach Tabelle 5 Bedingungen f r Bericht mit Verh ltnisdaten f r Progensa PCA3 Assay PCA3 Ergebnis PSA Ergebnis Aufgef hrter Weitere Matnahmeik mm ntar Analysecode Analysecode PCA3Score Tests Im Bereich Im Bereich PcA3 S Nei Keine weiteren Ma nahmen das Ergebnis kein Code kein Code gorg ein ist berichtf hig Ung ltig Ung ltig J Wiederholungstest f r beide Analyten a b e hoderi A B E H oder a a durchf hren siehe Wiederholungstest b l ssi Probe in Probenverd nner verd nnen siehe Ung ltig gn E Be J Verd nnung von Proben oberhalb des a b e h oder i s ai a zul ssigen Bereichs Wiederholungstest F beider Analyten durchf hren ber zul ssigem Unc lti Pr
21. von anderen Reagenzien als Enzym zielen Sie leicht seitlich auf den Boden des Reaktionsr hrchens ab wo der Boden abgerundet ist und in die Seiten bergeht Beim Pipettieren von Enzymreagenz zielen Sie direkt auf die Mitte des Reaktionsr hrchens Best tigen Sie visuell dass die Reagenzien richtig dispensiert werden nicht zuviel Reagenz an den Seiten der R hrchen und richtige Farb nderung Progensa PCA3 Assay 24 501377DE Rev 001 Progensa PCA3 Testverfahren D Temperatur 1 Die Reaktionen f r Target Capture Amplifikation Hybridisierung und Selektion sind temperaturabh ngig Daher ist es unbedingt erforderlich dass die Wasserb der innerhalb der angegebenen Temperaturbereiche gehalten werden 2 Raumtemperatur ist definiert als 15 C bis 30 C E Zeit Die Reaktionen f r Target Capture Amplifikation Hybridisierung und Selektion sind zeitabh ngig Halten Sie die unter Testverfahren angegebenen Zeiten ein F Mischen mit dem Vortex Mischer Richtiges Mischen mit dem Vortex Mischer ist f r die erfolgreiche Performance des Progensa PCA3 Assays wichtig Zum Mischen von Reaktionsmischungen mit dem Vortex Mischer stellen Sie den Vortex Mischer f r mehrere R hrchen auf die niedrigste Einstellung ein sichern den St nder und schalten den Mischer ein Steigern Sie langsam das Tempo bis die Fl ssigkeit auf die halbe H he des R hrchens angestiegen ist Mischen Sie mit dem Vortex Mischer 10 Sekunden ber den angege
22. 0 7 M bis 1 0 M Natriumhypochloritl sung in die 4 L Abfallflasche Hinweis Das kann unter einem Dunstabzug erfolgen um die Freisetzung von D mpfen in das Labor zu verhindern e Verschlie en Sie die Abfallflasche mit dem Deckel und vermischen Sie den Inhalt vollst ndig durch vorsichtiges Schwenken f Lassen Sie die Abfallflasche mindestens 15 Minuten stehen und entsorgen Sie dann den Inhalt Abfall g Sp len Sie die Abfallflasche mit Wasser um etwaigen Restabfall darin zu entfernen h Verschlie en Sie die leere Abfallflasche und stellen Sie sie in das Geh use der Vakuumfalle Bringen Sie die Schnellverschlussvorrichtungen an der TCS Einheit an Entsorgen Sie beide Handschuhe vorsichtig 4 TCS Einheit Wischen Sie die Oberfl chen des TCS Ger ts die Absaugvorrichtung und die Waschpuffer Auswerferspitzen mit Papierhandt chern ab die mit 2 5 iger bis 3 5 iger 0 35 M bis 0 5 M Natriumhypochloritl sung angefeuchtet wurden Sp len Sie im Anschluss an den Schritt mit Natriumhypochloritl sung mit Wasser ab und trocknen Sie die Oberfl chen anschlie end vollst ndig mit Papierhandt chern ab 5 St nder Tauchen Sie die St nder in 2 5 ige bis 3 5 ige 0 35 M bis 0 5 M Natriumhypochloritl sung Stellen Sie dabei sicher dass sie von der L sung bedeckt sind Lassen Sie die St nder 10 Minuten lang eingetaucht Eine l ngerer Kontakt hat Besch digung der St nder zur Folge Sp len Sie die St nder gr ndlich mit Wass
23. 00 4 Ger t verwendet Alle Pipetten m ssen regelm ig gereinigt werden wie in Verfahrenshinweise beschrieben Bei Verwendung von Wiederholungspipettierern zur Zugabe von Reagenzien darf das Reaktionsr hrchen nicht mit der Pipettenspitze ber hrt werden um eine Verschleppung von einem Reaktionsr hrchen zum anderen zu vermeiden Ausreichendes Mischen ist erforderlich um korrekte Testergebnisse zu erhalten Umfassende Informationen finden Sie unter Verfahrenshinweise Progensa PCA3 Assay 11 501377DE Rev 001 Warnhinweise und Vorsichtsma nahmen Progensa PCA3 V Separate Wasserb der sind f r die ausschlie liche Verwendung in den Pr amplifikations und Amplifikationsschritten und die Schritte nach der Amplifikation bereitzustellen W Das Etikett mancher Reagenzien dieses Kits enth lt Risiko und Sicherheitssymbole die durch die Europ ische Direktive 1999 45 EG vorgeschrieben sind Diese Reagenzien m ssen dementsprechend behandelt werden Materialsicherheitsdatenbl tter sind unter www hologic com abrufbar und k nnen auf Wunsch auch angefordert werden Progensa PCA3 Assay 12 501377DE Rev 001 Progensa PCA3 Lagerungs und Handhabungsbedingungen Lagerungs und Handhabungsbedingungen A Die Informationen zur Lagerung der Reagenzien entnehmen Sie bitte Tabelle 1 Tabelle 1 Lagerung der Reagenzien Ge ffnet rekonstituiert Reagenz Fl ssigkeit Lagerung unge ffnet Stab
24. 16 Groskopf J S M Aubin I L Deras A Blase S Bodrug C Clark S Brentano J Mathis J Pham T Meyer M Cass P Hodge M L Macairan L S Marks and H Rittenhouse 2006 Aptima PCA3 Molecular Urine Test Development of a Method to Aid in the Diagnosis of Prostate Cancer Clin Chem 52 1089 95 CLSI 1995 CLSI document GP10 A Assessment of the Clinical Accuracy of Laboratory Tests Using Receiver Operating Characteristic ROC Plots CLSI Wayne PA CLSI 2004 CLSI document EP17 A Protocols for Determination of Limits of Detection and Limits of Quantitation CLSI Wayne PA CLSI 2005 CLSI document EP7 A2 Interference Testing in Clinical Chemistry CLSI Wayne PA CLSI 2005 CLSI document EP15 A2 User Verification of Performance for Precision and Trueness CLSI Wayne PA CLSI 2003 CLSI document EP6 A Evaluation of the Linearity of Quantitative Measurement Procedures A Statistical Approach CLSI Wayne PA CLSI 2004 CLSI document EP5 A2 Evaluation of Precision Performance of Quantitative Measurement Methods CLSI Wayne PA based Molecular Urine Analysis for the Diagnosis of Prostate Cancer European Urology Ahal CE IVD Hologic Inc 10210 Genetic Center Drive San Diego CA 92121 USA Kundensupport 1 844 Hologic 1 844 465 6442 customersupport hologic com Technischer Kundendienst 1 888 484 4747 molecularsupport hologic com Weitere Kontaktinformationen finden Sie unter www hologic com
25. 6 0 1 5 36 14 844 7 5 2 6 0 4 6 36 72 372 7 4 6 0 1 0 7 36 430 26 26 0 11 0 1 8 36 62 274 13 8 8 3 0 5 1 34 52 739 9 6 6 7 4 2 2 34 218 789 10 6 7 7 4 0 3 32 1 073 920 11 4 6 9 8 0 PSA 4 34 37 185 9 5 7 3 0 1 5 32 386 504 10 4 8 6 3 4 6 34 1 518 748 12 5 8 4 3 7 7 32 11 007 14 8 9 0 6 0 8 34 1 694 404 11 7 7 0 1 6 Tabelle 12 Reproduzierbarkeit des Progensa PCA3 Assays PCA3 Score Analyse VK inner Panel Mittlerer Gesamt halb m YK VK zwischen sr A n zwischen zwischen 4 zwischen Probe Score VK eines ri y Ger ten L ufen Bedienern Chargen Laufs 1 34 5 27 26 5 23 8 0 2 34 32 14 9 10 12 0 2 3 32 30 12 7 5 17 7 6 7 32 39 28 24 2 8 11 7 8 34 37 21 14 12 0 0 9 Die Panelproben 4 bis 6 enthielten nur PCA3 oder PSA RNA Transkript und wurden daher in dieser Analyse nicht ber cksichtigt Progensa PCA3 Assay 41 501377DE Rev 001 Bibliographie Progensa PCA3 Bibliographie GO N0 O Bussemakers M J G A Van Bokhoven G W Verhaegh F P Smit H F M Karthaus J A Schalken F M J Debruyne N Ru and W B Isaacs 1999 DD3 A New Prostate Specific Gene Highly Overexpressed in Prostate Cancer Cancer Res 59 5975 5979 Hessels D J Mt Klein Gunnewiek I van Oort H F M Karthaus G J L van Leenders B van Balken L A Kiemeney J A Witjes and J A Schalken 2003 DD3 44 8
26. HOLOGIC Progensa PCA3 Progensa PCA3 Assay In vitro Diagnostikum Nur f r den US Export Allgemeine Informationen renrr rennen nenn 2 Verwendungszweck 2 222 nseeeeeeeneeeen nennen nn 2 Zusammenfassung und Erkl rung des Tests 22222220 2 TEStPNINZIP cce uk ana aa a ne he Bun ae ende 2 Im Lieferumfang enthaltene Reagenzien und Materialien 4 Materialien 4222000 a sr aaa nee 8 Warnhinweise und Vorsichtsma nahmen r2 10 Lagerungs und Handhabungsbedingungen 13 Probenentnahme transport und lagerung sr 15 Testverfahren 2ussrenen rennen en nenn 17 Verfahrenshinweise 2222 22eeeeee rennen ernennen 23 Qualit tskontrollverfahren n2 ss nun enn nenn 28 Interpretation der Ergebnisse 22rrreere nun nn 29 Einschr nkungen r22err sun nennen nennen 35 Leistungsmerkm le 2rresun rennen nennen 36 Bibliographie 2 00 isuke rua wu aaa 42 Progensa PCA3 Assay 1 501377DE Rev 001 Allgemeine Informationen Progensa PCA3 Allgemeine Informationen Verwendungszweck Der Progensa PCA3 Assay ist ein in vitro Nukleins ure Amgplifikationstest NAAT zum Nachweis von Ribonukleins ure RNA des Prostatakrebs Gens 3 Prostate Cancer Gene 3 PCA3 in m nnlichen Urinproben zur Erzeugung eines PCA3 Score Der PCA3 Score ist zur Verwendung in Verbindung mit d
27. TTUs mit den Proben IDs Tabelle 3 beschreibt die Zugabe der Kalibratoren Kontrollen und Proben Starten Sie die PSA Kalibratoren in einer neuen TTU Hinweis Die Kalibratoren sollen jeweils in drei Replikationen und die Kontrollen in zwei Replikationen ausgef hrt werden Sie m ssen auf dem gleichen St nder wie die Proben getestet werden Proben m ssen im Doppel getestet werden Zwischen den Kalibratoren Kontrollen und Proben keine leeren Reaktionsr hrchen lassen Bei Verwendung des TECAN Freedom EVO 100 4 Ger ts beziehen Sie sich bitte auf die TECAN Freedom EVO 100 40 Anwendungshinweise f r den Progensa PCA3 Assay TECAN Freedom EVO Anwendungshinweise f r weitere Anweisungen Tabelle 3 Beispiel f r einen St nderaufbau St nder Probe Target PCA3 Target PSA Position Beschreibung Konzentration Konzentration Kopien mL Kopien mL 1 bis 3 Kalibrator 1 0 0 4 bis 6 Kalibrator 2 250 7500 7 bis 9 Kalibrator 3 2500 75 000 10 bis 12 Kalibrator 4 25 000 750 000 13 bis 15 Kalibrator 5 125 000 3 000 000 16 bis 17 Kontrolle A 1250 37 500 18 bis 19 Kontrolle B 62 500 1 500 000 20 bis n Patientenprobe unbekannt unbekannt PCA3 und PSA Positivkalibratoren und kontrollen haben zugewiesene Werte sodass die tats chlichen Kopien mL Werte f r die Kalibratoren 2 bis 5 und die Kontrollen A und B leicht von den in der Tabelle aufgef hrten Target Konzentrationen abweichen Sie sind auch von Charge zu Charge versch
28. Verh ltnisdaten f r einen aufeinanderfolgenden Lauf in dem beide Analytl ufe g ltig sind Die Software berechnet und listet den PCA3 Score f r die Proben im Bericht mit Verh ltnisdaten auf Die Proben die im Bericht mit Verh ltnisdaten aufgef hrt werden erfordern entweder keine weiteren Tests oder beide Analyte m ssen erneut getestet werden Die Proben die nicht im Bericht mit Verh ltnisdaten aufgef hrt werden werden im Abschnitt Ausnahmen bersicht des Laufberichts mit Rohdaten aufgelistet Ein Bericht mit Verh ltnisdaten kann auch nach der manuellen Anpassung generiert werden weitere Informationen siehe Manuelle Anpassung QC Qualit tskontrolle Bericht Der QC Qualit tskontrolle Bericht listet die Laufvalidit tskriterien zugewiesenen und interpolierten Konzentrationen und Wiederfindung von Kalibratoren und Kontrollen auf Der Bericht listet auch die Parameter auf die die logistische Dosisreaktions Kalibrationskurve 3 mit vier Parametern definieren N here Informationen finden Sie in der Bedienungsanleitung der Progensa PCA3 Assay Software B Anpassung 1 Automatische Anpassung In aufeinanderfolgenden L ufen wo beide Analytl ufe g ltig sind passt die Software automatisch die einzelnen PCA3 und PSA Analytergebnisse f r die Proben an und ermittelt den PCA3 Score falls berechenbar Die Ergebnisse werden im Bericht mit Verh ltnisdaten oder der Ausnahmen bersicht des Laufberichts mit Rohdaten aufgel
29. a Auto Detect Kit 301048 2 eppendorf Repeater Plus Pipetten 105725 Spitzen f r Wiederholungspipetten 2 5 mL 5 0 mL 25 0 mL Entweder 2 Vortex Mischer f r mehrere R hrchen 102160F 3 Umlaufwasserb der 104586F 62 C 1 C 42 C 1 C 62 C 1 C 3 Wasserbad Distanzhalter 104627 ODER 2 SB100 Dry Heat Bath Vortexers 105524F Je nach dem erforderlichen Durchsatz k nnen weitere SB100 Instrumente erforderlich sein Mikropipette 1000 uL RAININ PR1000 901715 Spitzen 1000 uL P1000 105049 Pipettierer eppendorf 20 bis 200 uL 105726 Spitzen Pipetten 20 bis 200 uL Bleichmittel 5 ige bis 7 ige 0 7 M bis 1 0 M Natriumhypochloritl sung Plastikbeh lter mit gro em Deckel Standard Urinsammelbeh lter ohne Konservierungsmittel Zehn R hrchen Einheiten TTU TU0022 Zehn Spitzen Kassetten TTC 104578 SysCheck Kalibrationsstandard 301078 Optionale Materialien Best Nr Progensa PCA3 100 Reaktionen Kit 302354 Progensa PSA 100 Reaktionen Kit 302357 Progensa PCA3 Assay 8 501377DE Rev 001 Progensa PCA3 Materialien Best Nr Progensa PCAS3 Kalibratoren und Kontrollenkit 302353 Progensa PSA Kalibratoren und Kontrollenkit 302356 Progensa PCA3 PSA Proficiency Panels 302350 Progensa PCA3 Specimen Diluent Kit 302351 Aptima Assayfl ssigkeitskit 302002C Einmal Pipettenspitzen mit Filter 1 mL 10612513 Tecan TECAN Freedom EVO 100 4 900932 PCA3 Deckoplatteneinheit DTS 800 902021 Reage
30. an den Spitzen im TTC an Saugen Sie die gesamte Waschl sung ab die sich noch in der Einsp lwanne der Dispensierstation befindet c Gie en Sie mindestens 100 mL 0 5 ige bis 0 7 ige 0 07 M bis 0 1 M oder falls bevorzugt 2 5 ige bis 3 5 ige 0 35 M bis 0 5 M Natriumhypochloritl sung in die Einsp lwanne Aspirieren Sie die gesamte L sung durch die Absaugvorrichtung Progensa PCA3 Assay 25 501377DE Rev 001 Testverfahren Progensa PCA3 d Gie en Sie mindestens 100 mL deionisiertes Wasser in die Einsp lwanne Aspirieren Sie das gesamte Wasser durch die Absaugvorrichtung e Werfen Sie die Spitzen in ihre Original TTC aus f Lassen Sie die Vakuumpumpe eingeschaltet bis die Schl uche der Absaugvorrichtung trocken sind um R ckfluss zu verhindern ca 3 Minuten g Dekontaminieren Sie die Oberfl chen der Absaugvorrichtung wie in TCS Einheit beschrieben 3 TCS Abfallbeh lter Reinigen Sie die Abfallflasche mindestens einmal pro Woche oder wenn die Abfallflasche zu 25 voll ist wobei das zuerst eintretende Ereignis ausschlaggebend ist a Schalten Sie die Vakuumpumpe aus und lassen Sie den Vakuumdruck angleichen b Geben Sie die Schnellverschlussvorrichtungen zwischen der Abfallflasche und der berlaufflasche sowie der Abfallflasche und der Absaugvorrichtung frei c Entfernen Sie die Abfallflasche vom Geh use der Vakuumfalle d Entfernen Sie den Deckel und geben Sie vorsichtig 400 mL 5 ige bis 7 ige
31. benen Zeitraum oder bis sich eine gleichm ige Farbe einstellt Stellen Sie dann die Geschwindigkeit auf die niedrigste Einstellung bevor Sie den Vortex Mischer f r mehrere R hrchen ausschalten und den St nder entnehmen Die Reaktionsmischungen d rfen nicht die Abdeckfolie ber hren G Wasserb der 1 Der Wasserpegel in den Wasserb dern muss im Bereich von 3 8 bis 5 0 cm 1 5 bis 2 0 Zoll gemessen vom Metall Auflagetray unten am Wasserbad bis zur Wasseroberfl che gehalten werden Damit wird eine ordnungsgem e W rme bertragung sichergestellt 2 Zur Vermeidung von Kreuzkontaminationen sollten die Wasserb der jeweils ausschlie lich f r einen bestimmten Assayschritt reserviert werden H Dekontamination 1 Oberfl chen und Pipettierer Arbeitsfl chen im Labor und Pipetten m ssen regelm ig mit einer 2 5 igen bis 3 5 igen 0 35 M bis 0 5 M Natriumhypochloritl sung dekontaminiert werden Lassen Sie die Natriumhypochloritl sung mindestens 1 Minute auf den Fl chen einwirken Sp len Sie sie anschlie end mit Wasser ab Die Natriumhypochloritl sung darf nicht antrocknen Chlorl sungen k nnen Ger te und Metall angreifen Sp len Sie die Ger te gr ndlich mit Wasser ab um Lochfra zu verhindern 2 TCS Absaugvorrichtung Nach jeder Verwendung a Schieben Sie die Dosiervorrichtung aus dem Weg b Setzen Sie eine neue TTC in den TTC St nder Schalten Sie die Vakuumpumpe ein Bringen Sie die Absaugvorrichtung
32. che und diagnostische Verfahren wie z B Prostatektomie Bestrahlung Prostatabiopsie und andere k nnen die Lebensf higkeit von Prostatagewebe beeintr chtigen und sich anschlie end auf den PCA3 Score auswirken Die Wirkung dieser Verfahren auf die Assayleistung wurde noch nicht beurteilt Proben f r PCA3 Assays sollten gesammelt werden wenn der Kliniker der Ansicht ist dass das Prostatagewebe wiederhergestellt ist Der Progensa PCA3 Assay darf nur von Mitarbeitern durchgef hrt werden die im Verfahren unterwiesen wurden Eine Nichtbefolgung der Anweisungen in dieser Packungsbeilage kann fehlerhafte Ergebnisse zur Folge haben Jedes Labor muss ein LIS Transferverfahren unabh ngig validieren Zuverl ssige Ergebnisse h ngen von einer angemessenen Urinprobenentnahme ab Weil das f r den Progensa PCA3 Assay verwendete Transportsystem keine mikroskopische Beurteilung der Eignung der Urinprobe zul sst ist eine Schulung des klinischen Personals in den ordnungsgem en Urinprobenentnahmetechniken erforderlich Siehe Probenentnahme transport und lagerung Detaillierte Informationen finden Sie in der Packungsbeilage des Progensa PCA3 Transportkits f r Urinproben Die Ergebnisse des Progensa PCA3 Assays m ssen in Verbindung mit anderen dem Arzt zur Verf gung stehenden Labordaten und klinischen Befunden interpretiert werden Die Testergebnisse k nnen durch unsachgem e Probenahme technische Fehler oder Probenverwechselung beeintr c
33. d dabei die empfohlenen Temperaturen einzuhalten Vermeiden Sie Verspritzen und Kreuzkontamination Hinweis Der Versand der Proben muss in bereinstimmung mit geltenden nationalen und internationalen Frachtbestimmungen erfolgen Progensa PCA3 Assay 16 501377DE Rev 001 Progensa PCA3 Testverfahren Testverfahren A Vorbereitung des Arbeitsbereichs 1 Temperieren Sie ein Wasserbad auf 62 C 1 C zur Pr amplifikation ein zweites Wasserbad auf 42 C 1 C zur Amplifikation und ein drittes Wasserbad auf 62 C 1 C f r die Schritte nach der Amplifikation Stellen Sie sicher dass die Wasserb der ausreichend Wasser enthalten siehe Verfahrenshinweise Bei Verwendung des SB100 Dry Heat Bath Vortexers siehe die SB100 Dry Heat Bath Vortexer Anwendungshinweise f r den Progensa PCA3 Assay SB100 Anwendungshinweise 2 Arbeitsfl chen und Pipetten m ssen vor Assaybeginn mit einer 2 5 igen bis 3 5 igen 0 35 M bis 0 5 M Natriumhypochloritl sung dekontaminiert werden Lassen Sie die Natriumhypochloritl sung mindestens 1 Minute auf Fl chen und Pipetten einwirken Sp len Sie sie anschlie end mit Wasser ab Die Natriumhypochloritl sung darf nicht antrocknen Decken Sie die Arbeitsfl che auf der der Test durchgef hrt wird mit sauberen absorbierenden Labortischunterlagen mit Kunststoffunterschicht ab 3 Setzen Sie eine ausreichende Anzahl Zehn Spitzen Kassetten in das Target Capture System TCS Stellen Sie sicher
34. des angeben ob ein Proben oder Replikatergebnis g ltig oder au erhalb des zul ssigen Bereichs ist Eine vollst ndige Auflistung der Status und Analysecodes und n here Einzelheiten finden Sie in der Kurzanleitung oder der Bedienungsanleitung f r die Progensa PCA3 Assay Software Progensa PCA3 Assay 30 501377DE Rev 001 Progensa PCA3 Interpretation der Ergebnisse Wenn ein PCA3 Score im Bericht mit Verh ltnisdaten berichtet wird und keine Status oder Analysecodes in den PCA3 oder PSA Status Spalten erscheinen bedeutet das dass die Testergebnisse der beiden Analyten g ltig und innerhalb des zul ssigen Bereichs sind Das Probenergebnis kann berichtet werden und keine weiteren Ma nahmen sind erforderlich Wenn ein Status oder Analysecode in der Ausnahmen bersicht oder im Bericht mit Verh ltnisdaten erscheint kann ein Wiederholungstest erforderlich sein siehe Auswertung der Ergebnisse in der Ausnahmen bersicht und Auswertung der Ergebnisse im Bericht mit Verh ltnisdaten Wenn Analytergebnisse aus verschiedenen L ufen bezogen werden und sie einen Analysecode bzw codes haben suchen Sie die Kombination f r beide Analyten in Tabelle 4 oder Tabelle 5 auf um zu ermitteln ob weitere Ma nahmen erforderlich sind Hinweis Das Vorliegen eines Status oder Analysecodes bedeutet nicht automatisch dass ein Wiederholungstest erforderlich ist 3 Auswertung der Ergebnisse in der Ausnahmen bersicht Die Ausnahmen
35. enten des gepoolten Reagenzes d rfen die maximalen Lagerzeiten f r ge ffnete oder rekonstituierte Reagenzien berschreiten Stellen Sie sicher dass das gepoolte Reagenz gut gemischt wurde und ein ausreichendes Volumen hergestellt wurde um eine ausreichende Reagenzmenge f r einen gesamten Assaylauf bereitzustellen Progensa PCA3 Assay 14 501377DE Rev 001 Progensa PCA3 Probenentnahme transport und lagerung Probenentnahme transport und lagerung Der Progensa PCA3 Assay wurde zur Quantifizierung von PCA3 und PSA RNA entwickelt die im Erststrahlurin nach einer digitalen Rektaluntersuchung mit drei Druckanwendungen pro Lappen gesammelt wurden Der Urin wird mit dem Progensa PCA3 Transportkit f r Urinproben verarbeitet Die Stabilit t von PCA3 und PSA RNA in Urin und behandeltem Urin wurde durch berwachung der RNA Kopie Spiegel in Urinproben die gem der nachstehenden Anleitung gesammelt wurden bestimmt A Anleitung zur Sammlung und Verarbeitung von Urinproben 1 Es kann sich als n tzlich erweisen wenn der Patient eine gro e Menge Wasser ca 500 mL trinkt um ausreichend Urin f r die Probenahme sicherzustellen F hren Sie unmittelbar vor der Urinsammlung eine digitale Rektaluntersuchung wie nachstehend beschrieben durch Dr cken Sie fest genug auf die Prostata um die Oberfl che ungef hr 1 cm weit einzudr cken und zwar f r beide Lappen jeweils von der Basis bis zum Apex und von der lateralen zu
36. er ab und trocknen Sie sie dann vollst ndig mit Papiert chern ab I Assaykontamination 1 Verunreinigungsmaterialien k nnen eingeschleppt werden wenn w hrend des Assayverfahrens nicht mit gen gend Vorsicht vorgegangen wird Progensa PCA3 Assay 26 501377DE Rev 001 Progensa PCA3 Testverfahren 2 TTUs m ssen mit Deaktivierungsfl ssigkeit wie unter Testverfahren beschrieben dekontaminiert werden Die TTUs d rfen nicht wiederverwendet werden 3 F hren Sie eine regelm ige Dekontamination der Ger te und Arbeitsfl chen nach der oben in Dekontamination beschriebenen Anleitung durch 4 Wie in jedem Reagenzsystem kann berm iger Puder auf manchen Handschuhen eine Kontamination ge ffneter R hrchen verursachen Es wird empfohlen dass der Bediener ungepuderte Handschuhe tr gt Progensa PCA3 Assay 27 501377DE Rev 001 Qualit tskontrollverfahren Progensa PCA3 Qualit tskontrollverfahren A Validit t des Laufs 1 Kalibratoren und Kontrollen m ssen bei allen Tests und auf dem gleichen St nder wie die Testproben mitgef hrt werden Damit ein Lauf als g ltig angesehen werden kann m ssen die folgenden Kriterien erf llt sein Durchschnittliche RLU des Kalibrators 2 gt RLU Grenzwert wobei RLU Grenzwert durchschnittliche RLU des Kalibrators 1 1 645 Standardabweichungen der Kalibrator 1 RLU Replikate 1 645 Standardabweichungen der Kalibrator 2 RLU Replikate Durchschnittliche interpolier
37. erglichen Der mediane PCA3 RNA c mL Wert lag unter der Nachweisgrenze des Assays f r Proben von Probanden nach der Prostatektomie w hrend der mediane PCAS3 RNA c mL Wert f r Probanden vor der Biopsie 7243 c mL betrug Diese Daten best tigen dass PCA3 RNA in Urin aus der Prostata stammt Gewebespezifit t Gesamt RNA wurde aus Gewebe von zwei spezifischen m nnlichen Spendern pro Gewebetyp extrahiert zum Probenverd nner hinzugegeben 10 ng pro Reaktion und mit dem Progensa PCA3 Assay getestet Das Prostatagewebe war unter den in Tabelle 7 aufgef hrten Gewebetypen der einzige der ber der PCA3 RNA Nachweisgrenze nachgewiesen wurde Progensa PCA3 Assay 37 501377DE Rev 001 Leistungsmerkmale Progensa PCA3 Tabelle 7 M nnliche Gewebetypen die auf PCA3 RNA getestet wurden Gewebetyp Blase normal Niere Blase Tumor Penis Knochenmark Prostata Ductus deferens Vesikulardr se Epididymus Testis d Interferierende Substanzen Die in Tabelle 8 aufgef hrten Substanzen wurden zu Aliquots von gepooltem behandeltem m nnlichen Urin hinzugef gt Die Proben wurden mit dem Progensa PCA3 Assay gem CLSI EP7 A2 2005 getestet 6 Bei den aufgef hrten Konzentrationen wurde keine Assay Interferenz beobachtet Tabelle 8 F r Progensa PCA3 Assay Interferenz getestete Substanzen Therapeutische Wirkstoffe Therapeutische Wirkstoffe Fortsetzung Substanz Tes
38. fallsdatum auf dem Entnahmer hrchen berschritten wurde Progensa PCA3 Assay 10 501377DE Rev 001 Progensa PCA3 Warnhinweise und Vorsichtsma nahmen L Alle Proben bei den angegebenen Temperaturen lagern Die Assayleistung kann durch Verwendung von falsch gelagerten Patientenproben beeintr chtigt werden Spezifische Anweisungen finden Sie unter Probenentnahme transport und lagerung Urinproben k nnen infekti s sein Bei der Durchf hrung dieses Assays sind die allgemein g ltigen Vorsichtsma nahmen zu befolgen Der Laborleiter muss die richtigen Handhabungs und Entsorgungsverfahren festlegen Nur Personal das ber eine angemessene Qualifikation und Kompetenz in der Verwendung des Progensa PCA3 Assays verf gt und in der Handhabung von infekti sen Materialien geschult wurde darf dieses Verfahren ausf hren Kreuzkontamination in den Probenbehandlungsschritten vermeiden Urinproben k nnen hohe Konzentrationen des RNA Target enthalten Es ist sicherzustellen dass die Probenbeh lter nicht miteinander in Ber hrung kommen Benutzte Materialien d rfen nicht ber offene Beh lter hinweg entsorgt werden Wenn Handschuhe mit einer Probe in Kontakt kommen die Handschuhe wechseln um Kreuzkontamination zu vermeiden Assaybezogen O P Diesen Kit nicht nach dem Verfallsdatum verwenden F r den Progensa PCA3 Assay Kit PCA3 Assayreagenzien mit verschiedenen Chargennummern nicht austauschen vermischen oder kombin
39. gsmerkmale Tabelle 9 Kopie Wiederfindung des Progensa PCA3 Assay Bekannte Analyt Konzentration Gemessene a y 4 Konzentration cmL Wiederfindung c mL 750 808 108 7500 7618 102 PCA3 18 750 18 722 100 75 000 70 287 94 20 000 23 684 118 250 000 278 373 111 PSA 2 500 000 599 941 120 1 750 000 1 960 775 112 4 Linearit t und linearer Bereich Der lineare Bereich des Progensa PCA3 Assays wurde gem CLSI EP6 A 2003 8 auf der Grundlage der linearen Regressionsanalyse kleinste Quadrate bestimmt Zwei S tze Verd nnungsreihen wurden von Proben die hohe PCA3 und PSA RNA Konzentrationen aufwiesen hergestellt Ein Satz wurde in behandeltem weiblichen Urin verd nnt und ein Satz wurde in Probenverd nner verd nnt Die Verd nnungen erstreckten sich ber den gesamten Assay G ltigkeitsbereich zwischen dem niedrigsten und dem h chsten positiven Kalibrator f r jeden Analyten Mit dem Assay gemessene Ergebnisse f r den PCA3 Analyten und den PSA Analyten zeigten eine direkte proportionale Beziehung zwischen den getesteten Verd nnungen und den berichteten Analyt c mL Es trat kein signifikanter Verd nnungsmatrixeffekt auf Siehe Abbildung 4 PCA3 Analyt PSA Analyt 3 0EFOB mmm y 0 9932x 613 87 A y 1 0875x 27 939 E R2 0 9998 2 5E 06 R2 0 9991 z S O Probenverd nner A 3 O Probenverd nner amp 2 0E 06 T E
40. h der Sammlung in das Urinproben Transportr hrchen transferiert werden Andernfalls muss die Probe zur ckgewiesen und eine neue Probe entnommen werden Unbehandelte Urinproben nicht einfrieren Progensa PCA3 Assay 15 501377DE Rev 001 Probenentnahme transport und lagerung Progensa PCA3 5 Zur Verarbeitung von Urinproben diese fest verschlie en und 5 x umdrehen um die Zellen zu resuspendieren Entfernen Sie den Deckel des Urinproben Transportr hrchens und transferieren Sie mit der bereitgestellten Einweg Transferpipette 2 5 mL des gesammelten Urins in das R hrchen Das richtige Urinvolumen wurde hinzugef gt wenn das Fl ssigkeitsniveau zwischen den schwarzen F lllinien auf dem Etikett des Urinproben Transportr hrchens liegt Verschlie en Sie das Urintransportr hrchen wieder fest und drehen Sie die Urinprobe zum Vermischen 5 Mal um Das wird jetzt als behandelte Urinprobe bezeichnet B Probentransport und lagerung vor dem Test 1 Behandelte Urinproben m ssen im Urinproben Transportr hrchen ins Labor gebracht werden Der Transport kann unter Umgebungsbedingungen ohne Temperatur berwachung oder gefroren erfolgen Es m ssen Versandvorkehrungen getroffen werden um sicherzustellen dass die Proben innerhalb von 5 Tagen nach der Sammlung am Testzentrum eingehen Nach Eingang der Lieferung sollte das Labor das Datum der Probenentnahme auf dem R hrchen berpr fen Proben die unter Umgebungsbedingungen transport
41. hen Nicht infekti se chemilumineszente DNA Sonden getrocknet in sukzinatgepufferter L sung mit lt 5 F llstoff und lt 5 Lithiumlaurylsulfat Progensa PCA3 Assay 5 501377DE Rev 001 Im Lieferumfang enthaltene Reagenzien und Materialien Progensa PCA3 Progensa PSA Beh lter mit Raumtemperatur Lagerung bei 15 C bis 30 C vom Empfang bis zum angegebenen Verfallsdatum Symbol Komponente Menge AR PSA Amplifikationsrekonstitutionsl sung 1x 9 3 mL W ssrige L sung mit Konservierungsmitteln lt 1 Parabene ER PCA3 PSA Enzymrekonstitutionsl sung 1x3 3 mL HEPES gepufferte L sung mit einer oberfl chenaktiven Substanz 10 Triton X 100 und 20 Glycerol PR PCA3 PSA Sondenrekonstitutionsl sung 1x 12 4 mL Sukzinatgepufferte L sung mit lt 5 Lithiumlaurylsulfat S PCA3 PSA Selektionsreagenz 1x 31 mL Boratgepufferte L sung mit oberfl chenaktiver Substanz 1 Triton X 100 TCR PSA Target Capture Reagenz 1x22 mL Nicht infekti se Nukleins ure in HEPES gepufferter L sung mit Festphase Abdeckfolie 1 Packung Rekonstitutionsverbindungsst cke 1 Packung Progensa PSA Kalibrator und Kontrollenkit Lagerung bei 2 C bis 8 C vom Empfang bis zum angegebenen Verfallsdatum Symbol Komponente Menge CAL PSA Kalibrator 1 1x 2 0 mL Phosphatpufferl sung mit lt 5 Lithiumlaurylsulfat CAL PSA Kalibratoren 2 5 4x1 7mL Nicht infekti se PSA Nukleins ure in Phosphatpufferl sung mit
42. htigt sein Progensa PCA3 Assay 35 501377DE Rev 001 Leistungsmerkmale Progensa PCA3 Leistungsmerkmale A Klinische Ergebnisse 1 Diagnostische Sensitivit t und Spezifit t Die Leistungscharakteristika f r den Progensa PCA3 Assay wurden mit Proben von Probanden die an vier geographisch verschiedenen Pr fzentren in Nordamerika aufgenommen wurden bestimmt Die Probandenpopulation bestand aus 529 M nnern f r die eine Prostatabiopsie angesetzt wurde Die demographischen Angaben f r die Probanden sind wie folgt a Durchschnittsalter SA 64 8 Jahre Median 63 Spannweite 32 bis 89 b Durchschnittliche Serum PSA Konzentration 7 9 21 9 ug L 5 6 0 3 bis 484 c Durchschnittliches Prostatavolumen mit transrektalem Ultraschall ermittelt 44 25 cc 39 5 bis 225 d 34 180 529 positive Biopsie f r Prostatakrebs Abbildung 3 zeigt die Korrelation des PCA3 Scores mit der Wahrscheinlichkeit einer positiven Biopsie auf Mit steigendem PCA3 Score stieg das Auftreten einer karzinompositiven Biopsie bei den Probanden an 80 7 70 60 50 40 30 20 4 0 5 9 10 19 20 34 35 49 50 100 gt 100 anhand der Biopsie positiv PCA3 Score lt 5 Anz der Probanden 58 85 104 97 57 86 42 Abbildung 3 Korrelation von PCA3 Score mit Wahrscheinlichkeit einer positiven Biopsie Eine ROC Receiver Operating Characteristic Analyse wurde unter Einsatz der Prosta
43. iagnostischen Standard of Care Algorithmen als Hilfsmittel zur Diagnose von Prostatakrebs bestimmt Zusammenfassung und Erkl rung des Tests Die Verwendung des Serumtests auf prostataspezifisches Antigen PSA zum Prostatakrebsscreening hat zur Biopsiediagnose von kleineren zuvor nicht erkannten Tumoren 1 gef hrt und so ein neues diagnostisches Dilemma geschaffen Nur ein Bruchteil der M nner mit erh hten Serum PSA Werten haben nachweisbaren Prostatakrebs M nner mit mindestens einer negativen Biopsie haben oftmals persistent erh hte Serum PSA Werte die prim r durch eine vergr erte Prostata und benigne Prostatahyperplasie BPH bedingt sind Trotzdem leidet ein signifikanter Anteil der M nner mit leicht erh htem Serum PSA 2 5 4 0 ug L aktuell oder zu einem sp teren Zeitpunkt an klinisch signifikantem Prostatakrebs 1 Obwohl Biopsie noch immer der Goldstandard zum Nachweis von Prostatakrebs ist sind genauere Tests mit besserer Spezifit t erforderlich die als Entscheidungshilfe zur Prostatabiopsie herangezogen werden k nnen PCAS3 auch als PCA3 oder DD3 bezeichnet ist eine nicht kodierende prostataspezifische RNA die in Prostatakrebszellen stark berexprimiert ist und eine mediane 66 fache Upregulation im Vergleich zu benachbartem benignem Gewebe aufweist 2 Im Gegensatz dazu ist die PSA Genexpression in kanzer sen und benignen Prostatazellen hnlich PSA RNA Werte k nnen daher zur Normalisierung f
44. ieden Die Konzentrationsinformationen werden auf einer Karte in der Verpackung der Kalibrator und Kontrollfl schchen bereitgestellt und werden zur Kalibration und Bestimmung der Validit t des Laufs verwendet D Pr fung der Konzentrationsinformationen berpr fen Sie mit dem Systemadministrator der Progensa PCA3 Assay Software dass die Konzentrationsinformationen f r die getesteten Chargen der Progensa PCA3 und PSA Kalibratoren und Kontrollenkits eingegeben wurden N here Informationen finden Sie in der Kurzanleitung f r den Progensa PCA3 Assay Kurzanleitung oder dem Handbuch des Systemadministrators f r die Progensa PCA3 Assay Software Hinweis Die Eingabe der Konzentrationsinformationen ist vor der ersten Verwendung jeder neuen Kalibrator und Kontrollenkit Charge erforderlich Anschlie ende L ufe mit Kalibratoren und Kontrollen aus der gleichen Kitcharge erfordern keine weitere Ma nahme E Einrichtung des Worklist Editor Generieren Sie mit dem Hologic Worklist Editor eine Assaylauf Arbeitsliste auf einem Computer der sich im Pr amplifikationsbereich befindet Informationen zur Verwendung des Worklist Editor finden Sie in der Kurzanleitung oder Bedienungsanleitung f r den Hologic Worklist Editor Bei Verwendung des TECAN Freedom EVO 100 4 Ger ts finden Sie n here Anweisungen auch in den TECAN Freedom EVO Anwendungshinweisen F Probenvorbereitung 1 Lassen Sie die Kalibratoren und Kontrollen vor dem Test auf Raumtem
45. ieren d h f r jeden Analyten m ssen die Assayreagenzien im gek hlten Beh lter und im Beh lter mit Raumtemperatur aus der gleichen Charge stammen Die Assayreagenzien k nnen mit verschiedenen Chargen des Kalibrator und Kontrollenkits verwendet werden Aptima Assayfl ssigkeitskits sind untereinander austauschbar PCA3 und PSA Reagenzienkits m ssen nicht die gleiche Chargennummer haben Alle Assayreagenzien bei den angegebenen Temperaturen lagern Die Assayleistung kann durch Verwendung von falsch gelagerten Assayreagenzien beeintr chtigt werden Spezifische Anweisungen finden Sie unter Lagerungs und Handhabungsbedingungen und Verfahrenshinweise Zur Assaydeaktivierung siehe Testverfahren muss die Konzentration des Bleichmittels nach der 1 1 Verd nnung mit Deaktivierungspuffer mindestens 2 5 0 35 M Natriumhypochlorit betragen Um die zur Deaktivierung erforderliche Endkonzentration zu erhalten muss die Natriumhypochloritl sung daher zu Beginn 5 bis 7 0 7 M bis 1 0 M Natriumhypochlorit enthalten Es m ssen Spitzen mit hydrophoben St pseln verwendet werden Mindestens zwei Wiederholungspipettierer m ssen zur ausschlie lichen Verwendung mit diesem Test reserviert werden einer zur Verwendung in den Pr amplifikationsschritten und einer zur Verwendung in den Schritten nach der Amplifikation Ein Mikropipettierer muss f r die Verwendung im Probentransfer reserviert werden es sei denn es wird ein TECAN Freedom EVO 1
46. iert wurden und mehr als 5 Tage nach der Probenentnahme eingehen m ssen verworfen werden In diesem Fall eine neue Probe anfordern Das Labor kann die Proben bis zu 14 Tage bei 2 C bis 8 C lagern bevor sie entsorgt werden m ssen Wenn l ngere Zeiten erforderlich sind die zul ssigen Lagerfristen bei verschiedenen Temperaturen in Tabelle 2 beachten Tabelle 2 Lagerzeitr ume f r behandelte Urinproben Lagertemperatur Zeit Lagerung und Versand von verarbeiteten Proben Bis zu 5 Tage Nach Eingang am Testzentrum 2 C bis 8 C Bis zu 14 Tage 35 C bis 15 C Bis zu 11 Monate Bei oder unter 65 C Bis zu 36 Monate F r Transport unter Umgebungsbedingungen oder gefroren zul ssige Zeit Nach der gek hlten Lagerung zul ssige Zeit 2 Die behandelten Urinproben k nnen bis zu 5 Einfrier Auftau Zyklen unterzogen werden C Probenlagerung nach dem Test 1 Die bereits getesteten Proben m ssen aufrecht in einem St nder gelagert werden 2 Die Urinproben Transportr hrchen sind wenn sie nicht mit einem unversehrten Deckel wieder verschlossen werden mit einem neuen Barriereschutz aus sauberem Plastik oder Folie zu bedecken Wenn getestete Proben gefroren oder versandt werden m ssen entfernen Sie die durchl ssigen Kappen und setzen Sie neue undurchl ssige Kappen auf die Urinproben Transportgef e Falls die Proben f r den Test an eine andere Einrichtung transportiert werden m ssen sin
47. ilit t bis Verfallsdatum Amplifikationsreagenzien 2 C bis 8 C bis Verfallsdatum 30 Tage bei 2 C bis 8 C Sondenreagenzien 2 C bis 8 C bis Verfallsdatum 30 Tage bei 2 C bis 8 C Enzymreagenz 2 C bis 8 C bis Verfallsdatum 30 Tage bei 2 C bis 8 C Target Capture Reagenzien 15 C bis 30 C bis Verfallsdatum 30 Tage bei 15 C bis 30 C en 2 C bis 30 C bis Verfallsdatum Nicht zutr Einmalgebrauch Sondenrekonstitutionsl sung 2 C bis 30 C bis Verfallsdatum Nicht zutr Einmalgebrauch Enzymrekonstitutionsl sung 2 C bis 30 C bis Verfallsdatum Nicht zutr Einmalgebrauch Selektionsreagenz 2 C bis 30 C bis Verfallsdatum 30 Tage bei 15 C bis 30 C Kalibratoren 2 C bis 8 C bis Verfallsdatum Nicht zutr ein Lauf Kontrollen 2 C bis 8 C bis Verfallsdatum Nicht zutr ein Lauf lreagenz 15 C bis 30 C bis Verfallsdatum 30 Tage bei 15 C bis 30 C Waschl sung 15 C bis 30 C bis Verfallsdatum 30 Tage bei 15 C bis 30 C Puffer f r 15 C bis 30 C bis Verfallsdatum 28 Tage bei 15 C bis 30 C Deaktivierungsfl ssigkeit Kann bis zu 4 mal f r andere Assayl ufe verwendet werden vorausgesetzt dass die gesamte Lagerungszeit bei Raumtemperatur nicht mehr als 24 Stunden betr gt B Das Target Capture Reagenz nicht bei Temperaturen unter 15 C lagern C Das Sondenreagenz und das rekonstituierte Sondenreagenz sind lichtempfindlich Diese Reagenzien m ssen vor l ngerer Lichtexposition bei der
48. in die Flaschen ffnung Abbildung 2 Schritt 2 d Drehen Sie die zusammengebauten Flaschen langsam um Lassen Sie die L sung aus der Flasche in das Glasfl schchen ablaufen Abbildung 2 Schritt 3 Warten Sie bis das Iyophilisierte Reagenz in L sung gegangen ist und schwenken Sie dann die L sung behutsam im Glasfl schchen um sie zu vermischen Beim Schwenken der Flasche Schaumbildung vermeiden Abbildung 2 Schritt 4 e Drehen Sie die zusammengebaute Einheit um und neigen Sie sie im Winkel von 45 um die Schaumbildung auf ein Mindestma zu beschr nken Abbildung 2 Schritt 5 Lassen Sie die gesamte Fl ssigkeit in die Plastikflasche zur cklaufen f Entfernen Sie das Rekonstitutionsverbindungsst ck und das Glasfl schchen Abbildung 2 Schritt 6 g Verschlie en Sie das Plastikfl schchen wieder Abbildung 2 Schritt 7 Tragen Sie auf allen Fl schchen mit rekonstituierten Reagenzien die Initialen des Bedieners und das Rekonstitutionsdatum ein Achten Sie darauf dass Sie den Analyten PCA3 oder PSA auf den Sondenreagenzfl schchen vermerken h Entsorgen Sie das Rekonstitutionsverbindungsst ck und das Glasfl schchen Abbildung 2 Schritt 8 Zuvor rekonstituiertes Sonden Amplifikations und Enzymreagenz muss vor dem Start des Assays auf Raumtemperatur 15 C bis 30 C gebracht werden Siehe Lagerungs und Handhabungsbedingungen zum Poolen von Restreagenzien Wenn das rekonstituierte Amplifikationsreagenz ein Pr zipi
49. istet Progensa PCA3 Assay 29 501377DE Rev 001 Interpretation der Ergebnisse Progensa PCA3 2 Manuelle Anpassung Wenn die PCA3 und PSA Analyte in verschiedenen L ufen getestet werden kann die Software den PCA3 Score nicht automatisch ermitteln Ein manueller Abgleich der Analytergebnisse ist erforderlich um den PCA3 Score oder PCA3 Score Bereich zu ermitteln siehe die Kurzanleitung oder Bedienungsanleitung f r die Progensa PCA3 Assay Software Eine manuelle Anpassung kann auch f r Ergebnisse erforderlich sein die in der Ausnahmen bersicht des Laufberichts mit Rohdaten aufgelistet sind Nach der manuellen Anpassung wird der PCA3 Score bzw die Scores f r die angepasste Probe bzw Proben in einem neuen Bericht mit Verh ltnisdaten aufgelistet C Auswertung von Berichten 1 PCA3 Score PCA3 Wert Hinweis Nur PCA3 Scores und PCA3 Score Bereiche die im Bericht mit Verh ltnisdaten aufgelistet werden k nnen berichtet werden Ergebnisse die in der Ausnahmen bersicht erscheinen bed rfen m glicherweise weiterer Ma nahmen und sind nicht berichtf hig Der PCA3 Score wird als das Verh ltnis von PCAS RNA Kopien zu PSA RNA Kopien multipliziert mit 1000 berechnet Die PCA3 Scores k nnen nur mit Ergebnissen aus g ltigen L ufen und Patientenproben berechnet werden Ung ltige L ufe und ung ltige Proben m ssen noch einmal f r diesen Analyten getestet werden n here Einzelheiten siehe Wiederholungstest
50. m die Amplikonkontamination im Assay auf ein Mindestma zu beschr nken Dieser speziell reservierte Bereich sollte vom Pr amplifikationsbereich wo die Reagenzvorbereitung Target Capture und Amplifikation stattfinden entfernt sein Damit keine Kontamination der Laborbereiche mit Amplikon auftritt sollte im Laborbereich ein Arbeitsfluss in einer Richtung von der Reagenzvorbereitung bis nach der Amplifikation implementiert werden Proben Ger te und Reagenzien sollten nicht in einen Bereich zur ckgebracht werden wo ein vorheriger Schritt ausgef hrt wurde Das Personal sollte nicht in vorherige Arbeitsbereiche gehen ohne sachm ige Sicherheitsvorkehrungen gegen Kontamination zu treffen Probenbezogen Nach der Zugabe von Urin muss der F llstand im Urintransportgef zun chst zwischen den beiden schwarzen Markierungslinien auf dem Gef etikett liegen Sonst muss die Probe verworfen werden Um die Probenintegrit t zu wahren m ssen w hrend des Probenversands die ordnungsgem en Lagerbedingungen aufrecht erhalten werden Die Probenstabilit t unter anderen Versandbedingungen als den hier empfohlenen wurde nicht beurteilt Die Verfallsdaten auf den Probenentnahmekits gelten f r die Entnahmestelle und nicht f r die Testeinrichtung Zu irgendeinem Zeitpunkt vor dem Verfallsdatum des Probenentnahmekits gesammelte Proben die gem der Packungsbeilage transportiert und gelagert wurden sind g ltig f r Tests auch wenn das Ver
51. nverarbeitung zur Target RNA Amplifikation bzw zum Nachweis von Amplikon Progensa PCA3 Assay 2 501377DE Rev 001 Progensa PCA3 Allgemeine Informationen Bei der Ausf hrung des Progensa PCA3 Assay im Labor werden die Ziel RNA Molek le von den Urinproben mittels Target Capture isoliert Oligonukleotide F nger Oligonukleotide die zu sequenzspezifischen Regionen der Targets komplement r sind werden an die Targets in der Urinprobe hybridisiert F r jedes Target wird ein separates F nger Oligonukleotid verwendet Das hybridisierte Target wird dann auf magnetischen Mikropartikeln erfasst die von der Urinprobe in einem Magnetfeld getrennt werden In Waschschritten werden f r das Verfahren unwesentliche Komponenten aus dem Reaktionsr hrchen entfernt Die magnetische Trennung und Waschschritte werden mit einem Target Capture System durchgef hrt Die Target Amplifikation erfolgt mittels TMA d h ein transkriptionsbasiertes Nukleins ureamplifikationsverfahren das zwei Enzyme reverse MMLV Moloney Mausleuk mievirus Transkriptase und T7 RNA Polymerase verwendet F r jedes Target wird eine spezifische Reihe von Primern verwendet Die reverse Transkriptase wird zur Erzeugung einer DNA Desoxyribonukleins ure Kopie die eine Promotersequenz f r T7 RNA Polymerase enth lt der Target Sequenz verwendet T7 RNA Polymerase produziert mehrere Kopien des RNA Amplikons vom Template der DNA Kopie Die Detektion erfolgt mit HPA unte
52. nzien Vorratsbeh lter 40 mL Viertelmodul 104765 Geteilter Reagenzien Vorratsbeh lter 19 mL x 2 Viertelmodul 901172 Transportr hrchen 302521 Ersatzkappen durchl ssig 302520 Ersatzkappen undurchl ssig 103036A Progensa PCA3 Assay 9 501377DE Rev 001 Warnhinweise und Vorsichtsma nahmen Progensa PCA3 Warnhinweise und Vorsichtsma nahmen A B In vitro Diagnostikum Nur f r den US Export Laborbezogen C Nur die im Lieferumfang enthaltenen oder angegebenen Einweg Laborprodukte verwenden Die normalen Vorsichtsma nahmen im Labor ergreifen In den ausgewiesenen Arbeitsbereichen nicht essen trinken oder rauchen Ungepuderte Einweghandschuhe Augenschutz und Laborkittel beim Umgang mit Urinproben und Kitreagenzien tragen Nach der Handhabung von Urinproben und Kitreagenzien die H nde gr ndlich waschen Warnung Reizmittel tzmittel Kontakt von Auto Detect 1 und Auto Detect 2 mit der Haut den Augen und Schleimh uten vermeiden Bei Kontakt dieser Fl ssigkeiten mit der Haut oder den Augen den betroffenen Bereich mit Wasser abwaschen Bei Versch tten sind diese Fl ssigkeiten vor dem Aufwischen mit Wasser zu verd nnen Arbeitsfl chen Pipetten und andere Ger te m ssen regelm ig mit einer 2 5 igen bis 3 5 igen 0 35 M bis 0 5 M Natriumhypochloritl sung dekontaminiert werden siehe Verfahrenshinweise Ein getrennter Bereich f r die Schritte nach der Amplifikation wird dringend empfohlen u
53. obe in Probenverd nner verd nnen Wertebereich AB Sn Ja Wiederholungstest beider Analyte f AB E cHoder l durchf hren ber zul ssigem ber zul ssigem Probe in Probenverd nner verd nnen Wertebereich Wertebereich Ja Wiederholungstest beider Analyte f F durchf hren Uno lti unter zul ssigem Probe weist ungen gend RNA f r eine nguig Wertebereich Nein korrekte Analyse auf Eine neue Probe muss a b e h oder i G vom Patienten entnommen werden unter zul ssigem Probe weist ungen gend RNA f r eine Im Bereich i 7 2 Wertebereich Nein korrekte Analyse auf Eine neue Probe muss kein Code G vom Patienten entnommen werden ber zul ssigem unter zul ssigem Probe weist ungen gend RNA f r eine Wertebereich Wertebereich Nein korrekte Analyse auf Eine neue Probe muss f G vom Patienten entnommen werden unter zul ssigem unter zul ssigem Probe weist ungen gend RNA f r eine Wertebereich Wertebereich Nein korrekte Analyse auf Eine neue Probe muss 9 G vom Patienten entnommen werden Eine vollst ndige Liste der Analysecodes finden Sie in der Bedienungsanleitung der Progensa PCA3 Assay Software Gilt nur f r ung ltige Proben innerhalb eines g ltigen Laufs Wenn Proben aufgrund eines ung ltigen Laufs ung ltig waren werden die Ergebnisse in der Ausnahmen bersicht aufgelistet weitere Informationen siehe Auswertung der Ergebnisse in der Ausnahmen bersicht Progensa PCA3
54. oden in Kontakt lassen oder schnell anklopfen da ansonsten zu viel Schaum in der Vakuumfalle entstehen kann 12 Nach Abschluss der Aspiration werfen Sie die Spitzen in die Original Spitzenkassette aus Wiederholen Sie die Aspirationsschritte f r die restlichen TTUs wobei Sie eine gesonderte Spitze f r jedes Reaktionsr hrchen verwenden 13 Setzen Sie jeweils die Dosiervorrichtung ber die TTU und geben Sie unter Verwendung der Dispensierstationspumpe 1 0 mL Waschl sung in jedes TTU R hrchen 14 Bedecken Sie die R hrchen mit Abdeckfolie und nehmen Sie den St nder aus dem TCS Mischen Sie den St nder einmal mit dem Vortex Mischer f r mehrere R hrchen N here Informationen finden Sie unter Verfahrenshinweise 15 Setzen Sie den St nder 5 bis 10 Minuten auf den magnetischen Sockel des TCS 16 Aspirieren Sie die gesamte Fl ssigkeit wie in Schritte 11 und 12 beschrieben 17 Entfernen Sie den St nder nach der letzten Aspiration aus dem Sockel des TCS und unterziehen Sie die R hrchen einer Sichtpr fung um sicherzustellen dass die gesamte Fl ssigkeit aspiriert wurde und dass alle R hrchen Magnetpartikel Pellets enthalten Wenn Fl ssigkeit sichtbar ist setzen Sie den St nder noch einmal 2 Minuten auf den Sockel des TCS und wiederholen die Aspiration f r diese TTU mit den gleichen Spitzen die zuvor f r jedes Reaktionsr hrchen verwendet wurden Wenn nach Abschluss der Aspiration IRGENDEIN Magnetpartikel Pellet sichtbar is
55. peratur kommen Vermischen Sie die Fl schchen durch vorsichtiges Umdrehen Progensa PCA3 Assay 19 501377DE Rev 001 Testverfahren Progensa PCA3 2 Lassen Sie die Proben vor dem Test auf Raumtemperatur kommen Proben nicht mit dem Vortex Mischer mischen Die Proben sollten durch gelegentliches vorsichtiges Umdrehen w hrend der Erw rmungszeit vermischt werden Informationen ber Pr zipitate die nicht in L sung gehen und den Umgang mit gefrorenen Proben entnehmen Sie bitte dem Abschnitt Verfahrenshinweise G Pr amplifikation Die Pr amplifikationsumgebung muss 15 C bis 30 C betragen F hren Sie die L ufe f r beide St nder parallel aus Bei Verwendung des SB100 Dry Heat Bath Vortexers siehe die SB1T00 Anwendungshinweise Bei Verwendung des TECAN Freedom EVO 100 4 Ger ts finden Sie n here Anweisungen auch in den TECAN Freedom EVO Anwendungshinweisen 1 10 Durch Schwenken oder Umdrehen des Target Capture Reagenzes TCR gr ndlich vermischen Geben Sie mit dem Wiederholungspipettierer 100 uL des analytspezifischen TCR in das entsprechende Reaktionsr hrchen Durchstechen Sie den Deckel des Kalibratorfl schchens mit dem Mikropipettierer und geben Sie 400 uL des Kalibrators in das vorschriftsm ig beschriftete Reaktionsr hrchen hinzu Ziehen Sie mit der gleichen Pipettenspitze Replikatzugaben aus dem Fl schchen durch den durchstochenen Deckel ab Verwenden Sie neue Pipettenspitzen f r jedes Kalibratorfl
56. r Einsatz von einstr ngigen chemilumineszent markierten Nukleins uresonden die zum Amplikon komplement r sind F r jedes Target Amplikon werden separate Sonden verwendet Die markierten Nukleins uresonden hybridisieren spezifisch an das Amplikon Das Selektionsreagenz differenziert zwischen hybridisierten und nicht hybridisierten Sonden indem es die Markierung auf den nicht hybridisierten Sonden inaktiviert W hrend des Nachweisvorgangs wird das von der hybridisierten Sonde erzeugte Chemilumineszenzsignal mit einem Luminometer gemessen und in relativen Lichteinheiten RLU angegeben PCA3 und PSA RNA werden in getrennten R hrchen quantifiziert und der PCA3 Score wird bestimmt Kalibratoren mit bekannten Mengen von PCA3 oder PSA RNA Transkript werden in jedem Assaylauf mitgef hrt und zur Erzeugung einer Standardkurve verwendet PCA3 und PSA Kontrollen werden ebenfalls mitgef hrt um die Richtigkeit der Ergebnisse zu best tigen die von der Standardkurve interpoliert werden Progensa PCA3 Assay 3 501377DE Rev 001 Im Lieferumfang enthaltene Reagenzien und Materialien Progensa PCA3 Im Lieferumfang enthaltene Reagenzien und Materialien Hinweis Informationen zu eventuell mit den Reagenzien verbundenen Gefahren und Vorsichtshinweisen finden Sie in der Sicherheitsdatenblatt Sammlung Safety Data Sheet Library unter www hologic com sds Die Reagenzien und Materialien die im Lieferumfang des Progensa PCA3 PSA Assay Kit f r den
57. r medialen Linie wie in Abbildung 1 gezeigt F hren Sie genau drei Druckanwendungen f r jeden Lappen aus Dies soll keine Prostatamassage sein Basis Linker Lappen Rechter Lappen Apex Abbildung 1 Richtige Richtung der Druckanwendung auf die Prostata Weisen Sie den Patienten an nach der digitalen Rektaluntersuchung in einem entsprechend etikettierten Urinsammelbecher Urin aus dem Erststrahlurin ca 20 bis 30 mL des ersten Harnstrahls aufzufangen Dies muss eine Probe aus dem ersten Harnabgang nach der digitalen Rektaluntersuchung sein Verwenden Sie einen Sammelbecher ohne Konservierungsstoffe Wenn ein Patient den Harnfluss nicht mittendrin stoppen kann und mehr als die angeforderten 20 bis 30 mL Urin bereitstellt behalten Sie die gesamte Menge Mindestens 2 5 mL Urin sind zur Durchf hrung des Progensa PCA3 Assays erforderlich Mindestens diese Menge muss von einem Patienten der nicht das gesamte angeforderte Urinvolumen liefern kann bereitgestellt werden Sonst muss die Probe verworfen werden Hinweis Bei einem sehr hohen Urinvolumen kann die Konzentration der Analyten PCA3 und PSA absinken was gelegentlich zu einer ung ltigen Probe f hren kann Der Patient sollte daher nicht versuchen den Urinsammelbecher ganz zu f llen Wenn Urinproben nicht sofort behandelt werden m ssen die unbehandelten Urinproben bei 2 C bis 8 C oder auf Eis gelagert werden Die gek hlte unbehandelte Urinprobe muss innerhalb von vier Stunden nac
58. sreagenz 1x31 mL Boratgepufferte L sung mit oberfl chenaktiver Substanz 1 Triton X 100 TCR PCA3 Target Capture Reagenz 1x22 mL Nicht infekti se Nukleins ure in HEPES gepufferter L sung mit Festphase Abdeckfolie 1 Packung Rekonstitutionsverbindungsst cke 1 Packung Progensa PCA3 Assay 4 501377DE Rev 001 Progensa PCA3 Im Lieferumfang enthaltene Reagenzien und Materialien Progensa PCAS Kalibrator und Kontrollenkit Lagerung bei 2 C bis 8 C vom Empfang bis zum angegebenen Verfallsdatum Symbol Komponente Menge CAL PCA3 Kalibrator 1 1x2 0 mL Phosphatpufferl sung mit lt 5 Lithiumlaurylsulfat CAL PCA3 Kalibratoren 2 5 4x1 7 mL Nicht infekti se PCAS Nukleins ure in Phosphatpufferl sung mit lt 5 Lithiumlaurylsulfat PC PCA3 Positivkontrollen 2x1 7mL Nicht infekti se PCAS Nukleins ure in Phosphatpufferl sung mit lt 5 Lithiumlaurylsulfat Blatt mit Konzentrationsinformationen f r PCA3 1 Blatt Progensa PSA 100 Reaktionen Kit Progensa PSA gek hlter Beh lter Lagerung bei 2 C bis 8 C vom Empfang bis zum angegebenen Verfallsdatum Symbol Komponente Menge A PSA Amplifikationsreagenz 1 Fl schchen Nicht infekti se Nukleins uren getrocknet in HEPES gepufferter L sung mit lt 10 F llstoff E PCA3 PSA Enzymreagenz 1 Fl schchen Reverse Transkriptase und RNA Polymerase getrocknet in HEPES gepufferter L sung mit lt 10 F llstoff P PSA Sondenreagenz 1 Fl schc
59. sse A Berichttypen 1 Laufbericht mit Rohdaten Der Laufbericht mit Rohdaten stellt Informationen zur Laufvalidit t PASS ERFOLGREICH oder FAIL FEHLGESCHLAGEN siehe Qualit tskontrollverfahren und zu den einzelnen Reaktionsr hrchen die mit dem Progensa PCA3 Assay getestet werden bereit Wenn ein Lauf ung ltig ist FAIL FEHLGESCHLAGEN werden alle R hrchen in diesem Lauf als ung ltig ausgewiesen Einzelne R hrchen k nnen jedoch innerhalb eines g ltigen Laufs PASS ERFOLGREICH als ung ltig angesehen werden Bei aufeinanderfolgenden L ufen d h PCA3 und PSA Analyte werden im gleichen Testlauf getestet kann ein Analytlauf ung ltig sein w hrend der andere Analytlauf g ltig ist Die Ausnahmen bersicht findet sich am Ende des Laufberichts mit Rohdaten Bei aufeinanderfolgenden L ufen wo beide Analytl ufe g ltig sind kann es sein dass die Proben die in der Ausnahmen bersicht aufgef hrt sind einen Wiederholungstest eines Analyts erfordern Obwohl ein PCA3 Score Ergebnis in der Ausnahmen bersicht aufgef hrt werden kann gilt dieses Ergebnis nicht als berichtf hig bis eine manuelle Anpassung durchgef hrt wurde und das Ergebnis im Bericht mit Verh ltnisdaten aufgef hrt wird Wenn nur ein Analyt getestet wurde oder wenn ein Analytlauf ung ltig ist werden alle getesten Proben in der Ausnahmen bersicht aufgef hrt Bericht mit Verh ltnisdaten Die Assay Software erzeugt automatisch einen Bericht mit
60. t kann das R hrchen angenommen werden Wenn kein Pellet sichtbar ist sollte die Probe erneut getestet werden Wenn die gleiche Probe in diesem Schritt in einem anschlie enden Lauf kein Magnetpartikel Pellet enth lt kann dies ein Hinweis auf ein probenspezifisches Problem sein In dieser Situation wird die erneute Entnahme der Urinprobe empfohlen H Amplifikation Hinweis Die Enzymzugabe zu einem Reaktionsst nder Schritte 6 und 7 unten muss in 90 Sekunden oder weniger ausgef hrt werden F hren Sie Schritte 6 und 7 auf einem St nder durch bevor Sie sie auf dem zweiten St nder wiederholen Bei Verwendung des SB100 Dry Heat Bath Vortexers siehe die SB100 Anwendungshinweise Bei Verwendung des TECAN Freedom EVO 100 4 Ger ts finden Sie n here Anweisungen auch in den TECAN Freedom EVO Anwendungshinweisen Progensa PCA3 Assay 21 501377DE Rev 001 Testverfahren Progensa PCA3 1 8 Geben Sie mit dem Wiederholungspipettierer 75 uL rekonstituiertes analytspezifisches Amplifikationsreagenz in jedes Reaktionsr hrchen Alle Reaktionsmischungen im St nder sollten eine rote F rbung aufweisen Geben Sie mit der Wiederholungspipette 200 uL lreagenz hinzu Decken Sie die R hrchen mit Abdeckfolie ab und mischen Sie sie mit dem Vortex Mischer f r mehrere R hrchen Den St nder bei 62 C 1 C im Pr amplifikationswasserbad f r die Dauer von 10 5 Minuten inkubieren Den St nder in ein Wasserbad mit 42 C 1
61. tabiopsie als Referenzmethode gem CLSI GP10 A 1995 durchgef hrt 4 F r den Progensa PCA3 Assay betrug der Bereich unter der Kurve AUC 0 685 95 Vertrauensintervall 0 637 bis 0 733 Tabelle 6 zeigt die diagnostische Sensitivit t und Spezifit t bei verschiedenen PCA3 Score Grenzwerten Jedes Labor sollte den Grenzwert f r die diagnostische Sensitivit t oder Spezifit t festlegen siehe Interpretation der Ergebnisse Tabelle 6 Diagnostische Sensitivit t und Spezifit t des Progensa PCA3 Assays bei verschiedenen PCAS3 Score Grenzwerten PCA3 Score Grenzwert 5 10 15 25 35 50 95 Sensitivit t 96 85 77 63 53 41 17 Spezifit t 14 33 47 61 74 84 95 Progensa PCA3 Assay 36 501377DE Rev 001 Proge nsa PCA3 Leistungsmerkmale 2 Probenstabilit tsstudien a Stabilit t in Vollurin Von 10 Probanden wurde Erststrahlurin gesammelt und vor der Behandlung durch Zugabe von Urintransportmedium UTM bei 2 C bis 8 C oder bei 30 C gelagert Bei 2 C bis 8 C wurde nach 4 Stunden in manchen Proben eine signifikante PCA3 und PSA RNA Degradation beobachtet Daher muss Vollurin innerhalb von 4 Stunden behandelt werden Bei 30 C wurde in weniger als 1 Stunde eine signifikante Degradation beobachtet Daher muss Vollurin vor der Behandlung stets gek hlt oder auf Eis gelagert werden Stabilit t in behandeltem Urin Zw lf Proben wurden bei 4 C oder 30 C bis zu 38 Tage inkubiert Bei 4 C waren PCA3 und PSA
62. tat enth lt das bei Raumtemperatur nicht wieder in L sung geht erw rmen Sie es im Pr amplifikationsbereich 1 bis 2 Minuten auf 62 C 1 C Wenn das rekonstituierte Sondenreagenz ein Pr zipitat enth lt das bei Raumtemperatur nicht wieder in L sung geht erw rmen Sie es im Bereich f r die Schritte nach der Amplifikation 1 bis 2 Minuten auf 62 C 1 C Nach diesen Erw rmungsschritten kann das rekonstituierte Reagenz verwendet werden selbst wenn noch ein Restpr zipitat vorhanden ist Nach der Resuspension die Fl schchen durch vorsichtiges Umdrehen vermischen C St nderaufbau Der f r Target Capture Probentransfer und Amplifikation verwendete Wiederholungspipettierer muss ausschlie lich zur Verwendung in diesen Schritten reserviert sein siehe Warnhinweise und Vorsichtsma nahmen 1 Bauen Sie einen St nder f r den PCA3 Analyten und einen anderen St nder f r den PSA Analyten auf Hinweis Bei einer geringen Anzahl an Proben k nnen beide Analyte in einem St nder getestet werden Bei Verwendung des TECAN Freedom EVO 100 4 Ger ts m ssen f r jeden Analyten separate St nder verwendet werden Es d rfen jeweils nicht mehr als zwei volle St nder 20 TTUs getestet werden Setzen Sie ausreichend Zehn R hrchen Einheiten TTUs in den TTU St nder f r die Kalibratoren Kontrollen und Proben f r jeden Analyten Progensa PCA3 Assay 18 501377DE Rev 001 Progensa PCA3 Testverfahren 3 Beschriften Sie die
63. te Kalibrator 5 Wiederfindung 100 30 Durchschnittliche interpolierte Kontrolle A Wiederfindung 100 60 Durchschnittliche interpolierte Kontrolle B Wiederfindung 100 35 Die PCAS3 Software beurteilt die Ergebnisse automatisch entsprechend den vorstehenden Kriterien und berichtet den Laufstatus als PASS ERFOLGREICH wenn die Validit tskriterien erf llt sind und FAIL FEHLGESCHLAGEN wenn die Validit tskriterien nicht erf llt sind Wenn der Laufstatus FAIL FEHLGESCHLAGEN ist sind alle Testergebnisse im gleichen Lauf f r diesen Analyt ung ltig und d rfen nicht berichtet werden Wenn ein Lauf ung ltig ist muss der Lauf f r diesen Analyten wiederholt werden siehe Interpretation der Ergebnisse Wenn der Lauf f r den anderen Analyten g ltig ist k nnen diese Ergebnisse in der Datenanalyse mit dem g ltigen Wiederholungslauf des ersten Analyten verwendet werden B Probenvalidit t Innerhalb eines g ltigen Laufs k nnen einzelne Probenergebnisse als UNG LTIG angesehen werden und im Laufbericht mit Rohdaten angezeigt werden siehe Interpretation der Ergebnisse Obwohl einzelne Replikate einer Probe g ltig sein k nnen wird eine Probe ung ltig gemacht wenn die interpolierte c mL Differenz zwischen den Replikaten ber 600 liegt Der Test der Probe f r diesen Analyten muss wiederholt werden Progensa PCA3 Assay 28 501377DE Rev 001 Progensa PCA3 Interpretation der Ergebnisse Interpretation der Ergebni
64. tenposition 1 setzen und das WASCH Protokoll ein Mal durchf hren Stellen Sie sicher dass ausreichende Volumina an Auto Detect 1 und Auto Detect 2 zur Durchf hrung der Reaktionen vorhanden sind Laden Sie die TTUs in das Luminometer indem Sie sich nach dem Diagramm im Luminometer richten Wenn beide Analyten aufeinanderfolgende L ufe getestet werden laden Sie alle PCA3 TTUs zuerst unmittelbar gefolgt von allen PSA TTUs Melden Sie sich am Computer an Klicken Sie auf NEW RUN Neuer Lauf und w hlen Sie das entsprechende Assayprotokoll und die Konzentrationen Klicken Sie auf NEXT Weiter um den Durchlauf zu beginnen Hinweis Der Lauf muss innerhalb von 2 Stunden vom Ende der Inkubation bei 62 C im Selektionsschritt abgeschlossen werden Bereiten Sie Deaktivierungsfl ssigkeit vor indem Sie 5 ige bis 7 ige 0 7 M bis 1 0 M Natriumhypochloritl sung und Puffer f r Deaktivierungsfl ssigkeit zu gleichen Volumenteilen in einem Plastikbeh lter mit gro em Verschluss vermischen Beschriften Sie den Plastikbeh lter einschl Verfallsdatum Deaktivierungsfl ssigkeit ist bei Raumtemperatur 4 Wochen lang stabil Nach Abschluss des Laufs erzeugt die Assay Software zwei Laufberichte einen Laufbericht mit Rohdaten und einen Bericht mit Verh ltnisdaten wenn die L ufe aufeinanderfolgende L ufe sind siehe Qualit tskontrollverfahren und Interpretation der Ergebnisse Entfernen Sie nach Abschluss des Laufs die gebrauchten
65. tkonzentration Substanz Testkonzentration Acetaminophen Codein 5 34 umol L Uroxatral 30 mg L Atorvastatin 25 mg L Doxazosin 1 33 umol L Lisinopril 0 74 umol L Terazosin 7 8 umol L Amlodipin 245 umol L Finasterid 15 mg L Atenolol 37 6 umol L Tamsulosin 1 2 ug L Sulfasalazin 754 umol L Metformin 310 umol L Esomeprazol 120 mg L Sildenafil 12 9 pmol L Allopurinol 294 umol L Saw Palmetto S gepalme 1600 mg L Diphenhydramin 19 6 umol L Selen 0 275 mg L Acetaminophen 1324 umol L Acetylsalicyls ure 3 62 mmol L Urinbestandteile Ibuprofen 2425 umol L Substanz Testkonzentration Furosemid 181 umol L Harns ure 1 4 mmol L Ciprofloxacin 30 2 umol L H moglobin 2 g L Levaquin 48 6 umol L Wei e Blutk rperchen 4 56 x 10 Zellen L Doxycyclin 67 5 umol L Erythrozyten 3 06 x 10 Zellen L Fluoxetinhydrochlorid 11 2 umol L Albumin 50 g L Flutamid 1500 mg L Bilirubin unkonjugiert 342 g L Dutasterid 1 5 mg L IgG 60 g L 3 Genauigkeit Die Genauigkeit des Progensa PCA3 Assays wurde gem CLSI EP15 A2 2005 7 beurteilt PCA3 und PSA RNA Transkripte wurden mit UV vis Spektrophotometrie quantifiziert zu behandeltem normalem weiblichem Urin keine nachweisbare PCA3 oder PSA RNA hinzugef gt und die Konzentrationen wurden im Progensa PCA3 Assay gemessen Die prozentuale Wiederfindung wurde als Verh ltnis von gemessenen c mL zu hinzugef gten c mL multipliziert mit 100 berechnet Progensa PCA3 Assay 38 501377DE Rev 001 Proge nsa PCA3 Leistun
66. tzt eine gelbe Farbe aufweisen b Bedecken Sie die R hrchen mit Abdeckfolie und mischen Sie sie 10 Sekunden oder bis sich eine gleichm ige Farbe einstellt in einem Vortex Mischer f r mehrere R hrchen c Den St nder bei 62 C 1 C in einem Wasserbad f r die Dauer von 20 5 Minuten inkubieren d Entfernen Sie den St nder aus dem Wasserbad und inkubieren Sie ihn 5 1 Minute bei Raumtemperatur 2 Auswahl a Geben Sie mit dem Wiederholungspipettierer 250 uL rekonstituiertes Selektionsreagenz in jedes Reaktionsr hrchen Alle Reaktionsmischungen sollten nun rosa sein b Decken Sie die R hrchen mit Abdeckfolie ab mischen Sie den St nder 10 Sekunden in einem Vortex Mischer oder bis sich eine gleichm ige F rbung Progensa PCA3 Assay 22 501377DE Rev 001 Progensa PCA3 Testverfahren einstellt und inkubieren Sie den St nder 10 1 Minuten bei 62 C 1 C in einem Wasserbad c Nehmen Sie den St nder aus dem Wasserbad Inkubieren Sie den St nder bei Raumtemperatur f r 15 3 Minuten J Detektion Bei Einsatz des Leader HC Luminometers beziehen Sie sich bitte auf die Bedienungsanleitung f r das Leader HC Luminometer F r die Verwendung der Progensa PCA3 Assay Software beziehen Sie sich auf die Kurzanleitung und das Handbuch des Systemadministrators und die Bedienungsanleitung f r die Progensa PCA3 Assay Software 1 Bereiten Sie das Leader HC Luminometer vor indem Sie eine leere TTU in Kasset

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