Fastblot - Biometra
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1. 10 1 Reinigung und Instandhaltung Tauchen Sie das Ger t niemals in Wasser ein Seien Sie bei der Reinigung der Anodenplatte des B43 und B44 besonders vorsichtig um eine Besch digung des Platins zu verhindern Verwenden Sie keine Scheuermittel oder starke Detergenzien Die Kathodenplatte rostfreier Spezialstahl des B43 B44 kann mit leichten Scheuermitteln z B Ceranfeld Reiniger gereinigt werden Das komplette Ger t sollte in periodischen Abst nden mit warmen Wasser gereinigt werden um Salzreste zu entfernen Verwenden Sie niemals Alkohol gt 10 z B Methanol Ethanol oder organischen L sungsmittel z B Aceton zum Reinigen des Geh uses oder der Elektroden Das System darf niemals autoklaviert oder in einer Mikrowelle benutzt werden 10 2 Service Ein regelm iger Service ist nicht notwendig Dennoch sollten die Elektroden mit einem weichen Tuch mit dest Wasser angefeuchtet nach jedem Transfer gereinigt werden Sollten die Elektroden nach h ufigem Gebrauch zugesetzt sein so dass der Transfer innomogen oder vermindert ist nehmen Sie bitte Kontakt mit der Serviceabteilung auf 10 3 Ersatzteile Bitte kontaktieren Sie die Serviceabteilung 22 Fastblot Bedienungsanleitung 2009 07 biometra a part of Analytik Jena 11 Service Sollten Sie Probleme mit dem Ger t haben setzen Sie sich bitte mit unserer Serviceabteilung bzw dem f r Sie zust ndigen lokalen Biometra H ndler in Verbindung Biometra Gmb2. den f r Sie zust ndigen H ndler Dieses Symbol gilt nur in Staaten des EWR EWR Europ ischer Wirtschaftsraum umfasst die EU Mitgliedsstaaten sowie Norwegen Island und Liechtenstein 26 Fastblot Bedienungsanleitung 2009 07 biometra a part of Analytik Jena 14 EC Declaration of Conformity EU Konformit tserkl rung Goettingen July 2009 im Sinne der EG Richtlinie f r die elektromagnetische Vertr glichkeit 2004 108 EG following the EC directive about the electromagnetic compatibility 2004 109 EC Hiermit erkl ren wir dass folgende Blotting Systeme Herewith we declare that the following Blotting Systems Typ type Fastblot B33 Fastblot B34 Fastblot B43 Fastblot B44 Fastblot B64 Best Nr Order No 014 100 014 200 015 100 015 200 015 600 den grundlegenden Anforderungen der corresponds to the basic requirements of EG Niederspannunggsrichtlinie 2006 95 EG entsprechen EC low voltage directive 2006 95 EC Juergen Otte PhD Quality Manager Fastblot Bedienungsanleitung 2009 07 27 biometra a part of Analyt k Jena 15 Garantie Dieses Biometra Produkt wurde sorgf ltig hergestellt und die Qualit t vor der Auslieferung gr ndlichst kontrolliert Biometra garantiert da dieses Produkt den im Handbuch angegebenen Spezifikationen entspricht Biometra gew hrt eine Garantie von 12 Monaten auf fehlerhafte Teile unter folgenden Bedingungen Die Garantie ist g ltig f r 24 Monate ab dem Tag d
3. der verwendeten Symbole 0220022200200000n0 Rene nenn nnne nennen 6 2 2 Generelle Sicherheitshinweise 2 00020002400200002n00nnn nenne nnno nenn nano nenn anne 6 3 MSO e nenne 9 3 1 LIEICTUMI AN Gene eree 9 3 2 Auspacken und PI TEN ee ee een einen 9 3 3 Installation des Ger tes 2022u0sssuensnenennnnnnenennnnnennnennnnnnnnnnnnnennnennnnnnneenennnn 9 3 4 Stromversorgung 2 2u222u0 0s0nennennnnnnnnennnennnnennnnnnnnennnennnnennnnnnnnennnnnnnnennnenennennnnnnnnennnenn 9 4 BEAIENLIENENI ae ee ee ee 10 9 DENICD ea eier een 11 5 1 Protein BIOtino uns na ia aor E en 11 5 1 1 Vorbereitung des Blotting Sandwiches 0022200220020000200 02000 nenn nennen 11 5 2 DNA Blotting Agarose Gele u02200222002200nnnnennnennnennnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnne nennen 15 6 Allgemeine Blotting Infromationen 2 02220220000000n0n0n0nanunnnnnnnnn anne 16 6 1 Transiere zZ CZ ae a ne en a nen ee 16 6 2 TransterbediNguUnNgei een een ee ie 16 6 3 FSU UT ee ee ee ee 16 7 EOSUNGEN seen E nenne heuer 17 7 1 Kontinuierliche Transfer Puffersysteme 00222022200200002n0ennnennnnennnenennn nennen 17 1 2 Diskontinuierliche Transfer Puffersysteme 2 2022400222002n0enennnnnnennnn nennen nenn 18 1 3 Hinweise zum Einsatz von Methanol und SDS 2 002220222002000nenn ernennen 18 1 4 FAIDEIOSUM Ge sen
4. kann mit Hilfe einer zweiten Membran unter der eigentlichen Blottingmembran berpr ft werden welche ebenfalls nach dem Transfer auf das Vorhandensein von Proteinen getestet wird 1007 x Be _ Transfer i fi u Eu Rate A F z Pi j Pai il E Proteins 1 Carbonic Anhydrase MW 29 KDa enx 2 Albumin egg MW 40 kDa 3 Bovine serum albumin BSA MW 67 kDa 4 B Galactosidase MW 116 kDa 5 Myosin MW 205 kDa Transfer Time min Elektrophoretischer Transfer von Proteinen SDS PAGE Acrylamidkonzentration 10 Nitrocellulose Blottingmembran Porengr f se 0 45 um Stromst rke 5 mA cm Gelfl che Geldicke 1 0 mm Transferpuffer Tris Glycin SDS 6 3 K hlung Sollen Proteine mit einem hohen Molekulargewicht gt 100 kDa bertragen werden dauert der Blotvorgang bis zu 30 Minuten In diesem Fall und beim bertragen nativer Proteine Enzyme wird empfohlen das K hlungssystem der Fastblots B33 und B43 zu verwenden 16 Fastblot Bedienungsanleitung 2009 07 biometra a part of Analytik Jena 7 L sungen 7 1 Kontinuierliche Transfer Puffersysteme Transferpuffer pH 8 3 25 mM Tris Base 150 mM Gilycin 10 Methanol Optional Verd nnen Sie den Elektrophorese Laufpuffer mit destilliertem Wasser einfaches oder doppeltes Volumen Laufpuffer Laemmli System 25 mM Tris Base 192 mM Gilycin 0 1 SDS Natriumdodecylsulfat F r das Blotten mit einem oder zwei Teilen dest Wasser verd nnen und 10 20 Meth
5. Analytik Jena 1 3 Rechtliche Hinweise Copyright Alle Rechte vorbehalten Es ist nicht erlaubt die Bedienungsanleitung oder Teile von dieser in irgendeiner Form als Kopie auf Mikrofilm oder mittels anderer geeigneter Methoden ojne die schriftliche Genehmigung von Biometra zu kopieren oder zu ver ffentlichen Bei Firmennamen Biometra und allen anderen verbundenen Markennamen handelt es sich um gesch tzte Warenzeichen Haftung Biometra ist nicht verantwortlich f r Sch den oder Verletzungen die durch unsachgem e Anwendung unter Missachtung der anweisungen in der Betriebsanleitung entstehen Bedeutung der Bedienungsanleitung Biometra empfiehlt dringend vor dem Gebrauch des Ger tes die Bedienungsanleitung sorgf ltig zu lesen Die Bedienungsanleitung ist Teil des Produkts und sollte ber die gesamte Lebensdauer des Instruments aufbewahrt und allen Nutzern zug nglich sein Pflegen Sie alle Erg nzungen und Aktualisierungen in die Bedienungsanleitung ein Fastblot Bedienungsanleitung 2009 07 5 biometra a part of Analytik Jena 2 Sicherheitshinweise 2 1 Bedeutung der verwendeten Symbole Symbol Definition Achtung Anweisungen in der Bedienungsanleitung beachten Gefahr Hochspannung Zerbrechlich Mit Gleichstrom zu verwenden Generelle Sicherheitshinweise Empfindliches Ger t Vorsichtig behandeln Verwenden Sie das Ger t nicht wenn Puffer aus dem Zwischenraum zwischen Korpus und Deckel oder Wass
6. H Serviceabteilung Rudolf Wissell Str 14 16 D 37079 G ttingen Tel 49 0 5 51 50 68 6 10 oder 12 Fax 49 0 5 51 50 686 11 e mail Service biometra com Falls Sie das Ger t an uns zur cksenden m chten beachten Sie bitte unsere R cksendungsinstruktionen 11 1 R cksendungsinstruktionen Senden Sie nur fehlerhafte Ger te zur ck Bitte wenden Sie sich bei technischen Problemen die nicht eindeutig als Ger tefehler erkennbar sind vor Einsendung an den technischen Service von Biometra Kontaktieren Sie die Serviceabteilung um eine RAN Nummer f r die R cksendung zu erhalten Diese Nummer mu au en am Karton deutlich sichtbar angebracht werden R cksendungen ohne RAN Nummer k nnen nicht angenommen werden Wichtig Reinigen Sie alle Teile des Ger tes von R ckst nden sowie biologisch A gef hrlichen chemischen und radioaktiven Verunreinigungen Bei verunreinigten Ger ten verweigert Biometra die Annahme des Ger tes F r eventuelle Sch den oder Verlsute infolge mangelhafter Dekontamination des Ger tes haftet der Absender des Ger tes gt gt Bitte best tigen Sie bei jeder Einsendung schriftlich da das Ger t frei von biologisch gef hrlichen und radioaktiven Kontaminationen ist Nutzen Sie hierf r das Dekontamina tionsbescheinigungs Formular auf der folgenden Seite Benutzen Sie f r den Versand die Originalverpackung oder eine hnlich robuste Verpackung Kennzeichnen Sie
7. H gt 10 Schritt 7 Entfernen Sie eventuell vorhandene Luftblasen durch Ausrollen mit einem Reagenzglas oder einer Pipette Schritt 8 Verbinden Sie den Deckel mit dem Korpus des Fastblots Beachten Sie dabei da der Deckel ber die gesamte Fl che genau parallel zum Korpus aufliegt Legen Sie bei der Verwendung dickerer Gele ein Gewicht von 1 2 kg auf den Deckel z B eine Schale mit kaltem Wasser Schritt 9 Nach den Arbeitsschritten 2 bis 7 sollte das zum Blotten vorbereitete Sandwich die in Abb 2 dargestellte Anordnung bei Verwendung von kontinuierlichen Puffersystemen bzw die in Abb 3 dargestellt Anordnung bei Verwendung von diskontinuierlichen Puffersystemen haben re le sectrode cathodel Ah 2 Teen liter paper Anordnung von Filterpapier Blottingpapier ciyacryamide gel Gel und Blottingmembran zwischen den TS nO e Elektroden platten bei Verwendung von kontinuierlichen Puffersystemen Blottingpapier und Blottingmembran haben die we Gr e des Gels Cathode Abb 3 Aufbau eines typischen Blotting Sandwiches bei Verwendung von diskontinuierlichen Puffersystemen Cathode Buffer PVDF Membrane Anode Buffer II Anode Buffer I Anode A E 2 Fastblot Bedienungsanleitung 2009 07 biometra a part of Analytik Jena Schritt 10 Schalten Sie Ihr Spannungsger t z B das Biometra Standard Power Pack P25 oder P25T Bestellnummer 040 800 bzw 040 850 oder ein
8. Semidry Blottens zwischen zwei horizontalen Plattenelektroden erlaubt einen schnellen und homogenen Transfer von Proteinen 4 Der Aufbau des Semidry Blots erm glicht wahlweise die Verwendung diskontinuierlicher Puffersysteme z B ein Kathodenpuffer und zwei verschiedene Anodenpuffer zum schonenden Blotten von kleineren Proteinen oder zum gleichm igen Transfer unterschiedlichster Proteine Die urspr nglich verwendeten reinen Graphitelektroden zeigten sehr schnell erhebliche Korrosion Um diese Korrosion zu vermeiden werden f r die Fastblot Systeme B33 B34 und B64 modifizierte Elektrodenmaterialien auf Kohlenstoffbasis eingesetzt Zus tzlich werden B43 und B44 mit porenfreien Metallelektroden f r leichter Dekontamination angeboten Bei diesen Elektroden besteht die Anode aus platinumh lltem Titan und die Kathode aus einem speziellen rostfreien Stahl Diese Materialien erm glichen den Transfer bei h heren Stromst rken und erlauben das Blotten kleinerer Proteine in ca 10 30 Minuten L ngere Transferzeiten werden jedoch bei Proteinen gt 100 kDa ben tigt Die beim Transfer dieser Proteine auftretende Erw rmung kann im Fastblot B33 und B43 durch die in das System integrierte Durchflu k hlung kompen siert werden Dar ber hinaus werden bei h heren Stromst rken Proteine mit h herem Molekulargewicht gt 100 kDa schneller und quantitativer transferiert Auch kleinere Proteine lassen sich unter diesen Bedingungen schneller aus
9. annungsger t Nachdem Sie gegebenenfalls die K hlwasserzufuhr abgestellt haben nehmen Sie den Deckel des Fastblots ab Gefahr Hochspannung Ziehen Sie die Verbindungskabel aus der A Stromversorgung bevor Sie den Deckel ffnen Versuchen Sie niemals die Kabel vom Deckel zu entfernen ffnen Sie das System nicht w hrend des Transfervorgangs Fastblot Bedienungsanleitung 2009 07 13 biometra a part of Analytik Jena Schritt 14 Entfernen Sie das Blot Sandwich vorsichtig Die Membran kann nun f r Anf rbungen oder Immunoassays verwendet werden A Ber hren Sie die Membran niemals mit den Fingern ohne Handschuhe Schritt 15 Reinigen Sie die Elektrodenplatten nach jedem Blotvorgang mit destillierttem Wasser Verwenden Sie niemals organische L sungsmittel Die Elektroden k nnen mit Hilfe eines Papiertuches getrocknet werden 14 Fastblot Bedienungsanleitung 2009 07 biometra a part of Analytik Jena 5 2 DNA Blotting Agarose Gele Die Fastblot Apparaturen k nnen ebenfalls f r den Elektrotransfer von Nukleins uren eingesetzt werden Allerdings empfiehlt sich h ufig f r den Transfer von Nukleins uren der Einsatz der Vakuumblotting Technik DNA RNA bzw der Kapillarblotting Technik RNA Verfahren Zur Steigerung der Blot Effizienz sollte die DNA vor dem Transfer vorbehandelt werden Denaturierung 0 5 M NaOH 15 min 1 5 M NaCl Neutralisierung 3 0 M NaCl 15 min 0 5 M Tris pH 7 4 Das B
10. anol hinzuf gen Towbin Puffer 50 mM Tris 96 mM Glycin pH 1 8 8 4 A Achtung Maximale Stromst rke bei Verwendung des B64 3 5 mA cm Gelfl che Fastblot Bedienungsanleitung 2009 07 17 biometra a part of Analytik Jena 7 2 Diskontinuierliche Transfer Puffersysteme Anoden Puffer 300 mM Tris HCl pH 10 4 20 v v Methanol Anoden Puffer Il 25 mM Tris HCl pH 10 4 20 v v Methanol Kathoden Puffer 25 mM Tris HCI pH 9 4 40 mM Caprons ure 20 v v Methanol 0 01 SDS Das diskontinuierliche Puffersystem in Anlehnung an Kyhse Andersen 1984 ist geeignet f r native PAGE SDS PAGE und IEF Gele e Durch die geringe Konzentration des SDS 0 01 im Kathoden Puffer kommt es zu keiner Denaturierung der Proteine w hrend der kurzen Kontaktphase e Proteine ber 80 KD sollten vor dem Transfer f r 5 10 min im Kathoden Puffer aquilibriert werden e Urea lEF Gele sollten ebenfalls vor dem Blotten in Kathoden Puffer quilibriert werden Urea aussp len Achtung Nicht zu lange quilibrieren da die Proteine schnell aus dem Gel heraus diffundieren k nnen alternativer Kathoden Puffer 40mM D L Norleucin Norleucin unter Erw rmung aufl sen Stamml sung k nnen auf Grund der limitierten L slichkeit nicht hergestellt werden 25mM Tris HCl pH 9 4 25 v v Methanol Achtung Maximale Stromst rke bei Verwendung des B64 2 5 mA cm Gelfl che 7 3 Hinweise zum Einsatz von Methanol un
11. biometra a part of Analytik Jena Fastblot Semi Dry Blotter Bedienungsanleitung Modell Best Nr B33 014 100 B34 014 200 B43 015 100 B44 015 200 B64 015 600 I Achtung Bitte lessen Sie die Bedienungsanleitung sorgf ltig bevor Sie mit dem Ger t arbeiten Biometra GmbH Service Department Rudolf Wissell Str 30 Rudolf Wissell Str 14 16 D 37079 Goettingen D 37079 Goettingen Tel 49 0 5 51 50 68 6 0 Tel 49 0 5 51 50 68 6 10 or 12 Fax 49 0 5 51 50 68 6 66 Fax 49 0 5 51 50 68 6 11 e mail Info biometra com e mail Service biometra com internet http www biometra de biometra a part of Analytik Jena Diese Bedienungsanleitung beschreibt den Stand der Dinge zum Zeitpunkt der Drucklegung Es muss nicht notwendigerweise mit zuk nftigen Versionen bereinstimmen Irrt mer und nderungen vorbehalten Fastblot Bedienungsanleitung 2009 07 biometra a part of Analytik Jena Inhaltsverzeichnis 1 EINEN era E 3 1 1 Bestimmungsgem e Verwendung u022200220000n00nnnnnnennnnnnnnnnnnnennne nenn nnnenenn 3 1 2 Technische Spezifikationen 02220220020002000nnnnnnnnnnn nenn nenn nenn nen nnn nenn nen nennen 4 1 3 Rechtliche Hinweise nanonnannnnannnnnnnnnnnnnnonrnronrnrrnrsrrnrnrrnrsnrnrrrrnrrnrnrrnrnrrnesnrnrrrrnrrnne 5 2 Sicherheitshinweise 22 200200 n00n0nnunnnnnnunnun nun nun ann nnun nun nun nun nun nun nun nnunnen 6 2 1 Bedeutung
12. d SDS Methanol Verbessert die Bindung von Proteinen an Nitrocellulose Hemmt das quellen des Gels Kann die L slichkeit von Proteinen herabsetzen so da sich die Proteine schlechter blotten lassen SDS Hemmt die Bindung von Proteinen an die Membran Verleiht den Proteinen eine gleichm ige Ladung Kann die antigenen Eigenschaften eines Proteins ver ndern 18 Fastblot Bedienungsanleitung 2009 07 biometra a part of Analytik Jena 7 4 F rbel sung F rbel sung 1 2 09 Coomassie Brilliant Blau R 250 0 59 Coomassie Brilliant Blau G250 425 ml Ethanol 50 ml Methanol 100 ml Essigs ure 425 ml bidest Wasser ber Nacht r hren vor dem Benutzen filtrieren in dunkler Flasche lagern 7 5 Entf rbel sungen Acrylamidgele Schnelles Entf rben in 45 Ethanol 10 Essigs ure 45 bidest Wasser Langsames Entf rben in 25 Isopropanol 10 Eisessig 65 bidest Wasser Letztes Entf rben in 7 Essigs ure in bidest Wasser Fastblot Bedienungsanleitung 2009 07 19 biometra a part of Analytik Jena 8 Produkt Informationen 014 100 Fastblot B33 Komplettsystem Gr e der Elektroden 16cm x 20 cm mit Durchflu k hlung inkl Handbuch 014 200 Fastblot B34 Komplettsystem Gr e der Elektroden 16 cm x 20 cm ohne Durchflu k hlung inkl Handbuch 015 100 Fastblot B43 Komplettsystem mit speziellen Metallelektroden Gr e der Elektroden 16 cm x 20 cm mit Durchflu k hlung inkl Handbuch 015 200 Fa
13. dicken oder kleinporigen Gelen blotten Das Blotten von Nukleins uren ist grunds tzlich auch m glich Es empfiehlt sich jedoch f r Nukleins uren den Transfer mit der Vakuumtechnik vorzunehmen z B Biometra Vacu Blot System Bestellnummer 053 000 B43 B44 B33 B34 B64 Fastblot Bedienungsanleitung 2009 07 3 biometra a part of Analytik Jena 1 2 Technische Spezifikationen Geh use PMMA Anode B33 B34 B64 Spezial Carbon B43 B44 Platin umh lltes Titan Kathode B33 B34 B64 Spezial Carbon B43 B44 rostfreier Spezialstahl K hloption B33 B34 Durchflu k hlung Abmessungen B x L x H B33 B43 26 cm x 22 cm x 11 cm B34 B44 24 cm x 22 cm x 11 cm B64 34 cm x 44 cm x 14 cm Gewicht B33 B34 2kg B43 B44 2 5 kk B64 6kg Maximale Gelgr e B33 B34 B43 B44 15 5 cm x 19 5 cm B64 23 cm x 38 cm Chemische Best ndigkeit Die Komponenten der Semidry Blotter sind nicht best ndig gegen gt 10 Alkohol z B Methanol Ethanol oder organische L sungsmittel z B Aceton Chloroform Toluol Benzol Die Verwendung von organischen L sungsmitteln f hrt zum erl schen der Garantieanspr che Semidry Blooter sind f r die Anwendung in geschlossenen Laboratorien bei Umgebungstemperaturen von 5 C bis 40 C und einer relativen Luftfeuchtigkeit von 80 bei Temperaturen bis zu 32 C linear abnehmend auf 50 bei Temperaturen von 40 C bestimmt A Fastblot Bedienungsanleitung 2009 07 biometra a part of
14. die Verpackung u erlich mit CAUTION SENSITIV ELECTRONIC INSTRUMENT oder VORSICHT HOCHEMPFINDLICHE ELEKTROGER TE Bitte legen Sie eine pr zise Fehlerbeschreibung bei die m glichst auch aufzeigt bei welchen Prozeduren der Fehler auftritt bzw entstanden ist Bitte legen Sie eine Notiz bei die folgendes enth lt a Name und Adresse des Absenders b Ansprechpartner und Telefonnummer f r m gliche R ckfragen c Pr zise Beschreibung des Fehlers Fastblot Bedienungsanleitung 2009 07 23 biometra a part of Analytik Jena 12 Dekontaminationsbescheinigung Um eine Gef hrdung von Mitarbeitern w hrend der Reparatur oder Wartungsarbeiten ausschlie en zu k nnen bitten wir Sie folgendes auszuf llen und zu best tigen Insbesondere verweisen wir auf 8 71 Strahlenschutzverordnung 817 Gefahrstoffverordnung und 19 Chemikaliengesetz FIRMA INSTITUT ADRESSE TEL Nr FAX Nr E MAIL PRODUKT Modell Serien Nr Falls als Leih Probestellger t Beginn Datum Ende Datum Gesundheitsgef hrdende Substanzen Gefahrstoffe die mit diesem Produkt benutzt wurden Das Produkt wurde gereinigt und ggf dekontaminiert bei Verwendung radioaktiver Substanzen ein Wischtest Protokoll beif gen Art der Reinigung Dekontamination Mit der Unterschrift wird best tigt da das Produkt frei von Kontaminationen ist Falls die Dekontamination unzureichend durchgef hrt wurde wird mit der Unterschrift akzeptiert da d
15. e east ee ee re ee ren 19 1 9 Entf rbel sungen Acrylamidgele 0222002200200000000nnn nenne nenn nenn eennnnen 19 8 Produkt Informationen 2 22 2002002000n0nn0nnnunnun ann nnun nun nun nun ann nun nun ann nenn 20 I Reer ne o E EEE AEE EAEE EE ERA 21 Fastblot Bedienungsanleitung 2009 07 1 biometra a part of Analyt k Jena 10 Instandhaltung und Reparatur 2 22002002000n0n0nannnnnn ann nnun nun nun nnn nn nnnnn 22 10 1 Reinigung und Instandhaltung 200240020002n0nenn nen ennn ann nnnnnenene nennen 22 102 SOME ee ee ee ee 22 109 VEISATZIEIE nenne ee ee 22 11 EIVI E ee er ee ener 23 11 1 R cksendungsinstruktionen u222022400040200nnnnnnnnennnnnenenenenenene nenn nnnnnnn nenn nennen 23 12 Dekontaminationsbescheinigung uu2u00n0nn0nannnnunnun nun nun nun nnnnn 24 13 Hinweise zur Entsorgung von Elektroaltger ten 22202200200020000n 26 14 EC Declaration of Conformity EU Konformit tserkl rung 27 15 Garantie EEE NEE EEE NENNE NEE NEENESE IE NEHEESENEENEEENENENEDENEE 28 2 Fastblot Bedienungsanleitung 2009 07 biometra a part of Analytik Jena 1 Einleitung 1 1 Bestimmungsgem e Verwendung Das Elektroblotting ist eine wichtige Methode zum Transfer von Proteinen aus Polyacryl amidgelen auf Nitrocellulose oder andere Tr germembranen 1 2 3 Die Methode des
16. en Fastblot Bedienungsanleitung 2009 07 9 biometra a part of Analytik Jena 4 Bedienelemente Kathode rostfreier Spezialstahl Anschl sse der Durchflu k hlung Spiegelbild auf der Kathode Sicherheitsanschl sse f r den Deckel Anode Platin umh lltes Titan Abstandshalter Kathode Spezial Carbon Anode Spezial Carbon 10 Fastblot Bedienungsanleitung 2009 07 biometra a part of Analytik Jena 5 Betrieb 5 1 Protein Blotting Um die optimalen Transferbedingungen zu ermitteln sollte jeweils eine Zeitreihe mit Elektrotransfers durchgef hrt werden Da viele Faktoren den Transfer beeinflussen z B Molekulargewicht IP Porengr e des Gels kann es sein dass die zun chst geplante Transferzeit verk rzt werden kann 5 1 1 Vorbereitung des Blotting Sandwiches Schritt 1 Entfernen Sie sofort nach Beendigung der Elektrophorese die Glasplatten von dem Gel und schneiden Sie den Teil des Gels aus den Sie blotten m chten A Achtung Tragen Sie Handschuhe Schritt 2 Schneiden Sie das Blottingpapier auf die Gr e des Gels zu Tr nken Sie 5 Lagen 0 34 mm dickes Blottingpapier Whatman 3MM Chr oder 3 Lagen 0 92 mm dickes Blottingpapier Whatman 17Chr oder 2 Lagen 1 2 mm dickes Blottingpapier Whatman GB005 mit Transferpuffer Legen Sie das getr nkte Filterpapier auf die Anode Die Anode ist die Elektrode am Ger tekorpus Schritt 3 Schneiden Sie die Membran Standardmembran Nitrocellul
17. en verwechseln Sie nicht die Zu und Abflu verbindungen f r das K hlwasser Die K hlwasserverbindung mit dem schmaleren Durchmesser ist der Zuflu die Verbindung mit dem breiteren Durchmesser der Abflu R Die beste K hlung wird bei Verwendung eines Thermostaten mit einer Temperatur von 5 C erreicht Achtung Reduzieren Sie die Flu rate auf maximal 1 I min und verwenden Sie weder organische L sungsmittel noch Alkohol Betriebsbedingungen mr Ei e Max Spannung 5 mA 3 5 mA Max Stromst rke cm gel 8 W 10 W 50 C Max Temperatur H3 10 H 9 pH Bereich Elektroden P p Max Flu rate der n A K hlfl ssigkeit L min drucklos Lange Transferzeiten werden nicht empfohlen Lassen Sie das Ger t nicht unbeaufsichtigt Joul sche W rme kann schnell w hrend des Transferprozesses generiert werden Transferzeiten von l nger als 2 Stunden k nnen die Apparatur besch digen Fastblot Bedienungsanleitung 2009 07 7 biometra a part of Analytik Jena Justieren Sie nicht den pH Wert von Transfer Puffern wenn dieses nicht ausdr cklich in der Anleitung spezifiziert ist Ansonsten kann es zu einer Reduzierung der Leitf higkeit kommen die in einer Erh hung der Spannung resultiert Verwenden Sie keinen Alkohol z B Methanol Ethanol oder organische L sungsmittel zum K hlen oder Reinigen des Ger tes Das Ger t entspricht den EN 61616 1 Sicherheitsstandards Zertifizierte Ger te si
18. er Auslieferung an den Besteller durch Biometra oder einen autorisierten H ndler Die Garantie kann ohne schriftliches Einverst ndnis von Biometra nicht auf Dritte bertragen werden Die Gew hrleistung ist beschr nkt auf das Produkt und gegebenenfalls mitgeliefertes Originalzubeh r Die Gew hrleistung setzt voraus da das Ger t ausschlie lich entsprechend der Anleitung betrieben wurde Innerhalb der Garantie repariert oder ersetzt Biometra alle zur ckgesandten defekten Teile ohne Berechnung Die Garantie gilt nicht f r Sch den die durch unsachgem f en Gebrauch Fahrl ssigkeit oder normalen Verschlei verursacht sind Biometra GmbH Service Department Rudolf Wissell Str 30 Rudolf Wissell Str 14 16 D 37079 Goettingen D 37079 Goettingen Tel 49 0 5 51 50 68 6 0 Tel 49 0 5 51 50 68 6 10 or 12 Fax 49 0 5 51 50 68 6 66 Fax 49 0 5 51 50 68 8 11 e mail Info biometra com e mail Service biometra com internet http www biometra de 28 Fastblot Bedienungsanleitung 2009 07
19. er aus der K hlsystem austritt wenn Besch digungen am Fastblot sichtbar sind oder wenn die Kabel abgenutzt oder besch digt sind Stellen Sie sich dass der An Aus Schalter des verwendeten externen Stromversorgers jeder Zeit frei zug nglich ist Achtung Hochspannung Die Stromversorgung vom externen Stromversorger zum Ger t erfolgt ber den Sicherheitsdeckel welcher eine Sicherheitssperre zum Schutz des Anwenders darstellt Die Stromversorgung wird unterbrochen wenn der Deckel ge ffnet wird Versuchen Sie niemals diese Sicherheitsvorrichtung zu umgehen und schalten Sie grunds tzlich den Stromversorger aus bevor sie den Deckel ffnen oder eine T tigkeit am Ger t durchf hren Pb gt gt Pb gt gt 3 6 Fastblot Bedienungsanleitung 2009 07 biometra a part of Analytik Jena A gt gt Die Elektrizit t f r das Ger t wird von einem externen Gleichspannungs Stromversorger geliefert Die Ausg nge dieses Stromversorgers m ssen den g ltigen Sicherheitsvorschriften entsprechen Alle Biometra Stromversorger entsprechen diesen Anforderungen Stellen Sie niemals ein Instrument auf einen Stromversorger Ver ndern Sie nicht die Polarit t der Elektroden Die Anode befindet sich auf dem Korpus des Fastblots und die Kathode im Deckel Eine nderung der Polarit t f hrt zu Korrosionserscheinungen and der Kathode oderSch den an den Spezial Carbon Elektroden Wenn Sie die K hloption verwend
20. es der Hochspannungs Power Packs von Biometra auf eine konstante Stromst rke von maximal 3 5 mA cm B64 bzw maximal 5 mA cm B33 B34 B43 B44 Gelfl che ein A Achtung Die maximale Leistung f r die Modelle B33 B34 B43 B44 betr gt 8 Watt Die beiden Elektroden bestehen aus unterschiedlichen Materialien ndern Sie A die Polarit t der Elektroden nicht Die Anode befindet sich am Korpus des Fastblots die Kathode im Deckel des Ger tes Schritt 11 Erw rmt sich der Deckel w hrend des Blotvorgangs so reduzieren Sie die Stromst rke oder legen Sie ein vorgek hltes K hlkissen auf A Die maximale Betriebstemperatur darf 50 C nicht berschreiten Schritt 12 Bei der Verwendung der Durchflu k hlung ist das Folgende zu beachten Der Wasserzuflu der K hlung ist an seinem im Verh ltnis zum A Wasserabflu schmaleren Durchmesser zu erkennen Verwechseln Sie niemals den Zu und den Abflu der K hlung Die Flu geschwindigkeit des K hlwassers sollte maximal 0 5 1 l min A drucklos betragen Die beste K hlung wird bei Verwendung eines Thermostaten Bestell A nummer 043 300 oder 043 390 mit einer Temperatur von 5 C erreicht Vorsicht Reduzieren Sie die Flu rate auf maximal 1 l min drucklos und verwenden Sie weder organische L sungsmittel noch Alkohol Schritt 13 Stellen Sie nach Beendigung des Transfers zuerst das Spannungsger t aus und ziehen Sie die Stecker aus dem Sp
21. ie damit verbundenen Folgekosten z B Dekontamination durch eine Fachfirma bzw Entsorgung des Produktes als radioaktiver Abfall durch eine Fachfirma zu Lasten des Verursachers gehen Name Stellung in Fa Institut Leiter des Institutes Abt Firma Unterschrift Datum Bitte senden Sie dieses Formular zusammen mit dem Produkt an Biometra G ttingen oder an Ihren Biometra Au endienstmitarbeiter Bitte bringen Sie dieses Formular ausgef llt an der Au enseite der Verpackung an Produkte ohne dieses Formular werden kostenpflichtig an den Absender zur ckgeschickt 24 Fastblot Bedienungsanleitung 2009 07 biometra a part of Analytik Jena Allgemeine Hinweise zur Dekontamination Bitte wenden Sie sich an Ihren Sicherheitsbeauftragen oder Sicherheitsingenieur Bei Verwendung radioaktiver Substanzen Bitte wenden Sie sich an Ihren Strahlenschutzbeauftragten Bei Verwendung gentechnisch ver nderter Organismen oder Teilen davon Bitte wenden Sie sich an Ihren Gentechnikbeauftragten Fastblot Bedienungsanleitung 2009 07 25 biometra a part of Analytik Jena 13 Hinweise zur Entsorgung von Elektroaltger ten ww Das Symbol der durchgestrichenen Abfalltonne bedeutet f r unsere Kunden in Deutschland dass dieses Produkt von der Firma Biometra kostenlos zur Entsorgung zur ckgenommen wird Zu diesem Zweck kontaktieren Sie bitte unsere Service Abteilung Au erhalb Deutschlands wenden Sie sich bitte an
22. lotting Sandwich wird entsprechend der Angaben in Kapitel 6 Handhabung aufgebaut Als Transferpuffer wird 1 x TAE oder 1 x TBE empfohlen Oberhalb und unterhalb des Blot Sandwiches werden 10 Blatt Whatmann 3MM getr nkt mit Transferpuffer verwendet F r den Transfer ist es wichtig da die Membran z B Nylon Membran auf der Anoden Seite des Gels aufgelegt wird Der Transfer sollte nicht l nger als ca 30 min dauern A Achtung Keine Nitrocellulose Membranen verwenden da diese in basischen L sungen nicht stabil sind Fastblot Bedienungsanleitung 2009 07 15 biometra a part of Analytik Jena 6 Allgemeine Blotting Infromationen 6 1 Transfereffizienz Die Effizienz des Transfers kann durch die Verwendung von Standardproteinen an welche kovalent Coomassie Brilliant Blau gebunden ist berpr ft werden Nach dem Blotvorgang kann das Gel mit Coomassie Brillant Blau gef rbt werden um die Vollst ndigkeit des Transfers zu kontrollieren 6 2 Transferbedingungen Die bertragungsbedingungen Zeit Stromst rke sollten f r jedes Protein optimiert werden In Abb 1 sind die bertragungszeiten und raten einiger Proteine zusammengefa t Mit Hilfe dieser Abbildung sind grobe Absch tzungen der Transferzeiten m glich e Die Transferzeit wird auch von der Geldicke und der Acrylamidkonzentration beeinflu t e Ist die gew hlte Transferzeit zu lang ist es m glich da das Protein die Membran passiert und verloren geht Dies
23. nd sicher in der Handhabung wenn sie entsprechend der Bedienungsanleitung genutzt werden Das Ger t sollte niemals ver ndert werden nderungen f hren zu einem Verlust der Garantie Ung ltigkeit der EN 61010 1 Zertifizierung und bergen potentiell Sicherheitsgefahren Fastblot Bedienungsanleitung 2009 07 biometra a part of Analytik Jena 3 Installation 3 1 Lieferumfang Der Fastblot wird ausgeliefert mit Korpus mit Elektrode Anode B33 B43 enthalten Durchflu k hlung Deckel mit Elektrode Kathode Kabel dauerhaft verbunden mit dem Deckel mit Sicherheitsstecker Gaarantiekarte Handbuch 3 2 Auspacken und Pr fen Packen Sie das Ger t aus und untersuchen Sie es vorsichtig Finden Sie dabei Besch digungen so verwenden Sie das Ger t nicht und informieren Sie BIOMETRA Heben Sie in diesem Fall das Verpackungsmaterial auf I Achtung Bitte f llen Sie die Garantiekarte aus und schicken diese zur ck Dies ist wichtig f r Sie um den vollen Garantieanspruch zu erhalten 3 3 Installation des Ger tes Stellen Sie das Ger t in der N he des Stromversorger auf der f r die Versuche verwendet werden soll Achten Sie darauf da das Ger t an einem sicheren und trockenen Platz steht und einen ausreichenden Sicherheitsabstand zum Rand der Arbeitsplattform hat 3 4 Stromversorgung Dieses Ger t wurde f r die Verwendung mit Wechselstrom entwickelt WF Achtung Dieses Ger t darf nicht geerdet werd
24. ose vorsichtig auf Gelgr e zurecht Tr nken Sie die Membran ebenfalls mit Puffer 5 min und legen Sie sie auf die in Schritt 2 vorbereiteten Filterpapiere Bei Verwendung von PVDF Membranen mu diese zun chst in Methanol inkubiert werden 1 2 sec anschlie end 5 min in dest Wasser und danach in Transferpuffer Achtung Vermeiden Sie den Einschlu von Luftblasen wei e Flecken auf der Membran und ber hren Sie die Membran nur mit Handschuhen Schritt 4 quilibrieren Sie das Gel f r 5 min in Transferpuffer Bei Verwendung diskontinuierlicher Puffersysteme sollte das Gel in Kathodenpuffer quilibriert werden Achtung Die Zeiten f r die quilibrierung des Gels in Transferpuffer sollten konstant gehalten werden da k rzere oder l ngerer Inkubationszeiten die Transfereffizienz beeinflussen k nnen Schritt 5 Legen Sie das SDS Polyacrylamidgel auf die Membran A Achtung Vermeiden Sie Luftblasen Fastblot Bedienungsanleitung 2009 07 11 biometra a part of Analytik Jena Schritt 6 Legen Sie nun 5 Lagen 0 34 mm dickes Blottingpapier Whatman 3 MM Chr oder 3 Lagen 0 92 mm dickes Blottingpapier Whatman 17Chr oder 2 Lagen 1 2 mm dickes Blottingpapier Whatman GB005 auf das Polyacrylamidgel Auch in diesem Fall m ssen die Filterpapiere vor Verwendung in Transferpuffer getr nkt werden Verwenden Sie KEINE basischen Puffer mit pH lt 3 und keine alkalischen Puffer mit pH gt 9 B64 bzw p
25. stblot B44 Komplettsystem mit speziellen Metallelektroden Gr e der Elektroden 16 cm x 20 cm ohne Durchflu k hlung inkl Handbuch 015 600 Fastblot B64 Komplettsystem Gr e der Elektroden 22 5 cm x38 5 cm mit passiver K hlung inkl Handbuch Blotting Papier 10 426 981 Whatman GB005 200 mm x 200 mm 1 2 mm dick 25 Blatt 10 426 994 Whatman GB005 580 mm x 580 mm 1 2 mm dick 25 Blatt 3017915 Whatman 17 Chr 460 mm x 570 mm 0 92 mm dick 100 Blatt 3030 931 Whatman 3MM 580 mm x 680 mm 0 34 mm dick 100 Blatt Nitrocellulose Blotting Membranen 10 401 396 Whatman Protran BA83 Porengr e 0 20 um 30 cm x 3 m Rolle 10 401 196 Whatman Protran BA85 Porengr e 0 45 um 30 cm x 3 m Rolle 10 401 180 Whatman Protran BA85 Porengr e 0 45 um 30 cm x 60 cm 5 Stk Pkg 10 402 580 Whatman Protran BA85 Porengr e 0 45 um 33 cm x 56 cm 5 Stk Pkg 10 439 196 Whatman Protran BA S 85 Porengr e 0 45 um 30 cm x 3 m Rolle 20 Fastblot Bedienungsanleitung 2009 07 biometra a part of Analytik Jena 9 Referenzen 1 Towbin H Staehlin T and Gordon J 1979 Proc Nat Acad Sci 76 4350 4356 2 Bittner M Kupferer P and Morris C F 1980 Anal Biochem 102 459 571 3 Burnette W N 1981 Anal Biochem 112 195 203 4 Kyse Andersen J 1984 J Biochem Biophys Meth 10 203 209 Fastblot Bedienungsanleitung 2009 07 21 biometra a part of Analyt k Jena 10 Instandhaltung und Reparatur
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