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Amersham WB system Bedienungsanleitung

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1. ACHTUNG F r die Wartung oder Instandsetzung des Systems d rfen nur Er satz und Zubeh rteile verwendet werden die von GE zugelassen oder geliefert wurden ACHTUNG Beim Austausch eines besch digten Netzkabels ein Ersatzkabel desselben Typs und derselben Ma e verwenden das alle geltenden rtlichen elektrotechnischen Anforderungen erf llt und von GE zugelassen wurde ACHTUNG Vor einem Austausch der Netzsicherung stets die Netzstromversor gung trennen F r ununterbrochenen Schutz gegen die Brandgefahr nur gegen eine Sicherung austauschen deren Typ und Leistung den Angaben auf den Ger teetiketten entspricht VORSICHT Bei Verwendung von gef hrlichen Chemikalien alle angemessenen Schutzma nahmen einhalten wie beispielsweise das Tragen einer Schutzbrille und Handschuhe die resistent gegen die verwendeten Substanzen sind Lokale Vorschriften und Anweisungen f r den si cheren Betrieb und die Wartung des Systems befolgen A A A A A In diesem Kapitel Dieses Kapitel enth lt die folgenden Abschnitte Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 195 6 Wartung Abschnitt Siehe Seite 6 1 Wartungsprogramm 197 6 2 Anweisungen zur Wartung 202 196 Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 6 Wartung 6 1 Wartungsprogramm 6 1 Wartungsprogramm Einfuhrung Dieser Abschnitt listet die Wartungsarbeiten auf die von dem Benutzer des Amers
2. 212 Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE Schritt 6 Wartung 6 2 Anweisungen zur Wartung 6 2 2 Austauschverfahren MaBnahme 6 10 11 12 Den Pumpenkopf aus dem Wartungsfach herausheben Anmerkung Beim Entfernen des Kopfes darauf achten dass keine Schl uche in der Western Ger teeinheit besch digt oder verbogen werden Wenn ein Schlauch beschd digt oder verbogen ist muss er gegen einen neuen Schlauch ausgetauscht werden Kundendienst verst ndigen und Hilfe anfordern Einen neuen Pumpenkopf auspacken Den neuen Pumpenkopf in die richtige Position bringen und im Uhrzeigersinn drehen Anmerkung Sicherstellen dass sich das dazugeh rige Rad des Pumpenkopfes in der richtigen Position f r die Antriebswelle des Pumpenmotors befindet Die Arretierung verriegeln um den Pumpenkopf in der richtigen Position zu halten Den Pumpenschlauch rechts mit dem rechten Anschluss des Pumpenkopfes verbinden Den Pumpenschlauch links mit dem linken Anschluss des Pumpenkopfes verbinden Den Deckel des Wartungsfachs schlie en Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 213 6 Wartung 6 2 Anweisungen zur Wartung 6 2 2 Austauschverfahren Austauschen der Transferelektroden Wenn das Transferverfahren fehlschl gt k nnten defekte Transferelektroden die Ursache sein Es empfiehlt sich beide Elektroden auszutauschen Die nachstehende Anweisung beschreibt wie die Transferelektr
3. Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 4 Installation 4 2 Hardwareinstallation Schritt Ma nahme 3 Die Membrantrocknerf hrungen in die zwei Schlitze setzen Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 109 4 Installation 4 2 Hardwareinstallation Einbauen eines Matrixmarkierungslesers optional Schritt MaBnahme 1 Das USB Kabel an den Matrixmarkierungsleser anschlieBen 2 Das USB Kabel am Computer anschlieBen 3 Den Matrixmarkierungsleser gem den Anweisungen in der Benutzerdoku mentation fur den Matrixmarkierungsleser programmieren und seine Funktion berpr fen 110 Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 4 3 Softwareinstallation Installieren der Amersham WB software 4 Installation 4 3 Softwareinstallation So wird die Software auf einem Computer mit Windows 7 Professional installiert Anmerkung Es empfiehlt sich vor der Installation der Software alle ausstehenden Windows Aktualisierungen zu installieren und die Anweisungen in den Bedienerhinweisen zu befolgen Es empfiehlt sich nach einem Klick auf Install Installieren die vollst n dige Installation ohne Unterbrechungen durchzuf hren Schritt Ma nahme 1 Die Software DVD in den Computer einlegen Wenn das erste Assistentendialogfeld angezeigt wird auf Install Installieren klicken um die Softwarevoraussetzungen zu installieren Amersham WB software InstallShield Wiz
4. 1 Wenn die Netzkabel abgezogen wurden die Kabel an der R ckseite der Ger teeinheiten anschlie en Sicherstellen dass die Netzschalter auf der R ckseite der Ger teeinheiten eingeschaltet sind I Ergebnis Die Gerdteeinheiten werden gestartet 2 Den Computer und die Software starten siehe Starten der Software auf Seite 124 Wenn die Gerdteeinheiten angeschlossen sind wird das Protokollereignis im Experimenteprotokoll gespeichert 3 Wenn ein Programmlauf abgeschlossen werden soll der unterbrochen wurde die Experimentdatei f r den Programmlauf ffnen Danach das Dia logfeld Experiment Information Informationen zum Experiment ffnen und die Registerkarte Experiment log Experimenteprotokoll ausw hlen Auf der Registerkarte Experiment log Experimenteprotokoll berpr fen in welchem Schritt das Experiment unterbrochen wurde Die Teile des Schritts entfernen die beendet waren als der Programmlauf unterbrochen wurde und den Schritt neu starten 34 Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 2 Sicherheitsanweisungen 2 4 Informationen zum Recycling 2 4 Informationen zum Recycling Einf hrung Dieser Abschnitt enth lt Informationen ber die Entsorgung des Amersham WB analyzer Dekontamination Das Amersham WB analyzer muss vor der Entsorgung dekontaminiert werden und bei der Verschrottung des Ger ts m ssen alle rtlichen Vorschriften befolgt werden Entsorgung allgemeine Anweisungen
5. 5 Durchf hren eines Experiments 5 3 Einrichten eines Experiments in der Software Zum ffnen des Benutzerhandbuchs das Men element Help View user manual Hilfe Benutzerhandbuch anzeigen ausw hlen oder Strg F1 dr cken Erstellen und Einrichten eines Experiments Schritt Abbildung des Schritts gt Create New Experiment All Western experiments include necessary SDS PAGE steps D Easy Western Western with total protein normalization D Western with endogenous protein normalization Easy SDS PAGE Create Aktion des Bedieners Den Experimenttyp ausw h len und auf Create Erstellen klicken In diesem Beispiel Western with total protein normalization Western mit Gesamtprotein Normalisie rung Ergebnis Der Hauptbild schirm der Software wird angezeigt Hier wird der Ar beitsschritt EXPERIMENT amp SAMPLES Experiment und Proben dargestellt Einen berblick ber den Hauptbildschirm finden Sie unter Abschnitt 3 9 berblick ber die Software auf Sei te 89 WW EXPERIMENT amp SAMPLES Gel card 14 13 5 Gel card 14 8 18 e Die Anzahl der Gelkarten f r das Experiment w h len e Den Gelkartentyp aus w hlen Informationen ber Proteintrennungsin tervalle finden Sie unter Aufl sung der Proteintren nung auf Seite 71 Ergebnis Die Tabelle Gel card A Gelkarte A und die Optionen im Bereich Antibo dies for Membrane A Anti k rper f r Membran A
6. Trocknung PVDF Karte aus dem Sondierungsschritt Erforderliche Zubeh rteile Amersham WB dry ing holder Trock nungshalter Informatio nen hierzu siehe Scannen der PVDF Karte aus dem Trocknungsschritt PVDF Karte in der Elpho amp scan Ge r teeinheit Amersham WB membrane adaptert Membranadapter Abschnitt 3 7 4 Sonstiges Scannen von Da tenmatrix Tags auf Gelkarten und PVDF Kartenein zelpackungen optional 1 Enthalten im Lieferumfang des Amersham WB analyzer Bestellen von Verbrauchsmaterialien Matrixmarkierungsle ser separat bestel len Abschnitt 3 8 Je nach den durchzuf hrenden Experimenten werden verschiedene Kombinationen von Verbrauchsmaterialien ben tigt Ein Auswahlleitfaden f r das Zusammensetzen eines Satzes von Verbrauchsmaterialien steht unter www gelifesciences com zur Verf gung Bestellinformationen f r separate Verbrauchsmaterialien finden Sie im Amersham WB system User Manual 62 Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 3 Systembeschreibung 3 4 berblick ber Zubeh rteile und Verbrauchsmaterialien Lagerung von Verbrauchsmaterialien Die nachstehende Tabelle fasst die Lagerungs und Umweltbedingungen fur die verschie denen Verbrauchsmaterialien zusammen Das Ablaufdatum der Verbrauchsmaterialien ist auf der Packung aufgedruckt Verbrauchsmaterial Lagerungstemperatur Umgebung Prelabeling Verbrauchsmateria 15
7. Wenn das Amersham WB analyzer au er Betrieb gesetzt wird m ssen die unterschied lichen Werkstoffe gem den nationalen und rtlichen Umweltbestimmungen getrennt und recycelt werden Recycling gef hrlicher Substanzen Das Amersham WB analyzer enth lt gef hrliche Substanzen Ausf hrliche Informationen erhalten Sie von Ihrem GE Vertreter Entsorgung elektrischer Komponenten Elektro und Elektronik Altger te d rfen nicht als unsortierter Hausm ll entsorgt werden und sind getrennt zu sammeln Nehmen Sie Kontakt mit einem autorisierten Vertreter des Herstellers auf um Informationen hinsichtlich der Entsorgung des Ger ts zu erhalten Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 35 3 Systembeschreibung 3 Systembeschreibung Zu diesem Kapitel In diesem Kapitel werden die verschiedenen Bestandteile des Amersham WB system beschrieben Das Amersham WB system besteht aus e Amersham WB analyzer zwei Ger teeinheiten e Zubeh rteile und Verbrauchsmaterialien zur Verwendung mit dem Ger t e ein Computer nicht im Lieferumfang enthalten e Amersham WB software In diesem Kapitel Dieses Kapitel enth lt die folgenden Abschnitte Abschnitt Siehe Seite 3 1 berblick ber das Ger t 37 3 2 Elpho amp scan Ger teeinheit 40 3 3 Western Ger teeinheit 45 3 4 berblick ber Zubeh rteile und Verbrauchsmaterialien 60 3 5 Prelabeling Verbrauchsmaterialien 65 3 6 Zubeh rteile und Verbrauchsmateriali
8. 5 Durchf hren eines Experiments 5 7 Durchf hren des Transfers 5 7 3 Ausf hren des Transfers Starten und berwachen des Transfers VORSICHT Stromschlaggefahr Einen laufenden Transferlauf stets stoppen bevor Fl ssigkeit vom Ger t oder Arbeitstisch aufgewischt wird Schritt Abbildung des Schritts Aktion des Bedieners Im Hauptbildschirm der Software auf den Arbeitsschritt TRANSFER klicken TRANSFER Gel Cards amp Membranes Membrane 4f Position A J Position B ID Enter ID Enter ID Note Write note Write note Gel card ID Note lt Transfer Protocol Duration 30 15 180 minutes Ort Voltage limit 100 10 100V Default Solutions amp Volumes a i Transfer buffer Cleaning Description Tris Glycine 20 Ethanol Water Total volume 1000 mi 1000 mi Die Standardeinstellungen f r das Transfer Protocol Transferprotokoll verwenden die im Bildschirmfoto dargestellt sind 168 Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 5 Durchf hren eines Experiments 5 7 Durchf hren des Transfers 5 7 3 Ausf hren des Transfers Schritt Abbildung des Schritts Aktion des Bedieners Im Bereich Transfer auf Start Starten kli Transfer cken start Ready for Transfer Anmerkung W hrend des Transferlaufs empfiehlt es sich die L sungen zuzubereiten und anzuschlie Ben die im Sondierungsschritt verwendet werden sollen F r weitere Informationen siehe Ab
9. Anmerkung Darauf achten die Kartenplat te nicht mit scharfen Gegen st nden zu zerkratzen Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 139 5 Durchf hren eines Experiments 5 6 Durchf hren der Proteinelektrophorese 5 6 1 Vor der Elektrophorese Schritt Abbildung des Schritts Aktion des Bedieners e Den Dichtungsdeckel schlie en e Das Ende der Probenbet tabdeckung ergreifen und vorsichtig entfernen Tipp Den Griff wahrend des Entfer nens der Probenbettabde ckung wechseln damit ein Festhalten m glichstnahe an den Betten m glich ist Anmerkung Wenn die Probenbettabde ckung zerbricht Die Gelkarte bei geschlossenem Dichtungs deckel im Lader belassen Den Rest der Bettabdeckung z B mit einer Pinzette entfer nen 140 Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 5 Durchf hren eines Experiments 5 6 Durchf hren der Proteinelektrophorese 5 6 1 Vor der Elektrophorese Schritt Abbildung des Schritts Aktion des Bedieners Die Proben den Ladepuffer und oder das Molekulargewichtsmarker gem der Angaben auf dem Bildschirm EXPERIMENT amp SAMPLES Experiment und Proben der Software in die Betten laden normalerweise 20 ul Bett Anmerkung Nach dem Laden der Proben niemals den Deckel ffnen Anmerkung Alle Vertiefungen m ssen mit einer Probe einem Ladepuf fer mit einer gleichen Menge von Reinstwasser verd nnt oder Molekulargewich
10. C bis 30 C Inhalt von direkter Sonnenein lien strahlung sch tzen Vermeiden Sie wiederholtes Einfrieren und Auftauen des Cy5 Farbstoff Reagenz Gel stes Cy5 Farbreagens sollte innerhalb von 30 Min verwendet werden und darf nicht eingefroren werden Amersham WB molecular 15 C bis 30 C Sch tzen Sie die Molekularge weight markers wicht MW Marker vor direkter Sonneneinstrahlung Die MW Marker m ssen stets im Gefrier fach gelagert werden Halten Sie die Zeit bei Raumtempera tur vor der Verwendung so ge ring wie m glich und vermei den Sie ein erneutes Einfrieren MW Marker die in Ladepuffer mit DTT verd nnt werden k n nen in Aliquoten f r eine einma lige Verwendung dosiert wer den wenn sie direkt nach der Verd nnung eingefroren wer den Die Aliquoten sollten nicht l nger als eine Woche gelagert werden Amersham WB gel card 4 C bis 8 C Im K hlschrank oder im K hl raum lagern Amersham WB buffer strips 4 C bis 8 C Im K hlschrank oder im K hl raum lagern Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 63 3 Systembeschreibung 3 4 berblick ber Zubeh rteile und Verbrauchsmaterialien Verbrauchsmaterial Amersham WB PVDF card Lagerungstemperatur Raumtemperatur Umgebung Bewahren Sie die PVDF Karte in der Einzelpackung in der Schachtel in der diese geliefert werden auf Bewahren Sie die Schachtel an einem sauberen und trockenen Ort vo
11. schnitt 5 8 1 Zubereiten und Anschlie en der Sondierungs und Antik rperl sungen auf Seite 174 Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 169 5 Durchf hren eines Experiments 5 7 Durchf hren des Transfers 5 7 4 Verfahren nach dem Transfer 5 7 4 Verfahren nach dem Transfer Einf hrung In diesem Abschnitt werden die Reinigungsverfahren beschrieben die nach dem Transfer durchzuf hren sind Entfernen des der Transferhalter s Schritt MaBnahme 1 Den Transferbeh lterdeckel ffnen 2 Die Transferhalter entfernen Die Transferhalter diagonal innen an der Vor derseite des Transferbeh lters ber der Fl ssigkeit aufh ngen Anmerkung Um das Austrocknen von Membranen zu vermeiden die Transferhalter in diesem Schritt nicht ffnen 170 Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 5 Durchf hren eines Experiments 5 7 Durchf hren des Transfers 5 7 4 Verfahren nach dem Transfer Reinigen des Stromungswegs f r Transfer Anmerkung Vor dem Fortsetzen der Reinigung den Transferhalter entfernen Schritt Ma nahme 1 Wenn der Transfer abgeschlossen ist wird das Dialogfeld Transfer Comple ted Clean Transfer Flow Path Transfer abgeschlossen Str mungsweg f r Transfer reinigen angezeigt Anmerkung Es empfiehlt sich den Str mungsweg f r Transfer nach einem Programmlauf zu reinigen Wenn Sie das Reinigung des Transferstr mungswegs berspringen m chten kli
12. Anmerkung Ber hren Sie den Blotting Bereich mit einem roten Quadrat im Bild markiert nicht mit den Fingern Halten Sie die PVDF Karte an den Griffen 156 Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 5 Durchf hren eines Experiments 5 7 Durchf hren des Transfers 5 7 2 Vorbereiten des Transfer Sandwich Schritt Ma nahme 5 Optional Die PVDF Karteninformationen in der Software eingeben e Inder Software den Arbeitsschritt TRANSFER ausw hlen e Den Cursor im Bereich Gel Cards amp Membranes Gelkarten und Membra nen in das entsprechende ID Feld setzen e Tragen Sie die Kennnummer manuell ein oder scannen Sie den Data Matrix Tag auf der Markierung der PVDF Karten Einzelpackung Amersham WB PVDF card 1 piece i 29022566 Lotno 00115381 Identity no 0000001 Remove ond A e se e Umeine Anmerkung Uber die Membran einzugeben den Cursor in das Feld Note Anmerkung setzen und eine Anmerkung eintippen Tipp Die Chargennummer eintippen Diese ist nicht in der Datenmatrix enthal ten sondern auf dem Etikett des Kartons mit den PVDF Karten Gel Cards amp Membranes Membrane J Position A M Position B ID Note 6 Erfassen Sie die PVDF Kartengriffe und befeuchten Sie die Karte im Ethanol indem Sie sie f r ca 20 Sekunden in das Fach mit Ethanol legen Fi Die Karte PVDF zum Transferpufferbeh lter der PVDF Karte verlagern und f r mindestens 5 Minuten equilibrieren Anmerkung Sicherstellen dass
13. sind aktiviert Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 125 5 Durchf hren eines Experiments 5 3 Einrichten eines Experiments in der Software Schritt Abbildung des Schritts Aktion des Bedieners DEREN Probeninformationen und SER RE Kommentare in der Tabelle Sie unter Abschnitt 3 6 1 Amersham WB molecular weight markers auf Seite 68 Li Lumpie 14 barmpis LS imernhin WE i More Typ Suen BD Aiur Se oe E Ur lt n ii Gel card A Gelkarte A einge 2 Asmerchars WE MW Marware Wr ben optional reall E pana Informationen ber Moleku 6 Sample iv largewichtsmarker und die T Sarigee ae oo vw i automatische Berechnung ae T der Kalibrierungskurve f r sage a 11 Sample Ez das Molekulargewicht finden 12 Semele bd a u 16 Black Tipp Die Probentabelle wird w h rend der Elektrophorese nicht gesperrt Wenn ein Pro grammlauf schnell gestartet werden muss kann die Tabel le daher im Elektrophorese Schritt ausgef llt werden nachdem der Programmlauf gestartet wurde 126 Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 5 Durchf hren eines Experiments 5 3 Einrichten eines Experiments in der Software Schritt Abbildung des Schritts Aktion des Bedieners JEFE IEN EET DATER SAE Den Namen die Beschrei O Primary ab against target Enter description bu ng des Primary ab Labeled secondaryab Select Labeled secondaryab
14. t angeschlossen ist e Help Erstellen von Systemberichten ffnen Sie das Hilfe Panel das Benutzerhandbuch und den About Amersham WB Dialog 2 Workflow Feld Das Workflow Feld stellt die verschiedenen Arbeitsschritte f r ein Experiments in der Software dar Es ist m glich weiter und zur ck zu gehen um Informationen und Parameter in den ver schiedenen Arbeitsschritten anzuzeigen und zu bearbeiten bevor ein Programmlauf gest artet wird d h Elektrophorese Transfer Sondierung Trocknung oder Membranscan Es ist immer m glich zur ck zu gehen und in den verschiedenen Arbeitsschritten w hrend und nach einem Programmlauf Text in Informationsfeldern zu bearbeiten Die Probenta belle kann z B gef llt werden nachdem die Elektrophorese gestartet wurde Anmerkung F r ein Elektrophorese Experiment werden die Arbeitsschritte TRANSFER PROBING amp DRYING Sondierung und Trocknung und MEMBRANE SCANNING Membranscan abgeblen det Diese Schritte werden nur in Western Experimente einbezogen 3 Arbeitsbereich Der Arbeitsbereich zeigt die Textinformationen die Parameter und die Steuerelemente f r den aktuell angezeigten Arbeitsschritt Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 91 3 Systembeschreibung 3 9 berblick ber die Software Flache Beschreibung Ger testatus Feld Das Ger testatus Feld zeigt den Verbindungsstatus des Ger ts Wenn das Ger t ange schlossen ist wird der Status je
15. 147 Membranadapter 193 198 Pufferstreifenhalter 147 198 Stromungsweg f r Sondie rung 185 199 Str mungsweg f r Trans fer 171 199 Transferbeh lter 199 Transferhalter 172 Trocknungsfach 201 Trocknungshalter 193 199 Rezepturen Antik rperl sungen 174 Sondierungsl sungen 174 Transferl sungen 149 S Scannen Prozeduren nach 193 PVDF Karte 189 Vorbereitungen vor 189 Schlauchhalter Anbringen 106 Beschreibung 88 Schlauchschafte Montieren 104 Schwamm Beschreibung 82 Legen in den Transferhol der 158 Sicherheit Hinweise 9 Sicherheitsschalter 37 Sicherheitsvorkehrungen Einfuhrung 18 Software Installation 111 Starten 124 Uberblick 89 Sondierung Index 234 Anschlie en der Antik rper l sungen 176 Anschlie en der Sondie rungsl sungen 175 Austauschen des Sondie rungspumpenkopfes 210 Fl ssigkeitsweg 58 Grundprinzip des Sondie rungsvorgangs 59 Reinigen des Str mungs wegs 185 Reinigen des Str mungs wegs f r Sondierung 199 Starten und Uberwa chen 182 Vorf llen der Sondierungs kammer 179 Wartung frei von Str mungs weg 204 Zubereiten von Sondie rungs und Antik rperl sun gen 174 Sondierungsfach Beschreibung 51 7 Transfer Anschlie en der Losun gen 150 Austauschen der Transfer elektroden 214 Austauschen des Transfer beh lterfilters 215 Austauschen des Transfer pumpenkopfes 210 Fl ssigkeitsweg 56 Grundprinzip des Transfer vo
16. 163 5 Durchf hren eines Experiments 5 7 Durchf hren des Transfers 5 7 2 Vorbereiten des Transfer Sandwich Die PVDF Karte und die Bildung des Transfer Sandwiches fertig stellen Schritt Abbildung des Schritts Aktion des Bedieners Erfassen Sie beide PVDF Kartengrif fe mit den Fingern oder mit Hilfe einer Pinzette mit einem flachen Ende Entfernen Sie die Karte aus der Transfer Pufferwanne Anmerkung Vermeiden Sie ein Ber hren des Blotting Bereichs der PVDF Karte mit einem roten Quadrat in Bild markiert Legen Sie die PVDF Karte auf die Gelkarte indem Sie die PVDF Kar tenf hrungsl cher auf die F h rungsstifte anpassen und die PVDF Karte auf dem Gel nach unten rol len Anmerkung Korrigieren Sie die Platzierung der PVDF Karte nicht mehr wenn sie auf der Gelkarte liegt Ein Transferpapier in Transferpuf fer vorbefeuchten und auf die PVDF Karte legen der Transferpa piergriff sollte zwischen den Fuh rungsstiften liegen 164 Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE Schritt Abbildung des Schritts 5 Durchfuhren eines Experiments 5 7 Durchf hren des Transfers 5 7 2 Vorbereiten des Transfer Sandwich Aktion des Bedieners Alle Luftbl schen wie folgt entfer nen e Den wei en Deckel nehmen und in die zwei Aush hlungen einsetzen Bild links e Die Transferpapiergriffe mit der linken Hand ergreifen und den Roller mit der rechten Hand in den Halte
17. 4 Den oberen Teil des Kunststoffgitters an der Halterung entfernen an der sich der Filter befindet 5 Den Filter gegen einen neuen Filter austauschen und den oberen Teil des Kunststoffgitters fixieren 6 Die Halterung mit einem neuen Filter in die F hrungen im Rahmen einsetzen 7 Den Deckel des Filterfachs wieder in Position bringen und die Mutter durch Drehen im Uhrzeigersinn festziehen Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 209 6 Wartung 6 2 Anweisungen zur Wartung 6 2 2 Austauschverfahren Schritt Ma nahme 8 Den Deckel des Wartungsfachs schlie en Austauschen des Sondierungs oder Transferpumpenkopfes Die nachstehende Anweisung beschreibt den Austausch eines Pumpenkopfes am Beispiel der Sondierungspumpe Der Austausch des Transferkopfes verl uft vergleichbar Schritt Ma nahme 1 Den Deckel des Wartungsfachs ffnen um an die Sondierungs und Trans ferpumpen zu gelangen Anmerkung Die Sondierungspumpe befindet sich links und die Transferpumpe rechts 210 Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 6 Wartung 6 2 Anweisungen zur Wartung 6 2 2 Austauschverfahren Schritt Ma nahme 2 Die a links abziehen PROBING TR u Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 211 6 Wartung 6 2 Anweisungen zur Wartung 6 2 2 Austauschverfahren Schritt MaBnahme 4 Die Arretierung entriegeln die den Pumpenkopf in Position h lt
18. 5 Durchf hren eines Experiments 5 9 Scannen der Membran und Anzeigen der Ergebnisse Schritt Abbildung des Schritts Aktion des Bedieners Membranes Die Standardeinstellungen fur Membran Membrane Position A Position B Scans verwenden die im Bildschirmfoto 3 dargestellt sind Note Scanning Sensitivity Automatic sensitivity O Manual sensitivity Default Im Bereich Membrane Scanning Membran Scan auf Scan Scannen klicken Membrane Scanning BEER Ready for Membrane scanning Ergebnis Der Membran Scan wird gestartet Membrane Scanning Der Fortschritt der Scans wird im Bereich Remaining time Membrane Scanning Membran Scan ange Scanning Membranes py min zeigt Position A Cy5 Position B Cy5 i COREE E Nach Abschluss des Scans werden die Membranbilder im Bereich Membrane Scan ning Membran Scan angezeigt Position A Cy3 Position B Cy3 Die Ergebnisse anzeigen Schritt Ma nahme 1 In der Software auf den Arbeitsschritt EVALUATION Auswertung klicken Ergebnis Die Bilder im Bereich Membrane Scanning Membran Scan werden ausgewertet Der Fortschritt der Auswertung wird in einem Fortschrittsbalken angezeigt 192 Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE Schritt 5 Durchf hren eines Experiments 5 9 Scannen der Membran und Anzeigen der Ergebnisse Ma nahme 2 Nach Auswertung der Bilder werden die Bilder im Bildschirm Evaluation Auswertung
19. 77 AE 5 Durchf hren eines Experiments 5 8 Durchf hren von Sondierung und Trocknung 5 8 4 Ausf hren der Trocknung 5 8 4 Ausf hren der Trocknung Einf hrung Dieser Abschnitt beschreibt wie die Trocknung von PDVF Karten durchzuf hren ist Die Trocknung der PVDF Karte ergibt einen gleichm igen und schwachen Hintergrund sowie st rkere Signale Ausf hren der Trocknung Schritt Abbildung des Schritts Aktion des Bedieners Die Trocknungshalter mit einer oder mehre ren PVDF Karten m ssen im Trocknungsraum in das richtige Trocknungsfach und in die richtige Position gelegt werden d h PVDF Karte in die Sondierungsposition A zur Trocknungsposition A Im Arbeitsschritt PROBING amp DRYING Sondie Y rung und Trocknung der Software im Bereich Drying Trocknen auf Start Starten klicken PROBING amp DRYING Drying Remaining time Start Ready for Drying 10 min Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 187 5 Durchf hren eines Experiments 5 8 Durchf hren von Sondierung und Trocknung 5 8 4 Ausf hren der Trocknung Schritt Abbildung des Schritts Aktion des Bedieners Nach Abschluss der Trocknung amp e Den Deckel des Trocknerfachs ffnen e Entfernen Sie den die Trocknungshalter e Die PVDF Karte ist bereit zum Scannen Fahren Sie mit dem Abschnitt 5 9 Scannen der Membran und Anzeigen der Ergebnis se auf Seite 189 Anmerkung Wenn die Membranen nich
20. Emissions Fluoreszenssignale mithilfe des Mehrkanal Fluoreszenzscanners in der Elpho amp scan Ger teeinheit erfasst Die CyDyes besitzen eine hohe Photostabilit t Das Signal auf einer sondierten Membran ist bei Lagerung im Dunklen f r mehr als 3 Monate stabil Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 83 3 Systembeschreibung 3 7 Zubeh rteile und Verbrauchsmaterialien f r Western Blot Schritte 3 7 2 Sekund re Antik rper Sondierung Zubereitung und Lagerung von rekonstituierten sekund ren Antik rpern Rekonstituieren Sie die sekund ren Antik rper in 150 ul Reinstwasser pro Ampulle bis zu einer Konzentration von 1 ug ul Die rekonstituierten sekund ren Antik rper werden mit dem Vortexsch ttler gut gemischt und herunterzentrifugiert Es wird empfohlen die sekund ren Antik rper in Aliquoten bei 15 C bis 30 C zu lagern und vor Licht zu sch tzen Vermeiden Sie wiederholtes Einfrieren und Auftauen 84 Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 3 Systembeschreibung 3 7 Zubeh rteile und Verbrauchsmaterialien f r Western Blot Schritte 3 7 3 Trocknungshalter PVDF Kartentrocknung 3 7 3 Trocknungshalter PVDF Kartentrocknung Einf hrung Der Amersham WB drying holder Trocknungshalter fixiert und richtet die PVDF Karte in der richtigen Position f r bestm gliche Trocknungsergebnis aus Abbildung des Trocknungshalters Die Abbildungen unten zeigen den Trocknungshalter in geschlos
21. Erforderliche Materialien Einlassfiltersatz Zum Austausch eines Einlassfilters und eines St tznetzes die nachstehenden Anweisungen befolgen 216 Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 6 Wartung 6 2 Anweisungen zur Wartung 6 2 2 Austauschverfahren Schritt MaBnahme i Das St tznetz abziehen und den Einlassfilter aus der Einlassfilterhalterung ziehen 2 Das neue St tznetz und den Einlassfilter auf der Einlassfilterhalterung ein passen und den Filter in Position dr cken Austauschen der Netzsicherung ACHTUNG Vor einem Austausch der Netzsicherung stets die Netzstromversor gung trennen F r ununterbrochenen Schutz gegen die Brandgefahr nur gegen eine Sicherung austauschen deren Typ und Leistung den Angaben auf den Ger teetiketten entspricht Schritt Ma nahme 1 Die Stromzufuhr zum Amersham WB analyzer ausschalten Hierzu die Netzschalter auf den R ckseite der Elpho amp scan und der Western Ger te einheit in die Aus Stellung 0 bringen 2 Die Netzkabel von den Netzstromeing ngen an der Elpho amp scan und der Western Ger teeinheit abziehen 3 Das Sicherungsfach im Anschlussfeld der entsprechenden Ger teeinheit lokalisieren Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 217 6 Wartung 6 2 Anweisungen zur Wartung 6 2 2 Austauschverfahren 218 Schritt Ma nahme 4 Einen kleinen Schraubendreher in die Kerbe neben dem Sicherungsfach stecke
22. Gelkarten Scan 5 6 3 Verfahren nach Elektrophorese und Gelkarten Scan Einf hrung In diesem Abschnitt wird das Entfernen der Gelkarte und das Reinigen der Elpho amp scan Ger teeinheit nach der Elektrophorese beschrieben Entfernen der Gelkarten ACHTUNG Nach der Elektrophorese oder nach dem Transfer wenn das Transfer Sandwich ge ffnet und die PVDF Karte in das Sondierungs fach gelegt wurde entsorgen Sie das Gel auf sichere Weise Lesen Sie Sicherheitsdatenbl tter SDS MSDS der Gelkarte in Bezug auf Sicherheitshinweise in Bezug auf das Gel und die Entsorgung des Gels Anmerkung Der Transferlauf muss innerhalb einer Stunde nach Abschluss der Elektrophorese gestartet werden Schritt Ma nahme 1 Wenn die Elektrophorese bereit ist und die wei e Bereitschaftslampe am Ger tebedienfeld leuchtet die Auswurftaste an der Eloho amp scan Ger teein heit bet tigen Ergebnis Der Lader wird ausgeworfen 2 Den Dichtungsdeckel am Verschluss ffnen 3 Die Gelkarte entfernen und mit der Oberseite nach unten auf den Arbeitstisch legen 4 Mit Reinigen der Elpho amp scan Ger teeinheit auf Seite 147 fortfahren Anmerkung Es empfiehlt sich die Elpho amp scan Ger teeinheit nach jedem Programmlauf zu reinigen Wenn die Zeit dies jedoch nicht erlaubt mit dem Transfer fortfah ren und die Ger teeinheit in einer sp teren Phase des Experiments reinigen 146 Amersham WB system Bedienungsanleitung 2
23. Ger t Abbildung des Amersham WB analyzer Die Abbildung zeigt das Amersham WB analyzer mit der Eloho amp scan Ger teeinheit links und der Western Ger teeinheit rechts Abbildung der Ger tebedienfelder F r jedes Fach in den Ger teeinheiten Elektrophorese und Scan Transfer Sondierung und Trocknung steht die gleiche Anordnung von Kontrolllampen zur Verf gung Wenn die Ger teeinheiten eingeschaltet sind leuchten die Kontrolllampen mit den Fachnamen auf Die Anzeigen befinden sich auf dem Bedienfeld der einzelnen Ger teeinheiten Die nachstehende Abbildung zeigt die Bedienfelder an den zwei Ger teeinheiten mit aufleuchtenden Fachnamen ELPHO amp SCAN EB TRANSFER E PROBING DRYING 38 Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 3 Systembeschreibung 3 1 berblick ber das Ger t Anzeigen am Ger t Die folgende Tabelle beschreibt die verschiedenen Indikatoren Die Indikatoren Bereit Lauf beendet Ausf hren und Fehler oder Warnung sind f r alle Instrumente und F cher identisch In diesem Beispiel werden die TRANSFER Indikatoren beschrieben Statusanzeigen Status Beschreibung TRANSFER Start Der Text leuchtet auf wenn das Ger t startet und interne Tests vornimmt TRANSFER Bereit Programm Die Lampe leuchtet auf wenn lauf beendet e die Ger teeinheit das Fach f r ein neues Experiment bereit ist ein Schritt also Elektrophorese Scannen Transfer Sondierung oder
24. Ger teeinheit wird f r folgende Aufgaben verwendet e Transfer der getrennten Proteine im Gel auf die Membran e Sondierung der Proteine auf der Membran mit prim ren Antik rpern und danach mit sekund ren Antik rpern die auf einen CyDye konjugiert sind e Trocknung der PVDF Karten vor dem Scannen in der Elpho amp scan Ger teeinheit Dieser Abschnitt liefert einen berblick ber die Western Ger teeinheit In diesem Abschnitt Dieser Abschnitt enth lt die folgenden Unterabschnitte Abschnitt Siehe Seite 3 3 1 bersicht 46 3 3 2 F cher in der Western Ger teeinheit 50 3 3 3 Fl ssigkeitswege 55 Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 45 3 Systembeschreibung 3 3 Western Gerdteeinheit 3 3 1 Ubersicht 3 3 1 Ubersicht Einfuhrung Dieser Abschnitt liefert einen berblick ber die Vorder und R ckseite der Western Ge r teeinheit Abbildung der Western Ger teeinheit Die nachstehende Abbildung zeigt die Hauptbestandteile der Western Ger teeinheit Beschreibung 1 Deckel des Antikorperfachs 2 Bereich der gedr ckt wird um den Deckel des Antik rperfachs zu ffnen 3 Ger tebedienfeld f r die Statusanzeigen 4 Transferbeh lterdeckel 46 Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 3 Systembeschreibung 3 3 Western Ger teeinheit 3 3 1 bersicht Beschreibung Flaschengestell und Wartungsfachdeckel Anmerkung Das Flaschengestell nur dann
25. Netzschalter erst ausschalten wenn alle Anschl sse vorgenommen wurden Die Schlaucht rme des Western Ger ts zusammenbauen Die Schlauchsch fte f r die Schl uche der Western Ger teeinheit sind in der Lieferpa ckung nicht vormontiert und m ssen vom Benutzer zusammengebaut werden Schritt Ma nahme 1 Den Kunststoffbeutel mit den Sch ften und Schl uchen ffnen 104 Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 4 Installation 4 2 Hardwareinstallation Schritt MaBnahme 2 Jeden Schaft nach unten in die ffnung dr cken und im Uhrzeigersinn dre hen bis er einrastet Die Schl uche sollten folgenderma en installiert werden Schaftposition Schlauch aus Sicht der Ger tevorderseite Links T buffer und T water Mitte P water P block und P wash Rechts P Final wash und P Custom Anmerkung Darauf achten beim Montieren der Sch fte keine Schlauchbeschriftung zu entfernen Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 105 4 Installation 4 2 Hardwareinstallation Anbringen der Schlauchhalter Um Spannungen zu kompensieren die auftreten wenn Schl uche in Flaschen platziert werden und um zu vermeiden dass Flaschen bei sinkenden F llst nden herunterfallen m ssen an allen Schl uchen Schlauchhalter angebracht werden Anmerkung Schlauchhalter m ssen an alle Schl uche montiert werden bevor die Einlassfilter angebracht werden Schritt Ma nahme 1 Einen Sch
26. Trocknung abgeschlossen wurde TRANSFER Run Laufposition Die Lampe leuchtet auf e wenn die Ger teeinheit das Fach arbeitet w hrend der Reinigung der Str mungswege f r Transfer oder Son dierung Anmerkung Den die zugeh rigen Deckel w hrend des Programmlaufs nicht ffnen Das ffnen des Transferdeckels w hrend des Transfers stoppt z B den Transferlauf und kann das Ergebnis beeintr chtigen Fehler oder Die Lampe leuchtet auf wenn ein Fehler Warnung aufgetreten ist Informationen zum Fehler finden Sie in der Amersham WB software Vorschl ge zur Behebung des Problems werden von der Software geliefert Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 39 3 Systembeschreibung 3 2 Elpho amp scan Ger teeinheit 3 2 Elpho amp scan Ger teeinheit Einf hrung Die Eloho amp scan Ger teeinheit wird zur Trennung von SDS behandelten Probenproteinen in einem Polyacrylamid Gel verwendet Es wird au erdem eingesetzt um Gele nach der Elektrophorese und PVDF Karten nach der Sondierung und Trocknung in einem Western Experiment zu scannen Dieser Abschnitt liefert einen berblick ber die Elpho amp scan Ger teeinheit Abbildung der Elpho amp scan Ger teeinheit 40 Die nachstehende Abbildung zeigt die Hauptbestandteile der Elpho amp scan Ger teeinheit t 2 3 er Beschreibung Gerdtebedienfeld mit Statusanzeigen 2 Eloho amp scan Lader Zum Laden von Gelka
27. angezeigt der die normalisierten Werte f r das Experiment auf der Registerkarte Bar chart Balkendiagramm zeigt Weitere Informationen ber die Analyse der Ergebnisse finden Sie im User Manual oder software help Verfahren nach dem Membran Scan Schritt Ma nahme 1 Die Auswurftaste an der Elpho amp scan Ger teeinheit bet tigen Ergebnis Der Lader wird ausgeworfen Den Dichtungsdeckel ffnen Den Membranadapter mit der PVDF Karte von der Kartenplatte entfernen Die PVDF Karte vom Membranadapter entfernen Tipp Die PVDF Karte kann in getrocknetem Zustand zwischen zwei Filterpapiere in der originalen PVDF Karten Einzelpackung aufbewahrt werden Die Signale auf der getrockneten PVDF Karte sind f r ca 3 Monate haltbar Die Membranadapter mit einem fusselfreien Tuch reinigen und in den Lage rungsbereich im Antik rperfach zur cklegen Reinigen Sie die Trocknungshalter mit einem fusselfreien Tuch und legen Sie die Halter in den Trocknungsraum zur ck Die Kartenplatte mit einem fusselfreien Tuch abwischen das ggf mit 50 Ethanol angefeuchtet ist Das Schutzglas mit einem fusselfreien Tuch abwischen das ggf mit 50 Ethanol angefeuchtet ist Anmerkung Es ist wichtig das Schutzglas sauber zu halten um beim Scannen von Gelkar ten und PVDF Karten ein gutes Ergebnis erzielen zu k nnen Den Dichtungsdeckel schlie en und die Auswurftaste an der Elpho amp scan Ger teeinheit bet tigen Erg
28. die PVDF Karte in diesem Zeitraum mit Transferpuffer be deckt ist Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 157 5 Durchf hren eines Experiments 5 7 Durchf hren des Transfers 5 7 2 Vorbereiten des Transfer Sandwich Mit der Bildung des Transfer Sandwiches beginnen Schritt Abbildung des Schritts Aktion des Bedieners e Den Transferhalter mit der schwarzen Seite nach unten ablegen e Der Transferhalter ffnen Hierzu auf die Verriegelungen dr cken und den wei en De ckel anheben e Den Deckel schieben bis die Rollerstifte die zwei Aushohlun gen im Bild mit orangefarbe nen Kreisen gekennzeichnet erreichen e Den wei en Deckel abnehmen Hierzu den Deckel ber die zwei Aush hlungen anheben Den ersten Schwamm auf den schwarzen Deckel legen Ein Transferpapier in Transferpuf fer vorbefeuchten und auf den Schwamm auf dem schwarzen Deckel legen der Transferpapier griff sollte zwischen den F hrungs stiften liegen 158 Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 5 Durchf hren eines Experiments 5 7 Durchf hren des Transfers 5 7 2 Vorbereiten des Transfer Sandwich Ubersichtsabbildung f r die Zerlegung der Gelkarte Die nachstehende Abbildung zeigt eine Explosionsdarstellung der Bestandteile der Gel karte die nach dem Elektrophoreselauf ausgebaut werden m ssen Die nachstehende Tabelle beschreibt kurz die Bestandteile der Gelkarte die ausgebaut
29. durchgef hrt die in einem Western with total protein normalization Experiment Western Experiment mit Gesamtprotein Normalisierung verwendet werden sollen Weitere Informationen zum Prelabeling finden Sie im Amersham WB system User Manual ACHTUNG Beim Arbeiten mit dem Prelabeling von Proteinproben e Stets Schutzkleidung Handschuhe und eine Schutzbrille tragen e Vor dem Prelabeling von Proben das Sicherheitsdatenblatt SDB lesen VORSICHT Wenn das Prelabeling von Proteinen in Proben durchgef hrt wurde kann sich durch Spuren von Dimethylsulfid DMS und Dimethylsul foxid DMSO ein stechender Geruch entwickeln Eine rtliche Ab sauganlage kann erforderlich sein rtliche Bestimmungen und Anweisungen f r den sicheren Betrieb befolgen Anmerkung Um vergleichbare Markierungsleistungen zu erhalten sollten wichtige Parameter wie pH Wert Reaktionsvolumen Temperatur und Puffersal ze unver nderlich sein Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 5 Durchf hren eines Experiments 5 4 Durchf hren des Prelabelings von Proben Zudem variieren die Markierungsleistungen zwischen verschiedenen Proteinen Voraussetzungen f r das Prelabeling von Proben mittels des Western Prelabeling Protokolls Kompatible Lysepuffer Gemeinsame Lysepuffer auf TRIS Basis mit pH 7 bis 9 und mit unterschiedlichen Deter genzien und Salzen sind kompatibel mit der Vormarkierung von Zell Gewebeproben zum
30. m Emissionsgrad 2 Transienten berspannungskategorie ll Umgebung Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE Nur in Geb uden 221 7 Informationen zu Verweisen 7 1 Systemspezifikationen Systemspezifikationen Amersham WB analyzer Parameter Systemkonfiguration Tischsystem aus externem Computer und zwei Gerdteeinheiten der Eloho amp scan Ger teeinheit und der Western Gerdteeinheit Der Computer ist nicht im Lieferumfang enthalten Steuerung des Computerbetriebssystems PC mit Windows 7 Steuersoftware Amersham WB software Verbindung zwischen der Elpho amp scan Ger teeinheit und der Western Ger teein heit Ethernet Kabel Verbindung zwischen PC und der Elpho amp scan Ger teeinheit Emissionsgrad USB Kabel Typ A nach Typ B 2 Ger uschpegel Systemspezifikationen Elpho amp scan Ger teeinheit Parameter Abmessungen BxTxH Unter 80 dB A 47x51x27 cm Gewicht exkl Computer 25 kg Stromversorgung Spannung 100 240 V 10 Frequenz 50 60 Hz Stromverbrauch Max Leistung 300 VA Fuse 2x T4AH 250 V 222 Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 7 Informationen zu Verweisen 7 1 Systemspezifikationen Scannerspezifikationen Parameter Bildsensor Silizium Fotodiode Anlaufzeit Mindestens 1 Minute Anmerkung Das Anlaufen ist im automatischen Emp findlichkeit
31. mer ist mit wenigen Millilitern der ersten L sung in der Son dierungsfolgentabelle stan dardm ig die Blockierungsl sung gef llt Anmerkung Nach dem Vorf llen der Sondie rungskammer e Es ist nicht mehr m glich den Typ des ersten Schritts in der Sondierungssequenztabelle zu ndern Die Eintr ge Dur min Dauer und Repeat Wiederho len k nnen bearbeitet werden e Die Schaltfl che Pre Fill Vorful len wechselt zur Schaltflache Start und die Statusmeldung Ready for Probing Bereit zur Sondierung wird angezeigt Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 179 5 Durchf hren eines Experiments 5 8 Durchf hren von Sondierung und Trocknung 5 8 2 Ausf hren der Sondierung Schritt Abbildung des Schritts Aktion des Bedieners Offnen Sie den Deckel des Sondie rungsfachs und verwenden Sie die Verriegelung um den Deckel der Sondierungskammer zu Offnen Den Transferhalter ffnen und den Schwamm und das Transferpapier oben auf der PVDF Karte abneh men e Entfernen Sie die PVDF Karte aus dem Transferhalter Hal ten Sie die PVDF Kartengriffe mit den Fingern oder mit Hilfe einer Pinzette mit einem fla chen Ende e Legen Sie die PVDF Karte in die Sondierungskammer siehe Schritt 5 e Informationen zur Reinigung des Transferhalters und zum Umgang mit Abfall siehe Reini gen des Transferhalters auf Seite 172 180 Amersham WB system Bedienung
32. ssen f r alle Proben gleich sein Bei temperaturempfindliche Proben f r 30 Minuten auf Eis inkubieren Geben Sie 20 ul Ladepuffer hinzu Die Proben 3 Minuten lang auf 95 C erhitzen Zentrifugieren Sie die Proben Das Gesamtprobenvolumen betr gt 40 ul pro Reaktion empfohlenes Ladevolumen betr gt 20 ul Mit dem Laden der Proben gem der Beschreibung in Vorbereitungen vor dem Start der Elektrophorese auf Seite 135 fortfahren Wenn die Elektrophorese Analyse in einer sp teren Phase durchgef hrt wird die vormarkierten Proben bei 20 C lagern Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 131 5 Durchf hren eines Experiments 5 5 Vorbereiten Amersham WB molecular weight markers 5 5 Vorbereiten Amersham WB molecular weight markers Einfuhrung Nehmen Sie eine Ampulle Amersham WB molecular weight markers Molekulargewichts marker ausreichend fur den Lauf von zwei Gelkarten aus dem Gefrierschrank und lassen Sie sie vollstandig auftauen Western Experimente In Western Experimenten sollte Amersham WB molecular weight markers vor dem Laden auf die Gelkarte im Verh ltnis 1 20 im Ladepuffer verd nnt werden Vor Gebrauch muss der mitgelieferte Ladepuffer mit Reinstwasser verd nnt werden und zugegebenes DTT enthalten Schritt Ma nahme 1 Geben Sie 29 ul 1 M DTT Stamml sung in 0 7 ml eine Ampulle Ladepuffer Mit dem Vortexsch ttler gut mischen 2 Verd nnen Sie den DTT haltigen Ladepuffer mit der gl
33. 0 Ethanol oder 40 Methanol enthalten Es wird empfohlen in Transferpuffern lediglich 20 Ethanol zu verwenden Rezeptur Menge Lauf Transferpuffer 25 mM Tris 192 mM Glycin 20 Ethanol 1000 ml pH Wert 8 3 Im Transferpuffer kann Methanol statt Ethanol verwendet werden Anmerkung Manche Ethanole besitzen Autofluoreszenz Eigenschaften die zu einem hohen Membranhintergrund f hren Sicherstellen dass das beim Transfer verwendete Ethanol nicht autofluoreszierend ist Reinstwasser Reinstwasser 1000 ml zur Reinigung Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 149 5 Durchf hren eines Experiments 5 7 Durchf hren des Transfers 5 7 1 Zubereiten und Anschlie en der Transferl sungen Verbinden der Schl uche mit dem Transferpuffer und dem Reinstwasser auf dem Flaschengestell VORSICHT Um das Verspritzen von gef hrlichen Fl ssigkeiten zu vermeiden in Flaschen starke Einlassfilter verwenden die mit einem Schlauch verbunden sind Siehe Abschnitt 3 8 Sonstige Zubeh rteile auf Seite 87 f r Beschreibungen der Einlassfilter und Schlauchhalter Siehe Anbringen der Schlauchhalter auf Seite 106 zur Befestigung des Zubeh rs Die Schl uche vor dem Starten des Transfers wie folgt mit dem Transferpuffer und dem Reinstwasser zur Reinigung des Transferbeh lters verbinden Schritt Ma nahme 1 Vom linken Schlauchturm legen Sie den Schlauch mit der Markierung T Buffer in eine 1
34. 0 W die Maximalstromst rke betr gt 400 mA Sondierungsspezifikationen Parameter Beschreibung Volumina Antik rpersondierung 5 12 ml 224 Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE Trocknungsspezifikationen Parameter Temperatur 7 Informationen zu Verweisen 7 1 Systemspezifikationen Beschreibung Maximal 45 C Trocknungsdauer Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 10 Minuten 225 7 Informationen zu Verweisen 7 2 Leitfaden zur Chemikalienbestandigkeit 7 2 Leitfaden zur Chemikalienbestandigkeit Einfuhrung Dieser Abschnitt beschreibt die Chemikalienbestandigkeit des Amersham WB analyzer gegenuber den am hdufigsten verwendeten Chemikalien bei der Elektrophorese und dem Western Blotting Annahmen Die Auslegungen basieren auf den folgenden Voraussetzungen e Die synergistischen Auswirkungen der chemischen Gemische wurden nicht ber ck sichtigt e Raumtemperatur und begrenzter berdruck wird vorausgesetzt Anmerkung Chemische Einfl sse h ngen von Zeitdauer und Druck ab Wenn nicht anders angegeben belaufen sich alle Konzentrationen auf 100 Liste der Chemikalien Eine Liste der Chemikalien die in den Gelkarten und Pufferstreifen verwendet werden finden Sie im Sicherheitsdatenblatt SDB Verwendung Chemische Konzentration CAS Nr und EC Nr Allgemeines W ssrige Puffer mit pH Wert 4 10 0 0 2 M N Z z B Tris Glycin P
35. 000 ml Flasche mit Transferpuffer 2 Legen Sie die den Schlauch mit der Markierung T Water in eine 1000 ml Flasche mit Reinstwasser 150 Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 5 Durchf hren eines Experiments 5 7 Durchf hren des Transfers 5 7 2 Vorbereiten des Transfer Sandwich 5 7 2 Vorbereiten des Transfer Sandwich Erforderliche Materialien Bei der Vorbereitung eines Transfer Sandwiches werden die folgenden Verbrauchsma terialien und Zubeh rteile ben tigt 1 Transferhalter 1 Gelkarte nach ihrem Durchlauf 1 PVDF Karte 2 Schw mme 2 St ck Transferpapier 1 Beh lter mit Transferpuffer zum Anfeuchten der Transferpapierst cke 1 Beh lter mit mindestens 96 Ethanol f r das Voranfeuchten der PVDF Karte 1 Beh lter mit Transferpuffer zur Equilibrierung der PVDF Karte Anmerkung Manche Ethanole besitzen Autofluoreszenz Eigenschaften die zu einem hohen Membranhintergrund f hren Sicherstellen dass das beim Transfer verwendete Ethanol nicht autofluoreszierend ist VorsichtsmaBnahmen ACHTUNG Beim Umgang mit Gelkarten PVDF Karten und anderen Verbrauchs materialien die im Lieferumfang des Amersham WB system enthal ten sind stets Handschuhe Schutzkleidung und eine Schutzbrille tragen Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 151 5 Durchf hren eines Experiments 5 7 Durchf hren des Transfers 5 7 2 Vorbereiten des Transfer Sandwich bersichtsabbildung f
36. 2 Sicherheitsanweisungen 2 2 Schilder Sicherheitsschild bez glich Laserlicht Die folgenden Schilder betreffen Laserlicht und das erste ist auf der hinteren Verkleidung des Elpho amp scan Ger ts angebracht Das zweite ist im Elpho amp scan Lader angebracht Beschriftung Beschreibung Bei diesem Ger t handelt es sich um ein Laserpro dukt der Klasse 1 IEC 60825 1 2007 EN 60825 Dieses Ger t erf llt die Anforderungen an den La Complies with 21 CFR 1040 10 and 1040 11 except serstrahlenschutz gem US Bundesgesetzsamm tor geviariona pursui ta SED lung Code of the Federal Regulations Titel 21 CFR dated July 24 2007 IEC EN 60825 1 2007 Kapitel 1 Unterkapitel J Teil 1040 10 Laserproduk Jan Feb _ Mar _ Apr May Jun te sul AugL sepL oct Novi decL Auf dem Schild ist auch der Herstellungsmonat angegeben Das Symbol ist sichtbar wenn der Elpho amp scan Lader ge ffnet ist 32 Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 2 Sicherheitsanweisungen 2 3 Vorgehensweise in Notf llen 2 3 Vorgehensweise in Notf llen Einf hrung Dieser Abschnitt beschreibt die Durchf hrung einer Notausschaltung des Amersham WB analyzer und die Konsequenzen bei einem Stromausfalls Notausschaltung In einer Notsituation die Netzkabel von der R ckseite der Elpho amp scan Ger teeinheit und der Western Ger teeinheit abziehen So wird sichergestellt dass die Stromzufuhr sofort unt
37. 250 V R Go C N Tus LNE RD CER ie 4001767 MPAA VT GE Healthcare Bio Sciences AB G Made in Sweden 751 84 Uppsala Sweden Conforms to ANSI UL Std 61010 1 Cert to CAN CSA Std C22 2 No 61010 1 a Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 29 2 Sicherheitsanweisungen 2 2 Schilder Schild an der Western Ger teeinheit Die nachstehende Abbildung zeigt ein Beispiel f r das Produktschild an der Western Ger teeinheit Das Schild befindet sich auf der R ckseite der Ger teeinheit N 29032030 Amersham WB western unit Code no 28993466 Voltage 100 240 V Serial no 1111111 Frequency 50 60 Hz Mfg Year 2013 Max Power 400 VA Fuse 2x T4AH 250 V RX Hoy c us LAE RD CER m 4001767 INN SE Healthcare Bio Sciences AB Made in Sweden 751 84 Uppsala Sweden Conforms to ANSI UL Std 61010 1 Cert to CAN CSA Std C22 2 No 61010 1 Sicherheitssymbole auf den Schildern der Gerateeinheiten Auf den Schildern werden die folgenden Sicherheitssymbole verwendet Beschriftung Beschreibung ACHTUNG Vor Verwendung des Systems die Benutzerdokumenta tion lesen Keine Abdeckungen ffnen oder Teile austauschen es sei denn dies wird ausdr cklich in der Benutzerdokumentation angegeben Das System erf llt geltende europ ische Richtlinien Siehe Interna tionale Normen auf Seite 11 Das System erf llt die geltenden Anforderungen in Australien und Neuseeland gt m 30 Amersha
38. 9 0214 77 AE 5 Durchf hren eines Experiments 5 6 Durchf hren der Proteinelektrophorese 5 6 3 Verfahren nach Elektrophorese und Gelkarten Scan Reinigen der Elpho amp scan Ger teeinheit Schritt Ma nahme 1 Die Pufferstreifenhalter aus dem Lader entfernen und die Pufferstreifen entsorgen 2 Jegliche Fl ssigkeit auf der Kartenplatte mit einem fusselfreien Tuch abwi schen das ggf mit 50 Ethanol angefeuchtet ist 3 Jegliche Fl ssigkeit und jeglichen Schmutz auf dem Schutzglas mit einem fusselfreien Tuch abwischen das ggf mit 50 Ethanol angefeuchtet ist Anmerkung Es ist wichtig das Schutzglas sauber zu halten um ein gutes Ergebnis beim Scannen von Gelkarten und PVDF Karten zu erzielen 4 Den Dichtungsdeckel schlie en und die Auswurftaste an der Elpho amp scan Ger teeinheit bet tigen Ergebnis Der Lader wird eingefahren 5 Die Pufferstreifenhalter unter flie endem Wasser reinigen um Salze und Puffer zu entfernen Die Pufferstreifenhalter mit der Oberseite nach unten an der Luft trocknen lassen Fortsetzen mit dem Transfer F hren Sie einen der folgenden Schritte durch e Wenn Transferl sungen zubereitet und an die Western Ger teeinheit angeschlossen wurden mit den Anweisungen in Abschnitt 5 7 2 Vorbereiten des Transfer Sandwich auf Seite 151 andernfalls e Mit den Anweisungen in Abschnitt 5 7 1 Zubereiten und Anschlie en der Transferl sungen auf Seite 149 fortfahren Amersham
39. Amersham WB system Bedienungsanleitung Ubersetzt aus dem Englischen oO SS Diese Seite ist absichtlich leer Inhaltsverzeichnis Inhaltsverzeichnis DORN een inneren 5 IL AVES NT Tal UG CY geese cece cscs E EN 7 12 Wichtige Inlormationen T r Benuzer zu 8 1 3 BENSIANCHE VOR CHI ie ee en ee ee 10 1 4 Amersham WB system Dokumentation ussenseseeseeseenseenneeneennnennnnnnnennneenennennnennnne 14 2 Sicherheitsanweisungen csscccscccsscssssesssessscssscesssesssesseesssessssesssessscsssesseees 17 2 1 Sicherheitsvorkehrungen 2 eee essecsssesssessssssssecssecssecssscssscssscsssesssscssecssecssscssscesscssscssusessecssecssecssecsseceses 18 ee 6 aren men E nT TREE Tete me nt eR E ee Oe Sen 27 2 5 Vorgehensweise in Notf llen seiirt 33 22 ntormotionen zumi RECYCIINO een ae 35 3 Systembeschreibung een 36 3 1 berblick ber das Ger t on ecccccsssescssssssssesscssssssssssssssssssssssssssssssssssssuesecssssssessssssssssussssssneeess 37 32 Elpho SCO Geraleelnnel nun ned 40 e WE T E TANE a T A E A 45 3 3 1 bersicht ceeeecsssssssscsssccssssssscsccsssssssessscessssssscscessssssssesscecsssssseseceessssssesssceessssnsesseeesssssssssseenssneeesseesentee 46 3 3 2 F cher in der Western Ger teeinheit eccssescsesssesssesssecssesssessssecsssecsuecsssecssessssecessecsseessees 50 3 3 3 CSIC LCT Ve ee 55 3 4 Uberblick ber Zubeh rteile und Verbrauchsmateridlien uneeuesn 60 3 5 Prelabeling Verbrauchs
40. Anweisung beschreibt welche Vorbereitungen getroffen werden m ssen um ein Transfer Sandwich zu bilden Schritt Ma nahme 1 Nehmen Sie eine PVDF Karten Einzelpackung aus dem PVDF Kartenkasten Amersham WB PVDF cord pace A eases lotno ONIM identity ine Coed tt Fe he ruos Set ee ae Anmerkung Bewahren Sie die Packung f r die Kennnummer der individuellen PVDF Karte und auch f r die sp tere Lagerung auf 2 Nehmen Sie die PVDF Karte aus der Verpackung und entfernen Sie das erste blaue Schutzpapier Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 5 Durchf hren eines Experiments 5 7 Durchf hren des Transfers 5 7 2 Vorbereiten des Transfer Sandwich Schritt MaBnahme 3 Optional e Vor dem Entfernen des zweiten blauen Schutzpapiers bringen Sie eine Beschriftung mit Bleistift auf derPVDF Schreibfl che der Karte an Tipp Auf der Schreibfl che kann die Position A oder B angegeben werden auf der die PVDF Karte verwendet wird e Inder Software den Arbeitsschritt TRANSFER ausw hlen Den Cursor in das entsprechende Feld Note Anmerkung setzen und den Text eintippen Gel Cards amp Membranes Membrane J Position A M Position B ID Note Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 155 5 Durchf hren eines Experiments 5 7 Durchf hren des Transfers 5 7 2 Vorbereiten des Transfer Sandwich Schritt Ma nahme 4 Entfernen Sie das zweite blaue Schutzpapier
41. Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 3 Systembeschreibung 3 6 Zubeh rteile und Verbrauchsmaterialien f r die Elektrophorese 3 6 2 Amersham WB gel card Beschreibung Fuhrungslocher f r die richtige Platzierung der Gelkarten im Elpho amp scan Lader und dem Transferhalter Etikett mit Daten Matrixmarkierung Chargennummer und ID Abbildung der R ckseite einer Gelkarte Die nachstehende Abbildung zeigt die Gelkarte mit der R ckseite nach oben weisend Beschreibung Schutzfilme die vor der Elektrophorese entfernt werden um einen Kontakt zwischen den Gel und Pufferstreifen zu ermdglichen Schutzfilm der entfernt wird wenn das Transfer Sandwich vorbereitet wird nur bei Western Experimenten relevant Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 73 3 Systembeschreibung 3 6 Zubeh rteile und Verbrauchsmaterialien f r die Elektrophorese 3 6 3 Amersham WB buffer strip und Amersham WB buffer strip holder 3 6 3 Amersham WB buffer strip und Amersham WB buffer strip holder Einf hrung Die Pufferstreifen werden w hrend eines Elektrophoreselaufs von den Pufferstreifenhal tern in ihrer Position gehalten Die Pufferstreifenhalter besitzen integrierte Elektroden die durch den Kontakt zwischen der Elektrode und dem Pufferstreifen einen elektrischen Strom f r den Programmlauf liefern Die Pufferstreifen werden vor dem Starten eines Programmlaufs in
42. Beispiel e GE S ugetier Proteinextraktionspuffer e RIPA Puffer Proben pH Wert Der Proben pH Wert sollte zwischen 7 und 9 liegen Optimaler pH Wert ist nicht entscheidend fur die Zelllysate und Gewebeextrakte da eine hohe Empfindlichkeit fur das Gesamtproteinsignal nicht erforderlich ist Das Gesamtpro teinsignal in einem Western Experiment mit Gesamtproteinnormalisierung sollte propor tional zur Proteinmenge nicht abh ngig von hoher Empfindlichkeit sein Erforderliche Losungen und Materialien Fur das Prelabeling von Proteinen sind die folgenden Losungen und Materialien erforder lich e Prelabeling Verbrauchsmaterialien Cy5 Farbreagens Markierungspuffer Ladepuffer e 1MDTT Dithiothreitol Stamml sung DTT und Reinstwasser wenn eine reduzierende SDS PAGE durchgef hrt wird e Reinstwasser zur Verd nnung des Cy5 Farbstoffreagenz e Original Lysepuffer zur Anpassung des Reaktionsvolumens nur Western Experimente e 0 5 ml Mikrozentrifugenr hrchen e Heizblock e Vortex e Zentrifuge Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 129 5 Durchf hren eines Experiments 5 4 Durchf hren des Prelabelings von Proben Vorbereitungen vor dem Starten des Prelabelings Schritt Ma nahme 1 e Eines von jedem der folgenden Fl schchen ausreichend f r den Durch lauf von zwei Gelkarten aus dem Gefrierfach herausnehmen 1 Fl schchen Amersham WB Cy5 1 Fl schchen Amersham WB loading buffer e Die Prel
43. CHTUNG Nach der Elektrophorese oder nach dem Transfer wenn das Transfer Sandwich ge ffnet und die PVDF Karte in das Sondierungs fach gelegt wurde entsorgen Sie das Gel auf sichere Weise Lesen Sie Sicherheitsdatenbl tter SDS MSDS der Gelkarte in Bezug auf Sicherheitshinweise in Bezug auf das Gel und die Entsorgung des Gels Anmerkung F hren Sie diesen Schritt durch wenn das Transfer Sandwich ge ffnet wurde und die PVDF Karte in die Sondierungskammer gelegt wurde Schritt Ma nahme 1 Entfernen Sie das Gel aus dem Transfer Sandwich Entsorgen Sie das Gel nach den Anweisungen in den SDS MSDS und lokalen Verfahren f r den Umgang mit Abf llen 2 Die Schw mme und Transferpapierst cke entfernen und entsorgen 3 Reinigen Sie die verschiedenen Teile des Transferhalters unter flie endem Wasser 4 Den Transferhalter an der Luft trocken lassen Fortfahren mit der Sondierung F hren Sie einen der folgenden Schritte durch e Wenn Sondierungs und Antik rperl sungen zubereitet und an die Western Ger te einheit angeschlossen wurden mit den Anweisungen in Abschnitt 5 8 2 Ausf hren der Sondierung auf Seite 178 fortfahren andernfalls e Mit den Anweisungen in Abschnitt 5 8 1 Zubereiten und Anschlie en der Sondierungs und Antik rperl sungen auf Seite 174 fortfahren 172 Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 5 Durchf hren eines Experiments 5 8 Durchf hren von Sondierung und Trocknu
44. Company or institution Position or l job title Date YYYY MM DD Signed GE and GE monogram are trademarks of General Electric Company GE Healthcare Bio Sciences Corp 800 Centennial Avenue P O Box 1327 Piscataway NJ 08855 1327 2010 14 General Electric Company All rights reserved First published April 2010 DOC1149542 28 9800 26 AC 05 2014 228 Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 7 Informationen zu Verweisen 7 3 Gesundheits und Sicherheitserkl rungsformular R ckgabe oder Wartung von Produkten Zur Aufzeichnung von Details zur Dekontamination vor einer Produktr ckgabe oder in standsetzung muss ein Bericht zum Health amp Safety Declaration Form for Product Return or Servicing wie etwa im folgenden Beispiel verwendet werden Health amp Safety Declaration Form for Product Return or Servicing Return authorization and or number Service Ticket Request To make sure the mutual protection and safety of GE personnel our customers transportation personnel and our environment all equipment must be clean and free of any hazardous contaminants before shipping to GE To avoid delays in the processing of your equipment please complete this checklist and include it with your return 1 Please note that items will NOT be accepted for servicing or return without this form 2 Equipment which is not sufficiently cleaned prior to return to GE may lead to delays in servicin
45. G Geplatztes Glas Das System nicht arbeiten lassen wenn das Glas im Dichtungsdeckel der Elpho amp scan Ger teeinheit verkratzt oder zerbrochen ist Das Ger t ausschalten das Stromkabel ziehen und einen autorisierten Servicetechniker verst ndigen ACHTUNG Stromschlaggefahr nach Versch tten w hrend eines Programm laufs Wenn die Gefahr besteht dass versch ttete Fl ssigkeit in das Geh use des Amersham WB analyzer eindringen kann das Ger t sofort ausschalten das Stromkabel ziehen und einen Service techniker verst ndigen ACHTUNG Nach der Elektrophorese oder nach dem Transfer wenn das Transfer Sandwich ge ffnet und die PVDF Karte in das Sondierungs fach gelegt wurde entsorgen Sie das Gel auf sichere Weise Lesen Sie Sicherheitsdatenbl tter SDS MSDS der Gelkarte in Bezug auf Sicherheitshinweise in Bezug auf das Gel und die Entsorgung des Gels VORSICHT Bewegliche Teile Beim ffnen Schlie en des Laders darauf achten dass Finger oder Kleidung nicht eingeklemmt werden wenn der Lader sich bewegt Flaschen oder Fl schchen niemals vor die Elpho amp scan Ger teein heit stellen Sie k nnten beim ffnen des Laders herunterfallen VORSICHT Stromschlaggefahr Einen laufenden Transferlauf stets stoppen bevor Fl ssigkeit vom Ger t oder Arbeitstisch aufgewischt wird Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 23 2 Sicherheitsanweisungen 2 1 Sicherheitsvo
46. LPHO amp SCAN S 122 Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 5 Durchf hren eines Experiments 5 2 Die Amersham WB analyzer starten Starten der Amersham WB western Ger teeinheit Schritt Ma nahme 1 Schalten Sie den Netzschalter auf der R ckseite der Western Ger teeinheit auf I AN Anmerkung Die Elpho amp scan Ger teeinheit muss eingeschaltet sein bevor die Western Gerdteeinheit laufen kann Ergebnis Die Western Ger teeinheit wird gestartet W hrend des Starts zeigt das Ger tebedienfeld Folgendes an TRANSFER PROBING DRYING Wenn die F cher der Western Ger teeinheit einsatzbereit sind wird f r jedes der drei F cher Transfer Sondierung und Trocknung ein wei es Quadrat angezeigt PROBING DRYING Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 123 5 Durchf hren eines Experiments 5 3 Einrichten eines Experiments in der Software 5 3 Einrichten eines Experiments in der Software Einfuhrung In diesem Abschnitt wird kurz erl utert wie die Amersham WB software gestartet und ein Amersham WB Experiment in der Software eingerichtet wird Ausf hrliche Informa tionen finden Sie im Amersham WB software Help in im rechten Fensterbereich der Software Starten der Software Schritt Ma nahme 1 Den Computer starten und bei Microsoft Windows anmelden 2 Auf das Symbol Amersham WB software auf dem Desktop doppelklicken Amersham WB Sof
47. P Block gekennzeichnet ist in eine 100 ml Flasche mit Blockierungsl sung f hren 2 Den Schlauch aus dem rechten Schlauchschaft der mit e P Wash in eine 1000 ml Flasche mit Waschl sung PBS T e P Final Wash gekennzeichnet ist in eine 500 ml Flasche mit abschlie Bender Waschl sung PBS f hren 3 Die R hrchen mit Antik rperl sung vor dem Starten der Sondierung im An tik rperfach anschlie en Informationen siehe unten Anschlie en der R hrchen mit Antik rperl sung Anmerkung Die Antik rperl sungen sollten nahe am Zeitpunkt des Sondierungs starts zubereitet und angeschlossen werden Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 175 5 Durchf hren eines Experiments 5 8 Durchf hren von Sondierung und Trocknung 5 8 1 Zubereiten und Anschlie en der Sondierungs und Antik rperl sungen Schritt Ma nahme 1 Das Antik rperfach an der Western Ger teeinheit ffnen Hierzu auf das Auswurfsymbol auf dem Deckel des Antik rperfachs dr cken 176 Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE Schritt MaBnahme 5 Durchf hren eines Experiments 5 8 Durchf hren von Sondierung und Trocknung 5 8 1 Zubereiten und Anschlie en der Sondierungs und Antik rperl sungen 2 Jedes R hrchen mit Antik rperl sung in die passende Position bringen Hierzu den Schlauch in das R hrchen f hren und das R hrchen einrasten lassen In der nachstehenden Tabelle wird erl utert welche Antik rper in w
48. SCANNING Elektropho rese und Gel Scan die Standardeinstellungen f r die Elektrophorese und das Scannen von Gelkarten verwenden siehe Bildschirmfoto e Optional Die Option Pause for sample well cleanup after 5 minutes Pause zur Reinigung des Probenbetts nach 5 Minu ten ausw hlen wenn der Papierkamm verwen det werden soll Weitere Informationen siehe Ab schnitt 3 6 Zubeh rteile und Verbrauchsmateriali en f r die Elektrophorese auf Seite 67 Der Zeit punkt f r die Pause wird aus den Einstellungen f r Spannung und Stromst r ke berechnet Der Stan dardwert betr gt 5 Minu ten e Optional Im Feld Note Anmerkung eine Anmer kung zu den Gelkarten eingeben Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 143 5 Durchf hren eines Experiments 5 6 Durchf hren der Proteinelektrophorese 5 6 2 Ausf hren der Elektrophorese Schritt Abbildung des Schritts Aktion des Bedieners Im Bereich Electrophoresis D Electrophoresis_ Elektrophorese auf Start Start Ready for Electrophoresis Starten klicken Ergebnis Der Elektrophorese lauf wird gestartet Der Fortschritt des Pro Electrophoresis grammlaufs wird in den Dia a Tao aaa grammen f r Stromst rke Spannung Wirkung oder Temperatur angezeigt Die verstrichene Zeit f r den Kallage Bose Je Programmlauf wird ebenfalls GelA 50 mA GelB 50 mA angezeigt Elapsed time Electrophoresis in progress 37 5 Current
49. WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 147 5 Durchf hren eines Experiments 5 7 Durchf hren des Transfers 5 7 Durchf hren des Transfers Einfuhrung Dieser Abschnitt beschreibt wie das Transfer Sandwich vorbereitet wird wie der Transferlauf gestartet und Uberwacht wird sowie die Verfahren die nach dem Transfer lauf durchgef hrt werden m ssen In diesem Abschnitt Dieser Abschnitt enth lt die folgenden Unterabschnitte Abschnitt Siehe Seite 5 7 1 Zubereiten und Anschlie en der Transferl sungen 149 5 7 2 Vorbereiten des Transfer Sandwich 151 5 7 3 Ausf hren des Transfers 166 5 7 4 Verfahren nach dem Transfer 170 148 Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 5 Durchf hren eines Experiments 5 7 Durchf hren des Transfers 5 7 1 Zubereiten und Anschlie en der Transferl sungen 5 7 1 Zubereiten und Anschlie en der Transferl sungen Einf hrung In diesem Abschnitt wird das Zubereiten und Anschlie en von Puffern und L sungen f r den Transfer beschrieben Transferl sungen k nnen w hrend des Elektrophoreselaufs zubereitet werden und m ssen vor dem Start des Transfers angeschlossen sein Rezepturen f r Transferl sungen ACHTUNG Das Amersham WB analyzer in einem Raum mit Absauganlage aufstellen wenn Methanol oder andere Chemikalien verwendet werden f r die eine Entl ftung erforderlich ist VORSICHT Brandgefahr Keine Transferpufferl sungen verwenden die mehr als 4
50. abeling Komponenten vollst ndig auftauen e Das Cy5 Flaschchen vor dem ffnen in das Gleichgewicht auf Raumtem peratur bringen um die Kondensation von Feuchtigkeit zu vermeiden 2 Die Cy5 Farbreagens Fl ssigkeit mit einer Zentrifuge kurz herunterzentrifu gieren 3 Die Temperatur des Heizblocks auf 95 C einstellen 4 F r eine reduzierende SDS PAGE ein Reduzieragens zum Ladepuffer hinzu geben e 29ul1MDTT Stammldsung zu 0 7 ml ein Fl schchen Ladepuffer hinzu geben und zum Mischen kreisen lassen 130 Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 5 Durchf hren eines Experiments 5 4 Durchf hren des Prelabelings von Proben Durchf hren des Prelabelings von Proben Western Prelabeling Protokoll Tipp Schritt Das nachfolgende Protokoll kann aufskaliert werden Ma nahme 1 Die Markierungsreaktion in einem 0 5 ml Mikrozentrifugenrohrchen durch f hren e 2 19 ul Zelllysat oder Gewebeextraktprobe hinzugeben maximal 40 ug Gesamtprotein und mit Lysepuffer der Originalprobe auf ein Volumen von 19 ul auff llen e Geben Sie 1 ul Cy5 Farbstoffreagenz verd nnt 1 10 in Reinstwasser hinzu Anmerkung Der verd nnte Farbstoff muss frisch zubereitet und innerhalb von 30 Mi nuten verwendet werden Er kann nicht eingefroren und wiederverwendet werden e Zur sorgf ltigen Durchmischung kurz kreisen lassen Bei Raumtemperatur f r 30 Minuten inkubieren Anmerkung Markierungszeit und Volumen m
51. abilen flachen Arbeits tisch mit ausreichend Raum zur Bel ftung aufgestellt wird Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 21 2 Sicherheitsanweisungen 2 1 Sicherheitsvorkehrungen 22 ACHTUNG Zugang zu Netzschalter und Netzkabel nicht versperren Der Netzschalter muss stets gut zug nglich sein Das Netzkabel mit Stecker muss stets schnell herausgezogen werden k nnen ACHTUNG Schutzerdung und Netzkabel Das Amersham WB analyzer muss stets an eine geerdete Steckdose angeschlossen werden Nur ein zugelassenes dreiadriges Netzkabel verwenden das von GE geliefert oder zugelassen wurde oder mit allen geltenden rtli chen elektrotechnischen Anforderungen bereinstimmt VORSICHT Die Western Ger teeinheit niemals bewegen wenn Flaschen auf dem Ger t stehen VORSICHT Schweres Objekt Zum sicheren Anheben der Ger teeinheiten sind zwei Personen erforderlich HINWEIS Jeder zusammen mit dem Ger t verwendete Computer muss IEC EN UL CSA 60950 1 oder andere Sicherheitsvorschriften erf l len Er sollte gem den Anweisungen des Herstellers installiert und verwendet werden O ODD HINWEIS Kabel ziehen Vor dem Bewegen einer Ger teeinheit stets Kabel ziehen um eine Besch digung des Ger ts zu vermeiden Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE Systembedienung 2 Sicherheitsanweisungen 2 1 Sicherheitsvorkehrungen ACHTUN
52. abnehmen wenn die Pumpen und Schl uche inspiziert werden oder wenn wie in Kapitel 6 Wartung auf Seite 194 beschrie ben Teile ausgetauscht werden Schlauchhalter Sondierungsfachdeckel Trocknungsfachdeckel Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 47 3 Systembeschreibung 3 3 Western Gerdteeinheit 3 3 1 Ubersicht Abbildung der Ruckseite der Western Gerateeinheit Die nachstehende Abbildung zeigt die Hauptbestandteile auf der Ruckseite der Western Gerdteeinheit 1 2 3 gt on a Beschreibung 1 Ausl sse f r Ablauf und berlaufschlauch 2 Kommunikationsanschluss f r das Elpho amp scan Ethernet Kabel verwenden 3 Anschluss f r Netzkabel 60320 C14 4 Sicherungskasten 5x20 mm 5 Netzschalter AN I AUS O 6 Luftausl sse 48 Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 3 Systembeschreibung 3 3 Western Gerdteeinheit 3 3 1 Ubersicht Teil Beschreibung Lufteinlass Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 49 3 Systembeschreibung 3 3 Western Gerdteeinheit 3 3 2 F cher in der Western Gerdteeinheit 3 3 2 Facher in der Western Gerateeinheit Einfuhrung Dieser Abschnitt beschreibt die verschiedenen F cher der Western Ger teeinheit bei ge ffneten Deckeln Abbildung des Transferbeh lters Die nachstehende Abbildung zeigt den Transferbeh lter der Western Ger teeinheit Beschreibung 1 Sandwich Fuhrungssch
53. against target Prim rer Goat anti mouse Cy 3 Antikorper gegen Ziel optio Goat anti rabbit Cy 3 nal eingeben und den pas senden Labeled secondary ab Markierter sekund rer Antik rper auf der Register karte Gel card A Gelkarte A ausw hlen In diesem Protokoll wurde Cy5 f r das Prelabeling ver wendet Einen Cy3 konjugier ten sekund ren Antik rper w hlen Die Schritte 3 und 4 f r Gel karte B wiederholen falls im Experiment enthalten Tipp Das Protokoll kann ausge druckt und in Verbindung mit der Probenzubereitung und dem Prelabeling genutzt werden Zum Drucken des Protokolls auf das Symbol rechts von den Regis terkarten f r die Gelkarten klicken oder Strg P dr cken Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 127 5 Durchf hren eines Experiments 5 4 Durchf hren des Prelabelings von Proben 5 4 Durchf hren des Prelabelings von Proben Einf hrung VorsichtsmaBnahmen 128 Bei der Ausf hrung von Elektrophorese Experimenten ist das Prelabeling von Proben f r den Nachweis erforderlich Es ist auch in Western Experimenten erforderlich wenn das Gesamtprotein auf einer Membran nachgewiesen wird Dieser Abschnitt beschreibt Voraussetzungen f r das Prelabeling Erforderliche Materialien f r das Prelabeling Vorbereitungen vor dem Starten des Prelabelings Markierung von Proben Prelabeling Protokoll In diesem Beispiel wird ein Prelabeling von Zell Gewebelyseproben
54. ard Amersham WB software requires the following items to be installed on your computer Click Install to begin installing these requirements Status Pending Pending Pending Pending Pending Requirement GE Healthcare Life Sciences Windows Driver Package Microsoft Visual C 2005 SP 1 Redistributable Package x86 Microsoft Visual C 2008 SP 1 Redistributable Package x86 JRE_SE 1 7 0_02 x86 Microsoft NET Framework 4 0 Full Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 111 4 Installation 4 3 Softwareinstallation Schritt MaBnahme 2 112 Wenn das Dialogfeld Windows Security Windows Sicherheit angezeigt wird auf die Schaltfl che Install Installieren klicken Would you like to install this device software Name GE Healthcare Life Sciences Publisher GE Healthcare Bio Sciences AB Always trust software from GE Healthcare Don t Install _ Bio Sciences AB You should only install driver software from publishers you trust How can decide which device software is safe to install Wenn alle Voraussetzungen erfolgreich installiert wurden die Installation der Software durch Klick auf Next Weiter im Dialogfeld Welcome to the InstallShield Wizard for Amersham WB software Willkommen zum InstallS hield Assistenten f r starten Pleat NSO ne Aa Welcome to the InstallShield Wizard for Amersham WB software The InstallShield R Wizard will install Amer
55. ategorien unterteilt e Allgemeine Vorsichtsma nahmen e Entflammbare Fl ssigkeiten e Personenschutz e Installieren und Verstellen e Systembedienung e Wartung e Entsorgung des Altger ts Allgemeine VorsichtsmaBnahmen ACHTUNG Das Amersham WB analyzer System nur auf die im Bedienungsanleitung beschriebene Weise bedienen ACHTUNG Kein Zubeh r verwenden das nicht von GE geliefert oder empfohlen wurde 18 Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 2 Sicherheitsanweisungen 2 1 Sicherheitsvorkehrungen ACHTUNG Das Amersham WB analyzer Instrument keinesfalls verwenden wenn es nicht ordnungsgem funktioniert bzw besch digt wurde zum Beispiel e Besch digung des Netzkabels oder Steckers e Besch digung durch Fallenlassen des Ger ts e Besch digung an anderen Teilen die die Funktion beeintr ch tigen kann Entflammbare Fl ssigkeiten VORSICHT Brandgefahr e Wenn an der Geh useau enseite des Eloho amp scan oder des Western Fl ssigkeit ausgelaufen ist die Stromzufuhr trennen und die Fl ssigkeit abwischen e Wenn Fl ssigkeit auf den Ger teeinheiten ausgelaufen ist die in das Geh use des Elpho amp scan oder Western Ger ts eindringt das Netzkabel von den Ger ten ziehen und den Kundendienst verst ndigen VORSICHT Brandgefahr Sicherstellen dass der Ablaufschlauch von der Western Ger teeinheit in einen Ablaufbeh lter unter
56. blick ber die Zubeh rteile und Verbrauchsmaterialien die zusammen mit dem Amersham WB analyzer verwendet werden m ssen Au erdem enth lt es Informationen zur Lagerung von Verbrauchsmaterialien und Informationen zur Bestellung von Verbrauchsmaterialien Zubeh rteile und Verbrauchsmaterialien Die nachstehende Tabelle listet die Zubeh rteile und Verbrauchsmaterialien die mit dem Ger t verwendet werden m ssen in Bezug zum durchzuf hrenden Arbeitsschritt auf Das Ger tezubeh r wird zusammen mit dem System geliefert w hrend die Verbrauchs materialien separat bestellt werden Einzubauende Zubeh rteile werden in Abschnitt 4 2 Hardwareinstallation auf Seite 97 beschrieben Zubeh rteile fur Wartungsaufgaben die der Benutzer ausf hrt in Wartungs zubeh r auf Seite 207 Eine ausf hrliche Beschreibung der Zubeh rteile und Verbrauchsmaterialien finden Sie in den nachfolgenden Abschnitten Arbeitsschritt Erforderliche Verbrauchsmaterialien Erforderliche Informatio Zubeh rteile nen hierzu siehe Prelabeling von e Amersham WB Cy5 N Z Abschnitt Proben 35 e Amersham WB labeling buffer Markie rungspuffer e Amersham WB loading buffer Ladepuf fer e Amersham WB MiniTrap kit optional 60 Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE Arbeitsschritt Electrophorese Lauf Western Blot Schritte Erforderliche Verbrauchsmaterialien Amersham WB molecular weight markers Molekularg
57. bran und Anzeigen der Ergeb nisse Abschnitt 5 9 Scannen der Membran und Anzeigen der Er gebnisse auf Seite 189 Suche nach weiteren Informationen Hintergrundinformationen und detaillierte Informationen ber die Planung der Experi mente finden Sie im Amersham WBsystem User Manual Auf dieses kann von der Software aus zugegriffen werden indem Sie Help View user manual in der Men leiste w hlen Weitere Einzelheiten zu der Software finden Sie in der Amersham WB software help die mit der Software verf gbar im rechten Fenster der Software integriert ist Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 121 5 Durchf hren eines Experiments 5 2 Die Amersham WB analyzer starten 5 2 Die Amersham WB analyzer starten Einf hrung In diesem Abschnitt wird das Starten der Amersham WB analyzer Ger teeinheiten be schrieben Auf einem B rocomputer ohne Internetverbindung kann ein Experiment vorab eingerichtet werden Anmerkung Beide Ger teeinheiten m ssen w hrend eines Programmlaufs einge schaltet sein Starten der Amersham WB elpho amp scan Ger teeinheit Schritt Ma nahme 1 Schalten Sie den Netzschalter auf der R ckseite der Eloho amp scan Ger teein heit auf I AN Ergebnis Die Elpho amp scan Ger teeinheit wird gestartet 2 W hrend des Starts zeigt das Ger tebedienfeld Folgendes an ELPHO amp SCAN Wenn die Ger teeinheit einsatzbereit ist wird ein wei es Quadrat angezeigt E
58. brauchsmaterialien f r den Transfer 3 7 1 Einf hrung Zubeh rteile und Verbrauchsmaterialien f r den Transfer Dieser Abschnitt beschreibt e Amersham WB transfer holder Zubeh r e Amersham WB PVDF card Verbrauchsmaterial e Amersham WB transfer paper Verbrauchsmaterial e Amersham WB sponge Verbrauchsmaterial Amersham WEB transfer holder 78 Der Transferhalter wird beim Transfer verwendet Er enth lt das Transfer Sandwich Schwamm Transferpapier Gelkarte PVDF Karte Transferpapier und Schwamm das vor dem Start des Transfers vorbereitet wird Die getrennten Proteine werden wahrend des Transferlaufs vom Gel auf die Membran transferiert F hrungsstifte im Transferhalter gew hrleisten dass die Gelkarte und die PVDF Karte bei der Vorbereitung des Transfer Sandwiches richtig positioniert sind Durch Verwendung des eingebauten Rollers bei Bewegung des Rollers in den Rollerschie nen ber das Sandwich werden Luftbl schen entfernt und ein reproduzierbarer Druck wird auf die Gelkarte und die PVDF Karte ausge bt um einen gleichm igen Transfer vorgang zu erreichen Weitere Informationen zur Vorbereitung des Transfer Sandwiches finden Sie unter Mit der Bildung des Transfer Sandwiches beginnen auf Seite 158 Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 3 Systembeschreibung 3 7 Zubeh rteile und Verbrauchsmaterialien f r Western Blot Schritte 3 7 1 Zubeh rteile und Verbrauchsmaterialien f r d
59. ch ACHTUNG F r die Wartung oder Instandsetzung des Systems d rfen nur Er satz und Zubeh rteile verwendet werden die von GE zugelassen oder geliefert wurden ACHTUNG Beim Austausch eines besch digten Netzkabels ein Ersatzkabel desselben Typs und derselben Ma e verwenden das alle geltenden rtlichen elektrotechnischen Anforderungen erf llt und von GE zugelassen wurde ACHTUNG Vor einem Austausch der Netzsicherung stets die Netzstromversor gung trennen F r ununterbrochenen Schutz gegen die Brandgefahr nur gegen eine Sicherung austauschen deren Typ und Leistung den Angaben auf den Ger teetiketten entspricht VORSICHT Bei Verwendung von gef hrlichen Chemikalien alle angemessenen Schutzma nahmen einhalten wie beispielsweise das Tragen einer Schutzbrille und Handschuhe die resistent gegen die verwendeten Substanzen sind Lokale Vorschriften und Anweisungen f r den si cheren Betrieb und die Wartung des Systems befolgen gt gt gt gt gt gt Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 25 2 Sicherheitsanweisungen 2 1 Sicherheitsvorkehrungen Instandsetzung ACHTUNG Das Ger t vor der Instandsetzung dekontaminieren um sicherzu stellen dass gef hrliche R ckst nde entfernt wurden Entsorgung des Altger ts ACHTUNG Das Ger t vor der Entsorgung dekontaminieren um sicherzustellen dass gef hrliche R ckst nde entfernt wu
60. ch dliche St rungen im Funkverkehr erzeugen Der Betrieb dieses Ger ts in einem Wohngebiet verursacht vermutlich St rungen die der Benutzer auf eigene Kosten korrigieren muss Umweltkonformit t 12 Bestimmung 2011 65 EU Richtlinie zur Beschr nkung der Verwendung bestimmter gef hrlicher Stoffe RoHS Richtlinie 2012 19 EU Richtlinie ber die Abfallentsorgung von Elektro und Elektronikaltger ten WEEE EG Verordnung Nr No Registrierung Bewertung Zulassung und Beschr nkung 1907 2006 chemischer Stoffe REACH Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 1 Einf hrung 1 3 Beh rdliche Vorschriften Bestimmung ACPEIP Verwaltung zur Kontrolle von durch Elektronikger ten verursachte Umweltverschmutzungen chinesische Richtlinie zur Beschr nkung der Verwendung bestimmter gef hrlicher Stoffe RoHS Richtlinie Einhaltung der Vorschriften der angeschlossenen Ger te Alle Ger te die an das Amersham WB analyzer angeschlossen sind m ssen die Sicher heitsanforderungen von IEC EN UL CSA 61010 1 IEC EN UL CSA 60950 1 oder andere relevante nationale Sicherheitsvorschriften und normen erf llen Die Ger te m ssen gem den Anweisungen des Herstellers installiert und verwendet werden Innerhalb der EU m ssen angeschlossene Ger te das CE Kennzeichen aufweisen Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 13 1 Einf hrung 1 4 Amersham WB system Dokumentation 1 4 Ei
61. chrieben in den folgenden Abschnitten der mit dem Experimenttyp Western with total protein normalization Western mit Gesamtprotein Normalisierung veranschaulicht wird Elektrophorese Experimente Bei Elektrophorese Experimenten werden die Proben vor der Elektrophorese mit Cy5 Farbstoff Reagenz vormarkiert Dies erm glicht eine direkte Detektion der vormarkierten Proteine in der Probe wodurch die Notwendigkeit f r eine nachtr gliche F rbung des Gels entf llt Im Evaluierungsschritt nach dem Gel Scannen wird die automatische Analyse der Proteinb nder durchgef hrt und die Ergebnisse werden in der Software dargestellt Western Experimente 118 In Western Experimenten werden unmarkierte oder Cy5 vormarkierte Proteine w hrend der Elektrophorese im Gel getrennt und dann vom Gel auf eine Membran transferiert Die Membran wird mit prim ren und sekund ren Antik rpern sondiert diezum Nachweis der Zielproteine mit Cy3 oder Cy5 Farbstoff konjugiert sind F r den Gesamtprotein Nachweis wird die Probe mit Cy5 vormarkiert Nach der Sondierung wird die Membran getrocknet und danach gescannt Im Auswertungsschritt wird eine automatische Ana lyse der Proteinb nder vorgenommen und die Ergebnisse werden in der Software dar gestellt Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 5 Durchf hren eines Experiments 5 1 bersicht Allgemeiner berblick ber den Workflow Die nachstehende Abbildung zeigt die Hauptschritte
62. chrift gekennzeichnet z B Power Schalter Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 1 Einf hrung 1 2 Wichtige Informationen f r Benutzer 1 2 Wichtige Informationen f r Benutzer Vor dem Betrieb des Amersham WB analyzer lesen Alle Benutzer m ssen vor der Installation Handhabung oder Wartung des Ger ts die vollst ndige Bedienungsanleitung gelesen haben Die Bedienungsanleitung beim Betrieb des Amersham WB analyzer stets griffbereit halten Das Amersham WB analyzer nur wie in der Benutzerdokumentation beschrieben bedie nen Andernfalls k nnen Sie Gefahren ausgesetzt sein die m glicherweise zu Verletzungen und Ger tesch den f hren Verwendungsbereiche Amersham WB system ist ein Proteinelektrophorese und Western Blot System das Scans von Gelkarten und PVDF Karten beinhaltet Proteine k nnen mit Cy5 vormarkiert werden und demzufolge nach der Elektrophorese direkt im Gel nachgewiesen werden In Western Experimenten werden unmarkierte oder Cy5 vormarkierte Proteinproben auf Membranen transferiert und Zielproteine k nnen mittels Cy3 und oder Cy5 konju gierter sekund rer Antik rper nachgewiesen werden Der fluoreszenzbasierte Nachweis liefert eine hohe Empfindlichkeit und einen gro en Kontrastumfang und erm glicht Multiplex Analysen bei der gleichen Western Blot Membran Amersham WB system ist nur f r Forschungszwecke gedacht und darf nicht in klinischen Verfahren oder f r Diagnosezwecke eingeset
63. cken Sie auf Cancel und fahren Sie fort mit Fortfahren mit der Sondierung auf Seite 172 Denken Sie jedoch daran den Transferstr mungsweg in einer sp teren Phase des Experiments zu reinigen Die Reinigung kann durchgef hrt werden durch Auswahl von Control Clean Transfer flow path in der Men leiste Wenn die Reinigung bersprungen wurde muss der Transferstr mungsweg manuell entleert werden durch Auswahl von Empty Transfer tank im Control Men 2 Den T Buffer Schlauch zu der Wasserflasche mit 1000 ml Reinstwasser umsetzen zusammen mit dem T Water Schlauch 3 Im Dialogfeld Transfer Completed Clean Transfer Flow Path Transfer abgeschlossen Str mungsweg f r Transfer reinigen auf Start clean Reini gung starten klicken Die Reinigung wird gestartet und nimmt etwa 9 Minuten in Anspruch Anmerkung Die Sondierung kann w hrend der Reinigung des Str mungswegs f r Transfer gestartet werden siehe Fortfahren mit der Sondierung auf Seite 172 4 Die L sung in die Wasserflasche entsorgen und den Schlauch in eine leere Flasche f hren 5 Den oberen Teil des Transferbeh lterinneren mit einem feuchten fusselfreien Tuch abwischen 6 Alle verbliebenen sichtbaren Partikel Fasern und Gelst cke mit einer Pinzette entfernen Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 171 5 Durchf hren eines Experiments 5 7 Durchf hren des Transfers 5 7 4 Verfahren nach dem Transfer Reinigen des Transferhalters A
64. dem Arbeits tisch gef hrt wird und vor dem Start eines Programmlaufs keine Leckage vorliegt Ben tigt wird ein Ablaufbeh lter von mindestens 4 VORSICHT Brandgefahr Keine Transferpufferl sungen verwenden die mehr als 40 Ethanol oder 40 Methanol enthalten Es wird empfohlen in Transferpuffern lediglich 20 Ethanol zu verwenden Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 19 2 Sicherheitsanweisungen 2 1 Sicherheitsvorkehrungen Personenschutz 20 ACHTUNG Beim Umgang mit Gelkarten PVDF Karten und anderen Verbrauchs materialien die im Lieferumfang des Amersham WB system enthal ten sind stets Handschuhe Schutzkleidung und eine Schutzbrille tragen ACHTUNG Beim Arbeiten mit dem Prelabeling von Proteinproben e Stets Schutzkleidung Handschuhe und eine Schutzbrille tragen e Vor dem Prelabeling von Proben das Sicherheitsdatenblatt SDB lesen ACHTUNG Das Amersham WB analyzer ist ein Klasse A Produkt Im Wohnbe reich kann dieses Produkt Funkst rungen verursachen In diesem Fall muss der Benutzer entsprechende Ma nahmen ergreifen A A A A VORSICHT Gefahrstoffe Bei Verwendung von gef hrlichen chemischen und biologischen Substanzen alle angemessenen Schutzma nahmen beachten wie beispielsweise das Tragen einer Schutzbrille sowie von Handschuhen die resistent gegen die verwendeten Substanzen sind Regionale und oder nationale Vorschriften f r de
65. der Men leiste Wenn die Reinigung bersprungen wurde muss der Sondierungsstr mungs weg manuell entleert werden durch Auswahl von Empty Probing chamber im Control Men Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 185 5 Durchf hren eines Experiments 5 8 Durchf hren von Sondierung und Trocknung 5 8 3 Verfahren nach der Sondierung Schritt Ma nahme 2 Neue leere R hrchen mit Antik rperl sung in das Antik rperfach einsetzen Anmerkung Stets vier neue leere R hrchen einsetzen 3 Die Sondierungsschl uche P Block P Wash und P Final Wash mit einem feuchten Taschentuch abwischen und in die Flasche mit Reinstwasser mit dem P Water Schlauch umsetzen Im Softwaredialogfeld die Menge Reinstwasser berpr fen die f r die Reini gung erforderlich ist und sicherstellen dass die Flasche mindestens diese Menge Wasser enth lt 4 Im Dialogfeld Probing completed clean probing system Sondierung ab geschlossen Sondierungssystem reinigen auf Start clean Reinigung starten klicken Die Reinigung wird begonnen und dauert etwa 13 Minuten Anmerkung Das Trocknen der Membranen kann w hrend der Reinigung des Stromungs wegs f r Sondierung gestartet werden 5 Nach Abschluss der Reinigung die L sung in der Flasche mit Wasser entsor gen und das Abwasser in die Antik rperl sungs R hrchen entsorgen Die Schl uche in einer leeren Flasche platzieren 186 Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214
66. der zusammen mit dem Ger t verwendete Computer muss IEC EN UL CSA 60950 1 oder andere Sicherheitsvorschriften erf l len Er sollte gem den Anweisungen des Herstellers installiert und verwendet werden O 102 Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 4 Installation 4 2 Hardwareinstallation Schritt Ma nahme a Den Computer unter Verwendung des mitgelieferten USB Kabels mit der Elpho amp scan Ger teeinheit verbinden Kontakt Computer Western unit je Computer Anmerkung Es empfiehlt sich den Ruhemodus des Computers zu deaktivieren oder auf 3 Stunden einzustellen wenn der Computer an das Amersham WB analyzer angeschlossen ist Bei Eintritt in den Ruhemodus wird die Verbindung zum Remote Zugriff auf das Ger t unterbrochen sodass der Programmlaufstatus erst hochgeladen wird wenn der Computer wieder aktiv ist 2 Die Eloho amp scan Ger teeinheit Kontakt Western unit unter Verwendung des mitgelieferten Ethernet Kabels mit der Western Ger teeinheit Kontakt Elpho and scan unit verbinden Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 103 4 Installation 4 2 Hardwareinstallation Schritt MaBnahme 3 Netzkabel mit den Netzkabelanschl ssen der Ger teeinheiten verbinden a od CAAA 4 Netzkabel an eine geerdete Wandsteckdose anschlieBen Angaben zu Spannung und Frequenz finden Sie unter Abschnitt 7 1 Systems pezifikationen auf Seite 221 Anmerkung Den
67. des Hardwaremoduls Elektrophorese und Scankammer Transferbeh lter Sondierungskammer und Trocknungskammer und der Fortschritt jedes Programmlaufs in den Modulen angezeigt Es k nnen mehrere Experimente gleichzeitig ge ffnet werden F r jedes Experiment ist eine neue Instanz der Software zu ffnen Das Ger testatus Feld zeigt den Status des Ger ts f r alle ge ffneten Experimente Ein Hardwaremodul kann von jeweils einem Experiment verwendet werden Das bedeutet dass vier unterschiedliche Arbeitsschritte von vier ver schiedenen Experimenten parallel ausgef hrt werden k nnen Hilfefeld Das Hilfefeld zeigt die Hilfeanweisungen f r den aktuell im Arbeitsbereich angezeigten Bildschirm an Wenn ein neuer Schritt im Workflow ausgew hlt wird werden die Hilfean weisungen automatisch so aktualisiert dass die Hilfe f r den aktiven Bildschirm angezeigt wird Tipp Um das Benutzerhandbuch mit ausf hrlichen Informationen ber das System anzuzeigen in der Men leiste das Men element Help View user manual Hilfe Benutzerhandbuch anzei gen ausw hlen oder Strg F1 dr cken 92 Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 4 Installation Zu diesem Kapitel Dieses Kapitel beschreibt die Installation des Amersham WB system 4 Installation In diesem Kapitel Dieses Kapitel enth lt die folgenden Abschnitte Abschnitt Siehe Seite 4 1 Standortvorbereitung 94 4 2 Hardwareinstallation 97 4 3 Softwareinsta
68. die Halter geladen und nach dem Programmlauf entsorgt Die Form der Halter leitet den Benutzer bei der Platzierung der Pufferstreifen in den Haltern und bei der Platzierung der Halter in der Elpho amp scan Ger teeinheit F r weitere Informationen siehe Vorbereitungen vor dem Start der Elektrophorese auf Seite 135 In den Pufferstreifen verwendeter Puffer Bei dem in den Pufferstreifen verwendeten Puffer handelt es sich um Tris Tricin Abbildung der Pufferstreifen Die nachstehende Abbildung zeigt einen Pufferstreifen 74 Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 3 Systembeschreibung 3 6 Zubeh rteile und Verbrauchsmaterialien f r die Elektrophorese 3 6 3 Amersham WB buffer strip und Amersham WB buffer strip holder Abbildung der Pufferstreifenhalter Die nachstehende Abbildung zeigt einen Pufferstreifenhalter Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 75 3 Systembeschreibung 3 6 Zubeh rteile und Verbrauchsmaterialien f r die Elektrophorese 3 6 4 Amersham WB paper comb 3 6 4 Amersham WB paper comb Einf hrung Der Papierkamm wird verwendet um die Probenvertiefungen zu reinigen wenn Proteine f r ein paar Minuten in das Gel migriert sind Eine Reinigung der Probenvertiefung wird empfohlen um bersch ssige Farbe zu entfernen wenn vormarkierte Proben verwendet werden Dies reduziert den Hintergrund was die Detektion und Quantifizierung von schw cheren Proteinen lt 1 ng Band
69. dienungsanleitung 29 0214 77 AE 3 Systembeschreibung 3 7 Zubeh rteile und Verbrauchsmaterialien f r Western Blot Schritte 3 7 2 Sekund re Antik rper Sondierung 3 7 2 Sekund re Antik rper Sondierung Einf hrung Die Zielproteine werden identifiziert indem die Membran mit prim ren Antik rpern und artspezifischen sekund ren CyDye konjugierten Antik rpern sondiert wird Durch Ver wendung von zwei unterschiedlichen Arten von prim ren Antik rpern Maus und Kanin chen einem Cy3 konjugierten sekund ren Antik rper und einem Cy5 konjugierten se kund ren Antik rper kann ein Multiplex Experiment durchgef hrt werden bei dem zwei Proteine gleichzeitig auf derselben Membran nachgewiesen werden k nnen Die folgenden Varianten von CyDye konjugierten sekund ren Antik rpern stehen zur Verf gung e Amersham WB goat anti mouse Cy3 Ziege Anti Maus Cy3 e Amersham WB goat anti rabbit Cy3 Ziege Anti Kaninchen Cy3 e Amersham WB goat anti mouse Cy5 Ziege Anti Maus Cy5 e Amersham WB goat anti rabbit Cy5 Ziege Anti Kaninchen Cy5 CyDye konjugiert zu den sekund ren Antik rpern Die zu den sekund ren Antik rpern konjugierten CyDyes besitzen eigene Anregungs und Emissionswellenl ngen im sichtbaren Lichtspektrum und unterscheiden sich spektral voneinander was zu minimalen Wechselwirkungen f hrt siehe Tabelle unten Anregungswellenl nge Emissionswellenl nge Nach der Anregung werden die resultierenden
70. ebnis Der Lader wird eingefahren Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 193 6 Wartung 6 Wartung Zu diesem Kapitel Dieser Abschnitt listet die regelm igen Wartungsarbeiten auf die durch den Benutzer des Amersham WB analyzer durchgef hrt werden m ssen sowie die Wartungsarbeiten die bei Bedarf durchgef hrt werden m ssen VorsichtsmaBnahmen ACHTUNG Das Amersham WB analyzer Instrument keinesfalls verwenden wenn es nicht ordnungsgem funktioniert bzw besch digt wurde zum Beispiel e Besch digung des Netzkabels oder Steckers e Besch digung durch Fallenlassen des Ger ts e Besch digung an anderen Teilen die die Funktion beeintr ch tigen kann ACHTUNG Stromschlaggefahr Alle Reparaturen m ssen von Servicepersonal durchgef hrt werden das von GE autorisiert ist ffnen Sie keine Abdeckungen oder Ersatzteile es sei denn dies ist in der Benutzer dokumentation ausdr cklich angegeben ACHTUNG Die Stromzufuhr trennen Bevor Teile am Ger t ausgetauscht werden stets die Stromzufuhr zum Ger t trennen wenn in der Benutzerdokumentation nicht anderweitig angegeben 194 Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 6 Wartung ACHTUNG Bei Verwendung von gef hrlichen Chemikalien Verschutten ver meiden und eine Schutzbrille und andere Personenschutzausr s tung tragen NaOH beispielsweise ist tzend und daher gesund heitssch dlich
71. ebnisse aueneenenn 189 NOTEN Zeus ee ee 194 5 Warnungsprogr aiii ee a 197 6 2 Anweisungen zur Wartung a een 202 6 2 1 W chentliche Reinigung der Str mungswege f r Transfer und Sondierung 203 6 2 2 Austauschverfahren nn 2er 6 2 3 Umstellen der Ger leeinnellen ae 219 7 Informationen zu Verweisen uuusssssesssesssesnesnnsnnsennsennennnensnennnennennsnnnsnessnesnnnsnnnnne 220 Ved SYSTEMS IO SZ TOA OI nee ee een 221 7 2 Leitfaden zur Chemikalienbest ndigkeit oo eccescsesssssssssssssessecssecssecsseesssecssesssscssscssecsseceseeeses 226 7 3 Gesundheits und Sicherheitserkl rungsformular ou eessescssecssecsseesseesseessssessesssecssecssecsseeeses 228 7 4 _ bersetzungen von Zubeh rteilen und Verbrauchsmaterialien 230 ye 2 BRNNNGENTRETENEN TER Dire A ELUIEENEEERIRRTIGOR REEKEIERET 231 4 Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 1 Einf hrung 1 Einf hrung Das Amersham WB system Das Amersham WB system ist ein integriertes System f r SDS PAGE und die Western Blotting Analyse von Proteinen anhand von Fluoreszenzdetektion Elektrophorese Scannen Transfer und automatisierte Sondierungsschritte werden insgesamt von dem gleichen System durchgef hrt Es stehen Reagenzien f r eine Vormarkierung und eine Antik rperdetektion sowie Gel und Membranverbrauchsmaterial zur Verf gung Das Amersham WB system umfasst die Vorrichtung den Amersham WB analyzer Amersham WB
72. eden wird Es darf erst dann fortgefahren werden wenn alle angegebenen Bedingungen erf llt und verstanden wurden Anmerkungen und Tipps Anmerkung Tipp HINWEIS HINWEIS weist auf Anweisungen hin die befolgt werden m ssen um Sch den am Produkt oder anderen Ger ten zu vermeiden Eine Anmerkung weist auf Informationen hin die f r eine st rungsfreie und optimale Verwendung des Produkts wichtig sind Ein Tipp enth lt n tzliche Informationen die Ihre Verfahren verbessern oder optimieren k nnen Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 9 1 Einf hrung 1 3 Beh rdliche Vorschriften 1 3 _Beh rdliche Vorschriften Einf hrung Dieser Abschnitt beschreibt die Richtlinien und Normen die das Amersham WB system erf llt Herstellerinformationen Die folgende Tabelle enth lt eine Zusammenfassung der erforderlichen Herstellerinfor mationen For further information see the EU Declaration of Conformity DoC document Anforderung Inhalt Name und Anschrift des Herstellers GE Healthcare Bio Sciences AB Bj rkgatan 30 SE 751 84 Uppsala Sweden Konformit t mit EU Richtlinien Dieses Produkt entspricht den in der Tabelle aufgef hrten europ ischen Richtlinien indem es die entsprechenden harmonisierten Normen erf llt Richtlinie 2006 42 EC Maschinenrichtlinie 2004 108 EC Richtlinie zur elektromagnetischen Vertr glichkeit EMV 2006 95 EC Niederspannungsrichtli
73. eichen Menge Reinstwasser Mit dem Vortexsch ttler gut mischen 3 Verd nnen Sie die Molekulargewichtsmarker 1 20 mit dem vorbereiteten Ladepuffer Anmerkung Die Molekulargewichtsmarker k nnen weiter im vorbereiteten Lade puffer verd nnt werden um Proben mit schwachen Signalen zu ver gleichen Allerdings ist es dann notwendig die Option Stop electropho resis on time auszuw hlen Elektrophorese Experimente In Elektrophorese Experimenten ist es normalerweise nicht notwendig den Amersham WB molecular weight markers zu verd nnen Falls erforderlich verd nnen Sie den Mole kulargewichtsmarker mit dem Ladepuffer der DTT enth lt verd nnt mit dem gleichen Volumen Reinstwasser 132 Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 5 Durchf hren eines Experiments 5 5 Vorbereiten Amersham WB molecular weight markers Replikate Es wird empfohlen dem Lauf zwei Markerstreifen beizuf gen um bestm gliche Ergeb nisse in der automatischen Kalibrierung des Molekulargewichts von Probenproteinen im Evaluierungsschritt zu erzielen Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 133 5 Durchf hren eines Experiments 5 6 Durchf hren der Proteinelektrophorese 5 6 Durchf hren der Proteinelektrophorese Einf hrung Dieser Abschnitt beschreibt die Durchf hrung der Proteinelektrophorese einschlie lich Vorbereitungen vor dem Start der Elektrophorese Reinigung des Probenbetts Starten und berwachen von Elektr
74. elcher Position f r Antik rperr hrchen im Antik rperfach platziert werden Position A PRIMARY Beschreibung Position f r prim re Antik rper die auf die Mem bran in Position A in der Sondierungskammer gelenkt werden A SECONDARY Position f r sekund re Antik rper die auf die Membran in Position A in der Sondierungskammer gelenkt werden B PRIMARY Position f r prim re Antik rper die auf die Mem bran in Position B in der Sondierungskammer gelenkt werden B SECONDARY Position f r sekund re Antik rper die auf die Membran in Position B in der Sondierungskammer gelenkt werden 3 Den Deckel des Antik rperfachs schlie en Anmerkung F r jede Membran gibt es ein Antik rperr hrchen f r die prim ren Antik rper und eines f r die sekund ren Antik rper Das bedeutet zum Beispiel wenn zwei prim re Antik rper f r die Markierung der Membran in Position A ausgew hlt werden werden sie zusammen in dem glei chen Antik rperr hrchen gemischt und in Position gebracht A PRIMARY Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 177 5 Durchf hren eines Experiments 5 8 Durchf hren von Sondierung und Trocknung 5 8 2 Ausf hren der Sondierung 5 8 2 Ausf hren der Sondierung Einf hrung In diesem Abschnitt wird beschrieben wie e legen Sie die PVDF Karten in die Sondierungskammern e die Sondierung gestartet und berwacht wird VorsichtsmaBnahmen ACHTUNG Ge
75. elkarte Amersham WB gel card 14 8 18 Gelzusammensetzung Die Gele in der Gelkartenkassette sind gebrauchsfertig Bei den Gelen handelt es sich um Polyacrylamid Bisacrylamid Gele mit einem Tris Acetat Puffer Aufl sung der Proteintrennung In der nachstehenden Tabelle ist die Aufl sung der Proteintrennung f r die einzelnen Gelkartentypen aufgef hrt Gelkartentyp Trennungsaufl sung M x10 Amersham WB gel card 14 13 5 10 bis 225 Homogen Amersham WB gel card 14 8 18 e 6 bis 225 vormarkierte Proteine Gradientenbasiert e 3 5 bis 225 Western Experimente Antik r pernachweis Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 71 3 Systembeschreibung 3 6 Zubeh rteile und Verbrauchsmaterialien f r die Elektrophorese 3 6 2 Amersham WB gel card Abbildung der Vorderseite einer Gelkarte Die nachstehende Abbildung zeigt die Gelkarte mit der Vorderseite nach oben weisend I _ SS I B Bee TTT Teil Beschreibung Schreibflache fur eigenen Vermerk Anmerkung Beim Verfassen des Vermerks stets einen Bleistift verwenden Der Vermerk kann auch in der Software eingegeben werden Etikett mit Gelkartentyp 3 Probenbettabdeckung die abgenommen werden muss wenn der Dichtungsdeckel in der Elpho amp scan Ger teeinheit vor dem Aufbringen der Proben geschlossen wurde 4 Gelgriffe zur einfachen Handhabung des Gels nach Entfernung von seinem Tr ger f r Western Blotting 72 Amersham WB system
76. en Transfer Abbildung des geschlossenen Transferhalters Das nachstehende Bild zeigt den Transferhalter im geschlossenen Zustand Abbildung des zerlegten Transferhalters Das nachstehende Bild zeigt den Transferhalter im zerlegten Zustand 3 4 5 In der nachstehenden Tabelle werden die verschiedenen Teile des Transferhalters be schrieben Unterteil schwarzer Deckel Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 79 3 Systembeschreibung 3 7 Zubeh rteile und Verbrauchsmaterialien f r Western Blot Schritte 3 7 1 Zubehorteile und Verbrauchsmaterialien fur den Transfer Funktion Riegel F hrungsstifte f r Gelkarte und PVDF Karte Rollerschienen f r Rollerstifte Oberteil wei er Deckel Rollerstifte in Rollerschienen einpassen um die Deckel zusammenzuf gen Roller Griff ffnungen f r die Riegel Amersham WB PVDF card Im Transferschritt werden Proteine aus dem Gel auf den Blotting Bereich der PVDF Karte bertragen Die PVDF Karte ist eine PVDF Membran mit geringer Fluoreszenz Die folgende Abbildung zeigt die verschiedenen Teile der PVDF Karte und die Einzelpa ckung der PDVF Karte Amersham W PVDF card un ak torte Letna GUMS identity mo acer primo E O eect E Sele ab Die folgende Tabelle beschreibt die verschiedenen Teile der der PVDF Karte und PDVF die Einzelpackung der PDVF Karte 80 Amersham WB system Bedienungsa
77. en f r die Elektrophorese 67 3 7 Zubeh rteile und Verbrauchsmaterialien f r Western Blot 77 Schritte 3 8 Sonstige Zubeh rteile 87 3 9 berblick ber die Software 89 36 Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 3 Systembeschreibung 3 1 berblick ber das Ger t 3 1 berblick ber das Ger t Einf hrung Dieser Abschnitt liefert einen berblick ber das Amersham WB analyzer Das Amersham WB analyzer besteht aus zwei Ger teeinheiten e Amersham WB elpho amp scan Ger teeinheit e Amersham WB western Ger teeinheit Die Ger teeinheiten werden von einem PC gesteuert der mit Amersham WB software l uft Anmerkung Die Ger teeinheiten m ssen w hrend eines Programmlaufs stets miteinander verbunden sein Beide Ger teeinheiten m ssen eingeschal tet sein wenn ein Experiment in der Western Ger teeinheit ausgef hrt wird Sicherheitsschalter Die Elpho amp scan Ger teeinheit arbeitet mit Hochspannung und enth lt zwei Laser Die Ger teeinheit besitzt doppelte Sicherheitsschalter die die Stromzufuhr zum Hochspan nungswandler und den Lasern stoppen wenn der Lader ge ffnet wird Innerhalb des Transferbeh lters der Western Ger teeinheit liegt Hochspannung an Die Ger teeinheit besitzt Sicherheitsschalter die die Stromzufuhr stoppen wenn der Trans ferbeh lterdeckel ge ffnet wird Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 37 3 Systembeschreibung 3 1 berblick ber das
78. en von Experimenten die mit dem Amersham WB system durchgef hrt werden k nnen Er beschreibt auch den Workflow des Experimenttyps Western with total protein normalization Western mit Gesamtprotein Normalisierung VorsichtsmaBnahmen VORSICHT W hrend des Betriebs und der Wartung des Amersham WB analyzer stets Handschuhe Schutzkleidung und eine Schutzbrille tragen In diesem Kapitel Dieses Kapitel enth lt die folgenden Abschnitte Abschnitt Siehe Seite 5 1 bersicht 118 5 2 Die Amersham WB analyzer starten 122 5 3 Einrichten eines Experiments in der Software 124 5 4 Durchf hren des Prelabelings von Proben 128 5 5 Vorbereiten Amersham WB molecular weight markers 132 5 6 Durchf hren der Proteinelektrophorese 134 5 7 Durchf hren des Transfers 148 5 8 Durchf hren von Sondierung und Trocknung 173 116 Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 5 Durchf hren eines Experiments Abschnitt Siehe Seite 5 9 Scannen der Membran und Anzeigen der Ergebnisse 189 Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 117 5 Durchf hren eines Experiments 5 1 Ubersicht 5 1 Ubersicht Einfuhrung Dieser Abschnitt liefert einen berblick ber die zwei Haupttypen von Experimenten die durchgef hrt werden k nnen e Elektrophorese Experimente e Western Experimente umfasst die Proteinelektrophorese In diesem Abschnitt wird auch der Workflow eines typischen Experiments beschrieben bes
79. er Einlassfilter selbst stellt ein Gewicht dar das den Schlauch am Boden der Flaschen h lt Die nachstehende Abbildung zeigt eine am Schlauch angebrachte Einlassfilterhalterung mit montiertem Einlassfilter Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 87 3 Systembeschreibung 3 8 Sonstige Zubeh rteile Schlauchhalter Um Spannungen zu kompensieren die auftreten wenn Schl uche in Flaschen platziert werden muss am Schlauch ein Schlauchhalter angebracht werden Siehe Abbildung unten Weitere Zubeh rteile die der Benutzer einbauen muss Die Transferelektroden und Membrantrocknerf hrungen m ssen vom Benutzer eingebaut werden Weitere Informationen siehe Einbauen der Transferelektroden auf Seite 100 und Einbauen der Membrantrocknerf hrungen im Trocknerfach auf Seite 108 Zubeh rteile f r die Wartung durch den Benutzer Eine Beschreibung der Zubeh rteile f r die Wartung durch den Benutzer finden Sie unter Wartungszubeh r auf Seite 207 88 Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 3 Systembeschreibung 3 9 berblick ber die Software 3 9 berblick ber die Software Einf hrung Dieser Abschnitt liefert einen berblick ber die Amersham WB software Abbildung des Startbildschirms der Software Im Startbildschirms der Software k nnen neue Experimente erstellt und zuvor gespei cherte Experimente ge ffnet werden Informationen zum Erstellen Einrichten eines Ex periments
80. erbrochen wird auch wenn eine unterbrechungsfreie Stromversorgung USV verwendet wird Stromausfall Die Konsequenzen eines Stromausfalls werden nachstehend beschrieben Stromausfall an f hrt zu Amersham WB analyzer Alle laufenden Experimente werden gestoppt Experi mente werden nicht fortgesetzt wenn die Stromzufuhr wieder aktiviert wird Anmerkung Eine USV kann den Datenverlust w hrend und nach einem Stromausfall unterbinden und Zeit f r einen kontrollierte Ausschaltung des Amersham WB analyzer bieten e Der Zeitpunkt des Stopps wird in der Software f r die Ger teeinheiten protokolliert Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 33 2 Sicherheitsanweisungen 2 3 Vorgehensweise in Notf llen Stromausfall an f hrt zu Computer Der an die Elpho amp scan Ger teeinheit angeschlossene Computer f hrt herunter Alle laufenden Experimente werden unter der Voraus setzung fortgesetzt und beendet dass das Ger tnoch mit Strom versorgt wird Wenn der Computer neu gestartet und die Verbindung wiederhergestellt wird werden die Ergebnisse des Experiments gespeichert Bilder werden gegebenen falls gescannt Neustart nach einer Notausschaltung oder einem Stromausfall am Ger t Wenn die Stromzufuhr wiederhergestellt wird werden keine Experimente fortgesetzt die zum Zeitpunkt der Notausschaltung durchgef hrt wurden Folgenderma en fortfah ren Schritt Ma nahme
81. ereitung Verbrauchsmaterial inhalt 50 mM Tris Cl 0 25 w v Orange G 4 SDS 0 5 mM Lysin 5 Flaschchen orangefarbene Kappe 0 7 ml Lade Pufferl sung pro Am pulle ausreichend f r zwei Gelkar ten Die folgende Tabelle beschreibt die Amersham WB MiniTrap kit Probenvorbereitung Verbrauchs material Amersham WB MiniTrap kit 66 Funktion Das Kit ist f r eine schnelle und bequeme Reinigung von Proteinproben konzipiert gt 5000 M die St rsubstan zen z B Imidazol enthalten 30 abgepackte PD MiniTrap G 25 S ulen Einwegartikel die Sephadex G 25 Medium enthalten 1 Flache mit 10x Amersham WB labeling buffer 14 ml Stamml sung Integrierte Stativs ule Abfall beh lter und R hrenhalter Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 3 Systembeschreibung 3 6 Zubeh rteile und Verbrauchsmaterialien f r die Elektrophorese 3 6 Zubeh rteile und Verbrauchsmaterialien f r die Elek trophorese Einf hrung F r die Proteinelektrophorese werden die folgenden Zubeh rteile und Verbrauchsmate rialien ben tigt e Amersham WB buffer strip e Amersham WB buffer strip holder e Amersham WB molecular weight markers e Amersham WB gel card e Amersham WB paper comb wenn die Reinigung des Probenbetts vorgenommen wird e Amersham WB loading buffer fur Informationen Uber den Ladepuffer siehe Ab schnitt 3 5 Prelabeling Verbrauchsmaterialien auf Seite 65 In di
82. esem Abschnitt Dieser Abschnitt enthalt die folgenden Unterabschnitte Abschnitt Siehe Seite 3 6 1 Amersham WB molecular weight markers 68 3 6 2 Amersham WB gel card 71 3 6 3 Amersham WB buffer strip und Amersham WB buffer strip holder 74 3 6 4 Amersham WB paper comb 76 Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 67 3 Systembeschreibung 3 6 Zubeh rteile und Verbrauchsmaterialien f r die Elektrophorese 3 6 1 Amersham WB molecular weight markers 3 6 1 Amersham WB molecular weight markers Einf hrung Inhalt 68 Amersham WB molecular weight markers sind ein Gemisch von neun nativen und re kombinanten Proteinen M 10 000 bis 225 000 markiert sowohl mit Cy3 als auch mit Cy5 f r die Bestimmung des Molekulargewichts von Proteinen auf gescannten Gelkarten und PVDF Karten Die Software berechten Kalibrierungskurven f r das Molekulargewicht Bei Verwendung von zwei Kalibrierungskurven f r das Molekulargewicht werden interpolierte Daten aus den Kurven verwendet um probenbahnspezifische Kalibrierungskurven zu erstellen Danach werden die Molekulargewichte f r allenachgewiesenen B nder in den einzelnen Bahnen berechnet Jede Packung Amersham WB molecular weight markers enth lt eine L sung f r den Lauf von 10 Gelkarten wo 2 Streifen Gelkarte mit Amersham WB molecular weight markers geladen werden Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 3 Systembeschreibung 3 6 Zubeh rteile und Verbrauchsma
83. ewichtsmarker Amersham WB gel card Gelkarte Amersham WB buffer strip Pufferstrei fen Amersham WB loading buffer Amersham WB paper comb optional Papierkamm 3 Systembeschreibung 3 4 berblick ber Zubeh rteile und Verbrauchsmaterialien Erforderliche Zubeh rteile Amersham WB buf fer strip holder 1 Pufferstreifenhalter Informatio nen hierzu siehe Abschnitt 3 6 Transfer Amersham WB gel card aus dem Elek trophorese Lauf Amersham WB PVDF card PVDF Karte Amersham WB transfer paper Transfer papier Amersham WB sponge Schwamm Im Labor zubereitete Transferl sungen Rezepturen siehe Rezepturen f r Transferl sungen auf Seite 149 Amersham WB transfer holder Transferhalter Abschnitt 54 Sondierung R Im Labor zubereitete L sungen mit pri m ren Antik rpern Sekund rer Antik rper Amersham WB goat anti mouse Cy3 Cy5 Ziege Anti Maus Cy3 Cy5 oder Amersham WB goat anti rabbit Cy3 Cy5 Ziege Anti Kaninchen Cy3 Cy5 PVDF Karte aus dem Transfer Schritt Im Labor zubereitete Sondierungsl sun gen Rezepturen siehe Rezepturen f r Sondierungs und Antik rperl sungen auf Seite 174 R hrchen mit Antik r perl sung Abschnitt 3 1 2 Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 61 3 Systembeschreibung 3 4 berblick ber Zubeh rteile und Verbrauchsmaterialien Arbeitsschritt Erforderliche Verbrauchsmaterialien
84. finden Sie unter Erstellen und Einrichten eines Experiments auf Seite 125 A amp Amersham WB software 96 Amersham WB software File vw Control Y Remote W at Create New Experiment Easy Western All Western experiments include necessary SDS PAGE steps Western blot experiment for quick confirmation of protein identity and easy sample to sample comparison Easy Western One primary antibody against the specific target and a corresponding secondary antibody for the detection Optionally two primary antibodies of different species against two different targets and two corresponding secondary antibodies for detection of the two targets individually This allows for unambiguous analysis of two targets of similar size in one experiment Western with total protein normalization gt Western with endogenous protein normalization Easy SDS PAGE Create Samples should normally not be pre labeled for use in this experiment F WE fe Create new experiment Maintenance clean Open experiment based on a previous run Learn more N r manual Open New from existing Maintenance clean Transfer User manual z z Web resource Maintenance clean Probing Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 89 3 Systembeschreibung 3 9 berblick ber die Software Abbildung des Hauptbildschirms der Software Die nachstehende Abbildung zeigt den Hauptbildschirm der Software f r ein Wes
85. g Schritt Ma nahme 1 In der Software das Men element Control Maintenance clean Transfer flow path Steuerung Str mungsweg f r Transfer unterhaltsreinigen aus w hlen oder im Startbildschirm der Software auf die Schaltfl che Mainte nance clean Transfer Unterhaltsreinigen Transfer klicken Ergebnis Das Dialogfeld Maintenance Clean Transfer Flow Path Unterhalts reinigen des Str mungswegs f r Transfer wird angezeigt Maintenance Clean Transfer Flow Path Maintenance cleaning of the transfer flow path 1 Wipe both transfer tubing with a wet tissue 2 Insert the transfer Water tubing in 2000 mi water 3 Insert the transfer Buffer tubing in 1000 ml wash solution 4 Make sure that no transfer holders are left in the tank Note Discard all solutions after cleaning The procedure will take about 25 minutes Start clean Cancel 2 e Den oberen Teil des Transferbeh lters und beide Transferschl uche mit einem feuchten Taschentuch abwischen e berpr fen dass der Transferbeh lterfilter intakt und sauber ist Den Filter gegebenenfalls austauschen 3 Tauchen Sie den T Water Schlauch in eine Flasche mit 2000 ml Reinstwasser 4 Den T Buffer Schlauch in eine Flasche mit 1000 ml 0 5 M NaOH eintauchen 5 Im Dialogfeld auf die Schaltflache Start clean Reinigung starten klicken 6 Nach Beenden der Reinigung die Schl uche in eine leere Flasche umsetzen Anmerkung Alle L sungen nach der Reinigung ents
86. g the equipment and could be subject to additional charges 3 Visible contamination will be assumed hazardous and additional cleaning and decontamination charges will be applied Please specify if the equipment has been in contact with any of the following Radioactivity please specify Infectious or hazardous biological substances please specify Other Hazardous Chemicals please specify Equipment must be decontaminated prior to service return Please provide a telephone number where GE can contact you for additional information concerning the system equipment Telephone No Liquid and or gas in equipment is Water Ethanol None empty Argon Helium Nitrogen Liquid Nitrogen Other please specify Equipment type Product No Serial No Name Company or institution Position or job title Date YYYY MM DD Signed GE and GE monogram are trademarks of General Electric Company To receive a return authorization number or service number GE Healthcare Bio Sciences Corp 800 Centennial Avenue P O Box 1327 Piscataway please call local technical support or customer service NJ 08855 1327 US 2010 14 General Electric Company All rights reserved First published April 2010 DOC1149544 28 9800 27 AC 05 2014 Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 229 7 Informationen zu Verweisen 7 4 bersetzungen von Zubeh rteilen und Verb
87. h Zubereiten und Anschlie en der Sondierungs und Antik rperl sungen Ausf hren des Transfers Durchf hren von Sondierung und Trocknung Scannen der Membranlen und Anzeigen der Ergebnisse 120 Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 5 Durchf hren eines Experiments 5 1 bersicht In der nachstehenden Tabelle werden die Abschnitte aufgef hrt in denen die Schritte beschrieben werden Schritt Starten des Ger ts Abschnitt 5 2 Die Amersham WB analyzer starten auf Seite 122 Einrichten eines Experi ments in der Software Durchf hren des Prela beling Abschnitt 5 3 Einrichten eines Experiments in der Software auf Seite 124 Abschnitt 5 4 Durchf hren des Prelabelings von Proben auf Seite 128 Ausf hren von Elektro phorese und Scan Abschnitt 5 6 Durchf hren der Proteinelektrophorese auf Seite 134 Zubereiten und Anschlie Ben der Transferl sun Abschnitt 5 7 1 Zubereiten und Anschlie en der Transferl sungen auf Seite 149 Vorbereiten des Transfer Sandwich Ausf hren des Transfers Zubereiten und Anschlie Ben der Sondierungs und Antik rperl sungen Abschnitt 5 7 Durchf hren des Transfers auf Seite 148 Abschnitt 5 8 1 Zubereiten und Anschlie en der Sondie rungs und Antik rperl sungen auf Seite 174 Durchf hren von Sondie rung und Trocknung Abschnitt 5 8 Durchf hren von Sondierung und Trocknung auf Seite 173 Scannen der Mem
88. ham WB analyzer durchgef hrt werden m ssen Die Wartung ist unterteilt in e Nach jedem Lauf e W chentliche Wartung e Monatliche Wartung e J hrliche Wartung e Wartung nach Bedarf Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 197 6 Wartung 6 1 Wartungsprogramm RegelmaBiges Wartungsprogramm Der Bediener des Amersham WB analyzer sollte die folgenden regelm igen Wartungs arbeiten durchf hren Intervall Wartungsarbeit Anweisungen Nach jedem Programmlauf in der Elpho amp scan Ger teeinheit Jegliche Fl ssigkeit auf der Karten Ein fusselfreies Tuch oder St ck Papier platte abwischen verwenden das das Schutzglas oder EEE we die Kartenplatte nicht zerkratzt Jegliche Fl ssigkeit und jeglichen Schmutz auf dem Schutzglas im Dichtungsdeckel abwischen Zum Entfernen von Flecken ein fussel freies Tuch verwenden das in 50 Ethanol angefeuchtet wurde Das Glas des Dichtungsdeckels auf Kratzer oder Schrammen berpr fen und sicherstellen dass das Glas fest am Rahmen fixiert ist Den Kundendienst verst ndigen wenn ein Teil des Dichtungsdeckels ausge tauscht werden muss Die Dichtungsdeckelklappe berpr fen wenn der Rahmen geschlossen ist und jeglichen Schmutz entfernen Reinigen der Pufferstreifenhalter Die Pufferstreifenhalter unter flie en dem Wasser reinigen um Salze und Puffer zu entfernen Die Pufferstreifenhalter mit der Obersei te nach unten an der Luft troc
89. hergestellt und ist durch die US Patentnummern 5 569 587 und 5 627 027 gesch tzt Der Erwerb von CyDye Produkten umfasst eine begrenzte Lizenz zur Verwendung der CyDye Produkte f r interne Forschungs und Entwicklungszwecke nicht aber f r gewerbliche Zwecke Die Lizenz zur Verwendung der CyDye Produkte f r gewerbliche Zwecke unterliegt einer separaten Lizenzvereinbarung mit GE Healthcare Alle anderen Marken sind das Eigentum der jeweiligen Besitzer 2014 2015 General Electric Company Alle Rechte vorbehalten Erstver ffentlichung im M rz 2014 Der Verkauf aller Waren und Dienstleistungen unterliegt den Verkaufsbedingun gen der Firma innerhalb von GE Healthcare die diese liefert Eine Kopie dieser Bedingungen ist auf Anfrage erh ltlich Wenden Sie sich an Ihren GE Healthcare Vertreter bez glich der aktuellsten Informationen GE Healthcare Bio Sciences AB Bj rkgatan 30 751 84 Uppsala Sweden GE Healthcare Europe GmbH Munzinger Strasse 5 D 79111 Freiburg Germany GE Healthcare Bio Sciences Corp 800 Centennial Avenue PO Box 1327 Piscataway NJ 08855 1327 USA GE Healthcare Japan Corporation Sanken Bldg 3 25 1 Hyakunincho Shinjuku ku Tokyo 169 0073 Japan 29 0214 77 AE 03 2015 a24
90. hosphat Transfer Ethanol 40 64 17 5 200 578 6 Methanol 40 67 56 1 200 659 6 Transfer und Sondie Natriumchlorid 0 2 M 7647 14 5 231 598 3 run i Kaliumchlorid 50 mM 7447 40 7 231 211 8 Tween 1 9005 64 5 500 018 3 Reinigung von Str Natriumhydroxid 0 5 M 1310 73 2 215 185 5 mungswegen Natriumhypochlorit 5 7681 52 9 231 668 3 Reinigung der Karten Ethanol 50 64 17 5 200 578 6 platte 226 Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 7 Informationen zu Verweisen 7 2 Leitfaden zur Chemikalienbest ndigkeit Verwendung Chemische Konzentration CAS Nr und EC Nr Reingung von Oberfl Ethanol 64 17 5 200 578 6 chen Milde Reinigungsmittel Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 227 7 Informationen zu Verweisen 7 3 Gesundheits und Sicherheitserkl rungsformular 7 3 Gesundheits und Sicherheitserklarungsformular Wartung vor Ort Zur Aufzeichnung von Details zur Dekontamination vor einem Vor Ort Service muss ein Bericht zum On Site Service Health amp Safety Declaration Form wie etwa im folgenden Beispiel verwendet werden On Site Service Health amp Safety Declaration Form Service Ticket To make the mutual protection and safety of GE service personnel and our customers all equipment and work areas must be clean and free of any hazardous contaminants before a Service Engineer starts a repair To avoid delays in the servicing of your equipment please complete th
91. hreibung Luftsensor Zum Nachweis ob Luft im Schlauch vorhanden ist Der Luftdetektor halt den Programmlauf an wenn eine Flasche mit Losung leer ist Wechselventil fur die Sondierungskammer Zur Auswahl ob die L sung zu den Sondierungskammern oder von den Sondierungskammern zum Ablauf Sondierungskammern Grundprinzip des Sondierungsvorgangs Bei der Sondierung werden prim re Antik rper an die Proteine auf der Membran gebun den Danach werden sekund re Antik rper die zu einem CyDye konjugiert sind an die prim ren Antik rper gebunden Das Grundprinzip des Sondierungsvorgangs wird nachstehend erl utert Stufe Beschreibung 1 Die Sondierungskammer wird gem dem Eintrag in das Sondierungsproto koll der Software als Standard wird Blockierungsl sung verwendet mit der ersten L sung vorbef llt Das Vorbef llen der Sondierungskammer wird vom Benutzer durch Auswahl der entsprechenden Softwareanweisung gestartet 2 Die PVDF Karten werden in die Sondierungskammern eingesetzt und der Reihe nach werden Inkubationen einschlie lich Waschschritte der Membran mit Blockierungsl sung prim ren Antik rpern und sekund ren Antik rpern durchgef hrt Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 59 3 Systembeschreibung 3 4 berblick ber Zubeh rteile und Verbrauchsmaterialien 3 4 berblick ber Zubeh rteile und Verbrauchsmateria lien Einf hrung Dieser Abschnitt liefert einen ber
92. ibt die Wartungsarbeiten die am Amersham WB analyzer durchgef hrt werden m ssen In diesem Abschnitt Dieser Abschnitt enth lt die folgenden Unterabschnitte Abschnitt Siehe Seite 6 2 1 W chentliche Reinigung der Str mungswege f r Transfer und 203 Sondierung 6 2 2 Austauschverfahren 207 6 2 3 Umstellen der Ger teeinheiten 219 202 Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 6 Wartung 6 2 Anweisungen zur Wartung 6 2 1 W chentliche Reinigung der Str mungswege fur Transfer und Sondierung 6 2 1 W chentliche Reinigung der Str mungswege f r Transfer und Sondierung Einf hrung Die Unterhaltsreinigung der Str mungswege f r Transfer und Sondierung w chentlich oder in den Situationen durchf hren in denen die Ger teeinheit f r einige Tage nicht verwendet wird Unterhaltsreinigung des Str mungswegs f r Transfer Das Verfahren dauert etwa 25 Minuten Sondierung und Trocknung k nnen parallel ausgef hrt werden Anmerkung Sicherstellen dass keine Transferhalter im Beh lter zur ckgeblieben sind ACHTUNG Bei Verwendung von gef hrlichen Chemikalien Versch tten ver meiden und eine Schutzbrille und andere Personenschutzausr s tung tragen NaOH beispielsweise ist tzend und daher gesund heitssch dlich Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 203 6 Wartung 6 2 Anweisungen zur Wartung 6 2 1 W chentliche Reinigung der Str mungswege f r Transfer und Sondierun
93. icht den Gesamtprotein Nachweis beim Scannen der Gelkarte e beseitigt die Notwendigkeit zur Nachf rbung des Gels Wann soll das Prelabeling von Proteinen eingesetzt werden Das Prelabeling von Proteinen wird bei folgenden Experimenten stets vor dem Elektro phorese Schritt durchgef hrt e Elektrophorese Experimente e Western Experimente mit Gesamtprotein Normalisierung Prelabeling Verbrauchsmaterialien Vormarkierte Verbrauchsmaterialien werden in separaten Folienbeuteln verpackt Jeder Folienbeutel enth lt L sungsreagerzien die zum Lauf von 10 Gelkarten ausreichen wobei 14 Streifen Gelkarte mit vormarkierten Proben geladen werden das hei t 140 individuelle Markierungsreaktionen Die nachstehende Tabelle fasst den Inhalt der Prelabeling Verbrauchsmaterialien zusam men Prelabeling Verbrauchsmaterial Inhalt Amersham WB Cy5 0 25 mg ml etwa 250 5 Fl schchen blaue Kappe pmol l Cy5 Farbstoff in 35 ul Cy5 Farbstoffl sung pro DMSO Ampulle genug f r zwei Gelkarten Amersham WB labeling buffer SDS haltiger tris basierter 5 Fl schchen schwarze Kappe Markierungspuffer Puffer mit pH Wert 8 7 bei 0 7 ml Markierungs Pufferl sung 25 C pro Ampulle ausreichend f r zwei Gelkarten Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 65 3 Systembeschreibung 3 5 Prelabeling Verbrauchsmaterialien Prelabeling Verbrauchsmaterial Amersham WB loading buffer La depuffer Probenvorb
94. ie PVDF Karte in den Trocknungshalter indem Sie die PDVF Kar tenl cher ber die drei F hrungsstifte anpassen 4 Schlie en Sie den Trocknungshalter Der Trocknungshalter muss mit dem Riegel verriegelt sein 184 Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 5 Durchf hren eines Experiments 5 8 Durchf hren von Sondierung und Trocknung 5 8 3 Verfahren nach der Sondierung Schritt Ma nahme 5 Legen Sie den die Trocknungshalter in die entsprechende Position in der Trocknungskammer d h PVDF Karte in der Sondierungsposition A zur Trocknungsposition A Reinigen des Stromungswegs f r Sondierung Anmerkung Bevor Sie mit der Reinigung fortfahren bewegen Sie die PVDF Karte n in die Trocknungskammer Anweisungen siehe oben Schritt Ma nahme 1 Wenn die Sondierung abgeschlossen ist wird das Dialogfeld Probing Com pleted Clean Probing Flow Path Sondierung abgeschlossen Stromungs weg f r Sondierung reinigen angezeigt Anmerkung Es empfiehlt sich den Str mungsweg f r Sondierung nach einem Programm lauf zu reinigen Wenn Sie das Reinigung des Sondierungsstr mungswegs berspringen m chten klicken Sie auf Cancel und fahren Sie fort mit Abschnitt 5 8 4 Ausf hren der Trocknung auf Seite 187 Denken Sie jedoch daran den Sondie rungsstr mungsweg in einer sp teren Phase des Experiments zu reinigen Die Reinigung kann durchgef hrt werden durch Auswahl von Control Clean Probing flow path in
95. ienen 2 Anzeige von Position A und Position B 3 Rechte Transferelektrode 50 Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 3 Systembeschreibung 3 3 Western Gerdteeinheit 3 3 2 F cher in der Western Gerdteeinheit Beschreibung Transferbeh lterfilter Linke Transferelektrode Abbildung des Sondierungsfachs Die nachstehende Abbildung zeigt das Sondierungsfach der Western Ger teeinheit Beschreibung 1 Sondierungskammer 2 Sondierungskammerdeckel 3 Anzeige von Position A und Position B Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 51 3 Systembeschreibung 3 3 Western Gerdteeinheit 3 3 2 F cher in der Western Gerdteeinheit Teil Beschreibung Fuhrungsstifte fur die PVDF Karte durch orangefarbene Kreise gekenn zeichnet Sondierungsfachdeckel Klappe im Sondierungsfachdeckel Abbildung des Trocknungsfachs Die nachstehende Abbildung zeigt das Trocknungsfach der Western Ger teeinheit 1 2 el a Beschreibung Membrantrocknerfuhrungen Positionsanzeiger A und Position B Standorte 52 Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 3 Systembeschreibung 3 3 Western Gerdteeinheit 3 3 2 F cher in der Western Gerdteeinheit Abbildung des Antik rperfachs Die nachstehende Abbildung zeigt das Antik rperfach in das vor der Sondierung R hrchen mit 15 ml Antik rperl sung mit prim ren und sekund ren Antik rpern eingesetzt werden links Wei
96. in Elektrophorese und Western Experimenten Elektrophorese Experiment Western Experiment I Starten des Ger ts Einrichten des Experiments in der Software Durchf hren des Vorbereiten unmarkierter Prelabeling Proben f r das Laden Ausf hren von Elektrophorese und Zubereiten und Anschlie en Gel Scan der Transferl sungen Vorbereiten des Transfer Sandwich Bewerten der Zubereiten und AnschlieBen Ergebnisse O en des der Sondierungs und Transfers Antik rperl sungen Durchf hren von L Sondierung und Trocknung Scannen der Membran en Bewerten der Ergebnisse Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 119 5 Durchf hren eines Experiments 5 1 bersicht Workflow Western Experiment mit Gesamtprotein Normalisierung Die nachstehende Abbildung zeigt die Hauptschritte des Experimenttyps Western with total protein normalization Western mit Gesamtprotein Normalisierung Dieser Workflow wird verwendet um beispielhaft darzustellen wie ein typisches Experiment durchgef hrt wird Er wird in den folgenden Abschnitten weiter erl utert Andere Typen von Experimenten siehe das Amersham WB system User Manual Western Experiment Western mit Gesamtprotein Normalisierung Starten des Ger ts Einrichten des Experiments in der Software DUKA C Prelabeling Ausf hren von Zubereiten und Elektrophorese und Anschlie en der Gel Scan Transferl sungen Vorbereiten des Transfer Sandwic
97. inheit anheben Unter und neben der Ger teeinheit in die Aush hlungen im Schaumstoff greifen Die Einheit auf einen Labortisch stellen 98 Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 4 Installation 4 2 Hardwareinstallation Schritt Ma nahme 4 Um eine gute Bel ftung zu gew hrleisten muss die Elpho amp scan Ger teein heit links und die Western Ger teeinheit rechts aufgestellt werden Hinter den Ger teeinheiten mindestens 10 cm Raum f r die Bel ftung lassen Zugang zu Netzschalter und Netzkabel nicht versperren 5 Die Standf e so einstellen dass die Ger teeinheiten horizontal ausgerichtet sind Dies ist besonders wichtig f r die Western Ger teeinheit 6 Wenn keine Beschr nkung seitens des Herstellers besteht und es sich bei dem Computer um einen Laptop handelt kann der Computer auf der Oberseite der Elpho amp scan Ger teeinheit platziert werden Siehe die Um weltspezifikationen f r Computer Bei Verwendung eines Tischcomputers k nnen Monitor und Tastatur auf der Oberseite der Elpho amp scan Ger teeinheit platziert werden Das Compu tersystem selbst darf nicht auf der Oberseite platziert werden Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 99 4 Installation 4 2 Hardwareinstallation Entfernen des Transportschutzes der Elpho amp scan Ger teeinheit Um zerbrechliche Komponenten des Scanners in der Elpho amp scan Ger teeinheit zu schutzen ist ein Transportschutz angebrach
98. is checklist and present it to the Service Engineer upon arrival Equipment and or work areas not sufficiently cleaned accessible and safe for an engineer may lead to delays in servicing the equipment and could be subject to additional charges Please review the actions below and answer Yes or No Provide explanation for any No answers in box below Instrument has been cleaned of hazardous substances Please rinse tubing or piping wipe down scanner surfaces or otherwise ensure removal of any dangerous residue Ensure the area around the instrument is clean If radioactivity has been used please perform a wipe test or other suitable survey Adequate space and clearance is provided to allow safe access for instrument service repair or installation In some cases this may require customer to move equipment from normal operating location prior to GE arrival Consumables such as columns or gels have been removed or isolated from the instrument and from any area that may impede access to the instrument All buffer waste vessels are labeled Excess containers have been removed from the area to provide access Provide explanation for any No answers here Equipment type Product No Serial No hereby confirm that the equipment specified above has been cleaned to remove any hazardous substances and that the area has been made safe and accessible Name
99. knen las sen Reinigen der Membranadapter Die Membranadapter mit einem fussel freien Tuch reinigen und im Lagerungs bereich des Antik rperfachs platzieren 198 Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE Wartungsarbeit Nach jedem Programmlauf in der Western Gerdteeinheit 6 Wartung 6 1 Wartungsprogramm Anweisungen Reinigen des Stromungswegs fur Transfer Wenn der Transferstromungsweg nach einem erfolgten Transfer nicht gereinigt wurde f hren Sie den Reinigungsvor gang durch indem Sie auf Con trol Clean Transfer flow path in der Men leiste klicken Reinigen des Stromungswegs fur Son dierung Wenn der Sondierungsstromungsweg nach einer erfolgten Sondierung nicht gereinigt wurde f hren Sie den Reini gungsvorgang durch indem Sie auf Control Clean Probing flow path in der Men leiste klicken Reinigen des Transferhalters Siehe Reinigen des Transferhalters auf Seite 172 Reinigen der Trocknungshalter Reinigen Sie die Trocknungshalter mit einem fusselfreien Tuch und legen Sie sie in das Trocknungsfach Entfernen aller Partikel im Transferbe h lter Den Beh lter berpr fen und alle R ckst nde von Gel oder Papierfasern mit einer Pinzette entfernen Den Transferbeh lterfilter berpr fen und austauschen falls er verschmutzt ist siehe Austauschen des Transferbe h lterfilters auf Seite 215 Reinigen des oberen Teils des Transfer beh lters A
100. lauch in die ffnung des Schlauchhalters stecken 2 Das offene Schlauchende weiter in den Schlitz am Schlauchhalter stecken Anmerkung Sicherstellen dass die Schlauchbeschriftungen noch am Schlauch angebracht sind Die Beschriftung muss nicht innerhalb des Schlauchhalters liegen Anbringen der Einlassfilter an den Schl uchen Setzen Sie den Schlauch in die Filterhalterung mit Einlassfilter und drehen Sie den Filter um den Schlauch festzuziehen 106 Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 4 Installation 4 2 Hardwareinstallation Positionieren des Ablauf und Uberlaufschlauchs VORSICHT Der Ablauf und Uberlaufschlauch muss ordnungsgem befestigt werden um das Risiko zu vermeiden dass der Schlauch aus dem Abfallbeh lter herausf llt Den Ablauf und berlaufschlauch so platzieren dass die Ausl sse niedriger als der Ar beitstisch liegen auf der das Amersham WB analyzer aufgestellt ist Den Schlauch auf eine passende L nge zuschneiden und befestigen um das Risiko zu vermeiden dass der Schlauch aus dem Abfallbeh lter herausf llt Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 107 4 Installation 4 2 Hardwareinstallation Einbauen der Membrantrocknerf hrungen im Trocknerfach Schritt MaBnahme 1 Den Kunststoffbeutel mit den zwei Membrantrocknerf hrungen ffnen E en ro f a m i i j fi F H j N j i
101. llation 4 3 Softwareinstallation Schritt MaBnahme 6 e Zum berpr fen oder ndern der Installationseinstellungen auf Back Zur ck klicken e Zum Starten der Installation auf Install Installieren klicken The wizard is ready to begin installation Click Install to begin the installation If you want to review or change any of your installation settings dick Back Click Cancel to exit the wizard InstallShield f The InstallShield Wizard has successfully installed Amersham WB software Click Finish to exit the wizard lt Back C Fn Cancel 114 Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 4 Installation 4 3 Softwareinstallation berpr fen der Geratekommunikation Schritt Ma nahme 1 Den Computer die Eloho amp scan Ger teeinheit und die Western Ger teeinheit einschalten 2 Die Amersham WB software starten Ergebnis Die Software zeigt die hergestellten Kommunikationsverbindungen mit den Ger teeinheiten an Wenn die Kommunikation nicht hergestellt ist e Es k nnen falsche Kabel oder Netzkabelverbindungen vorliegen Die gesamte Hardwareinstallation berpr fen e Die USB Treiberroutine kann falsch sein Den USB Anschluss am Compu ter wechseln Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 115 5 Durchf hren eines Experiments 5 Durchf hren eines Experiments Zu diesem Kapitel Dieser Abschnitt liefert einen berblick ber die zwei Haupttyp
102. llation 111 93 Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 4 Installation 4 1 Standortvorbereitung 4 1 Standortvorbereitung Warum muss der Standort prdpariert werden Vor der Installation des Amersham WB system muss der Laborstandort geplant und vorbereitet werden Die Leistungsspezifikationen des Systems k nnen nur erf llt werden wenn die Laborumgebung die Anforderungen erf llt die in diesem Abschnitt aufgef hrt sind Stets alle rtlichen Sicherheitsvorschriften befolgen Platzbedarf ACHTUNG Das Amersham WB analyzer in einem Raum mit Absauganlage aufstellen wenn Methanol oder andere Chemikalien verwendet werden f r die eine Entl ftung erforderlich ist Die Ger teeinheiten d rfen keiner direkten Sonneneinstrahlung ausgesetzt werden Staub in der Atmosph re sollte auf einem Minimum gehalten werden Inder nachstehenden Tabelle sind Grenzwerte f r Temperatur und Luftfeuchtigkeitsbe reiche angegeben Parameter Zul ssiger Bereich Umgebungstemperatur Betrieb 15 C bis 32 C Fur optimale Leistung 16 C bis 28 C Umgebungstemperatur Lagerung und 25 C bis 60 C Transport Relative Luftfeuchtigkeit Betrieb 20 bis 80 nicht kondensierend Fur optimale Leistung 20 bis 70 nicht kondensierend H he ber dem Meeresspiegel Maximal 2 000 m Umgebung Nur in Geb uden 94 Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 4 Installation 4 1 S
103. ls Nach der Elektrophorese oder nach dem Transfer wenn das Transfer Sandwich ge ffnet und die PVDF Karte in das Sondierungs fach gelegt wurde entsorgen Sie das Gel auf sichere Weise Lesen Sie Sicherheitsdatenbl tter SDS MSDS der Gelkarte in Bezug auf Sicherheitshinweise in Bezug auf das Gel und die Entsorgung des VORSICHT Programmlaufs nicht ber hren Quetschgefahr Die bewegte Sondierungskammer w hrend eines Vor der Sondierung Sicherstellen dass Puffer Reinstwasser Antik rper Blockierungs und Waschl sungen vor dem Starten der Sondierung angeschlossen sind Anmerkung Reinstwasser muss stets angeschlossen sein da es zum Sp len zwi schen den Sondierungsschritten verwendet wird Waschl sung wird zum Sp len zwischen prim ren Antik rpern zur Positionierung verwen det A und B 178 Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 5 Durchf hren eines Experiments 5 8 Durchf hren von Sondierung und Trocknung 5 8 2 Ausf hren der Sondierung Vorfullen der Sondierungskammer und Laden der PVDF Karten Schritt Abbildung des Schritts Aktion des Bedieners Die Sondierungskammer vorf llen amp f e Inder Software auf den Ar beitsschritt PROBING amp DRY PROBING ING Sondierung und Trock amp DRYING nung klicken e Im Bereich Probing Sondie rung auf Pre Fill Vorf llen Probing klicken Pre Fill Ready for Probing pre fill Ergebnis Die Sondierungskam a
104. ls dr cken Sie die Gel Karte weiterhin mit den Fingern auf den Labortisch Die Ecken des oberen Gelrahmens ergreifen und den Gelrahmen so weit wie durch die gepunktete Li nie angezeigt l sen Sicherstellen dass der Gelrahmen vollst ndig aus dem wei en Gum mistecker durch den oberen orangefarbenen Pfeil angezeigt gel st wurde Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 161 5 Durchf hren eines Experiments 5 7 Durchf hren des Transfers 5 7 2 Vorbereiten des Transfer Sandwich Schritt Abbildung des Schritts Aktion des Bedieners Den Gelrahmen vorsichtig weiter in Richtung des unteren Endes von den Seiten der Gelkarte l sen bis der Gelrahmen vollst ndig gel st wurde Anmerkung Beim L sen des Gels dr cken Sie die Gel Karte weiterhin mit den Fingern auf den Labortisch Anmerkung Darauf achten das Gel nicht zu ber hren Die Gelrahmengriffe ergreifen und das Gel vorsichtig aus dem Rah mentrdger heben 162 Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE Schritt Abbildung des Schritts Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 5 Durchf hren eines Experiments 5 7 Durchf hren des Transfers 5 7 2 Vorbereiten des Transfer Sandwich Aktion des Bedieners Den Gelrahmen auf das Transfer papier legen Hierzu die Fuhrungs l cher am Gelrahmen an den F hrungsstiften ausrichten und das Gel auf dem Transferpapier abrollen
105. m WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 2 Sicherheitsanweisungen 2 2 Schilder Beschriftung Beschreibung national anerkannten Testlabor NTRL zertifiziert wurde Ein NRTL ist eine Einrichtung die von der US amerikanischen Beh rde f r Intertek Unfallverh tung und Gesundheitsschutz am Arbeitsplatz Occupa tional Safety and Health Administration OSHA anerkannt ist da sie die gesetzlichen Vorschriften in den USA Titel 29 der Bundesge setzsammlung Code of Federal Regulations 29 CFR Teil 1910 7 erf llt Dieses Symbol zeigt an dass das Amersham WB system von einem c el us Symbole bez glich gef hrlicher Substanzen auf Schildern der Ger teeinheiten Die folgenden Symbole auf den Schildern beziehen sich auf Gefahrenstoffe Beschriftung Beschreibung Dieses Symbol kennzeichnet Elektro und Elektronikaltger te die nicht mit dem unsortierten Haus oder Sperrm ll entsorgt werden d rfen sondern getrennt zu sammeln sind Nehmen Sie Kontakt mit einem autorisierten Vertreter des Herstellers auf um Informa tionen hinsichtlich der Entsorgung des Ger ts zu erhalten Dieses Symbol zeigt an dass das Produkt gef hrliche Materialien enth lt welche die Grenzen bersteigen die in dem chinesischen Standard SJ 11363 2006 Anforderungen zu Konzentrationsbegren zungen f r bestimmte gef hrliche Substanzen in elektronischen Ger ten gefordert sind Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 31
106. mA Tipp GelB Gel A W hrend der Elektrophorese bleibt sich die M glichkeit die Puffer und L sungen f r die Western Schritte zuzuberei 0 4 4 4 0 0 2 04 06 08 1 ten Informationen siehe Ab Time Minutes schnitt 5 7 1 Zubereiten und Anschlie en der Transferl sungen auf Seite 149 und Ab schnitt 5 8 1 Zubereiten und Anschlie en der Sondierungs und Antik rperl sungen auf Seite 174 144 Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 5 Durchf hren eines Experiments 5 6 Durchf hren der Proteinelektrophorese 5 6 2 Ausf hren der Elektrophorese Schritt Abbildung des Schritts Aktion des Bedieners Wenn die Option Pause for sample well cleanup after 5 Pause for sample well clean up minutes Pause zur Reini 1 Open the elpho amp scan loader gung des Probenbetts nach 2 Apply the Paper comb in the sample wells for 5 seconds 5 Minuten ausgew hlt wur de dienachstehenden Anwei sungen befolgen 3 Close the elpho amp scan loader Press the button below to continue the electrophoresis run Continue run 1 Den Lader ffnen 2 Den Papierkamm in die Probenbetten setzen und f r etwa 5 Sekunden dort belassen 3 Den Lader schlie en und den Programmlauf fort setzen Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 145 5 Durchf hren eines Experiments 5 6 Durchf hren der Proteinelektrophorese 5 6 3 Verfahren nach Elektrophorese und
107. materialien uneseeennsennsennsennneenneeneenneennnennennennn 65 3 6 Zubeh rteile und Verbrauchsmaterialien f r die Elektrophorese sssr 67 361 Amersham WB molecular weight markers u 68 362 Amer non WB GE Ce ee ee 71 3 6 3 Amersham WB buffer strip und Amersham WB buffer strip holder 74 3 6 4 Amersham WE DORF Dennerle 76 3 7 Zubeh rteile und Verbrauchsmaterialien f r Western Blot Schritte oo 77 3 7 1 Zubeh rteile und Verbrauchsmaterialien f r den Transfer ss 78 372 Sekund re Antik rper Sondierung unsssenneenneennseennseennsennnennnennnnennnnennnennnnennnnnnn 83 3 7 3 Trocknungshalter PVDF Kartentrocknung eeeaneensneennneenneunnnennnnnnnnennnnennnnnnnnennnennnnnennnnnnnnn 85 3 7 4 Membranadapter PVDF Kartenscan ccccsecsssssssssessssssseessssssessssecsssecssecssssessesessecsssecssecsssess 86 32 Son Ude ZUBE ae ee ee ee 87 3 9 berblick ber die Software ussneeneumnsseeennnnnneesennnnseennennunnnennnnnnnnnn 89 A Meala i nennen nee 93 dl Naa POV ICUN ee ee 94 4 2 Hardwareinstallation nee een 97 A STOUR Us CN UO a KEN NEINSENENTEIEEN TEN cease N 111 5 Durchf hren eines Experiments 22000200000002000000000020000000800000000000 000200000000 116 L 6 1 a E 118 5 2 Die Amersham WB analyzer starten cceccecsssesssssssessssssssssssesssecsscssessseesssssssesssssssecssecsseceseesseessess 122 5 3 Einrichten eines Experiments in der Software asassssnsensesnseenseensee
108. mersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE Den oberen Teil des Transferbeh lters miteinem feuchten Taschentuch abwi schen 199 6 Wartung 6 1 Wartungsprogramm intervall Wartungsarbeit Anweisungen W chentlich oder wenn das Ger t f r einige Tage nicht verwendet wird Intervall J hrlich Unterhaltsreinigen des Str mungswegs f r Transfer Siehe Abschnitt 6 2 1 W chentliche Rei nigung der Str mungswege f r Transfer und Sondierung auf Seite 203 Unterhaltsreinigen des Str mungswegs f r Sondierung Siehe Abschnitt 6 2 1 W chentliche Rei nigung der Str mungswege f r Transfer und Sondierung auf Seite 203 Die folgenden Komponenten berpr fen und gegebenenfalls austauschen e Pumpen e Schlauch e Luftfiler e Einlassfilter berpr fen und Festziehen der Schlauchanschl sse Wartungsarbeit Informationen zum Austausch von Pumpenk pfen Luftfilter und Einlassfil ter finden Sie unter Abschnitt 6 2 2 Aus tauschverfahren auf Seite 207 Den Kundendienst verst ndigen wenn Schl uche ausgetauscht werden m s sen Anweisungen 200 Ersetzen des Luftfilters im Trocknermo dul Der Luftfilter muss u U h ufiger ausge tauscht werden wenn die u ere Um gebung in Hinblick auf den Staubgehalt in der Luft unfreundlicher ist als norma le Laborumgebungen Siehe Austauschen des Luftfilters auf Seite 208 Austauschen des Transferoumpenko
109. n 5 Das Sicherungsfach mit dem Schraubendreher ffnen 6 Die Sicherungen austauschen Daten zu den Sicherungen befinden sich auf den Schildern auf der R ckseite der Ger teeinheiten 7 Die Sicherungslade in die ffnung am Anschlussfeld stecken Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 6 Wartung 6 2 Anweisungen zur Wartung 6 2 3 Umstellen der Ger teeinheiten 6 2 3 Umstellen der Ger teeinheiten VorsichtsmaBnahmen VORSICHT Personliche Schutzausrustung PSA Wenn das System verpackt ausgepackt transportiert bzw umgestellt werden soll muss die folgende Schutzausr stung getragen werden e Sicherheitsschuhwerk vorzugsweise mit Stahlauskleidung e Arbeitshandschuhe die Schutz gegen scharfe Kanten bieten e Schutzbrille VORSICHT Schweres Objekt Zum sicheren Anheben der Ger teeinheiten sind zwei Personen erforderlich VORSICHT Die Western Ger teeinheit niemals bewegen wenn Flaschen auf dem Ger t stehen HINWEIS Kabel ziehen Vor dem Bewegen einer Ger teeinheit stets Kabel ziehen um eine Besch digung des Ger ts zu vermeiden Anweisung zum Anheben Schritt Ma nahme 1 Alle Kabel von den Gerdteeinheiten abziehen und alle Flaschen auf den Ge rdteeinheiten entfernen 2 Hierzu sind zwei Personen erforderlich Eine Ger teeinheit zum Anheben mit jeweils einer Hand auf einer Seite aufnehmen und anheben Amersham WB system Bedienungsanlei
110. n 35 Entsorgung elektrischer Kompo nenten 35 Experiment Eingeben von Antik rperin formationen 127 Eingeben von Probeninfor mationen 126 Elektrophorese Experimen te 118 Erstellen 125 Western Experimente 118 F Formular mit Erkl rung zum Arbeits und Gesundheits schutz 228 229 G Gelkarte Aufl sung der Proteintren nung 71 Ausw hlen des Typs 125 Entfernen der Schutzfilme vor der Elektrophorese 138 L sen des Gelrahmens aus dem Geltr ger 160 Platzieren auf der Karten platte 139 Typen 71 berblick ber die Zerle gung 159 Zusammensetzung 71 Ger t Anschlie en am Compu ter 103 Anschlie en der Ger teein heiten 103 Anschlie en der Netzka bel 104 Eloho amp scan Ger teein heit 40 Elpho amp scan Lader 42 berpr fen der Ger tever bindung 115 Western Ger teeinheit 45 H Herstellerinformationen 10 Indikatoren 39 Installation Computeranforderun gen 96 Platzbedarf 95 Raumanforderungen 94 Softwareinstallation 111 Internationale Normen 11 L Laden der Proben 141 L sungen Anschlie en der Antik rper l sungen 176 Anschlie en der Sondie rungsl sungen 175 Anschlie en der Transferl sungen 150 Antik rper 174 Blockierung 174 Sondierung 174 Transfer 149 Luftfilter Austauschen des Luftfil ters 208 M Matrixmarkierungsleser Beschreibung 87 Einbauen des Matrixmarkie rungslesers 110 Membranadapter Beschreibung 86 Platzie
111. n Amersham WB membrane adapter auf der Kartenplatte platziert werden weitere Informationen siehe Abschnitt 5 9 Scannen der Membran und Anzeigen der Ergebnisse auf Seite 189 Durch Bet tigung der Auswurftaste auf der Vorderseite wird der Lader aus der Elpho amp scan Ger teeinheit ausgeworfen 42 Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 3 Systembeschreibung 3 2 Elpho amp scan Ger teeinheit Abbildung des Elpho amp scan Lademoduls Die nachstehende Abbildung zeigt die Eloho amp scan Ger teeinheit mit ausgeworfenem Lader bei der die Dichtungsdeckel der linken Kartenplatte ge ffnet sind 1 2 4 pe f 5 Beschreibung Verschluss Zum ffnen des Dichtungsdeckels Dichtungsdeckel Anzeige von Position A und Position B Aush hlungen F r Pufferstreifenhalter mit elektrischen Anschl ssen f r die Pufferelektro den 5 F hrungsstifte Zur richtigen Platzierung von Gelkarten oder Membranadaptern einschlie lich PVDF Karten 6 Kartenplatte Zur K hlung von Gelkarten und zur flachen Fixierung von Karten w hrend des Scans Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 43 3 Systembeschreibung 3 2 Elpho amp scan Ger teeinheit Teil Beschreibung Schutzglas 44 Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 3 Systembeschreibung 3 3 Western Ger teeinheit 3 3 Western Ger teeinheit Einf hrung Die Western
112. n sicheren Betrieb bzw gefahrlose Wartung und Entsorgung des Ger ts befol gen VORSICHT Wenn das Prelabeling von Proteinen in Proben durchgef hrt wurde kann sich durch Spuren von Dimethylsulfid DMS und Dimethylsul foxid DMSO ein stechender Geruch entwickeln Eine rtliche Ab sauganlage kann erforderlich sein rtliche Bestimmungen und Anweisungen f r den sicheren Betrieb befolgen Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 2 Sicherheitsanweisungen 2 1 Sicherheitsvorkehrungen VORSICHT W hrend des Betriebs und der Wartung des Amersham WB analyzer stets Handschuhe Schutzkleidung und eine Schutzbrille tragen VORSICHT Pers nliche Schutzausr stung PSA Wenn das System verpackt ausgepackt transportiert bzw umgestellt werden soll muss die folgende Schutzausr stung getragen werden e Sicherheitsschuhwerk vorzugsweise mit Stahlauskleidung e Arbeitshandschuhe die Schutz gegen scharfe Kanten bieten e Schutzbrille Installieren und Verstellen ACHTUNG Das Amersham WB analyzer in einem Raum mit Absauganlage aufstellen wenn Methanol oder andere Chemikalien verwendet werden f r die eine Entl ftung erforderlich ist ACHTUNG Versorgungsspannung Vor dem Anschlie en des Netzkabels si cherstellen dass die Versorgungsspannung an der Wandsteckdose der Kennzeichnung am Ger t entspricht ACHTUNG Sicherstellen dass das System auf einem st
113. nd Anwendungshinweise Datendateien und Anwendungshinweise k nnen von www gelifesciences com herunter geladen oder bestellt werden 16 Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 2 Sicherheitsanweisungen 2 Sicherheitsanweisungen Zu diesem Kapitel In diesem Kapitel werden die Sicherheitsvorkehrungen und die Verfahren zur Notaus schaltung f r das Amersham WB systembeschrieben Au erdem werden die Schilder an den Gerdten beschrieben und Informationen zum Recycling geliefert In diesem Kapitel Dieses Kapitel enth lt die folgenden Abschnitte Abschnitt Siehe Seite 2 1 Sicherheitsvorkehrungen 18 2 2 Schilder 27 2 3 Vorgehensweise in Notf llen 33 2 4 Informationen zum Recycling 35 Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 17 2 Sicherheitsanweisungen 2 1 Sicherheitsvorkehrungen 2 1 Sicherheitsvorkehrungen Einfuhrung Das Amersham WB analyzer wird mit Netzstrom gespeist und arbeitet mit Fl ssigkeiten die gef hrlich sein k nnen Vor Installation Bedienung oder Wartung der Ger teeinheiten m ssen Sie sich der in dieser Bedienungsanleitung beschriebenen Gefahren bewusst sein W hrend der sicheren Bedienung und Wartung des Systems und der sicheren Handha bung von Chemikalien stets rtliche Bestimmungen und Anweisungen befolgen Die gegebenen Anweisungen befolgen um Verletzungen oder Ger tesch den zu vermeiden Die Sicherheitsvorkehrungen in diesem Abschnitt werden in folgende K
114. nde Abbildung zeigt ein detailliertes Flussdiagramm f r den Transfervor gang Das Flussdiagramm zeigt die gegenseitigen Verbindungen zwischen Ger tekom ponenten Die wei en Beschriftungen beziehen sich auf Schlauchbeschriftungen Die blauen Zahlen beziehen sich auf Ger tekomponenten 5 T WASTE T BUFFER T WATER Die nachstehende Tabelle erl utert die Komponenten im Flussdiagramm Beschreibung 1 Transferventilblock Zur Auswahl der L sung die durch den Fl ssigkeitsweg gepumpt werden soll 56 Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 3 Systembeschreibung 3 3 Western Ger teeinheit 3 3 3 Fl ssigkeitswege Beschreibung Transferbeh lter Transferpumpe Zum Pumpen der L sung durch den Fl ssigkeitsweg Transferk hlaggregat Zum Abk hlen des Transferpuffers zur Stabilisierung auf Raumtemperatur Transferbeh lter berlauf Grundprinzip des Transfervorgangs Bei dem Transfer wird ein elektrophoretischer Transfer der getrennten Proteine im Gel auf die Membran durchgef hrt Das Grundprinzip des Transfervorgangs wird nachstehend erl utert Stufe Beschreibung 1 Nachdem der Amersham WB transfer holder s Transferhalter in den Transferbeh lter geladen wurde wird der Transferbeh lter mit Transferpuffer bef llt der Schlauch mit der Kennzeichnung T Buffer 2 Im Transferschritt wird der Transferpuffer durch den Transferbeh lter das Transferk hlaggregat die Transfer
115. nfuhrung Amersham WB system Dokumentation Dieser Abschnitt beschreibt die Benutzerdokumentation und die zugeh rigen Unterlagen f r das Amersham WB system Benutzerdokumentation Die nachstehende Tabelle f hrt die Benutzerdokumentation auf die im Lieferumfang des Amersham WB system enthalten ist Dokument Wesentlicher Inhalt Verf gbarkeit Amersham WB analyzer Anweisung zum Entpacken Diese Anweisung erl utert das Auspa cken des Amersham WB analyzer Im Amersham WB analyzer Versandkarton Amersham WB system Bedienungsanleitung Dieses Handbuch enth lt die Informa tionen die f r die folgenden Schritte erforderlich sind e Sichere Installation Handhabung und Wartung des Amersham WB system e Sichere Durchf hrung eines typi schen Experiments Es enth lt au erdem Sicherheitsinfor mationen und gesetzliche Vorschriften eine Beschreibung des Systems sowie Referenzinformationen Die englische Version im Druckformat wirdzusammen mit dem System geliefert bersetzte Versionen sind als PDF Dateien auf der Benut zerdokumentations CD ent halten 14 Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 1 Einf hrung 1 4 Amersham WB system Dokumentation Dokument Wesentlicher Inhalt Verf gbarkeit Amersham WB system User Dieses Handbuch enth lt die Informa Als HTML Handbuch im Hilfe Manual tionen die f r die folgenden Schritte Men von Amersham WB erforderlich
116. ng 5 8 Durchf hren von Sondierung und Trocknung Einf hrung In diesem Abschnitt wird die Durchf hrung der Sondierung und der Trocknung beschrie ben In diesem Abschnitt Dieser Abschnitt enth lt die folgenden Unterabschnitte Abschnitt Siehe Seite 5 8 1 Zubereiten und Anschlie en der Sondierungs und Antik rperl 174 sungen 5 8 2 Ausf hren der Sondierung 178 5 8 3 Verfahren nach der Sondierung 183 5 8 4 Ausf hren der Trocknung 187 Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 173 5 Durchf hren eines Experiments 5 8 Durchf hren von Sondierung und Trocknung 5 8 1 Zubereiten und Anschlie en der Sondierungs und Antik rperl sungen 5 8 1 Zubereiten und Anschlie en der Sondierungs und Anti k rperl sungen Einf hrung In diesem Abschnitt wird beschrieben wie Puffer und L sungen f r den Sondierungslauf zubereitet und angeschlossen werden Sondierungs und Antik rperl sungen k nnen w hrend des Transferlaufs zubereitet werden und m ssen vor dem Start des Sondierungslaufs angeschlossen sein Rezepturen f r Sondierungs und Antik rperl sungen Rezeptur Menge Lauf Blockierungsl sung Das System ist mit den meisten Blockierungsl sungen kompatibel z B 2 ECL PRIME Agens in PBS T 0 1 Tween 20 in 1xPBS oder 5 bovines Serumalbu min in PBS Blockierungsl sungen mit geringer Autofluoreszenz verwenden Empfehlungen siehe das Handbuch Western Blotting Principles and Method
117. nie 10 Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 1 Einf hrung 1 3 Beh rdliche Vorschriften CE Kennzeichnung Die CE Kennzeichnung und die entsprechende EU Konformit tserkl rung sind f r das Ger t g ltig wenn e als eigenst ndiges Ger t verwendet wird oder e anandere Produkte angeschlossen ist die in der Benutzerdokumentation empfohlen oder beschrieben sind und e im selben Zustand verwendet wird indem es von GE ausgeliefert wurde mit Ausnah me der in der Benutzerdokumentation beschriebenen Modifikationen Internationale Normen In der nachstehenden Tabelle sind die Normen angef hrt die von diesem Produkt erf llt werden Beschreibung Hinweise EN IEC 61010 1 UL Sicherheitsanforderungen fur elektri Die EN Norm 61010 1 CAN CSA C22 2 sche Mess Steuer und Laborgerd stimmt mit der Nr 1010 1 te EU Richtlinie 2006 95 EC berein EN IEC61326 1 Elektrische Mess Steuer und Labor Die EN Norm Emissionen entsprechend ger te EMV Anforderungen stimmt mit der CISPR 11 Gruppe 1 Klasse EU Richtlinie A 2004 108 EC berein EN ISO 12100 Sicherheit von Maschinen Allgemei Die EN ISO ne Gestaltungsleitsdtze Risikobeur Norm stimmt teilung und Risikoreduzierung mit der EU Richtlinie 2006 42 EG berein EN IEC 60825 1 Sicherheit von Laserprodukten Die EN Norm stimmt mit der EU Richtlinie 2006 95 EC berein Amersham WB system Bedien
118. nleitung 29 0214 77 AE 3 Systembeschreibung 3 7 Zubeh rteile und Verbrauchsmaterialien f r Western Blot Schritte 3 7 1 Zubeh rteile und Verbrauchsmaterialien f r den Transfer Beschreibung F hrungsl cher Anmerkung Die F hrungsl cher unterst tzen die richtige Platzierung der Karte im Transferhalter die Sondierungskammer den Trocknungshalter und das Elpho amp scan Lademodul Schreibfl che f r eigenen Vermerk Anmerkung Beim Verfassen des Vermerks stets einen Bleistift verwenden Der Vermerk kann auch in der Software eingegeben werden Kartengriffe Blotting Bereich PDVF Karten Einzelpackung PDVF Karte mit Schutzpapieren Kennzeichnung mit Produktcode Chargennummer Kennnummer und Datenmatrix Tag enth lt Produktcode Chargennummer und Kennnummer Amersham WB transfer paper Die Transferpapierst cke werden bei der Vorbereitung des Transfer Sandwiches verwen det Die nachstehende Abbildung zeigt ein Transferpapier Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 81 3 Systembeschreibung 3 7 Zubeh rteile und Verbrauchsmaterialien f r Western Blot Schritte 3 7 1 Zubeh rteile und Verbrauchsmaterialien f r den Transfer Amersham WB sponge Bei der Vorbereitung des Transfer Sandwiches werden zwei Schw mme verwendet Die Schw mme m ssen nach jedem Programmlauf ersetzt werden werden Die nachstehende Abbildung zeigt einen Schwamm 82 Amersham WB system Be
119. nnnnnnnennnennennnennnennnnnnnnn 124 5 4 Durchf hren des Prelabelings von Proben uuseeeeneeneeennnenneenennneeneennennne 128 5 5 Vorbereiten Amersham WB molecular weight markers uaneee 132 Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 3 Inhaltsverzeichnis 5 6 Durchf hren der Proteinelektrophorese ou ecceccsescssssssssssessseesssssssesssecssecssecsseessecsssssessseesseessees 134 5 6 1 Vor der Elektrophorese uusseeennseenneennnennneennneennnennnnennnennnennnnennnnennnnennnennnnnnnennnnnennnen 135 5 62 Aust hren der Elektrophorese an are een 142 5 6 3 Verfahren nach Elektrophorese und Gelkarten Scan u 146 57 Durenft nrendes 8 gc 6 see ee ee 148 5 7 1 Zubereiten und Anschlie en der Transferl sungen s s 149 5 2 Vorbereiten des Transter Sandwich nennen 151 573 Ausf hren des Transfers voecessessssessssssscsssesssssscsssccsssccsssscsessessssscssuscssssecsssecssssccasecssseccssseessseecessecen 166 5 7 4 Verlahren NOCH GER TIONSIE een 170 5 8 Durchf hren von Sondierung und Trocknung ccessacses cscsvacsstasecdioccnscbsceegveesecs couwewscosnbecaubeans 173 5 8 1 Zubereiten und Anschlie en der Sondierungs und Antik rperl sungen 174 5 8 2 Ausf hren der Sondier UNG use nein 178 583 VERS gma leree der OO ee ee 183 5 8 4 Ausf hren der Trocknung asseenssennseennneenseennnennnennnnennnnennnennnnennnennnnennnnennnnnnnennnsnnnnennnn 187 5 9 Scannen der Membran und Anzeigen der Erg
120. oden ausgetauscht werden Schritt Ma nahme 1 Den Transferbeh lterdeckel ffnen Auf jeder Seite befindet sich jeweils eine Elektrode 214 Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 6 Wartung 6 2 Anweisungen zur Wartung 6 2 2 Austauschverfahren Schritt Ma nahme 3 Die neue Elektrode einsetzen und herunterdr cken 4 Das Verfahren in gleicher Weise mit der Elektrode auf der anderen Seite wiederholen 5 Den Transferbeh lterdeckel schlie en Austauschen des Transferbehalterfilters Anmerkung Wenn der Transferfilter verschmutzt ist kann er nicht entfernt gereinigt und wieder eingesetzt werden Der Filter muss ausgetauscht werden Die nachstehende Anweisung beschreibt wie der Transferbeh lterfilter ausgetauscht wird Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 215 6 Wartung 6 2 Anweisungen zur Wartung 6 2 2 Austauschverfahren Schritt Ma nahme 1 Den Deckel des Transferbeh lters ffnen Der Filter befindet sich im Boden des Transferbeh lters 2 Die Mitte des Filters mit einer Pinzette durchstechen Anmerkung Den Filter nicht durch Griff an den Seiten entfernen da dies die Filterdichtung besch digen k nnte 5 Die Offnung zum Zugreifen nutzen und den Filter entfernen 4 Den neuen Filter auf die Filterdichtung setzen und leicht auf den Filter drucken Austauschen der Einlassfilter Den Einlassfilter gegebenenfalls austauschen z B wenn die Filter verstopfen
121. ophorese und Gelkarten Scan Verfahren nach Elektrophorese und Gelkarten Scan In diesem Abschnitt Dieser Abschnitt enth lt die folgenden Unterabschnitte Abschnitt Siehe Seite 5 6 1 Vor der Elektrophorese 135 5 6 2 Ausf hren der Elektrophorese 142 5 6 3 Verfahren nach Elektrophorese und Gelkarten Scan 146 134 Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 5 Durchf hren eines Experiments 5 6 Durchf hren der Proteinelektrophorese 5 6 1 Vor der Elektrophorese 5 6 1 Vor der Elektrophorese Einf hrung Dieser Abschnitt beschreibt wie Pufferstreifen Gelkarte vorbereitete Amersham WB molecular weight markers und Proben f r den Elektrophoreselauf geladen werden Vorbereitungen vor dem Start der Elektrophorese ACHTUNG Geplatztes Glas Das System nicht arbeiten lassen wenn das Glas im Dichtungsdeckel der Elpho amp scan Ger teeinheit verkratzt oder zerbrochen ist Das Ger t ausschalten das Stromkabel ziehen und einen autorisierten Servicetechniker verst ndigen VORSICHT Bewegliche Teile Beim ffnen Schlie en des Laders darauf achten dass Finger oder Kleidung nicht eingeklemmt werden wenn der Lader sich bewegt Flaschen oder Fl schchen niemals vor die Elpho amp scan Ger teein heit stellen Sie k nnten beim ffnen des Laders herunterfallen Schritt Abbildung des Schritts Aktion des Bedieners Die Pufferstreifen in den Puf eb ferstreifenhaltern platzieren Hier
122. orgen Unterhaltsreinigung des Str mungswegs f r Sondierung Das Verfahren dauert etwa 45 Minuten Transfer und Trocknung k nnen parallel ausge f hrt werden Anmerkung Es d rfen keine PVDF Karten in den Sondierungskammern zur ckge lassen werden 204 Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 6 Wartung 6 2 Anweisungen zur Wartung 6 2 1 W chentliche Reinigung der Str mungswege fur Transfer und Sondierung ACHTUNG Bei Verwendung von gef hrlichen Chemikalien Versch tten ver meiden und eine Schutzbrille und andere Personenschutzausr s tung tragen NaOH beispielsweise ist tzend und daher gesund heitssch dlich Schritt Ma nahme 1 In der Software das Men element Control Maintenance clean Probing flow path Steuerung Str mungsweg f r Sondierung unterhaltsreinigen ausw h len oder im Startbildschirm der Software auf die Schaltfl che Maintenance clean Probing Unterhaltsreinigen Sondierung klicken Ergebnis Das Dialogfeld Maintenance Clean Probing Flow Path Unterhalts reinigen des Str mungswegs f r Sondierung wird angezeigt r Maintenance Clean Probing Flow Path Maintenance cleaning of the probing flow path 1 Wipe all probing tubing with a wet tissue 2 Insert the probing Water tubing in at least 1000 ml water 3 Insert the Custom tubing in at least 450 ml cleaning solution 4 Insert the tubing for probing Block Wash and Final wash in an empty bottle 5 Make sure
123. otal time 2 31 h Auf Start klicken oo Ergebnis Die Sondierung wird ge Start Ready for Probing startet Der laufende Sondierungsschritt wird im Bereich Probing Sondie Probing gt rung angezeigt FR Ready at Remaining time a a 1636 2 27 I Probing steps Dur min Repeat 1 Block 10 1 2 Wash 1 Z 3 Primary antibody 60 1 4 Wash 1 4 3 Secondary antibody 30 1 6 Wash 1 4 7 Final wash 1 s Total time 2 31 h 182 Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 5 Durchf hren eines Experiments 5 8 Durchf hren von Sondierung und Trocknung 5 8 3 Verfahren nach der Sondierung 5 8 3 Verfahren nach der Sondierung Einf hrung In diesem Abschnitt wird beschrieben wie e legen Sie die PVDF Karte in den Trocknungshalter e legen Sie den Trocknungshalter in das Trocknungsfach und beginnen Sie mit dem Trocknen e der Str mungsweg f r Sondierung gereinigt wird Verlagern der PVDF Karte n zum Trocknungsfach Schritt Ma nahme 1 Entfernen Sie einen Amersham WB drying holder Trocknungshalter aus dem Trockenfach und ffnen Sie ihn 2 Erfassen Sie die PVDF Kartengriffe mit den Fingern oder verwenden Sie eine Pinzette mit einem flachen Ende und heben Sie die PVDF Karte aus der Sondierungskammer Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 183 5 Durchf hren eines Experiments 5 8 Durchf hren von Sondierung und Trocknung 5 8 3 Verfahren nach der Sondierung Schritt Ma nahme 3 Legen Sie d
124. p fes Siehe Austauschen des Sondierungs oder Transferpumpenkopfes auf Sei te210 Austauschen des Sondierungspumpen kopfes Siehe Austauschen des Sondierungs oder Transferpumpenkopfes auf Sei te210 Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE intervall Nach Bedarf Wartungsarbeit 6 Wartung 6 1 Wartungsprogramm Anweisungen Reinigen des Trocknungsfachs Das Trocknungsfach mit einem fussel freien Tuch das mit Reinstwasser ange feuchtet ist von jeglichem Staub oder Partikeln befreien Das Fach vor dem Gebrauch trocknen lassen Austauschen der Transferelektroden Siehe Austauschen der Transferelektro den auf Seite 214 Austauschen der Pufferstreifenhalter Bestellinformationen finden Sie im Amersham WB system User Manual Austauschen der Netzsicherung Siehe Austauschen der Netzsicherung auf Seite 217 Austauschen eines besch digten Netz kabels Austauschen des Filters im Transferbe h lter Siehe VorsichtsmaBnahmen am Anfang dieses Kapitels Den Filter berpr fen und bei Ver schmutzung oder Besch digung erset zen Siehe Austauschen des Transferbeh lter filters auf Seite 215 Austauschen der Einlassfilter Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE Siehe Austauschen der Einlassfilter auf Seite 216 201 6 Wartung 6 2 Anweisungen zur Wartung 6 2 Anweisungen zur Wartung Einf hrung Dieser Abschnitt beschre
125. pumpe und den Transferventilblock ge pumpt sodass er w hrend des Programmlaufs zirkuliert Das Transferk hlaggregat gew hrleistet dass der Transferpuffer w hrend des Programmlaufs auf Raumtemperatur gehalten wird 3 Nach einem Programmlauf und nach dem Entfernen der Transferhalter wird der Fl ssigkeitsweg mit Reinstwasser gereinigt der Schlauch mit der Kenn zeichnung T Water wird zur Reinigung verwendet Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 57 3 Systembeschreibung 3 3 Western Ger teeinheit 3 3 3 Fl ssigkeitswege Abbildung des Fl ssigkeitswegs f r Sondierung 58 Die nachstehende Abbildung zeigt ein detailliertes Flussdiagramm f r den Sondierungs vorgang Das Flussdiagramm zeigt die gegenseitigen Verbindungen zwischen Ger te komponenten Die wei en Beschriftungen beziehen sich auf Schlauchbeschriftungen Die blauen Zahlen beziehen sich auf Ger tekomponenten P WASTE P CUSTOM P WASTE u P WATER P WASH Wise P BLOCK Beschreibung 1 Antik rperfach mit R hrchen fur Antik rperl sung die prim re und sekun d re Antik rper f r die Positionen A und B enth lt 2 Sondierungsventilblock Zur Auswahl der L sung die durch den Fl ssigkeitsweg gepumpt werden soll 3 Sondierungspumpe Zum Pumpen der L sung durch den Fl ssigkeitsweg Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 3 Systembeschreibung 3 3 Western Ger teeinheit 3 3 3 Fl ssigkeitswege Besc
126. r Licht gesch tzt auf Amersham WB transfer paper Raumtemperatur Die Transferpapierst cke tro cken in dem Karton lagern in dem sie geliefert wurden Vor Staub sch tzen Amersham WB paper comb Raumtemperatur Die Papierk mme trocken in dem Karton lagern in dem sie geliefert wurden Vor Staub sch tzen Amersham WB sponge Raumtemperatur Vor Staub und direkter Sonnen einstrahlung sch tzen Amersham WB goat anti mou se Cy3 Cy5 oder Amersham WB anti rabbit Cy3 Cy5 lyophi lisiert 2 C bis 8 C Sekund re Antik rper vor Lichteinstrahlung sch tzen Rekonstituierte sekund re Anti k rper rekonstituiert in Reinst wasser auf eine Konzentration von 1 ug ul Bewahren Sie die Aliquoten bei 15 C bis 30 C auf Rekonstituierte sekund re Anti k rper vor Lichteinstrahlung sch tzen Die Aliquoten sollten nicht l n ger als 6 Monate gelagert wer den Vermeiden Sie wiederhol tes Einfrieren und Auftauen Prim re Antik rper 64 Siehe Anweisungen des Herstel lers Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE Siehe Anweisungen des Herstel lers 3 Systembeschreibung 3 5 Prelabeling Verbrauchsmaterialien 3 5 Prelabeling Verbrauchsmaterialien Einf hrung Die Prelabeling Verbrauchsmaterialien werden f r das Prelabeling von Proteinproben mit einem fluoreszierenden Farbstoff verwendet Fluoreszenz Prelabeling von Proben e erm gl
127. r den Zusammenbau des Transfer Sandwiches Die nachstehende Abbildung bietet einen berblick ber das Zusammensetzen eines Transfer Sandwiches 152 Die nachstehende Tabelle beschreibt kurz den Vorgang der Vorbereitung eines Transfer Sandwiches Stufe Beschreibung 1 Die PVDF Karte wird vorab in Ethanol angefeuchtet und danach in Transfer puffer equilibriert 2 Ein Schwamm wird auf das Unterteil des Transferhalters schwarzer Deckel gelegt 3 Ein Transferpapier wird vorab in Transferpuffer angefeuchtet und dann in den Transferhalter gelegt 4 Der Gelrahmen einschlie lich des Gels mit getrennten Proteinen wird aus dem Gelrahmentr ger genommen und in den Transferhalter gelegt 5 Die PVDF Karte wird im Transferhalter platziert 6 Das zweite Transferpapier wird vorab in Transferpuffer angefeuchtet und dann in den Transferhalter gelegt 7 Luftbl schen werden mithilfe des eingebauten Rollers im Transferhalter entfernt Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 5 Durchf hren eines Experiments 5 7 Durchf hren des Transfers 5 7 2 Vorbereiten des Transfer Sandwich Stufe Beschreibung 8 Ein zweiter Schwamm wird auf das Transferpapier gelegt 9 Der Transferhalter wird geschlossen Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 153 5 Durchf hren eines Experiments 5 7 Durchf hren des Transfers 5 7 2 Vorbereiten des Transfer Sandwich Vorbereiten der PVDF Karte 154 Die nachstehende
128. rauchsmaterialien 7 4 bersetzungen von Zubeh rteilen und Verbrauchsma terialien Produktname auf Englisch Amersham WB labeling buffer bersetzung Markierungspuffer Amersham WB loading buffer Ladepuffer Amersham WB molecular weight markers Molekulargewichtsmarker Amersham WB gel card 14 8 18 Gelkarte Amersham WB gel card 14 13 5 Gelkarte Amersham WB buffer strip Pufferstreifen Amersham WB PVDF card PVDF Karte Amersham WB transfer paper Transferpapier Amersham WB goat anti rabbit Cy3 Cy5 Ziege Anti Kaninchen Cy3 Cy5 Amersham WB goat anti mouse Cy3 Cy5 Ziege Anti Maus Cy3 Cy5 Amersham WB paper comb Papierkamm Amersham WB buffer strip holder Pufferstreifenhalter Amersham WB transfer holder Transferhalter Amersham WB sponge Schwamm Amersham WB membrane adapter Amersham WB drying holder Membranadapter Trocknungshalter Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE Index A Anmerkungen und Tipps 9 Antik rper sekund r Beschreibung 83 Konjugierte CyDyes 83 Lagerung von Iyophilisierten Antik rpern 64 Lagerung von rekonstituier ten Antik rpern 64 Antik rperfach Anschlie en der Antik rper l sungen 176 Beschreibung 53 Anzeigen der Ergebnisse 192 B Beh rdliche Vorschriften 10 Einhaltung gesetzlicher Vorschriften angeschlosse ner Ger te 13 Internationale Normen 11 La
129. rden 26 Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 2 Sicherheitsanweisungen 2 2 Schilder 2 2 Schilder Einf hrung Dieser Abschnitt beschreibt die Sicherheits und Warnschilder bez glich gef hrlicher Substanzen am Amersham WB analyzer Informationen zu Computer Kennzeichnungen finden Sie in den jeweiligen Herstelleranweisungen Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 27 2 Sicherheitsanweisungen 2 2 Schilder Position der Schilder am Amersham WB analyzer Die nachstehende Abbildung zeigt die Position der Schilder an der Elpho amp scan Ger te einheit und der Western Ger teeinheit 28 Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 2 Sicherheitsanweisungen 2 2 Schilder Beschreibung Computer Western unit Produktschild f r die Amersham WB elpho amp scan Ger teeinheit Sicherheitsschild bez glich Laserlicht Produktschild f r die Amersham WB western Ger teeinheit Elpho amp scan unit Only for service Schild an der Elpho amp scan Ger teeinheit Die nachstehende Abbildung zeigt ein Beispiel f r das Produktschild an der Elpho amp scan Ger teeinheit Das Schild befindet sich auf der R ckseite der Ger teeinheit 29032030 Amersham WB elpho amp scan unit Code no 29009368 Voltage 100 240 V Serial no 1111111 Frequency 50 60 Hz Mfg Year 2013 Max Power 300 VA Fuse 2x T4AH
130. ren auf der Karten platte 190 Reinigen 193 198 Membrantrocknerf hrungen Einbauen der Membran trocknerf hrungen 108 Molekulargewichtsmarker Abbildung 69 Proteine 69 N Netzsicherung Austauschen der Netzsiche rung 217 Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE p Papierkamm Beschreibung 76 Verfahren 145 Platzbedarf 95 Prelabelin Erforderliche L sungen und Materialien 129 Prelabeling 128 Vorbereitungen 130 Western Prelabeling Proto koll 131 Puffer Lysepuffer 129 Pufferstreifen Beschreibung 74 Platzieren im Pufferstreifen halter 135 Pufferstreifenhalter Beschreibung 74 Platzieren in der Elpho amp scan Ger teeinheit 136 Reinigen 147 198 Puffer und L sungen Abschlie ender Waschpuf fer Sondierung 174 Antik rperl sung Sondie rung 174 Blockierungsl sung 174 Reinstwasser Reini gung 149 174 Transferpuffer 149 Waschpuffer Sondie rung 174 Pumpenkopf Austauschen des Sondie rungs oder Transferpum penkopfes 210 PVDF card Karte Vorbereiten 154 PVDF Karte Beschreibung 80 Bewegen Sie sie zum Trock nungsfach 183 PVDF Karte Platzieren in der Elpho amp scan Ger teeinheit 189 Platzieren in der Sondie rungskammer 181 Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE Index Starten und berwachen des Scans 191 R Raumanforderungen 94 Recycling gef hrlicher Substan zen 35 Reinigen Elpho amp scan Ger teein heit
131. rgangs 57 Reinigen des Str mungs wegs f r Transfer 199 Starten und Uberwa chen 168 Wartung frei von Str mungs weg 203 Zubereiten und Anschlie en der L sungen 149 Transferbeh lter Beschreibung 50 Laden des Transfer Sandwi ches 167 Reinigen 199 Transferbeh lterfilter Austauschen des Transfer beh lterfilters 215 Transferelektroden Austauschen der Transfer elektroden 214 Einbauen 100 Transferhalter Beschreibung 78 Entfernen nach einem Pro grammlauf 170 Reinigen 172 Transferpapier Beschreibung 81 Transfer Sandwich Laden in den Transferbeh l ter 167 Materialien 151 Ubersicht Uber das Zusam mensetzen 152 Vorbereiten 151 Transportschutz Entfernen 100 Trocknung Start und Uberwa chung 187 Trocknungsfach Beschreibung 52 Reinigen 201 Trocknungshalter 85 Reinigen 193 199 Typografische Konventionen 7 U berblick ber den Workflow Allgemein 119 berpr fen der Ger teverbin dung 115 bersicht ber den Workflow Western mit Gesamtprote in Normalisierung 120 V Verbrauchsmaterialien Bestellen 62 Lagerung 63 Verfahren im Notfall Notausschaltung 33 Stromausfall 33 Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE Verfahren nach der Elektropho rese 146 Vormarkierung Beispiel pH Wert 129 Kompatible Lysepuffer 129 Vorrichtung Indikatoren 39 W Wartung Austauschen der Netzsiche rung 217 Austauschen der Transfer elek
132. rkehrungen Wartung 24 VORSICHT Quetschgefahr Die bewegte Sondierungskammer w hrend eines Programmlaufs nicht berUhren VORSICHT Keine Abdeckungen der Elpho amp scan Ger teeinheit entfernen Die Ger teeinheit enth lt einen Laser der Klasse 3B VORSICHT Um das Verspritzen von gef hrlichen Fl ssigkeiten zu vermeiden in Flaschen starke Einlassfilter verwenden die mit einem Schlauch verbunden sind O gt D HINWEIS Nur Chemikalien verwenden die im Leitfaden zur Chemikalienbe st ndigkeit aufgef hrt sind ACHTUNG Stromschlaggefahr Alle Reparaturen m ssen von Servicepersonal durchgef hrt werden das von GE autorisiert ist ffnen Sie keine Abdeckungen oder Ersatzteile es sei denn dies ist in der Benutzer dokumentation ausdr cklich angegeben ACHTUNG Die Stromzufuhr trennen Bevor Teile am Ger t ausgetauscht werden stets die Stromzufuhr zum Ger t trennen wenn in der Benutzerdokumentation nicht anderweitig angegeben Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 2 Sicherheitsanweisungen 2 1 Sicherheitsvorkehrungen ACHTUNG Vor dem Offnen des Wartungskammerdeckels alle Flaschen aus dem Flaschengestell entfernen ACHTUNG Bei Verwendung von gef hrlichen Chemikalien Verschutten ver meiden und eine Schutzbrille und andere Personenschutzausr s tung tragen NaOH beispielsweise ist tzend und daher gesund heitssch dli
133. rs installiert aufgestellt und verwendet werden 96 Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 4 Installation 4 2 Hardwareinstallation 4 2 Hardwareinstallation Entpacken des Amersham WB analyzer Siehe Amersham WB analyzer Anweisungen zum Entpacken Anheben der Gerateeinheiten auf den Arbeitstisch ACHTUNG Sicherstellen dass das System auf einem stabilen flachen Arbeits tisch mit ausreichend Raum zur Bel ftung aufgestellt wird ACHTUNG Zugang zu Netzschalter und Netzkabel nicht versperren Der Netzschalter muss stets gut zug nglich sein Das Netzkabel mit Stecker muss stets schnell herausgezogen werden k nnen VORSICHT Pers nliche Schutzausr stung PSA Wenn das System verpackt ausgepackt transportiert bzw umgestellt werden soll muss die folgende Schutzausr stung getragen werden e Sicherheitsschuhwerk vorzugsweise mit Stahlauskleidung e Arbeitshandschuhe die Schutz gegen scharfe Kanten bieten e Schutzbrille VORSICHT Schweres Objekt Zum sicheren Anheben der Ger teeinheiten sind zwei Personen erforderlich Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 97 4 Installation 4 2 Hardwareinstallation Schritt Ma nahme 1 Die Ger teeinheiten durch Nutzung des Hebebereichs neben den Einheiten mit der Hand anheben Sicherstellen dass die Ger teeinheiten auf einem stabilen flachen Arbeitstisch aufgestellt werden 2 Die erste Ger tee
134. rschienen zur anderen Seite des Transfer halters ziehen Den zweiten Schwamm auf das Transferpapier legen Den Transferhalter schlie en Hierzu auf den Deckel dr cken bis die Verriegelungen einrasten Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 165 5 Durchf hren eines Experiments 5 7 Durchf hren des Transfers 5 7 3 Ausf hren des Transfers 5 7 3 Ausf hren des Transfers Einfuhrung Dieser Abschnitt beschreibt e wie der Transferhalter in den Transferbeh lter geladen wird e wie der Transfer gestartet und berwacht wird e die Verfahren die nach dem Transfer durchzuf hren sind Vor dem Transfer Sicherstellen dass der Transferpuffer und das Reinstwasser f r den Transferlauf ange schlossen wurden Weitere Informationen siehe Verbinden der Schl uche mit dem Transferpuffer und dem Reinstwasser auf dem Flaschengestell auf Seite 150 166 Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 5 Durchf hren eines Experiments 5 7 Durchf hren des Transfers 5 7 3 Ausf hren des Transfers Laden der Transfer Sandwiches Schritt Abbildung des Schritts Aktion des Bedieners Den Deckel des Transferbeh lters ffnen Die Transferhalter in den Beh lter einsetzen Sicherstellen dass der wei e Pfeil in Richtung des Pfeils im Ger t lin Ihre Richtung weist Den Transferbeh lterdeckel schlie en Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 167
135. rsetzungen von Zubeh rteilen und Verbrauchsmaterialien auf Seite 230 In diesem Kapitel Dieses Kapitel enth lt die folgenden Abschnitte Abschnitt Siehe Seite 1 1 Zu diesem Handbuch 7 Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 5 1 Einf hrung Abschnitt Siehe Seite 1 2 Wichtige Informationen f r Benutzer 8 1 3 Beh rdliche Vorschriften 10 1 4 Amersham WB system Dokumentation 14 6 Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 1 Einf hrung 1 1 Zu diesem Handbuch 1 1 Zu diesem Handbuch Zweck dieses Handbuchs Die Bedienungsanleitung enth lt die Anweisungen die zur sicheren Installation Handha bung und Wartung des Amersham WB system erforderlich sind Anwendungsbereich dieses Handbuchs Die Bedienungsanleitung enth lt die folgenden Informationen Sicherheitsinformationen und beh rdliche Vorschriften eine Beschreibung des Systems einschlie lich der Zubeh rteile und Verbrauchsma terialien die mit dem System verwendet werden m ssen Anweisungen zur Installation Informationen zur sicheren Durchf hrung eines Experiments Anweisungen zur Wartung durch den Benutzer Spezifikationen und weitere Referenzinformationen Typografische Konventionen Software Elemente werden im Text durch kursive Fettschrift gekennzeichnet Ein Dop pelpunkt trennt Men ebenen So bezieht sich File Open auf das Kommando Open im Men File Hardware Elemente werden im Text durch fettgedruckte S
136. rten oder PVDF Karten Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 3 Systembeschreibung 3 2 Elpho amp scan Ger teeinheit Beschreibung Auswurftaste Zum Offnen SchlieBen des Laders fiir das Elektrophorese und Scanfach Anmerkung Der Lader kann nur dann ge ffnet werden wenn kein Elektrophorese oder Scanexperiment l uft Jeder laufende Programmlauf muss zun chst mit der passenden Softwareanweisung gestoppt werden damit der Lader ausgeworfen werden kann Einstellbare Standf e 4 Standf e ein Fu an jeder Ecke Abbildung der R ckseite der Elpho amp scan Ger teeinheit Die nachstehende Abbildung zeigt die Hauptbestandteile auf der R ckseite der Elpho amp scan Ger teeinheit a NO Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 41 3 Systembeschreibung 3 2 Elpho amp scan Ger teeinheit Beschreibung USB Kabelanschluss USB Typ B Zum Anschluss der Elpho amp scan Ger teeinheit an einen Computer Kommunikationsanschluss f r die Western Ger teeinheit Ethernet Kabel verwenden Lufteinlass Netzschalter AN I AUS O Sicherungskasten 5x20 mm Anschluss f r Netzkabel 60320 C14 Luftausl sse Elpho amp scan Lader Der Elpho amp scan Lader wird eingesetzt um Folgendes zu laden e Gelkarten f r Elektrophorese und das Scannen e PVDF Karten f r das Scannen Beim Laden von PVDF Karten f r das Scannen muss zun chst ei
137. s Waschpuffer PBS T 0 1 Tween 20 in 1xPBS 560 ml Abschlie ender Waschpuffer PBS pH Wert 7 4 290 ml Antik rperl sung Antik rper in PBS T 0 1 Tween 20 in 1xPBS 5 bis 12 ml Informationen zur Bestimmung der optimalen Anti k rperkonzentrationen finden Sie im Amersham WB system User Manual Reinstwasser verwendet zur Reinstwasser Sp lung zwischen Sondierungs schritten und zur Reinigung des Stromungswegs f r Sondie rung 174 Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 5 Durchf hren eines Experiments 5 8 Durchf hren von Sondierung und Trocknung 5 8 1 Zubereiten und Anschlie en der Sondierungs und Antik rperl sungen Verbinden der Schl uche mit dem Sondierungsl sungen auf dem Flaschengestell VORSICHT Um das Verspritzen von gef hrlichen Fl ssigkeiten zu vermeiden in Flaschen starke Einlassfilter verwenden die mit einem Schlauch verbunden sind Siehe Abschnitt 3 8 Sonstige Zubeh rteile auf Seite 87 f r Beschreibungen der Einlassfilter und Schlauchhalter Siehe Anbringen der Schlauchhalter auf Seite 106 zur Befestigung des Zubeh rs Vor dem Starten der Sondierung die Schl uche aus dem mittleren und rechten Schlauchschaft wie folgt mit den im Sondierungslauf verwendeten L sungen verbinden Schritt Ma nahme 1 Den Schlauch aus dem mittleren Schlauchschaft der mit e P Water gekennzeichnet ist in eine 1000 ml Flasche mit Reinstwasser f hren e
138. sanleitung 29 0214 77 AE 5 Durchf hren eines Experiments 5 8 Durchf hren von Sondierung und Trocknung 5 8 2 Ausf hren der Sondierung Schritt Abbildung des Schritts Aktion des Bedieners Die PVDF Karte in der vorgef llten Sondierungskammer platzieren Hierzu die PVDF Kartenl cher ber den F hrungsstiften mit orange farbenen Kreisen gekennzeichnet ausrichten und die PVDF Karte in der Sondierungskammer abrollen Anmerkung Achten Sie darauf den Blotting Bereich der PVDF Karte nicht zu ber hren Schlie en Sie den Deckel der Son dierungskammer und den Deckel des Sondierungsfachs Der Deckel der Sondierungskammer muss mit dem Riegel verriegelt sein Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 181 5 Durchf hren eines Experiments 5 8 Durchf hren von Sondierung und Trocknung 5 8 2 Ausf hren der Sondierung Starten und berwachen der Sondierung Schritt Abbildung des Schritts Aktion des Bedieners In der Software auf den Arbeits Yr schritt PROBING amp DRYING Son dierung und Trocknung klicken PROBING amp DRYING D ETE E Die Standardeinstellungen f r die _ EE BET em Probing steps Sondierungsschrit te im Bereich Probing Sondie ade z i Remove step rung verwenden die im Bild wey antibody p m 1 schirmfoto dargestellt sind ble x i Default 3 Secondary antibody 30 1 6 Wash vw 1 4 7 Final wash vir ai 0 T
139. senem oben und im ge ffneten unten Zustand Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 85 3 Systembeschreibung 3 7 Zubeh rteile und Verbrauchsmaterialien f r Western Blot Schritte 3 7 4 Membranadapter PVDF Kartenscan 3 7 4 Membranadapter PVDF Kartenscan Einf hrung Der Amersham WB membrane adapter Membranadapter orientiert und fixiert die PVDF Karte in der richtigen Position f r bestm gliches Scannen und Detektion in der Elpho amp scan Einheit Abbildung des Membranadapters Die nachstehenden Abbildungen zeigen den Membranadapter im geschlossenen links und ge ffneten rechts Zustand 86 Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 3 Systembeschreibung 3 8 Sonstige Zubeh rteile 3 8 Sonstige Zubeh rteile Matrixmarkierungsleser Der Matrix Tag Reader wird verwendet um die Gelkarte und die PVDF Karteninformatio nen Produktcode ID und Chargennummer durch Scannen der Datenmatrix Tags auf der Gelkarte und auf der PVDF Einzelpackungsmarkierung der Karte in die Software einzugeben Er muss separat bestellt werden siehe Bestellinformationen in Amersham WB system User Manual Die nachstehende Abbildung zeigt den Matrixmarkierungsleser Einlassfilterhalterung Die Einlassfilterhalterungen werden zusammen mit Einlassfiltern an den Einlassschl uchen angebracht die in die Flaschen im Flaschengestell eingef hrt sind Partikel werden durch den Einlassfilter gefiltert D
140. serbestimmungen und standards 12 Umweltkonformit t 12 Bestellinformationen Bestellen von Verbrauchs materialien 62 C CE Konformit t 10 CE Kennzeichnung 11 Computeranforderungen 96 CyDye Anregungswellenl nge 83 Emissionswellenl nge 83 D Dekontamination 35 Dokumentation Benutzerdokumentation 14 Datendateien und Anwen dungshinweise 16 Methodenhandbuch 15 Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE Index E Einbau Einbauen der Membran trocknerf hrungen 108 Einbauen der Transferelek troden 100 Einbauen des Matrixmarkie rungslesers 110 Montieren der Schlauch sch fte 104 Einhaltung von FCC Bestim mungen 12 Einlassfilter Anbringen der Einlassfilter an den Schl uchen 106 Austauschen des Einlassfil ters 216 Einlassfilterhalterung 87 Einlassfilterhalterung Beschreibung 87 Elektrophorese Entfernen der Gelkarte 146 Laden der Proben 141 Platzieren der Pufferstreifen halter in derElpho amp scan Ger teeinheit 136 Platzieren von Pufferstreifen in Pufferstreifenhaltern 135 Starten und Uberwa chen 143 Verfahren nach 146 Vorbereiten 135 Elektrophorese Experiment Beschreibung 118 berblick 119 Elektrophorese und Scan Ge r teeinheit Starten 122 Elpho amp scan Ger teeinheit 40 ffnen 136 Reinigen 147 Schlie en 141 Elpho amp scan Lader 42 Entfernen der Probenbettabde ckung 140 231 Index 232 Entsorgung allgemeine Anwei sunge
141. sham WB software on your computer To continue click Next WARNING This program is protected by copyright law and international treaties Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 4 Installation 4 3 Softwareinstallation Schritt Ma nahme 4 Die Software Lizenzvereinbarung lesen Wenn die Lizenzvereinbarung gelesen und angenommen wurde die Option I accept Ich akzeptiere ausw hlen und auf Next Weiter klicken Please read the following license agreement carefully GE Healthcare a Ly STANDARD SOFTWARE END USER LICENSE AGREEMENT FOR LIFE SCIENCES SOFTWARE PRODUCTS IMPORTANT PLEASE READ CAREFULLY THIS IS THE LICENSE AGREEMENT THAT END USER IS REQUIRED TO ACCEPT BEFORE INSTALLING AND USING GE HEALTHCARE SOFTWARE CAREFULLY READ ALL OF THE TERMS AND CONDITIONS OF THIS LICENSE AGREEMENT BEFORE PROCEEDING I accept the terms in the license agreement I do not accept the terms in the license agreement InstallShield lt Back J _Next gt J 5 e Um das Standardverzeichnis zu ndern nicht empfohlen auf Change ndern klicken und zum gew nschten Verzeichnis navigieren e Auf Next Weiter klicken Click Next to install to this folder or dick Change to install to a differs ee Install Amersham WE software to C Program Files x86 GE Healthcare Amersham WE software Change InstallShield Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 113 4 Insta
142. sind software integriert e Sichere Bedienung und Wartung Auch als PDF Datei auf der des Amersham WB system Benutzerdokumentations CD enthalten Planung Durchf hrung und Auswer tung von Elektrophorese und Wes tern Experimenten Fehlerbehebung bei System und Ergebnissen Es enth lt au erdem eine Beschreibung des Systems Referenzinformationen und Bestellinformationen Amersham WB software Das Amersham WB software Help ent In Amersham WB software Help h lt Informationen ber integriert im rechten Feld e Benutzer Workflows f r die Durch der Software f hrung von Elektrophorese und Western Experimenten Erl uterungen zur Software Links zum Amersham WB system User Manual f r ausf hrliche Infor mationen ber die Handhabung des Ger ts der Zubeh rteile und der Verschlei materialien Methodenhandbuch Das Handbuch Western Blotting Principles and Methods liefert eine Anleitung f r den gesamten Western Blotting Workflow Es beschreibt theoretische und praktische Aspekte der Technik und liefert n tzliche Hinweise und Tipps Das Handbuch zielt darauf ab Anf nger und Experten zu erfolgreichem Western Blotting anzuleiten und zu inspirie ren Das Handbuch Western Blotting Principles and Methods 28 9998 97 von www gelifesciences com herunterladen oder bestellen Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 15 1 Einf hrung 1 4 Amersham WB system Dokumentation Datendateien u
143. smodus enthalten Linse F1 0 13 mm Lichtquelle Cy5 Laserdiodenmodul 635 nm 10 mW Cy3 Laserdiodenmodul 532 nm 10 mW Betrieb Vollautomatisch automatische Belich tung weder Fokussierung noch andere Einstellungen oder Kalibrierungen erfor derlich Maximale Probengr e 2 Proben von etwa 80 x 65 mm Grauskala 65 536 Stufen 16 Bit Dynamikbereich 4 6 Gr enordnungen Bildausgabe 16 Bit Grauskala tif Trennungsspezifikationen Parameter Beschreibung Voltage 250 600 V 1 Strom 20 50 mA 1 Die maximale Leistung betr gt 20 W Gelkarte Die Maximalwerte der Parameter k nnen nicht gleichzeitig erreicht werden Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 223 7 Informationen zu Verweisen 7 1 Systemspezifikationen Systemspezifikationen Western Gerateeinheit Parameter Abmessungen B xT x H 43 x 53 x 39 cm Gewicht 20 kg Stromversorgung Spannung 100 240 V Wechselstrom Frequenz 50 60 Hz Stromverbrauch Max Leistung 400 VA Fuse 2x T4AH 250 V Transferschl uche und Schlauchverbin Schlauchmaterial FEP ID 1 8 der Ferrule blau Schlauchverbinder Mutter 5 16 24UNF 2 A Sondierungsschl uche und Schlauchver Schlauchmaterial FEP ID 0 063 binder Ferrule gelb Schlauchverbinder Mutter 1 4 28UNF 2 B Transferspezifikationen Parameter Beschreibung Voltage 10 100 V 1 1 Die Maximalleistung betr gt 4
144. software Software sowie Zubeh r und Verbrauchsmaterialien Der Amersham WB analyzer besteht aus zwei Einheiten der Amersham WB elpho amp scan Einheit und der Amersham WB western Einheit Das System unterst tzt viele Anwendungsbereiche von einer schnellen Untersuchung der Proteinzusammensetzung oder h ufigkeit bis zur fortgeschrittenen quantitativen Analyse f r Vergleiche von Proteingehalten zwischen Proben Proteine k nnen mit dem Farbreagens Amersham WB Cy 5 vormarkiert und demzufolge nach der Elektrophorese direkt im Gel nachgewiesen werden In Western Experimenten werden unmarkierte oder Cy5 vormarkierte Proteinproben auf Membranen transferiert und Zielproteine k nnen mittels Cy3 und oder Cy5 konjugierter sekund rer Antik rper nachgewiesen werden Der fluoreszenzbasierte Nachweis liefert eine hohe Empfindlichkeit und einen gro en Kontrastumfang und erm glicht Multiplex Analysen bei der gleichen Western Blot Membran Die Multiplexanalyse von Gesamtprotein das mit Cy5 vormarkiert und mit Cy3 markierten sekund ren Antik rpern als Ziel erkannt wurde erm glicht eine Normalisierung der Zielsignale ber das Gesamtprotein in jeder Bahn Die benutzerfreundliche Amersham WB software zur Steuerung der einzelnen Schritte im Workflow und zur automatischen oder manuellen Auswertung Ihrer Ergebnisse ist Bestandteil des Systems Eine Liste bersetzter Namen von Zubeh rteilen und Verbrauchsmaterialien finden Sie unter Abschnitt 7 4 be
145. t Vor dem Einschalten der Stromzufuhr den Transportschutz vorsichtig entfernen Einbauen der Transferelektroden ACHTUNG Die Stromzufuhr trennen Bevor Teile am Gerdt ausgetauscht werden stets die Stromzufuhr zum Ger t trennen wenn in der Benutzerdokumentation nicht anderweitig angegeben Schritt Ma nahme 1 Den Transferbeh lterdeckel ffnen 100 Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 4 Installation 4 2 Hardwareinstallation Schritt Ma nahme 2 Die linke Transferelektrode ganz links in den Transferbeh lter einsetzen und herunterdr cken 3 Die rechte Transferelektrode ganz rechts in den Transferbeh lter einsetzen und herunterdr cken 4 Den Transferbeh lterdeckel schlie en Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 101 4 Installation 4 2 Hardwareinstallation Verbinden der Ger teeinheiten und des Computers und Anschlie en der Netzkabel ACHTUNG Schutzerdung und Netzkabel Das Amersham WB analyzer muss stets an eine geerdete Steckdose angeschlossen werden Nur ein zugelassenes dreiadriges Netzkabel verwenden das von GE geliefert oder zugelassen wurde oder mit allen geltenden rtli chen elektrotechnischen Anforderungen bereinstimmt ACHTUNG Versorgungsspannung Vor dem Anschlie en des Netzkabels si cherstellen dass die Versorgungsspannung an der Wandsteckdose der Kennzeichnung am Ger t entspricht HINWEIS Je
146. t vollkommen tro cken sind im Bereich Drying Trocknen auf Start Starten klicken um einen neuen Trocknungslauf durchzuf hren 188 Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 5 Durchf hren eines Experiments 5 9 Scannen der Membran und Anzeigen der Ergebnisse 5 9 Scannen der Membran und Anzeigen der Ergebnisse Einf hrung In diesem Abschnitt wird beschrieben wie e legen Sie die PVDF Karte in die Eloho amp scan Einheit e das Scannen gestartet und Uberwacht wird e die Ergebnisse des Scans angezeigt werden Platzieren der PVDF Karte im Lader VORSICHT Bewegliche Teile Beim ffnen Schlie en des Laders darauf achten dass Finger oder Kleidung nicht eingeklemmt werden wenn der Lader sich bewegt Flaschen oder Fl schchen niemals vor die Elpho amp scan Ger teein heit stellen Sie k nnten beim ffnen des Laders herunterfallen Schritt Abbildung des Schritts Aktion des Bedieners Die Auswurftaste an der Elpho amp scan Ger teeinheit bet tigen Ergebnis Der Lader wird ausgeworfen e Die Verriegelungen nach oben drehen und den Dichtungsdeckel ffnen e Jegliche Fl ssigkeit und jeglichen Schmutz auf dem Schutzglas der Karten platte mit einem fusselfreien Tuch abwi schen Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 189 5 Durchf hren eines Experiments 5 9 Scannen der Membran und Anzeigen der Ergebnisse Schritt Abbildung des Schrit
147. tandortvorbereitung Platzbedarf ACHTUNG Zugang zu Netzschalter und Netzkabel nicht versperren Der Netzschalter muss stets gut zug nglich sein Das Netzkabel mit Stecker muss stets schnell herausgezogen werden k nnen Die Ger teeinheiten sollten auf einem Labortisch aufgestellt werden Der Arbeitstisch muss sauber flach eben stabil und in der Lage sein das Gewicht des Amersham WB system zu tragen Ger teeinheiten 45 kg Gewicht des Laptops und der Fl ssigkeiten auf der Western Gerdteeinheit Platzbedarf siehe unten Hinter den Ger teeinheiten mindestens 10 cm Raum f r die Bel ftung lassen Der Platzbedarf f r die zwei Ger teeinheiten betr gt 90 cm 140 cm Platz auf dem Arbeitstisch werden jedoch empfohlen um Platz f r die Reagenszuberei tung den Umgang mit den Gelkarten usw zu erm glichen Strombedarf Siehe Abschnitt 7 1 Systemspezifikationen auf Seite 221 Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 95 4 Installation 4 1 Standortvorbereitung Anforderungen an den Computer Parameter Betriebssystem Windows 7 Professional 32 bit or 64 bit Englische Version Webbrowser Windows Internet Explorer 8 oder h her Bildschirmauflosung Aufl sung von 1280 x 800 oder h her Leistungs Minimum 2 GB physischer Speicher Empfohlen 4 GB physischer Speicher Anmerkung Der Computer muss gem den Anweisungen und Spezifikationen des Computerherstelle
148. te ote nen Alternativ die funfstellige ID z B 00123 eintippen Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 137 5 Durchf hren eines Experiments 5 6 Durchf hren der Proteinelektrophorese 5 6 1 Vor der Elektrophorese Schritt Abbildung des Schritts Aktion des Bedieners e Die Gelkarte so drehen dass die Ruckseite nach oben weist blaue Gelgrif fe ohne Etiketten weisen nach oben e Das Ende des Schutzfilms am unteren Ende der Gelkarte ergreifen und vorsichtig entfernen e Das Ende des Schutzfilms am oberen Ende der Gel karte ergreifen und vor sichtig entfernen Durch Entfernen der Schutz filme wird der Kontakt zwi schen dem Gel und dem Puffer hergestellt wenn die Gelkarte auf die Kartenplatte gelegt wird Darauf achten die frei liegenden Geloberfl chen nicht zu ber hren 138 Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE Schritt Abbildung des Schritts 5 Durchf hren eines Experiments 5 6 Durchf hren der Proteinelektrophorese 5 6 1 Vor der Elektrophorese Aktion des Bedieners e Das Gelso drehen dass die Vorderseite nach oben weist d h die Pro benbettabdeckung weist nach oben Anmerkung Sicherstellen dass die Kartenplatte vollig tro cken ist e Die Gelkarte auf der Kar tenplatte platzieren Hierzu die L cher im Gel kartenrahmen an den F hrungsstiften ausrich ten die mit orangefarbe nen Kreisen gekennzeich net sind
149. tere Informationen siehe Anschlie en der R hrchen mit Antik rperl sung auf Seite 175 Die rechte Seite des Fachs wird fur die Lagerung der Amersham WB membrane adapters Membranadapter genutzt Beschreibung R hrchenhalter Schlauch T rschloss magnetisch Membranadapter Halterung f r Membranadapter T rschloss Anzeige f r die Position eines R hrchens mit Antik rperl sung A PRIMARY A prim r ASECONDARY A sekund r B PRIMARY B prim r und BSECON DARY B sekund r Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 53 3 Systembeschreibung 3 3 Western Gerdteeinheit 3 3 2 F cher in der Western Gerdteeinheit Abbildung des Wartungsfachs Die nachstehende Abbildung zeigt das Wartungsfach der Western Ger teeinheit Beschreibung Transferventilblock Sondierungspumpe Transferpumpe Deckel des Luftfilterfachs Sondierungsventilblock 54 Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 3 Systembeschreibung 3 3 Western Ger teeinheit 3 3 3 Fl ssigkeitswege 3 3 3 Fl ssigkeitswege Einf hrung Dieser Abschnitt zeigt die Fl ssigkeitswege f r Transfer und Sondierung in der Western Ger teeinheit und erl utert die Grundlagen des Betriebs Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 55 3 Systembeschreibung 3 3 Western Ger teeinheit 3 3 3 Fl ssigkeitswege Abbildung des Fl ssigkeitsweges f r Transfer Die nachstehe
150. terialien f r die Elektrophorese 3 6 1 Amersham WB molecular weight markers Abbildung von Molekulargewichtsmarkern Die nachstehende Abbildung zeigt die Gr e der Amersham WB molecular weight markers die auf einer Gradienten Gelkarte Bild links und auf einer homogenen Gelkarte Bild rechts getrennt wurden Mx10 i Pr 225 wa 225 97 w E 56 66 50 35 35 25 25 20 20 14 a 10 me 14 om 10 Proteine fur Molekulargewichtsmarker Die nachstehende Tabelle f hrt die einbezogenen Proteine auf Protein Molekulargewicht M x10 Rekombinantes Protein Phosphorylase B Kaninchenmuskel Albumin Rinderserum 66 Rekombinantes Protein 50 Rekombinantes Protein 35 Rekombinantes Protein 25 Trypsin Inhibitor Sojabohne 20 Alpha Lactalbumin Kuhmilch 14 Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 69 3 Systembeschreibung 3 6 Zubeh rteile und Verbrauchsmaterialien f r die Elektrophorese 3 6 1 Amersham WB molecular weight markers Protein Molekulargewicht M x10 70 Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 3 Systembeschreibung 3 6 Zubeh rteile und Verbrauchsmaterialien f r die Elektrophorese 3 6 2 Amersham WB gel card 3 6 2 Amersham WB gel card Einf hrung In diesem Abschnitt werden Details der Gelkarten beschrieben Gelkartentypen Es gibt zwei Typen von Gelkarten e Homogene Gelkarte Amersham WB gel card 14 13 5 e Gradienten G
151. tern Experiment amp Unsaved eaperment Ambersham Wi scythe Bosy Western Gel cond 14 13 5 El hogre wel gardi Blank he Type sample IO Ammian lt o Dommens G Amenham WE KIA Markem W Sampie PHORESIS E GEL SCANNING Sample Print the experiment and samples information aa E Brin the experiment A rampis infomation 5 Sample a foptianal a 6 Sample ka TRANSFER 7 Sample ling 8 Sample Per if Software puprview W Emperment formation ka 9 Sample a 10 Sarmpalee hel 11 Sampie hil 1 Sarg u 13 Simple eu HEMERAHNE SANE 14 Sample Amersham WE MW Markere wor Eleni koa wien ile Antibodies for Membrane A Primary antibody Labeled secondary ab Framany andy a 90 Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 3 Systembeschreibung 3 9 berblick ber die Software Flache Beschreibung 1 Menuleiste Die Men leiste enth lt vier Men s e File Datei Experimente erstellen ffnen und speichern Informationen drucken und die Software beenden e Control Steuerung Nach dem Programmlauf die Transfer und Sondierungskammer leeren und die Reinigung der Str mungswege f r Transfer und Sondierung starten e Remote Remote Zugriff auf das Ger t verbinden und trennen Zugriffscodes f r das Ger t abrufen und Remote Benutzer verwalten Die Konfiguration der Remote Verbin dung bearbeiten Anmerkung Nur dann sichtbar wenn ein Ger
152. there are four empty tubes in the antibody solution compartment 6 Make sure there are no membranes left in the probing chambers Note Discard all solutions and the antibody tubes after the cleaning The procedure will take about 45 minutes Start clean Cancel 2 Die Sondierungsschl uche und den Deckel und die Seiten der Sondierungs kammer mit einem feuchten Taschentuch abwischen 3 Tauchen Sie den P Water Schlauch in eine Flasche mit mindestens 1000 ml Reinstwasser 4 Den P Custom Schlauch in eine Flasche mit mindestens 450 ml 0 5 M NaOH eintauchen 5 Die P Block PWash und P Final Wash Schl uche in einem leeren Ablaufbe h lter platzieren 6 Vier saubere leere 15 ml R hrchen in das Antik rperfach einsetzen und anschlie en Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 205 6 Wartung 6 2 Anweisungen zur Wartung 6 2 1 W chentliche Reinigung der Stromungswege f r Transfer und Sondierung Schritt MaBnahme Im Dialogfeld auf Start clean Reinigung starten klicken 8 Nach Beenden der Reinigung die Schl uche in eine leere Flasche umsetzen Anmerkung Alle L sungen und Antik rperr hrchen nach der Reinigung entsorgen 206 Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 6 Wartung 6 2 Anweisungen zur Wartung 6 2 2 Austauschverfahren 6 2 2 Austauschverfahren Einfuhrung In diesem Abschnitt wird der Austausch der folgenden Komponenten beschrieben Luftfiler Transfer und Sondierungsp
153. troden 214 Austauschen des Einlassfil ters 216 Austauschen des Luftfil ters 208 Austauschen des Sondie rungs oder Transferpum penkopfes 210 Austauschen des Transfer beh lterfilters 215 Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE Index Wartung frei von Sondie rungsstr mungsweg 204 Wartung frei von Transfer str mungsweg 203 Wartungsprogramm 194 Zubeh r 207 Wartungsfach Austauschen der Pumpen k pfe 210 Austauschen des Luftfil ters 208 Beschreibung 54 Western Experiment berblick 119 Western Experiment Beschreibung 118 Western Ger teeinheit 45 Antik rperfach 53 Sondierungsfach 51 Starten 123 Transferbeh lter 50 Trocknungsfach 52 Wartungsfach 54 Western Prelabeling Proto koll 131 Diese Seite ist absichtlich leer Diese Seite ist absichtlich leer Kontaktinformationen fur lokale Niederlassun gen finden Sie unter www gelifesciences com contact GE Healthcare UK Limited Amersham Place Little Chalfont Buckinghamshire HP7 9NA Vereinigtes K nigreich www gelifesciences com GE und GE Monogramm sind Marken von General Electric Company Amersham Cy CyDye MiniTrap und Sephadex sind Marken von GE Healthcare oder einer ihrer Tochtergesellschaften Microsoft und Windows sind eingetragene Marken von Microsoft Corporation Tween ist eine Marke von Unigema Americas LLC CyDye Dieses Produkt wird unter einer ausschlie lichen Lizenz von Carnegie Mellon University
154. ts Aktion des Bedieners e Einen Membranadapter aus dem Antik r perfach der Western Ger teeinheit neh men Anmerkung Sicherstellen dass der Membranadapter trocken und sauber ist e Den Membranadapter ffnen und auf der Kartenplatte platzieren Hierzu die F h rungsl cher im Membranadapter ber den F hrungsstiften ausrichten Anmerkung Darauf achten die Kartenplatte nicht mit scharfen Gegenst nden zu zerkratzen O ffnen Sie den Trocknungshalter t G Entfernen Sie die PVDF Karte aus dem Trocknungshalter und legen Sie die Karte in den Membranadapter indem Sie die F h rungsl cher auf die F hrungsstifte stecken Anmerkung Achten Sie darauf den Blotting Bereich der PVDF Karte nicht zu ber hren 190 Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 5 Durchf hren eines Experiments 5 9 Scannen der Membran und Anzeigen der Ergebnisse Schritt Abbildung des Schritts Aktion des Bedieners Den Membranadapter schlieBen Den Dichtungsdeckel schlieBen a Die Auswurftaste an der Elpho amp scan Ger teeinheit bet tigen Ergebnis Der Lader wird geschlossen Starten und berwachen des Membran Scans Schritt Abbildung des Schritts Aktion des Bedieners In der Software auf den Arbeitsschritt MEM EI BRANE SCANNING Membran Scan klicken SCANNING Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 191
155. tsmarker geladen werden Es wird empfohlen Ladepuffer in den Vertiefungen 1 und 16 und Molekulargewichtsmarker in den Vertiefungen 2 und 15 zu haben Nachdem alle Proben gela den wurden die Auswurftas te bet tigen Ergebnis Der Lader wird in die Eloho amp scan Ger teein heit eingefahren Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 141 5 Durchf hren eines Experiments 5 6 Durchf hren der Proteinelektrophorese 5 6 2 Ausf hren der Elektrophorese 5 6 2 Ausf hren der Elektrophorese Einf hrung In diesem Abschnitt wird das Starten und berwachen der Elektrophorese beschrieben 142 Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 5 Durchf hren eines Experiments 5 6 Durchf hren der Proteinelektrophorese 5 6 2 Ausf hren der Elektrophorese Starten und berwachen von Elektrophorese und Gel Scan Schritt Aktion des Bedieners Abbildung des Schritts Gel Cards Gel card Position B ID Position A Note Electrophoresis Protocol Voltage limit 600 250 600 V Current limit 50 20 50 mA Pause for sample well cleanup after 5 minutes Stop electrophoresis on front detection Estimated time 42 minutes D Stop electrophoresis on time Default Gel Scanning Protocol j Scan gel automatically after electrophoresis Scanning sensitivity Automatic sensitivity Manual sensitivity Default e Im Arbeitsschritt ELEC TROPHORESIS amp GEL
156. tung 29 0214 77 AE 219 7 Informationen zu Verweisen 7 Informationen zu Verweisen Zu diesem Kapitel In diesem Kapitel sind die technischen Daten des Amersham WB analyzer aufgef hrt Das Kapitel enth lt auch einen Leitfaden zur Chemikalienbest ndigkeit und einen Dekon taminationsbericht in dem die Details der Dekontamination vor einer Instandsetzung aufgezeichnet werden m ssen In diesem Kapitel Dieses Kapitel enth lt die folgenden Abschnitte Abschnitt Siehe Seite 7 1 Systemspezifikationen 221 7 2 Leitfaden zur Chemikalienbest ndigkeit 226 7 3 Gesundheits und Sicherheitserkl rungsformular 228 7 4 bersetzungen von Zubeh rteilen und Verbrauchsmaterialien 230 220 Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 7 1 Systemspezifikationen Einfuhrung 7 Informationen zu Verweisen 7 1 Systemspezifikationen In diesem Abschnitt werden die Systemspezifikationen des Amersham WB analyzer aufgelistet Betriebsbereiche Parameter Temperaturbereich fur Lagerung und Transport 25 C bis 60 C Chemische Umgebung Betriebsbereich Parameter Betriebstemperaturbereich Relative Luftfeuchtigkeit Siehe Abschnitt 7 2 Leitfaden zur Chemi kalienbest ndigkeit auf Seite 226 Grenzen 15 C bis 32 C F r volle Leistung 16 C bis 28 C 20 bis 80 nicht kondensierend F r volle Leistung 20 bis 70 nicht kondensierend H he ber dem Meeresspiegel Maximal 2 000
157. tware Ergebnis Der Startbildschirm der Software wird angezeigt r Amersham WB software Easy Western D Easy SDS PAGE Create Open experiment Open 96 Amersham WB software Create New Experiment All Western experiments include necessary SDS PAGE steps D Western with total protein normalization gt Western with endogenous protein normalization Create new experiment based on a previous run New from existing Sex File W Control wW Remote w Easy Western Western blot experiment for quick confirmation of protein identity and easy sample to sample comparison One primary antibody against the specific target and a corresponding secondary antibody for the detection Optionally two primary antibodies of different species against two different targets and two corresponding secondary antibodies for detection of the two targets individually This allows for unambiguous analysis of two targets of similar size in one experiment Samples should normally not be pre labeled for use in this experiment F E aintenance clean Learn more User manual Maintenance clean Transfer Web resource Maintenance clean Probing Help w Tipp Um das Hilfefeld mit Hilfeanweisungen f r den aktiven Bildschirm an zuzeigen auf die Hilfefeld Schaltfl che klicken oder F1 dr cken 124 Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE
158. umpenk pfe Transferelektroden Transferbeh lterfilter Einlassfilter Netzsicherung Wartungszubeh r Die folgenden Zubeh rteile werden f r die Wartung des Amersham WB analyzer ben tigt Pumpenkopf f r Transferpumpe oder Sondierungspumpe Luftfiler Transferbeh lterfilter Transferelektroden Einlassfiltersatz Sicherung die richtige Sicherung finden Sie unter Abschnitt 7 1 Systemspezifikationen auf Seite 221 VorsichtsmaBnahmen ACHTUNG Die Stromzufuhr trennen Bevor Teile am Gerdt ausgetauscht werden stets die Stromzufuhr zum Ger t trennen wenn in der Benutzerdokumentation nicht anderweitig angegeben ACHTUNG Vor dem Offnen des Wartungskammerdeckels alle Flaschen aus dem Flaschengestell entfernen Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 207 6 Wartung 6 2 Anweisungen zur Wartung 6 2 2 Austauschverfahren Austauschen des Luftfilters Die nachstehende Anweisung beschreibt wie der Luftfilter ausgetauscht wird Schritt Ma nahme 1 Den Deckel des Wartungsfachs ffnen 2 Den Deckel ber dem Fach ffnen in dem sich der Filter befindet Hierzu die Mutter gegen den Uhrzeigersinn drehen und entfernen 208 Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 6 Wartung 6 2 Anweisungen zur Wartung 6 2 2 Austauschverfahren Schritt Ma nahme 3 Den Filter aus dem Rahmen entfernen Hierzu den Filter mit der angebrachten Halterung hochziehen
159. und niedermolekularen Proteinen M lt 40 000 verbessert Eine Reinigung der Probenvertiefung verbessert im Allgemeinen die Bandaufl sung auch f r nichtmarkierte Proben mit hohen Proteinkonzentrationen oder gro e Proben volumina Weitere Informationen zur Verwendung des Papierkamms finden Sie unter Starten und Uberwachen von Elektrophorese und Gel Scan auf Seite 143 Abbildung des Papierkamms 76 Die nachstehende Abbildung zeigt einen Papierkamm Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 3 Systembeschreibung 3 7 Zubeh rteile und Verbrauchsmaterialien f r Western Blot Schritte 3 7 Zubeh rteile und Verbrauchsmaterialien f r Wes tern Blot Schritte Einf hrung In diesem Abschnitt werden die Zubeh rteile und Verbrauchsmaterialien beschrieben die f r den Transfer von Proteinen vom Gel auf die Membran die Sondierung der Membran mit prim ren und sekund ren Antik rpern und das Scannen von PVDF Karten verwendet werden In diesem Abschnitt Dieser Abschnitt enth lt die folgenden Unterabschnitte Abschnitt Siehe Seite 3 7 1 Zubeh rteile und Verbrauchsmaterialien f r den Transfer 78 3 7 2 Sekund re Antik rper Sondierung 83 3 7 3 Trocknungshalter PVDF Kartentrocknung 85 3 7 4 Membranadapter PVDF Kartenscan 86 Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 77 3 Systembeschreibung 3 7 Zubeh rteile und Verbrauchsmaterialien f r Western Blot Schritte 3 7 1 Zubeh rteile und Ver
160. ungsanleitung 29 0214 77 AE 11 1 Einf hrung 1 3 Beh rdliche Vorschriften Laserbestimmungen und standards Bei diesem Ger t handelt es sich um ein Laserprodukt der Klasse 1 IEC 60825 1 2007 EN 60825 1 2007 Dieses Ger t erf llt die Anforderungen an den Laserstrahlenschutz gem Code ofthe Federal Regulations US Bundesrichtlinien Titel 21 CFR Kapitel 1 Unterkapitel J Teil 1040 10 Laserprodukte Einhaltung von FCC Bestimmungen Dieses Ger t entspricht Teil 15 der FCC Bestimmungen Voraussetzung f r den Betrieb sind folgende zwei Bedingungen 1 Dieses Ger t darf keine sch dlichen St rungen verursachen und 2 dieses Ger t muss st rfest gegen ber externen St rquellen sein einschlie lich St rstrahlungen die einen ungew nschten Betrieb verursachen k nnen Anmerkung Der Benutzer wird eindringlich darauf hingewiesen dass jegliche nicht ausdr cklich von GE genehmigten nderungen zum Verlust der Nut zungsberechtigung f r dieses Ger t f hren k nnen Dieses Ger t wurde erfolgreich auf die Einhaltung der Grenzwerte eines Digitalger ts der Klasse A gem Teil 15 der FCC Bestimmungen getestet Diese Grenzwerte dienen zur Gew hrleistung eines angemessenen Schutzes vor sch dlichen St rungen bei Betrieb des Ger ts in einer gewerblichen Umgebung Dieses Ger t erzeugt und verwendet Hochfrequenzenergie und kann diese abstrahlen Es kann wenn es nicht gem der Bedienungsanleitung installiert wird s
161. werden m ssen Stufe Beschreibung 1 Schutzfilm Dieser Film wird zuerst entfernt 2 Gelrahmen Die Seiten des Gelrahmens werden aus dem Gelrahmentr ger vorgel st 3 in der Abbildung und dann vorsichtig entfernt 3 Der Gelrahmentr ger bleibt auf dem Arbeitstisch Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 159 5 Durchf hren eines Experiments 5 7 Durchf hren des Transfers 5 7 2 Vorbereiten des Transfer Sandwich L sen des Gelrahmens aus dem Gelrahmentr ger und Platzieren im Transferhalter Anmerkung Den Gelbereich mit einem roten Kreis gekennzeichnet beim L sen des Gelrahmens nicht ber hren Schritt Abbildung des Schritts Aktion des Bedieners Die Gelkarte mit festem Griff hal ten Den Schutzfilm entfernen Hierzu das mit einem orangefarbe nen Pfeil gekennzeichnete Ende ergreifen und diagonal in Pfeilrich tung ziehen 160 Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 5 Durchf hren eines Experiments 5 7 Durchf hren des Transfers 5 7 2 Vorbereiten des Transfer Sandwich Schritt Abbildung des Schritts Aktion des Bedieners Die Gelkarte entsprechend der Darstellung im Bild auf den Arbeit stisch legen mit dem frei liegen den Gel nach oben weisend Die Ecken des unteren Gelrah mens ergreifen und den Gelrah men zwischen den unteren Ecken so weit wie durch die gepunktete Linie und die Pfeile angezeigt l sen Anmerkung Beim L sen des Ge
162. zt werden Voraussetzungen F r den bestimmungsgem en Betrieb des Systems m ssen die folgenden Vorausset zungen erf llt sein e Sie sollten allgemeine Kenntnisse der Funktionsweise von PC und Microsoft Win dows besitzen e Sie m ssen das Konzept der Elektrophorese und des Western Blotting verstehen e Das Ger t und die Software m ssen gem den Anweisungen im Abschnitt Kapitel 4 Installation auf Seite 93 installiert werden 8 Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE Tipp 1 Einf hrung 1 2 Wichtige Informationen f r Benutzer Um mehr ber die Grundlagen und Methoden von Western Blotting zu lesen und eine Anleitung zur erfolgreichen Durchf hrung des Wes tern Blotting zu erhalten das Handbuch Western Blotting Principles and Methods 28 9998 97 von www gelifesciences com herunterladen oder bestellen Sicherheitshinweise Diese Benutzerdokumentation enth lt Sicherheitshinweise WARNUNG VORSICHT und HINWEIS zur sicheren Verwendung des Produkts Siehe nachfolgende Definitionen ACHTUNG ACHTUNG Weist auf eine gef hrliche Situation hin die zuschweren oder lebensbedrohlichen Verletzungen f hren kann falls sie nicht vermieden wird Es darf erst dann fortgefahren werden wenn alle angegebenen Bedingungen erf llt und verstanden wurden VORSICHT VORSICHT Weist auf eine gef hrliche Situation hin die zu leichten oder mittelschweren Verletzungen f hren kann falls sie nicht ver mi
163. zu die zwei Pufferstreifen aus ihrer Packung direkt in die Pufferstreifenhalter dr cken Anmerkung Um eine Kontamination der Pufferstreifen zu vermeiden die Pufferstreifen nicht ber h ren oder sicherstellen dass saubere Handschuhe verwen det werden Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 155 5 Durchf hren eines Experiments 5 6 Durchf hren der Proteinelektrophorese 5 6 1 Vor der Elektrophorese Schritt Abbildung des Schritts Aktion des Bedieners Die Auswurftaste an der Eloho amp scan Ger teeinheit bet tigen Ergebnis Der Lader wird ausgeworfen Den Dichtungsdeckel am Verschluss ffnen Die Pufferstreifenhalter in den Aush hlungen der Kar tenplatte im Lader platzieren 136 Amersham WB system Bedienungsanleitung 29 0214 77 AE 5 Durchf hren eines Experiments 5 6 Durchf hren der Proteinelektrophorese 5 6 1 Vor der Elektrophorese Schritt Abbildung des Schritts Aktion des Bedieners A CRIE e Eine Gelkarte aus ihrer Packung herausnehmen mit der Vorderseitenach oben weisend 5 e Optional Den Cursor im Arbeitsschritt ELECTRO PHORESIS amp GEL SCAN NING Elektrophorese und Gel Scan im Feld ID der Software platzieren und mithilfe des Matrix markierungslesers die Matrixmarkierung der Gelkarte mit einem Gel Cards i orangefarbenen Kreis Gel card Position A Position B ID Enteri gekennzeichnet scan No

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