Aptima HIV-1 Quant Dx assay package insert
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1. 10612513 Tecan Aptima HIV 1 Quant Dx Assay 13 AW 11853 801 Rev 001 DE Panther System Aptima Ersatzkappen undurchlassig Ersatzkappen fur Reagenzien L sungen zur Rekonstitution von Amplifikations Enzym und Promotorreagenz CL0041 100 Kappen TCR CL0040 100 Kappen Labortischunterlagen mit Kunststoffunterschicht auf der Ruckseite Fusselfreie T cher Pipettierer Spitzen Es k nnen prim re Entnahmer hrchen mit folgenden Abmessungen verwendet werden 13 mm x 100 mm 13 mm x 75 mm 16 mm x 100 mm Zentrifuge Vortexer Optionale Materialien Material Probenaliquotr hrchen Specimen Aliquot Tubes SAT 100 St Kappe f r Transportr hrchen 100 St Kappe f r SAT Aptima Probenverd nner Kit mit zus tzlichen Aptima HIV 1 Quant Dx Assay Kontrollen Kit mit zus tzlichem Aptima HIV 1 Quant Dx Assay Kalibrator Transferpipetten Handels bliche Panels z B HIV 1 von Quality Control for Molecular Diagnostics oder Panel des College of American Pathologists zur Erhebung der HIV Viruslast oder SeraCare ACCURUN HIV Panels Wattest bchen Schwenkvorrichtung f r R hrchen 103036A Kat Nr 503762 504415 PRD 03003 PRD 03002 PRD 03001 Aptima HIV 1 Quant Dx Assay 14 AW 11853 801 Rev 001 DE Aptima Panther System Testverfahren mit dem Panther System Hinweis N here Verfahrensinformationen finden Sie im Panther System Operator s Manual Bedienungsanleitung f r2. 5 Rheumatoide Arthritis RA 6 Multiple Sklerose MS 7 Hyperglobulin mie IgG oder IgM ist akzeptabel 8 Erh hte Alaninaminotransferase ALT 9 Alkoholbedingte Zirrhose AC 10 Multiples Myelom MM 11 Lip misch erh hte Lipide 12 Ikterisch erh htes Bilirubin 13 H molysiert erh htes H moglobin 14 Erh htes Proteinalbumin 15 HCV Antik rper 16 HBV Antik rper 17 HIV 2 Antik rper Spezifit t Die Spezifit t des Aptima HIV 1 Quant Dx Assays wurde mithilfe von 120 frischen und 510 gefrorenen HIV 1 negativen Plasmaproben und mithilfe von 120 frischen und 510 gefrorenen HIV 1 negativen Serumproben Alle Ergebnisse waren nicht reaktiv Spezifit t 100 95 KI 99 4 100 Tabelle 10 Serum und Plasmaspezifit t Frisches Gefrorenes Gesamt Frisches Gefrorenes Gesamt Plasma Plasma plasma Serum Serum serum G ltige Replikate n 120 510 630 120 510 630 Nicht reaktiv 120 510 630 120 510 630 EEN 100 100 100 100 100 100 Spezifit t 95 Kl 970 100 99 3 100 99 4 100 97 0 100 99 3 100 99 4 100 Aptima HIV 1 Quant Dx Assay 31 AW 11853 801 Rev 001 DE Leistung Aptima Analytische Spezifitat Die mogliche Kreuzreaktivitat auf Erreger Tabelle 11 im Aptima HIV 1 Quant Dx Assay wurde mit oder ohne 3 log Kopien von HIV 1 RNA in HIV 1 negativem Plasma evaluiert Bei Gegenwart der Erreger wurde keine Interferenz der Leistung des Assays festgestellt Tabelle 11 Zur Ermittlung der Analyses
3. Alle Ergebnisse gt 7 00 log Kopien ml wurden in einer weiteren Analyse gesch tzt Methodenkorrelation Die Leistung des Aptima HIV 1 Quant Dx Assays wurde mit dem eines anderen Assays mit CE Kennzeichnung verglichen indem unverd nnte klinische Plasmaproben von HIV 1 Infizierten auf vier Panther Systemen mit zwei Reagenzchargen getestet wurden F r die lineare Regression wurden insgesamt 340 gefrorene und 103 frische Plasmaproben mit quantifizierbaren Ergebnissen sowohl im Aptima HIV 1 Quant Dx Assay als auch im Vergleichsassay verwendet Abbildung 8 Die Proben beinhalteten die HIV 1 Gruppe M Subtyp A B C D F G H CRFO1_AE CRFO2_AG Aptima HIV 1 Quant Dx Assay 34 AW 11853 801 Rev 001 DE Aptima Leistung 8 00 7 00 wm Y 1 05x 0 05 S o R 0 94 4 Aptima HIV 1 Quant Dx Assay log Kopien ml 0 00 1 00 2 00 3 00 4 00 5 00 6 00 7 00 8 00 Vergleichsassay log Kopien ml Abbildung 8 Korrelation zwischen dem Aptima HIV 1 Quant Dx Assay und einem Vergleichsassay Diagnostische Ubereinstimmung Zur Beurteilung der diagnostischen Ubereinstimmung wurden Patientenproben von HIV 1 positiven Personen mit dem Aptima HIV 1 Quant Dx Assay und einem qualitativen HIV 1 Vergleichsassay mit CE Kennzeichnung getestet 413 Patientenproben lieferten g ltige Ergebnisse Tabelle 14 Die Ergebnisse beider Assays wurden folgenderweise kategorisiert Jedes quantifizierbare oder nachweisbare Ergebnis wurde als Nachgewies
4. 0 08 1 17 Die Variabilit t aufgrund von manchen Faktoren kann numerisch negativ sein und zwar dann wenn die Variabilit t aufgrund dieser Faktoren sehr klein ist In diesem Fall gilt SA 0 und VK 0 Pro Panel wurden insgesamt 162 Replikate getestet es wurden nur Replikate mit numerischem Wert analysiert Diese Panelprobe wurde 1 3 mit Probenverd nner verd nnt und zur Evaluierung der Pr zision mit der verd nnten Probe getestet Stoffe mit m glicher beeintr chtigender Wirkung Es wurde die Anf lligkeit des Aptima HIV 1 Quant Dx Assays gegen ber Interferenzen durch erh hte Konzentrationen endogener Stoffe und von Wirkstoffen die HIV 1 Infizierten h ufig verordnet werden evaluiert Es wurden HIV 1 negative Plasmaproben und Proben verwendet die bis zu einer Konzentration von 3 log Kopien ml mit HIV 1 RNA versetzt worden waren Bei Vorhandensein von Albumin 90 mg ml H moglobin 5 mg ml Triglyzeriden 30 mg ml oder unkonjugiertem Bilirubin 0 2 mg ml wurde keine Interferenz der Leistung des Aptima HIV 1 Quant Dx Assays festgestellt Bei Vorhandensein der in Tabelle 8 gelisteten exogenen Stoffe in Konzentrationen vom mindestens Dreifachen der Cmax Humanplasma wurde keine Interferenz der Leistung des Aptima HIV 1 Quant Dx Assays festgestellt Aptima HIV 1 Quant Dx Assay 29 AW 11853 801 Rev 001 DE Leistung Aptima Tabelle 8 Exogene Stoffe Pool von exogenen Getestet
5. 801 Rev 001 DE Allgemeine Informationen Aptima P Assay Reagenzien aus Kits mit verschiedenen Hauptchargennummern nicht austauschen vermischen oder kombinieren Assay Fl ssigkeiten k nnen verschiedene Chargennummern aufweisen Kontrollen und Kalibratoren k nnen verschiedene Chargennummern aufweisen Q Eine mikrobielle und Nuklease Kontamination der Reagenzien ist zu vermeiden R Alle Assay Reagenzien verschlie en und bei den angegebenen Temperaturen lagern Die Assayleistung kann durch Verwendung von falsch gelagerten Assay Reagenzien beeintr chtigt sein F r weitere Informationen siehe Lagerungs und Handhabungsbedingungen f r Reagenzien und Testverfahren mit dem Panther System S Assay Reagenzien oder Fl ssigkeiten nicht kombinieren au er auf ausdr ckliche Anweisung F llen Sie Reagenzien oder Fl ssigkeiten nicht nach Das Panther System berpr ft die Reagenzien F llst nde Aptima HIV 1 Quant Dx Assay 6 AW 11853 801 Rev 001 DE Aptima Allgemeine Informationen Lagerungs und Handhabungsbedingungen fur Reagenzien A Die folgende Tabelle zeigt die Lagerungsbedingungen und die Stabilitat der Reagenzien der Kontrollen und des Kalibrators Lagerung im Offenes Kit rekonstituiert Reagenz unge ffneten Zustand Lagerung Stabilit t qHIV 1 Amplifikationsreagenz 2 C bis 8 C qHIV 1 Amplifikationsrekonstitutionsl sung 2 C bis 8 C 2 C bis 8 C 30 Tage qHIV 1 Enzy
6. Ei Ei a o CH Fo so e 2 Ei Ei Aptima HIV 1 Quant Dx log Kopien ml En S S R 0 9995 0 00 5 0 00 1 00 2 00 3 00 4 00 5 00 6 00 7 00 8 00 Target Konzentration log Kopien ml Abbildung 6 Linearit t des Aptima HIV 1 Quant Dx Assays Linearit t bei HIV 1 Subtypen und Gruppen Die lineare Reaktion des Aptima HIV 1 Quant Dx Assays in Gruppe M Subtyp A B C D F G H CRFO1_AE und in den Gruppen N und O wurde durch Testung von pufferverd nnten HIV 1 Transkript Panels im Konzentrationsbereich von 2 00 bis 6 50 log Kopien ml best tigt Die Tests erfolgten auf vier Panther Systemen in sechs L ufen Im gesamten Testbereich wurde Linearit t aufgezeigt Abbildung 7 8 00 E 700 EC 2 6 00 x Subtyp A 2 Em Subtyp B x a Subtyp C A 4 00 x Subtyp D Subtyp AE CG 3 00 Subtyp F Subtyp G I 200 Subtyp H Gruppe N 3 100 Gruppe O lt 0 00 0 00 1 00 2 00 3 00 4 00 5 00 6 00 7 00 8 00 Target Konzentration log Kopien ml Abbildung 7 Linearit t in Gruppe M Subtyp A B C D F G H CRF01_AE und in den Gruppen N und O Aptima HIV 1 Quant Dx Assay 26 AW 11853 801 Rev 001 DE Aptima Leistung Bestimmung der unteren Quantifizierungsgrenze mithilfe des 3 internationalen WHO Standards Die untere Quantifizierungsgrenze Lower Limit of Quantitation LLOQ ist definiert als die niedrigste Konzentration bei der HIV 1 RNA innerhalb eines Gesamtfehlers Total Error TE zuverl s
7. Nukleins ureamplifikationsmethode bei der zwei Enzyme die reverse Transkriptase des MMLV Moloney murines Leuk mievirus und die T7 RNA Polymerase zum Einsatz kommen Die reverse Transkriptase erzeugt eine DNA Kopie mit einer Promotorsequenz f r die T7 RNA Polymerase der Targetsequenz Die T7 RNA Polymerase produziert mehrere Kopien des RNA Amplikons vom Template der DNA Kopie Der Aptima HIV 1 Quant Dx Assay verwendet die TMA Methode zur Amplifizierung von zwei Regionen in der HIV 1 RNA Pol und LTR Zur Amplifikation dieser bestimmten Regionen werden spezielle Primer zur Amplifizierung der HIV 1 Gruppen M N und O verwendet Das Design der Primer und der Ansatz mit zwei Targets gew hrleisten eine akkurate Detektion und Quantifizierung von HIV 1 Die Detektion wird erreicht indem einzelstr ngige Nukleins ure Fackeln verwendet werden die w hrend der Amplifikation des Targets vorhanden sind und spezifisch und in Echtzeit an das Amplikon hybridisieren Jede Fackel hat ein Fluorophor und einen Quencher Wenn die Fackel nicht mit dem Amplikon hybridisiert befindet sich der Quencher nahe bei dem Fluorophor und Aptima HIV 1 Quant Dx Assay 3 AW 11853 801 Rev 001 DE Allgemeine Informationen Aptima unterdr ckt die Fluoreszenz Bindet die Fackel jedoch an das Amplikon ist der Abstand zwischen Quencher und Fluorophor gr er sodass dieses bei Anregung mit einer Lichtquelle ein Signal mit einer bestimmten Wellenl nge abgibt Je me
8. dem Tod infizierter Zellen und Aptima HIV 1 Quant Dx Assay 2 AW 11853 801 Rev 001 DE Aptima Allgemeine Informationen der Erneuerung von CD4 positiven Zellen die Waage halten sodass die Plasmaviramie und die Zahl der CD4 positiven Zellen relativ stabil bleiben 20 22 Quantitative Messungen von HIV im peripheren Blut haben gezeigt dass h here Viruszahlen m glicherweise mit einem erh hten Risiko einer klinischen Progression von HIV assoziierten Krankheiten einhergehen Verringerungen der Viruszahl im Plasma dagegen mit einem verringerten Risiko f r eine klinische Progression 23 25 Die Viruszahl im peripheren Blut l sst sich durch Messung des HIV p24 Antigens im Serum durch quantitative Kultur von HIV aus Plasma oder durch direkte Messung viraler RNA im Plasma mittels Nukleins ure Amplifikations oder Signalamplifikationstechnologien quantifizieren 26 30 Die Detektion einer HIV 1 Infektion beruht derzeit in erster Linie auf serologischen Tests auf Antik rper und oder p24 Antigen mit einem Immunassay Die US amerikanischen Centers for Disease Control empfehlen die Verwendung eines Antik rper und RNA Tests zur Diagnose einer akuten HIV Infektion 31 Wenngleich sich die Empfindlichkeit der Detektion von Antik rpern gegen HIV 1 und p24 Antigen verbessert hat besteht nach wie vor ein Zeitfenster zwischen dem Zeitpunkt der Infektion und dem Zeitpunkt der Detektion anhand von serologischen Markern Dieses Zeitfenster h ng
9. den Anweisungen im Panther System Operator s Manual Bedienungsanleitung f r das Panther System und den Verfahrenshinweise ein Achten Sie darauf Reagenzienstander und TCR Adapter der geeigneten Gr e zu verwenden 2 Laden Sie Proben in den Probenst nder F hren Sie f r jedes Probenr hrchen Patientenproben und ggf Kalibrator und Kontrollen die folgenden Schritte durch a L sen Sie die Kappe eines Probenr hrchens aber nehmen Sie sie noch nicht ab Hinweis Achten Sie besonders darauf eine Kontamination durch Aerosolausbreitung zu vermeiden L sen Sie vorsichtig die Kappen der Proben b Laden Sie das Probenr hrchen in den Probenst nder Wiederholen Sie Schritt 2 a und 2 b f r jede verbleibende Probe d Wenn die Proben in den Probenst nder geladen sind nehmen Sie die Kappe von jedem Probenr hrchen ab und entsorgen Sie sie in einen Probenst nder F hren Aptima HIV 1 Quant Dx Assay 18 AW 11853 801 Rev 001 DE Aptima Panther System Sie die Kappen zur Vermeidung von Kontamination nicht Uber einen Probenst nder oder ein Probenr hrchen e Verwenden Sie ggf eine neue Einwegtransferpipette um etwaige Luft oder Schaumblaschen zum Platzen zu bringen f Wenn die letzte Kappe abgenommen worden ist fixieren Sie den Probenhalter wenn gleichzeitig andere Assays und Probentypen analysiert werden und laden Sie den Probenstander in ein Probenfach g Wiederholen Sie Schritt 2 a bis 2 f fur den nachsten Pro
10. einer geeigneten Schwenkvorrichtung platziert werden um ihren Inhalt gr ndlich zu mischen Es ist darauf zu achten dass der R hrcheninhalt vor dem Gebrauch komplett aufgetaut ist Hinweis Beim Umdrehen des Kalibrators und der Kontrollen ist starke Schaumbildung zu vermeiden Schaum beeintr chtigt die F llstandsmessung im Panther System 2 Wenn der R hrcheninhalt aufgetaut ist trocknen Sie das R hrchen au en mit einem sauberen trockenen Einwegtuch ab 3 Zur Verhinderung einer Kontamination sollten Sie die R hrchen nicht ffnen C Reagenzrekonstitution Vorbereitung eines neuen Kits Hinweis Die Reagenzrekonstitution sollte vor Beginn von Arbeiten mit dem Panther System durchgef hrt werden 1 Gehen Sie folgenderweise vor um das Target Capture Reagenz TCR vorzubereiten a Nehmen Sie das TCR aus der Lagerung 2 C bis 8 C berpr fen Sie die Chargennummer auf der TCR Flasche um sicherzustellen dass sie mit der Chargennummer auf dem Hauptchargen Barcodeblatt bereinstimmt b Sch tteln Sie die TCR Flasche sofort kr ftig 10 Mal Lassen Sie die TCR Flasche mindestens 45 Minuten bei 15 C bis 30 C erw rmen W hrend dieser Zeit sollten Sie das TCR Flaschchen mindestens alle 10 Minuten schwenken und umdrehen Option Das TCR Flaschchen kann auf einer geeigneten Schwenkvorrichtung folgenderweise vorbereitet werden Nehmen Sie das TCR aus der Lagerung 2 C bis 8 C und sch tteln Sie es sofort kr ftig 10 Mal
11. vom mindestens 95 festgestellt wird Die LOD wurde durch Testung von Panels bestimmt die aus Verd nnungen des 3 Internationalen HIV 1 Standards der WHO Subtyp B NIBSC Code 10 152 in HIV 1 negativem Plasma bestanden Es wurden 30 Replikate jeder Verd nnung auf drei Panther Systemen mit drei Reagenzchargen analysiert d h insgesamt 90 Replikate pro Verd nnung Gem CLSI EP17 A2 sind die Ergebnisse der Reagenzcharge mit der h chsten Konzentration f r die vorhergesagte Nachweisgrenze als LOD definiert und in Tabelle 2 gezeigt Die LOD f r den Aptima HIV 1 Quant Dx Assay betr gt per Probit Analyse 13 Kopien ml 37 IE ml 0 35 Kopien 1 IE Tabelle 2 Nachweisgrenze des Aptima HIV 1 Quant Dx Assays bei Verwendung des 3 internationalen HIV 1 Standards der WHO Vorhergesagte Konzentration Nachweisgrenze Kopien ml 10 1 3 20 1 8 30 2 3 40 2 7 50 3 2 60 3 9 70 4 9 80 6 5 90 9 5 95 13 1 Nachweisgrenze bei HIV 1 Subtypen und Gruppen F r die HIV 1 Gruppe M Subtyp A C D F G CRFO1_AE CRFO2_AG und die Gruppen N und O wurden sieben Panels hergestellt indem HIV 1 negatives Humanplasma entweder mit einer HIV 1 Viruskultur oder positiven klinischen Patientenproben versetzt wurde 0 bis 40 Kopien ml Jede Panelprobe wurde in 30 Replikaten mit zwei Reagenzchargen getestet d h insgesamt 60 Replikate pro Panelprobe Die Zuweisung der Konzentration zu klinischen Patientenproben oder Vi
12. 2 Test von Abbott durchgef hrt mit folgenden Ausnahmen Die Panels PRB974 PRB975 und PRB978 wurden mit dem Anti HIV 1 2 Test von Siemens getestet Die Tests auf HIV 1 p24 Antigen wurden mit dem HIV 1 p24 Ag Test von Coulter durchgef hrt mit folgenden Ausnahmen Die Panels PRB974 PRB975 und PRB978 wurden mit dem p24 Ag Test von BioMerieux getestet Alle Blutproben in diesem Panel waren im Anti HIV 1 2 Antik rper Test nicht reaktiv Als Basis f r die Tage bis zum ersten reaktiven Ergebnis wurde der letzte Blutentnahmetag verwendet Serum Plasma quivalenz Studie Zur Beurteilung der quivalenz wurden Serum und Plasmapaare 25 HIV 1 positiv und 25 HIV 1 negativ und 40 Proben die mit HIV 1 Kultur 50 1 000 000 Kopien ml in HIV 1 negativem Plasma und Serum versetzt worden waren mit dem Aptima HIV 1 Quant Dx Assay getestet Die negative bereinstimmung betrug 100 0 95 KI 96 6 100 0 Die positive bereinstimmung betrug 98 4 95 KI 95 4 99 5 Aptima HIV 1 Quant Dx Assay 36 AW 11853 801 Rev 001 DE Aptima Bibliographie Bibliographie 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 Barre Sinoussi F J C Chermann F Rey M T Nugeyre S Chamaret J Gruest C Dauguet C Axler Blin F Vezinet Brun C Rouziuuz W Rozenbaum and L Montagnier 1983 Isolation of a T lymphotropic retrovirus from a patient at risk for Acquired Immune Deficiency Sy
13. 30 1 54 1 20 0 25 0 34 0 84 1 94 1 74 0 22 0 21 0 64 2 42 2 30 0 19 0 12 0 50 1 15 0 86 0 40 0 29 1 09 1 24 0 95 0 37 0 29 1 03 1 42 1 10 0 33 0 32 0 98 g 1 54 1 27 0 36 0 27 0 99 1 94 1 79 0 18 0 15 0 51 2 42 2 35 0 12 0 07 0 31 Aptima HIV 1 Quant Dx Assay 27 AW 11853 801 Rev 001 DE Leistung Aptima Tabelle 5 Aufstellung von LLOQ mit dem 3 internationalen HIV 1 Standard der WHO 3 Reagenzchargen Reagenzcharge log N log ee 1 1 27 19 2 1 20 16 3 1 10 13 Verifizierung der LLOQ bei HIV 1 Subtypen und Gruppen Die LLOQ bei HIV 1 Subtypen und Gruppen wurde gem CLSI EP17 A2 37 verifiziert F r jede HIV 1 Gruppe M Subtyp A B C D F G CRFO1_AE CRFO2_AG und die Gruppen N und O wurden Panels hergestellt indem gepooltes HIV 1 negatives Humanplasma entweder mit nat rlich infizierten klinischen Proben oder klinischen Isolaten versetzt wurde Die Tests bestanden aus insgesamt 30 Replikaten pro Panelprobe Die Daten in Tabelle 6 zeigen die niedrigste Konzentration f r jeden Subtyp bzw jede Gruppe bei dem bzw der der TE unter 1 log Kopien ml bestand Die h chste LLOQ f r alle getesteten Subtypen und Gruppen betrug 30 Kopien ml daher wurde dieser h here Wert als LLOQ f r den Aptima HIV 1 Quant Dx Assay gew hlt Tabelle 6 Verifizierung des LLOQ nach HIV 1 Subtyp oder Gruppe Panel log See Subtyp A 30 Subtyp CRF01_AE ER Subtyp CREOZ AG 30 Subtyp B a8 Su
14. HOLOGIC Aptima Aptima HIV 1 Quant Dx Assay In vitro Diagnostikum Nur zum US Export Allgemeine Informationen cee eee eee eee eee eee 2 Verwendungszweck 2 Zusammenfassung und Testerkl rung 0000 0c cee eee eee 2 TEStpriNZIP Sege 2 ete ded de a een Se dE ee eae deeb edad bape ee 3 Warnhinweise und Vorsichtsma nahmen 4 Lagerungs und Handhabungsbedingungen f r Reagenzien 2222220 eee 7 Probenentnahme und Lagerung 8 Proben auf dem Panther System 11 Transport von Patientenproben 11 Panther System EE d Et EEN E EECH EE Ee EE 12 Im Lieferumfang enthaltene Reagenzien und Materialien 12 Erforderliche jedoch nicht im Lieferumfang enthaltene Materialien 22 2222 e2ee en 13 Optionale Materialien 14 Testverfahren mit dem Panther System 15 Verfahrenshinweise 2 24 224 ke arg 20 Qualtatskontrolle i2 r 0uuuu0 ARTE ECK ee niaeee tans we wee wee aewn eee 21 Assay Kalibrier ung sise rered ereke si dea ae eee ee ae SER Ae ea 21 Negativ und Positivkontrollen 21 Interner Kalibrator Interne Kontrolle 21 Testauswertung ain ia 0 00 m 0 th a im a RER 22 Le 22 Sa ee ea eee ere 23 Leistung 4 u ann nn nee a eich 24 Kee 24 Nachweisgrenze bei HIV 1 Subtypen und Gruppen 24 Dtearer Bereich sa 4 5 4 40 3 a 22 4 Se ee rd nern gobs rede ne 25 Linearit t bei HIV 1 Subtypen und Gruppen 26 Bestimmung der unteren Quantifizier
15. IV 1 Quant Dx Assay 4 AW 11853 801 Rev 001 DE Aptima Allgemeine Informationen empfohlen um die Ansammlung von Ablagerungen in Metallrohren und ein dadurch bedingtes Explosionsrisiko zu vermeiden J Zu der guten Standardpraxis f r Molekularbiologie Laboratorien geh rt auch die berwachung der Laborumgebung Zur berwachung der Laborumgebung wird folgende Vorgehensweise empfohlen 1 Einen Tupfer mit Wattespitze und ein SAT bereitlegen 2 Jedes SAT entsprechend beschriften 3 Jedes SAT mit 1 ml Aptima Probenverd nner f llen 4 Zur Erfassung der Oberfl chenproben einen Tupfer leicht mit nukleasefreiem entionisiertem Wasser befeuchten 5 Den Tupfer auf der betreffenden Oberfl che in einer vertikalen Bewegung von oben nach unten f hren W hrend der Probengewinnung den Tupfer etwa eine halbe Drehung drehen 6 Die Tupferprobe sofort in das R hrchen geben und in dem Verd nner vorsichtig schwenken um m glicherweise auf dem Tupfer vorhandenes Material zu extrahieren Den Tupfer an der Seite des Transportr hrchens ausdr cken um so viel Fl ssigkeit wie m glich zu extrahieren Den Tupfer entsorgen und das R hrchen mit der Kappe verschlie en 7 Die Schritte mit den verbleibenden Tupferproben wiederholen 8 Die Tupferprobe mit dem molekularen Assay testen Probenbezogen K Proben k nnen infekti s sein Bei der Durchf hrung dieses Assays sind die allgemeinen Vorsichtsma nahmen 33 35 zu befolgen Entsprechen
16. J W H W Jaffe A M Hardy W M Morgan R M Selik and T J Dondero 1988 Epidemiology of HIV Infection and AIDS in the United States Science 239 610 616 Gaines H M A von Sydow and L V von Stedingk 1990 Immunological changes in primary HIV 1 infection AIDS 4 995 999 Tindall B and D A Cooper 1991 Primary HIV 1 infection host responses and intervention strategies AIDS 5 1 14 Daar E S T Moudgil R D Meyer and D D Ho 1991 Transient high levels of viremia in patients with primary human immunodeficiency virus type 1 infection N Engl J Med 324 961 964 Clark S J M S Saag and W D Decker 1991 High titers of cytopathic virus in plasma of patients with symptomatic primary HIV 1 infection N Engl J Medicine 324 954 960 Albert J B Abrahamsson K Nagy E Aurelius H Gaines G Nystrom and E M Fenyo 1990 Rapid development of isolate specific neutralizing antibodies after primary HIV 1 infection and consequent emergence of virus variants which resist neutralization by autologous sera AIDS 4 107 112 Horsburgh C R Jr C Y Ou J Jason S D Holmberg I M Longini Jr C Schable K H Mayer A R Lifson G Schochetman J W Ward et al 1989 Duration of human immunodeficiency virus infection before detection of antibody Lancet 16 637 640 Schnittman S M M C Psallidopoulos H C Lane L Thompson M Baseler F Massari C H Fox N P Salzman and A S Fauci 1989 The re
17. LPC qHIV 1 schwach positive Kontrolle Nicht infekt se HIV 1 Armored RNA in defibriniertem Humanplasma mit 5x 1 5 ml Gentamicin und 0 2 Natriumazid als Konservierungsmittel HPC qHIV 1 stark positive Kontrolle Nicht infekt se HIV 1 Armored RNA in defibriniertem Humanplasma mit 5x 1 5 ml Gentamicin und 0 2 Natriumazid als Konservierungsmittel Barcode Etikett der Kontrolle Aptima HIV 1 Quant Dx Kalibrator Kit Kat Nr PRD 03001 Lagerung bei 15 C bis 35 C nach Empfang Symbol Komponente Menge PCAL qHIV 1 Positivkalibrator 5x25 ml Transkript in gepufferter L sung Barcode Etikett des Kalibrators Erforderliche jedoch nicht im Lieferumfang enthaltene Materialien Hinweis Materialien die von Hologic erh ltlich sind sind mit der Katalognummer aufgef hrt sofern nicht anders angegeben Material Panther System Aptima Assayfl ssigkeitskit Kat Nr 303095 enth lt Aptima Waschl sung Aptima Puffer f r Deaktivierungsfl ssigkeit und Aptima lreagenz Multi R hrchen Einheiten multi tube units MTUs 104772 02 Panther Entsorgungsbeutel Kit 902731 Panther Abfallabdeckung 902714 Oder Panther Durchlaufkit f r Echtzeit Assay enth lt MTUs Entsorgungsbeutel Abfallabdeckungen und Assayfl ssigkeiten Spitzen 1000 ul leitfahig zur Fl ssigkeitsstandmessung Bleichmittel 5 bis 7 0 7 M bis 1 0 M Natriumhypochloritl6sung Ungepuderte Einweghandschuhe 303014 1000 Tests PRD 03455 5000 Tests
18. Plasma oder Serum von Patienten ohne Antik rper gegen HIV 1 weist auf eine akute oder prim re HIV 1 Infektion hin Der Aptima HIV 1 Quant Dx Assay kann erg nzend zur Testung von Patientenproben eingesetzt werden die in zugelassenen HIV Immunassays mehrmals reaktiv waren Erweist sich eine solche Patientenprobe im Aptima HIV 1 Quant Dx Assay als reaktiv ist dies eine Best tigung der HIV 1 Infektion Der Aptima HIV 1 Quant Dx Assay kann auch in Verbindung mit dem klinischen Bild und anderen Labormarkern zur Krankheitsprognose bei HIV 1 Infizierten angewendet werden Der Aptima HIV 1 Quant Dx Assay kann als Hilfsmittel zur berwachung der Wirksamkeit einer antiretroviralen Behandlung durch Messen von Ver nderungen der HIV 1 RNA Konzentration im Plasma herangezogen werden Wenn der Aptima HIV 1 Quant Dx Assay als Hilfsmittel zur Diagnose einer HIV 1 Infektion verwendet wird muss die Leistung hinsichtlich qualitativer Ergebnisse sowohl mit Plasma als auch mit Serumproben festgestellt werden Bei Verwendung als Hilfsmittel bei der berwachung der Wirksamkeit einer antiretroviralen Therapie muss die Leistung hinsichtlich quantitativer Ergebnisse lediglich mit Plasmaproben festgestellt werden Serumproben k nnen f r quantitative Ergebnisse nicht verwendet werden Dieser Assay ist nicht f r die Verwendung beim Screening von Blut oder Plasmaspendern bestimmt Zusammenfassung und Testerkl rung Epidemiologische Studien identifizierten das hu
19. Platzieren Sie die TCR Aptima HIV 1 Quant Dx Assay 15 AW 11853 801 Rev 001 DE Panther System Aptima Flasche auf einer geeigneten Schwenkvorrichtung und lassen Sie sie mindestens 45 Minuten bei 15 C bis 30 C erwarmen c Vergewissern Sie sich vor dem Gebrauch dass alle Prazipitate in L sung und die Magnetpartikel suspendiert sind 2 Zum Rekonstituieren von Amplifikations Enzym und Promotorreagenz gehen Sie folgenderweise auf a Nehmen Sie die gefriergetrockneten Reagenzien und die entsprechenden Rekonstitutionsl sungen aus der Lagerung 2 C bis 8 C Paaren Sie jede Rekonstitutionsl sung mit ihrem gefriergetrockneten Reagenz b Vergewissern Sie sich dass das Etikett der Rekonstitutionsl sung und das des gefriergetrockneten Reagenzes dieselbe Farbe aufweisen Pr fen Sie die Chargennummern auf dem Hauptchargen Barcodeblatt um sicherzustellen dass die richtigen Reagenzien miteinander gepaart wurden i ffnen Sie das Fl schchen mit dem gefriergetrockneten Reagenz indem Sie die Metallversiegelung und den Gummistopfen entfernen ii F hren Sie das gekerbte Ende des Rekonstitutionsverbindungsst cks schwarz fest in das Fl schchen ein Abbildung 5 Schritt 1 iii ffnen Sie die Flasche mit der entsprechenden Rekonstitutionsl sung und legen Sie die Kappe auf eine saubere abgedeckte Arbeitsfl che iv Stellen Sie die Flasche mit der Rekonstitutionsl sung auf eine stabile Fl che d h den Labor
20. Schritt E 6 Wenn eine Patientenprobe verd nnt wird sollte sie sofort nach dem Verd nnung analysiert werden Eine verd nnte Patientenprobe nicht einfrieren Proben auf dem Panther System Proben k nnen insgesamt bis zu 8 Stunden lang unverschlossen auf dem Panther System stehen gelassen werden Solange die Gesamtverweildauer auf dem System vor dem Pipettieren der Probe vom Panther System 8 Stunden nicht bersteigt k nnen die Proben wieder aus dem Panther System genommen und getestet werden Transport von Patientenproben Es ist auf Einhaltung der Probenlagerungsbedingungen entsprechend der Beschreibung unter Probenentnahme und lagerung zu achten Hinweis Ein Versand der Patientenproben muss in bereinstimmung mit geltenden nationalen internationalen und regionalen Frachtbestimmungen erfolgen Aptima HIV 1 Quant Dx Assay 11 AW 11853 801 Rev 001 DE Panther System Aptima Panther System Nachstehend sind die Reagenzien fur den Aptima HIV 1 Quant Dx Assay f r das Panther System gelistet Die Symbole zur Identifikation der Reagenzien sind neben dem Reagenznamen angegeben Im Lieferumfang enthaltene Reagenzien und Materialien Hinweis Informationen zu eventuell mit den Reagenzien verbundenen Gefahren und Vorsichtshinweisen finden Sie in der Sicherheitsdatenblatt Sammlung Safety Data Sheet Library unter www hologic com sds Aptima HIV 1 Quant Dx Assay Kit 100 Tests Kat Nr PRD 03000 1 Assay Box 1 Kalibrato
21. T bis zu 90 Tage lang bei 20 C oder 70 C Aptima HIV 1 Quant Dx Assay 8 AW 11853 801 Rev 001 DE Aptima Allgemeine Informationen Primar 30 C D lt 24 Stunden nach der Entnahme 8 C 8 C 15 C 65 C adi e 2 C 2 C 35 C 85 C lt 3 Tage lt 5 Tage lt 90 Tage Abbildung 1 Bedingungen f r die Lagerung von EDTA ACD Prim rr hrchen 2 PPT Patientenproben PPTs mit zentrifugiertem Plasma k nnen nach der Probenentnahme bis zu 24 Stunden lang bei 2 C bis 30 C gelagert werden Abbildung 2 oberes Rahmenfeld Nach 24 Stunden kann das Plasma unter einer der folgenden Bedingungen l ngere Zeit gelagert werden Abbildung 2 untere Rahmenfelder Im PPT bis zu 3 Tage lang bei 2 C bis 8 C e im SAT bis zu 5 Tage lang bei 2 C bis 8 C oder im PPT oder SAT bis zu 90 Tage lang bei 20 C oder 70 C PPT 30 C EY j lt 24 Stunden nach der Entnahme PPT SAT PPT oder SAT 8 C 8 C 15 C 65 C 2 C X 2 C X 35 Ad oder A lt 3 Tage lt 5 Tage lt 90 Tage Abbildung 2 Bedingungen f r die Lagerung von PPTs Aptima HIV 1 Quant Dx Assay 9 AW 11853 801 Rev 001 DE Allgemeine Informationen Aptima 3 Patientenproben in Serumr hrchen Serumr hrchen mit zentrifugiertem Serum k nnen nach der Probenentnahme bis zu 24 Stunden lang bei 2 C bis 30 C gelagert werden Abbildung 3 oberes Rahmenfel
22. a Verd nnung von Patientenproben die in kleinen Volumen vorliegen Das Volumen von Plasmaproben kann mit dem Aptima Probenverd nner auf das erforderliche Mindestvolumen 700 ul erh ht werden Patientenproben mit mindestens 240 ul Plasma k nnen mit zwei Teilen Probenverd nner 1 3 folgenderweise verd nnt werden i Geben Sie 240 ul Patientenprobe in ein SAT ii Geben Sie 480 ul Probenverd nner hinzu ii Verschlie en Sie das R hrchen iv Drehen Sie es vorsichtig 5 Mal um um den Inhalt zu mischen Patientenproben die 1 3 verd nnt worden sind k nnen mit der 1 3 Option auf dem Panther System getestet werden weitere Informationen finden Sie im Panther System Operator s Manual Bedienungsanleitung f r das Panther System Die Software gibt automatisch das Ergebnis f r die unverd nnte Probe ab indem sie den VerdUnnungsfaktor anwendet Solche Patientenproben werden als verd nnte Patientenproben gekennzeichnet b Verd nnung hochtitriger Patientenproben Liegt das Ergebnis einer Patientenprobe ber dem oberen Quantifizierungsgrenzwert kann sie mit 99 Teilen des Aptima Probenverd nners 1 100 folgenderweise verd nnt werden i Geben Sie 30 ul Patientenprobe in ein SAT ii Geben Sie 2970 ul Probenverd nner hinzu ii Verschlie en Sie das R hrchen iv Drehen Sie es vorsichtig 5 Mal um um den Inhalt zu mischen v Multiplizieren Sie das Ergebnis mit 100 F Vorbereitung des Systems 1 Richten Sie das System entsprechend
23. benstander Aptima HIV 1 Quant Dx Assay 19 AW 11853 801 Rev 001 DE Panther System Aptima Verfahrenshinweise A Kalibrator 1 Der qHIV 1 Positivkalibrator kann in jede Position im Probenstander und in jede Probenfach Bahn auf dem Panther System geladen werden Die Pipettierung der Proben beginnt wenn eine der folgenden beiden Bedingungen erfullt ist a Der Kalibrator wird derzeit vom System verarbeitet b Ein g ltiges Ergebnis f r den Kalibrator ist im System gespeichert Sobald das Kalibratorr hrchen pipettiert worden ist und mit dem Aptima HIV 1 Quant Dx Assayreagenzien Kit verarbeitet wird k nnen bis zu 24 Stunden lang Patientenproben mit dem zugeh rigen rekonstituierten Kit getestet werden es sei denn a Das Kalibratorergebnis ist ung ltig b Das zugeh rige Assayreagenzien Kit wird aus dem System genommen c Das zugeh rige Assayreagenzien Kit hat die Stabilit tsgrenze berschritten Das Kalibratorr hrchen kann einmal getestet werden Wenn versucht wird mehr als drei Replikate aus dem R hrchen zu pipettieren kann es zu Verarbeitungsfehlern kommen B Kontrollen 1 Die R hrchen mit der schwach positiven der stark positiven und der negativen qHIV 1 Kontrolle k nnen in jede Position im Probenstander und in jede Probenfach Bahn auf dem Panther System geladen werden Die Pipettierung der Proben beginnt wenn eine der folgenden beiden Bedingungen erf llt ist a Die Kontrollen werden derzei
24. btyp C 30 Subtyp D 20 Subtyp F 15 Subtyp G a0 Gruppe N 9 Gruppe O 13 Pr zision Zur Beurteilung der Pr zision des Aptima HIV 1 Quant Dx Assays wurde ein Panel aus mit HIV 1 Subtyp B Viruskultur versetztem HIV 1 negativem Plasma von drei Anwendern mit drei Reagenzchargen auf drei Panther Systemen in einem Zeitraum von 20 Tagen getestet Tabelle 7 Das Panel bestand aus einer HIV 1 negativen Panelprobe und acht HIV 1 Aptima HIV 1 Quant Dx Assay 28 AW 11853 801 Rev 001 DE Aptima Leistung positiven Panelproben Die Zuweisung der Konzentration zu klinischen Patientenproben oder Viruskultur Stamml sungen wurde mit einem Vergleichsassay bestimmt Tabelle 7 Prazision des Aptima HIV 1 Quant Dx Assays Zwischen Zwischen Zwischen Zwischen Innerhalb von Anzahl der Mittlere Ger ten Bedienern Chargen Durchl ufen Durchl ufen Gesamt g ltigen Konzentration Replikate log Kopien ml SD Ke SD a SD Vo SD A SD K SD Ve 132 1 74 0 00 0 00 0 03 1 76 0 00 0 00 0 00 0 00 0 16 908 0 16 9 25 157 2 32 0 00 000 005 217 002 091 009 3 75 015 657 0 18 7 92 158 2 42 0 00 0 00 002 061 005 19 007 281 0 13 531 0 15 6 34 162 2 92 0 02 053 008 258 0 04 128 0 09 323 0 09 3 02 0 16 5 30 162 3 80 0 02 057 004 09 005 129 005 1 38 008 2 10 0 12 3 03 159 4 99 0 01 0 19 003 051 005 09 005 1 09 0 04 0 79 0 09 1 73 162 5 73 0 00 0 00 002 038 004 078 004 0 65 0 07 128 0 10 1 67 161 6 75 0 00 0 00 002 026 004 0 62 0 04 054 0 05 080
25. d Nach 24 Stunden kann das Serum unter einer der folgenden Bedingungen l ngere Zeit gelagert werden Abbildung 3 untere Rahmenfelder e Im Serumr hrchen bis zu 5 Tage lang bei 2 C bis 8 C e im SAT bis zu 5 Tage lang bei 2 C bis 8 C oder e im SAT bis zu 7 Tage lang bei 20 C Serumrohrchen 30 C Sek lt 24 Stunden nach der Entnahme Serumr hrchen SAT SAT 8 C 8 C 15 C 2 C X 2 C 35 C lt 5 Tage lt 5 Tage lt 7 Tage Abbildung 3 Bedingungen f r die Lagerung von Serumr hrchen 4 SST Patientenproben SSTs mit zentrifugiertem Serum k nnen nach der Probenentnahme bis zu 24 Stunden lang bei 2 C bis 30 C gelagert werden Abbildung 4 oberes Rahmenfeld Nach 24 Stunden kann das Serum unter einer der folgenden Bedingungen l ngere Zeit gelagert werden Abbildung 4 untere Rahmenfelder Im den SSTs bis zu 5 Tage lang bei 2 C bis 8 C e im SAT bis zu 5 Tage lang bei 2 C bis 8 C oder e im SAT bis zu 7 Tage lang bei 20 C Aptima HIV 1 Quant Dx Assay 10 AW 11853 801 Rev 001 DE Aptima Allgemeine Informationen SST 30 C wA lt 24 Stunden nach der Entnahme Abbildung 4 Bedingungen f r die Lagerung von SSTs C Verd nnung von Plasmaproben Eine Plasmaprobe kann f r die Analyse auf dem Panther System in einem SAT verd nnt werden F r weitere Informationen siehe Testverfahren mit dem Panther System
26. d berf hren Sie sie in die Lagerung 2 C bis 8 C Abbildung 5 Schritt 7 Aptima HIV 1 Quant Dx Assay 16 AW 11853 801 Rev 001 DE Aptima Panther System Warnung Bei der Rekonstitution von Reagenzien berm ige Schaumbildung vermeiden Schaum beeintr chtigt die F llstandsmessung im Panther System 1 N 3 Ce a TO SU ENDE 5 6 7 8 AE la Z SS A Abbildung 5 Rekonstitution von Reagenzien D Reagenzienvorbereitung f r bereits vorbereitete Reagenzien 1 Nehmen Sie die bereits vorbereiteten Reagenzien aus der Lagerung 2 C bis 8 C 2 Bereits vorbereitete Amplifikations Enzym Promotor und TC Reagenzien m ssen vor Beginn des Assays auf eine Temperatur von 15 C bis 30 C gebracht werden 3 Bei bereits vorbereiteten TCR f hren Sie vor dem Laden auf das System den Schritt C 1 oben durch 4 Vor dem Laden auf das System m ssen Amplifikations Enzym und Promotorreagenzien zum gr ndlichen Mischen geschwenkt und umgedreht werden Beim Umdrehen von Reagenzien berm ige Schaumbildung vermeiden 5 F llen Sie Reagenzienflaschen nicht nach Das Panther System erkennt Flaschen die nachgef llt wurden und nimmt sie nicht an E Probenhandhabung 1 Vergewissern Sie sich dass gefrorene Patientenproben ganz aufgetaut sind Mischen Sie die aufgetauten Patientenproben gr ndlich 3 bis 5 Sekunden auf dem Vortexer 2 Bringen Sie die Patientenp
27. d den vor Ort geltenden Bestimmungen sind angemessene Handhabungs und Entsorgungsmethoden festzulegen 36 Dieses Verfahren sollte nur von Personen durchgef hrt werden die in der Anwendung des Aptima HIV 1 Quant Dx Assays und in der Handhabung infekti sen Materials entsprechend geschult sind L Um die Probenintegrit t zu wahren m ssen w hrend des Probenversands die ordnungsgem en Lagerbedingungen aufrecht erhalten werden Die Probenstabilit t unter anderen Versandbedingungen als den hier empfohlenen wurde nicht beurteilt M Kreuzkontamination in den Probenbehandlungsschritten vermeiden Insbesondere ist darauf zu achten beim L sen oder Entfernen von Kappen von Patientenproben eine Kontamination durch Verbreitung von Aerosolen zu vermeiden Die Proben k nnen sehr hohe Konzentrationen von Organismen aufweisen Es ist sicherzustellen dass die Probenbehalter nicht miteinander in Ber hrung kommen Benutzte Materialien d rfen nicht ber offene Beh lter hinweg entsorgt werden Wechseln Sie die Handschuhe wenn sie mit Proben in Kontakt kommen Assaybezogen N Quantitative Ergebnisse des Aptima HIV 1 Quant Dx Assays wurden mit Plasma evaluiert Serum kann f r quantitative Ergebnisse nicht verwendet werden Qualitative Ergebnisse wurden sowohl mit Plasma als auch mit Serum evaluiert O Das Reagenzien Kit den Kalibrator oder die Kontrollen nicht nach Ablauf des Verfallsdatums verwenden Aptima HIV 1 Quant Dx Assay 5 AW 11853
28. das Panther System A Vorbereitung des Arbeitsbereichs 1 Reinigen Sie die Arbeitsfl chen wo die Reagenzien vorbereitet werden Wischen Sie die Arbeitsflachen mit einer 2 5 igen bis 3 5 igen 0 35 M bis 0 5 M Natriumhypochloritl sung ab Lassen Sie die Natriumhypochloritl sung mindestens 1 Minute auf den Fl chen einwirken Sp len Sie sie anschlie end mit entionisiertem Wasser ab Die Natriumhypochloritl sung darf nicht antrocknen Decken Sie die Arbeitsfl che auf der die Reagenzien und Proben vorbereitet werden mit sauberen absorbierenden Labortischunterlagen mit Kunststoffunterschicht ab 2 Reinigen Sie eine separate Arbeitsfl che wo die Proben vorbereitet werden Gehen Sie dabei vor wie vorstehend beschrieben Schritt A 1 3 Reinigen Sie alle Pipettierer Gehen Sie dabei vor wie vorstehend beschrieben Schritt A 1 B Vorbereitung von Kalibrator und Kontrollen Lassen Sie den Kalibrator und die Kontrollen vor der Verarbeitung eine Temperatur von 15 C bis 30 C annehmen indem Sie folgenderweise vorgehen 1 Nehmen Sie den Kalibrator und die Kontrollen aus der Lagerung 15 C bis 35 C und bringen Sie sie auf eine Temperatur von 15 C bis 30 C Drehen Sie jedes R hrchen w hrend des gesamten Auftauprozesses um um den Inhalt gr ndlich zu mischen Es ist darauf zu achten dass der R hrcheninhalt vor dem Gebrauch komplett aufgetaut ist Option Die R hrchen mit dem Kalibrator und den Kontrollen k nnen auf
29. ders Nicht Nicht Keine HIV 1 RNA festgestellt Nicht reaktiv auf HIV 1 RNA nachgewiesen nachgewiesen lt 30 lt 1 47 Es wird HIV 1 RNA nachgewiesen aber in einer Reaktiv auf HIV 1 RNA nachgewiesen Menge unter der unteren Quantifizierungsgrenze Lower Limit of Quantitation LLOQ 30 bis 1 47 bis 7 00 Die HIV 1 RNA Konzentration liegt im linearen Reaktiv auf HIV 1 RNA 10 000 000 Bereich von 30 bis 10 000 000 Kopien ml gt 10 000 000 gt 7 00 Die HIV 1 RNA Konzentration liegt Uber der Reaktiv auf HIV 1 RNA oberen Quantifizierungsgrenze Upper Limit of Quantitation ULOQ Ung ltig Ung ltig Es gab einen Fehler bei der Erzeugung des Ung ltig Ergebnisses Die Patientenprobe sollte noch einmal getestet werden Die Leistung des Assays hinsichtlich der Quantifizierung von HIV 1 RNA in Serumproben wurde nicht ermittelt F r Serumproben keine quantitativen HIV 1 RNA Ergebnisse angeben PDer Faktor zum Umrechnen von Kopien in internationale Einheiten IE f r den 3 Internationalen Standard f r HIV 1 RNA 10 152 lautet 0 35 Kopien lE Eine diagnostische Auswertung kann ausgehend von unverd nnten Serum oder Plasmaproben erfolgen Hinweis Bei verd nnten Patientenproben k nnen Ergebnisse wie Nicht nachgewiesen oder lt 30 nachgewiesen erhalten werden indem eine Patientenprobe mit einer Konzentration knapp ber der LOD LLOQ verd nnt wird Es wird empfohlen eine andere unverd nnte Patientenprobe zu entnehmen und zu
30. e exogene Stoffe Stoffen 1 Lopinavir Indinavir Saquinavir Ritonavir Nelfinavirmesylat Darunavir Amprenavir Atazanavir 2 Nevirapin Efavirenz Rilpivirin Clarithromycin Amphotericin B 3 Tenofovir Disoproxilfumarat Adefovirdipivoxil Ribavirin Enfuvirtid Maraviroc Raltegravir Dolutegravir Abacavirsulfat Didanosin Zidovudin Lamivudin Stavudin Entecavir 4 rn BEER Telbivudine Emtricitabin 5 Paroxetin HCl Fluoxetin Sertralin 6 Ganciclovir Valacyclovir Acyclovir Rifampin Rifampicin Ethambutol 7 Ciprofloxacin Azithromycin Amoxicillin Cephalexin Ampicillin Trimethoprim 8 Valganciclovirhydrochlorid Boceprevir Telaprevir Simeprevir Sofosbuvir 9 PegInterferon alpha 2b Interferon alpha 2a Interferon alpha 2b 10 Heparin EDTA Natriumcitrat 11 Tipranavir 12 Isoniazid Die in Tabelle 9 gelisteten klinischen Plasmaproben von Patienten mit erh hten Konzentrationen definierter Stoffe oder von Patienten mit den gelisteten Krankheiten wurden mit dem Aptima HIV 1 Quant Dx Assay mit oder ohne 3 log Kopien von HIV 1 RNA getestet Es wurde keine Interferenz der Leistung beobachtet Aptima HIV 1 Quant Dx Assay 30 AW 11853 801 Rev 001 DE Aptima Leistung Tabelle 9 Getestete Typen klinischer Patientenproben Typen klinischer Patientenproben 1 Rheumafaktor RF 2 Anti Kern Antik rper ANA 3 Anti Jo 1 Antik rper JO 1 4 Systemischer Lupus eryth SLE
31. en kategorisiert Jedes Ergebnis mit nicht nachgewiesenem Target wurde als Target nicht nachgewiesen kategorisiert Tabelle 14 Diagnostische bereinstimmung zwischen dem Aptima HIV 1 Quant Dx Assay und einem Vergleichsassay Aptima HIV 1 Quant Dx Assay Target nicht Nachgewiesen e nachgewiesen Nachgewiesen 213 0 Vergleichsassay Target nicht 0 200 nachgewiesen Verschleppung Um festzustellen ob das Panther System das Risiko falschpositiver Ergebnisse infolge einer verschleppungsbedingten Kontamination minimiert wurde eine Analysestudie mit mehreren L ufen durchgef hrt bei der versetzte Panels auf zwei Panther Systemen getestet wurden Die Beurteilung der Verschleppung erfolgte anhand von hochtitrigen mit HIV 1 versetzten Proben 7 log Kopien ml die im Schachbrettmuster zwischen HIV 1 negativen Proben verteilt waren Zur Testung wurden f nf L ufe durchgef hrt Die Gesamtverschleppungsrate betrug 0 n 470 Serokonversionspanel Es wurden 19 HIV 1 Serokonversionspanelsets aus 204 Proben mit dem Aptima HIV 1 Quant Dx Assay getestet Der Nachweis von HIV 1 RNA wurde mit dem Nachweis in p24 Antigentests und in HIV 1 2 Antik rpertests verglichen Die Anzahl der Tage bis zum ersten Aptima HIV 1 Quant Dx Assay 35 AW 11853 801 Rev 001 DE Leistung Aptima reaktiven Ergebnis bei p24 Antigentests Anti HIV 1 2 Antik rpertests und im Aptima HIV 1 Quant Dx Assay ist in Tabelle 15 gelistet D
32. er Aptima HIV 1 Quant Dx Assay wies HIV 1 RNA durchschnittlich 5 58 und 10 89 Tage vor dem p24 Antigentest bzw dem Anti HIV 1 2 Antik rpertest nach Tabelle 15 Zusammenfassung der Daten mit dem Serokonversionspanel Unterschied bzgl der Tage bis Tage bis zum ersten reaktiven zum ersten reaktiven Ergebnis Anzahl der reaktiven Panelproben Ergebnis ausgehend vom Datum der Anzahl der Blutentnahme Panel ID getesteten Nachweis um Nachweis um Panelproben Aptima HIV p24 Anti HIV 1 2 Aptima HIV p24 Anti HIV 1 2 x Tage fr her als x Tage fr her als HIV 1 Antigen Antik rper HIV 1 Antigen Antik rper mit dem HIV mit dem Anti HIV Quant Dx Test Test Quant Dx Test Test p24 Antigen 1 2 Antik rper Test Test 6248 7 3 2 1 14 18 25 4 11 6243 10 6 3 2 18 25 32 7 14 6247 9 4 4 1 21 21 30 0 9 9016 10 3 2 0 27 30 34 3 7 9018 11 5 3 2 21 28 32 7 11 9020 22 5 4 1 83 87 97 4 14 9021 17 5 4 1 43 47 57 4 14 9022 9 3 2 1 23 25 32 2 9 9023 22 5 3 0 71 78 85 7 9 9030 16 5 3 1 40 47 54 7 14 9034 13 4 3 1 41 46 53 5 12 9089 6 5 3 2 7 16 20 9 13 12008 13 7 4 4 21 28 33 7 12 PRB962 6 4 2 0 7 14 17 7 10 PRB963 7 4 2 0 9 17 21 8 12 PRB966 10 5 3 2 35 44 48 9 13 PRB974 4 3 2 1 7 9 16 2 9 PRB975 5 3 1 0 7 14 14 7 7 PRB978 7 3 1 0 26 33 33 7 7 Mittel 5 58 10 89 Gesamt 204 82 51 20 Median 7 11 Die Tests auf Anti HIV 1 2 Antik rper wurden mit dem Anti HIV 1
33. h der Probenentnahme zu zentrifugieren Plasma oder Serum unter Einhaltung der Herstelleranweisungen f r das jeweils verwendete R hrchen vom Erythrozytenpellet trennen Plasma oder Serum kann im prim ren R hrchen auf dem Panther System getestet oder zuerst in ein sekund res Probenaliquotr hrchen Specimen Aliquot Tube SAT berf hrt und dann auf dem Panther System getestet werden Das Mindestvolumen f r prim re Entnahmer hrchen betr gt 1200 ul bzw 700 ul bei SATs Wird der Test nicht sofort durchgef hrt k nnen Plasma und Serum nach den nachstehenden Spezifikationen gelagert werden In ein SAT berf hrtes Plasma kann bei 20 C oder 70 C eingefroren werden Serum kann bei 20 C eingefroren werden Die Proben sollten h chstens dreimal eingefroren und wieder aufgetaut werden um Auswirkungen auf das Ergebnis zu vermeiden Patientenproben nicht in EDTA ACE oder prim ren Serumentnahmer hrchen einfrieren B Bedingungen f r die Lagerung von Patientenproben 1 EDTA und ACD Plasmaproben Prim rr hrchen mit zentrifugiertem Plasma k nnen nach der Probenentnahme bis zu 24 Stunden lang bei 2 C bis 30 C gelagert werden Abbildung 1 oberes Rahmenfeld Nach 24 Stunden kann das Plasma unter einer der folgenden Bedingungen l ngere Zeit gelagert werden Abbildung 1 untere Rahmenfelder e Im prim ren Entnahmer hrchen bis zu 3 Tage lang bei 2 C bis 8 C oder e im SAT bis zu 5 Tage lang bei 2 C bis 8 C oder e im SA
34. hods 43 177 187 Centers for Disease Control and Association of Public Health Laboratories 2014 Laboratory testing for the diagnosis of HIV infection Updated recommendations Pandori M W J Hackett Jr B Louie A Vallari T Dowling S Liska and J D Klausner 2009 Assessment of the ability of a fourth generation immunoassay for human immunodeficiency virus HIV antibody and p24 antigen to detect both acute and recent HIV infections in a high risk setting J Clin Microbiol 47 2639 2642 Clinical and Laboratory Standards Institute CLSI 2005 Collection Transport Preparation and Storage of Specimens for Molecular Methods Approved Guideline CLS Document MM13 A Wayne PA 29 CFR Part 1910 1030 Occupational Exposure to Bloodborne Pathogens current version Centers for Disease Control and Prevention National Institutes of Health Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories BMBL current version Clinical and Laboratory Standards Institute CLSI 2002 Clinical Laboratory Waste Management CLSI Document GP5 A2 Villanova PA Clinical and Laboratory Standards Institute CLSI 2012 Evaluation of Detection Capability for Clinical Laboratory Measurement Procedures Approved Guideline Second Edition CLS Document EP17 A2 Clinical and Laboratory Standards Institute Wayne PA Clinical and Laboratory Standards Institute CLSI 2003 Evaluation of the Linearity of Quantitative Measurement Procedures A Stati
35. hr Fackeln an Amplikons hybridisieren desto st rker ist das erzeugte Fluoreszenzsignal Der Zeitraum der verstreicht bis das Fluoreszenzsignal einen bestimmten Schwellenwert erreicht hat ist zur HIV 1 Ausgangskonzentration proportional Jede Reaktion hat einen internen Kalibrator eine interne Kontrolle Internal Control IC zur berpr fung auf Schwankungen bei der Probenbearbeitung Amplifikation und Detektion Die Konzentration einer Probe wird von der Panther System Software bestimmt indem die HIV 1 und IC Signale in jeder Reaktion mit Kalibrierungsdaten verglichen werden Warnhinweise und Vorsichtsma nahmen A B In vitro Diagnostikum Zur Verringerung des Risikos ung ltiger Ergebnisse m ssen die Packungsbeilage und das Panther System Operator s Manual Bedienungsanleitung fur das Panther System vollst ndig durchgelesen werden bevor dieser Assay durchgef hrt wird Laborbezogen C 8 VORSICHT Die Kontrollen f r diesen Assay enthalten Humanplasma In von der US amerikanischen Food and Drug Administration zugelassenen Verfahren ist das Plasma negativ auf Hepatitis B Oberfl chenantigen HBsAg Antik rper gegen HCV Antik rper gegen HIV 1 und HIV 2 und HIV Antigen Das Plasma ist au erdem bei Testung mit zugelassenen Nukleins uretests von Probenpools nicht reaktiv auf HCV RNA und HIV 1 RNA Alle aus Humanblut stammenden Materialien sind als potenziell infekti s zu betrachten und mit den allgemeinen Vorsichtsma nahme
36. ird ii bei jedem neu rekonstituierten Reagenzien Kit und iii alle 24 Stunden in Dreifachausf hrung analysiert Der Anwender wird von Software auf dem Panther System darauf aufmerksam gemacht wenn eine Kalibration erforderlich ist Der Anwender scannt einen Kalibrierungskoeffizienten der auf dem jedem Reagenzien Kit beiliegenden Masterchargen Barcodeblatt angegeben ist W hrend der Verarbeitung werden Kriterien f r die Annahme des Kalibrators von der Software auf dem Panther System automatisch verifiziert Wenn weniger als zwei Kalibratorreplikate g ltig sind erkl rt die Software den Lauf automatisch f r ung ltig Proben eines f r ung ltig erkl rten Laufs sind mit einem frisch vorbereiteten Kalibrator und frisch vorbereiteten Kontrollen erneut zu testen Negativ und Positivkontrollen Zur Erzeugung g ltiger Ergebnisse muss ein Satz von Assay Kontrollen getestet werden Ein Replikat der Negativkontrolle der schwach positiven Kontrolle und der stark positiven Kontrollen muss jeweils i jedes Mal wenn ein Reagenzien Kit auf das Panther System geladen wird ii bei jedem neu rekonstituierten Reagenzien Kit und iii alle 24 Stunden getestet werden Der Anwender wird von Software auf dem Panther System darauf aufmerksam gemacht wenn Kontrollen erforderlich sind W hrend der Verarbeitung werden Kriterien f r die Annahme der Kontrollen von der Software auf dem Panther System automatisch verifiziert Zur Erzeugung g ltiger Ergebnis
37. mane Immunschw chevirus Typ 1 HIV 1 als Etiological Agent des erworbenen Immunschw chesyndroms AIDS 1 7 HIV kann durch sexuellen Kontakt Exposition gegen ber infiziertem Blut oder infizierten Blutprodukten oder von einer HIV positiven Mutter auf das ungeborene Kind bertragen werden 8 Nach einer HIV Exposition entwickeln die Infizierten innerhalb von 3 bis 6 Wochen im Allgemeinen ein kurzes akutes Syndrom mit grippeartiger Symptomatik und ausgepr gter Vir mie im peripheren Blut 9 12 Bei den meisten Infizierten folgt auf diese Fr hphase eine HIV spezifische Immunreaktion und ein R ckgang der Plasmavir mie in der Regel innerhalb von 4 bis 6 Wochen nach Symptombeginn 13 14 Nach der Serokonversion tritt bei den Infizierten normalerweise eine klinische stabile asymptomatische Phase ein die jahrelang andauern kann 15 17 Die asymptomatische Phase ist durch persistierende geringe Plasmavir mie 18 und eine allm hliche Depletion von CD4 positiven T Lymphozyten gekennzeichnet Diese Depletion f hrt zu gravierender Immunschw che multiplen opportunistischen Infektionen Tumorerkrankungen und zum Tod 19 Wenngleich die Viruszahl im peripheren Blut in der asymptomatischen Phase der Infektion relativ niedrig ist scheint es sich bei der Replikation und Beseitigung des Virus um dynamische Prozesse zu handeln bei denen sich eine rasche Virusbildung und die Infektion von CD4 positiven Zellen mit einer gleich raschen Viruseliminierung
38. mreagenz 2 C bis 8 C qHIV 1 L sung zur Enzymrekonstitution 2 C bis 8 C 2 C bis 8 C 30 Tage qHIV 1 Promotorreagenz 2 C bis 8 C qHIV 1 L sung zur Promotorrekonstitution 2 C bis 8 C 2 C bis 8 C 30 Tage qHIV 1 Target Capture Reagenz 2 C bis 8 C 2 C bis 8 C 30 Tage Fl schchen f r den Einmalgebrauch Innerhalb von 20 Stunden verwenden qHIV 1 CONTROL Negativkontrolle 15 C bis 35 C 15 C bis 30 C Fl schchen f r den qHIV 1 CONTROL L schwach positive Einmalgebrauch Kontrolle CCS EH Innerhalb von 20 Stunden verwenden Fl schchen f r den qHIV 1 CONTROL H stark positive 15 C bis 35 C 15 C bis 30 C Einmalgebrauch Kontrolle Innerhalb von 20 Stunden verwenden Fl schchen f r den d a EN S Einmalgebrauch gHIV 1 PCAL Positivkalibrator 15 C bis 35 C 15 C bis 30 C ee Innerhalb von 20 Stunden verwenden 2 Wenn Reagenzien aus dem Panther System genommen werden sind sie sofort wieder bei ihren jeweiligen Lagerungstemperaturen aufzubewahren B Alle unbenutzten rekonstituierten Reagenzien und das Target Capture Reagenz Target Capture Reagent TCR nach 30 Tagen oder nach Ablauf des Verfallsdatums der Hauptcharge das fr here Datum ist ausschlaggebend entsorgen C Im Panther System gelagerte Reagenzien sind im Ger t 72 Stunden stabil Reagenzien k nnen bis zu 5 Mal auf das Panther System geladen werden Das Laden von Reagenzien wird jedes Mal im Panthe
39. n zu behandeln 33 35 Dieses Verfahren sollte nur von Personen durchgef hrt werden die in der Anwendung des Aptima HIV 1 Quant Dx Assays und in der Handhabung potenziell infekti sen Materials entsprechend geschult sind Versch ttungen sind unter Einhaltung entsprechender vor Ort g ltiger Verfahren sofort zu desinfizieren Nur die im Lieferumfang enthaltenen oder angegebenen Einweg Laborprodukte verwenden Die normalen Vorsichtsma nahmen im Labor ergreifen Nicht mit dem Mund pipettieren In den ausgewiesenen Arbeitsbereichen nicht essen trinken oder rauchen Ungepuderte Einweghandschuhe Augenschutz und Laborkittel beim Umgang mit Proben und Kitreagenzien tragen Nach der Handhabung von Proben und Kitreagenzien die H nde gr ndlich waschen Arbeitsfl chen Pipetten und andere Ger te m ssen regelm ig mit einer 2 5 igen bis 3 5 igen 0 35 M bis 0 5 M Natriumhypochloritl sung dekontaminiert werden Material das in Kontakt mit Patientenproben und Reagenzien gelangt ist nach allen geltenden Vorschriften entsorgen 33 36 Alle Arbeitsfl chen gr ndlich reinigen und desinfizieren Die Kontrollen enthalten Natriumazid als Konservierungsmittel F r den Reagenzientransfer keinen Metallr hrchen verwenden Wenn L sungen mit Natriumazidverbindungen in ein Rohrsystem entsorgt werden sind sie zu verd nnen und mit reichlichen Mengen an flieRendem Leitungswasser hinuntergesp lt werden Diese Vorsichtsma nahmen werden Aptima H
40. ndrome AIDS Science 220 868 871 Popovic M M G Sarngadharan E Read and R C Gallo 1984 Detection isolation and continuous production of cytopathic retroviruses HTLV III from patients with AIDS and pre AIDS Science 224 497 500 Gallo R C S Z Salahuddin M Popovic G M Strearer M Kaplan D F Haynas T J Palker R Redfield J Oleske B Safai G White P Foster and P D Markham 1984 Frequent detection and isolation of cytopathic retroviruses HTLV Ill from patients with AIDS and at risk for AIDS Science 224 500 503 Piot P F A Plummer F S Mhalu J L Lamboray J Chin and J M Mann 1983 AIDS An international perspective Science 239 573 579 Sarngadharan J G M Popovic L Broch J Scupbach and R C Gallo 1984 Antibodies reactive with human T lymphotropic retroviruses HTLV III in the serum of patients with AIDS Science 224 506 508 Gallo D J S Kimpton and P J Dailey 1987 Comparative studies on use of fresh and frozen peripheral blood lymphocyte specimens for isolation of human immunodeficiency virus and effects of cell lysis on isolation efficiency J Clin Microbiol 25 1291 1294 Clavel F D Guetard F Brun Vezinet S Chamaret M Rey M O Santos Ferraira A G Laurent C Dauguet C Katlama C Rouzioux D Klatzmann J L Champalimaud and L Montagnier 1986 Isolation of a new human retrovirus from West African patients with AIDS Science 233 343 346 Curran
41. olbarkeit bei klinischen Patientenproben Durchschnitts Patienten konzentration sD probe log Kopien ml i 2 51 0 08 3 3 14 0 02 7 3 17 0 02 S SS 0 03 z 4 20 0 06 S 4 94 0 02 gt 5 19 0 08 F Sep 0 03 A 5 86 0 02 6 67 0 01 Probenverd nnung mit Probenverd nner Zur Beurteilung der Probenverd nnung wurde ein Panel aus 11 Proben mit Konzentrationen im linearen Bereich des Aptima HIV 1 Quant Dx Assays inkl zwei Proben ber der oberen Quantifizierungsgrenze des Assays unverd nnt und verd nnt 1 3 oder 1 100 in Probenverd nner in dreifacher Ausf hrung Tabelle 13 getestet Aptima HIV 1 Quant Dx Assay 33 AW 11853 801 Rev 001 DE Leistung Aptima Tabelle 13 Probenverd nnung Durchschnitts Durchschnitts na konzentration konzentration Unterschied tor unverd nnt angegeben log Kopien ml log Kopien ml 2 51 2 65 0 14 3 14 3 31 0 17 3 17 3 51 0 34 3 95 4 02 0 07 4 20 4 21 0 01 1 3 4 94 4 81 0 13 5 19 5 11 0 08 5 55 5 38 0 17 5 86 5 99 0 13 6 67 6 66 0 01 2 39 2 17 0 22 1 100 gt 7 00 7 13 7 51 0 38 1 100 gt 7 00 7 46 7 45 0 01 eee Die angegebene Konzentration ist der nach Anwendung des Verd nnungsfaktors berechnete Wert Versetzte Patientenprobe Ergebnis von zwei von drei getesteten Replikaten Ein angegebenes Replikatergebnis war nicht numerisch lt 30 nachgewiesen Hinweis
42. pezifit t getestete Erreger Erreger Konzentration Hepatitis A 100 000 PBE ml Hepatitis B 100 000 IE mi Hepatitis C 100 000 IE ml Hepatitis G 100 000 Kopien ml Herpes Simplex Virus 1 100 000 PBE ml Herpes Simplex Virus 2 75 000 PBE ml Humanes Herpesvirus 6 100 000 Kopien ml Humanes Herpesvirus 8 42 000 PBE ml HIV 2 5 500 PBE ml HTLV 100 000 vp mI West Nil Virus 100 000 Kopien ml Parvo B19 100 000 IE ml Zytomegalievirus 100 000 Kopien ml Epstein Barr Virus 100 000 Kopien ml Adenovirus Typ 5 100 000 PBE ml Dengue 100 000 Kopien ml Influenza A 100 000 PBE ml Staphylococcus aureus 1 000 000 KBE mi Propionibacterium acnes 1 000 000 KBE ml Staphylococcus epidermis 1 000 000 KBE ml Neisseria gonorrhoeae 1 000 000 KBE ml Chlamydia trachomatis 300 000 IFU mI Candida albicans 1 000 000 KBE ml PBE ml Plaque bildende Einheiten pro ml 7IE ml Internationale Einheiten pro ml vp ml Viruspartikel pro ml KBE ml Kolonie bildende Einheiten pro ml 5IFU ml Einschlussk rper bildende Einheiten pro ml Aptima HIV 1 Quant Dx Assay 32 AW 11853 801 Rev 001 DE Aptima Leistung Wiederholbarkeit bei klinischen Patientenproben Es wurden zehn klinische Plasmaproben in drei Replikaten mit dem Aptima HIV 1 Quant Dx Assay getestet Die Durchschnittskonzentration und die Standardabweichungen sind in Tabelle 12 gezeigt Tabelle 12 Wiederh
43. pien ml angegeben In Tabelle 1 ist die Ergebnisauswertung gezeigt Wenn f r 1 3 verd nnte Patientenproben die 1 3 Option verwendet wird berechnet das Panther System automatisch die HIV 1 Konzentration der unverd nnten Patientenprobe indem es die Konzentrationsergebnisse mit dem Verd nnungsfaktor multipliziert Hinweis Bei verd nnten Patientenproben k nnen Ergebnisse wie Nicht nachgewiesen oder lt 30 nachgewiesen erhalten werden indem eine Patientenprobe mit einer Konzentration knapp ber der LOD bzw LLOQ verd nnt wird Es wird empfohlen eine andere unverd nnte Patientenprobe zu entnehmen und zu testen wenn kein quantitatives Ergebnis erhalten wird Das Panther System liefert kein qualitatives Ergebnis d h Reaktiv oder Nicht reaktiv f r die diagnostische Anwendung Der Anwender muss die angegebene HIV 1 RNA Konzentration selbst zu einem qualitativen Ergebnis interpretieren Tabelle 1 Patientenproben mit einem Ergebnis Nicht nachgewiesen sind nicht reaktiv auf HIV 1 RNA Patientenproben mit einem Ergebnis lt 30 nachgewiesen oder Patientenproben mit Ergebnissen innerhalb des linearen Bereichs bedeuten dass HIV 1 RNA nachgewiesen wurde und dass diese Patientenproben auf HIV 1 RNA reaktiv sind Tabelle 1 Ergebnisauswertung Angegebenes Aptima HIV 1 Quant Dx Ergebnis Diagnostische qualitative Auswertung der HIV 1 RNA Konzentration Auswertung des Kopien ml Logan Wert Anwen
44. r Kit und 1 Kit mit Kontrollen Aptima HIV 1 Quant Dx Assay Box Lagerung bei 2 C bis 8 C nach Empfang Symbol Komponente Menge A qHIV 1 Amplifikationsreagenz dE Ech Nicht infekti se Nukleins uren getrocknet in Pufferl sung E qHIV 1 Enzymreagenz Reverse Transkriptase und RNA Polymerase getrocknet in HEPES 1 Fl schchen gepufferter L sung PRO qHIV 1 Promotorreagenz 4 Fidechenan Nicht infekti se Nukleins uren getrocknet in Pufferl sung AR qHIV 1 Amplifikationsrekonstitutionsl sung a W ssrige L sung mit Glyzerol und Konservierungsmitteln ER qHIV 1 L sung zur Enzymrekonstitution EE HEPES gepufferte L sung mit oberfl chenaktiver Substanz und Glyzerol PROR qHIV 1 L6sung zur Promotorrekonstitution SE W ssrige L sung mit Glyzerol und Konservierungsmitteln TCR qHIV 1 Target Capture Reagenz Nukleins uren in einer gepufferten Salzl sung mit nicht infekti sen 1x 72 0 ml Nukleins uren in der Festphase und einem internen Kalibrator Rekonstitutionsverbindungsst cke 3 Barcode Blatt f r Hauptcharge 1 Blatt Aptima HIV 1 Quant Dx Assay 12 AW 11853 801 Rev 001 DE Aptima Panther System Kit mit Aptima HIV 1 Quant Dx Kontrollen Kat Nr PRD 03002 Lagerung bei 15 C bis 35 C nach Empfang Symbol Komponente Menge NC qHIV 1 Negativkontrolle HIV 1 negatives defibriniertes Humanplasma mit Gentamicin und 0 2 5x 1 5 ml Natriumazid als Konservierungsmittel
45. r System Protokoll vermerkt D Nach dem Auftauen des Kalibrators muss die L sung klar sein d h keine Tr bungen oder Pr zipitate aufweisen E Das Promotorreagenz und das rekonstituierte Promotorreagenz sind lichtempfindlich Diese Reagenzien sind lichtgesch tzt zu lagern und f r die Anwendung vorzubereiten Aptima HIV 1 Quant Dx Assay 7 AW 11853 801 Rev 001 DE Allgemeine Informationen Aptima Probenentnahme und lagerung Hinweis Alle Patientenproben sind als potenziell infekti s zu handhaben Es sind allgemeine Vorsichtsma nahmen zu treffen Hinweis Bei den Schritten die eine Handhabung von Proben erfordern darauf achten eine Kreuzkontamination zu vermeiden Benutztes Material ist beispielsweise so zu beseitigen dass es nicht ber ge ffnete R hrchen gef hrt wird Es k nnen in die folgenden Glas oder Kunststoffr hrchen entnommene Vollblutproben verwendet werde F r quantitative Messungen R hrchen die EDTA oder Acid Citrate Dextrose ACD Antikoagulanzien enthalten oder e Plasmapr parationsr hrchen Plasma Preparation Tubes PPTs Fur die qualitative Bestimmung R hrchen die EDTA oder ACD Antikoagulanzien enthalten oder e PPTs oder e Serumr hrchen oder e Serumtrennr hren Serum Separator Tubes SSTs Bei Serum ist vor der Weiterverarbeitung die Koagelbildung abzuwarten A Probenentnahme Vollblut kann bei 2 C bis 30 C gelagert werden und ist innerhalb von 24 Stunden nac
46. roben vor der Verarbeitung auf eine Temperatur von 15 C bis 30 C Weitere Informationen ber Proben auf dem Ger t siehe Proben auf dem Panther System 3 Vergewissern Sie sich dass jedes prim re Entnahmer hrchen mindestens 1200 ul Patientenprobe enth lt Vergewissern Sie sich dass jedes Probenaliquotr hrchen Specimen Aliquot Tube SAT mindestens 700 ul Patientenprobe enth lt Falls eine Verd nnung der Patientenprobe erforderlich ist siehe Schritt E 6 f r weitere Informationen 4 Mischen Sie die Patientenproben in SATs gr ndlich 3 bis 5 Sekunden auf dem Vortexer 5 Zentrifugieren Sie jede Patientenprobe unmittelbar vor dem Laden in einen Probenst nder 10 Minuten bei 1000 bis 3000g Nehmen Sie nicht die Kappen ab Luftblaschen im R hrchen st ren die Fullstandsmessung des Panther Systems F r Informationen zum Laden des St nders und zum Abnehmen der Kappen siehe Vorbereitung des Systems Schritt F 2 nachstehend 6 Verd nnen einer Plasmaprobe in einem SAT Eine Plasmaprobe kann f r die Analyse auf dem Panther System in einem SAT verd nnt werden Aptima HIV 1 Quant Dx Assay 17 AW 11853 801 Rev 001 DE Panther System Aptima A Wenn berhaupt so ist eine Verd nnung von Plasmaproben nur f r quantitative Ergebnisse erforderlich F r diagnostische Ergebnisse d rfen Plasmaproben nicht verd nnt werden Hinweis Wenn eine Patientenprobe verd nnt wird ist sie unmittelbar nach der Verd nnung zu testen
47. ruskultur Stamml sungen wurde mit einem Vergleichsassay bestimmt Zur Aufstellung der vorhergesagten 50 und 95 Nachweisgrenzen wurde eine Probit Analyse durchgef hrt Gem CLSI EP17 A2 37 sind die Ergebnisse der Reagenzcharge mit der h chsten Konzentration f r die vorhergesagte Nachweisgrenze als LOD definiert und in Tabelle 3 gezeigt Aptima HIV 1 Quant Dx Assay 24 AW 11853 801 Rev 001 DE Aptima Leistung Tabelle 3 Nachweisgrenze bei HIV 1 Subtypen und Gruppen Vorhergesagte Konzentration Subtyp ruppe Nachweisgrenze Kopien ml 50 3 0 A 95 12 3 50 1 8 CRFO1_AE 95 7 6 50 3 4 CRF02_AG 95 15 4 50 2 2 Cc 95 11 8 50 4 2 D 95 14 8 50 2 0 F 95 8 3 50 3 5 G 95 18 2 50 1 3 N 95 7 9 50 2 0 O 95 8 0 Linearer Bereich Der lineare Bereich des Aptima HIV 1 Quant Dx Assays wurde durch Testung von Panels bestimmt die aus einer nach CLSI EPO6 A 38 in HIV 1 negativem Humanplasma verdunnten HIV 1 Subtyp B Viruskultur bestanden Die Konzentration der Panels lag im Bereich von 1 30 bis 7 30 log Kopien ml Die Tests erfolgten auf sieben Panther Systemen mit zwei Reagenzchargen des Aptima HIV 1 Quant Dx Assays Wie in Abbildung 6 gezeigt erwies sich der Aptima Quant Dx Assay im gesamten Testbereich als linear Aptima HIV 1 Quant Dx Assay 25 AW 11853 801 Rev 001 DE Leistung Aptima 8 00 EA E
48. se muss die Negativkontrolle ein Ergebnis Keine HIV 1 RNA nachgewiesen liefern und die Ergebnisse der Positivkontrollen m ssen innerhalb vordefinierter Parameter liegen Wenn das Ergebnis f r eine der Kontrollen ung ltig ist erkl rt die Software den Lauf automatisch f r ung ltig Proben eines f r ung ltig erkl rten Laufs sind mit einem frisch vorbereiteten Kalibrator und frisch vorbereiteten Kontrollen erneut zu testen Interner Kalibrator Interne Kontrolle Jede Probe enth lt einen internen Kalibrator eine interne Kontrolle IC W hrend der Verarbeitung werden IC Annahmekriterien von der Software auf dem Panther System automatisch verifiziert Wenn das IC Ergebnis ung ltig ist wird das Probenergebnis f r ung ltig erkl rt Jede Probe mit ung ltigem IC Ergebnis muss erneut getestet werden um ein g ltiges Ergebnis zu erhalten Aptima HIV 1 Quant Dx Assay 21 AW 11853 801 Rev 001 DE Testauswertung Aptima Testauswertung Hinweis Unter Verwendung von Plasma wurden die quantitativen Ergebnisse des Aptima HIV 1 Quant Dx Assays evaluiert Serum kann f r quantitative Ergebnisse nicht verwendet werden Qualitative Ergebnisse wurden sowohl mit Plasma als auch mit Serum evaluiert Ergebnisse Das Panther System bestimmt die Konzentration der HIV 1 RNA in Patientenproben und Kontrolle automatisch indem es die Ergebnisse mit einer Kalibrationskurve vergleicht HIV 1 RNA Konzentrationen werden in Kopien ml und og Ko
49. servoir for HIV 1 in human peripheral blood is a T cell that maintains expression of CD4 Science 245 305 308 Erratum in Science 1989 245 preceding 694 Schnittman S M J J Greenhouse M C Psallidopoulos M Baseler N P Salzman A S Fauci and H C Lane 1990 Increasing viral burden in CD4 T cells from patients with human immunodeficiency virus HIV infection reflects rapidly progressive immunosuppression and clinical disease Ann Intern Med 113 438 443 Pantaleo G C Graziosi and A S Fauci 1993 New concepts in the immunopathogenesis of human immunodeficiency virus HIV infection N Engl J Med 328 327 335 Piatak M Jr M S Saag L C Yang S J Clark J C Kappes K C Luk B H Hahn G M Shaw and J D Lifson 1993 High levels of HIV 1 in plasma during all stages of infection determined by competitive PCR Science 259 1749 1754 Fauci A S S M Schnittman G Poli S Koenig and G Pantaleo 1991 NIH conference immunopathogenic mechanisms in human immunodeficiency virus HIV infection Ann Intern Med 114 678 693 Coffin J M 1995 HIV 1 population dynamics in vivo implications for genetic variation pathogenesis and therapy Science 267 483 489 Ho D D A U Neumann A S Perelson W Chen J M Leonard and M Markowitz 1995 Rapid turnover of plasma virions and CD4 lymphocytes in HIV 1 infection Nature 373 123 126 Wei X S K Ghosh M E Taylor V A Johnson E A Emini P De
50. sig gem CLSI EP17 A2 37 quantifiziert werden kann Der TE wurde mit dem Westgard Modell berechnet TE Bias 2 SA Zur Sicherstellung der Genauigkeit und Pr zision der Messungen wurde der TE des Aptima HIV 1 Quant Dx Assays auf 1 log Kopien ml festgesetzt d h an der LLOQ ist der Unterschied zwischen zwei Messungen von mehr als 1 log Kopien ml statistisch signifikant Die LLOQ wurde durch Testung von Panels bestimmt die aus Verd nnungen des 3 internationalen HIV 1 WHO Standards Subtyp B NIBSC Code 10 152 in HIV 1 negativem Plasma bestanden Gem CLSI EP17 A2 wurden die Panels mit drei Reagenzchargen in Replikaten von je 30 pro Charge in 26 L ufen getestet Die Ergebnisse sind in Tabelle 4 gezeigt Die h chste LLOQ f r die drei auf dem Aptima HIV 1 Quant Dx Assay mit dem 3 internationalen WHO Standard gemessenen Chargen betr gt 19 Kopies ml 1 27 log Kopien ml Tabelle 5 Tabelle 4 Bestimmung der LLOQ des Aptima HIV 1 Quant Dx Assays mit dem 3 internationalen HIV 1 Standard der WHO Target Aptima HIV 1 Reagenz Konzentration Quant Dx SA Bias Borecanetar IE charge log Kopien ml log Kopien ml log Kopien ml log Kopien ml log Kopien ml 1 15 0 97 0 36 0 18 0 90 1 24 0 86 0 34 0 39 1 06 1 42 1 27 0 35 0 15 0 85 1 54 1 36 0 23 0 19 0 64 1 94 1 90 0 15 0 05 0 34 2 42 2 40 0 08 0 01 0 18 1 15 0 49 0 30 0 65 1 26 1 24 0 73 0 41 0 51 1 33 1 42 0 88 0 38 0 54 1
51. stical Approach Approved Guideline CLSI document EPO6 A Clinical and Laboratory Standards Institute Wayne PA W i IVD 0843 Hologic Inc 10210 Genetic Center Drive San Diego CA 92121 USA EMERGO EUROPE Molenstraat 15 2513 BH Den Haag Niederlande Kundensupport 1 844 Hologic 1 844 465 6442 customersupport hologic com Technischer Kundendienst 1 888 484 4747 molecularsupport hologic com Weitere Kontaktinformationen finden Sie unter www hologic com Aptima HIV 1 Quant Dx Assay 38 AW 11853 801 Rev 001 DE Aptima Bibliographie HOLOGIC Aptima und Panther und assoziierte Logos sind Marken oder eingetragene Marken von Hologic Inc und oder seinen Tochterunternehmen in den Vereinigten Staaten und oder anderen Landern Armored RNA ist eine Marke der Asuragen Inc Alle anderen Marken die m glicherweise in dieser Packungsbeilage erscheinen geh ren dem jeweiligen Eigent mer Dieses Produkt ist ggf von mindestens einem US Patent gesch tzt siehe www hologic com patents 2014 Hologic Inc Alle Rechte vorbehalten AW 11853 801 Rev 001 DE 2014 10 Aptima HIV 1 Quant Dx Assay 39 AW 11853 801 Rev 001 DE
52. t vom System verarbeitet b G ltige Ergebnisse f r die Kontrollen sind im System gespeichert Sobald die R hrchen mit den Kontrollen pipettiert worden sind und mit dem Aptima HIV 1 Quant Dx Reagenzien Kit verarbeitet werden k nnen bis zu 24 Stunden lang Patientenproben mit dem zugeh rigen rekonstituierten Kit getestet werden es sei denn a Die Kontrollenergebnisse sind ung ltig b Das zugeh rige Assayreagenzien Kit wird aus dem System genommen c Das zugeh rige Assayreagenzien Kit hat die Stabilit tsgrenze berschritten Jedes Kontrollr hrchen kann einmal getestet werden Wenn versucht wird mehr als einmal aus dem R hrchen zu pipettieren kann es zu Bearbeitungsfehlern kommen C Handschuhpuder Wie in jedem Reagenzsystem kann berm iger Puder auf manchen Handschuhen eine Kontamination ge ffneter R hrchen verursachen Es werden ungepuderte Handschuhe empfohlen Aptima HIV 1 Quant Dx Assay 20 AW 11853 801 Rev 001 DE Aptima Qualitatskontrolle Qualitatskontrolle Ein Lauf oder Patientenprobenergebnis kann von einem Anwender f r ung ltig erkl rt werden wenn w hrend der Durchf hrung des Assays technische anwenderbezogene oder geratebezogene Probleme auftreten und dokumentiert werden Assay Kalibrierung Zur Erzeugung g ltiger Ergebnisse muss eine Assay Kalibrierung durchgef hrt werden Ein einzelner Positivkalibrator wird i jedes Mal wenn ein Reagenzien Kit auf das Panther System geladen w
53. t von der Empfindlichkeit des verwendeten serologischen Tests ab Einer Sch tzung 32 zufolge k nnen die p24 Antigen Antik rper Assays der 4 Generation eine Infektion nachweisen wenn die HIV 1 RNA Konzentration 14 000 Kopien ml erreicht hat Die Nachweisgrenze des Aptima HIV 1 Quant Dx Assays liegt erheblich unter 14 000 Kopien ml und k nnte das Vorhandensein von HIV 1 fr her als HIV Immunassays nachweisen Testprinzip Der Aptima HIV 1 Quant Dx Assay umfasst drei Hauptschritte die alle in einem einzigen R hrchen auf dem Panther System stattfinden Target Capture Target Amplifikation durch transkriptionsvermittelte Amplifikation Transcription Mediated Amplification TMA und Detektion der Amplifikationsprodukte Amplikons mithilfe der fluoreszenzmarkierten Sonden Fackeln W hrend des Target Capture wird virale RNA aus Patientenproben isoliert Die Patientenprobe wird mit einem Detergens behandelt um die Virush lle zu solubilisieren Proteine zu denaturieren und die genomische Virus RNA freizusetzen Capture Oligonukleotide hybridisieren an hoch konservierte Regionen der ggf in der Testprobe vorhandenen HIV 1 RNA Das hybridisierte Target wird anschlie end auf magnetischen Mikropartikeln gebunden die dann in einem Magnetfeld von der Patientenprobe getrennt werden Irrelevante Bestandteile werden durch Waschschritte aus dem Reaktionsr hrchen entfernt Die Target Amplifikation findet durch TMA statt eine transkriptionsbasierte
54. testen wenn kein quantitatives Ergebnis erhalten wird Ung ltige Ergebnisse sind in blauer Schrift angezeigt Aptima HIV 1 Quant Dx Assay 22 AW 11853 801 Rev 001 DE Aptima Einschrankungen Einschrankungen A Dieser Test darf nur von Mitarbeitern durchgef hrt werden die im Verfahren unterwiesen wurden Eine Nichtbefolgung der Anweisungen in dieser Packungsbeilage kann fehlerhafte Ergebnisse zur Folge haben Zuverlassige Ergebnisse hangen von der Adaquanz der Entnahme des Transports der Lagerung und der Verarbeitung der Patientenproben ab Dieser Assay wurde nur mit Humanplasma zur Verwendung als quantitativer Assay validiert Dieser Assay wurde mit Humanplasma und Humanserum zur Verwendung als qualitativer Assay validiert Eine Kontamination kann nur durch Einhaltung der guten Laborpraxis und der in der vorliegenden Packungsbeilage angegebenen Vorgehensweise vermieden werden Es besteht die seltene M glichkeit dass Mutationen in den hoch konservierten Regionen des Virusgenoms in denen die Primer und oder Sonden im Aptima HIV 1 Quant Dx Assay binden zu einer zu niedrigen Quantifizierung oder zu einem nicht erfolgten Nachweis des Virus f hren Aptima HIV 1 Quant Dx Assay 23 AW 11853 801 Rev 001 DE Leistung Aptima Leistung Nachweisgrenze Die Nachweisgrenze Limit of Detection LOD ist definiert als die HIV 1 RNA Konzentration die gem CLSI EP17 A2 37 mit einer Wahrscheinlichkeit
55. th risk of clinical progression in patients with advanced infection AIDS Clinical Trials Group ACTG 116B 117 Study Team ACTG Virology Committee Resistance and HIV 1 RNA Working Groups J Infect Dis 174 704 712 Hammer S C Crumpacker R D Aquila B Jackson J Lathey D Livnat and P Reichelderfer 1993 Use of virologic assays for detection of human immunodeficiency virus in clinical trials Recommendations of the AIDS Clinical Trials Group Virology Committee J Clin Microbiol 31 2557 2564 Schochetman G and J R George ed 1994 AIDS Testing A Comprehensive Guide To Technical Medical Social Legal and Management Issues 2 ed Springer Verlag New York Mulder J N McKinney C Christopherson J Sninsky L Greenfield and S Kwok 1994 Rapid and simple PCR assay for quantitation of human immunodeficiency virus type 1 RNA in plasma application to acute retroviral infection J Clin Microbiol 32 292 300 Dewar R L H C Highbarger M D Sarmiento J A Todd M B Vasudevachari R T Davey Jr J A Kovacs N P Salzman H C Lane and M S Urdea 1994 Application of branched DNA signal amplification to monitor human immunodeficiency virus type 1 burden in human plasma J Infect Dis 170 1172 1179 van Gemen B T Kievits R Schukkink D van Strijp L T Malek R Sooknanan H G Huisman and P Lens 1993 Quantification of HIV 1 RNA in plasma using NASBA during HIV 1 primary infection J Virol Met
56. tisch Drehen sich dann das Fl schchen mit dem gefriergetrockneten Reagenz ber der Flasche mit der Rekonstitutionsl sung um und befestigen Sie das Verbindungsst ck an der Flasche mit Rekonstitutionsl sung Abbildung 5 Schritt 2 v Drehen Sie die zusammengef gte Flaschen an Flasche mit L sung aufgesetztes Fl schchen langsam um damit die L sung in das Glasfl schchen laufen kann Abbildung 5 Schritt 3 vi Schwenken Sie die zusammengef gten Flaschen mindestens 10 Sekunden lang Abbildung 5 Schritt 4 vii Warten Sie mindestens 30 Sekunden damit das gefriergetrocknete Reagenz in L sung gehen kann viii Nachdem das gefriergetrocknete Reagenz in L sung gegangen ist schwenken Sie die zusammengef gten Flaschen mindestens 10 Sekunden lang und mischen Sie anschlie end die L sung gr ndlich indem Sie das Glasfl schchen leicht nach vorne und hinten kippen c Drehen Sie die zusammengef gten Flaschen dann wieder langsam um damit die L sung wieder komplett zur ck in die Flasche mit der Rekonstitutionsl sung flie en kann Abbildung 5 Schritt 5 d Nehmen Sie das Rekonstitutionsverbindungsst c und das Glasfl schchen vorsichtig ab Abbildung 5 Schritt 6 und entsorgen Sie sie Abbildung 5 Schritt 8 e Tragen Sie die Initialen des Bedieners und das Rekonstitutionsdatum auf dem Etikett ein Laden Sie die Flaschen f r den sofortigen Gebrauch auf den Reagenzienst nder andernfalls verschlie en Sie die Flaschen un
57. ungsgrenze mithilfe des 3 internationalen WHO Standards 27 Verifizierung der LLOQ bei HIV 1 Subtypen und Gruppen 28 Pr zision Ess ee eE Ee e EE ee tee e E ne 28 Stoffe mit m glicher beeintr chtigender Wirkung 29 SPEZIAL nu rn ad a ee amen oe an aba Ree OA 31 Analytische Spezifit t nee BS Pee ale 32 Wiederholbarkeit bei klinischen Patientenproben seen een rennen 33 Probenverd nnung mit Probenverd nner 33 Methodenkorrelation HEET NEEN babe eee eee endende 34 Diagnostische bereinstimmung 35 Verschlepp nd a dr SEENEN Here msn nee ne 35 Serokonversionspanel 35 Serum Plasma quivalenz Studie 36 Bibliographie eet Aere iene Ee EE E E ERR 37 Aptima HIV 1 Quant Dx Assay 1 AW 11853 801 Rev 001 DE Allgemeine Informationen Aptima Allgemeine Informationen Verwendungszweck Der Aptima HIV 1 Quant Dx Assay ist ein n vitro Nukleinsaure Amplifikationstest zum Nachweis und zur Quantifizierung von RNA des humanen Immunschwachevirus Typ 1 HIV 1 auf dem voll automatisierten Panther System Er ist zur Verwendung als Hilfsmittel bei der Diagnose einer HIV 1 Infektion zur Bestatigung einer HIV 1 Infektion und als Hilfsmittel beim klinischen Management von Patienten mit HIV 1 Infektion bestimmt Der Aptima HIV 1 Quant Dx Assay kann als Hilfsmittel bei der Diagnose eine HIV 1 Infektion einschlie lich einer Akut oder Prim rinfektion verwendet werden Das Vorhandensein von HIV 1 RNA im
58. utsch J D Lifson S Bonhoeffer M A Nowak B H Hahn et al 1995 Viral dynamics in human immunodeficiency virus type 1 infection Nature 373 117 122 O Brien W A P M Hartigan D Martin J Esinhart A Hill S Benoit M Rubin M S Simberkoff and J D Hamilton 1996 Changes in plasma HIV 1 RNA and CD4 lymphocyte counts and the risk of progression to AIDS Veterans Affairs Cooperative Study Group on AIDS N Engl J Med 334 426 431 Welles S L J B Jackson B Yen Lieberman L Demeter A J Japour L M Smeaton V A Johnson D R Kuritzkes R T D Aquila P A Reichelderfer D D Richman R Reichman M Fischl R Dolin R W Coombs J O Kahn C McLaren J Todd S Kwok and C S Crumpacker 1996 Prognostic value of plasma Human Immunodeficiency Virus Type HIV 1 RNA Aptima HIV 1 Quant Dx Assay 37 AW 11853 801 Rev 001 DE Bibliographie Aptima 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 levels in patients with advanced HIV 1 disease and with little or no zidovudine therapy AIDS Clinical Trials Group Protocol 116A 116B 117 Team J Infect Dis 174 696 703 Coombs R W S L Welles C Hooper P S Reichelderfer R T D Aquila A J Japour V A Johnson D R Kuritzkes D D Richman S Kwok J Todd J B Jackson V DeGruttola C S Crumpacker and J Kahn 1996 Association of plasma Human Immunodeficiency Virus Type RNA level wi
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