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Dokument 1 - Gießener Elektronische Bibliothek - Justus

1. Eigene Untersuchungen 151 Tab 37 Regressionsgeradengleichung Normbereichsgrenze und t Wert der prozentualen Biutzelldifferenzierung eingeteilt nach Rasse und Altersgruppe Neutrophile Granulozyten Regressionsgeraden lt 6 Monate 6 24 Monate gt 2 Jahre gleichung SB y 32 33 2 91x 21 01 0 22x 30 43 0 12x DFV y 32 33 2 91x 27 04 0 22x 30 43 0 12x Normbereichsgrenze 15 78 13 32 12 65 t Wert 2 0262 1 976 1 976 Lymphozyten Regressionsgeraden lt 6 Monate 6 24 Monate gt 2 Jahre gleichung SB y 55 89 2 25x 67 91 0 21x 58 66 1 14x DFV y 55 89 2 25x 64 47 0 21x 58 66 1 14x Normbereichsgrenze 14 07 13 58 13 31 t Wert 2 0262 1 976 1 976 Eosinophile Granulozyten Regressionsgeraden lt 24 Monate gt 2 Jahre gleichung SB y Ig 0 979 0 027x Ig0 60 DFV y Ig 1 101 0 027x Ig0 60 Normbereichsgrenze 1g0 245 1g0 47 t Wert 1 9726 1 976 Monozyten Regressionsgeraden lt 24 Monate gt 2 Jahre gleichung SB y Ig 0 91 0 01x Ig 0 66 0 001 DFV y Ig 0 91 0 01x Ig 0 66 0 001 Normbereichsgrenze 1g0 245 1g0 24 t Wert 1 9726 1 976 152 Diskussion der Ergebnisse 4 DISKUSSION DER ERGEBNISSE Bei der Untersuchung von Patientenblut mit Hamatologiesystemen wird primar nur die physikalische Eigenschaft des Blutes insbesondere seiner Blutzellen erfa t Erst durch eine Datenverkn pfung oder Analogie kann aus diesen Eigenschaften ein h matologi
2. 74 Softwareadaptation und begleitende Evaluation des ADVIA 120 75 ERGEBNISSE oxic heise ctr ect ota A ee edt sor Band Sie 76 Evaluation des ADVIA 120 ccccccccceeeeeeeeeeeeneeeeeeeeeeeeeeeeeteeeeeeeeees 76 Meth denvergleich us Harrer 76 Richtigkeit der Blutzellz hlung suus44444444444nnnnnnnnnnnn 76 Richtigkeit Blutzelldifferenzierung uu 222444444000n nenn 82 Prazision une ee ae 86 Verschleppung carry over und Linearitat cceeeeeeeeeeeeeeeeees 92 BINtaNERUNG a Fa a ee 95 3 2 4 1 3 2 4 2 3 2 5 3 2 6 3 2 6 1 3 2 6 2 3 2 6 3 4 1 1 4 1 2 4 1 3 4 1 3 4 1 4 4 1 5 4 2 4 2 1 4 2 2 4 2 3 A A N O a Inhaltsverzeichnis Il Einflu von Lagertemperatur und Lagerdauer auf die Bl tzellz hlung a aa 97 Einflu von Lagertemperatur und Lagerdauer auf die Blutzelldifferenzierung 2444444400snnn nennen 105 Antikoagulanzienvergleich near 110 Alters und Rasseabh ngige Referenzbereiche 114 Referenzbereiche f r die Parameter des roten Blutbildes 116 Referenzbereiche f r die Parameter der Thrombozytenanalytik 130 Referenzbereiche f r die Parameter des wei en Blutbildes 140 DISKUSSION DER ERGEBNISSE s sessseeeesesseesssseeeeeeeees 152 Evaluierung GES ADV IAI 20 ics una 152 Methodenvergleich cceccceceeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeee
3. Bann ze DUFFIELD MORITZ und Einheit 2000 2000 WBC Gil 5 05 13 30 5 6 14 3 RBC T I 4 90 7 50 5 37 10 63 HGB mmol l 5 21 7 44 4 73 8 95 HCT I I 0 21 0 30 0 21 0 37 MCV fl 36 50 28 28 50 69 MCH fmol 0 87 1 18 0 65 1 17 MCHC mmol l 23 59 26 75 21 03 27 31 CHCM mmol l k a 20 30 25 15 RDW 16 20 16 63 26 73 HDW mmol l k a 1 06 1 88 Retikulozyten G l 0 00 1 89 95 59 Schrifttum 33 Fortsetzung Tab 09 RER DUFFIELD MORITZ und Einheit 2000 2000 PLT GI I 160 650 154 1022 MPV fl 4 60 7 40 5 10 9 70 MPC g l k a 159 70 246 80 MPM pg k a 1 00 1 60 PDW k a 46 60 81 30 PCDW g l k a 55 90 76 10 PMDW pg k a 0 40 0 90 neutr Gran G l 1 70 6 20 1 19 6 40 Lymphoz G l 1 80 8 10 2 72 8 75 Monozyten G l 0 10 0 70 0 18 0 88 eos Gran G I 0 05 1 15 0 04 1 52 baso Gran G I 0 00 0 20 0 03 0 23 manuelles und automatisches Blutbild 2 5 5 Rassespezifische Referenzbereiche Der Einflu der Rasse auf die h matologischen Blutwerte und ihre Bedeutung f r die Auswertung von Blutuntersuchungen wird von verschiedenen Autoren unterschiedlich bewertet Statistisch signifikante Rasseunterschiede sind nicht so bedeutend als da sie bei 34 Schrifttum der Beurteilung von Blutbildern eine klinische Relevanz aufweisen w rden JAIN 1986 sowie ST MPFLI u ITTIG 1982 vergleichen 600 Jungstiere i
4. 1022 G l an DUFFIELD 2000 gibt f r laktierende Milchk he einen Referenzbereich von 160 650 G I an Die Angaben von ST BER u GR NDER 1990 und KRAFT 1997 unterscheiden sich von diesen Ergebnissen deutlich Eine Ursache kann wie von MORITZ 2000 ebenfalls vermutet in der gegen ber lteren Methoden empfindlicheren 2D Thrombozytenanalytik des ADVIA 120 liegen Das Mittlere Thrombozytenvolumen zeigt in keiner Gruppe eine klinisch relevante Abh ngigkeit vom Alter Gleichwohl kann eine Zunahme des Volumens in der Gruppe der adulten K he im Vergleich zu den Jugendklassen beobachtet werden Der von MORITZ 2000 angegebene altersunabh ngige Referenzbereich von 5 07 9 73 fl konnte in dieser Untersuchung nur bedingt reproduziert werden Der Referenzbereich f r die Altersgruppe bis sechs Monate betr gt 3 30 4 48 fl f r die mittlere Altersgruppe bis 24 Monate 3 44 4 57fl und f r die Gruppe ber 24 Monaten ergab sich der Referenzbereich von 3 61 5 00 fl In der Gruppe der adulten Tiere besitzen die Fleckviehk he um 0 25 fl kleinere Thrombozyten als die schwarzbunten Tiere BEDDIES 1999 findet bei Schafen einen hnlichen Verlauf des MPV CHAPMAN 2001 beschreibt in einem Fallbericht ber gro e 170 Diskussion der Ergebnisse Thrombozyten bei einem Traumapatienten Die Mittlere Konzentration innerer Thrombozytenbestandteile bzw Thrombozytendichte ist von MACEY et al 1998 als Indikator f r die Thrombozytenaktivi
5. Abb 48 Altersabh ngige Entwicklung der Retikulozytenzahl f r die Rinderrassen schwarzbunte Holstein und Deutsch Fleckvieh Dargestellt sind Mittelwert sowie oberer und unterer Grenzwert bis zum Alter von 24 Monaten Regressionsgeraden gleichung SB DFV Normbereichsgrenze t Wert Signifikanzen Rasseabh ngigkeit Altersabh ngigkeit Freiheitsgrade SB DFV Altersgruppe lt 24 Monate y lg 1 16 0 014x y lg 1 07 0 014x 1g0 398 1 9739 p lt 0 05 p lt 0 001 n 108 n 67 Eigene Untersuchungen 127 40 O DFV SB SB DFV 35 30 E 25 20 2 o 15 Retikulozyten G I 10 Alter Jahre Abb 49 Altersabh ngige Entwicklung der Retikulozytenzahl f r die Rinderrassen schwarzbunte Holstein und Deutsch Fleckvieh Dargestellt sind Mittelwert sowie oberer und unterer Grenzwert f r die Altersgruppe zwischen zwei und zehn Jahren Regressionsgeraden Altersgruppe gt 2 Jahre gleichung SB y Ig0 85 DFV y lg0 78 Normbereichsgrenze 1g0 39 t Wert 1 9714 Signifikanzen Rasseabhangigkeit p lt 0 05 Altersabh ngigkeit n s Freiheitsgrade SB n 101 DFV n 111 F r die Parameter MCH MCHC RDW und HDW werden in Ergebnisse in den folgenden Tabellen zusammengefa t In Tabelle 29 sind die Ergebnisse des t Test 128 Eigene Untersuchungen f r den Einflu der Rasse abgebildet Tabelle 30 zeigt die Ergebnisse f r die Altersabhangigkeit Tab 29 Signifikanzen
6. Einen Abfall der Leukozytenzahl infolge einer Abnahme der neutrophilen Granulozyten w hrend der Hochlaktation wird von PAAPE 1974 beschrieben 36 Schrifttum Einen Abfall der Zahl der eosinophilen Granulozyten weniger als 100 Eosinophile mm beobachten BOSTEDT u BERCHTOLD 1968 bei K hen ante und peripartal Post partum konnte die Autoren eine Eosinophilie mit Mittelwerten gt 700 Eosinophile mm beobachten Vier Tage nach der Geburt konnten wieder Werte im Normbereich festgestellt werden Schrifttum 2 5 Altersspezifische Referenzbereiche Die Veranderungen der Blutbilder in Abhangigkeit vom Alter sind in vielen Arbeiten untersucht worden In den folgenden Tabellen 10 und 11 sind die Referenzbereiche fur Jersey und Holsteinrinder altersabhangig dargestellt Tab 10 Altersabhangige Leukozytenwerte weiblicher Jerseyrinder Altersabhangige Leukozytenwerte weiblicher Jerseyrinder Jain 1986 1 6 6 12 1 2 2 3 3 4 4 6 gt 6 Parameter Monate Monate Jahre Jahre Jahre Jahre Jahre Einheit G l n 16 n 10 n 14 n 31 n 28 n 14 n 28 wec X 875 7 75 9 00 9 40 7 70 7 75 7 70 s 2 50 1 80 2 50 1 75 1 90 1 10 2 50 Stab X 0 05 0 025 0 015 0 005 Neutr G s 0 075 900 900 gyo5 9 00 0 045 0 030 Segm X 3 00 0 80 2 35 2 15 1 90 1 80 1 80 Neutr G S 1 75 0 45 1 40 0 93 0 95 0 65 0 90 x 4 65 6 30 5 90 5 30 4 60 4 0 4 25 Lymph gt 130 150 160 120 105 os 205
7. komponentengleichung y mx b logarithmierte Werte Ig y Ig m x b Signifikanz f r alle Parameter ADVIA 120 Peroxidasef rbung Softwareversionen 1 4 Korrelationskoeffizient r Parameter Hauptkomponentengleichung y mx b Einheit f Version1 Version2 Version3 Version4 n 14 n 30 n 63 n 30 Neutrophile G 0 915 0 845 0 673 0 925 1 19x 0 17 1 31x 2 58 1 34x 2 96 1 08x 2 51 Lymphozyten 0 974 0 859 0 550 0 916 1 18x 0 31 1 21x 0 38 1 59x 1 06 1 13x 0 22 Monozyten 0 054 0 288 0 199 0 410 43 59x 39 22 5 22x 3 17 10 41x 6 88 4 22x 2 91 Eosinophile G 0 922 0 694 0 670 0 770 1 31x 0 35 1 56x 0 66 1 51x 0 79 1 74x 0 53 Basophile G n s p lt 0 05 logarithmierte Werte Eigene Untersuchungen 85 Tab 21 Korrelation der Werte des ADVIA 120 mit denen der zytochemischen F rbung ANAE f r die Parameter der Blutzelldifferenzierung vergleichend f r alle Softwareversionen r Korrelationskoeffizient Hauptkomponentengleichung y mx b logarithmierte Werte Ig y Ig mx b Signifikanz aller Parameter p lt 0 001 ADVIA 120 Naphtylesterasef rbung Softwareversionen 1 4 Korrelationskoeffizient r P arameter Hauptkomponentengleichung y mx b Einheit Version1 Version2 Version3 Version4 n 63 n 30 Neutrophile G 0 814 0 962 1 21x 0 70 1 02x 4 74 Lymphozyten 0 802 0 938 1 21x 0 40 1 02x 0 07 Monozyten 0 511 0 509
8. 0 70 x 4 55 CHCM mmol l 23 40 25 40 y 21 0 0 36 x 1 00 MCHC mmol l 21 10 23 30 y 20 99 0 29 x 1 08 MCH mmol l 0 70 0 80 5 RDW 17 95 22 78 y 19 19 0 29 x 2 4 HDW mmol l 1 40 1 70 y 1 71 0 043 x 0 16 Retikulozyten G I 10 2 15 2 y lg 1 16 0 014 x Ig 0 398 PLT Gil 154 90 943 10 y 713 41 x 394 12 MPV f l 3 40 4 50 a siehe bei Altersgruppe lt 24 Monate kein Alterseinflu 176 Zusammenfassung Fortsetzung Tab 40 Referenzbereich beim Formel der Regressionsgeraden gleichung zur Berechnung Granulozyten Parameter Alter von 4 Monaten altersabhangiger Referenzbereiche MPC g dl 22 70 27 10 y 23 47 0 36 x 2 20 MPM pg 0 74 0 92 y 0 87 0 01 x 0 09 PDW 36 90 85 10 amp PCDW g dl 4 44 5 32 WBC Gil 6 10 14 20 y Ig 0 89 0 02 x 0 18 ERSTER i Lymphozyten G I 4 10 9 90 y lg 0 66 0 037 x 0 19 Monozyten Gil 0 30 1 30 y lg 0 22 0 33 Eosinophile _ Granulozyten G l alte ei 1 23 4 46 y lg 0 32 0 012 x 0 28 Soren 4 90 36 50 y 32 33 2 91 x 15 78 Lymphozyten 50 80 79 00 y 55 89 2 25 x 14 07 Monozyten 2 Eosinophile Granulozyten i i Basophile 1 25 2 85 y Ig 0 34 0 009 x 0 18 siehe bei Altersgruppe lt 24 Monate kein Alterseinflu Tab 41 Zusammenfassung der Referenzbereiche f r
9. Abb 27 Stabilit t des mittleren Erythrozytenvolumens Dargestellt ist die prozentuale Abweichung vom Ausgangswert x S bei 4 C und 22 C Uber 72 Stunden n 10 Das mittlere Erythrozytenvolumen in Abbildung 27 dargestellt nimmt zu Beginn der Lagerung leicht ab um sich nach 36 Stunden Lagerung langsam dem Ausgangswert wieder anzugleichen Die Ursache hierf r liegt in einem Fl ssigkeitsverlust der zu einer Volumenabnahme der Erythrozyten f hrt dieses Ph nomen kehrt sich nach einer l ngeren Lagerung um so da das Zellvolumen wieder ansteigt Die Verlaufsuntersuchungen des Hamatokritwertes zeigen wie in Abbildung 28 ersichtlich den gleichen Verlauf Die Lagerungstemperatur hat auf dieses Ph nomen einen geringen Einflu 102 Eigene Untersuchungen HCT 60 S Lagerungstemperatur 22 C D Lagerungstemperatur 4 C 5 x Q ouen a x m 5p l 20 eb N DO ro a nn A 60 r T r T r T r T r T r T r T r 0 10 20 30 40 50 60 70 80 Zeit Stunden Abb 28 Stabilitat des Hamatokritwertes Dargestellt ist die prozentuale Abweichung vom Ausgangswert x S bei 4 C und 22 C ber 72 Stunden n 10 Der Einflu der unterschiedlichen Lagerbedingungen auf die Thrombozytengesamtzahl ist in Abbildung 29 zu dargestellt Hier zeigt sich da bei einer Lagerung bei 22 C bis 12 Stunden nach Blutentnahme die Zahl der Thrombozyten um f nf bis zehn Prozent zunimmt Nach diese
10. Die Zelldifferenzierung in Blutausstrichen Variabilitat der Ergebnisse Triangle 4 154 158 RUMKE C L BEZEMER P D KUIK D J A 1975 Normal Values and Least Significant Differences for Differential Leucocyte Counts J Chron Dis 28 661 668 RYAN G M 1971 Blood Values in Cows Erythrocytes Res Vet Sci 12 572 575 RYAN G M 1971 Blood Values in Cows Leukocytes Res Vet Sci 12 576 578 SACHS L 1992 Angewandte Statistik Anwendung Statistischer Methoden Springer Verlag SCARBOROUGH R A 1932 The Blood Picture of Normal Laboratory Animals Yale J Biol Med 4 69 70 SCHALM O W 1999 Manual of Bovine Hematology Lea amp Febiger Philadelphia SCHALM O W JAIN N C CAROLL 1975 Normal Values in Blood Morphology In Schalm Hrsg Veterinary Hematology Lea amp Febiger Philadelphia 152 156 200 7 Schrifttumverzeichnis SCHLERKA G BAUMGARTNER W 1983 Labordiagnostik in der Klauentierpraxis Die hamatologische Untersuchung Tierarztl Umschau 38 273 285 SEEGERS M 1997 Einsatzfahigkeit des Technicon H 1 in der hamatologischen Diagnostik beim Pferd Vetmed Diss Justus Liebig Universitat GieBen STEINHARDT M THIELSCHER H H HORN V T HORN V R ERMGASSEN K LADEWIG J SMIDT D 1994 Bemerkungen zur Hamoglobinkonzentration des Blutes bei Milchrindern verschiedener Rassen und ihren Nachkommen im peripartalen Zeitraum Tierarztl Praxis 22 2 129 135 STOB
11. Ein Referenzbereich wird von einer definierten Probandengruppe abgeleitet Eine Geltung f r alle Individuen einer Rasse oder Art ist damit nicht Verbunden KRAFT u D RR 1995 Der Referenzbereich liegt zwischen zwei Referenzgrenzen Diese Referenzgrenzen leiten sich aus einer mit ad quaten statistischen Methoden ermittelten hypothetischen Verteilung der Referenzwerte ab IFCC 1983b Bei der Erstellung von Referenzwerten m ssen Kriterien f r die Referenzindividuen und die Probenaufarbeitung definiert werden IFCC u ISCH 1987 Der IFCC hat dazu folgende sechs Punkte aufgestellt 1 Ein und Ausschlu kriterien der Referenzpopulation 2 Eigenschaften der Referenzpopulation wie Alter und Geschlecht der Individuen 3 Umweltbedingungen der Referenzpopulation und Entnahmebedingungen 4 Behandlung der Individuen bei Probeentnahme und der gewonnenen Proben 5 Genaue Spezifikation der verwendeten Analysemethoden 6 Verwendete statistische Methoden Die klassische statistische Methode zur Herstellung von Referenzbereichen ist die Bestimmung des arithmetischen Mittelwertes mit zweifacher Standardabweichung x 2s Diese Methode setzt voraus das die Daten einer Gau schen Normalverteilung unterliegen Dieses trifft in der Medizin f r die wenigsten Parameter zu Daher soll f r den Fall einer schiefen Verteilung die Berechnung von nicht parametrischen Normbereichen eingesetzt werden Parametrische Normbereiche sollten f r normalverteilte Merk
12. WATT JG 1967 Fluid Therapy for Dehydration in Calves J Am Vet Med Assoc 150 7 742 750 WEBER R 1992 MeBprinzipien in der Hamatologie MTA Extra 16 4 24 WEISS D J PERMAN V 1992 Assesssment of the Hematopoietic System in Ruminants Vet Clin North Am Food Anim Pract 8 411 428 WENZ B RAMIREZ M A 1987 The H 1 Hematology Analyzer Arch Path Lab Med 111 521 524 202 7 Schrifttumverzeichnis WESTGARD J O CAREY R N WOLD S 1974 Criteria for Judging Precision and Accuracy in Method Development and Evaluation Clin Chem 20 825 833 ZELMANOVIC D GARCIA R A TURRELL J 1992 Automated Instrumentation Haematology aus Kirk Othmer Encyclopedia of Chemical Technology 4 Edition 772 787 ZIEGLER A 1997 Die Automatische Blutzelldifferenzierung mit den Hamatologiesystemen Microx 70 und Technicon H 1 beim Hund Vet Med Diss Justus Liebig Universitat GieBen Danksagung 8 DANKSAGUNG Zuerst m chte ich mich ganz herzlich bei meinen Doktorv tern Herrn Prof Dr K Doll und HDoz Dr A Moritz f r die berlassung des Themas und die Unterst tzung bei der Anfertigung der Dissertation bedanken Mein besonderer Dank gilt HDoz Dr A Moritz der durch seine Kompetenz und seine F higkeit jederzeit motivierend Einflu zu nehmen entscheidend an der Fertigstellung dieser Arbeit beigetragen hat Allen Landwirten die durch Ihre tatkr ftige Mithilfe und geduldige Bereitschaf
13. ber 24 Monate Lebensalter zeigen einen langsamen Anstieg des Erythrozytenvolumens von 0 052 fl pro Jahr Bei einem Lebensalter von vier Jahren liegt das Erythrozytenvolumen zwischen 37 70 und 50 00 fl Ein Rasseeinflu ist nur in der Altersgruppe der 6 24 Monate alten Tiere zu bemerken Dabei liegt das Erythrozytenvolumen der Fleckviehrinder um 2 2 fl ber dem der SB POMSEL 1980 ermittelt bei den vier Monate alten Tieren die kleinsten Erythrozytenvolumina und gibt f r dieses Alter einen Mittelwert von 34 fl an damit liegt er Uber dem niedrigsten Wert dieser Untersuchung von 32 fl mit sechs Monaten hnliche Angaben sind auch bei MORITZ 2000 zu finden Alle brigen oben zitierten Autoren geben als Referenzbereich f r alle Altersgruppen zusammen einen um 10 bis 15 fl h heren Bereich an Eine Ursache daf r kann in der direkten Messung dieses Parameters liegen wohingegen in lteren Arbeiten der MCV aus H matokritwert und Erythrozytenzahl berechnet wurde Die Mittlere H moglobinkonzentration der Erythrozyten MCHC und der CHCM zeigen keinen alter bh ngigen Unterschied Ein Rasseunterschied besteht hier in der Altersgruppe der Tiere lter 6 Monate wobei das DFV einen um 0 2 0 5 mmol l niedrigeren Referenzbereich besitzt als das SB Rind Die Referenzbereiche zu ausgew hlten Zeitpunkten setzen sich wie folgt zusammen im ersten Lebensmonat ist der CHCM 20 36 22 35 mmol l sowie der MCHC 20 20 22 36 mmol l am niedrigsten
14. eeeeeeeeeeeeeeeeeseeeneeeeeeees 63 Hameglobinbesimmungs esse ee 64 Leukozytenbestimmung 444444444Hnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnn nen 64 Erythrozyten und Thrombozytenbestimmung uusrssss essen 65 Hamatokritzentrifuge H mofuge A 2uuusnennsssennnnnnnnnnnnnnnnn nn 67 FAarBUNgen esse eier 67 Panoptische F rbung nach Pappenheim PAN 67 Alpha Naphtylacetat Esterase F rbung ANAE 2000 68 Peroxidase F rbung POX cccceceeeeeeseeeeeeeeeeeeeeeeeeeseneeeeeeeeees 68 Retik lozytenf rb ng ce caioce vez cc acies Conecueisucu een 68 Statistische Methoden ccceeeeeeeeeccceeeeeeeeeeeeeeeaaeeeeeeeeeeeeeeeeeaaeees 69 Korrelationsanalyse 2 440uuuu44444nnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnn 69 Regressionsanalyse at se See Si ee ee ee ee 69 Varlanzanalysesnus een 70 Matched t Test Wilcoxon Test uuuennenennenennnnnennnnnennnnnnnnnnnnnn 70 Klassischer X 2s Referenzbereich cccccccccscccseesseeeseeeseeeseeeaes 70 Test auf Normalverteilung 224444400004444Hnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnn 71 Parametrische Referenzbereiche 24444444444nnnnnn nn 71 Nicht parametrische Referenzbereiche ccceeeeeeeeeeeeeeeteees 72 Altersabh ngigkeit der Referenzbereiche uursss nn 72 Rassenabh ngigkeit der Referenzbereiche
15. gt o s ne o GS __ FA EST Bree lens aa o TeV eet a Or e oe oe EN 2 eo o Oe 7 o _2__O o mm 0 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Alter Jahre Abb 63 Altersabhangige Entwicklung der Lymphozytenzahl fiir die Rinderrassen schwarzbunte Holstein und Deutsch Fleckvieh Dargestellt sind Mittelwert sowie oberer und unterer Grenzwert fur die Altersgruppe zwischen zwei und zehn Jahren Regressionsgeraden Altersgruppe gt 2 Jahre gleichung SB y Ig 0 789 0 004x DFV y Ig 0 789 0 004x Normbereichsgrenze 1g0 209 t Wert 1 97 Signifikanzen Rasseabhangigkeit n s Altersabhangigkeit p lt 0 001 Freiheitsgrade SB n 105 DFV n 135 146 Eigene Untersuchungen Abbildung 64 und 65 zeigen die Entwicklung der Monozytenzahl bis zum Alter von 10 Jahren f r die Rassen SB und DFV SS O DFV SB Rassenmittel 1 4 S 172 ee e gt 0 oe 102 5 ee ee Oaa L 0 S eo 0 8 e o r0 0 e o 5 fo e hd N eo 7 Q_ e J 2 0 6 Opes E rn ne Lo o Z e e ee a Rz e O Ome Qee o0 oad o RE gr ER oe ro R er OMe a oc Ooo CoP o e ans 2 0 0 he eS ue ee ae ra pe Sipe el 0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 Alter Monate Abb 64 Altersabhangige Entwicklung der Monozytenzahl fiir die Rinderrassen schwarzbunte Holstein und Deutsch Fleckvieh Dargestellt sind Mittelwert sowie oberer und unterer Grenzwert bis
16. lg 0 66 0 037 x 0 19 monocytes Gil 0 30 1 30 y lg 0 22 0 33 eosinophils G l basophils G l 1 23 4 46 y Ig 0 32 0 012 x 0 28 neutrophils 4 90 36 50 y 32 33 2 91 x 15 78 lymphocytes 50 80 79 00 y 55 89 2 25 x 14 07 monocytes eosinophils basophils 1 25 2 85 y Ig 0 34 0 009 x 0 18 see age group lt 24 month no influenze by age Summary 185 tab 44 Summary of age depending reference values for the age 6 24 month Reference values at 16 month of age Formula of the regression line to calculate agedepending reference values L German German parameter Holstein Fleckvieh noisteln Fleckvieh l f y 10 6 0 13x y 10 1 0 13 x RBC T I 6 70 10 30 6 20 9 80 oe nee HGB mmol l 6 00 8 60 HCT 1 1 0 25 0 37 y 0 32 0 001 x 0 06 i y 28 69 0 53x y 30 49 0 53 x MCV fl 31 40 43 00 33 20 44 80 os 15 78 i f y 23 18 0 03x y 22 58 0 03 x CHCM mmol l 22 20 25 10 21 60 24 50 eee wee i i y 22 50 0 05x y 22 17 0 05 x MCHC mmol l 21 80 24 50 22 00 24 70 ee 135 i y 0 64 0 014 x y 0 67 0 014 x MCH mmol l 0 70 1 00 0 80 1 00 a en RDW 17 30 23 50 16 60 22 70 i HDW mmol l 1 40 1 70 u i i y 647 0 14 0x y 714 9 14 0x PLT Gil 197 50 708 50 265 40 716 40 nee 20661 MPV f l 3 60 4 50 y 3 83 0
17. lter 2 Jahre R terenzbereich beim Formel der Regressionsgeradengleichung zur Berechnung altersabh ngiger Alter von 6 Jahren Referenzbereiche Schwarzbunte Deutsches Schwarzbunte Deutsches Parameter Holstein Fleckvieh Holstein Fleckvieh RBC T I 5 80 8 40 ERR HGB mmol l 5 40 8 00 a HCT I I 0 23 0 34 273 MCV fl 35 40 47 80 y 41 35 0 05 x 6 12 EICH 22 30 24 20 22 10 23 90 j 8 mmol l MCHG 21 90 24 70 21 60 24 40 K mmol l MCH mmol l 0 80 1 10 y 0 97 0 001 x 0 15 RDW 17 20 22 10 y 19 73 0 022 x 2 44 HDW mmol l 1 30 1 60 eee PLT Gil 186 50 597 10 as MPV f l 3 60 5 00 3 50 4 90 MPC g dl 24 30 28 30 23 60 27 70 i MPM pg 0 90 1 30 0 84 1 14 i i PDW 53 70 106 59 32 PCDW g dl 4 10 5 35 y 4 69 0 006 x 0 63 kein Alterseinflu kein RasseeinfluB kein Alters und Rasseeinflu 180 Zusammenfassung Fortsetzung Tab 42 Referenzbereich beim Alter von 6 Jahren Formel der Regressionsgeradengleichung zur Berechnung altersabhangiger Referenzbereiche Schwarzbunte Deutsches Schwarzbunte Deutsches Parameter Holstein Fleckvieh Holstein Fleckvieh Retikulozyten G l 4 60 9 50 3 50 8 50 u u y lg 1 02 0 002 x y lg 0 97 0 002 x WBC Gil 6 70 15 40 6 00 13 70 0 18 0 18 Neutrophile Granulozyten Gil i I Ly
18. 0 001 Eigene Untersuchungen 139 Tab 34 Regressionsgeradengleichung Normbereichsgrenze und t Wert fur die Parameter PDW und PCDW eingeteilt nach Rasse und Altersgruppe Thrombozytenverteilungsbreite Regressionsgeraden lt 6 Monate 6 24 Monate gt 2 Jahre gleichung SB y 61 0 60 73 0 55x 79 88 DFV y 61 0 55 64 0 55x 79 88 Normbereichsgrenze 24 08 20 16 26 71 t Wert 2 0262 1 9908 1 9837 Verteilungsbreite der Thrombozytendichte Regressionsgeraden lt 6 Monate 6 24 Monate gt 2 Jahre gleichung SB y 4 88 4 73 4 69 0 006x DFV y 4 88 4 73 4 69 0 006x Normbereichsgrenze 0 44 0 58 0 63 t Wert 2 0262 1 9908 1 9837 140 Eigene Untersuchungen 3 2 6 3 Referenzbereiche f r die Parameter des wei en Blutbildes Abbildung 58 und 59 zeigen die Entwicklung der Leukozytenzahl bis zum Alter von 10 Jahren f r die Rassen SB und DFV 16 O DFV SB Rassenmittel a 14 ae en a ea IR Or Wir a ey a PRS Sed agen A GE 8s 4 ae oc e O 1 2 e O fe 6 va o o o b go gt e Bes se o ee oo o 10 de os ee we u Os ee amp 8 Oo 0 Q Te gt e sg es oat Ong o m gte 7 A 8 R Eo e o 3 Ce o o o fo Ob e e oo O Pee i ala sr ee en a Be o 9 z g 4 2 een ee cr fe Ca N R S a a 0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 Alter Monate Abb 58 Altersabhangige Entwicklung der Leukozytenzahl fiir die Rinderrassen schwarzbunte Holstein und Deutsch Fleckv
19. 2 gro e Thrombozyten 3 Erythrozyten 4 Erythrozyten Fragmente 5 Zelltrummer 6 leere Erythrozytenmembranen n oberer und unterer Brechungsindex Abb 13 Thrombozytenzytogramm PLT 784 G l MPV 5 5fl MPC 26 6 g dl Rind Nr 224 3 1 2 2 6 Retikulozytenmethode Der ADVIA120 gibt bei der Retikulozytenanalytik folgende Parameter aus Retikulozytenzahl Retic sowie Retikulozyten mit geringem L Retic mittlerem M Retic und hohem H Retic Gehalt an RNA in Prozent und als Absolutwert Weiterhin werden das mittlere Retikulozytenvolumen rMCV und die mittlere H moglobinkonzentration der Retikulozyten rCHCM bestimmt Die Aufbereitung der Probe erfolgt auf die gleiche Weise wie bei den Erythrozyten Die aufgekugelten Zellen werden mit dem Chromogen Oxaxin 750 gefarbt um vorhandene RNA anzuf rben Mit Hilfe der Lichtabsorptionsmessung kann zwischen vier Reifungsstufen der Erythrozyten unterteilt werden 60 Eigene Untersuchungen 1 Reife Erythrozyten ohne RNA Neg RBC 2 Retikulozyten mit geringem RNA Gehalt L RETIC 3 Retikulozyten mit mittlerem RNA Gehalt M RETIC 4 Retikulozyten mit hohem RNA Gehalt H RETIC Die Signale des Gro winkelstreulichts werden auf der x Achse des Retikulozytenzytogramms aufgetragen und geben den Grad der Absorption des Lichtes wieder Zellen mit hohem RNA Gehalt befinden sich in Abbildung 14 in Feld D Aus den Kleinwinkelstreulichtsignalen l t sich Gr e der Zellen able
20. 78 4 1938 Sample Type PATIENT M Retic 15 7 338 EEE NE H Retic 5 9 147 System IRF H 5 3 Sequence 3 IRF M H 21 6 Species Cattle Playback RTC Cells Acquired 11980 FOR LABORATORY USE ONLY RTC Cells Analyzed 11151 RTC Gated Cells 11096 Hide Run Screen Information Retic Count WEC 10 40 x10 cells L Retic Scatter Abs RBC 1 28 x10 2cellsf L HGB 1 8 m mol L HET 0 108 L L Moy 84 2 fL MCH 1 41 fmol MCHC 16 71 m mol L CHCM 18 05 mmol l CH 1 49 fmol CHDW 0 32 fmol RDW 26 4 8 HDW 2 28 m mol L PLT 32 x10 cells L MPN 7 4 STE PDW 60 3 9 FET 0 000 SARE Abb 69 Ergebnis des ADVIA 120 f r die Erythrozyten und Retikulozytenz hlung bei einem Rind mit regenerativer An mie Der Untersuchungszeitpunkt liegt 12 Tage nach der ersten Messung Die Abbildung 70 auf der nun folgenden Seite zeigt den Zustand 26 Tage nach der ersten Messung Die Retikulozyten sind nahezu nicht mehr vorhanden 1 8 Gil 0 1 Der Hamatokritwert ist auf 0 161 L L angestiegen und die Erythrozytenzahl ist auf 2 81 T l angestiegen Die Erythrozytenmorphologie zeigt noch ein geringgradig hypochromes makrozytares Verteilungsbild Zu diesem Zeitpunkt werden nur noch reife Erythrozyten aus dem Knochenmark entlassen 158 Diskussion der Ergebnisse SID ORTSIEFER Time amp Date 13 09 99 09 21 37 Neg RBC 33 9 23483 Retic 0 1 1 8 Selectivity CBC DIFF RETIC L Retic 367 13 Sample Type PATIEN
21. BER u GR NDER finden sich auch bei KRAFT 1997 und bei SCHALM 1977 Die statistische Auswertung der Anzahl der neutrophilen Granulozyten erfolgte in zwei Gruppen Dabei konnte sowohl in der Gruppe mit den Tieren j nger als 24 Monate als auch bei den Rindern lter als 24 Monate kein signifikanter Einfu auf die Referenzbereiche festgestellt werden Der Referenzbereich f r die Tiere bis 24 Monaten liegt bei 1 09 4 82 G l und f r die erwachsenen Rinder lautet der Referenzbereich 1 77 5 53 G l MORITZ 2000 und DUFFIELD 2000 geben f r adulte Rinder bez glich des oberen Grenzwertes geringf gig h here Werte an Eine hnlich gute bereinstimmung liegt auch f r die Lymphozytenz hlung vor MORITZ 2000 gibt hier 2 72 8 75 G I an F r vier Wochen alte K lber liegt der Referenzbereich zwischen 3 18 und 7 69 G l Mit zunehmendem Alter erfolgt ein langsamer Anstieg der Werte so da im Alter von sechs Monaten 4 50 10 75 G l Lymphozyten im Blut zirkulieren Bei Rindern lter 24 Monate f llt die Leukozytenzahl wieder ab Der Referenzbereich bei einem Alter von 8 Jahren betr gt 3 53 9 25 G l POMSEL 1980 findet bei Rindern mit vier Monaten die h chste Lymphozytenzahl KRAFT 1997 sowie ST BER u GR NDER 1990 geben den oberen Grenzwert f r adulte Rinder mit 5 50 G l an Der von ST BER u GR NDER 1990 ermittelte Referenzbereich f r K lber deckt sich mit den eigenen Untersuchungen F r die Gruppe der Monozyten ist
22. Berichterstatter Tag der m ndlichen Pr fung Prof Dr Dr h c Bernd Hoffmann HDoz Dr Andreas Moritz Prof Dr Klaus Doll 2 Juli 2002 Meinem Vater INHALTSVERZEICHNIS 1 EINLEITUNG 2 2 cs 1 2 SCHRIFTTUM na 2 2 1 Geschichtlicher barblick nu 2 2 2 H matologische MeBtechniken 442444444440Hnnnnnn anne 4 2 2 1 Manuelle Blutzellz hlung us444444444444BBRRnnnnnn anne 4 2 2 2 Bestimmung der H moglobinkonzentration sssssss sen 6 2 2 3 Manuelle Blutzelldifferenzierung 2444444444000nnnnn nennen 7 2 3 Automatische Analyseverfahren 24444444440Rnnnnn nn 8 2 3 1 Durchflu zytometrie uuu444444444444HHHnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnn 9 2 3 2 Widerstandsmessung 4444444444400nnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnn 10 2 3 3 Optoelektrische Me methode 224444444400nnnnnnn nennen 11 2 4 Eval ationsrichtlinie Nnnna A 13 2 5 Referenzbereiche h matologischer Parameter beim Rind 20 2 5 1 Rotes Blutbild und Retikulozyten 2224444440000nHn nenn 22 2 5 2 Wei es Blutbild 220228 eeeeees 28 2 5 3 FAromMDOZytE aenaran ae ia aee ia aa a AAE E E 31 2 5 4 Vergleichsuntersuchungen ADVIA 120 eeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeteeees 32 2 5 5 Rassespezifische Referenzbereiche cccccccceeeeeeeeeeeeeeeeeeeeees 33 2 5 6 Gesc
23. Die berpr fung der Linearit t ber den gesamten vom Hersteller angegebenen Me bereich soll an allen Parametern H moglobingehalt Leukozyten Erythrozyten und Thrombozytenzahl die durch Verd nnung bzw Konzentration beeinflu t werden erfolgen Unter Verwendung geeichter Me instrumente werden zehn Verd nnungsstufen f r den jeweiligen Parameter angefertigt Me gr en die keiner Ver nderung durch eine Verd nnung unterliegen wie z B Thrombozyten und Erythrozytenindizes d rfen keine bedeutenden Abweichungen zeigen Der am Ende der Evaluation anzufertigende Abschlu bericht enth lt die Ergebnisse der statistischen Auswertung Erl uterungen in den dazugeh rigen Anh ngen und die Beurteilung der Handhabung des Ger tes und der Software Des weiteren sollen die Kosten f r Verbrauchsmaterial aufgef hrt und eine Empfehlung ber den klinischen Einsatz bei der Erstellung von Diagnosen und berwachung von Therapien gegeben werden 2 5 Referenzbereiche h matologischer Parameter beim Rind Die Untersuchung von Blutbildern gibt dem Untersucher wertvolle Hinweise zur Diagnostik von Krankheiten So zeigen sich bei vielen Rinderkrankheiten Schrifttum 21 pathognostische Ver nderungen der Blutk rperchen in ihrer Zahl und oder in ihren morphologischen Eigenschaften ST BER u GR NDER 1990 Die Ergebnisse einer klinischen Untersuchung von Patienten werden mit einem Referenzbereich von klinisch gesunden Individuen verglichen
24. Die Ergebnisse einer Evaluation dienen dem Benutzer dieser Systeme als Sicherheit da das Ger t die vom Hersteller angegebenen Leistungen erbringt VON R CKER et al 1994 MORITZ 1999 Zur Durchf hrung von Evaluationen an H matologiesystemen f r den Einsatz in der Humanmedizin ist von der Sektion H matologie der Arbeitsgruppe Ger teevaluation und der Arbeitsgruppe Labor H matologie der Deutschen Gesellschaft f r Klinische Chemie 1994 das Evaluationsprotokoll f r h matologische Zellz hl und Zelldifferenzierungsger te VON R CKER et al 1994 erarbeitet worden Ebenfalls aus dem Jahr 1994 stammen die Richtlinien des International Committee for Standardization ICSH Guidelines for evaluation of blood cell analysers including those used for differential leukozyte and reticulocyte counting and cell marker applications ENGLAND et al 1994 bei denen es sich um eine berarbeitung der Richtlinien Protocol for evaluation of automated bloodcell counters aus dem Jahre 1984 handelt Von R CKERT 1994 teilt in Anlehnung an ENGLAND 1984 die Evaluation in f nf Arbeitsschritte die im Folgenden dargestellt werden In der Vorphase werden die Einrichtungen mindestens drei Multicenter Evaluation welche die Evaluation durchf hren ausgew hlt und ein ausf hrliches Pr fprotokoll mit einem detailliertem Zeit und Finanzierungsplan erstellt In der Pr fphase I erfolgt die Ausbildung des Personals am Ger t was vom Herstell
25. Einschl sse Qualitative Ver nderungen der Lymphozyten Qualitative Ver nderungen der Monozyten Auftreten von Vorstufen Blasten oder nicht klassifizierbaren Zellen N O 0 A Thrombozytenmorphologie Verteilung Aggregate Gr e Formen 8 Schrifttum Zur Beurteilung dieser Kriterien wird der Ausstrich im letzten Drittel m anderf rmig durchgemustert da hier die Zellen einzeln liegen und die Innenstruktur der Leukozyten optimal beurteilt werden kann KOEPPEN u HELLER 1991 KRAFT et al 1997 Die Aussagekraft manuell erstellter Blutbilder ist in hohem Ma e abh ngig von den F higkeiten des Untersuchers und der Anzahl der ausgez hlten Zellen BACCUS 1973 VerteilungsunregelmaBigkeiten der Blutzellen infolge mangelhafter Ausstrichtechnik BARNETT 1933 und Interpretationsfehler bei der Differenzierung der einzelnen Blutzellgruppen BACCUS 1973 haben einen mehr oder weniger gro en Einflu auf die Ergebnisse Der Statistische oder Zufallsfehler stellt bei der Differenzierung von 100 oder 200 Blutzellen die Hauptfehlerquelle dar Durch eine Differenzierung von 400 Zellen verdoppelt sich die Pr zision und bei einer Differenzierung von 10 000 Zellen was nur in Automaten erreicht werden kann wird die Pr zision um das Zehnfache gesteigert R MKE 1960 R MKE et al 1975 2 3 Automatische Analyseverfahren Die Entwicklung und Benutzung automatischer H matologiesysteme erfolgt mit dem Ziel kosteng nstige und
26. HEINRITZI K 1999 H matologie In Kraft W und D rr Hrsg Klinische Labordiagnostik in der Tiermedizin Schattauer Verlag Stuttgart 43 77 7 Schrifttumverzeichnis 197 LORENZ R J 1996 Grundbegriffe der Biometrie Gustav Fischer Verlag Stuttgart LOSCH U C J ERHARD M H KASPERS B 2000 Blut und Abwehr In Engelhardt W v Breves G Hrsg Physiologie der Haustiere Enke Verlag Stuttgard 190 216 LUMSDEN J H ET A 1974 The Piromen Test as an Assay of Bone Marrow Granulocyte Reserves in the Calf Studies on Bone Marrow and Peripheral Blood Leukocytes Can J Comp Path 35 38 Macey M G Carty E Webb L Chapman E S Zelmanovic D Okrongly D Rampton D S Newland A C 1999 Use of Mean Platelet Component to Measure Platelet Activation on the ADVIA 120 Haematology System Cytometry 38 250 255 MAMMERICKX M LORENZ R J STRAUB O C DONNELLY W J FLENSBURG J C GENTILE G MARKSON L M RESSANG A A TAYLOR S M 1978 Bovine hematology Ill Comparative Breed Studies on the Leukocyte Parameter of Several European Cattle Breeds as Determined in the Common Reference Laboratory Zbl Vet Med B 25 4 257 267 MAMMERICKX M LORENZ R J STRAUB O C DONNELLY W J FLENSBURG J C GENTILE G MARKSON L M RESSANG A A TAYLOR S M 1978 Bovine hematology IV Comparative Breed Studies on the Erythrocyte Parameters of 16 European Cattle Breeds as Dete
27. PCT mittlere Thrombozytendichte MPC dies entspricht dem CHCM der Erythrozyten Thrombozytendichteverteilungsbreite PCDW mittlere Thrombozytenmasse MPM und deren Verteilungsbreite PMDW gro e Thrombozyten Large PLT Erythrozyten Fragmente und leere Membranen RBC fragments ghost sowie die Anzahl der Thrombozytenaggregate PLT clumps Die chemische Aufbereitung gleicht der der Erythrozyten s Kapitel 3 1 2 2 4 Die aufgekugelten Thrombozyten werden in der Flu zelle von einem Laserstrahl durchleuchtet Entstehendes Streulicht wird im Gro winkel um das 12 fache und im Kleinwinkel 30 fach verst rkt Die Signale der Thrombozyten werden in ein Zytogramm bertragen Abbildung 11 zeigt das RBC Scatter mit der Thrombozytenwolke Eine Vergr erung der Thrombozytenwolke aus Abbildung 11 ist das PLT Volume PC Zytogramm Abbildung 13 58 Eigene Untersuchungen RBC Scatter PLT Yolume PC Abb 11 Erythrozytenscattergramm Abb 12 Thrombozytenzytogramm Rind Nr 224 Rind Nr 224 Die verst rkten Thrombozytensignale werden im Thrombozytenzytogramm PLTVolume PC Abbildung 12 dargestellt Auf der X Achse wird die Dichte Brechungsindex von 0 40 g dl aufgetragen und auf der Y Achse das Thrombozytenvolumen von 0 60 fl Abbildung 13 zeigt das PLT Scattergramm Dargestellt sind die Zusammenh nge von Brechungsindex und Volumen der Zellpopulation Eigene Untersuchungen 59 PLT Scatter v 30fl 1 Thrombozytenwolke
28. c In der Formel mu f r ZL die Zahl der gez hlten Zellen eingesetzt werden a ist der Verd nnungsfaktor 10 und f r b mu der Multiplikationsfaktor 10 eingesetzt werden der die Schichth he der Kammer von 0 1 mm auf 1 mm umrechnet C ist die Anzahl der ausgez hlten Quadrate 4 Die Erythrozytenzahl wird im mittleren Quadrat der neun Felder ermittelt Dazu werden f nf der 25 Unterquadrate ausgez hlt wobei die Felder ausgez hlt werden die das Quadrat diagonal durchlaufen Wie bei der Leukozytenz hlung bestimmt die Lage einer Zelle zur Seitenlinie ob sie mit in die Berechnung einbezogen wird Die Formel f r die Berechnung der Erythrozytenzahl pro ul Blut lautet 6 Schrifttum ZExaxbxd c ZE ist die Gesamtzahl der gez hlten Erythrozyten und d steht f r die Anzahl der Quadrate innerhalb des Erythrozytenz hlfeldes konstanter Faktor 2 Zur Bestimmung der Thrombozytenzahl wird nach H molyse der Erythrozyten die Z hlkammer beschickt und im Phasenkontrast bzw Hellfeldverfahren bei 400facher Vergr erung ausgez hlt Zur Bewertung kommen f nf Gruppenquadrate von zusammmen 0 02 ul Volumen Die Berechnung erfolgt nach der Formel ZTx20 0 02 Die Formel setzt sich zusammen aus der gez hlten Thrombozytenzahl ZT der Verd nnungsstufe 1 20 und dem Volumen der ausgez hlten Quadrate HALLMANN 1980 Die Ergebnisse der Kammerz hlung unterliegen einer gro en Variation da sowohl die Verteilung der Zellen in de
29. r laktierende Rinder F rsen und Fresser bestand in allen Herden aus Gras und Maissilage mit unterschiedlichen Leistungsfutterzus tzen Die K lber erhielten Milchaustauscher und dem Alter entsprechend Heu Die durchschnittliche Jahresmilchleistung lag in den Betrieben mit Schwarzbunten K hen etwa bei 8200 kg und in Fleckviehbetrieben um 6500 kg Das ergibt einen Unterschied von 1700 kg Milch zwischen den Rassen Der Betrieb mit der besten Herdenleistung erzeugte 10200 kg Milch pro Tier und Jahr SB die niedrigste Herdenleistung lag bei 5000 kg pro Tier und Jahr DFV In den Schwarzbuntenherden betrug die Spannweite der Herdenleistung 3500 kg Milch und in den Fleckviehherden 2500 kg Die Altersverteilung der untersuchten Tiere ist in der folgenden Tabelle dargestellt Eigene Untersuchungen 43 Tab 14 Erstellung von Referenzbereichen mit dem ADVIA 120 Anzahl untersuchter Rinder pro Rasse und Altersverteilung Schwarzbunte Fleckvieh AltersgruppengroBe Holsteien d Referenzbereiche n 213 n 219 Anzahl Prozent Anzahl Prozent SB DFV Alter 1 6 19 8 9 21 9 5 19 21 Monate 6 12 15 7 0 17 7 7 Monate 89 63 12 24 74 34 7 46 20 9 Monate 24 36 26 12 2 48 21 8 Monate 36 48 24 11 3 25 11 4 105 135 Monate gt 60 55 25 9 62 28 6 Monate 3 1 1 1 Blutentnahme Die Blutproben f r die Evaluation des ADVIA 120 wurden mit einer sterilen Einmalkan le 17 bzw 18 G durch Punktion der mittels Staukette gestauten Vena
30. rbung Korrelationskoeffizient Erythrozytenzahl Red Blood Cells Red Cell Count relative Differenz Erythrozyten volumen verteilungsbreite Red Cell Volume Distribution Width Standardabweichung siehe Seite schwarzbunte Holstein Standardabweichung der Differenz Streuung innerhalb der Probe Tabelle unter anderem Mikroliter vergleiche absolute Zahl der gro en Leukozyten relative Zahl der gro en Leukozyten absolute Zahl der kleinen Leukozyten relative Zahl der kleinen Leukozyten Leukozyten gesamt zahl White Blood Cells Total Leucocyte Count Mittelwert Abkurzungsverzeichnis Einleitung 1 1 EINLEITUNG Die Untersuchung von Blutbildern gibt dem Untersucher wertvolle Hinweise in der Diagnostik von Krankheiten So zeigen sich bei vielen Rinderkrankenheiten pathognostische Ver nderungen der Blutk rperchen in ihrer Zahl und oder in ihren morphologischen Eigenschaften ST BER und GR NDER 1990 Die technische Weiterentwicklung von automatischen Laboreinheiten zur Erstellung umfangreicher Blutbilder er ffnet der Medizin neue diagnostische M glichkeiten Vor dem Einsatz dieser Systeme steht eine ausf hrliche klinische Validierung aller relevanten Parameter an jeder einzelnen f r dieses System vorgesehenen Spezies Dabei mu das Augenmerk gleicherma en auf etablierte Parameter wie auch auf neue Parameter die nach genormten Richtlinien evaluiert werden gerichtet sein In dieser Arbeit werden f r das Ri
31. wird automatisch in einen Bereich zwischen 40 und 60 fl gesetzt und markiert damit den Beginn der Leukozytenpopulation An der 300 fl Markierung befindet sich ebenfalls ein Diskriminator der auf Abbildung 17 nicht sichtbar ist Alle Ereignisse die sich zwischen diesen beiden Diskriminatoren befinden werden als WBC angegeben Der mit 2 bezeichnete Diskriminator Taldiskriminator teilt die Leukozyten in zwei Gruppen Die erste Gruppe setzt sich bei Humanproben laut Herstellerangaben aus Lymphozyten zusammen Die Zellgruppe oberhalb des Taldiskriminators umfa t alle Granulozyten und Monozyten Beide Werte werden absolut und prozentual angegeben 3 1 4 3 Erythrozyten und Thrombozytenbestimmung Die Erythrozyten und Thrombozytenzahl werden aus der 1 50 000 Verd nnung in einem eigenen Me kanal bestimmt Die Signale der Widerstandsmessung werden in je ein Histogramm eingetragen Der F 800 setzt die Diskriminatoren f r das Erythrozyten Histogramm automatisch zwischen 25 75 fl unterer Diskriminator und 200 250 fl oberer Diskriminator und f r das Thrombozyten Histogramm zwischen 66 Eigene Untersuchungen 2 6 fl unterer Diskriminator und 6 30 fl oberer Diskriminator Bei Proben die Zellgr en au erhalb dieser Voreinstellung aufweisen ist eine manuelle Korrektur der Diskriminatoren m glich Der H matokritwert wird durch die kumulative Impulsh hensummierung berechnet Hierzu addiert der Automat alle Impulsh hen der Widerstandsmessu
32. wird durch Abzug der basophilen Granulozytenzahl von den nahezu Peroxidase negativen Zellen aus Feld Nr 2 berechnet Monozyten werden im Feld Nr 4 gez hlt Sie weisen beim Rind eine geringere Peroxidaseaktivit t auf als diejenigen des Menschen Im Feld Nr 5 wird die Zellgruppe der LUC bestimmt und beim Differentialblutbild ausgewiesen Liegt der Anteil von LUC ber einem festgesetzten Prozentwert wird das Ergebnis mit einem Stern gekennzeichnet und die Probe mu erneut gemessen bzw einer manuellen Untersuchung unterzogen werden Normoblasten Thrombozytenaggregate und Rauschen Felder Nr 6 7 8 werden beim Rind zu einem Ereignisfeld zusammengefa t Die Ergebnisse f r die Gesamtleukozytenzahl aus dem Peroxidasekanal werden mit den Ergebnissen aus dem Basokanal verglichen Bei auftretenden Unterschieden werden die betroffenen Ergebnisse mit einem Stern gekennzeichnet und eine Fehlermeldung angezeigt Durch eine interne Plausibilit ts und Fehlerkontrolle berwacht das System die Ergebnisse so da Fehlmessungen eindeutig zu erkennen sind und die Probe einer erneuten berpr fung unterzogen werden kann In der nun folgenden Abbildung sind alle von einer Messung im System verf gbaren Daten aus dem Peroxidasekanal dargestellt 54 Eigene Untersuchungen Abb 09 Ausdruck der Me daten des Peroxydasekanals als Beispiel f r die im System verf gbaren Informationen zu einer MeBmethode Rind Nr 224 Eigene Untersuchungen 55 Man ka
33. 0 0 0 0 0 0 Werte in SI Einheiten umgerechnet KLEE et al 1979 untersuchten die prognostische und diagnostische Information von Blutharnstoff und Hamatokritwert bei K lberdiarrhoe Die Heilungsaussicht verschlechtert sich signifikant bei einem HCT Uber 0 5 I I und Harnstoffwerten Uber 28 45 mmol l Nach WATT 1967 besteht schon ab einem Hamatokritwert von 0 55 I eine schlechte Prognose und nach MANOIU 1973 schon ab einem Wert Uber 0 45 II DOLL 1991 beschreibt Hamokonzentrationen bei Kalbern mit Werten zwischen 0 40 und 0 50 1 1 bei St rungen der Mikrozirkulation von Darmabschnitten bei Darmscheibendrehung oder Volvulus jejuni Weitere Ursachen k nnen auch Labmagentorsionen und Inkarzerationen der Pars pylorica des Labmagens oder des Duodenums sein Dabei ist der Verlust von Fl ssigkeit die ins Darmlumen sezerniert wird fur den Anstieg des HCT verantwortlich Schrifttum 27 HOFMANN 1972 weist auf den Zusammenhang zwischen der Verabreichung furozolidonhaltiger Praparate und hamorrhagischer Diathese bei Kalbern hin Die Tiere entwickeln eine Panzytopenie mit m iger An mie ausgepr gter Agranulozytose und Thrombozytopenie Hayashi 1976 berichtet in diesem Zusammenhang von 4 K lbern die aufgrund der Panmyelophiphtise und der h morrhagischen Diathese Erythrozytenwerte von 3 3 5 4 T l Hamatokritwerte zwischen 0 12 0 261 l und einen Hamoglobingehalt von 2 2 bis 4 2 mmol l aufwiesen OGAWA e
34. 012x 0 46 MPC g dl 4 10 28 30 2300 8720 F5070072 x y 28 98 40 072 x 2 1 2 1 i y 0 92 0 006x y 0 86 0 006 x MPM pg 0 91 1 13 0 85 1 07 ee il i i y 60 73 0 55x y 55 64 0 55 x PDW 49 40 89 69 44 28 84 60 Ries ote PCDW g dl 4 15 5 31 ee age lt 24 month no influence by age no influence by breed no influence by age and breed 186 continuation tab 41 Summary Reference values at 16 month of age Formula of the regression line to calculate age depending reference values Holstein German Holstein German parameter hee Fleckvieh re Fleckvieh retikulocytesG I 10 2 15 2 y Ig 1 16 0 014x lg 0 398 WBC Gil 6 34 13 90 y g 1 02 0 003 x 0 17 neutrophils G l 1 80 5 60 1 40 4 50 i lymphocytes Gil 4 10 9 80 y lg 0 87 0 004 x 0 189 monocytes Gi l 0 20 1 10 y lg 0 08 0 013 x 0 33 f f y lg 0 98 0 027 y lg 1 10 0 027 x eosinophils G l 0 01 1 23 0 05 0 94 x 0 64 0 64 basophils G l 0 06 0 21 y lg 0 65 0 019 x 0 28 RER _ 7 y 21 01 0 22 x 27 04 0 22 x neutrophils 11 20 37 90 17 20 43 90 13 32 13 32 o i i y 67 91 021x y 64 47 0 21 x lymphocytes 57 70 84 90 54 25 81 40 13 58 13 58 monocytes z 4 20 13 00 y lg 0 91 0 01 x 0 25 le o _ 5 y lg 0 98 0 027 x y lg 0 98 0 027 x eosinophils 4 20
35. 36 0 G L auf 19 0 G l Bei Rindern ber 24 Monaten konnte in dieser Untersuchung ein Referenzbereich von 2 84 17 26 G l etabliert werden Diese Ergebnisse der Diskussion der Ergebnisse 169 Retikulozytenz hlung m ssen immer im Zusammenhang mit der geringen Wiederholbarkeit der Me ergebnisse bei Proben mit geringen Retikulozytenzahlen gesehen werden Unter gleichem Vorbehalt gibt MORITZ 2000 einen Referenzbereich von 1 89 95 95 G l an ST BER u GR NDER 1990 geben f r K lber einen oberen Grenzwert von 100 G I an Nach Angaben der brigen Autoren finden sich bei gesunden K lbern keine Retikulozyten im Blut 4 2 2 Parameter der Thrombozytenz hlung Die Thrombozytengesamizahl ist in den ersten Lebensmonaten sehr variabel Dementsprechend umfa t der Referenzbereich eine gro e Spanne Im Alter von zwei Monaten liegt der untere Grenzwert bei 237 G I und der obere Grenzwert bei 1025 G l Mit zunehmendem Alter verkleinert sich die Spannweite Mit 16 Monaten liegt der Referenzbereich zwischen 197 648 G l Gleiche Ver nderungen werden von BEDDIES 1999 f r das Schaf beschrieben Alter von 24 Monaten betr gt der Referenzbereich 186 596 G I zu diesem Zeitpunkt besitzt das Alter keinen Einflu mehr auf die Thrombozytenzahl Der Rasseeinflu zeigt sich nur in der mittleren Altersgruppe in der Art da beim Fleckvieh um 50 G I h here Werte angegeben werden m ssen MORITZ 2000 gibt unabh ngig vom Alter eine Spanne von 155
36. 9 50 3 50 8 50 i _ Br y lg 1 02 0 002 x y lg 0 97 0 002 x WBC Gil 6 70 15 40 6 00 13 70 0 18 0 18 neutrophils G l 1 80 5 60 1 40 4 50 i Lymphocytes Gi l 3 60 9 40 Ig 0 789 0 004 x 0 21 monocytes Gi l 0 25 0 90 0 20 0 70 i 7 u y lg 0 38 0 002 x y Ig 0 30 0 002 x Eosinophils G l 0 13 1 28 0 15 1 54 0 50 0 50 P _ y lg 0 94 0 008 x y lg 1 05 0 003 x basophils G l 0 05 0 23 0 04 0 18 0 32 0 32 neutrophils 18 50 43 80 y 30 43 0 12 x 12 65 lymphocytes 38 50 65 10 y 58 66 1 14 x 13 31 monocytes 2 60 7 80 y Ig 0 66 0 001 x 0 24 eosinophils z 0 40 3 40 y lg 0 60 x 0 47 basophils 0 63 1 93 y lig 0 049 0 001 x 0 24 no influence by age no influence by breed no influence by age and breed 7 Schrifttumverzeichnis 189 7 SCHRIFTTUMVERZEICHNIS ACKERMANN H 1983 Sind x 2s Bereiche n tzliche Diagnostische Hilfsmittel Med Welt 34 7 212 215 AHNADI C E CHAPMAN E S OKRONGLY D HOANG T LUCENA FERNANDES F GRANT A M 2001 Evaluation of Platelet Activation in Patients with Chest Pain by the ADVIA 120 Hematology System http mmserver cjp com gems blood PlateletActivation pdf AMAKIRI S F NGERE L O OLUSANYA S K IKEDE B O 1979 Crossbreeding of Exotic and Indigenous Cattle in Nigeria Haematological Co
37. Cattle Breed Sex and Year Differences Can J Comp Med 41 13 18 DOTSON M A 1998 Multiparameter Hematology Instruments In Stiene Martin E A Lotspeich Steininger C A and Koepke J A Clinical Hematology Lippincott Philadelphia 519 551 D RNER K SCHULZE S REINHARDT M A 1993 Erste Evaluationsergebnisse mit dem H matologiesystem Cell Dyn 3500 Klin Lab 39 39 44 DUFFIELD PEREGRINE SMITH 2000 Hematology Reference Intervals http www uoguelph ca ahl UsersGuide 19_HEMATOLOGY_REF_INTERVALS htm EDER H 1987 Scheunert Trautmann Hrsg Lehrbuch der Veterin r Physiologie Paul Parey Verlag Berlin und Hamburg EDER H FRITSCHE H A 1986 Automatisation in der h matologischen Diagnostik Entwicklungsstand der Ger te zum Z hlen und Differenzieren von Blutzellen Tier rztl Praxis 14 417 429 EISENSMITH S P 1994 PlotIT for Windows Scientific Programming Enterprises Haslett MI 48840 USA 194 7 Schrifttumverzeichnis ENGLAND J M ROWAN R M VAN ASSENDELFT O W BULL B S COULTER W H FUJIMOTO K GRONER W JONES A R KOEPKE J A LEWIS S M SHINTON N K TATSUMI N THOM R VERWILGHEN R L MCLAREN C E 1994 Guidelines for the Evaluation of Blood Cell Analysers Including Those Used for Differential Leucocyte and Reticulocyte Counting and Cell Marker Applications Clin Lab Haematol 16 2 157 174 GOLDSTON R T WILKES R D SEYBOLD I M 1980 The B
38. ELUTEILD L 4 90 x10971 LEUKO 6 06 xte ERY L 6 0 mmol l HE L 267 1 1 HKT L 44 1 fl MEY 39 fmol MCH H 22 36 mmalli MCHC 7 H 16 6 EVE 1 13 mmol l HYB L 462 x10371 THROME H 6 2 fl nme l 44 7 z TVS ERY VOL BASOrTierart OL L 003 121 TKT 0 200 Fl E S t EEFE PEES ee 38 5 NEUT F 47 3 LYMP 2 34 HB KONZ 2 MONO Di 0 30 mmol l Sat Fas 48 Bilas sn a ee ee H 1 1 BASO 05 H 8 5 LUC H 42 LI 2 00 THROM VOL MPXI L 32 8 hoi C0 13 3381 LEVKO SIGNAL 000 UEa ac oe a A R i ee E feacereecs PRINSEN Perssesces r Abb 16 Report 1 des Technicon H 1 Rind Nr 225 3 1 4 H matologiesystem Sysmex F 800 Der Sysmex F 800 ist ein halbautomatisches H matologiesystem das nach dem Prinzip der Widerstandsmessung arbeitet Mit dem Sysmex F 800 im weiteren als F 800 bezeichnet kann ein kleines Blutbild erstellt werden Gleichzeitig erfolgt eine Gr endifferenzierung der Leukozyten Zum System geh rt die Analyseeinheit und der Autodiluter AD 260 Fa TOA Medical Electronics Hamburg Zur Aufbereitung der Probe werden 20 ul Blut mit dem Autodiluter angesaugt und 1 500 mit elektrisch leitf higer Verd nnungsl sung Cellpack PK30L Fa TOA Medical Electronics Hamburg vermischt Bei Leukozytenz hlung und H moglobinbestimmung wird zur Zerst rung der Erythrozyten und der Leukozytenzellmembranen 0 1 ml Sysmex Quicksilver Il zugegeben Die Erythrozyten und Thromb
39. Patient oder Primer NaCl kann im Feld 2 gew hlt werden Zur Untersuchung von Patientenblut kann zwischen f nf Analysenmodi Selectivity gew hlt werden Abbildung 5 Nr 3 Kleines Blutbild sn a eu CBC Grobes Blutbild ui CBC DIFF Gro es Blutbild und Retikulozytenanalytik CBC DIFF RETIC Kleines Blutbild und Retikulozytenanalytik CBC RETIC Retikulozytenanalytik c cccccceeeeesseseecceeeeeeeeeeeeneseeeees RETIC Die in Klammern angegebenen Abk rzungen entsprechen den vom Hersteller verwendeten Bezeichnungen zur Auswahl des Analysemodus Der Probendurchsatz betr gt 120 gro e und oder kleine Blutbilder in 60 Minuten W hlt der Benutzer zus tzlich oder ausschlie lich die Retikulozytenanalytik verringert sich der maximale Probenumsatz auf 72 Blutbilder in 60 Minuten 3 1 2 2 Arbeitsweise Die Proben k nnen ber den automatischen Probennehmer ACTS den manuellen Probennehmer f r geschlossene Probenr hrchen MCTS oder ber den manuellen Probennehmer f r offene Probenr hrchen MOTS angesaugt werden Das Aspirationsvolumen betr gt bei allen Ansaugmodi 155 ul Aus dem angesaugten Probenvolumen werden am Probenscherventil f nf Aliquote gebildet und in verschiedenen Reaktionskammern bearbeitet Das so aufbereitete Blut wird im UFC Unified Fluidic Circuit den einzelnen Me methoden zugef hrt Die folgende Abbildung zeigt den UFC Block Er besteht aus acht Acrylplatten In diese Platten si
40. Reference Values Part 1 The Concept of Reference Values J Clin Chem Clin Biochem 25 337 342 IFCC 1983 The theory of reference values Part 5 Statistical treatment of collected reference values Determination of reference limits J Clin Chem Clin Biochem 21 749 760 JAIN N C 1986 The Cattle Normal Hematology with Comments on Response to Disease In Schalm Ed Veterinary Hematology Lea Febiger Philadelphia 4 Edition 178 207 196 7 Schrifttumverzeichnis JAIN N C 1993 Essentials of Veterinary Hematology Lea amp Febiger Philadelphia KERSHAW G W ROBIN H KRONENBERG H 1987 Evaluation of the Technicon H 1 Hematology Analyser Pathology 19 305 309 KLEE W SCHILLINGER D DIRKSEN G 1979 Blutharnstoff und Hamatokritwert bei der Kalberdiarrhoe diagnostische und prognostische Bedeutung Dtsch Tierarztl Wschr 86 457 512 KOEPPEN K M HELLER S 1991 Zelldifferenzierung In Boll I und Heller S Hrsg Praktische Blutzelldiagnostik INSTAND Schriftenreihe 7 Springer Verlag 162 187 KOSANKE W 1999 Laserstreulicht und Peroxidasefarbung als Grundlagen zur Erstellung des Blutbildes und der Retikulozytenanalytik In Bruhn H D und F lsch U R Lehrbuch der Labormedizin Schattauer Verlag Stuttgart 403 410 KRAFT W 1967 Das Blutbild des Kalbes in den ersten zehn Lebenstagen Dtsch Tierarztl Wschr 74 8 194 197 KRAFT W D RR U M F RLL M BOSTEDT H
41. danach steigt der CHCM auf 21 89 24 75 mmol l und der MCHC auf 21 47 24 18 mmol l im Alter von sechs Monaten Bis 24 Monate Lebensalter steigen beide Parameter langsam an soda mit 16 Monaten der CHCM auf 22 12 24 98 mmol l und der MCHC auf 22 01 24 72 mmol l ansteigt Ab dem 24sten Lebensmonat ist ein Alterseinflu nicht mehr feststellbar so da f r diese Gruppe der Referenzbereich f r den CHCM 22 31 24 15 mmol l und den MCHC 22 29 24 34 mmol l betr gt Die aus der zitierten Literatur bekannten Referenzbereiche f r 168 Diskussion der Ergebnisse den MCHC liegen jeweils um 2 3 mmol l unter den mit dem ADVIA 120 ermittelten Werten Eine Ausnahme bildet hier der Referenzbereich von MORITZ 2000 bei dem die obere Grenze mit 27 31 mmol l deutlich h her liegt Bei POMSEL 1980 ist ein eindeutiger Alterseinfluss nicht zu erkennen BEDDIES 1999 findet beim Schaf einen zum Rind vergleichbaren Anstieg des MCHC in den ersten Lebensmonaten Der mittlerer Zellul rer H moglobingehalt ist in den ersten sechs Monaten stabil der Referenzbereich betr gt in dieser Zeit 0 66 0 84 fmol Bis zum Alter von 24 Monaten erfolgt ein Anstieg des MCH um 0 014 fmol pro Monat mit 16 Monaten liegt der Referenzbereich zwischen 0 73 1 00 fmol Ab dem zweiten Lebensjahr bleibt der MCH stabil soda f r den gesamten Zeitraum der Referenzbereich mit 0 86 1 16 fmol angegeben werden kann MORITZ 2000 kommt f r den MCH bei seiner Stu
42. der Referenzbereich bei der Gruppe der K lber bis sechs Monate 0 32 1 49 G l Bis zum Alter von 24 Monaten sinkt die Monozytenzahl der Referenzbereich betr gt bei 16 Monate alten Rindern 0 28 172 Diskussion der Ergebnisse 0 95 G l Rinder ber zwei Jahre haben einen stabilen Referenzbereich von 0 24 0 90 G l In dieser Altersgruppe ist ein Rasseunterschied von 0 10 G l vorhanden POMSEL 1980 findet keinen eindeutigen Alterseinflu bei der Auswertung der Literaturdaten MORITZ 2000 gibt altersunabh ngig einen Referenzbereich von 0 18 0 88 G l an Bei JAIN 1993 liegt der Referenzbereich zwischen 0 03 0 84 G I und KRAFT 1997 gibt 0 00 0 33 G l an Die Unterschiede die sich hier zeigen sind hinsichtlich der geringen Anzahl von zirkulierenden Monozyten im Blut auf statistische Schwankungen zur ckzuf hren Die Zahl der eosinophilen Granulozyten steigt bis zum Alter von 24 Monaten auf 0 10 1 69 G I und sinkt danach wieder auf 0 13 1 24G ab In der Literatur werden weitgehend identische Referenzbereiche angeben JAIN 1993 gibt den h chsten oberen Grenzwert mit 2 40 G an F r die Gruppe der basophilen Granulozyten sind keine Unterschiede zu den zitierten Autoren gefunden worden Zusammenfassung 173 5 ZUSAMMENFASSUNG Die Bestimmung hamatologischen Parameter ist Bestandteil der weiterfuhrenden Diagnostik bei buiatrischen Patienten Die Blutprobenanalysen erfolgt dabei immer mehr mittels automatischer H ma
43. der Variationskoeffizient f r die Parameter PLT MPV und PDW bei beiden Untersuchungen zwischen 3 3 und 6 8 Positive Eigene Untersuchungen 89 Ausnahme ist hier das MPV bei der Prazision innerhalb der Serie CV 1 5 ein negativer Ausrei er ist die PDW in Version 1 und 2 bei der Pr zision von Serie zu Serie CV 11 9 12 1 Eine sehr gute Wiederholbarkeit liegt f r den MPC CV lt 1 4 von Serie zu Serie in allen vier Versionen vor Die Retikulozytenz hlung ist in beiden Untersuchungen durch eine schlechte Wiederholbarkeit gekennzeichnet Der Variationskoeffizient liegt hier zwischen 62 und 33 Die Bestimmung des prozentualen Anteils an der Erythrozytenpopulation zeigt nur eine geringf gig bessere Pr zision ber verschiedene Serien hinweg Die Ergebnisse der Blutzelldifferenzierung k nnen der Tabelle 23 entnommen werden Hier erfolgte eine Bestimmung der Pr zision mittels Variationskoeffizient und Mittelwert mit Standardabweichung f r die Zellgruppen der neutrophilen eosinophilen und basophilen Granulozyten sowie f r Lymphozyten Monozyten und der Gruppe der large unstained cells LUC Ber cksichtigt wurde sowohl der prozentuale Anteil der Zellen an der Gesamt Leukozytenzahl sowie die absoluten Ergebnisse in G l Auf den folgenden Seiten sind die Tabellen f r die Blutzelldifferenzierung synoptisch f r die Pr zision ber verschiedene Serien hinweg f r die Softwareversionen 1 4 und f r die Pr zision innerhalb d
44. des Einflusses der Rasse auf die Referenzbereiche f r die Altersgruppen kleiner sechs Monate sechs bis 24 Monate und gr er 24 Monate p Signifikanz n s nicht signifikant Rinder lt 6 Rinder 6 24 Rinder gt 24 Parameter Monate Monate Monate MCH p lt 0 05 p lt 0 05 n s MCHC n s p lt 0 05 p lt 0 001 RDW n s p lt 0 001 p lt 0 01 HDW p lt 0 05 n s p lt 0 001 Tab 30 Signifikanzen des Einflusses des Alters auf die Referenzbereiche f r die Altersgruppen kleiner sechs Monate sechs bis 24 Monate und gr er 24 Monate p Signifikanz n s nicht signifikant Rinder lt 6 Rinder 6 24 Rinder gt 24 Parameter Monate Monate Monate MCH n s p lt 0 001 p lt 0 001 MCHC p lt 0 001 p lt 0 001 n s RDW p lt 0 05 n s p lt 0 001 HDW p lt 0 001 n s p lt 0 001 Eigene Untersuchungen 129 Tab 31 Zusammenfassung der Regressionsgeradengleichung Normbereichs grenze und des t Wertes der Parameter MCH MCHC RDW und HDW eingeteilt nach Rasse und Altersgruppe Mittlerer Hamoglobingehalt MCH Regressionsgeraden lt 6 Monate 6 24 Monate gt 2 Jahre gleichung SB y 0 75 0 64 0 014x 0 97 0 001x DFV y 0 75 0 67 0 014x 0 97 0 001x Normbereichsgrenze 0 089 0 139 0 15 t Wert 2 0262 1 976 1 976 Mittlere H moglobinkonzentration MCHC Regressionsgeraden lt 6 Monate 6 24 Monate gt 2 Jahre gleichung SB y 20 99 0 29
45. diesen Werten die Pr zision von Serie zu Serie bestimmt Dabei wurde der Einflu durch Ein und Abschalten des Ger tes von durchgef hrten Kalibrationen und der Umwelteinflu auf das System ber einen Zeitraum von mehreren Monaten beurteilt Aus diesen Messungen wurden Mittelwert Standardabweichung und Variations koeffizient berechnet In den folgenden zwei Tabellen werden die Resultate der Pr zisionsmessungen getrennt nach Blutzellzahlung und Blutzelldifferenzierung dargestellt In der Tabelle 22 ist die Pr zision der Blutzellz hlung innerhalb der Serie in der rechten Spalte fettgedruckt f r die Softwareversion 4 dargestellt und die Pr zision ber verschiedene Serien hinweg f r die Softwareversionen 1 4 vgl Kapitel 3 1 10 in die vorherigen Spalten eingef gt Es erfolgt die Angabe von Mittelwert und Standardabweichung sowie des Variationskoeffizienten f r die Parameter WBC RBC RDW HGB HDW HCT MCV MCH MCHC PLT MPV PDW MPC Retic Aus technischen Gr nden fehlen die Angaben f r die Pr zision innerhalb der Serie f r die Parameter HDW MPC und Retic Eigene Untersuchungen 87 Tab 22 Prazision der Blutzellzahlung Uber verschiedene Serien hinweg und innerhalb einer Serie 25 fach Messung n 1 x SDin Mittelwert Standardabweichung CV Variationskoeffizient ADVIA 120 ADVIA 120 Pr zision Softwareversionen 1 4 innerhalb der Parameter Pr zision ber verschiedene Serien hinweg Serie Ein
46. eine Leukozytenz hlmethode beobachtet die Eigenbewegung der Leukozyten differenziert im Nativausstrich f nf Leukozytenarten entdeckt Blutzellbildung im Knochenmark beginnt seine Leukozytenf rbestudien beschreiben die nach ihnen benannte F rbemethode beschreibt die nach ihm benannte Farbemethode beschreibt das nach ihm benannte H mometer beschreibt die bis heute gebr uchliche Z hlkammer gr ndet die Berliner H matologische Gesellschaft f hrt das seither praktizierte Differentialblutbild ein beschreiben die Segmentierungsanomalie ver ffentlicht die Medizinische Spektrophotometrie beschreibt ein mechanisiertes Blutzellz hlger t erh lt ein Patent auf ein mechanisiertes Blutzellz hlger t 4 Schrifttum Die Verwendung der Blutzellzahlung und insbesondere der Blutzelldifferenzierung zu diagnostischen Zwecken hat nach der in Tabelle 01 aufgestellten Zeittafel auch in der Tiermedizin sehr schnell Beachtung gefunden Trotzdem hat es bis in die 90er Jahre des 20 Jahrhunderts gedauert bis automatische Systeme in der Tiermedizin f r verschiedene Tierspezies eingef hrt wurden 2 2 H matologische Me techniken Die folgenden Kapitel geben einen Einf hrung in die M glichkeiten der h matologischen Untersuchungsmethoden Neben den manuellen Methoden werden die automatischen Verfahren dargestellt Dabei stellt die Beschreibung der automatischen Systeme den gr eren Anteil in diesem Kapitel 2 2 1 Manuelle Blutzellz hlung Die Z
47. einem Span von 0 6 am st rksten gegl ttet B 0 4 und C 0 2 Da der berwiegende Anteil der behandelten Parameter diese Einschnitte zeigte ist die Einteilung in Tiere bis 6 Monate Tiere 6 24 Monate und Tiere lter als 24 Monate f r alle Parameter bernommen worden Bei einigen Ausnahmen ist auf die Unterteilung der Gruppe kleiner 24 Monate verzichtet worden F r jede dieser Gruppen wurden Formeln zur Berechnung eines parametrischen altersabh ngigen Referenzbereiches ermittelt 74 Eigene Untersuchungen BEDDIES 1999 gibt f r die Berechnung altersabhangiger Referenzbereiche bei Schafen folgende Formel an yx sa b xt tt Den 1 a 2 n 3 n a Y Achsenabschnitt der Regressionsgeraden b Steigung der Regressionsgeraden X Altersangabe in Monaten t Wert der Student Verteilung f r die zweiseitige Irrtumswahrscheinlichkeit a bei n 3 Beobachtungen amp vorausgew hlte zweiseitige Irrtumswahrscheinlichkeit n Anzahl der Beobachtungen s Standardabweichung Die Formel stellt eine Modifikation der Formel von ACKERMANN 1983 dar Die Berechnung erfolgt dabei mit der Formel f r parametrische Referenzbereiche wobei x durch die Gleichung der Regressionsgraden ersetzt wird 3 1 9 Rassenabh ngigkeit der Referenzbereiche Der Einflu der Rasse auf die Referenzbereiche wird mit Hilfe des Programms BMDP1V getestet Die Probanden werden in die oben beschriebenen Altersgruppen eingeteilt und einer Kovarianzanalyse unterz
48. formula there is in the center column for the age dependent parameters a reference range for the chosen age given For non age dependent parameters the reference range is valid exclusively tab 43 Summary of the reference values for cattle lt 6 month The reference values are valid for both breeds Reference value Formula of the regression line to calculate parameter 4 month of age agedepending reference values RBC T I 8 00 11 80 7 HGB mmol l 6 00 8 40 HCT I I z MCV fl 28 50 37 50 y 35 75 0 70 x 4 55 CHCM mmol l 23 40 25 40 y 21 0 0 36 x 1 00 MCHC mmol l 21 10 23 30 y 20 99 0 29 x 1 08 MCH mmol l 0 70 0 80 RDW 17 95 22 78 y 19 19 0 29 x 2 4 HDW mmol l 1 40 1 70 y 1 71 0 043 x 0 16 retikulocyte G I 10 2 15 2 y lg 1 16 0 014 x Ig 0 398 PLT Gil 154 90 943 10 y 713 41 x 394 12 MPV f l 3 40 4 50 j see age group lt 24 month no age influence 184 continuation tab 40 Summary Reference value Formula of the regression line to parameter 4 month of age calculate agedepending reference values MPC g dl 22 70 27 10 y 23 47 0 36 x 2 20 MPM pg 0 74 0 92 y 0 87 0 01 x 0 09 PDW 36 90 85 10 PCDW g dl 4 44 5 32 WBC Gil 6 10 14 20 y Ig 0 89 0 02 x 0 18 neutrophils G l 1 10 4 80 lymphocytes G I 4 10 9 90 y
49. ist kaum gr er als die Zelldurchmesser und gro e Zellagglomerate ragen in den H llstrom hinein ohne Verstopfungen zu erzeugen Dabei wird durch unterschiedliche FlieBgeschwindigkeiten der beiden Fl ssigkeiten laminare Str mung erzeugt welche eine Vermischung verhindert und eine die optischen Me systeme st rende Wirbelbildung unterdr ckt stabiler Probenstrom Messbereich Probenstrom Mantelstrom Kapillare Abb 02 Hydrodynamische Zellfokussierung 10 Schrifttum Der Mantelstrom wird in die Kapillare eingeleitet Durch seine h here Flie geschwindigkeit vereinzelt er die Zellen im Probenstrom WEBER 1992 MORITZ 2000 2 3 2 Widerstandsmessung Bei der Widerstandsmessung wird die Probe mit einer Elektrolytl sung stark verd nnt und durch eine Me ffnung Kapillare Pore gef hrt Die suspendierten Partikel treten dabei von einem Fl ssigkeitsraum in den n chsten ber In beiden R umen befindet sich eine Elektrode zwischen denen ein Gleichstrom flie t Beim Durchtritt einer Zelle durch die Me ffnung ndert sich aufgrund der geringeren elektrischen Leitf higkeit von Blutzellen gegen ber der Elektrolytl sung kurzzeitig der elektrische Widerstand Die impulsartige nderung der Stromst rke erzeugt in Abh ngigkeit von der Zellgr e unterschiedlich starke Signale Dies erm glicht es neben der Partikelzahl auch das Volumen zu bestimmen EDER u FRITSCHE 1986 Um unterschie
50. jugularis gewonnen Das frei ablaufende Blut wurde in einem 4ml 44 Eigene Untersuchungen Probengef Fa Sarstedt N mbrecht aufgefangen Die Untersuchung der Blutproben wurde innerhalb von vier Stunden nach der Entnahme durchgef hrt Die Blutproben zur Erstellung der Referenzbereiche wurden durch Punktion der Vena coccygica gewonnen Bei Tieren unter f nf Monaten erfolgte die Blutentnahme aus der Vena jugularis Das frei ablaufende Blut wurde mit einem 4 ml Probengef Fa Sarstedt N mbrecht aufgefangen und durch K3 EDTA ungerinnbar gemacht Die Proben wurden innerhalb von f nf Stunden nach der Blutentnahme am ADVIA 120 gemessen 3 1 1 2 Antikoagulanzien Als Antikoagulanz wurde zur Durchf hrung der Evaluation Kalium3 EDTA verwendet Der Einfu unterschiedlicher Antikoagulanzien auf das Me ergebnis wurde f r Lithium Heparin und Natrium Citrat untersucht Eine sorgf ltige Durchmischung der Blutrobe mit dem Antikoagulanz erfolgte durch wiederholtes ber Kopf Drehen des Probenr hrchens Eigene Untersuchungen 45 3 1 2 H matologiesystem ADVIA 120 Das H matologiesystem ADVIA 120 Fa Bayer Diagnostic Fernwald ist ein Mehrkanal Analysensystem zur h matozytologischen Diagnostik Die Laboreinheit besteht aus dem Analysensystem mit der UFC Unified Fluidic Circuit Technik 1 integrierten Reagenzien 2 und technischen Bauteilen 3 dem automatischem Probennehmer 4 dem Barcodeleser 5 dem Vorratsbeh lte
51. lt 0 05 p lt 0 001 n 41 n 40 Eigene Untersuchungen 131 1200 O DFV SB Rassenmittel 1000 800 NN _ ____ EEE NIEREN a a a a a a a ERTETERERE z BODA ee 3 a o Q oo ce nt C0 e o 400 1 9 dog a w 2 os e o 8 o Z fo Reo o e e o fe 200 es Seen a Bee Se REEL EDEN TE eT eee Re Se eee ees 5 o 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Alter Jahre Abb 51 Altersabh ngige Entwicklung der Thrombozytenzahl f r die Rinderrassen schwarzbunte Holstein und Deutsch Fleckvieh Dargestellt sind Mittelwert sowie oberer und unterer Grenzwert f r die Altersgruppe zwischen zwei und zehn Jahren Regressionsgeraden Altersgruppe gt 2 Jahre gleichung SB y 391 8 DFV y 391 8 Normbereichsgrenze 205 28 t Wert 1 9837 Signifikanzen Rasseabhangigkeit n s Altersabhangigkeit n s Freiheitsgrade SB n 47 DFV n 57 132 Eigene Untersuchungen Abbildung 52 und 53 zeigen die Entwicklung des Mittleren Thrombozytenvolumens bis zum Alter von 10 Jahren f r die Rassen SB und DFV 6 0 O DFV SB Rassenmittel 5 5 5 0 gt 45 0 o a A o e o O Q o o o o e o e e O ee e o O3 1 e fe 4 0 000 J oe o o 0 8 08 0 e Q 0 0 0_ O o oe ose ee o ee e ne Ca vo en OO O0 0 ec o o m eo oeo o o 00 ee e o e 3 5 fo o 0 EE EE E E EAEE S EEE Blo EEEE 3 0 foo Te oP Eo a ae Pe eT E a el 0 2 4 6 8 10 1
52. mit anderen Rassen weisen Rinder der Rassen Jersey MAMMERICKX 1978 und Guernsey RYAN 1971a niedrigere Erythrozyten und Leukozytenzahlen auf GREATOREX 1975 f hrt die Unterschiede bei diesen Rassen auf die Haltung auf einer Insel zur ck Brown Swiss Rinder haben geringere Erythrozytenzahlen und Charolais Rinder erh hte Erythrozytenzahlen sowie h here H matokritwert und Hamoglobinwerte STEINHARD et al 1994 beschreiben signifikante Unterschiede der mittleren HGB Konzentration bei Milchk hen unmittelbar post partum Die Leukozytenzahl der Anteil der Monozyten und neutrophilen Granulozyten ist bei Herefordrindern und Charolais erh ht dagegen bei Rindern der Rasse Jersey erniedrigt RYAN 1971b MENESES 1980 beobachtet h here Leukozytenzahlen und Lymphozytenwerte bei Jersey als bei HF Rindern BUSCH 1965 h lt Variationen der Blutwerte f r Schrifttum 35 physiologische Schwankungen und f hrt die von ihm und von anderen Autoren festgestellten Differenzen auf Unterschiede in den Untersuchungszeitpunkten in den Umweltbedingungen und den unterschiedlichen Rassezugeh rigkeiten zur ck In Untersuchungen von KRAFT 1967 und TENNANT et al 1974 werden keine signifikanten Rasseunterschiede festgestellt DOORNENBAL 1977 untersucht Hamoglobinkonzentration und Hamatokritwert bei Rindern der Rassen Short Horn Charolais Simmentaler Limousin Red Angus Beefmaster Brown Swiss Chianina und Jersey und findet signifikante Unter
53. nderungen des Differentialblutbildes da die Gesamtleukozytenzahl bei vielen Krankheiten keine relevanten Ver nderungen zeigt Der mit einer Krankheit verbundene Stre l st eine Aussch ttung von Kortisol aus Folge ist ein Stre blutbild mit einer Verringerung in der Zahl der Monozyten Lymphozyten sowie der eosinophilen und basophilen Granulozyten dagegen steigt die Zahl der neutrophilen Granulozyten an Das Knochenmark sch ttet reife neutrophile Granulozyten ins Blut aus die umgehend in das betroffene Gewebe bertreten Das Verh ltnis von Lymphozyten zu neutrophilen Granulozyten verschiebt sich von 2 1 bis zu einem Verh ltnis 1 3 Durch den begrenzten Vorrat reifer neutrophiler Granulozyten kommt es zu einer Freisetzung von stabkernigen neutrophilen Granulozyten ins Blut Linksverschiebung Im Knochenmark proliferieren die granulozyt ren Vorl uferzellen und nach 4 5 Tagen erscheint die Leukozytenzahl normal bis erh ht COLE et al 1997 Experimentell wurde bei Rindern eine milde vor bergehende Neutropenie durch subkutane Injektion des Endotoxins von Pseudomonas aeruginosa hervorgerufen Durch intraven se Injektion wurde eine l nger andauernde Neutropenie ausgel st LUMSDEN et al 1974 Schrifttum 31 2 5 3 Thrombozyten Thrombozyten sind kernlose Zellabschn rungen der im Knochenmark ans ssigen Megakaryozyten Mit einem Durchmesser von 2 3 5 um sind sie die kleinste Zellgruppe des Blutes und haben eine rundliche bis spindel
54. pr zise Ergebnisse in kurzer Zeit zu erstellen Durch die hohen Anschaffungskosten und die Leistungsf higkeit dieser Systeme wird ein effektiver Einsatz auf Kliniken und GroBlaboratorien beschr nkt Um bei hohen Untersuchungszahlen den menschlichen Einsatz gering zu halten m ssen die Automaten konstante Resultate von gleichbleibender Qualit t liefern Zur Erf llung dieses Zieles sind unterschiedliche Systeme entwickelt worden die alle nach dem Prinzip der Durchflu zytometrie arbeiten Daher wird im folgenden vor der Beschreibung der einzelnen Systeme diese Technik kurz vorgestellt Schrifttum 9 2 3 1 DurchfluBzytometrie Zur Erfassung der Zellen in einer Probe m ssen diese an einem Messwandler vorbeigef hrt werden Hierzu mu die Probe verd nnt werden EDER u FRITSCHE 1986 Passieren zwei oder mehrere Zellen gleichzeitig den Me wandler wird nur ein Signal verarbeitet Zur Vermeidung von Koinzidenzen wird die Verd nnung so hoch gew hlt und der Durchmesser des Probenstroms auf ein Minimum reduziert da die Zellen einzeln erfa t werden k nnen ZELMANOVIC et al 1992 In den meisten Widerstandsmessger ten werden englumige Kapillarr hrchen verwendet die durch Gerinnsel in der Probe verstopfen Dagegen wird in optischen Durchflu zytometern mit hydrodynamischer Zellfokussierung Abbildung 2 dieses Problem umgangen In diesen Ger ten wird die verd nnte Probe von einem Mantelstrom umh llt Der eigentliche Probenstromfaden
55. schlechteste Wiederholbarkeit Die Variationskoeffizienten der prozentualen 92 Eigene Untersuchungen Differenzierungswerte weichen bei der Pr zision innerhalb der Serie nur geringf gig von denen fur die absoluten Werte des Differentialblutbildes ab Die Feststellung der Variationskoeffizienten f r die Pr zision von Serie zu Serie erbrachte vergleichbare Ergebnisse zur Pr zision innerhalb der Serie f r die neutrophilen Granulozyten und Monozytendifferenzierung Die Werte der eosinophilen Granulozyten zeigen eine verbesserte Pr zision in den einzelnen Versionen CV 11 31 Niedrigere Variationskoeffizienten konnten auch bei der Lymphozytenz hlung CV 5 11 in den einzelnen Versionen ermittelt werden Bei den basophilen Granulozyten bewegt sich der Variationskoeffizient in allen Versionen zwischen 10 und 20 Die Pr zision der LUC ist in bereinstimmung mit der Wiederholbarkeit bei der 25 fach Messung ungen gend 3 2 3 Verschleppung carry over und Linearit t Linearit t und carry over werden anhand von Blutproben bestimmt die eine starke Konzentration bzw Verd nnung der zellul ren Blutbestandteile aufweisen F r diesen Ger tetest mu der Leukozytengehalt auf gt 120 G I 100er Pool und die Thrombozytenzahl auf gt 2500 G I 100er Pool angehoben werden Um diese hohen Konzentrationen zu erreichen m ssen 80 ml K3 antikoaguliertes EDTA Blut zuerst 15 Minuten bei 300 G zentrifugiert danach der Buffy coat abpipetie
56. schwarzbunte Holstein und Deutsch Fleckvieh Dargestellt sind Mittelwert sowie oberer und 24 Monaten Regressionsgeraden Altersgruppe lt 6 Monate y 21 0 36x y 21 0 36x gleichung SB DFV Normbereichsgrenze t Wert Signifikanzen Rasseabh ngigkeit Altersabh ngigkeit Freiheitsgrade SB DFV unterer 1 00 2 0262 n s p lt 0 001 n 19 n 21 bis zum Alter von Altersgruppe 6 24 Monate y 23 18 0 03 x y 22 58 0 03 x 1 430 1 976 p lt 0 001 p lt 0 05 n 89 n 63 Eigene Untersuchungen 125 28 O DFV SB SB DFV CHCM mmol l D ow 22 21 20 19 ie a oe ie SP a Se a A 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Alter Jahre Abb 47 Altersabh ngige Entwicklung des CHCM f r die Rinderrassen schwarzbunte Holstein und Deutsch Fleckvieh Dargestellt sind Mittelwert sowie oberer und unterer Grenzwert f r die Altersgruppe zwischen zwei und zehn Jahren Regressionsgeraden Altersgruppe gt 2 Jahre gleichung SB y 23 23 DFV y 23 00 Normbereichsgrenze 0 918 t Wert 1 97 Signifikanzen Rasseabhangigkeit p lt 0 001 Altersabh ngigkeit n s Freiheitsgrade SB n 105 DFV n 135 Abbildung 48 und 49 zeigen die Entwicklung der Retikulozytenzahl bis zum Alter von 10 Jahren f r die Rassen SB und DFV 126 Eigene Untersuchungen 35 30 25 20 Retikulozyten G I 40 O DFV SB SB DFV 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 Alter Monate
57. sowie der Standardabweichung zwischen den Antikoagulanzien K3 EDTA Na Citrat und Li Heparin f r die Blutzellz hlung n 10 Paarweiser Vergleich der Antikoagulanzien f r die Parameter der Blutzellz hlung ADVIA 120 Softwareversion 4 Parameter K3 EDTA Ks EDTA Li Heparin Einheit Li Heparin Na Citrat Na Citrat mittlerer Unterschied 1 05 1 00 0 99 WBC Gil sd 1 06 1 04 1 08 relativer Unterschied 5 20 0 46 1 00 mittlerer Unterschied 0 08 0 18 0 10 RBC T I sd 0 13 0 16 0 15 relativer Unterschied 1 0 2 2 1 24 mittlerer Unterschied 0 52 1 00 0 48 MCV fl sd 0 27 0 28 0 11 relativer Unterschied 1 60 3 00 1 40 logarithmierte Werte nicht signifikant p gt 0 017 112 Eigene Untersuchungen Fortsetzung Tab 27 Paarweiser Vergleich der Antikoagulanzien fur die Parameter der Blutzellzahlung ADVIA 120 Softwareversion 4 Parameter K3 EDTA Ks EDTA Li Heparin Einheit Li Heparin Na Citrat Na Citrat Mittlerer Unterschied 0 29 0 63 0 34 MCHC mmol l Sd 0 26 0 23 0 11 relativer Unterschied 1 2 2 7 1 4 mittlerer Unterschied 0 47 0 97 0 51 CHCM mmol l Sd 0 21 0 27 0 13 relativer Unterschied 1 9 3 9 2 1 mittlerer Unterschied 214 10 169 84 442 65 PLT G I Sd 126 16 756 23 963 31 relativer Unterschied 45 7 33 1 94 5 mittlerer Unterschied 10 37 26 06 15 70 MPC g dl Sd 0 96 16 63 16 15 relativer U
58. were determined for the cattle breeds Holstein and German Fleckvieh The adaptation of software and evaluation were performed with 245 blood samples on both healthy and sick cattle within age range of 1 day to 12 years The correlation of the results of the ADVIA 120 to these of the refernce analysers Sysmex F 800 and Technicon H 1 is excellent r gt 0 96 for the following parameters WBC RBC HGB MCV HCT MCH Independent from the staining methods the differentiation of blood cells correlates with the results of the manual counting for the neutrophil granulocytes r gt 0 95 lymphocytes r gt 0 90 and eosinophil granulocytes r 0 80 from good to very good The correspondence of the differentiation of the monocytes is in comparison to the o Naphtylacetateesterase staining method r 0 51 satisfactory regarding the basophil granulocytes there is no correspondence to the manual differentiation The precision within a serie as well as for different series is excellent CV lt 3 for the parameters WBC RBC HGB MCV HCT MCH MCHC HDW and RDW Furthermore the repetition of the parameters PLT MPV PDW and MPC is satisfactory CV 1 50 6 78 It is only the repetition of reticulocytecount is only unsatisfactory CV 37 87 61 20 The precision for the differentiation of blood cells is described for neutrophil granulocytes as good CV lt 4 98 Concerning lymphocytes and monocytes the repetition is poorer CV 11 13 31 03 The count
59. zision von Serie zu Serie bei der Blutzelldifferenzierung rangieren zwischen 4 45 f r die neutrophilen Granulozyten und bei 31 0 f r die eosinophilen Granulozyten und Monozyten Die Z hlung der Lymphozyten variiert um 11 3 MORITZ 2000 berichtet f r die Tierarten Hund Katze Pferd Rind und Schaf beim Technicon H 1 ber Variationskoeffizienten von 162 Diskussion der Ergebnisse 2 4 4 8 bei der neutrophilen Granulozytenzahlung und f r die Lymphozytenz hlung 3 5 10 9 Diese Werte entsprechen denen des ADVIA 120 Au ergew hnlich ist die starke Abweichung der eosinophilen Granulozyten MORITZ f hrt hier Werte zwischen CV 6 9 15 6 an und unterschreitet damit die f r den ADVIA 120 ermittelten Werte Die Variationskoeffizienten der Monozytendifferenzierung erstrecken sich bei MORITZ von 13 8 bis 0 4 und gehen mit den oben genannten Resultaten konform Die berpr fung der Pr zision der Ergebnisse innerhalb einer Serie best tigt die oben beschriebenen Resultate Die hier erhaltenen Werte zeichnen sich in der Regel durch geringf gig h here Variationskoeffizienten aus 4 1 3 Antikoagulanzienvergleich Die Abweichungen zwischen den einzelnen Antikoagulanzien stellt sich wie folgt dar Der Unterschied zwischen Li Heparin und Na Citrat ist beim Gruppenvergleich am geringsten Ks EDTA verglichen mit Li Heparin erzeugt ebenfalls geringe Abweichungen Auff llig ist ein Unterschied von 5 2 bei der Leukozytenz hlung Die
60. 0 990 y 1 01x 0 03 0 98x 0 04 0 96x 0 09 1 04x 0 16 MPV fl r 0 048 0 254 0 647 0 145 y 0 13x 4 97 0 94x 0 15 1 70x 4 31 0 83x 0 29 n s p lt 0 05 p lt 0 01 logarithmierte Werte 78 Eigene Untersuchungen Abbildung 20 zeigt ein Beispiel einer sehr guten Ubereinstimmung der mit beiden Methoden erzielten Ergebnisse die Daten des ADVIA 120 Softwareversion 4 fur den RBC im Vergleich zu den Werten des H 1 Abb 20 Korrelationsdiagramm iP au RBC T l Hauptkomponentengleichung Winkelhalbierende 10 Referenzger t H 1 x Softwareversion 4 a cc 5 Y 0 96x 0 05 r 0 993 p lt 0 001 0 5 1 RBC ADVIA 120 In der Tabelle 17 werden die Daten der Korrelation f r den Vergleich von ADVIA 120 mit dem Impedanzmesssystem Sysmex F 800 vorgestellt Eigene Untersuchungen 79 Tab 17 Korrelation des ADVIA 120 mit dem Sysmex F800 f r die Parameter der Blutzellzahlung Korrelationskoeffizient r Hauptkomponenten gleichung y mx b logarithmierte Werte Ig y Ig mx b Signifikanz f r alle Parameter p lt 0 001 Parameter Einheit ADVIA 120 Sysmex F800 Softwareversionen 1 4 Korrelationskoeffizient r Hauptkomponentengleichung y mx b Version 1 Version 2 Version 3 Version 4 n 115 n 30 n 60 n 30 WBC Gil r 0 969 0 947 0 980 0 997 y 1 05x 0 08 0 94x 0 04 0 97x 0 01 0 97x 0 01 RBC T I r 0 977 0 959 0 973 0 974 y 0 95x 0 21 1 10x 1 1
61. 1 95x 60 3 12x 1 76 Eosinophile G l 0 683 0 657 1 34x 0 68 1 41x 0 50 Basophile G n s p lt 0 05 logarithmierte Werte Die manuell ermittelten prozentualen Anteile neutrophiler Granulozyten am Blutbild korrelieren bei allen drei F rbungen gut bis sehr gut mit den Messungen des ADVIA 120 Eine Ausnahme bildet hier das Ergebnis der Softwareversion 3 f r die Peroxidase r 0 673 und Panoptische r 0 573 F rbung Die ANAE F rbung ergab insgesamt die schlechteste Korrelation ber alle vier Versionen Bei der 86 Eigene Untersuchungen Differenzierung der Lymphozyten und eosinophilen Granulozyten korrelieren die Resultate des ADVIA 120 gut mit denen der mikroskopischen Differenzierung Die geringsten Korrelationen ergaben sich hinsichtlich der Monozytendifferenzierung und dies in allen vier Softwareversionen sowie bei allen F rbungen Die Identifikation der basophilen Granulozyten stellte sich bei der manuellen Differenzierung aufgrund der geringen Anzahl im Blut als sehr schwierig dar so da eine Korrelation der Ergebnisse nur f r die PAN F rbung vollst ndigkeitshalber erstellt wurde 3 2 2 Pr zision Die Pr zision des ADVIA 120 wurde auf zwei Arten bestimmt Einerseits wurde eine Blutprobe von einem Probanden 25mal in Folge gemessen um die Pr zision bei gleicher Einstellung des Ger tes innerhalb einer Serie zu ermitteln Andererseits wurde jede der 245 Evaluationsblutproben dreifach gemessen und aus
62. 11 6 16 5 71 9 31 10 87 10 09 7 82 8 45 Gran n 258 633 517 252 359 701 1334 3053 52 29 62 37 67 68 65 42 67 26 56 41 53 88 51 82 Lymph s 10 07 6 59 6 60 9 02 7 40 7 63 6 95 10 51 n 258 634 520 213 2225 2628 3279 2264 X 5 78 3 51 3 97 5 26 4 07 4 78 4 68 4 61 Mono s 271 2 99 2 31 2 71 2 27 2 29 2 53 2 73 n 260 659 581 232 742 528 997 2206 i x 0 40 0 70 1 09 1 99 3 63 9 85 11 16 7 98 Eosin 5 0 52 0 78 0 94 1 91 2 38 4 11 4 51 3 53 Gran n 723 723 579 277 580 711 1336 2857 Die hier von POMSEL 1980 wiedergegebenen Referenzbereiche sind auf die wichtigsten Altersgruppen beschr nkt Auf den anschlie enden Seiten erfolgt nun die Vorstellung der Eigenen Untersuchungen Eigene Untersuchungen 41 3 EIGENE UNTERSUCHUNGEN 3 1 Material und Methoden 3 1 1 Probanden Die Blutproben f r die Softwareadaptation und Evaluierung des ADVIA 120 wurden von mannlichen und weiblichen Patienten der Klinik fur Wiederkauer und Schweine Innere Medizin und Chirurgie der Justus Liebig Universitat GieBen im Rahmen der t glichen Routinediagnostik entnommen Untersucht wurden des weiteren Blutproben von gesunden Rindern die im Zuge von IBR und BVD MD Bestandsuntersuchungen in hessischen Milchviehbetrieben entnommen wurden In Tabelle 13 ist die Rassen und Geschlechterverteilung der insgesamt 245 untersuchten Tiere dargestellt Das Alter der Tiere bewegte sich zwischen ein
63. 13 10 5 60 17 30 0 26 0 26 basophils 0 70 1 89 y lg 0 32 0 016 x 0 22 age lt 24 month no influence by age no influence by breed no influence by age and breed Summary 187 Tab 45 Summary of reference values for cattle gt 2 years Reference values at Formula of the regression line to calculate 6 years of age age depending reference values r German German parameter moleeln Fleckvieh moisten Fleckvieh RBC T I 5 80 8 40 ai HGB mmol l 5 40 8 00 ae HCT I I 0 23 0 34 MCV fl 35 40 47 80 y 41 35 0 05 x 6 12 Crem 22 30 24 20 22 10 23 90 mmol l MERC 21 90 24 70 21 60 24 40 is mmol l MCH mmol l 0 80 1 10 y 0 97 0 001x 0 15 RDW 17 20 22 10 y 19 73 0 022 x 2 44 HDW mmol l 1 30 1 60 ANA PLT G I 186 50 597 10 ji MPV fil 3 60 5 00 3 50 4 90 x i MPC g dl 24 30 28 30 23 60 27 70 i MPM pg 0 90 1 30 0 84 1 14 i j PDW 53 70 106 59 ij PCDW g dl 4 10 5 35 y 4 69 0 006 x 0 63 no influence by age no influence by breed no influence by age and breed 188 continuation tab 42 Summary Reference values at 6 years of age Formula of the regression line to calculate age depending reference values German German parameter Holstein Fleckvieh Horsten Fleckvieh RetikulocytesG I 4 60
64. 2 Signifikanzen Rasseabhangigkeit p lt 0 001 Altersabhangigkeit p lt 0 05 Freiheitsgrade SB n 108 DFV n 84 Eigene Untersuchungen 121 0 44 O DFV SB SB DFV 0 42 0 40 0 38 0 36 0 34 0 32 0 30 0 28 0 26 0 24 0 22 0 20 HCT v1 Alter Jahre Abb 43 Altersabh ngige Entwicklung des Hamatokritwertes f r die Rinderrassen schwarzbunte Holstein und Deutsch Fleckvieh Dargestellt sind Mittelwert sowie oberer und unterer Grenzwert f r die Altersgruppe zwischen zwei und zehn Jahren Regressionsgeraden Altersgruppe gt 2 Jahre gleichung SB y 0 292 DFV y 0 285 Normbereichsgrenze 0 054 t Wert 1 97 Signifikanzen Rasseabhangigkeit p lt 0 05 Altersabh ngigkeit n s Freiheitsgrade SB n 105 DFV n 135 122 Eigene Untersuchungen Abbildung 43 und 44 zeigen die Entwicklung des Mittleren Erythrozytenvolumens bis zum Alter von 10 Jahren f r die Rassen SB und DFV 60 O DFV SB Rassenmittel SB DFV 55 50 45 MCV fl 40 0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 Alter Monate Abb 44 Altersabh ngige Entwicklung des Mittleren Erythrozytenvolumens f r die Rinderrassen schwarzbunte Holstein und Deutsch Fleckvieh Dargestellt sind Mittelwert sowie oberer und unterer Grenzwert bis zum Alter von 24 Monaten Regressionsgeraden Altersgruppe lt 6 Monate Altersgruppe 6 24 Monate gleichung SB y 35 75 0 70 y 28 69 0 5
65. 2 14 16 18 20 22 24 Alter Monate Abb 52 Altersabhangige Entwicklung des Mittleren Thrombozytenvolumen f r die Rinderrassen schwarzbunte Holstein und Deutsch Fleckvieh Dargestellt sind Mittelwert sowie oberer und unterer Grenzwert bis zum Alter von 24 Monaten Regressionsgeraden Altersgruppe lt 6 Monate Altersgruppe 6 24 Monate gleichung SB y 3 95 y 3 83 0 012x DFV y 3 95 y 3 83 0 012x Normbereichsgrenze 0 53 0 460 t Wert 2 0262 1 9908 Signifikanzen Rasseabhangigkeit p lt 0 05 n s Altersabh ngigkeit n s p lt 0 05 Freiheitsgrade SB n 19 n 41 DFV n 21 n 40 Eigene Untersuchungen 133 6 0 O DFV SB SB DFV 5 5 507 eso o 2 601 ee genen 0 e 0 ti e e e gt 4 5 0 0 e oe 0 e e oe eo oO 0 eco _e_____e _ 806 00 0 Q Q Oan iO ke BE eS ee A AE Teens E E EA oOo 0e e O eeo O fe fe 4002 e o e 00 Me ee oO o 00 oo oe SH tee halo el OLN ee cs seltene ot Soh a ee er fe 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Alter Jahre Abb 53 Altersabh ngige Entwicklung des Mittleren Thrombozytenvolumen f r die Rinderrassen schwarzbunte Holstein und Deutsch Fleckvieh Dargestellt sind Mittelwert sowie oberer und unterer Grenzwert f r die Altersgruppe zwischen zwei und zehn Jahren Regressionsgeraden Altersgruppe gt 2 Jahre gleichung SB y 4 31 DFV y 4 16 Normbereichsgrenze 0 69 t Wert 1 9837 Signifikanzen Rasseabhangigkei
66. 2 5 3 5 T I sinkt der Wert unter 2 5 T I Blut spricht man von einer schweren An mie und bei Erythrozytenzahlen unter 1 5 T Blut ist die Prognose ung nstig ST BER u GR NDER 1990 Das MCV dient der Einteilung der Erythrozyten in normo mikro und makrozyt r Nimmt der Anteil mikrozyt rer oder makrozyt rer Erythrozyten zu spiegelt sich dies in einer gr eren Erythrozytenverteilungsbreite wider und man spricht von einer Anisozytose Eine ausgeglichene Zunahme von Mikrozyten und Makrozyten f hrt ebenfalls zu einem Anstieg der RDW dabei bleibt aber das MCV scheinbar unver ndert Eine Mikrozytose tritt bei Eisen Kupfer und Vitamin Bs Mangel auf Bei Eisenmangel werden mehr Zellteilungen durchgef hrt infolge dessen nimmt das Volumen der Erythrozyten ab und die Verteilungsbreite zu THOMAS 1998 Eine Makrozytose ist ein Hinweis auf eine regenerative An mie in deren Verlauf der Anteil gro er Erythrozyten immer weiter zunimmt Weiter kommt Vitamin B 2 Mangel in Betracht Bei der Makrozytose ist die DNS Synthese verringert mit der Folge da die Erythropoese mit weniger Zellteilungen abl uft THOMAS 1998 24 Schrifttum Die Bestimmung des mittleren Hamoglobingehaltes der Erythrozyten MCH wird nach folgender Formel berechnet MCH Hb RBC x10 Der MCH dient der Differenzierung von normochromen hypochromen und hyperchromen Anamien MCV und MCH sind eng korreliert Ist das Volumen verringert liegt auch eine Hypochro
67. 3x DFV y 35 75 0 703x y 30 49 0 53x Normbereichsgrenze 4 547 55 777 t Wert 2 0262 1 976 Signifikanzen Rasseabhangigkeit n s p lt 0 001 Altersabhangigkeit n s p lt 0 001 Freiheitsgrade SB n 19 n 89 DFV n 21 n 63 Eigene Untersuchungen 123 Abb 45 60 O DV SB Rassenmittel 55 l 2 einai NN punea Zn ee 07 2 A u Er l Hr O e o 8 R o o ie Ren a b 00 QQ han 45 f 928 amp een A otoo a ane l m 5 er Te woe a O o ze Cae 8 6 XR K o o PIENET aaa n e a l n e OF Les On ee 5 35 p 30 25 2 3 4 5 6 7 N 1 Alter Jahre Altersabh ngige Entwicklung des Mittleren Erythrozytenvolumens f r die Rinderrassen schwarzbunte Holstein und Deutsch Fleckvieh Dargestellt sind Mittelwert sowie oberer und unterer Grenzwert f r die Altersgruppe zwischen zwei und zehn Jahren Regressionsgeraden Altersgruppe gt 2 Jahre gleichung SB y 41 35 0 05x DFV y 41 35 0 05x Normbereichsgrenze 6 12 t Wert 1 97 Signifikanzen Rasseabhangigkeit n s Altersabhangigkeit p lt 0 001 Freiheitsgrade SB n 105 DFV n 135 124 Eigene Untersuchungen Abbildung 46 und 47 zeigen die Entwicklung des CHCM bis zum Alter von 10 Jahren f r die Rassen SB und DFV 28 O DFV SB CHCM mmol l PO oo Abb 46 Altersabhangige Entwicklung des DFV SB 8 10 Alter Monate Rassenmittel 18 20 22 24 f r die Rinderrassen
68. 3x 22 50 0 054x 23 31 DFV y 20 99 0 293x 22 17 0 054x 23 00 Normbereichsgrenze 1 083 1 352 1 431 t Wert 2 0262 1 976 1 025 Erythrozytenverteilungsbreite RDW Regressionsgeraden lt 6 Monate 6 24 Monate gt 2 Jahre gleichung SB y 19 19 0 29x 20 40 19 52 0 022x DFV y 19 19 0 29x 19 66 19 94 0 022x Normbereichsgrenze 2 395 3 075 2 44 t Wert 2 0262 1 976 1 976 H moglobinverteilungsbreite HDW Regressionsgeraden lt 6 Monate 6 24 Monate gt 2 Jahre gleichung SB y 1 71 0 043x 1 56 1 49 0 001x DFV y 1 71 0 043x 1 53 1 51 0 001x Normbereichsgrenze 0 16 0 149 0 141 t Wert 2 0262 1 976 1 976 130 Eigene Untersuchungen 3 2 6 2 Referenzbereiche f r die Parameter der Thrombozytenanalytik 1200 1000 800 PLT G 1 O O oO gt oO oO 200 0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 Alter Monate Abb 50 Altersabh ngige Entwicklung der Thrombozytenzahl f r die Rinderrassen schwarzbunte Holstein und Deutsch Fleckvieh Dargestellt sind Mittelwert sowie oberer und unterer Grenzwert bis zum Alter von 24 Monaten Regressionsgeraden gleichung SB DFV Normbereichsgrenze t Wert Signifikanzen Rasseabhangigkeit Altersabhangigkeit Freiheitsgrade SB DFV Altersgruppe lt 6 Monate y 713 0 41 0x y 713 0 41 0x 394 12 2 0262 p 0 05 p 0 05 n 19 n 21 Altersgruppe 6 24 Monate y 647 0 14 0x y 714 9 14 0x 225 51 1 9908 p
69. 5 keine Normalverteilung bzw Log Normalverteilung vor ist die nicht parametrische Berechnung der Referenzbereiche die Folge 3 1 7 5 2 Parametrische Referenzbereiche Ein parametrischer Referenzbereich zeichnet sich durch den Einsatz der Student oder t Verteilung aus Bei der t Verteilung ist der Kurvenverlauf hnlich der Normalverteilung wobei die Kurve durch die Anzahl der Freiheitsgrade charakterisiert wird Der Unterschied zur Berechnung des x 2s Referenzbereiches liegt im frei w hlbaren zu berdeckende Populationsanteil P Liegt eine Stichprobe zu n quantitativen Werten x aus einer GauB Verteilung vor dann berdeckt das Intervall im Mittel den gew nschten Anteil P 1 amp z B 95 Folgende Formel kommt dabei zur Anwendung AE n 1 a 2 n 1 n x arithmetischer Mittelwert t Wert der Student Verteilung f r die zweiseitige Irrtumswahrscheinlichkeit w bei n 1 Beobachtungen amp Vorausgew hlte zweiseitige Irrtumswahrscheinlichkeit n Anzahl der Beobachtungen s Standardabweichung Der t Wert ist dabei der statistischen Tabelle der t Verteilung zu entnehmen SACHS 1992 72 Eigene Untersuchungen 3 1 7 5 3 Nicht parametrische Referenzbereiche Wird f r einen Parameter festgestellt da keine Normalverteilung vorliegt werden nicht parametrische Referenzbereiche oder Quantile berechnet Dazu rangordnet man alle Werte x eines Stichprobenumfangs n zu einer Wertereihe x in auf oder absteigender Folge D
70. 6 0 97x 0 2 1 00x 0 46 HGB mmol l r 0 985 0 987 0 992 0 995 y 1 02x 0 07 1 11x 0 17 1 0x 0 14 0 99x 0 10 HCT I I r 0 948 0 893 0 920 0 946 y 1 15x 0 03 1 16x 0 01 1 1 1x 0 0 1 02x 0 01 MCV fl r 0 987 0 977 0 983 0 980 Y 1 06x 3 3 0 97x 7 87 1 15x 1 06 1 08x 3 63 MCH fmol r 0 961 0 919 0 958 0 869 Y 1 12x 0 02 1 24x 0 09 1 18x 0 08 1 41x 0 29 MCHC mmol l r 0 184 0 042 0 612 0 427 Y 6 58x 130 8 0 12x 18 92 1 7x 17 7 1 44x 11 99 PLT Gil r 0 671 0 940 0 788 0 963 y 1 18x 0 54 1 24x 0 68 0 77x 0 56 1 29x 0 95 MPV fl r 0 471 0 221 0 750 0 581 y 0 32x 4 55 0 23x 5 43 1 16x 0 38 0 38x 4 29 n s p lt 0 05 p lt 0 01 logarithmierte Werte 80 Eigene Untersuchungen Im Vergleich zu Abbildung 20 kann der Abbildung 21 entnommen werden da mit dem ADVIA 120 auch gegen ber der Impedanzmessung eine sehr gute bereinstimmung erzielt wird Abb 21 Korrelationsdiagramm 19 RBC T I n 30 Hauptkomponentengleichung Winkelhalbierende Referenzger t F 800 Softwareversion 4 10 oO O LL Mm oc 5 Y 1 00x 0 46 r 1 00 p lt 0 001 0 0 5 10 15 RBC ADVIA 120 Abbildung 21 zeigt die graphische Darstellung der Thrombozytenz hlung Softwareversion 1 als Beispiel f r eine mittlere Korrelation r 0 671 Eigene Untersuchungen 81 Abb 22 Korrelationsdiagramm PLT Gil Poe n 115 J Hauptkomponentengleichung Winkelhalbierende Referenzgerat F 800 Soft
71. 674 _Leuwenhock beobachtet Blutzellver nderungen w hrend seiner Krankheit 1717 Jurin ermittelt den Erythrozytendurchmesser 1732 Hales findet ungen gend Blutkugeln bei einer Blutungsanamie 1743 Schwencke ver ffentlicht Haematologia sive sanguinis historia 1744 Schurigius ver ffentlicht Haematologia historico medico 1744 Sauvages vermutet farbige Molek le in den Blutk gelchen 1753 Rhades weist Eisen in den roten Blutk rperchen nach 1756 Haller ver ffentlich ausf hrliche Monographie ber das Blut 1765 Stiles Torre beschreiben die Delle der roten Blutk rperchen 1782 _ Levison warnt vor Aderlass wegen Abnahme der Erythrozytenzahl 1818 Home entdeckt die Blutplattchen Fortsetzung Tab 1 Jahr 1827 1830 1831 1839 1840 1846 1852 1854 1863 1865 1868 1877 1902 1902 1902 1905 1908 1912 1928 1933 1948 1956 Name Hodgkin Lister Denis Lecanu Nasse Gulliver Virchow Vierordt Welker Recklinghausen Schulze Neumann Ehrlich May u Gr nwald Giemsa Sahli B rker Pappenheim Schilling Pelger u Huet Heilmeyer Langerkranz Coulter Schrifttum Sachverhalt beschreiben die Lymphogranulomatose bestimmt die Hamoglobinkonzentration findet niedrigere Hb Normalwerte bei der Frau zeichnet ein Bild der segmentkernigen Granulozyten f hrt Erythrozytenstudien bei 485 Tierspezies durch Bedeutung der farblosen Blutk rperchen in der Pathologie beschreibt eine Erythrozytenz hlmethode beschreibt
72. Aus der Medizinischen und Gerichtlichen Veterinarklinik Innere Medizin der Kleintiere und klinische Laboratoriumsdiagnostik und der Klinik fur Wiederkauer und Schweine Innere Medizin und Chirurgie der Justus Liebig Universitat GieBen Softwareadaptation und begleitende Evaluation des Hamatologiesystems ADVIA 120 fur die Tierart Rind Erstellung von hamatologischen Referenzbereichen fur die Rinderrassen schwarzbunte Holstein und deutsches Fleckvieh Inaugural Dissertation zur Erlangung des Doktorgrades beim Fachbereich Veterinarmedizin der Justus Liebig Universitat GieBen Eingereicht von Mark Holsteg GieBen 2002 Aus der Medizinischen und Gerichtlichen Veterinarklinik Innere Medizin der Kleintiere und klinische Laboratoriumsdiagnostik und der Klinik fur Wiederkauer und Schweine Innere Medizin und Chirurgie Prof Dr K Doll der Justus Liebig Universitat GieBen Betreuer Hochschuldozent Dr A Moritz Softwareadaptation und begleitende Evaluation des Hamatologiesystems ADVIA 120 fur die Tierart Rind Erstellung von hamatologischen Referenzbereichen fur die Rinderrassen schwarzbunte Holstein und deutsches Fleckvieh Inaugural Dissertation zur Erlangung des Doktorgrades beim Fachbereich Veterin rmedizin der Justus Liebig Universit t Gie en Eingereicht von Mark Holsteg Tierarzt aus Wesel Gie en 2002 Mit Genehmigung des Fachbereichs Veterinarmedizin der Justus Liebig Universitat GieBen Dekan 1 Berichterstatter 2
73. BE H 1991 Analyte des Kleinen Blutbildes In Boll I and Heller S Hrsg Praktische Blutzelldiagnostik INSTAND Schriftenreihe Band 7 Springer Verlag Berlin Heidelberg 44 89 ST BER M GR NDER H D 1990 Kreislauf In Rosenberger G Hrsg Die klinische Untersuchung des Rindes Verlag Paul Parey Berlin 194 233 TENNANT B HARROLD D REINA G M KENDRICK J W LABEN RC 1974 Hematology of the Neonatal Calf Erythrocyte and Leukocyte Values of normal Calves Cornell Vet 64 516 532 THOM R 1990 Me techniken in der H matologie und vergleichende Bewertung von h matologie Analysatoren Aus Trends in der H matologie INSTAND Symposium 1988 Berlin TOA MEDICAL ELECTRONICS EUROPE GMBH Hamburg 63 76 7 Schrifttumverzeichnis 201 THOMAS L 1998 Labor und Diagnose TH Books Verlagsgesellschaft Frankfurt UNDRITZ E 1972 Hamatologische Tafeln 2 Aufl Sandoz AG Nurnberg VON RUCKER A HENKEL E HAECKEL R DIEM H GUNZER H MULLER H A G NEBE T WEBER R JONSSON D HELLER S BRUGGEMANN M FINK P KALOUS J KATZ N KUTZNER M LENZ T LIPS H MULLLER W PICK K H PINTO G PROHASKA W RAFFAEL A REINECKE T ROTHE G RUBY C SACHSE C SEEGER H T SCHMITZ G SCHNEIDER W STOBRAWA F VAN WERSCH J W J ZIERVOGEL H 1994 Evaluationsprotokoll fur hamatologische Zellzahl und Zelldifferenzierungsgerate Klinische Chemie Mitteilungen 25 272 286
74. C HGB MCV HCT MCH MCHC HDW und RDW ist hervorragend CV lt 3 die Wiederholbarkeit bei den Parametern PLT MPV PDW und MPC befriedigend CV 1 50 6 78 Die Wiederholbarkeit der Retikulozytenz hlung erreicht nur unbefriedigende Werte CV 37 87 61 20 Die Pr zision der Blutzelldifferenzierung ist f r die neutrophilen Granulozyten als gut zu bezeichnen CV lt 4 98 Hinsichtlich der Lymphozyten und Monozyten ist die Wiederholbarkeit schlechter CV 11 13 31 03 Die Z hlung der eosinophilen Granulozyten zeigt ber verschiedene Serien hinweg einen Variationskoeffezienten von 31 15 dieses Ergebnis wird durch den physiologischerweise geringen Anteil eosinophiler Granulozyten am Blutbild und der damit verbundenen statistischen Anf lligkeit der Z hlung f r Koinzidenzen verursacht Linearit t und Verschleppung 174 Zusammenfassung des ADVIA 120 sind f r die Parameter RBC WBC und HGB als sehr gut und f r den Parameter PLT als gut zu bezeichnen Die Bestimmung der Blutalterung anhand von 10 Proben zeigt da die Lagerdauer einen gr eren Einflu auf die Haltbarkeit von Rinderblutproben hat als die Lagerungstemperatur Die Ergebnisse der Blutzellzahlung bleibt f r WBC RBC HGB MCV MCH bei 4 C bis zu 72 Stunden stabil Die Thrombozytenz hlung liefert bis 12 Stunden nach Blutentnahme bei 22 C Lagerungstemperatur akzeptable Ergebnisse Die Bilutzelldifferenzierung erf hrt durch die Lagerung bei Raumtemper
75. DER 1987 Sinkt der WBC unter 5 G I Leukozyten wird beim Rind von einer Leukozytopenie gesprochen Dies deutet auf eine akute Belastung des Organismus durch Intoxikation oder ein Infektionsgeschehen hin Dieser Zustand bleibt meist nur wenige Stunden bis Tage bestehen um dann in eine Leukozytose berzugehen Geschieht dies nicht ist die Prognose ung nstig Eine kurzzeitige Leukozytose tritt beim Rind unter Umst nden schon nach schwerer k rperlicher Anstrengung bzw Stress auf Eine l nger andauernde Erh hung des WBC weist auf eine akute bakterielle oder virale Lokal oder Allgemeininfektion hin Bei Bakteri mien lassen sich ausgepr gte Ver nderungen feststellen allerdings kann bei chronisch abzedierten Pneumonien und jauchigen Peritonitiden ein Anstieg der Gesamtleukozytenzahl fehlen Eine Erh hung des WBC auf 20 30 x G l wird beim Rind sehr selten beobachtet ST BER u GR NDER 1990 SCHALM 1999 Das Differentialblutbild wird beim Rind von den Lymphozyten gepr gt Lymphatisches Blutbild der prozentuale Anteil der Lymphozyten betr gt beim Neugeborenen 50 und steigt bis zum f nften Lebensjahr kontinuierlich an wobei die absolute Lymphozytenzahl sich stetig verringert KRAFT et al 1997 Im Alter von 2 3 Monaten verringert sich der Anteil der neutrophilen Granulozyten auf 25 und die Lymphozytenanteil steigt auf 60 Mit einem Jahr erreicht der Lymphozytenanteil 70 der Leukozyten Das Verh ltnis von Lymphozyten zu neutr
76. Der Abbildung 25 k nnen die Ergebnisse f r die H moglobinmessung entnommen werden RBC amp Lagerungstemperatur 22 C Lagerungstemperatur 4 C Prozentuale Abweichung 0 10 20 30 40 50 60 70 80 Zeit Stunden Abb 24 Stabilit t der Erythrozytenzahl Dargestellt ist die prozentuale Abweichung vom Ausgangswert x S bei 4 C und 22 C ber 72 Stunden n 10 Eigene Untersuchungen 99 HGB amp Lagerungstemperatur 22 C gt Lagerungstemperatur 4 C 5 ta Q ab OQ lt amp 4 Cc ab N O gt A 0 10 20 30 40 50 60 70 80 Zeit Stunden Abb 25 Stabilit t des H moglobingehaltes Dargestellt ist die prozentuale Abweichung vom Ausgangswert x S bei 4 C und 22 C ber 72 Stunden n 10 In den folgenden Abbildungen werden die Ergebnisse f r die Parameter MCH und MCV vorgestellt 100 Eigene Untersuchungen MCH Lagerungstemperatur 22 C Lagerungstemperatur 4 C gt 0p O O N O N fe Prozentuale Abweichung iN D 0 10 20 30 40 50 60 70 80 Zeit Stunden Abb 26 Stabilit t des mittleren H moglobingehaltes Dargestellt ist die prozentuale Abweichung vom Ausgangswert x S bei 4 C und 22 C ber 72 Stunden n 10 Eigene Untersuchungen 101 MCV 60 Lagerungstemperatur 22 C Lagerungstemperatur 4 C Prozentuale Abweichung 0 10 20 30 40 50 60 70 80 Zeit Stunden
77. Ergebnisse Bei dem kal Faktor handelt es sich um einen geratespezifischen Kalibrationsfaktor Aus dem prozentualen Anteil der Retikulozyten und der Erythrozytengesamizahl RBC wird die absolute Anzahl der Retikulozyten berechnet Die Angabe der Retikulozytengesamtzahl erfolgt in und Gil Des weiteren kann der Abbildung 68 die Erythrozytenmorphologie entnommen werden Die Gewinnung der Blutprobe erfolge ca 30 Minuten nach einer Bluttransfusion mit 1 Liter Vollblut Die Population der normochromen normozyt ren Spendererythrozyten ist mit der Nummer 5 gekennzeichnet Die Zellgruppen 2 und 3 beschreiben die hypochromen bis normochromen makrozyt ren Zellen des Empfangertieres Im Verlauf der Regeneration wurden nach 12 und 26 Tagen Kontrolluntersuchungen durchgef hrt Die Ergebnisse sind auf den Abbildungen 69 und 70 zu entnehmen Auf Abbildung 69 zeigt sich eine geringe Erh hung der Erythrozytenzahlen auf 1 28 T l die Zahl der Retikulozyten betr gt 284 8 G I 22 3 Der Hamatokritwert ist auf 0 108 L L angestiegen Die Erythrozytenmorphologie ist im Vergleich zur ersten Untersuchung kaum ver ndert Zu diesem Zeitpunkt ist die Population der Spendererythrozyten nicht mehr vorhanden so da keine normozyt ren normochromen Erythrozyten vorliegen Diskussion der Ergebnisse 157 SID ORTSIEFER Time amp Date 30 08 99 11 12 03 Neg RBC 77 7 8623 Retic 22 3 294 8 Selectivity CBC DIFF RETIC L Retic
78. Jedes Diagramm enth lt die Angaben f r die Rinder der Rassen SB und DFV F r die F lle in denen kein Rasseunterschied ermittelt werden konnte wird das Rassenmittel angegeben Jede Altersgruppe und gegebenenfalls Rasse wird durch drei Geraden auf der Grafik beschrieben Die mittlere Gerade Regressionsgerade stellt den Altersmittelwert dar Die Berechnung der Regressionsgeraden erfolgt nach der folgenden Formel y x a b x a Y Achsenabschnitt b Linearer Regressionskoeffizient x Alter Addiert bzw subtrahiert man von dem so erhaltenen Wert die Normbereichsgrenze erh lt man die obere bzw untere Referenzbereichsgrenze Die Normbereichsgrenze entspricht der ann hernd doppelten Standerdabweichung Anschlie end an die Grafik finden sich alle notwendigen statistischen Angaben zur Erstellung der Grafik und zur Berechnung der Referenzbereiche Eigene Untersuchungen 115 Die Gruppengr e der Probanden f r die Berechnung der Referenzbereiche der Thrombozytenanalytik weicht von den brigen Parametern ab Bei der Erstellung der Thrombozytenreferenzbereiche wurden bei der Systemmeldung Thrombozytenaggregate PLT CLM NW die Thrombozyten parameter aus der Berechnung der Referenzwerte herausgenommen Dieses Warnsignal wird vom System gesetzt bei mehr als 350 registrierten Thrombozytenaggregaten Um den Einflu aktivierter Thrombozyten auf die Referenzbereiche auszuschlie en werden nur Proben mit weniger als 350 Aggregaten in die B
79. Mono x 0 68 0 60 042 0 457 0325 0 45 0 35 Isl 0 37 0 17 0 17 0 22 0 150 0 20 0 20 f x 0 17 0 08 0 50 1 3 0 90 1 20 1 30 Eosin G 052 0 05 0 380 100 065 070 0 70 x 0 05 0 06 0 07 0 05 0 06 0 02 Baso G lt oos 900 oos o10 005 005 0 03 Schrifttum Tab 11 Altersabh ngige Leukozytenwerte weiblicher Holsteinrinder Altersabhangige Leukozytenwerte weiblicher Holsteinrinder Jain 1986 P rametet 1 2 2 3 3 4 4 6 gt 6 Jahre Einheit g l Jahre Jahre Jahre Jahre n 17 n 9 n 16 n 34 n 44 X 110 11 40 935 815 7 90 WBC s 320 210 200 200 170 Stab X 459 0 01 0 025 0 030 0 015 Neutr G s 0 04 0 020 0 100 0 025 Segm X 226 3 9 345 280 3 00 Neutr G S 063 1 35 1 352 1 10 1 25 X 6 88 5 8 490 420 3 75 Lymph 1 250 2 10 1 25 1 50 0 95 x os 086 0 30 055 0 45 Mono gt o10 030 035 030 0 20 l X o62 075 0 63 0 55 0 65 Eosin G 5 040 055 053 035 050 X 0 30 060 0 25 0 35 0 40 Baso G 050 070 040 025 030 Schrifttum 39 POMSEL 1980 stellt aus 240 Arbeiten von 1901 bis 1977 die Ergebnisse der Blutzellzahlung und Differenzierung zusammen und kommt zu den in Tabelle 12 dargestellten Werten Tab 12 Altersabhangige Referenzbereiche aus Literaturangaben von 1901 bis 1977 Altersabhangige Refer
80. Rinder 6 24 Monate Zusammenfassung 177 Referenzbereich beim Alter von 16 Monaten Formel der Regressionsgeradengleichung zur Berechnung altersabhangiger Referenzbereiche Schwarzbunte Deutsches Schwarzbunte Deutsches Parameter Holstein Fleckvieh Holstein Fleckvieh i y 10 6 0 13 x y 10 1 0 13 x RBC T I 6 70 10 30 6 20 9 80 18 18 HGB mmol l 6 00 8 60 HCT I I 0 25 0 37 y 0 32 0 001 x 0 06 _ _ y 28 69 0 53 x y 30 49 0 53 x MCV fl 31 40 43 00 33 20 44 80 5 78 5 78 7 _ y 23 18 0 03 x y 22 58 0 03 x CHCM mmol l 22 20 25 10 21 60 24 50 41 43 1 43 _ y 22 50 0 05 x y 22 17 0 05 x MCHC mmol l 21 80 24 50 22 00 24 70 1 35 1 35 y 0 64 0 014 x y 0 67 0 014 x MCH mmol l 0 70 1 00 0 80 1 00 0 139 0 14 RDW 17 30 23 50 16 60 22 70 a HDW mmol l 1 40 1 70 2 2 y 647 0 14 0 x y 714 9 14 0 x PLT G I 197 50 708 50 265 40 716 40 225 51 225 51 MPV f l 3 60 4 50 y 3 83 0 012 x 0 46 MPC g dl 54 10 2880 3 00 a7 20 YORE y ee So Ulex 2 1 2 1 i y 0 92 0 006 x y 0 86 0 006 x MPM pg 0 91 1 13 0 85 1 07 0 11 0 11 i y 60 73 0 55 x y 55 64 0 55 x PDW 49 40 89 69 44 28 84 60 20 16 20 16 PCDW g dl 4 15 5 31 Sa Altersgruppe lt 24 Monate kein Alterseinflu kein Rasseeinflu kein Alters und Ra
81. Serien Pr zision eas hinweg bei Dreifachmessung 25fach Einheit M Version1 Version2 Version3 Version4 essung n 115 n 30 n 60 n 30 Neutrophile G z sp 36 06 13 52 35 37 12 37 9443 4556 62 10 3 30 11 34 19 31 CV 10 49 4 04 4 95 4 31 5 31 Lymphozyten sp 50 81 13 15 51 01 12 33 5987 4282 o6 6945 44 11 03 17 77 CV 9 78 4 40 6 50 10 32 21 26 Monozyten X SD 6 83 2 95 5 13 2 38 5 14 2 30 6 59 2 58 8 33 2 42 O 2 CV 17 92 16 08 23 96 31 00 29 06 Eosinophile G X SD 5 044 3 57 0 56 0 39 4 98 5 28 2 80 3 66 1 49 0 62 x CV 18 99 11 29 19 57 29 17 41 27 BasophileG x sn 0 79 0 36 0 12 0 05 0 97 0 56 0 92 0 33 1 15 0 14 CV 17 94 12 74 19 16 19 97 12 35 x SD 0 47 0 36 0 11 0 06 0 61 0 42 1 33 0 96 1 34 1 11 LUC CV 39 39 23 87 42 33 107 4 3 82 74 logarithmierte Werte Die Wiederholbarkeit der Me werte f r die 25 fach Messung ist hinsichtlich der neutrophilen Granulozytengesamtzahl mit einem CV von 4 98 als gut zu bezeichnen Bez glich der Lymphozyten und Monozyten betragen die Variationskoeffizienten 22 bzw 29 Eine schlechte Pr zision wurde f r die eosinophilen Granulozyten ermittelt CV 40 F r die Population der basophilen Granulozyten konnte eine Wiederholbarkeit von 11 01 errechnet werden Die Gruppe der LUC zeigt mit einem Variationskoeffizienten von 83 die
82. T M Retic 67 1 Sex amp Age U H Retic 6 7 1 System IRF H 6 7 Sequence 150 IRF M HH 13 3 Species Cattle Playback RTC Cells Acquired 24920 FOR LABORATORY USE ONLY RTC Cells Analyzed 24104 RTC Gated Cells 23498 Hide Run Screen Information Retic Count 15 Retic Scatter Abs RBC V HC WBC 6 37 x10 cells L RBC 2 81 x10 2cells L HGB 3 3 m mol L HET 0 161 LAL MCW 57 3 fL MCH GEZ fmol MCHC 20 51 m mol L CHCM 20 14 mmol L CH 1 15 fmol CHDW 0 23 fmol RDW 17 3 HDW 1 57 mmol L PLT 78 x10 cells L MPW 7 4 fL PDW 61 0 PET 0 001 LAL Abb 70 Ergebnis des ADVIA 120 f r die Erythrozyten und Retikulozytenzahlung bei einem Rind mit regenerativer Anamie Der Untersuchungszeitpunkt liegt 26 Tage nach der ersten Messung An diesem Beispiel l t sich anschaulich darstellen da der ADVIA 120 in der Lage ist in klinisch relevanten F llen Retikulozyten beim Rind zu detektieren Des weiteren ist eine sichere und schnelle Aussage ber die Regenerationsf higkeit von An miepatienten zu machen Dabei erleichtert die Art der Datenaufbereitung in Form von Histogrammen und die routinem ige Beschreibung der Erythrozytenmorphologie die schnelle Auswertung und in der Folge die Einleitung von Sofortma nahmen zur Therapie eines An miepatienten Es w re zu w nschen da diese anschauliche Art der Informationsdarstellung jedem Untersuchungsbericht neben den reinen Zahlenwerten zur Verf gung steht Le
83. ahme erforderlich Das Differentialblutbild sollte bei einer Transportzeit von mehr als 24 Stunden durch eine manuelle Differenzierung von einem bei Blutentnahme angefertigten Objekttr gers erfolgen 164 Diskussion der Ergebnisse Das ICSH 1994 empfiehlt eine Untersuchung innerhalb von vier Stunden nach Blutentnahme f r die Analyse von humanen Blutproben Die Untersuchung von bovinen Blutproben sollte im Hinblick auf eine sichere Diagnostik aller Parameter ebenfalls in diesem Zeitraum erfolgen oder auf ein kleines Blutbild beschr nkt bleiben Untersuchungen von BLEUL 1998 und GROMMELT 1999 mit Rinderblut stimmen mit diesen Ergebnissen berein 4 1 5 Verschleppung carry over und Linearit t Zur berpr fung der Linearit t wurden speziell aufbereitete Proben mit hohen analytischen Werten f r die Parameter WBC RBC HB und PLT am ADVIA 120 gemessen Die Linearit t der Ergebnisse ist f r die Leukozyten von 0 bis 120 G l gegeben bei der Thrombozytenz hlung sind die Ergebnisse bis zu einer Zellkonzentration von 2500 G I konstant Die Z hlung der Erythrozyten liefert stabile Resultate bis 12 T l Das Verbleiben von Zellen im Leitungssystem eines Zellz hlger tes nach einer Messung f hrt bei Reihenuntersuchungen zu einer Verf lschung von zytopenischen Blutproben Dieser Carry over ist f r den ADVIA 120 mittels Messung von Proben mit hohen Zellkonzentrationen und zellfreiem Plasma bestimmt worden Dabei wurden die vom Hersteller
84. aluation of Laboratory Animal Haematology Comp Haematol Intern 1 91 105 DIN 58931 1995 Bestimmung der Hamoglobinkonzentration im Blut Referenzmethode Deutsches Institut fur Normung e V 1 4 192 7 Schrifttumverzeichnis DIN 58932 1 1996 Bestimmung der Blutk rperchenkonzentration im Blut Teil 1 Blutentnahme Probenvorbereitung Einflu gr en St rfaktoren Deutsches Institut f r Normung e V 1 2 DIN 58932 2 1998 Bestimmung der Blutk rperchenkonzentration im Blut Teil 2 Kennzeichnende Gr en f r Erythrozyten Erythrozytenindices Deutsches Institut f r Normung e V 1 2 DIN 58932 3 1994 Bestimmung der Blutk rperchenkonzentration im Blut Bestimmung der Konzentration der Erythrozyten Referenzmethode Deutsches Institut f r Normung e V 1 5 DIN 58933 1 1995 Bestimmung des Volumenanteils der Erythrozyten im Blut Teil 1 Zentrifugationsmethode als Referenzmethode Deutsches Institut f r Normung e V 1 3 DIN 58934 1 1997 Kontrollmaterialien f r das Blutbild Teil 1 Kontrollblute Deutsches Institut f r Normung e V 1 3 DIXON W J 1993 BMDP Statistical Software Manual Volume 1 and 2 University of California Press Berkley Los Angeles London DOLL K 1991 H matologische und klinisch chemische Untersuchungsbefunde bei K lbern und Jungrindern mit lleus Tierarztl Praxis 19 44 47 7 Schrifttumverzeichnis 193 DOORNENBAL H 1977 Physiological and Endocrine Parameters in Beef
85. angegebenen Grenzen f r humanes Blut f r den RBC 0 2 mit 0 09 deutlich unterschritten Das gleiche gilt f r den WBC 0 4 zu 0 18 und den Hamoglobingehalt 0 02 zu 0 Der f r den Menschen angegebene Carry over f r die Thrombozytenz hlung von 0 1 wird bei Rinderthrombozyten mit einer Verschleppung von 0 26 nicht eingehalten BLEUL 1998 beschreibt f r den Cell Dyn 3500 die Thrombozyten einen Carry over von 1 5 und liegt damit deutlich ber den Werten des ADVIA 120 Diskussion der Ergebnisse 165 4 2 Erstellung von rasse und altersabhangigen Referenzbereichen Mit der Erstellung der Referenzbereiche in dieser Untersuchung sollte einerseits dem Einflu von ver nderten Haltungsbedingungen in der modernen Milchviehwirtschaft Rechnung getragen werden andererseits stellt die Entwicklung von H matologiesystemen mit neuen Parametern den Kliniker vor die spannende Frage inwiefern diese Parameter ein diagnostisches Hilfsmittel darstellen Diese Fragestellungen werden in den anschlie enden Kapiteln diskutiert Dabei sollen die bekannten Parameter mit Referenzbereichen aus der Literatur verglichen werden und die neuen Parameter mit den Erkenntnissen von anderen Spezies verglichen und besprochen werden 4 2 1 Parameter des roten Blutbildes Das Zusammenspiel der verschiedenen Parameter von der Geburt bis zu einem Alter von 10 Jahren zeigt da der H moglobingehalt im Blut ber die gesamte Lebensspanne nahezu konstant ist D
86. angt in Phase II Angaben ber Referenzbereiche Me bereiche und Nachweisgrenzen zu machen Dabei sollen die Referenzbereiche nach Altersgruppen und Geschlecht unterschieden werden und auf Besonderheiten des Patientengutes bedingt durch Einfl sse von Region Rasse und geographischer H he hingewiesen werden Die Angaben des Herstellers ber die Me bereiche von allen im Blut vorkommenden Zellarten und Zellkomponenten sind auf ihre Richtigkeit zu berpr fen Die Gesellschaft f r klinische Chemie erachtet die in Tabelle 03 angegebenen Me bereiche als klinisch sinnvoll Schrifttum 17 Tab 03 Empfehlung f r die Me bereiche des roten Blutbildes der Thrombozyten und Retikulozyten durch die Deutsche Gesellschaft f r klinische Chemie Parameter Spannweite Bemerkungen Hamoglobin 1 25 15 6 bestimmung mmol l Erythrozyten 0 75 7 5 T l z hlung H matokrit 0 10 0 80 I I bestimmung Mittleres 55 130 fl Erythrozyten Volumen MCV Erythrozytenver abh ngig vom teilungsbreite RDW MeBprinzip Retikulozytenzahl 10 500 G l Thrombozytenzahl 1 1500 G l In der PLT Humanmedizin wird 5 G l als Transfusionsindika tion angenommen Mittleres 5 5 12 5 fl abh ngig vom Thrombozyten Me prinzip Volumen MPV Thrombozyten abh ngig vom Verteilungsbreite Me prinzip PDW 18 Schrifttum Tab 04 Empfehlung f r die Me bereiche des wei en Blutbildes durch die De
87. anhand der Softwareversion 4 V 1 1 04 MS die eine Zulassung f r den deutschen und amerikanischen Markt erhalten hat Als erstes werden die Ergebnisse des ADVIA 120 mit denen der Referenzmethoden verglichen danach folgt die Beurteilung der Pr zision sowie der Vergleich verschiedener Antikoagulanzien und der Einflu der Lagerungsdauer und Lagertemperatur von Blutproben auf die Ergebnisse des ADVIA 120 Abschlie end erfolgt die Feststellung von Linearit t und Verschleppung f r den ADVIA 120 Diskussion der Ergebnisse 153 4 1 2 Methodenvergleich Der Methodenvergleich dient der berpr fung der Richtigkeit der Me ergebnisse des ADVIA 120 Hierzu wurden die Ergebnisse der Referenzmethoden denen des ADVIA 120 gegen bergestellt s a Kapitel 2 4 Zun chst erfolgt der Vergleich der Parameter der Blutzellzahlung anschlie end wird mit einem Beispiel auf die Me genauigkeit der Retikulozytenanalytik eingegangen und zum Schlu des folgenden Kapitels werden die Ergebnisse der Blutzelldifferenzierung mit den manuell ermittelten Ergebnissen verglichen Von den Parametern der Blutzellz hlung konnten f r den WBC RBC HGB HCT MCV MCH und PLT zwischen ADVIA 120 und H 1 vgl Tabelle 16 bereinstimmungen mit einer exzellenten Korrelation r 0 99 ermittelt werden Eine nur unbedeutend niedrigere Korrelation mit r 0 87 wurden f r den MCHC gefunden Im Vergleich des ADVIA 120 mit dem F 800 Widerstandsmessprinzip wurden sehr gute Korrelat
88. asic Clinical Pathology Laboratory 4 Vet Med Small Anim Clin 4 586 590 GOOSSENS W VAN HOVE L VERWILGHEN R L 1991 Monocyte Counting Discrepancies in Results Obtained with Different Automated Instruments J Clin Path 44 224 227 GREATOREX J C 1975 Observation on the Hematology of Calves and Various Breeds of Adult Dairy Cattle Br Vet J 113 469 481 GROMMELT P 1999 Automatisierte Blutzellzahlung und Differenzierung mit dem Hamatologiesystem Technicon H 1 beim Rind Vet med Diss Justus Liebig Universitat GieBen GROSS R WICHMANN H E A 1979 Was ist eigentlich Normal Med Welt 30 1 4 14 HABERMANN J PATZ S A 1989 Monozyten Mikroskop vs cytochemisch cytometrische automatisierte Bestimmung Extr Diag 3 108 111 7 Schrifttumverzeichnis 195 HALLMANN L 1980 Untersuchung von Blut und Sternalpunktat In Klinische Chemie und Mikroskopie Georg Thieme Verlag Stuttgart New York HAYASHI T YAMANE O SAKAI M 1976 Hematological and Pathological Observations of Chronic Furazolidone Poisoning in Calves Nippon Juigaku Zasshi 38 225 223 HEWETT C 1974 On the Causes and Effects of Variations in the Blood Profile of Swedish Dairy Cattle Acta Vet Scand Suppl 50 1 152 HOFMANN W 1972 Hamorrhagische Diathese beim Kalb infolge chronischer Furazilidon Vergiftung Dtsch Tierarztl Wschr 79 289 312 IFCC ISCH 1987 Approved Recommendation 1986 on the Theory of
89. atur bis 12 Stunden nach der Blutentnahme keine Ver nderungen Eine Verf lschung der Blutzelldifferenzierung durch einen l ngeren Transport kann mittels der zus tzlichen Einsendung eines Blutausstriches vermieden werden Der Vergleich der Antikoagulanzien Li Heparin Na Citrat und K3 EDTA zeigt eindeutig den Vorteil von K3 EDTA beim Einsatz am ADVIA 120 Im zweiten Schritt dieser Arbeit wurden mit dem ADVIA 120 altersabh ngige Referenzbereiche f r die Rinderrassen schwarzbunte Holstein und Deutsch Fleckvieh erstellt Von 432 gesunden Rindern wurden K3 EDTA Blutproben innerhalb von 5 Stunden nach Entnahme analysiert Die Daten wurden mittels einer nichtparametrischen Regression mit einem lokal gewichteten Regressionsgl tter S Plus Version 3 1 Statistical Sciences Inc analysiert und in drei Altersgruppen eingeteilt lt 6 Monate 6 24 Monate gt 24 Monate F r jede Altersgruppe wurde der Einflu der Rasse durch eine einfaktorielle Kovarianzanalyse mit dem Programm BMDP1V Dixon 1993 ermittelt Mit Hilfe der abgebildeten Formel ist es nun m glich f r altersabh ngige Parameter individuell angepa te parametrische Referenzbereiche zu berechnen yx sa b xt tt Was 1 a 2 n 3 n a Y Achsenabschnitt der Regressionsgeraden b Steigung der Regressionsgeraden x Altersangabe in Monaten t Wert der Student Verteilung f r die zweiseitige Irrtumswahrscheinlichkeit bei n 3 Beobachtungen amp vorausgew hlte zweiseitige Irr
90. der eosinophilen und neutrophilen Granulozyten Im MN Cluster erscheinen Lymphozyten und Monozyten 50 Eigene Untersuchungen Abb 07 ADVIA 120 Nukleogramm A Mensch B Rind Nr 224 1 Basophile Granulozyten Mononukleare Leukozyten Monozyten und Lymphozytenkerne Polymorphkernige Leukozyten Zellkerne von neutrophilen und eosinophilen Granulozyten Rauschen lyseresistente groBe Leukozyten Sattigung Blasten Zellkerne oO N NOOA Feld Nr 4 Rauschen enth lt Zellbruchst cke Thrombozyten und Erythrozytenstroma Im Feld Nr 5 Basosuspekt werden Iyseresistente gro e Leukozyten dargestellt die nicht zu den basophilen Granulozyten gez hlt werden Feld Nr 6 Sattigungsbereich und Nr 7 Blastenzellkerne sind im Rindernukleogramm nicht eingerichtet Der S ttigungsbereich enth lt Luftblasen und Koinzidenzen Die Grenzlinien treshhold zwischen den Populationen sind im Rindernukleogramm unflexibel im Gegensatz zur Einstellung der Humansoftware Die einzige Ausnahme Eigene Untersuchungen 51 bildet hier die Trennung von MN und PMN Cluster Diese Grenze wird im Humannukleogramm verwendet um den Lobularitatsindex LI zu berechnen mit dem das Signal Linksverschiebung angezeigt wird Diese Warnmeldung ist beim Rind zur Zeit derzeitige Multispeziessoftware Version MS V 1 1 07 des ADVIA 120 BAYER 1999 nicht aktiv 3 1 2 2 3 Peroxidasemethode Im Peroxidasekanal wird neben der Gesamtleukozytenzahl LeukoP der prozent
91. die zu identischen Ergebnissen 0 65 1 17 fmol JAIN 1993 kommt ebenfalls zu vergleichbaren Ergebnissen STOBER u GRUNDER 1990 sowie KRAFT 1997 weichen von diesen Ergebnissen um durchschnittlich 0 20 fmol ab DUFFIELD 2000 beschreibt f r Milchk he in einer hnlichen Untersuchung am ADVIA 120 identische Referenzbereiche Die Erythrozytenverteilungsbreite steigt in den ersten sechs Monaten um 0 29 pro Monat auf 18 34 23 13 mit 5 Monaten Zwischen 6 und 24 Monaten ver ndert sich die RDW nicht soda f r den gesamten Zeitraum ein Referenzbereich von 17 33 23 48 angegeben werden kann Bei Rindern ber 24 Monate verringert sich die RDW unmerklich F r diese Gruppe lautet der Referenzbereich 16 81 21 91 Auch hier zeigt sich eine hervorragende bereinstimmung mit den Ergebnissen von DUFFIELD 2000 Die H moglobinverteilungsbreite zeigt keine starken Schwankungen ber alle Altersgruppen Der Referenzbereich f r diesen Parameter wurde mit 1 30 1 68 mmol l ermittelt MORITZ 2000 gibt hier einen Bereich von 1 06 1 88 mmol l f r das Rind an Beim Referenzbereich f r die absolute Anzahl der Retikulozyten werden zwei Altersgruppen unterschieden Bei der Gruppe bis zwei Jahre besteht eine starke Altersabh ngigkeit Der untere Grenzwert unterliegt geringen Schwankungen und nimmt von der Geburt bis zum Alter von 24 Monaten von 5 76 G l auf 3 04 G l ab Der obere Grenzwert zeigt in diesem Zeitraum einen R ckgang von
92. dliche Signale einzelnen Zellgr en zuzuordnen m ssen Schwellenwerte festgelegt werden Durch die Bestimmung des unteren Schwellenwertes werden zuf llige Signale sogenannte Rauschimpulse von der Z hlung ausgeschlossen Diese Rauschimpulse k nnen im Extremfall das Z hlger t mit der Zellz hlung berfordern WEBER 1992 Die Sensitivit t der Me anordnung ist vom Verh ltnis des Zellvolumens zur Kapillare abh ngig Zur sicheren Erkennung von Blutzellen ist es sinnvoll mit unterschiedlichen Kapillarvolumina f r einzelne Zellgruppen zu arbeiten So k nnen Impulse von optimaler St rke erzeugt werden WEBER 1992 Beim Durchtritt der Zelle durch die Kapillare wird die Zellform durch die Str mung beeinflu t Dadurch kommt es bei der Bestimmung des mittleren Erythrozytenvolumens zu Fehlmessungen Die Erythrozyten ndern ihre Gestalt und damit die Gr e des elektrischen Signals in Abh ngigkeit von der zellul ren Hamoglobinkonzentration Die Folge sind Fehler bei der Volumenmessung Erythrozyten mit hohem Hamoglobingehalt werden vom System durchschnittlich zu gro eingeordnet ZELMANOVIC et al 1992 Schrifttum 11 2 3 3 Optoelektrische Me methode Zur Ermittlung der Me gr en mit optoelektrischen Verfahren wird die verd nnte Probe in einer Durchflu k vette von einem enggeb ndelten Halogen oder Laserstrahl beleuchtet Das von den Zellen erzeugte Streulicht wird mit einem Photomultipler gemessen die von der Zelle absorbi
93. duelle Konstanz besitzen MCHC MCV MCH der analytische Drift statistisch ber einen l ngeren Zeitraum berwacht werden Der Test auf Verschleppung stellt sicher da Ergebnisse durch die aufeinanderfolgende Messung von Proben mit hohen und niedrigen Zellkonzentrationen nicht verf lscht werden wobei bedacht werden mu da die Zellart Einflu auf die Gr enordnung der Verschleppung hat Dazu werden zehnmal jeweils nach drei Proben mit hoher H1 H2 H3 drei Proben mit niedriger N1 N2 N3 Konzentration gemessen Aus der Differenz zwischen N1 und N3 wird mittels gepaartem t Test errechnet ob eine signifikante Verschleppung vorliegt Die 20 Schrifttum Berechnung der durchschnittlichen Verschleppung erfolgt aus dem Mittelwert der N1 und N3 Messungen nach der Formel Die prozentuale Verschleppung kann von N3 ECCLS oder H3 N3 ICSH mit der folgenden Formel angegeben werden N1 N3 x100 V N3 oder H3 N3 Die Richtigkeit der Me ergebnisse wird durch den Vergleich mit der f r den jeweiligen Parameter aktuell g ltigen Referenzmethode berwacht siehe Tabelle 2 Der Vergleich soll an je 20 Proben mit normalen hoch pathologischen und tief pathologischen Werten erfolgen und mit dem gepaarten t Test statistisch ausgewertet werden Das Setzen von Warnsignalen durch das Ger t bei pathologisch ver nderten Blutproben Blasten LUC Aggregate Linksverschiebung soll auf Sensitivit t und Spezifit t berpr ft werden
94. e See S ER 600 So ede OG ge x3 oO o 0 4 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Alter Jahre Abb 39 Altersabh ngige Entwicklung der Erythrozytenzahl f r die Rinderrassen schwarzbunte Holstein und Deutsch Fleckvieh Dargestellt sind Mittelwert sowie oberer und unterer Grenzwert f r die Altersgruppe zwischen zwei und zehn Jahren Regressionsgeraden Altersgruppe gt 2 Jahre gleichung SB y 7 17 0 01 x DFV y 7 17 0 01 x Normbereichsgrenze 1 27 t Wert 1 97 Signifikanzen Rasseabh ngigkeit n s Altersabh ngigkeit p lt 0 001 Freiheitsgrade SB n 105 DFV n 135 118 Eigene Untersuchungen 10 O DFV SB Rassenmittel oO 9 e e e e BER RER SE Bee Dr Ra ae ee g Oo o 8 Oe O o o o e 3 C5 0 j TE a es ae eo 48 Oreo e_o __ 6 oo ___96 __ 8 9 9 _ 7 s 8 T oO e 8 l leS eo ii ore ge b 2o 008 e Se e o 4 4 m s g go ay ee oF g 6 EEEE SEEAER a ELIEHERE een iO Le Sa o 5 0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 Alter Monate Abb 40 Altersabhangige Entwicklung des Hamoglobingehaltes f r die Rinder rassen schwarzbunte Holstein und Deutsch Fleckvieh Dargestellt sind Mittelwert sowie oberer und unterer Grenzwert bis zum Alter von 24 Monaten Regressionsgeraden Altersgruppe lt 6 Monate Altersgruppe 6 24 Monate gleichung SB y 7 22 y 7 31 DFV y 7 22 y 7 31 Normbereichsgrenze 1 20 1 31 t Wert 2 026 1 976 S
95. eeseneeeeeeeeeees 153 PUZIS OM cco chicos Rishi at a ee ils ih di ital S di Sie 161 Antikoagulanzienvergleich eececeeeecceeeeeeeeeeeeeeeneeeeeeeeeeeeeeeees 162 Blift llerUng essen rss 163 Verschleppung carry over und Linearit t uu een 164 Erstellung von rasse und altersabhangigen Referenzbereichen 165 Parameter des roten Blutbildes 444444444444RRRRRnn nenn 165 Parameter der Thrombozytenz hlung 442444444000RRR nenn 169 Parameter des wei en Blutbildes 4444444444444eRee 170 ZUSAMMENFASSUNG 22 4 us220000nn00nnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnn nenn 173 SUMMARY nnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnn 181 SCHRIFTTUMVERZEICHNIS ccceeeeeeessessessceeeeeeeeesseneees 189 DANKSAGUNG nahen 203 Abkurzungsverzeichnis Im Text verwendete Abkurzungen Abb abs ANAE Basophile G bzw CHCM CV d d h DSB eosinophile G et al F 800 Fa fl fmol H 1 HDW HCT HGB ICSH Ks EDTA k a Kap Li LUC Lympho MCH MCHC MCV MN MPV Abbildung absolut o Naphtylacetat Esterase F rbung Basophile Granulozyten beziehungsweise Mittlere H moglobinkonzentration der Erythrozyten engl Corpuscular Haemoglobin Concentration Mean Variationskoeffizient Coefficent of Variation Mittelwert der Dif
96. em Tag und zw lf Jahren Tab 13 Evaluierung ADVIA 120 Anzahl untersuchter Rinder Rassen und Geschlechterverteilung Sonstige Summe 42 Eigene Untersuchungen Die Erstellung der Referenzbereiche erfolgt anhand von 432 auswertbaren Blutproben aus zwolf hessischen und nordrhein westfalischen Herdbuchzuchtbetrieben wobei je sechs Betriebe pro Rasse besucht wurden Insgesamt wurden 504 gesunde Tiere in die Untersuchung einbezogen Von diesen Proben konnten 71 aufgrund von Thrombozytenverklumpung geronnener Blutproben oder unsachgem bef llter Blutr hrchen nicht mit in die Untersuchung einbezogen werden Die Probenentnahme wurde im Winterhalbjahr Anfang Dezember bis Mitte M rz durchgef hrt Alle Tiere befanden sich zu diesem Zeitpunkt im Stall Drei Betriebe verf gten ber Kurzst nde mit Anbindehaltung die restlichen Betriebe ber einen Liegeboxenlaufstall K lber und Jungrinder wurden sowohl in Anbindehaltung als auch freilaufend in Gruppen gehalten Es wurden nur weibliche Tiere in die Untersuchung einbezogen Rinder acht Wochen vor und sowie zw lf Wochen nach der Kalbung wurden nicht mit in die Untersuchung aufgenommen Zur Feststellung des Gesundheitszustandes wurde eine ausf hrliche Anamnese erhoben und eine klinische Untersuchung durchgef hrt Auf eine Ermittlung der K rperinnentemperatur wurde zugunsten einer schnelleren Probenentnahme verzichtet um den Einflu durch Stre zu minimieren Das Grundfutter f
97. en BOLLINGER P B DREWINKO B BRAILAS C D SMEETON N A TRUJILLO J M 1987 The Technicon H 1 an Automated Hematology Analyzer for Today and Tomorrow Complete Blood Count Parameters Am J Clin Path 87 71 78 BOROVICZENY K G V 1991 Entwicklung der Blutzellanalytik In Boll Irene and Heller Silke Praktische Blutzelldiagnostik INSTAND Schriftenreihe Band 7 Springer Verlag Berlin Heidelberg 1 4 7 Schrifttumverzeichnis 191 BOSTEDT H BERCHTOLD M 1968 Veranderungen der Glucose Konzentration und der Zahl der eosinophilen Leukozyten im Blut von Rindern intra und post partum Berl Munch Tierarztl Wschr 81 243 245 BUSCH B 1965 Blutuntersuchungen an weiblichen Kalbern im Zeitraum vom 8 bis 99 Lebenstag 1 Mitteilung Die Entwicklung der morphologischen Blutwerte Mh Vet Med 20 545 550 CHAPMAN D 2001 Case Study Large Platelets in a Trauma Patient http www bloodline net Stories storyReader 2568 COLE DJ ROUSSEL AJ WHITNEY MS 1997 Interpreting a Bovine CBC Evaluating the leukon and acute phase proteins Vet Clin North Am Food Anim Pract 5 470 478 CORAPI W V ELLIOTT R D FRENCH T W ARTHUR D G BEZEK D M DUBOVI E J 1990 Thrombocytopenia and Hemorrhages in Veal Calves infected with Bovine Viral Diarrhea Virus J Am Vet Med Assoc 196 590 596 DAVIES D T FISHER G V 1991 The Validation and Application of the Technicon H 1 for the Automated Ev
98. en Varianzanalyse Durch die Bestimmung von Variationskoeffizient VK und Standardabweichung S ist die Verteilung der Werte um den Mittelwert X zu beurteilen Abh ngig vom Abstand zum Mittelwert wird die Pr zision als gut oder schlecht eingestuft Bei schiefer Verteilung der Orginaldaten wurde eine logarithmische Transformation durchgef hrt und der geometrische Mittelwert X mit Streufaktor SF berechnet Die Untersuchungen zur Probenalterung und des Einflusses verschiedener Antikoagulanzien auf die Me ergebnisse wurden mittels einer zweifaktoriellen Varianzanalyse ausgewertet 3 1 7 4 Matched t Test Wilcoxon Test Die Bestimmung der Signifikanz zwischen den Mittelwerten erfolgte bei normalverteilten Differenzen mittels dem t Test f r verbundene Stichproben und bei nicht normalverteilten Differenzen mittels Wilcoxon Test 3 1 7 5 Klassischer X 2s Referenzbereich Die Erstellung eines Referenzbereiches erfolgte blicherweise durch Bestimmung des arithmetischen Mittelwertes und der zweifachen Standartabweichung Voraussetzung f r dieses Vorgehen ist eine Normalverteilung der Werte Durch x 2s sollen 95 gesunde Individuen einer Population erfa t werden ACKERMANN 1983 Eigene Untersuchungen 71 3 1 7 5 1 Test auf Normalverteilung Die Normalverteilung der Daten ist nicht direkt beweisbar Die Antithese hingegen ist mittels des Shapiro Wilks Test beweisbar Programm BMDP2D Liegt auf einem Signifikanzniveau von z B
99. enzbereiche Zusammenfassung der Literatur Parameter Pomsel 1980 Einheit 1 4 2 6 1 3 6 ohne Woche Wochen Monate Monate Jahr Jahre Jahre Angabe X 8 28 8 28 8 01 10 03 9 96 8 53 7 53 8 02 WBC s 139 1 58 192 1 99 226 163 1 39 1 80 10G I n 427 566 668 377 7367 6745 6866 6372 x 7 20 7 84 8 43 8 66 7 50 6 03 5 93 6 36 or s 1 28 145 129 1 49 096 1 15 0 75 1 17 n 340 911 1137 395 858 814 1956 3599 x 6 90 6 34 5 87 6 65 7 06 6 86 6 76 6 95 HGB s 149 1 43 165 137 1 32 1 66 1 3 1 21 mmol l n 483 1851 3344 683 751 944 2352 5903 x 0 34 0 34 0 29 0 36 0 35 0 33 0 33 0 33 ae s 0 03 0 05 005 005 004 003 0 06 0 03 n 972 1175 2056 563 721 455 1929 5924 X 47 78 42 99 34 64 41 5 47 20 55 22 55 99 52 20 Be Ss k a k a k a k a k a k a k a k a n k a k a k a k a k a k a k a k a X 0 96 0 81 0 70 0 77 0 94 1 14 1 14 1 09 MCH sS k a k a k a k a k a k a k a k a fmol n k a k a k a k a k a k a k a k a X 20 05 18 81 20 09 18 47 19 94 20 61 20 36 20 94 a Ss k a k a k a k a k a k a k a k a O o n k a k a k a k a k a k a k a k a 40 Schrifttum Fortsetzung Tab 12 Altersabhangige Referenzbereiche Zusammenfassung der Literatur Parameter Pomsel 1980 Einheit 1 4 2 6 1 3 6 ohne Woche Wochen Monate Monate Jahr Jahre Jahre Angabe 40 99 33 09 27 27 26 29 27 67 31 61 32 04 33 39 Neutro s 10
100. er Serie Softwareversion 4 vgl a Kapitel 3 1 10 zusammengestellt 90 Eigene Untersuchungen Tab 23 Pr zision des ADVIA 120 f r die Parameter der Blutzelldifferenzierung beim Rind x SD Mittelwert Standardabweichung innerhalb einer Probe bei Dreifachmessung CV Variationskoeffizient ADVIA 120 Softwareversionen 1 4 ADVIA 120 Parameter Prazision Uber verschiedene Serien Prazision Eaka hinweg bei Dreifachmessung 25fach Versioni Version Version3 Version4 Messung n 115 n 30 n 60 n 30 Neutrophile G X SD 3 39 2 12 3 41 1 84 3 00 1 87 5 27 4 94 4 19 0 21 Gil CV 14 92 4 00 6 04 4 45 4 98 Lymphozyten X SD 4 43 1 35 4 82 1 57 4 53 1 67 3 56 1 63 1 73 0 38 Gil CV 10 62 5 37 7 30 11 13 22 03 Monozyten X SD 0 62 0 38 0 46 0 18 0 43 0 23 0 63 0 41 0 56 0 16 Gil CV 18 08 15 89 26 39 31 03 28 78 Eosinophile G X SD 0 43 0 31 0 56 0 39 0 40 0 43 0 25 0 35 0 10 0 04 Gil CV 19 50 11 29 20 35 31 15 40 67 Basophile G X SD 0 07 0 03 0 12 0 05 0 09 0 07 0 09 0 08 0 08 0 01 Gil CV 19 58 12 74 18 97 18 39 11 01 X SD 0 04 0 04 0 11 0 06 0 05 0 03 0 13 0 11 0 09 0 07 LUC GI CV 41 16 23 87 43 41 98 28 82 75 logarithmierte Werte Eigene Untersuchungen 91 Fortsetzung Tab 23 ADVIA 120 ne u a 1 4 ADVIA 120 arameter Pr zision ber versc iedene
101. er durchgef hrt werden soll Die Wirkungsweise und Zusammensetzung der Reagenzien mu dargelegt Hinweise auf Umweltbelastung gegeben und ein Nachweis ber die Erf llung der in Deutschland geltenden Sicherheitsbestimmungen gef hrt werden Die Auswahl von Vergleichsmethoden und Kontrollmaterial zur berpr fung der Richtigkeit einer Messung bildet den Kernpunkt der Phase 1 In Tabelle2 sind die international und national derzeit anerkannten Methoden aufgef hrt 14 Schrifttum Tab 02 International und national anerkannte Referenzmethoden und Kontrollmaterialien zur Uberprifung der Richtigkeit f r die Blutzellzahlung und differenzierung ENGLAND et al 1994 VON RUCKER et al 1994 Referenzmethode Referenzmaterial Hamoglobin H miglobincyanid Methode NCCLS Hamoglobin Cyanid konzentration Protokoll H15 A Standard ICSH Empfehlung in Clin Lab Haemat ICSH 9 73 1987 BCR European DIN 58931 1995 Community Bureau of Reference Hamatokrit Zentrifugations Methode Frischblut NCCLS Protokoll H7 A Surrogatmaterial ICSH Empfehlung in J Clin Pathol 33 semi stabiles Blut 1 1980 z B ACD Blut DIN 58933 1 1995 Erythrozyten Elektronische Impulszahlung im Frischblut konzentration DurchfluBzytometer Surrogatmaterial ICSH Empfehlung in Clin Lab Haemat partiell stabile 10 203 1988 Erythrozytenpraparationen DIN 58932 1 2 3 58934 1 z B fixierte stabi Zellen 1996 1998 1994 1997 Leukozyten Elektr
102. erechnung einbezogen F r die Retikulozytenanalytik flie en durch Fehlermeldungen des Analysesystems ebenfalls verminderte Probandenzahlen in die Berechnung der Referenzbereiche ein 116 Eigene Untersuchungen 3 2 6 1 Referenzbereiche f r die Parameter des roten Blutbildes Die Parameter des roten Blutbildes werden in den Abbildungen 37 bis 49 dargestellt Die Abbildungen 38 und 39 zeigen die Entwicklung der Erythrozytenzahl bis zu einem Alter von 10 Jahren f r die Rassen SB und DFV 14 O DFV SB Rassenmittel SB DFV RBC T I 0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 Alter Monate Abb 38 Altersabh ngige Entwicklung der Erythrozytenzahl f r die Rinderrassen schwarzbunte Holstein und Deutsch Fleckvieh Dargestellt sind Mittelwert sowie oberer und unterer Grenzwert bis zum Alter von 24 Monaten Regressionsgeraden Altersgruppe lt 6 Monate Altersgruppe 6 24 Monate gleichung SB y 9 89 y 10 60 0 13x DFV y 9 89 y 10 10 0 13x Normbereichsgrenze 1 90 1 80 t Wert 2 026 1 976 Signifikanzen Rasseabhangigkeit p 0 05 p lt 0 001 Altersabhangigkeit n s p lt 0 001 Freiheitsgrade SB n 19 n 89 DFV n 21 n 63 Eigene Untersuchungen 117 14 O DFV SB Rassenmittel 12 10 5 2 eet ee ee eee 5 8 i opo a O e o P L s EUR S S e ge gy 2 e 0 Sic 8 yom 084 o Po E 6 0 o0 B
103. ereich der Fleckviehtiere um 0 50 T I niedriger als die der schwarzbunten Rinder liegt Bei den Tieren ber 24 Monaten Lebensalter ist weder ein Rasseeinflu noch ein relevanter Alterseinflu feststellbar Der Referenzbereich ist mit einer Spannweite von 5 90 8 44 T I mit den Ergebnissen von ST BER u GR NDER 1990 f r erwachsene Rinder weitgehend identisch Der H moglobingehalt zeigt keine Abh ngigkeit vom Alter In der Altersgruppe ber zwei Jahre ist der Mittelwert der schwarzbunten Rinder um 0 3 mmol l h her als der Mittelwert der Fleckviehk he Ein Vergleich mit den Werten von POMSEL 1980 zeigt ebenfalls da der H moglobingehalt keine eindeutige Entwicklung in Abh ngigkeit vom Alter zeigt F r die Gruppe j nger als sechs Monate kann demnach ein Referenzbereich von 6 03 8 42 mmol l angegeben werden f r die Tiergruppe der heranwachsenden Rinder 6 24 Monate lautet dieser Bereich 6 00 8 62 mmol l Eine Unterteilung der Altersgruppen erscheint hier nicht weiter sinnvoll so da der Referenzbereich f r Tiere bis zum Alter von 24 Monaten 6 00 8 62 mmol l betr gt Laut K lberhaltungsverordnung mu bei K lbern ein auf die Gruppe bezogener durchschnittlicher H moglobinwert von mindestens 6 mmol l Blut gew hrleistet sein BGBl 1997 ST BER u GR NDER 1990 geben f r K lber einen Referenzbereich von 4 9 8 7 mmol l an Unter dem Gesichtspunkt des Tierschutzes mu dieser ge nderte Referenzbereich dringend in d
104. ernsegmentierungsmethode Die Gesamtleukozytenzahl LeukoB und der absolute bzw prozentuale Anteil der basophilen Granulozyten wird im Erythrozyten Thrombozyten Kernsegmentierungs Kanal bestimmt Durch eine Behandlung mit Phtals ure pH 2 werden alle Zellen au er basophile Granulozyten bei 32 34 C gestrippt Beim sogenannten cytoplasmatic stripping werden die Zellen durch eine oberfl chenaktive Substanz vom Zytoplasma getrennt so da nur noch der Nukleus erhalten bleibt Thrombozyten und Erythrozyten werden vollst ndig lysiert Die Zellen in der solcherma en vorbereiteten Zellsuspension werden in der Flu zelle mit Laser Streulicht durchleuchtet siehe Kapitel 2 2 3 das austretende Streulicht in elektrische Signale umgewandelt und in jeweils 50 Kan len x y Achse gez hlt Die Ergebnisse des Gro winkelstreulichtsignals werden auf der x Achse Dichte des Kernchromatins des Nukleogramms aufgetragen Die Ergebnisse des Kleinwinkelstreulichtsignals werden auf der y Achse Zellkerngr e des Nukleogrammes aufgetragen Abbildung 7 zeigt Nukleogramme vom Mensch A und Rind B Im Feld Nr 1 liegt die Population der intakten basophilen Granulozyten die durch ihre Gr e leicht von den brigen Zellklassen getrennt werden kann Unter der Basophilenpopulation liegen die Zellkerne der mononukle ren Zellen MN Feld Nr 2 und im Feld Nr 3 die der polymorphkernigen PMN Zellen Die PMN Punktwolke Cluster enth lt die Zellen
105. erschiedlicher Lagertemperatur 4 C 22 C ber 72 Stunden wird durch Messung zu den Zeitpunkten 0 6 12 24 36 48 60 und 72 Stunden nach Blutentnahme in den nun folgenden Kapiteln beschrieben Dazu wurden von zehn Rindern je zwei Ks3 EDTA Blutproben entnommen und f r die Dauer dieser Untersuchung im K hlschrank und bei Raumtemperatur gelagert Die statistische Auswertung der Me werte erfolgte mittels zweifaktorieller Varianzanalyse Die Ergebnisse f r die Parameter der Blutzellzahlung und Blutzelldifferenzierung sind in den folgenden Kapiteln dargestellt Die folgenden Tabellen Tabelle 26 u 27 enthalten die Ergebnisse der statistischen Auswertung getrennt nach Blutzellzahlung und Differenzierung Die Einteilung erfolgt nach dem Einflu von Lagertemperatur Lagerdauer sowie dem Einflu beider Lagerbedingungen 96 Eigene Untersuchungen Tab 26 Einflu von Lagerdauer und Lagertemperatur auf die MeBergebnisse des ADVIA 120 anhand von Rinderblutproben n 10 p Signifikanz niveau n s nicht signifikant Einflu Parameter ne ee Lagerdauer und Lagertemperatur Lagerdauer Lagertemperatur WBC p lt 0 001 p lt 0 01 p lt 0 001 RBC n s p lt 0 01 p lt 0 01 HGB n s n s n s HCT p lt 0 05 p lt 0 001 p lt 0 001 MCV p lt 0 05 p lt 0 001 p lt 0 001 MCH n s n s n s MCHC n s p lt 0 01 n s PLT p lt 0 05 p lt 0 05 p lt 0 001 MPV p lt 0 001 p lt 0 001 p lt 0 001 Lymphozyten abs n s
106. erte Lichtmenge erfa t eine Photodiode EDER u FRITSCHE 1986 DOTSON 1998 Das Streulicht ist die Summe mehrerer physikalischer Effekte Der auf die Zelle auftreffende Lichtstrahl wird von der Oberfl che teilweise reflektiert und beim Ein und Austritt aus der Zelle gebrochen Zus tzlich wird durch intrazellul re Strukturen z B verdichtetes Chromatin und zellul re Granula Licht absorbiert und gebeugt Die Depolarisation bestimmter Wellenl ngen tr gt ebenfalls zur Streuung bei WEBER 1992 Zur Z hlung von Leukozyten Erythrozyten und Thrombozyten wird die Beobachtung genutzt da die meisten mikroskopisch kleinen Partikel den gr ten Anteil des einfallenden Lichtes in einem Winkel von 0 15 streuen ZELMANOVIC et al 1992 Bei der Erythrozyten und Thrombozytenmessung mit den H Systemen von Technicon und dem ADVIA 120 von Bayer m ssen f r reproduzierbare Ergebnisse isovolumetrisch aufgekugelte Zellen vorliegen s Kapitel 3 1 2 2 4 sowie eine Lichtquelle mit monochromatischem Licht und eine Zellvereinzelung durch hydrodynamische Zellfokussierung KOSANKE 1999 Beim ADVIA 120 und den H Systemen von Technicon werden bei einem Winkel von 2 3 die Volumensignale und bei einem solchen von 5 15 die Dichtesignale H moglobingehalt des Zellinhaltes von Erythrozyten empfangen Die Bestimmung der einzelnen Erythrozytenparameter erfolgt mittels der Mie Theorie Bei der kombinierten Messung von Streulicht und Absorption wird da
107. erung beschrieben worden Beim Rind steigt der MPC bis zum Alter von sechs Monaten rasant an um dann bis zum Alter von 2 Jahren nur noch m ig anzusteigen und bei den Tieren ber zwei Jahren kommt es zu einem klinisch nicht relevanten R ckgang des MPC von 0 0001 g l pro Lebensjahr Der Rasseunterschied zeigt sich dergestalt da schwarzbunte Tiere um 7 10 g l h here Werte aufweisen F r die Gruppe von Tieren j nger als 6 Monate kann ein mittlerer Referenzbereich bei einem Alter von zwei Monaten mit 220 264 g l in der Gruppe bis 2 Jahre lautet der ermittelte Referenzbereich f r 16 Monate alte Tiere 241 282 g l F r adulte Tiere betr gt der Referenzbereich 243 283 g l MORITZ 2000 gibt den Referenzbereich mit 159 70 246 80 g l an Die mittlere Thrombozytenmasse zeigt die gleiche altersabh ngige und rasseabh ngige Entwicklung wie der MPM AHNADI et al 2001 untersuchen die Aussagekraft des MPC an Patienten mit Brustschmerz Sie kommen zu dem Ergebnis da der MPC ein geeigneter Parameter zur Fr herkennung des akuten Koronarsyndroms ist F r zwei Monate alte Tiere lautet der Referenzbereich 0 80 0 99 pg und f r ber zwei Jahre alte Tiere 0 90 1 20 pg MORITZ 2000 gibt den MPC mit 1 0 1 6 pg an Die Bedeutung der neuen Thrombozytenparameter zur Fr herkennung und Diagnose von Krankheiten f r das Rind mu nun mit Hilfe dieser Referenzbereiche in weiteren Studien untersucht werden Erste Ergebnisse aus der Hu
108. estimmung der Retikulozytenzahl wurden je zwei Ausstriche mittels Brilliantkresylblau angef rbt 3 1 6 1 Panoptische F rbung nach Pappenheim PAN Die luftgetrockneten Blutausstriche wurden f r 5 Minuten mit unverd nnter May Gr nwald L sung Fa Merck Darmstadt gef rbt und mit Phosphat Puffer nach Weise pH 7 2 drei Minuten gesp lt Der Ausstrich wurde danach 15 Minuten in verd nnter Giemsa L sung Verd nnung 1 20 inkubiert und zum Abschlu nochmals mit Phosphatpuffer abgesp lt Die gef rbten Blutaustriche wurden mit Entellan Fa Merck Darmstadt und Deckglas eingedeckt 68 Eigene Untersuchungen 3 1 6 2 Alpha Naphtylacetat Esterase F rbung ANAE Zur Herstellung der o Naphtylacetat Esterase F rbung wurde das F rbeset LEUKOGNOST EST verwendet Hierzu wurden die luftgetrockneten Blutausstriche mit LEUCOGNOST Fixiergemisch eine Minute lang bedeckt und anschlie end mit Aqua dest abgesp lt Die so vorbehandelten Blutausstriche wurden in frisch bereitete F rbel sung aus Testansatz eingestellt und f r 2 Stunden im Dunkeln inkubiert Im Anschlu wurden die Blutausstriche mit Aqua dest f r 10 Sekunden gesp lt und f r 30 Minuten in Mayers H malaunl sung nachgef rbt Die so pr parierten Objekttr ger wurden 5 Minuten unter Leitungswasser gebl ut und nach Lufttrocknung zur Konservierung mit AQUATEX Fa Merck Darmstadt eingedeckt 3 1 6 3 Peroxidase Farbung POX Die Aufbereitung der Blutausstriche zur F
109. f r Windows Version 3 2 h EISENSMITH 1994 erzeugt 3 1 7 1 Korrelationsanalyse Bei der Auswertung des Methodenvergleichs wurde der Korrelationskoeffizient r und die Hauptkomponentengerade zur Darstellung des Zusammenhangs der MeBergebnisse berechnet In der Darstellung werden die Me wertpaare als Punktwolke und die Hauptkomponentengerade abgebildet Bei einer vollkommenen bereinstimmung der Me wertpaare entspricht r 1 und die Hauptkomponentengerade verlauft deckungsgleich mit der Winkelhalbierenden 3 1 7 2 Regressionsanalyse Aus dem Resultat der Regressionsanalyse kann bei nderung einer Einflu gr e bestimmt werden wie sich die Auspr gung einer Zielgr e ver ndert Die dabei bestimmte Regressionsgrade ist die Gerade bei der die Summe der Abstandsquadrate den kleinstm glichen Wert annimmt LORENZ 1996 Die Darstellung der Ergebnisse erfolgt ebenfalls als Punktwolke mit einer Hauptkomponentengerade f r die gleichberechtigte Variable Die Gleichung der Regressionsgeraden lautet y mxX b bei einer Log Normalverteilung der Orginaldaten lautet die Formel Ig y m Ig x b wobei in beiden Formeln m dem 70 Eigene Untersuchungen linearen Regressionskoeffezienten entspricht und b den Y Achsenabschnitt bezeichnet 3 1 7 3 Varianzanalyse Die berpr fung der Pr zision des ADVIA 120 f r die Ergebnisse der Wiederholungsmessung innerhalb einer Serie und ber verschiedene Serien hinweg erfolgte mittels der einfaktoriell
110. f rmige Gestalt Tritt durch eine Gef verletzungen Blut aus bilden sie tentakel hnliche Protoplasmaausl ufer und neigen zu Zerfall und Agglutination Sie sind somit ein wichtiger Bestandteil der Blutgerinnung EDER 1987 Das Rind verf gt ber 300 800 G l Thrombozyten im zirkulierenden Blut Thrombozytosen treten nach Operationen Blutverlusten und Splenektomien auf Thrombozytopenien k nnen bei disseminierter intravasaler Gerinnung auftreten und bei Depression des Knochenmarks durch Medikamente oder ionisierende Strahlung ausgel st werden KRAFT et al 1997 Thrombozytopenien im Zusammenhang mit BVD MD Infektionen werden u a von CORAPI et al 1990 beschrieben Tabelle 8 auf der folgenden Seite stellt die Referenzbereiche f r Thrombozyten nach Angaben verschiedener Autoren gegen ber Tab 08 Thrombozytennormalwerte aus der Literatur Autoren und Erscheinungsjahr der Ver ffentlichung R 3 Schal Bea St ber u Gr nder Kraft u D rr ia 1990 1997 und Einheit 1977 n adulte adulte adulte K lber i f Rinder Rinder Rinder Thrombozyten Gi l 200 800 300 800 100 800 32 Schrifttum 2 5 4 Vergleichsuntersuchungen ADVIA 120 MORITZ 2000 und DUFFIELD et al 2000 erstellten mit Hilfe des ADVIA 120 vom Alter unabh ngige Referenzbereiche f r das Rind In der folgenden Tabelle 9 sind die Ergebnisse zusammengefa t Tab 09 Referenzbereiche erstellt am ADVIA 120
111. fahne nicht die R nder und das Ende des Objekttragers erreicht und weder zu d nn noch zu dick ist UNDRITZ 1972 Zur F rbung des luftgetrockneten Objekttr gers stehen verschiedene Methoden zur Verf gung Die kombinierte May Gr nwald Giemsa F rbung nach Pappenheim s Kapitel 3 1 5 1 und die F rbung nach Wright sind panoptische F rbungen zur Routinediagnostik Spezialf rbungen zur Identifizierung einzelner Zellgruppen sind die Supravitalf rbung zur Darstellung der Retikulozyten die Peroxidasef rbung zur Darstellung der zellul ren Peroxidase in den Granula der Granulozyten und die a Naphtyl Esterase F rbung zur besseren Identifikation der Monozyten s Kapitel 3 1 5 2 3 1 5 4 Die Differenzierung der Blutausstriche ist durch eine geschulte Person durchzuf hren wobei stundenlanges Mikroskopieren zu vermeiden ist um Fehler aufgrund nachlassender Konzentration so gering wie m glich zu halten Der Objekttr ger wird nach der makroskopischen Begutachtung vorzugsweise mit einem binokularen Mikroskop zun chst mit dem 10fachen Objektiv durchgemustert um eine bersicht ber Verteilung und Anordnung der Blutzellen zu erhalten Anschlie end werden im Ausstrich mit limmersion und einem 40 50er oder 100er Objektiv folgende Befunde aufgenommen 1 Erythrozytenmorphologie Gr e Gestalt Farbe Einschl sse Vorstufen 2 Leukozytenmorphologie und prozentuale Verteilung 3 Qualitative Ver nderungen der Granulozyten Granulation
112. ferenz das hei t schwarzbunte Holstein Eosinophile Granulozyten et alii Sysmex F 800 Firma Femtoliter Femtomol Stunden hours Technicon H 1 Hamoglobinverteilungsbreite Haemoglobin Distribution Width Hamatokrit Hematocrit Hamoglobin Haemoglobin Internationales Kommittee f r Standardisierung in der H matologie International Committee for Standardization in Haematology Jahre Kalium Ethylendiamintetraessigs ure keine Angabe Kapitel Lithium Gro e Peroxidase Negativ Gef rbte Zellen Large Unstained Cells Lymphozyten Mittlerer Zellul rer H moglobingehalt Mean Corpuscular Haemoglobin Mittlere H moglobinkonzentration der Erythrozyten engl Mean Corpuscular Haemoglobin Concentration Mittleres Erythrozytenvolumen Mean Corpuscular Volume Mononukle re Zellen Mononucleated Cells Mittleres Thrombozytenvolumen Mean Platelet Volume n Na n b NCCLS Neutrophile G PAN PDW PLT PMN POX r RBC rd RDW SB sd Sin Tab u a vgl W LCC W LCR W SCC W SCR WBC x Abk rzungsverzeichnis Probenzahl Natrium nicht bestimmt Nationales Kommittee f r Klinische Labor Standards National Committee for Clinical Laboratory Standards Neutrophile Granulozyten Panoptische F rbung nach Pappenheim Thrombozyten Volumenverteilungsbreite Platelet Volume Distribution Width Thrombozytenzahl Platelet Count Polymorphnukle re Zellen Polymorphnucleated Cells Peroxidase F
113. gr ten Unterschiede kann beim Vergleich von K3 EDTA mit Na Citrat festgestellt werden Unabh ngig vom paarweisen Vergleich wurden bei der Thrombozytenz hlung die gr ten relativen Unterschiede festgestellt dicht gefolgt von der eosinophilen und basophilen Granulozytenzahl Von BEDDIES 1999 und SEEGERS 1997 ist der Einflu von Li Heparinblut auf die Thrombozytenz hlung beim Schaf und beim Pferd beschrieben worden Beide Autoren f hren dies auf die erh hte Agglutinationsneigung der Thrombozyten bei der Verwendung von Li Heparin als Antikoagulanz zur ck Dieses geht konform mit den Beobachtungen beim Rind da durch die erh hte Anzahl von Thrombozytenaggregaten der MPC rapide abf llt und die Fehlermeldung PLT Clumps den Untersucher auf eine erh hte Zahl gt 350 Thrombozytenaggregate hinweist Aufgrund des negativen Einflusses von Li Heparin auf die Z hlung der Thrombozyten durch Aggregatbildung und damit auf die Thrombozytendichte MPC ist der Einsatz als Gerinnungshemmer bei Blutproben die am ADVIA 120 gemessen werden abzulehnen Der Nachteil von Na Citrat liegt in der Verd nnung der Probe Diskussion der Ergebnisse 163 demzufolge zu niedrigen Zellzahlen welche eine rechnerische Korrektur der Ergebnisse erforderlich machen 4 1 4 Blutalterung Der Einsatz des ADVIA 120 wird auf groBe Kliniken und kommerzielle Laboratorien beschrankt bleiben Der erforderliche Transport verlangert den Zeitraum zwischen Probeentnahme und A
114. heit bei Dreifachmessung 25 fach Messung Version 1 Version 2 Version 3 Version 4 Version 4 n 115 n 30 n 60 n 30 n 1 i x SD 8 98 2 57 9 41 2 31 8 49 2 79 9 93 6 26 6 75 0 15 WBC Gil CV 3 84 2 00 2 69 2 26 2 20 x SD 7 02 1 20 8 41 4 1 54 7 444 1 54 7 16 2 10 5 62 0 07 RBC T I CV 1 45 1 44 1 76 1 11 1 20 xX SD 18 62 1 75 20 98 2 14 20 21 1 91 21 71 5 84 16 68 0 12 RDW CV 0 91 0 84 0 76 0 59 0 08 HGB SD 6 93 0 87 6 97 1 04 6 77 1 22 5 92 1 44 6 89 0 10 mmol l CV 1 06 1 21 1 63 1 19 1 40 x SD 1 20 0 11 1 57 0 16 1 52 0 22 1 60 0 34 HDW n b CV 0 82 0 78 0 88 0 78 x SD 0 30 0 04 0 31 0 05 0 29 0 05 0 26 0 06 0 28 0 003 HCT I I CV 1 14 1 76 1 87 1 16 1 30 x SD 42 99 5 21 37 52 6 47 39 84 5 41 37 34 8 30 50 65 0 46 MCV fl CV 0 54 0 44 0 47 0 37 0 90 MCH x SD 1 00 0 11 0 84 0 13 0 93 0 15 0 86 0 19 1 22 0 02 fmol CV 1 12 1 94 1 56 1 35 1 40 McHc SD 23 27 0 51 22 58 1 11 23 18 1 02 22 88 1 43 24 18 0 39 mmol l CV 0 98 1 91 1 55 1 30 1 60 n b nicht bestimmt logarithmierte Werte 88 Eigene Untersuchungen Fortsetzung Tab 22 ADVIA 120 ADVIA 120 Prazision Softwareversionen 1 4 innerhalb der Parameter Prazision Uber verschiedene Serien hinweg Serie REN bei Dreifachmessung 25 fach Einheit Messung Version Version2 Ver
115. hiebungen der Ergebnisse der Blutzelldifferenzierung deutlich Zum Entnahmezeitpunkt umschlie t das Cluster zur Monozytenz hlung eine dichte Punktwolke 24 Stunden sp ter ist die Punktwolke weniger dicht 48 Stunden sp ter werden nur noch wenige Zellpunkte im Monozytencluster abgebildet Die Ursache hierf r ist eine Gr enverminderung und ein Verlust an endogener Peroxidase der Zellen durch die Lagerung so da die Monozytenpunktwolke in das darunterliegende Lymphozytencluster wandert und deren Zahl erh ht Auf dem gleichem Prinzip beruht der kontinuierliche Anstieg der eosinophilen Granulozyten Hier rutschen neutrophile Granulozyten in das eosinophile Granulozytencluster auf Abbildung 33 bis 36 rechtes Cluster 108 Eigene Untersuchungen Monozytenkluster Abb 33 Leukogramm der Abb 34 Leukogramm der Blutzelldifferenzierung Blutzelldifferenzierung unmittelbar nach Blutentnahme 24 Stunden nach Blutentnahme Monozytenkluster Abb 35 Leukogramm der Abb 36 Leukogramm der Blutzelldifferenzierung Blutzelldifferenzierung 36 Stunden nach Blutentnahme 48 Stunden nach Blutentnahme Eigene Untersuchungen 109 Monozyten Lagerungstemperatur 22 C Lagerungstemperatur 4 C Zellen 10 0 10 20 30 40 50 60 70 80 Zeit Stunden Abb 37 Stabilit t der absoluten Monozytenzahl dargestellt ist der absolute Verlauf x S bei 4 C und 22 C ber 72 Stunden n 10 Auf der Abbildung 37 ist die Abnahme der Monoz
116. hlechtsspezifische Referenzbereiche ccccceeeeeeeeeeeeeeeees 35 2 5 7 Altersspezifische Referenzbereiche cccccccccesseccceeeeeeeeeeeees 37 3 EIGENE UNTERSUCHUNGEN uuuuuusnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnn 41 3 1 Materialund Methoden eu 41 3 1 1 Probandenkls z n sets een 41 3 1 1 1 Blutentnahme zussesessanselssenaeenaeieiee 43 3 1 1 2 Antikoagulanzien ee a eh 44 3 1 2 Hamatologiesystem ADVIA 120 2222440000snnnnnsnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnn 45 3 1 2 1 SOWA anal 46 3 1 2 2 ArbellsWelse eine a a a E a E aig 47 3 1 2 2 1 Hamoglobinmethode ccccceeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeseenseeaeeeeeees 49 3 1 2 2 2 Basophilen Kernsegmentierungsmethode gt 49 3 1 2 2 3 Peroxidasemethode uusn4444nnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnn 51 3 1 2 2 4 Erythrozytenmethode nase 55 Inhaltsverzeichnis I 3 1 2 2 5 3 1 2 2 6 3 1 3 3 1 4 3 1 4 1 3 1 4 2 3 1 4 3 3 1 5 3 1 6 3 1 6 1 3 1 6 2 3 1 6 3 3 1 6 4 3 1 7 3 1 7 1 3 1 7 2 3 1 7 3 3 1 7 4 3 1 7 5 3 1 7 5 1 3 1 7 5 2 3 1 7 5 3 3 1 8 3 1 9 3 1 10 3 2 3 2 1 3 2 1 1 3 2 1 2 3 2 1 3 3 2 2 3 2 3 3 2 4 Inhaltsverzeichnis Thrombozytenmethode sec rss 57 Retikulozytenmethode ccccceceeeeeeeeeeeeeceeeeeeeeeeeeeeeeseeseeeeeeeeees 59 Hamatologiesystem Technicon H 1 cceceeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeeees 61 Hamatologiesystem Sysmex F 800
117. hlkammer wird zur Zellz hlung von Erythrozyten Leukozyten und Thrombozyten verwendet Das Blut wird mit speziellen Mischpipetten 1 200 Erythrozyten 1 100 Thrombozyten oder 1 10 Leukozyten verd nnt Die Zellen werden in der jeweiligen Verd nnung mit Hilfe von Z hlkammer und Mikroskop ausgez hlt Die Z hlkammer ist ein Glasblock mit zwei eingeschliffenen Kammern von 0 1 mm Tiefe In den Boden der Kammern ist ein Gitternetz Z hlnetz eingraviert NIEPAGE 1974 Von den verschiedenen Z hlkammersystemen die entwickelt worden sind soll hier kurz die Verwendung der verbesserten Z hlkammer nach Neubauer beschrieben werden Abbildung 1 zeigt die seitliche Ansicht und die Aufsicht der Neubauer Z hlkammer Schrifttum 5 Deckglas NV V seitliche Ansicht Z hlnetz Steg N J Aufsicht Abb 01 Neubauer Zahlkammer Das Z hlnetz der verbesserten Neubauer Kammer ist durch Linien in neun gleich gro e Quadrate von je 1 mm aufgeteilt Die vier Eckquadrate dienen der Leukozytenz hlung In diesen vier Quadraten werden jeweils alle Zellen gez hlt die innerhalb der Dreifachlinienbegrenzung liegen und die Mittlere dieser Linien nicht ber hren Von den Zellen die auf der mittleren Dreifachbegrenzungslinie liegen werden an zwei aneinander grenzenden Seiten die Zellen mitgez hlt welche die mittlere Begrenzungslinie ber hren Die Berechnung der Zellzahl pro ul Blut erfolgt nach der Formel ZLxaxb
118. hnlicher Peroxidaseaktivit t und hnlichem Volumen liegen im Peroxidasezytogramm in einer Region Mittels Cluster Analyse wird zun chst jede Population aufgrund Position Bereich und Dichte identifiziert Nach der Identifikation erfolgt die Verarbeitung der Zellzahl jeder einzelnen Population Dabei werden die Linien welche die verschiedenen Zellpopulationen trennen auf der Basis einer 52 Eigene Untersuchungen probenweisen Berechnung von der Software durchgef hrt Abbildung 8 zeigt ein Peroxidasezytogramm eines Rind und eines Menschen Abb 08 ADVIA 120 Peroxidasezytogramm A Mensch B Rind Nr 224 Neutrophile Granulozyten Lymphozyten und basophile Granulozyten Eosinophile Granulozyten Monozyten GroBe Ungefarbte Zellen LUC Thrombozytenaggregate Normoblasten Rauschen ON OOF WD Die Populationen der neutrophilen Feld Nr 1 und der eosinophilen Feld Nr 3 Granulozyten k nnen im Peroxidasezytogramm durch ihre Gr e und ausgepr gte Peroxidaseaktivit t beim Rind leicht abgegrenzt werden Die eosinophilen Granulozyten besitzen die gr te Peroxidaseaktivit t Ihre Gr e Eigene Untersuchungen 53 berragt die der Neutrophilen Durch die hohe Peroxidaseaktivitat wird jedoch Streulicht von der zellularen Granula nicht durchgelassen und so eine kleineres Volumen vorgetauscht Durch diesen Effekt bereitet die Isolation dieser Zelltypen beim Rind und beim Menschen keine Schwierigkeiten Die Anzahl der Lymphozyten
119. hrozyten in hypochrom normochrom und hyperchrom Die Schwellenwerte f r das Volumen sind V lt 3 fl V 3 40 fl V gt 40 fl und f r den HGB Gehalt HC lt 19 HC 19 27 HC gt 27 Abb 10 Erythrozyten Zytogramm und RBC Matrix zur numerischen Einteilung der Erythrozytenpopulation Rind Nr 224 RBC Matrix HC 19 HC 19 27 HC gt 27 Ve 40 8 0 0 In der RBC Matrix werden die absoluten und prozentualen Zellzahlen f r jedes Feld wiedergegeben Aus diesen Darstellungen lassen sich in kurzer Zeit alle wichtigen Informationen ber die Erythrozytenmorphologie entnehmen Bei jeder Messung wird eine interne Plausibilit tskontrolle durchgef hrt Dies geschieht durch den Vergleich von gemessener mittlerer H moglobinkonzentration CHCM mit dem berechnetem Wert MCHC Weichen diese Werte um mehr als 5 voneinander ab werden die Eigene Untersuchungen 57 betroffenen Parameter besternt und das System gibt f r diese Messung eine Fehlermeldung aus Im Verlauf eines Zahlvorgangs der 10 Sekunden dauert werden ca 50 000 Erythrozyten und 3000 Thrombozyten beurteilt 3 1 2 2 5 Thrombozytenmethode Die Thrombozytenzahlung erfolgt gleichzeitig mit der Erythrozytenzahlung in einem Arbeitsschritt Neben der Plattchenzahl PLT werden bei der 2D Thrombozytenmessung die im weiteren aufgez hlten Parameter aufgenommen mittleres Thrombozytenvolumen MPV Thrombozytenvolumenverteilungsbreite PDW Thrombokrit
120. ider sieht die Praxis in den meisten Gro labors noch anders aus Die Qualitat der Blutzelldifferenzierung ist eine entscheidende Eigenschaft des Hamatologiesystems Ein zuverlassiges automatisch erstelltes Differentialblutbild reduziert den Arbeitsaufwand und damit die Kosten jeder Untersuchung Die Richtigkeit der Blutzelldifferenzierung des ADVIA 120 wurde durch Differenzierung von 593 Ausstrichen ermittelt Tabelle 39 zeigt die Ergebnisse f r verschiedene Diskussion der Ergebnisse Analysatoren f r das Rind und das Schaf 159 Tab 39 Korrelationskoeffizienten zwischen mikroskopisch und automatisch erstellten Differenzialblutbilder f r Rind und Schaf nach Literaturangaben Autor Bleul Beddies Grommelt Eigene 1998 1999 1999 Untersuchung Analysator Cell Dyn 3500 Technicon H 1 Technicon H 1 ADVIA 120 Spezies Rind Schaf Rind Rind Parameter F rbung PAN r 0 971 r 0 945 r 0 949 r 0 945 raat POX 2 r 0 954 r 0949 r 0 925 ranutozyten ANAE r r 0 944 r 0 945 r 0 962 PAN r 0 935 r 0 943 r 0 939 r 0 895 nein POX r r 0 950 r 0 945 r 0 916 ANAE 2r r 0 950 r 0 936 r 0 938 PAN r 0 761 r 0 244 r 0 234 r 0 395 Monozyten POX r r 0 364 r 0 140 r 0 410 ANAE a r 0 529 r 0 265 r 0 509 PAN r 0 876 r 0 921 r 0 882 r 0 798 a POX Se r 0 911 r 0 869 r 0 770 y ANAE au r 0 905 r 0 875 r 0 657 l PAN r 0 088
121. ie Berechnung der Me bereichsgrenzen erfolgt mit der Formel a a 2 n 1 1 0 2 n 1 x untere bzw obere Grenze des Referenzbereiches amp vorausgew hlte zweiseitige Irrtumswahrscheinlichkeit n Anzahl der Beobachtungen Durch die Bestimmung von kann der Anteil der Grundgesamtheit bestimmt werden 3 1 8 Altersabhangigkeit der Referenzbereiche Der Einfu des Alters auf einen Parameter kann dazu f hren da die Angabe eines globalen Referenzbereiches zu einem bestimmten Lebensalter zu weite oder falsche Referenzbereiche liefert Eine Einteilung in Altersgruppen erscheint daher sinnvoll Der Nachteil dieser Einteilung ist die willk rliche Gruppenbildung die unter Umst nden sehr viele Einzelwerte zur Folge hat In dieser Arbeit wurden die Daten mittels einer nicht parametrischen Regression mit einem lokal gewichteten Regressionsgl tter S Plus Version 3 1 Statistical Sciences Inc aufbereitet und in drei Altersgruppen eingeteilt Abbildung 19 zeigt das Diagramm f r den MCV Dabei lassen sich die drei Altersgruppen erkennen die Aufgrund eines Einschnitts im Kurvenverlauf einzeln behandelt werden Eigene Untersuchungen 73 MCV fi 45 50 55 40 35 l I l T T 0 20 40 60 80 100 120 Alter in Monaten Abb 19 Nicht parametrische Regression des mittleren Erythrozytenvolumens Die Linien A B C stellen sind unterschiedliche Glattungen der Werte dar Fur die Kurve A wurden die Werte mit
122. ie Erythrozytenzahl entwickelt sich gegenl ufig zum Erythrozytenvolumen Die Abnahme der Erythrozytenzahl wird durch eine Zunahme des Erythrozytenvolumens kompensiert der H matokritwert ist dadurch in diesem Zeitraum nur geringen nderungen unterworfen Der CHCM steigt vom Zeitpunkt der Geburt zuerst rasant an um danach in einen moderaten Anstieg ber zu gehen Die Retikulozytenzahl im zirkulierenden Blut f llt nach der Geburt parallel mit der Erythrozytenzahl ab Im nun folgenden Abschnitt erfolgt eine Besprechung der einzelnen Parameter Die Erythrozytenzahl entwickelt sich in den ersten sechs Monaten ohne Alterseinflu Der Referenzbereich liegt zwischen 7 79 und 11 59 T I POMSEL 1980 beschreibt in seiner Arbeit eine Zunahme des RBC bis zum Alter von sechs Monaten zu diesem Zeitpunkt gibt er einen Referenzbereich von 7 17 10 15 T l an ST BER u GR NDER 1990 dagegen legen f r K lber die untere Grenze bei 5 0 T l und die obere Grenze bei 10 0 T I fest Ein Erkl rung f r die Zunahme der Erythrozytenzahl um ber 1 0 T I in der Gruppe bis 6 Monaten 166 Diskussion der Ergebnisse gegen ber der Arbeit von STOBER u GRUNDER sowie POMSEL 1980 kann in der gesetzlichen Festlegung der Eisenversorgung von K lbern vermutet werden F r die Altersgruppe von 6 24 Monaten verringerte sich die Erythrozytenzahl monatlich um 0 13 T l so da bei einem Alter von 16 Monaten der Referenzbereich 6 72 10 32 T I betr gt wobei der Referenzb
123. ie t gliche Praxis bernommen werden Aus dem selben Grund erscheint auch eine Angabe von altersabh ngigen Referenzbereichen als unabdingbar F r die Tiere ber 24 Monaten ergab sich ein Referenzbereich von 5 50 8 14 mmol l Dieses stimmt mit dem von KRAFT 1997 5 6 8 7 mmol l angegebenen Referenzbereich f r das Rind weitgehend berein Daraus l t sich f r die von KRAFT 1997 verwendeten Referenzbereiche folgern da die Referenzpopulation fast ausschlie lich aus adulten Tieren bestanden hat Der H matokritwert entwickelt sich in den ersten 24 Monaten einheitlich so da keine Unterteilung erfolgt Der H matokritwert verringert sich von der Geburt bis zum Alter von 24 Monaten stetig Danach bleibt der Referenzbereich stabil Im Alter von Diskussion der Ergebnisse 167 2 Monaten liegt der Referenzbereich bei 0 26 0 38 I I Ab 24 Monaten bleibt der Referenzbereich von 0 24 0 35 I I stabil Der Rasseunterschied von 0 01 I I erscheint hier nicht von Bedeutung Sowohl STOBER u GRUNDER 1990 wie auch KRAFT 1997 und MORITZ 2000 sowie JAIN 1993 machen keine altersbedingten Unterscheidungen Das mittlere Erythrozytenvolumen ist in Abh ngigkeit vom Alter starken Ver nderungen unterlegen Der Referenzbereich f r die Jungendklasse erreicht mit sechs Monaten den niedrigsten Wert 27 00 36 10 fl Mit 16 Monaten besitzen die Erythrozyten wieder das gleiche Volumen wie zum Geburtszeitpunkt von 31 40 42 95 fl Die Tiere
124. ieh Dargestellt sind Mittelwert sowie oberer und unterer Grenzwert bis zum Alter von 24 Monaten Regressionsgeraden Altersgruppe lt 6 Monate Altersgruppe 6 24 Monate gleichung SB y Ig 0 89 0 02x y Ig 1 02 0 003x DFV y Ig 0 89 0 02x y Ig 1 02 0 003x Normbereichsgrenze 1g0 183 1g0 171 t Wert 2 0262 1 976 Signifikanzen Rasseabhangigkeit n s n s Altersabh ngigkeit p lt 0 05 p lt 0 05 Freiheitsgrade SB n 19 n 89 DFV n 21 n 63 Eigene Untersuchungen 141 16 O DFV WBC G I SB SB DFV Alter Jahre Abb 59 Altersabh ngige Entwicklung der Leukozytenzahl f r die Rinderrassen schwarzbunte Holstein und Deutsch Fleckvieh Dargestellt sind Mittelwert sowie oberer und unterer Grenzwert f r die Altersgruppe zwischen zwei und zehn Jahren Regressionsgeraden Altersgruppe gt 2 Jahre gleichung SB y Ig 1 015 0 002x DFV y Ig 0 972 0 002x Normbereichsgrenze 1g0 176 t Wert 1 97 Signifikanzen Rasseabhangigkeit p lt 0 001 Altersabhangigkeit p lt 0 001 Freiheitsgrade SB n 105 DFV n 135 Abbildung 60 zeigt die Entwicklung Altersgruppe 0 24 Monate Auf eine der neutrophilen Granulozytenzahl in der Unterteilung dieser Gruppe konnte aufgrund 142 Eigene Untersuchungen fehlender Altersunterschiede verzichtet werden Abbildung 61 zeigt die Entwicklung f r Rinder alter zwei Jahre Neutrophile Gran G I O DFV SB Rassenmi
125. ignifikanzen Rasseabhangigkeit n s n s Altersabhangigkeit n s n s Freiheitsgrade SB n 19 n 89 DFV n 21 n 63 Eigene Untersuchungen 119 1 0 O DFV e SB un DFV SB HGB mmol l N Alter Jahre Abb 41 Altersabh ngige Entwicklung des H moglobingehaltes f r die Rinder rassen schwarzbunte Holstein und Deutsch Fleckvieh Dargestellt sind Mittelwert sowie oberer und unterer Grenzwert f r die Altersgruppe zwischen zwei und zehn Jahren Regressionsgeraden Altersgruppe gt 2 Jahre gleichung SB y 6 82 DFV y 6 58 Normbereichsgrenze 1 32 t Wert 1 97 Signifikanzen Rasseabhangigkeit p lt 0 05 Altersabh ngigkeit n s Freiheitsgrade SB n 105 DFV n 135 120 Eigene Untersuchungen Abbildung 42 und 43 zeigen die Entwicklung des Hamatokritwertes bis zum Alter von 10 Jahren f r die Rassen SB und DFV Eine Unterteilung in der Altersgruppe lt 24 Monate war hier nicht erforderlich 0 44 0 42 0 40 0 38 0 36 0 34 0 32 0 30 0 28 0 26 0 24 0 22 0 20 HCT 1 1 0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 Alter Monate Abb 42 Altersabh ngige Entwicklung des Hamatokritwertes f r die Rinderrassen schwarzbunte Holstein und Deutsch Fleckvieh Dargestellt sind Mittelwert sowie oberer und unterer Grenzwert bis zum Alter von 24 Monaten Regressionsgeraden Altersgruppe lt 24 Monate gleichung SB y 0 319 0 001x DFV y 0 327 0 001x Normbereichsgrenze 0 059 t Wert 2 026
126. ing of eosinophil granulocytes shows for different series a variation coefficient of 31 5 this result is caused by the physiological insignificant amount of eosinophile granulocytes in the blood pictures and furthermore by the connected statistical susceptibility for the count of coincidences Linearity and carry over of the ADVIA 120 were found to be very good for the parameters RBC WBC HGB and 182 Summary good for the parameter PLT The aging determination of the blood cells from 10 samples shows that the storage time has a greater influence on the keeping quality of bovine blood samples than the storage temperature The results of the blood count for WBC RBC HGB MCV MCH can be described as stable at 4 C for the first 72 hours The results for platelet count are acceptable until 12 hours after blood taking at a temperature of 22 C The storage at room temperature until 12 hours after blood taking does not influence the blood cell differentiation An adulteration of blood cell differentiation by a longer lasting transport can be avoided by additionally sending a blood smear When comparing the anticoagulants Li Heparin Na Citrat and K3 EDTA there is an obvious advantage of K3s EDTA when using ADVIA 120 In the second step of the study there were age dependent reference ranges determined for the bovine breeds black Holstein and German Fleckvieh Using 432 healthy cattle Ks EDTA blood samples were analysed within 5 hours after blood samp
127. ionskoeffizienten zwischen r 0 869 und 0 997 ermittelt vgl Tabelle 17 Aus der Literatur vgl Tabelle 38 sind hnlich gute Ergebnisse f r den Technicon H 1 und den Cell Dyn 3500 f r das Schaf bzw f r das Rind bekannt Bleul 1998 BEDDIES 1999 GROMMELT 1999 Die Messung des H matokritwertes mit dem ADVIA 120 korreliert mit den Ergebnissen der Zentrifuge mit r 0 975 ebenfalls gut Das mittlere Plattchenvolumen MPV korreliert nur m ig mit den Referenzmethoden r lt 0 6 Die Ursache hierf r liegt in der berlegenen 2D Thrombozytenanalyse des ADVIA 120 s a Kapitel 3 1 1 2 5 Diese Technik erm glicht es neben dem Ausschlu von Zelltr mmern und kleinen Erythrozyten von den Thrombozytenzahlen eine exakte Volumenmessung der Thrombozyten vorzunehmen KOSANKE 1999 Hierin zeigt der ADVIA 120 einen deutlichen Vorteil gegen ber den Referenzger ten der durch interne Plausibilit tskontrollen einen hohen Standard an diagnostischer Sicherheit 154 Diskussion der Ergebnisse Tab 38 Korrelationskoeffizienten ausgew hlter Parameter der Blutzellzahlung f r Gerateevaluationen mit den Tierarten Rind und Schaf nach Literaturangaben Autor Bleul 1998 Beddies Grommelt Eigene 1999 1999 Untersuchungen Analysator Cell Dyn 3500 Technicon H 1 Technicon H 1 ADVIA 120 Referenz Kammer Sysmex F 800 Sysmex F 800 Technicon H 1 ger t z hlung Spezies Rind Schaf Rind Rind WBC r 0 960 r 0 916
128. iten diese Werte sind auf der Y Achse des Retikulozytenzytogramms zu finden Im Feld E werden die Signale von Thrombozyten abgebildet und im Feld F werden Koinzidenzen von der validen Zellgruppe ausgegrenzt Die nun folgende Abbildung zeigt das pathologisch ver nderte Blutbild eines 14 Monate alten DRB Rindes Auf der Abbildung 15 sind die Ergebnisse des kleinen Blutbildes und der Retikulozytenanalytik zusammengefa t Retic Scatter Abs 1 6 Schwellenwerte zwischen den Zellgruppen A Erythrozyten B Retikulozyten hoher Reifung C Retikulozyten mittlerer Reifung D Retikulozyten niedriger Reifung E Thrombozyten F Koinzidenzen Abb 14 Retikulozytenzytogramm Rind mit hamolytischer Anamie Eigene Untersuchungen 61 Retie O OO WBC 10 40 x10 cells L Neg RBC 777 8623 RBC 1 28 x10 2cells L Retic 22 3 2e4g HGB 18 m mol L L Retic 78 4 1938 HCT 0 108 L L M Retic 15 2 388 MON 84 2 fL H Retic 5 9 147 MCH 1 41 fmol IRF H 5 3 MCHC 16 71 m mol L IRF M H 21 6 CHCM 18 05 m mol L RTC Cells Acquired 11980 CH 1 49 fmol RTC Cells Analyzed 11151 CHDW 0 32 Frl RTC Gated Cells 11096 RDW 26 4 Retic Count 2473 x HD vy 2 28 mmol L Abb 15 Retikulozytenparameter Erythrozytenparameter und Leukozytenzahl Rind mit h molytischer An mie Retikulozyten 284 8 G I 22 3 Erythrozyten 1 28 T l Hamatokritwert 0 108 I I H moglobin 1 8 mmol l In den nun anschlieBenden Kapiteln 3 1 3 und 3 1 4 e
129. kante Unterschiede festgestellt werden Im Vergleich zum K3 EDTA erzeugte die Verwendung von Na Citrat die gr ten Verschiebungen Der relative Unterschied zwischen Na Citrat und Li Heparin ist dagegen gering 114 Eigene Untersuchungen 3 2 6 Alters und Rasseabhangige Referenzbereiche In dem nun folgenden Abschnitt werden die Ergebnisse der Berechnung der Referenzbereiche in Form von Graphiken fir einen Teil der Parameter vorgestellt Die mathematischen Grundlagen f r die Erstellung der Graphiken finden sich unter den Darstellungen Jeder Parameter wird f r drei eigenst ndige Altersgruppen angegeben Die erste Gruppe enth lt Tiere mit einem Alter kleiner 6 Monate die zweite Gruppe Tiere zwischen 6 und 24 Monaten In der letzten Gruppe werden die Daten der Rinder lter als 24 Monate zusammengefa t Die Einteilung der Altersgruppen erfolgt unter Zuhilfenahme eines lokal gegl tteten Regressionsgl tters vgl Kap 3 1 8 Die graphische Darstellung erfolgt in zwei Diagrammen Das erste Diagramm beschreibt den Verlauf der Daten f r die Tiergruppen bis 6 Monate und 6 bis 24 Monate Das zweite Diagramm gibt den Verlauf ab dem zweiten Lebensjahr bis zum Alter von zehn Jahren wieder Auf der y Achse sind die Einheiten der Parameter aufgetragen auf der x Achse erfolgt die Angabe des Alters Dabei mu beachtet werden da bei den Tieren bis zu zwei Jahren die Angabe der Einheit in Monaten und bei den Tieren ber zwei Jahren in Jahren erfolgt
130. l l y 0 12x 0 15 r 1 00 WBC Gil 0 120 GI y 1 29x 0 05 r 0 983 PLT Gil 0 2500 Gil y 21 77x 356 10 94 Eigene Untersuchungen Zur berpr fung des Carry over erfolgt sieben mal in Folge nach einer doppelten Messung des O Pools eine Messung des 100er Pools Die Berechnung der Verschleppung wird durch die Subtraktion der Mittelwerte der zweiten O Pool Messung von der ersten O Pool Messung vorgenommen Tabelle 25 zeigt die Ergebnisse der berpr fung der Verschleppung von Blutzellen f r die Parameter RBC HGB WBC und PLT zwischen aufeinanderfolgenden Messungen des ADVIA Tab 25 Ergebnisse der Verschleppung f r die Parameter RBC HGB WBC und PLT Parameter Verschleppung Einheit RBC Til 0 09 HGB mmol l 0 00 WBC Gil 0 18 PLT Gil 0 26 Zu diesen Ergebnissen ist zu sagen da der angestrebte Wert von lt 0 25 bei der Thrombozytenz hlung geringgradig 0 26 berschritten wird Die Messung im H moglobinkanal zeichnet sich durch keine me bare Verschleppung aus Die Verschleppung bei der Erythrozytenz hlung ist mit 0 09 und bei der Leukozytenz hlung mit 0 18 ebenfalls gering Eigene Untersuchungen 95 3 2 4 Blutalterung Die Untersuchung von Blutproben wird in zunehmendem Ma e von Gro laboratorien als Dienstleistung angeboten Die Folge ist eine Verlangerung der Zeitspanne zwischen Blutentnahme und Untersuchung Der Einflu dieser Transportzeit auf die MeBergebnisse bei unt
131. leich zu den beiden gew hlten Referenzmethoden als schlecht zu bezeichnen wobei die Ergebnisse des ADVIA 120 mit den Messungen des F 800 besser korrelieren als mit denen des Technicon H 1 F r die Ergebnisse der Retikulozytenz hlung kann keine Korrelation angegeben werden da aufgrund erheblicher Unterschiede in der Sensitivit t der Methoden ein verzerrtes Ergebnis dargestellt w rde Der ADVIA 120 unterscheidet bei der Z hlung der Retikulozyten drei unterschiedliche Reifestadien Zellen mit einem hohem Gehalt an RNA H Retic entsprechen den mikroskopisch erkennbaren und somit z hlbaren Retikulozyten Der Anteil dieser Retikulozyten im Blut von Rindern ist nach ST BER u GR NDER 1991 kleiner 1 Ein Vergleich der Ergebnisse des ADVIA 120 mit denen der manuellen Z hlung kann aus diesen Gr nden kein valides Resultat erbringen 3 2 1 3 Richtigkeit Blutzelldifferenzierung Bei der Blutzelldifferenzierung wurden als Referenzmethoden die Panoptische F rbung nach Pappenheim die Peroxidase F rbung und die Naphtylacetat Esterase F rbung eingesetzt Von jedem Ausstrich wurden 200 Zellen manuell differnziert und den Ergebnissen des ADVIA 120 gegen bergestellt Verglichen wurden die prozentualen Anteile der neutrophilen Granulozyten Lymphozyten eosinophilen Granulozyten basophilen Granulozyten und Monozyten an der Gesamt Leukozytenzahl In den Tabellen19 20 und 21 sind die Ergebnisse nach den F rbungen gegliedert wiedergegeben Dabei
132. ling The measurements were analysed by a non parametrical regression with the help of a local assessed regression smoothener S Plus Version 3 1 Statistical Sciences Inc and were divided into 3 different age groups lt 6 months 6 24 months gt 24 months For each age group the influence of the breed was determined by a mono factorial covariance analysis using the software BMDP1V Dixon 1993 With the help of the shown formula it is possible to calculate the individual parametric reference ranges for the age dependent parameters y x at b xit Dee 1 a 2 n 3 n a Y intercept of the regression line b Slope gradient of the regression line x Age in month t Value of the student distribution for the bilateral level of probability with n 3 random samples a Preselected bilateral level of probability n Number of random samples s Standard deviation The following tables tables 40 42 demonstrate the reference ranges of the age groups lt 6 months 6 24 months and gt 24 months for the bovine breeds Holstein and German Fleckvieh From the tables the age dependent parameters can be calculated with the help of the mentioned formula for each age In the formula of the corresponding age group the variable X must be replaced by the age in months or if Summary 183 the animals are older than 24 months in years If there is no difference in the breeds at one parameter the formula is valid for both breeds Additionally to the
133. lt werden Die Zahl der durch den ADVIA 120 erfaBten Lymphozyten nimmt ber den gesamten Lagerungszeitraum stetig zu Abbildung 31 zeigt die Verlaufskurven f r die Lymphozytenz hlung Lymphozyten 140 gt Lagerungstemperatur22 C o Poo Lagerungstemperatur 4 C Prozentuale Abweichung Sn VAQON oo oo co D S co 0 10 20 30 40 50 60 70 80 Zeit Stunden Abb 31 Stabilit t der absoluten Lymphozytenzahl dargestellt ist die prozentuale Abweichung vom Ausgangswert x S bei 4 C und 22 C ber 72 Stunden n Zur Darstellung der eosinophilen Granulozyten und der Monozyten wurden die absoluten Werte verwendet die geringe Zellzahl f hrt zu einer Verzerrung der graphischen Auswertung bei prozentualer Darstellung Abbildung 32 gibt den Verlauf der eosinophilen Granulozyten wieder Die Zellzahl steigt ber 72 Stunden an und zeigt bei K hlschranklagerung eine geringe Streuung der Ergebnisse Eigene Untersuchungen 107 Eosinophile Granulozyten Lagerungstemperatur 22 C Zellen 109 1 0 10 20 30 40 50 60 70 8 Zeit Stunden Abb 32 Stabilitat der absoluten eosinophilen Granulozytenzahl dargestellt ist der absolute Verlauf x S bei 4 C und 22 C ber 72 Stunden n 10 Auf den Abbildungen 33 bis 36 ist das Peroxidasezytogramm der Messungen unmittelbar nach Blutentnahme bzw 24 36 und 48 Stunden nach Probengewinnung abgebildet An diesen Leukogrammen wird der Grund f r die Versc
134. lung bzw Lagerung gegeben Danach sollen die mit KsEDTA ungerinnbar gemachten Blutproben bei 18 22 C nicht l nger als 4 Stunden bis zur Verarbeitung gelagert werden Bei der Verwendung von Na Citrat Li Heparin oder andere Antikoagulanzien mu deren Einflu auf das Blut beachtet und im Protokoll vermerkt werden Die Durchmischung der korrekt bef llten Prober hrchen vor der Messung hat durch einen berkopf oder Schaukelmischer zu erfolgen Die Temperatur von Reagenzien und Raumluft sollte 20 24 C betragen und ber die gesamte Evaluation protokolliert werden um eventuelle Einfl sse auf Ger t und Ergebnisse zu erkennen Die Probenzuf hrung und Behandlung im Ger t mu mit allen Verd nnungsstufen beschrieben werden Des weiteren soll in Phase II der Einflu der Probenalterung und Probenstabilit t auf die Me ergebnisse in einer Studie bestimmt und die Stabilit t f r jeden 16 Schrifttum Parameter angeben werden Die Grenze der klinisch tolerierbaren Abweichungen ist erreicht wenn 3 Standardabweichungen der Pr zision in der Serie berschritten werden F r das Differentialblutbild sind die Ergebnisse nicht mehr tolerabel wenn 99 der Vertrauensgrenze der Poissonverteilung berschritten werden Dazu m ssen Blutproben von gesunden und kranken Spendern bei verschiedenen Temperaturen gelagert und zu den Zeitpunkten 1 2 1 11 2 4 6 8 10 24 48 und 72 Stunden nach der Blutentnahme gemessen werden Vom Hersteller wird verl
135. m Alter zwischen 3 und 13 Monaten der Rassen Braunvieh Simmentalerfleckvieh und Schwarzfleckvieh eingeteilt nach dem Blutanteil an Red Holstein und Brown Swiss F r H matokritwert H moglobin Erythrozytenzahl MCV MCHC Leukozytenzahl und dem prozentualem Anteil der eosinophilen Granulozyten der Lymphozyten und der Monozyten werden signifikante Unterschiede zwischen wenigstens 2 der 9 Tiergruppen festgestellt Demnach weisen die Original Simmentalerfleckviehstiere einen im Gegensatz zu den Tieren mit Red Holsteinblut niedrigeren H matokritwert auf Mit der Einkreuzung steigt der H matokritwert die Erythrozytenzahl und der H moglobingehalt tendenziell an Die Einkreuzung von Braun Swiss in Braunvieh f hrt zu einer Abnahme von H moglobin und H matokritwert Die Erythrozytenzahl sinkt mit steigendem Fremdblutanteil Braunviehstiere mit Braun Swiss Blut zeigten h here MCH Werte gegen ber den verglichenen Rassen MAMMERICKX et al 1978 Bei der Leukozytenzahl weisen alle Braunviehstiere niedrigere Werte auf als die brigen Rassen Schwarzfleckvieh und Simmentalerfleckvieh mit hohem Red Holstein Anteil weisen die h chsten Leukozytenwerte auf AMAKIRI ET AL 1979 stellen bei einem Vergleich der Rassen German Brown und N Dama fest da Erythrozyten und Leukozytenzahl sowie der H matokritwert bei N Dama signifikant erh ht sind Rinder aus Kreuzungen beider Rassen weisen dem Blutanteil entsprechend intermedi re Werte auf Im Vergleich
136. m Zeitpunkt f llt die Thrombozytenzahl kontinuierlich ab und nach 72 Stunden mu mit einer Verringerung der Thrombozytengesamtzahl bezogen auf den Ausgangswert von ber 20 Prozent gerechnet werden Bei einer Lagerung bei 4 C ist der Verlauf ber den Untersuchungszeitraum dem bei 22 C entgegengesetzt Auff llig ist auch die Streuung die eine klinische Interpretation der Daten schon ab 12 Stunden Lagerung bei 4 C unm glich macht Auf den nun folgenden Abbildungen ist die Stabilit t der Thrombozytenzahl und des mittleren Thrombozytenvolumens graphisch dargestellt Abb Prozentuale Abweichung Prozentuale Abweichung 29 Eigene Untersuchungen 103 PLT Lagerungstemperatur 22 C Lagerungstemperatur 4 C 40 4 60 T 0 10 20 30 40 50 60 70 80 Zeit Stunden MPV Lagerungstemperatur 22 C Lagerungstemperatur 4 C 60 40 204 es a T 0 10 20 30 40 50 60 70 80 Zeit Stunden Stabilit t der Thrombozytenzahl und des Thrombozytenvolumens Dargestellt ist die prozentuale Abweichung vom Ausgangswert x S bei 4 C und 22 C ber 72 Stunden n 10 104 Eigene Untersuchungen Das mittlere Thrombozytenvolumen ist bei 4 C Lagertemperatur sechs Stunden nach Blutentnahme im Mittel um zehn Prozent erniedrigt Danach steigt der MPV im Mittel um bis zu 15 Prozent im Vergleich zum Entnahmezeitpunkt an Eine Lagerung bei Raumtemperatur bedingt einen fo
137. male Anwendung finden GROSS u WICHMANN 1979 IFCC 1983a ACKERMANN 1983 22 Schrifttum 2 5 1 Rotes Blutbild und Retikulozyten Die Bildung der roten Blutk rperchen findet ab der zweiten H lfte der Embryonalentwicklung im Knochenmark statt Eine Unterscheidung der kernhaltigen Zellen der Erythropoese kann aufgrund ihrer Gr e des Kern Zytoplasma Verh ltnisses der Kernstruktur und der Anf rbbarkeit des Zytoplasmas gemacht werden In Tab 5 sind die Eigenschaften der einzelnen Entwicklungsstufen der Erythropoese dargestellt L SCH et al 2000 Tab 05 Charakteristika der Zellformen w hrend der Erythropoese bei S ugetieren Zellformen Charakteristika Junge unreife gro e runde Zelle kernhaltig scharf Proerythroblast yt begrenzte Nukleolen Zytoplasma stark basophil Kleinere runde Zelle keine Nukleolen kleinerer Kern Erythroblast Zytoplasma von basophil bis polychromatisch zunehmender Hamoglobingehalt Zelle wird noch kleiner dichterer Kern vollstandige Normoblast Hamoglobinisation Zytoplasma polychromatisch bis ortho chromatisch Kernlos feines netzartiges Ger st Ausf lllung von Ribonukleoproteinen bei der Retikulozytenf rbung Retikulozyt nicht mehr teilungsf hig noch m ige RNA Protein und H msynthese Normozyt Kleine kernlose runde Zelle mit zentraler Aufhellung reifer Erythrozyt bikonkave Form Normoblasten und Retikulozyten als erythrozytare Vorl ufe
138. manmedizin deuten an da es sich um sehr sensitive Parameter handelt 4 2 3 Parameter des wei en Blutbildes Das wei e Blutbild des Rindes entwickelt sich von einem neutrophilen Blutbild zu einem Iymphozyt rem Die Ursache liegt in einer Zunahme der Lymphozyten im zirkulierendem Blut dagegen bleibt die Zahl der neutrophilen Granulozyten nahezu ber die gesamte Lebensspanne unver ndert Die Gesamtleukozytenzahl weist bis zum Alter von 24 Monaten keine Unterschiede Diskussion der Ergebnisse 171 zwischen den Rassen SB und DFV auf in der folgenden Altersgruppe zeigt sich ein Unterschied von 1 10 G l Mit sechs Monaten ist die Leukozytenzahl mit einem Referenzbereich von 6 77 14 88 G l am h chsten Danach erfolgt ein kontinuierlicher R ckgang des WBC auf so da mit einem Alter von 10 Jahren der Referenzbereich 4 36 9 79 G l lautet JAIN 1986 beschreibt gleichfalls einen R ckgang der Leukozyten mit zunehmendem Alter und gibt f r die Altersgruppe der ein bis zweij hrigen weiblichen Holsteinrinder einen Referenzbereich von 4 32 7 8 G l an Eine hnlich gute bereinstimmung findet sich bei MORITZ 2000 in einer altersunabh ngigen Untersuchung gibt er eine Spannweite f r die Leukozytenzahl von 5 60 14 31 G l an ST BER u GR NDER 1990 beschreiben ebenfalls eine Abnahme der wei en Blutzellen im Blut lterer Rinder Sie geben aber als oberen Grenzwert um bis zu 5 00 G I niedrigere Werte an hnliche Angaben wie bei ST
139. masie vor Normozytare Anamien entsprechen demzufolge normochromen Anamien Makrozytare Anamien bedingen nicht immer einen Anstieg des MCH THOMAS 1998 Die mittlere Hamoglobinkonzentration MCHC der zirkulierenden Erythrozytenmasse wird berechnet nach der Formel MCHC Hbx100 HCT Durch die Verwendung von HCT und HGB bei der Berechnung des MCHC ist dieser Wert leicht und pr zise zu ermitteln und ein guter Indikator von Eisenmangelan mien EDER 1987 Ein Anstieg der MCHC wird nur beim Erscheinen von Sph rozyten im Blut wie es bei immunvermittelter An mie oder bei einer frischen invitro oder vivo H molyse vorkommt beobachtet Werte unter dem Normbereich k nnen bei hypochromen bzw regenerativen Anamien auftreten GOLDSTON et al 1980 Der CHCM entspricht dem MCHC wird aber aufgrund der direkten Erfassung beim Messvorgang nicht durch eine frische H molyse verf lscht Der Vergleich von MCHC und CHCM gibt bei Differenzen dieser beiden Parameter einen Hinweis auf eine akute H molyse SCHLERKA u BAUMGARTNER 1983 sowie WEISS u PERMAN 1992 halten MCV MCH und MCHC beim Rind f r unbrauchbar da nach Ansicht der genannten Autoren aufgrund der nat rliche Anisozytose keine brauchbaren Referenzbereiche definiert werden k nnen Der H matokritwert HCT ist abh ngig von Zahl und Volumen der Erythrozyten und dem Plasmavolumen Dabei ist zu beachten da der H matokritwert einen Relativwert darstellt der das Verh ltnis vo
140. mphozyten Gil 3 60 9 40 Ig 0 789 0 004 x 0 21 Monozyten G l 0 25 0 90 0 20 0 70 i i Eosinophile u _ y lg 0 38 0 002 x y Ig 0 30 0 002 x Granulozyten Gil 9191 28 0 15 1 54 0 50 0 50 Basophile Eu Br y lg 0 94 0 003 x y lg 1 05 0 003 x Granulozyten Gi 90 0 23 0 04 0 18 0 32 0 32 Neutrophile u E xx Granulozyten 18 50 43 80 y 30 43 0 12 x 12 65 Lymphozyten 38 50 65 10 y 58 66 1 14 x 13 31 Monozyten 2 60 7 80 y Ig 0 66 0 001 x 0 24 Eosinophile u u xx Granulozyten 0 40 3 40 y Ig 0 60 x 0 47 Basopnilg 0 63 1 93 y Ig 0 049 0 001 x 0 24 Granulozyten kein Alterseinflu kein RasseeinfluB kein Alters und Rasseeinflu Summary 181 6 SUMMARY The determination of haematological parameters is part of an elaborate and experienced diagnostic workup of buiatric patients The analysis of blood samples is more often than not performed with automatic haematology systems The laser based multiparameter system ADVIA 120 firstly developed for the use in the general medicine was adapted to standards on bovine blood samples in co operation with the manufacturing company BAYER DIAGNOSTICS With the adaptation of software which was done in four steps the instrument were parallelly evaluated Finally using the ADVIA 120 age dependent reference ranges both old and new blood parameters
141. n Blutk rperchen zu Plasma wiedergibt Schrifttum 25 Sofern nicht eine Messung mittels Zentrifugation erfolgt kann der HCT nach der folgenden Formel berechnet werden HCT RBC xMCV 10 Die Bestimmung des Hamoglobins im Blut ist bei der Klarung von Anamienursachen bei der Beurteilung des Verlaufs und bei der Therapie von Bedeutung THOMAS 1998 Der Anteil der Retikulozyten auf 1000 gez hlte Erythrozyten gibt bei einer An mie Auskunft Uber die Aktivitat des Knochenmarks und die Regenerationsfahigkeit der Erythrozyten Adulte Uber zwei Jahre alte gesunde Rinder weisen im peripheren Blut keine Retikulozyten auf Bei j ngeren Tieren sind sporadisch Retikulozyten anzutreffen bei unter zwei Tage alten K lbern bis zu 10 o Die diagnostische und prognostische Aussagekraft der Retikulozytenz hlung ist aufgrund der gro en Variabilit t der Ergebnisse gering ST BER u GR NDER 1990 26 Schrifttum Tab 06 Erythrozyten und Retikulozyten Werte aus der Literatur Autoren und Erscheinungsjahr der Veroffentlichung Parameter Stober u Grunder Kraft u Durr Schalm und Einheit 1990 1997 1977 K lber Rinder Rinder Rinder RBC Til 5 0 10 0 5 0 8 0 5 0 10 0 5 0 10 0 HCT WI 0 30 0 40 0 28 0 38 0 24 0 46 HGB mmol l 4 9 8 7 4 9 7 5 5 6 8 7 4 9 9 3 MCV fl 40 0 60 0 46 65 40 60 MCH fmol 0 87 1 49 0 7 1 0 0 68 1 06 MCHC mmol l 26 34 19 21 30 36 Retikulozyten o 0 0 10
142. n diesem Kapitel werden die Ergebnisse des Methodenvergleichs f r die Parameter WBC RBC HGB HCT MCV und MCH dargestellt Verglichen wurde der ADVIA 120 mit dem Technicon H 1 dem Sysmex F 800 und der H matokritzentrifuge In der Tabelle 16 sind die Ergebnisse der Korrelation des ADVIA 120 mit dem Technicon H 1 ersichtlich 77 Eigene Untersuchungen Tab 16 Korrelation der Parameter der Blutzellzahlung des ADVIA 120 mit denen des H 1 Korrelationskoeffizient r Hauptkomponentengleichung y mx b logarithmierte Werte Ig y Ig mx b Signifikanz f r alle Parameter p lt 0 001 ADVIA 120 H 1 Softwareversionen 1 4 Korrelationskoeffizient r Parameter Einheit Hauptkomponentengleichung y mx b Version1 Version2 Version3 Version4 n 115 n 30 n 60 n 30 WBC Gil r 0 989 0 985 0 990 0 997 y 1 03x 0 10 1 03x 0 13 1 01x 0 04 1 01x 0 06 RBC T I r 0 991 0 998 0 992 0 993 y 0 94x 0 002 1 003x 0 15 1 02x 0 25 0 96x 0 05 HGB mmol l r 0 982 0 990 0 990 0 996 y 1 003x 0 23 1 09x 0 37 0 95x 0 25 0 92x 0 21 HCT I l r 0 987 0 985 0 986 0 995 y 1 01x 0 01 0 98x 0 02 1 0x 0 01 1 03x 0 01 MCV fl r 0 991 0 994 0 997 0 999 Y 1 06x 0 92 0 95x 4 02 1 09x 2 5 0 98x 2 04 MCH fmol r 0 976 0 994 0 994 0 992 Y 1 09x 0 07 1 07x 0 01 0 99x 0 02 0 96x 0 03 MCHC mmol l r 0 468 0 768 0 859 0 867 Y 1 48x 11 34 0 61x 8 56 0 71x 6 19 1 04x 1 25 PLT GI r 0 964 0 987 0 971
143. nalyse Der Einflu der Lagerungsdauer und der Lagerungstemperatur 4 C und 22 C ist anhand von je zehn Blutproben Uber 72 Stunden berpr ft worden Das rote Blutbild RBC HGB MCH MCV HCT unterliegt bei 4 C und bei 22 C Lagertemperatur ber den gesamten Zeitraum einer Ver nderung die aber 5 nicht bersteigt Die Leukozytenzahl f llt bei 22 C Lagertemperatur nach 24 Stunden ab dies kann durch eine Lagerung bei 4 C vermieden werden Insgesamt weichen die gemessenen Leukozytenzahlen bei 4 C Lagertemperatur nach 72 Stunden maximal um 10 ab Gro en Einflu hat die Lagerungsdauer auf die Parameter der Thrombozytenz hlung Unabh ngig von der Lagerungstemperatur ist nach einer Lagerungsdauer von mehr als zw lf Stunden eine klinische Interpretation der Daten aufgrund der gro en Streuung der Ergebnisse nicht zu empfehlen hnlich ist der Sachverhalt bei der Differenzierung der Leukozyten die Zellen unterliegen bei der Lagerung optischen und zytochemischen Ver nderungen und werden infolgedessen vom Analysesystem falschen Zellpopulationen zugeordnet siehe auch Kapitel 3 2 4 2 Auf diese Problematik wird der Untersucher durch den ADVIA 120 mittels Fehlermeldungen bei den einzelnen Parametern aufmerksam gemacht Zusammenfassend kann gesagt werden da ein kleines Blutbild auch nach 24 Stunden erstellt werden kann Aber f r die korrekte Thrombozytenbestimmung ist eine Untersuchung innerhalb von 4 6 Stunden nach Blutentn
144. nd die Kan le f r die Fl ssigkeiten und den Luftstrom die Ventile und vier Reaktionskammern eingearbeitet Die PEROX Reaktionskammer ist an der 48 Eigene Untersuchungen AuBenseite des UFC Blocks montiert Die Reagenzpumpe die unten am UFC Block montiert ist besteht ebenfalls aus Acryl Die Pumpe ist mit einer Membran mit sieben einzelnen Pumpenbereichen ausger stet die als Diaphragmen dienen und die Reagenzien in die Reaktionskammern bef rdern Auf Abbildung 6 ist der UFC Block dargestellt UFC Seitenansicht A PEROX Reaktionskammer B BASO Nadel Thermistor C Scherventil D Vorsteuerventile E Reagenzpumpe F Vakuum Luftdruck Anschl sse der Reagenzpumpe Abb 06 ADVIA 120 UFC Block Seitenansicht aus ADVIA TM 120 Hematology System Benutzerhandbuch Willkommen bei ADVIA 120 V1 03 00 Copyright 1997 1998 Bayer Corporation In den nun folgenden Kapiteln werden Me methoden und Ergebnisdarstellung des ADVIA 120 n her erl utert Eigene Untersuchungen 49 3 1 2 2 1 H moglobinmethode Der Gesamth moglobingehalt HGB wird photometrisch bei einer Wellenl nge von 546nm ermittelt Die Aufbereitung der Probe erfolgt in der H moglobinreaktionskammer Kolorimeter mittels der Cyanmethamoglobin Methode gem einer modifizierten ICSH Richtlinie Zur Messung werden die Erythrozyten lysiert und bei 546nm das freigesetzte H moglobin in der Durchflu kolorimeterk vette bestimmt 3 1 2 2 2 Basophilen K
145. nd neben bekannten h matologischen Parametern neue Me gr en der Thrombozyten und Retikulozytenz hlung beschrieben Die Interpretation von Untersuchungsergebnissen setzt voraus da Referenzbereiche exsistieren Um hier L cken bei der Tierart Rind zu schlie en wurden mit dem Multiparameter Hamatologiesystem ADVIA 120 Referenzbereiche f r neue und bekannte hamatozytologische Parameter erstellt Intention dieser Arbeit ist es den ADVIA 120 f r die Tierart Rind zu evaluieren und dar ber hinaus altersabh ngige h matologische Referenzbereiche f r die Rinderrassen schwarzbunte Holstein und deutsches Fleckvieh zu erstellen 2 Schrifttum 2 SCHRIFTTUM 2 1 Geschichtlicher Uberblick Die Erforschung des Blutes ist seit der Beschreibung der Blutkugeln von Borelli im Jahre 1656 durch zunehmendes Verst ndnis f r die Funktion seiner Bestandteile und der Entwicklung immer pr ziser werdender Untersuchungsmethoden zu einem wichtigen Bestandteil der Diagnostik geworden In Tabelle 01 sind die geschichtlichen Fortschritte der H matologie bis zur Entwicklung des ersten Automaten durch Coulter zusammengetragen Tab 01 Zeittafel der Blutzellanalytik und Blutzelldiagnostik aus Praktische Blutzelldiagnostik BOROVICZENY 1991 Jahr Name Sachverhalt 1656 Borelli beschreibt als erster die Blutkugeln 1658 Swammerdamm f hrt systematische mikroskopische Untersuchungen durch 1665 Malpighi h lt Blutk rperchen im Omentum f r Fettk gelchen 1
146. ng und multipliziert das Ergebnis mit einem speziesspezifischen Faktor Mittleres Zellvolumen mittlerer H moglobingehalt und mittlere H moglobinkonzentration der Erythrozyten werden vom F 800 errechnet Aus der Untersuchung der Erythrozytenverteilungsbreite RDW wird der Variationskoeffizient angegeben Die Thrombozytenverteilungsbreite und mittlere Pl ttchenvolumen werden ebenfalls ausgewiesen Abbildung 18 zeigt nun einen vollst ndigen Ergebnisausdruck des F 800 von Probe Nr 241 11 43 Bel x1OFrk 4 57 vie 26 amade hed f amog mmt t x103 y Abb 18 Sysmex F 800 WBC Histogramm Rind Nr 241 Eigene Untersuchungen 67 3 1 5 Hamatokritzentrifuge Hamofuge A Der Hamatokritwert wurde mittels der Mikrohamatokritmethode mit der Hochgeschwindigkeitszentrifuge H mofuge A Fa Heraeus Sepatech GmbH Osterode bestimmt nach DIN 58933 Dazu wurden zwei Kapillarr hrchen zu je 80 mit Blut gef llt an einem Ende verschlossen und 10 Minuten bei 5000 g zentrifugiert Durch Anlegen der Kapillarr hrchen an eine Auswertungsschablone kann der H matokritwert abgelesen werden Aus beiden Me ergebnissen wurde der arithmetische Mittelwert gebildet 3 1 6 F rbungen Zur Erstellung der manuellen 200er Differentialblutbilder wurden pro Blutrobe je zwei Ausstriche f r die panoptische F rbung nach Pappenheim die o Naphtylacetat Esterase F rbung und die Peroxidase F rbung angefertigt F r die 1000er Erythrozytenz hlung zur B
147. nn zwischen den Informationen zur berwachung des Me vorgangs und klinisch relevanten Me werten unterscheiden Zur Auswertung einer gemessenen Probe werden das Feld Header mit den Identifikationsdaten das Peroxydasezytogramm und die Ergebnisse aus dem Feld WBC Differential herangezogen Die Ubrigen Histogramme und Tabellen dienen der Uberwachung des MeBvorgangs und k nnen bei Fehlermeldungen zur Aufkl rung der St rung herangezogen werden Die Tabelle Cluster Data Perox enth lt die Me werte zur Erstellung der Punktwolken Perox Y und Perox X geben die Me punkte auf den Achsen wieder Mit dem Feld Perox Rate ist die Kontrolle des Messvorgangs in der Flu zelle m glich Im Histogramm Noise Lymph ist das Rauschen im Lymphozytencluster dargestellt und die Tabellen Peroxsystem und Perox enthalten Systemwerte der Peroxidasemessung 3 1 2 2 4 Erythrozytenmethode Bei der Anfertigung des roten Blutbildes werden die im folgenden aufgez hlten Me gr en erhoben Erythrozytengesamtzahl RBC H moglobinkonzentration HGB H matokritwert HCT mittleres Erythrozytenvolumen MCV mittlerer zellul rer H moglobingehalt der Erythrozyten MCH mittlere errechnete zellul re H moglobinkonzentration der Erythrozyten MCHC mittlere gemessene zellul re H moglobinkonzentration der Erythrozyten CHCM zellul rer H moglobingehalt CH H moglobinverteilungsbreite HDW sowie der Variationskoeffizient der Ery
148. nterschied 40 9 96 8 62 0 logarithmierte Werte nicht signifikant p gt 0 017 Eigene Untersuchungen 113 Tab 28 Darstellung des mittleren und relativen Unterschiedes sowie der Standardabweichung zwischen den Antikoagulanzien K3 EDTA Na Citrat und Li Heparin f r die Blutzelldifferenzierung n 10 Paarweiser Vergleich der Antikoagulanzien f r die Parameter der Blutzelldifferenzierung ADVIA 120 Softwareversion 4 Parameter K3 EDTA K3 EDTA Li Heparin Einheit Li Heparin Na Citrat Na Citrat mittlerer Unterschied 0 26 0 29 0 03 Eosinophile G o sd 0 26 0 24 0 25 Yo relativer Unterschied 45 0 47 4 4 5 mittlerer Unterschied 0 32 0 01 0 33 Basophile G a sd 0 20 0 14 0 30 Yo relativer Unterschied 235 0 1 2 25 3 logarithmierte Werte nicht signifikant p gt 0 017 Fur die Leukozytenzahlung betragt der relative Unterschied zwischen Li Heparin und Ks EDTA 5 2 Prozent Bei der Erythrozytenz hlung konnte nur zwischen Ks EDTA und Na Citrat ein signifikanter relativer Unterschied von 2 2 Prozent festgestellt werden MCV CHCM und MCHC weisen beim Vergleich der Antikoagulanzien nur geringe relative Unterschiede auf Erheblich Unterschiede von bis zu 96 Prozent traten f r die Parameter PLT und MPC auf Bei der Blutzelldifferenzierung konnten f r die relativen Anteile der eosinophilen und basophilen Granulozyten am Differentialblutbild signifi
149. ogen Dabei wird einerseits berpr ft ob die Regressionsgraden der Rassen parallel verlaufen andererseits kann ermittelt werden ob eine globale Altersabh ngigkeit besteht Wenn beide Voraussetzungen gegeben sind wird mit Hilfe vom Alter bereinigter Mittelwerte f r jeden Parameter ein rassenabh ngiger Mittelwert und ein oberer und unterer Grenzwert berechnet Eigene Untersuchungen 75 3 1 10 Softwareadaptation und begleitende Evaluation des ADVIA 120 Die Softwareversion 1 des H matologiesystems ADVIA 120 wurde aus humanmedizinischen Einstellungen durch Dr David Zelmanovic von der Fa Bayer f r das Rind anhand von 10 Blutproben am 25 05 98 in Gie en eingestellt Danach erfolgte die sogenannte Alpha site ber f nf Monate anhand von 115 Blutproben Aus diesen Daten des ADVIA 120 und der Referenzmethoden wurde die Softwareversion 2 erstellt Die Einstellungen der Softwareversion 3 erfolgte mit weiteren 30 Blutproben von gesunden und von kranken Rindern und wurde am 06 11 98 freigegeben Weitere 60 Blutproben wurden zur Erstellung der Softwareversion 4 bearbeitet Diese Softwareversion wurde am 15 12 98 zur berpr fung freigegeben und als vorl ufige Endversion f r die Spezies einstellungen mit abschlie enden 30 Proben getestet In Tabelle 15 sind die einzelnen Schritte der Softwareadaptation und der Evaluation zusammengestellt Tab 15 Stationen der Softwareadaptation mit begleitender Evaluation ADVIA 120 f r die Speziessof
150. oluten Zahl der eosinophilen Granulozyten f r die Rinderrassen schwarzbunte Holstein und Deutsch Fleckvieh Dargestellt sind Mittelwert sowie oberer und unterer Grenzwert bis zum Alter von 24 Monaten Regressionsgeraden Altersgruppe lt 24 Monate gleichung SB y Ig 0 979 0 027x DFV y Ig 1 101 0 027x Normbereichsgrenze 190 637 t Wert 2 0262 Signifikanzen Rasseabhangigkeit p lt 0 05 Altersabh ngigkeit p lt 0 001 Freiheitsgrade SB n 105 DFV n 135 Eigene Untersuchungen 149 2 0 0 5 Eosinophile Granulozyten G I oO 0 0 O DFV DSB DSB DFV Alter Jahre Abb 67 Altersabh ngige Entwicklung der absoluten Zahl der eosinophilen Granulozyten f r die Rinderrassen schwarzbunte Holstein und Deutsch Fleckvieh Dargestellt sind Mittelwert sowie oberer und unterer Grenzwert f r die Altersgruppe zwischen zwei und zehn Jahren Regressionsgeraden Altersgruppe gt 2 Jahre gleichung SB y Ig 0 382 0 002x DFV y Ig 0 304 0 002x Normbereichsgrenze 190 497 t Wert 1 97 Signifikanzen Rasseabhangigkeit p lt 0 001 Altersabhangigkeit n s Freiheitsgrade SB n 105 DFV n 135 150 Eigene Untersuchungen Die Formeln zur Erstellung der Referenzbereiche f r den prozentualen Anteil der Zellpopulationen des Differentialblutbildes werden in den folgenden Tabellen zusammengefa t In Tabelle 35 sind die Ergebnisse des t Test f r den Einflu der Ras
151. onische Impulszahlung im Frischblut konzentration DurchfluBzytometer nach Lyse der Surrogatmaterial Erythrozyten fixierte nicht lysierbare ICSH Empfehlung in Clin Lab Haemat Erythrozyten 10 203 1988 fixierte Leukozyten DIN 58934 1 1997 Thrombozyten Zahlkammer oder elektronische Frischblut konzentration Impulszahlung im DurchfluBzytometer Surrogatmaterial nach Koinzidenzkorrektur Fixierte Thrombozyten ICSH empfohlene Methode 1988B DIN 58934 1 1997 Visuelle Differenzierung Frischblut von 4 x 200 Zellen Vergleich mit Ausstrich NCCLS H20 A 1992 Schrifttum 15 Fortsetzung Tab 02 Retikulozyten Elektronische Impulszahlung Frischblut konzentration nach Anf rbung der RNS bzw DNS Surrogatmaterial Reste mit Ethylenglykol fixierte ICSH empfohlene Methode 1992 oder Erythrozyten Retikulozyten NCCLS H44 P 1993B Pure and Appl Chem 3 1141 1991 DIN 58933 1 1995 DIN 58932 2 1998 DIN 58932 1 1996 DIN 58934 1 1997 DIN 58931 1995 DIN 58932 3 1994 Vor Inbetriebnahme des Ger tes mu eine Erst kalibration durch den Hersteller erfolgen die entweder mit Frischblutproben von gesunden Normalpersonen oder mit unterschiedlichen Frischblutproben durchgef hrt wird Eine Nach kalibration durch Nichttechniker mit stabilem Kalibriermaterial darf nur nach Absprache mit dem Hersteller durchgef hrt werden F r die Pr fphase II wird von den Autoren eine Empfehlung zur Probengewinnung und Behand
152. ophilen Granulozyten sollte beim gesunden Rind 2 1 betragen Alle brigen Zellpopulationen der Leukozyten unterliegen in ihrer Anzahl keiner oder nur geringer Altersabh ngigkeit SCHALM 1999 In Tabelle 7 sind die Normalwerte f r das Differentialblutbild der Spezies Rind von verschiedenen Autoren vergleichend dargestellt Schrifttum 29 Tab 07 Referenzbereiche des wei en Blutbildes nach Literaturangaben Autoren und Erscheinungsjahr der Ver ffentlichung RER St ber u Gr nder Kraft u D rr Schalm N 1990 1997 1977 und Einheit K lber adulte Adulte adulte Rinder Rinder Rinder WBC Gil 5 0 12 0 5 0 10 4 0 10 0 4 0 12 0 Lymphozyten G l 4 0 10 0 2 5 5 5 2 5 5 5 2 5 7 5 45 65 45 65 45 75 Monozyten G l 0 0 33 25 840 2 8 2 6 2 7 Stabkernige neutrophile Granulozyten Gi l 0 0 2 0 0 12 0 3 0 3 0 2 Segmentkernige neutrophile Granulozyten Gi l 1 3 5 0 6 4 25 45 25 45 15 45 eosinophile Granulozyten G l 3 0 9 0 0 3 1 5 0 2 4 1 10 1 10 2 20 30 Schrifttum Fortsetzung Tab 07 Autoren und Erscheinungsjahr der Verdffentlichung Bda St ber u Gr nder Kraft u D rr Schalm 1990 1997 1977 und Einheit l l l K lber adulte adulte adulte Rinder Rinder Rinder basophile Granulozyten G l 0 0 1 0 0 2 0 2 0 2 0 2 Die Aussagekraft des wei en Blutbildes beruht beim Rind haupts chlich in den Ver
153. ozyten und Thrombozyten beruht ebenfalls auf dem beim ADVIA 120 beschriebenen Prinzip Unterschiedlich ist hier die Ergebnispr sentation W hrend die Erythrozytenparameter keiner Ver nderung unterliegen ist die Thrombozytendiagnostik im Vergleich zur 2 D Technik des ADVIA 120 stark eingeschr nkt Da es sich beim Technikon H 1 um eine eindimensionale Analyse handelt werden nur die Thrombozytenzahl der Thrombokrit und das mittlere Thrombozytenvolumen inklusive der Verteilungsbreite angegeben Auf der folgenden Abbildung ist der Ausdruck Report 1 von Rind Nr 225 dargestellt Report 1 beinhaltet Leukozytenzahl Leuko Erythrozytenzahl Ery H moglobin gehalt HGB Hamatokritwert HCT mittleres Erythrozytenvolumen MCV mittlerer H moglobingehalt MCH mittlere H moglobinkonzentration MCHC Erythrozyten verteilungsbreite EVB H moglobinverteilungsbreite HVB Thrombozytenzahl THROMB mittleres Thrombozytenvolumen MTV Thrombozytenverteilungs breite TVB und der Thrombokrit TKT Sofern ein gro es Blutbild angefordert wurde werden die absoluten und prozentualen Werte f r das Differentialblutbild zus tzlich gemessen und angegeben Graphische Darstellung sind das Ery und Throm VOL Histogramm HGB KONZ Histogramm sowie PEROX BASO und ERY Zytogramm Eigene Untersuchungen 63 SEQ 0000046 RE Valea Goatees A aa E Kain ZEIT 10 27 15701795 ERY Tierart 0i 2 o SYS Tierart 01 i a F Id 0121225 L
154. ozytenz hlung erfolgt nach einer 64 Eigene Untersuchungen erneuten Verd nnung von 20 ul der ersten Verd nnungsstufe auf ein Verh ltnis von 1 50 000 3 1 4 1 Hamoglobinbestimmung Das Prinzip der Hamoglobinbestimmung beruht auf einer Modifizierung der international standartisierten Cyanmethamoglobin Methode Das Hamoglobin aus den lysierten Erythrozyten wird zu Meth moglobin oxidiert und bildet dann mit dem KCN des Hamolysemittels einen Cyanmethamoglobin Kompex Dieser wird bei 540 nm photometrisch bestimmt 3 1 4 2 Leukozytenbestimmung Der F 800 gibt neben der Gesamtleukozytenzahl den prozentualen Anteil W SCR und die absolute Anzahl W SCC kleiner Leukozyten sowie den prozentualen Anteil W LCR und die absolute Anzahl W LCC groBer Leukozyten an Die Messung erfolgt an 0 5 ml der 1 500 verd nnten Probe Die Kerne der Leukozyten werden mit der Widerstandsmessung gez hlt und ihr Volumen bestimmt Das Ergebnis der Zahlung und der Volumenmessung wird in einem Histogramm dargestellt Mit Hilfe von Diskriminatoren Abbildung 17 Nr 1 2 kann die Gesamtleukozytenzahl bestimmt und Zellpopulationen von unterschiedlicher Gr e voneinander getrennt werden Abbildung 17 zeigt das WBC Histogramm einer Rinderblutprobe Eigene Untersuchungen 65 W SCR D 213 W LOR 0 787 W SCE 1 5 105 4 W LEC 4 8 103 0 Abb 17 Sysmex F 800 WBC Histogram Rind NR 241 Der im Histogramm mit 1 bezeichnete Diskriminator Schwellenwert
155. p lt 0 001 p lt 0 001 Neutrophile G abs p lt 0 01 p lt 0 001 p lt 0 05 Eosinophile G abs p lt 0 05 p lt 0 001 n s Monozyten abs p lt 0 001 p lt 0 001 p lt 0 001 Diese Zusammenstellung zeigt da der Einflu von Lagerdauer und Lagertemperatur auf die Ergebnisse der Blutzellz hlung wesentlich geringer ist als der Einflu auf die Blutzelldifferenzierung Eigene Untersuchungen 97 3 2 4 1 Einflu von Lagertemperatur und Lagerdauer auf die Blutzellzahlung Die Leukozytenzahl ist bei einer Lagerung bei 4 C Uber 72 Stunden stabil durch eine Lagerung bei Raumtemperatur werden die Abweichungen vom Ausgangswert ab 36 Stunden nach Blutentnahme gr er bleiben aber im Mittel unter zehn Prozent In der Abbildung 23 ist der Verlauf der Leukozytenzahl f r eine Lagerung bei 4 C und 22 C ber 72 Stunden vergleichend dargestellt WBC 4 Lagerungstemperatur 22 C Lagerungstemperatur 4 C Prozentuale Abweichung 0 10 20 30 40 50 60 70 80 Zeit Stunden Abb 23 Stabilit t der Leukozytenzahl Dargestellt ist die prozentuale Abweichung vom Ausgangswert x S bei 4 C und 22 C ber 72 Stunden n 10 98 Eigene Untersuchungen Die Auswirkungen der beiden Einflu gr en Lagertemperatur und Lagerdauer auf die Erythrozytenzahl und den H moglobingehalt sind ber den gesamten Untersuchungszeitraum sehr gering Die Abbildung 24 zeigt den Verlauf der Erythrozytenz hlung
156. pr zision des ADVIA 120 wird anhand von zwei Me reihen ermittelt Die Pr zision innerhalb der Serie wird durch eine 25 fach Wiederholungsmessung ermittelt Die Pr zision ber verschiedene Serien hinweg wird durch 3 fach Messung aller Evaluationsblutproben bestimmt Die Absch tzung des Zufallsfehlers und damit die Reproduzierbarkeit von Untersuchungsergebnissen ist eine unabdingbare Voraussetzung bei der korrekten Blutzellzahlung WESTGARD et al 1974 Moderne H matologiesysteme sollten ber einen Variationskoeffizienten von lt 3 bei Wiederholungsmessungen verf gen D RNER et al 1993 F r die Parameter der Blutzellzahlung ergibt sich f r den ADVIA 120 ein Variationskoeffizient bei der Messung ber verschiedene Serien hinweg von CV 0 59 RDW bis CV 2 26 WBC vergl auch Tabelle 22 Damit liegt dieser f r die Parameter WBC RBC RDW HGB HCT MCV MCH und MCHC deutlich unter der 3 Marke Ein wenig schlechter ist die Pr zision f r die Thrombozyten mit 3 60 Beim Vergleich dieser Werte mit den Ergebnissen von GROMMELT 1999 f r das Rind WBC 4 9 RBC 1 2 und PLT 3 4 und BEDDIES 1999 f r das Schaf WBC 4 5 RBC 1 1 und PLT 4 2 zeichnet sich der ADVIA 120 durch eine deutlich bessere Prazision der Ergebnisse aus Eine Ausnahme bildet hier die Z hlung der Retikulozyten f r die eine Abweichung von 37 87 zwischen den einzelnen Messungen berechnet wurde Die Variationskoeffizienten f r die Pr
157. r 0 976 r 0 997 RBC r 0 859 r 0 793 r 0 880 r 0 993 PLT r 0 706 r 0 718 r 0 840 r 0 990 HCT r 0 968 r 0 862 r 0 808 r 0 993 Referenzger t H matokritzentrifuge Beim Vergleich der Retikulozytenz hlung mittels ADVIA 120 mit der Z hlung der Retikulozyten in einem mit Brilliantkresylolau gef rbtem Ausstrich konnte keine signifikante Korrelation ermittelt werden Die Ursache hierf r ist die physiologischerweise geringe Zahl an Retikulozyten im zirkulierendem Blut beim Rind sowie die geringe Anzahl der manuell gez hlten Zellen 1000 Zellen pro Ausstrich im Gegensatz zu 50 000 bis 60 000 untersuchten Zellen pro Messung bei der automatischen Z hlung durch den ADVIA 120 Auf der anderen Seite ist es durch die sensitive Me technik m glich Erythrozyten mit geringem RNA Gehalt den Retikulozyten zuzuordnen Beim klinischen Einsatz an an mischen Patienten zeigte sich da der ADVIA 120 in diagnostisch relevanten Bereichen einsetzbar ist vergleiche auch Kapitel 3 1 1 2 6 Auf den Abbildungen 68 69 70 ist eine Zusammenstellung der Erythrozyten und Retikulozytenmessergebnisse dargestellt Bei dem Patienten handelt es sich um ein ca 18 Monate altes weibliches Rind der Rasse Deutsch Rotbunt mit einer regenerativen An mie Zum Zeitpunkt der Untersuchung betr gt Diskussion der Ergebnisse 155 der H matokritwert 0 087 L L und die Erythrozytenzahl ist auf 1 T l abgefallen Die Zahl der im Blut zi
158. r r 0 441 r 0 152 a POX ae r r 0 326 n b anutozyten ANAE ae ree r 0 01 n b keine Angaben 160 Diskussion der Ergebnisse Die bereinstimmung des automatisch erstellten Differentialblutbildes des ADVIA 120 mit der manuellen Biutzelldifferenzierung mittels Peroxidase Panoptischen und Naphtylacetat Esterase gef rbten Blutaustrichen ist f r die Erkennung der Lymphozyten und neutrophilen Granulozyten sehr gut Der Korrelationskoeffizient rangiert zwischen r 0 895 und r 0 962 wobei die Ergebnisse f r die neutrophilen Granulozyten etwas besser korrelieren als die der Lymphozyten Die Richtigkeit bei der Differenzierung dieser Zellgruppen erbrachte auch in anderen Evaluationen hnliche gute Ergebnisse BEDDIES 1999 GROMMELT 1999 BLEUL 1998 Deutlich schlechter f llt das Ergebnis f r die Differenzierung der eosinophilen Granulozyten aus Dieses ist um so erstaunlicher da diese Population im Peroxidasezytogramm s Abb 08 des ADVIA 120 ein genau definiertes Kluster bildet Die Korrelationskoeffizienten von r 0 657 ANAE bis r 0 798 PAN lassen sich nur durch die geringe Zahl von eosinophilen Granulozyten in bovinen Blutproben erkl ren Aufgrund der geringen Anzahl von Zellen kommt es zu starken statistischen Schwankungen sowohl bei der automatischen wie auch bei der manuellen Differenzierung Bei einem hohen Anteil eosinophiler Granulozyten am Differentialblutbild ist die automatische Differenzie
159. r Kammer als auch die Handhabung von Pipette und Z hlkammer eine erhebliche Fehlerquelle darstellen BERKSON et al 1940 Niepage rechnet bei sorgf ltiger Ausf hrung der Methode mit einem Fehler von 5 NIEPAGE 1974 2 2 2 Bestimmung der Hamoglobinkonzentration Der Gehalt an Hamoglobin im Blut wird photometrisch ermittelt Die von NIEPAGE 1974 angegebene kolorimetrische Methode bei der eine visuelle Erfassung der Farbintensitat von Hamoglobin oder seiner Verbindungen mit dem Auge erfolgt gilt heute als obsolet Bei der heute gebr uchlichen Hamiglobincyanidmethode werden die Erythrozyten lysiert der rote Blutfarbstoff freigesetzt und mittels Kaliumhexacyanoferrat Ill zu H miglobin oxidiert Durch die Reaktion mit Kaliumcyanid entsteht ein stabiler H miglobincyanidkomplex Das Absorptionsmaximum dieser Verbindung liegt bei einer Wellenl nge von 546 nm Aus der ermittelten Extinktionsdifferenz zwischen Probe und Transformationsl sung wird die H moglobinkonzentration errechnet STOBBE 1991 Schrifttum 7 2 2 3 Manuelle Blutzelldifferenzierung Die manuelle Differenzierung von Blutzellen erfolgt an einem gefarbten Blutausstrich Hierzu kann natives und auch antikoaguliertes Blut verwendet werden Auf einem staubfreien entfetteten Objekttrager wird an einer Schmalseite ein Bluttropfen aufgetragen und mit einem geschliffenen Ausstrichglas im Winkel von 40 ber den Objekttrager gezogen Der Ausstrich ist gelungen wenn die Blut
160. r f r die Sp l und Mantelstromfl ssigkeit 6 und dem Abfallbeh lter f r gebrauchte Reagenzien 7 Die folgende bersicht zeigt das Analysensystem des H matologiesystems ADVIA 120 Abb 04 ADVIA 120 Fa Bayer Die Kennzeichnung der Probe und die Darstellung der Ergebnisse erfolgen mittels eines Computerprogramms das hinsichtlich seiner Benutzeroberfl che mit den Programmen von Microsoft vergleichbar ist Da ein gro er Teil dieser Arbeit nur mit 46 Eigene Untersuchungen Hilfe der Systemsoftware des ADVIA 120 zu bew ltigen war sollen im n chsten Kapitel einzelne Funktionen vorgestellt werden 3 1 2 1 Software Die Einsatzm glichkeiten des ADVIA 120 werden durch die installierte Software festgelegt Der Benutzer kann zwischen einer Human und einer Multi Spezies Software w hlen Die Multi Spezies Version verf gt ber Voreinstellungen f r die folgenden 20 Spezies und Subspezies Hund Katze Schwein Pferd Schaf Ziege Rind Meerschweinchen Cynomolgus und Rhesusaffe Kaninchen Ratte Maus und Mensch Bei der Auswahl der Probenanforderung kann bei der Multi Spezies Version V 1 1 07 MS die gew nschte Tierart ausgew hlt werden Abbildung 5 Nr 4 700 Mouse CD1 Abb 05 ADVIA 120 Bildschirm zur Probenidentifikation im manuellen Ansaugmodus Eigene Untersuchungen 47 Die Kennzeichnung der Proben erfolgt durch die Vergabe einer Patientenidentifikation Abbildung 5 Nr 1 Der Probentyp Kontrolle
161. rbung mit dem F rbeset LEUCOGNOST POX Fa Merck Darmstadt erfolgte durch Einstellen in LEUCOGNOST Fixiergemisch f r 1 Minute und anschlie endem Sp len mit Leitungswasser Die fixierten Blutausstriche wurden 10 Minuten mit frisch bereiter F rbel sung aus Testansatz bedeckt mit Aqua dest 10 Sekunden gesp lt und luftgetrocknet Die so vorbehandelten Objektrager wurden dann f r zwei Minuten mit Mayers H malaunl sung nachgef rbt und abschlie end f nf Minuten mit Leitungswasser abgesp lt Zur Aufbewahrung wurden die Blutausstriche mit AQUATEX Fa Merck Darmstadt und Deckgl schen konserviert 3 1 6 4 Retikulozytenf rbung Bei der Supravitalfarbung der Retikulozyten wurden Mikro Probengef e zur Retikulozytenf rbung Fa Sarstedt N mbrecht verwendet Zur F rbung wurden 100 ul Blut mit der im Probengef enthaltenen 100 ul Brilliantkresylblaul sung 1 ig vermischt und 15 Minuten inkubiert Aus diesem Ansatz wurde ein Ausstrich angefertigt der mit Entellan und Deckglas eingedeckt wurde Eigene Untersuchungen 69 3 1 7 Statistische Methoden Die statistische Auswertung erfolgte durch die Arbeitsgruppe Biomathematik und Datenverarbeitung des Instituts f r Veterin rphysiologie der Justus Liebig Universit t Gie en Zur Aufbereitung der Daten wurden das Statistikprogramm BMDP Dynamic Release 7 0 DIXON 1993 eingesetzt Die graphische Aufbereitung der Daten wurde auf einem Personalcomputer mit dem Programm PlotIT
162. rfolgt die Vorstellung der Vergleichsgerate der Evaluation des ADVIA 120 3 1 3 H matologiesystem Technicon H 1 Das H matologiesystem Technicon H 1 Fa Bayer Diagnostic Fernwald ist ein Vorl ufer des ADVIA 120 Daher wird in diesem Kapitel der Beschreibung der technischen Unterschiede zum ADVIA 120 gr ere Aufmerksamkeit geschenkt als der erneuten Beschreibung identischer Einzelheiten Der H 1 ist ein automatisches Analysesystem zur Erstellung gro er und kleiner Blutbilder Der MeBvorgang beruht auf dem Prinzip der Durchflu zytometrie mit optoelektronischer Zellz hlung Der maximale Probenumsatz pro Stunde betr gt bei einem gro en Blutbild 60 und einem kleinen Blutbild 80 Untersuchungen Das Ansaugvolumen betr gt 100 ul durch EDTA antikoaguliertes Blut Die Ergebnisse k nnen in neun verschiedenen Analysemodi dargestellt werden Report 1 3 stellt die 62 Eigene Untersuchungen Ergebnisse mit jeweils unterschiedlicher Gewichtung auf das wei e und rote Blutbild dar Die Untersuchungsmodi Labor 1 3 und Research 1 3 dienen der berwachung des Me vorgangs Die Multi Spezies Software erm glicht Blutuntersuchungen von Humanproben und von Tierproben Hund Katze Kaninchen Maus Pferd Ratte Die Probenaufbereitung und das Messverfahren zur Feststellung des H moglobingehaltes und die Messung im Basophilen Kernsegmentierungskanal sowie im Peroxidasekanal gleicht der beim ADVIA 120 beschriebenen Technik Die Aufbereitung der Erythr
163. rkulierenden Retikulozyten liegt bei 162 2 G I 16 Header Rete SID ORTSIEFER Time amp Date 19 08 99 16 17 43 Neg RBC 538 5968 Retic 16 2 162 2 Selectivity CBC DIFFLRETIC REES 524 603 re H Retic 27 7 318 System IRF H 277 Sequence 20 IRF MHH 476 species Cattle Playback RTC Cells Acquired 10962 FOR LABORATORY USE ONLY RTC Cells Analyzed 7112 RTC Gated Cells 7109 Hide Run Screen Information Rate count 1150 Retic Scatter Abs 20 56 x10 cells L 1 00 x10 2cells L 1 3 mmol L 0 087 TRE 86 7 RE 1 32 fmol 15 27 mmol L 16 86 mmol l 1 36 frol 0 33 fmol 33 4 a i 3 73 mmolfL 137 x10 cells L RUE SOS ES 60 7 n 156 0 001 ERE Abb 68 Ergebnis des ADVIA 120 f r die Erythrozyten und Retikulozytenzahlung bei einem Rind mit regenerativer Anamie Auf der Abbildung 68 ist im Retikulozytenzytogramm die Population der Retikulozyten mit 2 Retic Count gekennzeichnet Diese Gruppe umfa t Retikulozyten mit geringem L RETIC mittlerem M RETIC und hohem H RETIC Gehalt an Ribonukleins ure links im Anschlu an die Retikulozyten folgt die Population der reifen Erythrozyten 1 Neg RBC Die Zellen aus Gruppe 1 und 2 bilden zusammen die Gruppe der Klassifizierten Zellen RTC Gated Cells Die Berechnung des prozentualen Anteils der Retikulozyten erfolgt nach der Formel Retikulozyten 100 x Retikulozyten Klassifizierte Zellen x kal Faktor 156 Diskussion der
164. rluste bei hohen Zellzahlen und zu gro dimensionierter Me ffnung und Z hlfehler bei Widerstandsme ger ten durch Verf lschung der Signale beim Durchtritt der Zelle durch die Me ffnung am Rand oder in der Mitte bzw durch Rezirkulation bedingte Doppelz hlung der Partikel In Pr fphase III wird die Untersuchung von Pr zision analytischem Drift Verschleppung Richtigkeit und Linearitat des Analysators durch die Autoren empfohlen Die berwachung der Pr zision innerhalb der Serie erfolgt durch 20 fache Messung einer Patientenblutprobe und von Kontrollmaterialien mit hohen niedrigen und normalen Zellkonzentrationen Von den Ergebnissen werden jeweils Mittelwert Standardabweichung und Variationskoeffizient berechnet Bei der Bestimmung der Pr zision von Tag zu Tag werden Kontrollmaterialien an zehn Arbeitstagen oder bis zum Verfallsdatum der Kontrollen t glich gemessen Doppelbestimmungen F r die Me bereiche hoch niedrig und normal sollen Mittelwert Standardabweichung und Variationskoeffizient dargestellt werden Erg nzend dazu mu das Ger t an einem Tag mehrfach kalibriert und jeweils die Pr zision innerhalb der Serie an Frischblutproben bestimmt werden Beim analytischem Drift wird Frischblut partiell stabilisiertes Blut oder Surrogatmaterial in unterschiedlichen Zeitintervallen untersucht und mittels t Test ein Vergleich der Mittelwerte auf Abweichung durchgef hrt Alternativ kann mit Parametern die eine hohe interindivi
165. rmined in the Common Reference Laboratory Zbl Vet Med B 25 6 484 498 198 7 Schrifttumverzeichnis MANOIU J MAY J MARSCHANG A POP P COSTEA V Pathogenese und Therapie von Erkrankungen des Intestinaltraktes bei Kalbern Arch Exp Veterinarmed 27 3 527 541 MORITZ A 2000 Der Einsatz lasergest tzter Multiparameter H matologiesysteme in der Veterin rmedizin Vetmed Habilitation Justus Liebig Universit t Gie en NIEPAGE H 1974 Methoden der praktischen H matologie f r Tier rzte Paul Parey Verlag Berlin und Hamburg NOONAN T R CROSS F H REYNOLDS R A MURPHREE R L 1978 Effects of Age Season and Reproductive Activity on Hemograms of Female Hereford Cattle Am J Vet Res 39 433 440 OGAWA E KOBAYASHI K YOSHIURA N MUKAI J 1989 Hemolytic Anemia and red Blood Cell Metabolic Disorder attributable to low Phosphorus intake in Cows Am J Vet Res 50 388 392 PAAPE M J CARROLL D W KRAL A J MILLER R H DESJARDINS C 1974 Corticosteroids circulating Leukocytes and Erythrocytes in Cattle Diurnal changes and Effects of Bacteriologic Status Stage of Lactation and Milk yield on Response to Adrenocorticotropin Am J Vet Res 35 355 362 POMSEL T 1980 Hamatologische Normalwerte beim Rind in Abhangigkeit von Alter und Trachtigkeit Eine Auswertung der Literatur Vet med Diss Justus Liebig Universitat GieBen 7 Schrifttumverzeichnis 199 RUMKE C L 1960
166. rrelates Trop Anim Health Prod 11 106 112 AMMELOUNX B 1980 Hochgradige Blutarmut beim Kalb infolge von massivem Lausebefall Tierarztl Umschau 35 692 696 ANOSA V O LOGAN HENFREY L L SHAW M K 1992 A Light and Electron Microscopic Study of Changes in Blood and Bone Marrow in acute Hemorrhagic Trypanosoma vivax Infection in Calves Vet Pathol 29 33 45 BACCUS J 1973 The Observer Error in Peripheral Blood Cell Classification Am J Clin Path 59 223 230 BARNETT C W 1933 The Unavoidable Error in the Differential Count of the Leucocytes of the Blood J Clin Invest 12 77 85 190 7 Schrifttumverzeichnis BAYER CORPORATION 1999 ADVIA 120 Hematology System Multi Species TM System Software Version 1 1 07 MS Supplemental Operating Information Bayer Customer Bulletin Publication No TN9 9219 00 BEDDIES G 1999 Erstellung hamatologischer Referenzwerte mit dem fur die Tierart Schaf etablierten Hamatologiesystem Technicon H 1 Vet med Diss Justus Liebig Universitat GieBen BERKSON J D MAGATH T B HURN M 1940 The Error of Estimate of Blood Cell Count as Made with the Hemocytometer Am J Physiol 128 309 323 BGBI 1997 3328 3329 Kalberhaltungsverordnung in der Fassung der Bekanntmachung vom 22 12 97 BLEUL U 1998 Hamatologische Verlaufsuntersuchungen bei Rindern intra und post partum gleichzeitig eine berpr fung des Hamatologiesystems CellDyn 3500 R Vet med Diss Gie
167. rt und anschlie end die Probe dem n chsten Schritt zugef hrt werden Dieser Schritt beinhaltete eine Zentrifugation f r 10 Minuten bei 300 G und anschlie end zweimal ber 5 Minuten bei 600 G Zur Erstellung einer Konzentration von 12 T I Erythrozyten 100er Pool muss die Blutprobe 25 Minuten lang bei 750 G zentrifugiert werden Aus den 100er Pools werden in 20er Schritten Verd nnungsreihen hergestellt Die Leerprobe 0 Pool wird aus dem zellfreiem Plasma der Zentrifugationschritte gewonnen Bei der Feststellung der Linearit t werden nacheinander die Verd nnungsstufen 0 10 20 40 60 80 100 zweifach gemessen Aufgrund der geringen Eigene Untersuchungen 93 Varianz der Wiederholungsmessungen der Verd nnungsstufen wird anstelle des Varianzquotiententestes eine Korrelationsanalyse der Ergebnisse durchgef hrt In Tabelle 24 sind die Ergebnisse f r die Linearit tsbestimmung der Parameter WBC RBC HGB und PLT aufgef hrt Angegeben wird der Korrelationskoeffizient r und die Hauptkomponentengleichung y mx b Der analytische Bereich gibt die Zellkonzentration an Uber die der Parameter getestet ist Die Ergebnisse fur alle untersuchten Parameter sind hoch signifikant p lt 0 0001 Tab 24 Ergebnisse der Linearit tsbestimmung f r die Parameter RBC HGB WBC und PLT Parameter Sa Linearit t Analytischer Bereich Einheit r 0 999 RBC Til 0 12T y 0 13x 0 09 r 0 999 HGB mmol l 0 12 mmo
168. rtlaufenden Anstieg des mittleren Thrombozytenvolumens das bei 72 Stunden nach Entnahme den Ausgangswert um 25 Prozent bersteigt Eigene Untersuchungen 105 3 2 4 2 Einflu von Lagertemperatur und Lagerdauer auf die Blutzelldifferenzierung Die Zahlung der neutrophilen Granulozyten unterliegt nur geringen Veranderungen sofern die Probe nach der Entnahme bei 4 C gelagert wird Nach 72 Stunden betragt die mittlere Abweichung vom Ausgangswert zehn Prozent Durch eine Lagerung bei Raumtemperatur verk rzt sich die klinisch unbedenkliche Lagerzeit auf 24 Stunden Abbildung 30 zeigt den Verlauf der absoluten neutrophile Granulozytenzahl bei diesen beiden Lagerungstemperaturen Neutrophile Granulozyten 140 amp Lagerungstemperatur 22 C 120 Oo Lagerungstemperatur 4 C S100 4 aeee 80 604 w lt 20 49 hs 3 0 Cc 20 N 40 a a 60 80 0 10 20 30 40 50 60 70 80 Zeit Stunden Abb 30 Stabilitat der absoluten neutrophilen Granulozytenzahl dargestellt ist die prozentuale Abweichung vom Ausgangswert x S bei 4 C und 22 C ber 72 Stunden n 10 Die Stabilit t der Lymphozytenzahl ist ebenfalls stark abh ngig von der Lagertemperatur Eine Lagerung bei Raumtemperatur f hrt wie auch bei den neutrophilen Granulozyten zu einer erheblichen Streuung der Ergebnisse 106 Eigene Untersuchungen Aussagekraftige Werte k nnen nur 12 bis 24 Stunden nach Probenentnahme ermitte
169. rung der manuellen berlegen Von verschiedenen Autoren werden hnliche Probleme beschrieben GROMMELT 1999 R MKE 1960 TVEDTEN u KORCAL 1979 HABERMANN et al 1989 belegten die berlegenheit der automatischen eosinophilen Granulozytenz hlung gegen ber der manuellen Differenzierung Bei der Bestimmung der Richtigkeit der Z hlung der basophilen Granulozyten ergaben sich keine signifikanten bereinstimmungen mit den Referenzverfahren Die Differenzierung der Monozyten bereitet bei der manuellen Differenzierung beim Rind insoweit Schwierigkeiten als da eine exakte Unterscheidung gro er Lymphozyten von Monozyten nicht immer m glich ist Die Problematik liegt in dem Fehlen einer geeigneten Referenzmethode zur exakten Identifikation GOOSSENS et al 1991 Durch den Einsatz der ANAE F rbung kann die Identifizierung erleichtert werden Beim Methodenvergleich korreliert die ANAE F rbung mit r 0 509 am besten mit den Ergebnissen des ADVIA 120 gefolgt von der POX F rbung mit r 0 410 Die schlechteste bereinstimmung besteht zur PAN F rbung mit r 0 396 GROMMELT 1999 erhielt bei der Evaluation des H 1 vergleichbare Korrelationen f r die Monozytenz hlung nachdem er die Gruppe der LUC zur Diskussion der Ergebnisse 161 Monozytenfraktion addierte BEDDIES 1999 konnte mit dem H 1 aufgrund der fehlenden Softwareeinstellung f r das Schaf keine ausreichende Richtigkeit der Messungen feststellen 4 1 3 Pr zision Die Me
170. rzellen sind im Blut sehr selten anzutreffen Die Entwicklung und Reifung l uft vollst ndig im Knochenmark ab Ihre Lebensdauer im Blut betr gt ca 160 Tage Mit einem Durchmesser von 5 7 um besitzen Rinder im Vergleich zu den anderen Haustierarten relativ gro e Schrifttum 23 Erythrozyten EDER 1987 Durch eine physiologische Anisozytose schwankt der Querdurchmesser zwischen 4 und 9 um JAIN 1993 Die Erfassung der Erythrozytenzahl RBC Red Blood Count ist eine Basisuntersuchung zur Bestimmung von St rungen der Erythropoese Die Erythrozyten sind charakterisiert durch die Hamoglobinkonzentration HGB das mittlere Zellvolumen MCV Mean Corpuskular Volume und der Erythrozyten verteilungsbreite RDW Red cell Distribution Width Der H matokritwert HCT und die Erythrozytenindizes MCV Mean Corpuscular Volume MCH Mean Corpuscular Hemoglobin MCHC Mean Corpuscular Hemoglobin Concentration werden je nach verwendetem H matologiesystem berechnet oder direkt gemessen SCHALM et al 1975 Der RBC dient zusammen mit dem H matokritwert der Erkennung von An mien oder H mokonzentrationen Nach ihrer Entstehung mu man h morrhagische durch Blutverlust hamolytische aufgrund intravasaler Aufl sung von Erythrozyten und nichtregenerative An mien gest rte Neubildung im Knochenmark unterscheiden Eine leichte An mie liegt vor wenn die Erythrozytenzahl 3 5 5 T I Blut betr gt Bei einer m igen An mie betr gt der Wert
171. s Streulicht von zytochemisch angef rbten Lekozyten zur Bestimmung des Volumens verwendet und die F rbeintensit t mittels der Absorbtion gemessen BAYER CORPORATION 1999 In Abbildung 3 ist die Funktionsweise einer Durchflu k vette zur Z hlung von Leukozyten schematisch dargestellt 12 Schrifttum 8 7 7 6 1 4 2 3 Abb 03 ADVIA 120 Messung von Absorbtion und Streulicht an gef rbten Leukozyten aus ADVIA TM 120 Hematology System Benutzerhandbuch Willkommen bei ADVIA 120 V1 03 00 Copyright 1997 1998 Bayer Corporation Die Abbildung zeigt die Flu zelle 1 die hier grau unterlegt ist Der Kanal f r die Vorsp lung ist mit der Zahl 2 gekennzeichnet Der Probenstrom wird ber den mittleren Zuflu 3 in die Flu zelle eingeleitet Nummer 4 bezeichnet den Einstrom f r die Mantelstromfl ssigkeit Das Licht der Halogenlampe 9 wird ber die Linse 5 geb ndelt und ber den Spiegel 6 teilweise umgelenkt so da an den Positionen die mit 7 Absorptionsmessung und 8 Streulichtmessung gekenzeichnet sind die Lichtsignale jeder Zelle gemessen werden k nnen Schrifttum 13 2 4 Evaluationsrichtlinien Vor dem klinischen Einsatz von automatischen Laborgeraten sollte immer eine ausf hrliche Evaluation stehen Das Ziel einer Evaluation ist die Herstellung eines Ger testandards der es erm glicht Ergebnisse verschiedener Laboratorien und unterschiedlicher Ger tetypen vergleichbar zu machen
172. sabh ngige Entwicklung der Mittleren Thrombozytenmasse f r die Rinderrassen schwarzbunte Holstein und Deutsch Fleckvieh Dargestellt sind Mittelwert sowie oberer und unterer Grenzwert f r die Altersgruppe zwischen zwei und zehn Jahren Regressionsgeraden Altersgruppe gt 2 Jahre gleichung SB y 1 05 DFV y 0 99 Normbereichsgrenze 0 15 t Wert 1 9837 Signifikanzen Rasseabhangigkeit p lt 0 001 Altersabh ngigkeit n s Freiheitsgrade SB n 47 DFV n 57 F r die Parameter PDW und PCDW werden die Ergebnisse in den folgenden Tabellen zusammengefa t In Tabelle 32 sind die Ergebnisse des t Test f r den Einflu der Rasse abgebildet Tabelle 33 zeigt die Ergebnisse f r die Altersabh ngigkeit 138 Eigene Untersuchungen Tab 32 Signifikanzen des Einflusses der Rasse auf die Referenzbereiche fur die Altersgruppen j nger sechs Monate sechs bis 24 Monate und lter 24 Monate p Signifikanzniveau n s nicht signifikant Rinder lt 6 Rinder 6 24 Rinder gt 24 Parameter Monate Monate Monate PDW n s p lt 0 05 n s PCDW p lt 0 05 n s n s Tab 33 Signifikanzen des Einflusses des Alters auf die Referenzbereiche f r die Altersgruppen j nger sechs Monate sechs bis 24 Monate und lter 24 Monate p Signifikanzniveau n s nicht signifikant Rinder lt 6 Rinder 6 24 Rinder gt 24 Parameter Monate Monate Monate PDW n s p lt 0 05 n s PCDW n s n s p lt
173. schen zwei und zehn Jahren Regressionsgeraden Altersgruppe gt 2 Jahre gleichung SB y 26 31 0 01x DFV y 25 63 0 01x Normbereichsgrenze 2 02 t Wert 1 9837 Signifikanzen Rasseabh ngigkeit p lt 0 001 Altersabh ngigkeit p lt 0 05 Freiheitsgrade SB n 47 DFV n 57 Abbildung 56 und 57 zeigen die Entwicklung der Mittleren Thrombozytenmasse bis zum Alter von 10 Jahren f r die Rassen SB und DFV 136 Eigene Untersuchungen MPM pg 0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 Alter Monate Abb 56 Altersabhangige Entwicklung der Mittleren Thrombozytenmasse fir die Rinderrassen schwarzbunte Holstein und Deutsch Fleckvieh Dargestellt sind Mittelwert sowie oberer und unterer Grenzwert bis zum Alter von 24 Monaten Regressionsgeraden Altersgruppe lt 6 Monate Altersgruppe 6 24 Monate gleichung SB y 0 87 0 01x y 0 92 0 006x DFV y 0 87 0 01x y 0 86 0 006x Normbereichsgrenze 0 09 0 110 t Wert 2 0262 1 9908 Signifikanzen Rasseabhangigkeit n s p lt 0 001 Altersabhangigkeit p lt 0 05 p lt 0 05 Freiheitsgrade SB n 19 n 41 DFV n 21 n 40 Eigene Untersuchungen 137 15 O DFV SB SB DFV 1 4 o 184 1 2 oo eh BEE a PEIE HERE ARE scree eee ce en 1 1 oe Oo f ka oo 8 e o 0 1 0 4 Oe R 2 2 PEs AE oe nel ei REEDE diene ics o vo 09 ane bono 8 o 0s 0 7 0 6 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Alter Jahre Abb 57 Alter
174. scher Me wert abgeleitet werden Kein Ger t ist in der Lage Blutk rperchen zu erkennen sondern es werden elektrische und oder optische Signale gez hlt und differenziert THOM 1990 Bevor also ein Analysator in den klinischen Einsatz geht ist eine ausf hrliche Validierung seiner Spezifikationen und Me ergebnisse erforderlich Durch technische Neuerungen werden dem Benutzer des ADVIA 120 eine reihe bisher unbekannter Parameter zur Thrombozyten Retikulozyten und Erythrozytenanalytik bereitgestellt Diese neuen Parameter verf gen zur Zeit ber keine klinische Bedeutung Daher werden zweiten Teil dieser Arbeit f r neue Parameter Referenzbereiche erstellt um eine Grundlage f r die klinischen Bewertung und Einsatzf higkeit zu geben Gleichzeitig werden auch f r bekannte Parameter Referenzbereiche erstellt die zum Teil aufgrund von verbesserter Me methoden oder in Folge ver nderter Haltungs und Umweltbedingungen von den bisherigen Referenzbereichen abweichen 4 1 1 Evaluierung und Softwareadaptation des ADVIA 120 Die Evaluation des ADVIA 120 teilt sich in vier Schritte Softwareversion 1 4 Die Umsetzung erforderlicher Ver nderungen an der Software f r die einzelnen Tierarten zur Verbesserung der Me genauigkeit wurde durch Mitarbeiter von Bayer Diagnostics Tarrytown NY durchgef hrt Die einzelnen Softwareversionen werden in den n chsten Kapitel parallel verglichen und vorgestellt Die Bewertung der Ger tetauglichkeit erfolgt
175. schiede f r alle Rassen 2 5 6 Geschlechtsspezifische Referenzbereiche Unterschiede im Blutbild die durch das Geschlecht bedingt sind werden hinsichtlich der Erythrozytenzahl in mehreren Untersuchungen beschrieben ST BER u GR NDER 1990 stellen fest da geschlechtsreife Jungbullen normalerweise etwas h here Erythrozytenwerte aufweisen als gleichaltrige weibliche Rinder SCARBOROUGH 1932 beschreibt f r Bullen 1 bis 1 5 T I h here Erythrozytenzahlen als f r K he DOORNENBAL 1977 stellt bei weiblichen Rindern h here H matokritwerte fest als bei Bullen Im Gegensatz dazu ist die H moglobinkonzentration bei F rsen niedriger als bei den m nnlichen Tieren Dagegen k nnen HOLMAN u DEW 1967 keine Geschlechtsunterschiede feststellen Der Einflu von Reproduktionsstand und Milchleistung auf das Blutbild weiblicher Rinder ist bekannt ST BER u GR NDER 1990 beschreiben ein Absinken der Erythrozytenwerte bei tragenden Tieren Im Gegensatz dazu beobachtet JAIN 1986 einen leichten Anstieg im Laufe der Trachtigkeit Einen R ckgang der Erythrozytenzahlen bei hochlaktierenden Milchk hen infolge eines f tterungsbedingten Mangels an Eiwei Eisen Kupfer oder Kobalt wird von ST BER u GR NDER 1990 in Erw gung gezogen Eine negative Korrelation von Milchleistung und Parametern des roten Blutbildes H matokritwert H moglobingehalt und Erythrozytenzahl wird durch andere Arbeiten best tigt NOONAN et al 1978 HEWETT 1974
176. se abgebildet Tabelle 36 zeigt die Ergebnisse f r die Altersabh ngigkeit Tab 35 Signifikanzen des Einflusses der Rasse auf die Referenzbereiche f r die Altersgruppen kleiner sechs Monate sechs bis 24 Monate bzw kleiner 24 Monate und gr er 24 Monate p Signifikanzniveau n s nicht signifikant Rinder lt 6 Rinder 6 24 Rinder gt 24 Parameter Rinder lt 24 Monate Monate Monate Monate Neutrophile Gran p lt 0 05 p lt 0 05 p lt 0 001 Lymphozyten n s n s p lt 0 001 Eosinophile Gran n s p lt 0 001 Monozyten p lt 0 05 n s F r die Z hlung der eosinophilen Granulozyten und der Monozyten kann wie in Tabelle 36 ersichtlich kein signifikanter Unterschied zwischen der Gruppe lt 6 Monate und der Gruppe 6 24 Monate festgestellt werden Daher erfolgt die Berechnung eines Referenzwertes f r beide Gruppen gemeinsam Tab 36 Signifikanzen des Einflusses des Alters auf die Referenzbereiche f r die Altersgruppen kleiner sechs Monate sechs bis 24 Monate bzw kleiner 24 Monate und gr er 24 Monate p Signifikanzniveau n s nicht signifikant Rinder lt 24 Rinder 6 24 Rinder gt 24 Parameter Monate Rinder lt 6 Monate Monate Monate Neutrophile Gran p lt 0 05 n s P lt 0 001 Lymphozyten P lt 0 001 n s P lt 0 001 Eosinophile Gran p lt 0 001 n s Monozyten p lt 0 001 p lt 0 001
177. sion3 Version4 Version4 n 115 n 30 n 60 n 30 n 1 eT X SD 416 7 159 4 415 5 198 7 524 1 287 6 647 1 214 8 633 5 34 9 CV 6 22 4 15 6 78 3 60 5 50 x SD 7 20 0 80 5 94 0 61 6 15 0 64 6 14 0 76 5 94 0 09 MPV fl CV 3 26 3 31 1 70 3 67 1 50 X SD 52 80 12 68 138 44 10 18 51 54 3 75 61 74 9 28 47 99 2 30 PDW CV 11 90 12 14 3 03 6 78 4 79 x SD 23 41 1 76 25 39 2 19 26 04 1 73 24 60 1 65 MPC g dl n b CV 1 34 1 15 1 33 1 34 x SD 0 10 0 05 0 08 0 08 0 20 0 40 0 31 0 58 Retic n b CV 29 73 50 59 47 70 37 87 x SD 5 29 4 44 5 15 4 95 14 41 33 76 17 28 23 15 1 98 1 21 Retic G l CV 33 84 56 70 60 26 49 30 61 20 n b nicht bestimmt logarithmierte Werte Wie in Tabelle 22 ersichtlich ist die Wiederholbarkeit der Ergebnisse f r die Leukozytenz hlung ber verschiedene Serien hinweg bis auf Version 1 sehr gut CV lt 2 69 Die Pr zision innerhalb einer Serie ist mit einem CV von 2 20 ebenfalls sehr gut F r die Erythrozytenz hlung H moglobinbestimmung und den H matokritwert sowie f r die Indizes des roten Blutbildes verf gt das Ger t mit einem Variationskoeffizient von unter zwei Prozent ebenfalls ber eine sehr gute Wiederholbarkeit der Ergebnisse Dies gilt sowohl f r die Pr zision ber verschiedene Serien hinweg als auch f r die 25 fach Messung einer Probe Bei der Thrombozytenz hlung liegt
178. sseeinflu 178 Zusammenfassung Fortsetzung Tab 41 Formel der Referenzbereich beim Regressionsgeradengleichung zur Alter von 16 Monaten Berechnung altersabhangiger Referenzbereiche Schwarzbunte Deutsches Schwarzbunte Deutsches Parameter Holstein Fleckvieh Holstein Fleckvieh RetikulozytenG I 10 2 15 2 y Ig 1 16 0 014x lg 0 398 WBC Gil 6 34 13 90 y lg 1 02 0 003 x 0 17 Neutrophile Granulozyten G l 1 80 5 60 1 40 4 50 Lymphozyten Gil 4 10 9 80 y lg 0 87 0 004 x 0 189 Monozyten Gil 0 20 1 10 y lg 0 08 0 013 x 0 33 Eosinophile 2 i y lg 0 98 0 027 y lg 1 10 0 027 x Granulozyten gt 01 1 23 MPO Oe x 0 64 0 64 Basophile i See u Granulozyten Gil 0 06 0 21 y lg 0 65 0 019 x 0 28 Neutrophile i y 21 01 0 22 x 27 04 0 22 x Granulozyten A a 13 32 13 32 A 1 y 67 91 0 21x y 64 47 0 21 x Lymphozyten 57 70 84 90 54 25 81 40 13 58 13 58 Monozyten 4 20 13 00 y lg 0 91 0 01 x 0 25 Eosinophile 5 7 y lg 0 98 0 027 x y lg 0 98 0 027 x Granulozyten e Reo atag N 0 26 0 26 Basophile Granulozyten 0 70 1 89 y lg 0 32 0 016 x 0 22 Altersgruppe lt 24 Monate kein Alterseinflu kein Rasseeinflu kein Alters und Rasseeinflu Zusammenfassung 179 Tab 42 Zusammenfassung der Referenzbereiche f r Rinder
179. t n s Freiheitsgrade SB n 105 DFV n 135 144 Eigene Untersuchungen Abbildung 62 und 63 zeigen die Entwicklung der Lymphozytenzahl bis zum Alter von 10 Jahren f r die Rassen SB und DFV 14 O DFV SB Rassenmittel 12 PA 10 gee gS eg o e er O Pa 5 fe y s u Nine c 32 sg o 9e oe bg 8 rd e E z e o o o e Q rn R Bu a E aes a s e 85 n m a 2 26 os DOO o es 0 oe Tg 28S 2 oo eo Gee 8 e gt 0 et Sls nen P ss Se o y 8 o l 4 0 BA O TTT 7222 2 22 9 2 S er o ceo e o 2 Oi in ph ah ele le I RZ A 0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 Alter Monate Abb 62 Altersabh ngige Entwicklung der Lymphozytenzahl f r die Rinderrassen schwarzbunte Holstein und Deutsch Fleckvieh Dargestellt sind Mittelwert sowie oberer und unterer Grenzwert bis zum Alter von 24 Monaten Regressionsgeraden gleichung SB DFV Normbereichsgrenze t Wert Signifikanzen Rasseabhangigkeit Altersabhangigkeit Freiheitsgrade SB DFV Altersgruppe lt 6 Monate y I9 0 657 0 037x y I9 0 657 0 037x 1g0 192 2 0262 n s p lt 0 001 n 19 n 21 Altersgruppe 6 24 Monate y Ig 0 867 0 004x y I9 0 867 0 004x 190 189 1 976 n s p lt 0 05 n 89 n 63 Eigene Untersuchungen 145 14 O DFV SB Rassenmittel 12 10 9 e Oi ee a EL ee o 6 0 7 ren a oe ee o Be es 2 E Seat ort et eg a
180. t p lt 0 05 Altersabh ngigkeit n s Freiheitsgrade SB n 47 DFV n 57 Abbildung 54 und 55 zeigen die Entwicklung des MPC bis zum Alter von 10 Jahren f r die Rassen SB und DFV 134 Eigene Untersuchungen MPC g dl N o1 0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 Alter Monate Abb 54 Altersabhangige Entwicklung der Mittleren Thrombozytendichte fir die Rinderrassen schwarzbunte Holstein und Deutsch Fleckvieh Dargestellt sind Mittelwert sowie oberer und unterer Grenzwert bis zum Alter von 24 Monaten Regressionsgeraden Altersgruppe lt 6 Monate Altersgruppe 6 24 Monate gleichung SB y 23 47 0 36x y 25 0 0 072x DFV y 23 47 0 36x y 23 93 0 072x Normbereichsgrenze 2 20 2 090 t Wert 2 0262 1 9908 Signifikanzen Rasseabhangigkeit p lt 0 001 p lt 0 001 Altersabhangigkeit p lt 0 001 p lt 0 05 Freiheitsgrade SB n 19 n 41 DFV n 21 n 40 Eigene Untersuchungen 135 30 3 ke2 25 O A 20 Abb 55 O DFV SB SB DFV e Sc aaa Sota erie tases Sy 0 3 9 S no ee s o o e eee es us ne Sa 0 P8 9 ET Dr o e a a A ea RER EEE SO sake 6 2 o o COE FE Poo eo E ee o 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Alter Jahre Altersabh ngige Entwicklung der Mittleren Thrombozytendichte f r die Rinderrassen schwarzbunte Holstein und Deutsch Fleckvieh Dargestellt sind Mittelwert sowie oberer und unterer Grenzwert f r die Altersgruppe zwi
181. t al 1989 beschreibt bei zwei K hen post partum eine hamolytische An mie mit Mikrozytose induziert durch eine Phosphormangel Fitterung Der Phosphormangel im Blutplasma beeinflu te die Funktion und Widerstandsf higkeit der Erythrozyten durch Einschr nkung der ATP Produktion ANOSA et al 1992 berichtet von elf K lbern die im Verlauf einer Trypanosoma vivax Infektion eine An mie Thrombozytopenie und initiale Leukopenie entwickelten Im weiteren Krankheitsgeschehen zeigte sich eine Leukozytose mit Lymphozytose und Neutropenie und einer moderaten Retikulozytose mit 3 6 9 4 Eine hochgradige An mie durch den Befall mit Linognatus vituli wird von GR NDER 1980 beschrieben Die betroffenen K lber hatten einen Hamatokritwert von 0 11 I bei 2 T I Erythrozyten und einem Hamoglobingehalt von 1 8 mmol l Zus tzlich zeigte das wei e Blutbild eine Leukozytose von 30 G l mit leichter Kernlinksverschiebung 5 und ausgepr gter Neutrophilie 87 28 Schrifttum 2 5 2 Wei es Blutbild Zum wei en Blutbild wird die Gesamtleukozytenzahl WBC und das Differentialblutbild mit der absoluten Anzahl und dem prozentualem Anteil der einzelnen Zellpopulationen gez hlt Unter dem Oberbegriff Leukozyten werden unterschiedliche Zellpopulationen zusammengefa t Morphologisch werden mononukle re Zellen MN Monozyten und Lymphozyten und polymorphnukle re Zellen PMN neutrophile eosinophile und basophile Granulozyten unterschieden E
182. t zur Auskunft ber Betriebs und Tierdaten die Probenentnahme zu einem angenehmen Teil der Arbeit gemacht haben Dies sind besonders die Familien Aberle Haupt Kley Kehm Krusen Holsteg Michel Schadek Stein Weil sowie die Administratoren der Versuchsg ter Rauischholzhausen und Marienborn Dr K Failing Herrn Heiter und den Mitarbeitern der Arbeitsgruppe Biomathematik die durch die statistische Aufbereitung der enormen Datenmengen diese Arbeit erst durchf hrbar gemacht haben Den Laborteams der Rinderklinik Frau Brigitte Neeb Sonntag Frau Dagmar Bartkowiec und Frau Gisela Dapper und der Kleintierklinik die durch Tips und Hilfe die Ausf hrung der Arbeit erheblich erleichtert haben Den Mitarbeitern der Firma Bayer Diagnostics Herr Kosanke Herr Schraml und Herr Schweitzer stellvertretend f r den technischen Not Beratungsdienst die in F llen von technischen Problemen und Computerabst rzen schnell und zu jeder Zeit kl rende Hilfe boten Nicht zuletzt meiner Freundin meiner Familie und Freunden die entweder durch Hilfe bei der Erstellung der Arbeit oder durch Hilfe bei der Wiederherstellung meiner Moral eine unersetzliche Hilfe waren Vielen Dank an Andreas Marie Therese Christian Susu Kati R tger Marie Louise Kirsten Bernhard Ralph und meine Mutter Ingrid Holsteg
183. throzytenverteilungsbreite RDW Die Erythrozyten werden in der Ery Reaktionskammer mit Natriumdodecylsulfat SDS isovolumetrisch aufgekugelt und mit Glutaraldehyd fixiert Durch die Fixation wird eine H molyse infolge Einwirkung von SDS verhindert ZELMANOVIC et al 1992 Die chemisch aufbereitete Probe wird zur Flu zelle im Erythrozyten Thrombozyten Kernsegmentierungs Kanal geleitet Hier erfolgt die Erfassung der Kleinwinkelstreulichtsignale die dem Zellvolumen entsprechen und die der Grofwinkelstreulichtsignale zur Bestimmung der zellul ren H moglobinkonzentration Abbildung 11 ist die graphische Darstellung im RBC 56 Eigene Untersuchungen Scatter Unter Verwendung der Mie Theorie ber die Lichtstreuung homogener Sph ren werden die Streulichtsignale f r jede Zelle in Hamoglobinkonzentration und Volumen umgerechnet Die so erhaltenen Werte werden in das lineare Volumen H moglobin Zytogramm RBC V HC aufgetragen das eine sehr gute Darstellung der Erythrozytenmorphologie biete Abbildung 10 zeigt Volumen H moglobin Zytogramm und die RBC Matrix Die Erythrozytenpopulation wird bei dieser Darstellung in neun Gruppen aufgeteilt In Gruppe 1 befinden sich hypochrom makrozyt re Erythrozyten in Gruppe 2 und 3 makrozyt re normochrome und hyperchrome Erythrozyten Gruppe 4 5 und 6 unterteilt die normozyt ren Erythrozyten in hypochrom normochrom und hyperchrom In den Gruppen 7 8 und 9 erfolgt die Unterscheidung der mikrozyt ren Eryt
184. tologiesysteme Das zun chst f r den humanmedizinischen Einsatz konzipierte lasergest tze Multiparametersystem ADVIA 120 ist im Rahmen dieser Arbeit in enger Kooperation mit der Herstellerfirma Bayer Diagnostics an die Anforderungen boviner Blutproben angepa t worden Neben dieser Softwareadaptation in vier Schritten erfolgte begleitend die Ger teevaluation Abschlie end wurden mit dem ADVIA 120 f r die Rinderrassen schwarzbunte Holstein und deutsch Fleckvieh altersabh ngige Referenzbereiche f r bekannte und neue Parameter erstellt Die Softwareadaptation und begleitende Evaluation erfolgte anhand von 245 Blutproben von gesunden und kranken Rindern im Alter von einem Tag bis zu zw lf Jahren Die Korrelation der Ergebnisse des ADVIA 120 mit den Messungen des Sysmex F 800 und Technicon H 1 ist f r die Parameter WBC RBC HGB HCT MCV und MCH exzellent r gt 0 96 Die Blutzelldifferenzierung korreliert mit den Ergebnissen der manuellen Ausz hlung unabh ngig von der F rbemethode f r die neutrophilen Granulozyten r gt 0 95 Lymphozyten r gt 0 90 und eosinophilen Granulozyten r 0 80 gut bis sehr gut Die bereinstimmung bei der Monozytendifferenzierung ist im Vergleich zur o Naphtylesterasefarbung r 0 51 befriedigend bez glich der basophilen Granulozyten besteht zur manuellen Differenzierung keine bereinstimmung Die Pr zision sowohl innerhalb einer Serie als auch ber verschiedene Serien hinweg f r die Parameter WBC RB
185. ttel o e J e e Ta Sass ts Gr a On a aaa aaa es fe 0 e o 2 y e coe Q oe o e e fon ode Q o O o o o o a e es e amp gt o oe O J eo e so Z e e 4 0 amp 8 o 2 0 ee u rer tar 3 0 Oe Qos ee o e 3 o C e oge o Bee u De SE re OO Sa Ian Due oa e 0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 Alter Monate Abb 60 Altersabh ngige Entwicklung der neutrophilen Granulozytenzahl f r die Rinderrassen schwarzbunte Holstein und Deutsch Fleckvieh Dargestellt sind Mittelwert sowie oberer und unterer Grenzwert bis zum Alter von 24 Monaten Regressionsgeraden Altersgruppe lt 24 Monate gleichung SB y Ig0 36 DFV y I90 36 Normbereichsgrenze 1g0 323 t Wert 1 97 Signifikanzen Rasseabhangigkeit p lt 0 05 Altersabh ngigkeit n s Freiheitsgrade SB n 105 DFV n 135 Eigene Untersuchungen 143 10 O DFV SB DFV SB 9 8 S 7 6 O o 5 a 4 g 5 3 Z 2 1 0 Alter Jahre Abb 61 Altersabhangige Entwicklung der neutrophilen Granulozytenzahl f r die Rinderrassen schwarzbunte Holstein und Deutsch Fleckvieh Dargestellt sind Mittelwert sowie oberer und unterer Grenzwert f r die Altersgruppe zwischen zwei und zehn Jahren Regressionsgeraden Altersgruppe gt 2 Jahre gleichung SB y 1g0 50 0 001 DFV y 1g0 40 0 001 Normbereichsgrenze 1g0 25 t Wert 1 97 Signifikanzen Rasseabhangigkeit p lt 0 05 Altersabh ngigkei
186. tumswahrscheinlichkeit n Anzahl der Beobachtungen s Standardabweichung Zusammenfassung 175 Die abschlie enden Tabellen 40 42 stellen die Referenzbereiche der Altersgruppen lt 6 Monate 6 24 Monate und gt 2 Jahre f r die Rinderrassen schwarzbunte Holstein und das deutsche Fleckvieh dar Aus den Tabellen kann f r Parameter die einem Alterseinflu unterliegen mit Hilfe der angegebenen Formel der gew nschte Referenzbereich f r jedes beliebige Alter errechnet werden Dazu mu in der Formel der entsprechenden Altersgruppe die Variable x durch das Alter in Monaten bzw bei Tieren die lter als 24 Monate sind durch das Alter in Jahren ersetzt werden Besteht bei einem Parameter kein Rasseunterschied gilt die angegebene Formel f r beide Rassen Zus tzlich zur Formel wird in der mittleren Spalte f r altersabh ngige Parameter zu ausgew hltem Alter ein Referenzbereich zur Veranschaulichung angegeben Bei Parametern f r die kein Alterseinflu vorliegt erfolgt ausschlie lich die Vorstellung des Referenzbereiches Tab 40 Zusammenfassung der Referenzbereiche f r Rinder lt 6 Monate Die Angabe des Referenzbereiches erfolgt f r beide Rassen gemeinsam Referenzbereich Formel der Regressionsgeraden beim Alter gleichung zur Berechnung Parameter von 4 Monaten altersabh ngiger Referenzbereiche RBC T I 8 00 11 80 HGB mmol l 6 00 8 40 i HCT I I 2 MCV fl 28 50 37 50 y 35 75
187. tware Rind Software Datum der Probenzahl version Freigabe V 1 0120C 11 03 98 115 V 1 1 01 MS 06 10 98 30 V 1 1 03 MS 06 11 98 60 V 1 1 04 MS 15 12 98 30 76 Eigene Untersuchungen 3 2 ERGEBNISSE 3 2 1 Evaluation des ADVIA 120 3 2 1 1 Methodenvergleich Die Richtigkeit der Me ergebnisse ist ein wichtiges Kriterium zur Beurteilung der Einsatzf higkeit eines H matologiesystems Dazu wurden Blutproben von 245 Rindern mittels etablierter Referenzmethoden untersucht und den Ergebnissen des ADVIA 120 gegen bergestellt F r die Parameter der Blutzellz hlung diente der H 1 der Sysmex F 800 und die H matokritzentrifuge als Referenzger t Zur berpr fung der Richtigkeit der Blutzelldifferenzierung wurden die Resultate des ADVIA 120 mit denen der manuellen Differenzierung 200er Differentialblutbild der F rbungen POX ANAE und PAN gegen bergestellt Die Richtigkeit der Ergebnisse der Retikulozytenz hlung erfolgte mittels der Supravitalf rbung mit Brillantkresylblau 1000 gez hlte Zellen In den folgenden zwei Kapiteln sind die Ergebnisse der einzelnen Softwareversionen f r die Parameter der Blutzellz hlung und Blutzelldifferenzierung unter Angabe des Korrelationskoeffizienten r und der Hauptkomponentengleichung y mx b logarithmierte Werte Ig y m lg x b sowie das Resultat des Matched t Test Wilcoxon Test f r verbundene Stichproben dargestellt 3 2 1 2 Richtigkeit der Blutzellz hlung I
188. uale und absolute Anteil der Monozyten und Lymphozyten sowie der Anteil neutrophiler eosinophiler und basophiler Granulozyten bestimmt Zus tzlich werden Gro e Ungef rbte Zellen LUC Large Unstained Cells in absoluter Anzahl und als prozentualer Anteil an der Gesamtleukozytenzahl ermittelt Zu der Gruppe der LUC geh ren Blasten und atypische Lymphozyten die aufgrund mangelnder Peroxidaseaktivit t nicht angef rbt werden Das dem Peroxidasekanal zugef hrte Probenvolumen wird bei 64 72 C mit drei unterschiedlichen Reagenzien bearbeitet Perox 1 Reagenz Natriumlaurylsulfat und Brij 35 Iysiert die enthaltenen Erythrozyten und fixiert mittels Formaldehyd die Leukozyten Die Leukozyten werden durch die Zugabe von 4 Chloro 1 Naphtol PEROX 2 Reagenz das in Verbindung mit Wasserstoffperoxid PEROX 3 Reagenz die endogene zellul re Peroxidase als einen dunklen Niederschlag sichtbar macht angef rbt Ein konstantes Volumen der Zellsuspension wird danach der Flu zelle zugef hrt Bei der Passage durch die Flu zelle wird der Probenstrom mit Halogenlicht bestrahlt dabei werden die Absorption Peroxidasef rbung und die Lichtstreuung Zellvolumen ermittelt Diese Me werte werden in ein Koordinatensystem eingetragen Die x Achse entspricht der Absorption bzw der Farbintensit t Auf der y Achse werden die Ergebnisse der Streulichtmessung Volumen aufgetragen Beide Achsen sind in jeweils 100 Z hl Kan le unterteilt Zellen von
189. utsche Gesellschaft f r klinische Chemie Parameter Spannweite Bemerkungen Absolute 0 001 99 0 In der humanmedizinischen Leukozytenzahl G l Transfusionsmedizin wird bei einer Leukozytenkonzentration von 10 pro Transfusion bei einer blichen Transfusionsmenge von 300 ml mit einer Alloimmunisierung gerechnet Neutrophile 0 05 99 0 G I Granulozyten Eosinophile 0 05 20 0 G I Granulozyten Basophile 0 05 1 0 G l Granulozyten Monozyten 0 05 20 0 G I Lymphozyten 0 05 99 0 G I Die berpr fung der Nachweisgrenzen f r die vom Hersteller angegebenen Parameter erfolgt durch eine Konzentration bzw Verd nnung der Blutbestandteile Der Einflu der brigen Zellarten und Zellkomponenten auf die Ergebnisse mu im normalen niedrigen und hohen Bereich untersucht werden Als letzter Schritt in Phase II wird vorgegeben die Erkennung von pathologischen Zellen und die Anf lligkeit f r Interferenzen sowie die Korrektur dieser St rungen zu untersuchen Interferenzen k nnen durch methodenbedingte St rungen auftreten So kann ein z B angeborener Peroxydasemangel beim Menschen zu Fehlern f hren wenn mit Schrifttum 19 Systemen gearbeitet wird die sich einer Anfarbung der zellularen Peroxidase bedienen Weitere Beispiele hierf r sind die Zerst rung fragiler Zellen durch beim oder vor dem Me vorgang auftretende Scherkr fte Verf lschung der Ergebnisse durch Koinzidenzve
190. wareversion 1 800 2 al 400 Y 1 18x 0 54 r 0 671 p lt 0 001 L 0 400 800 1200 PLT ADVIA 120 Der Tabelle 18 k nnen die Ergebnisse f r den Vergleich ADVIA 120 und der Mikroh matokritmethode f r den H matokritwert entnommen werden Tab 18 Korrelation des ADVIA 120 mit den Ergebnissen der Mikroh matokrit methode Korrelationskoeffizient r Hauptkomponentengleichung y mx b Signifikanz f r alle Parameter p lt 0 001 ADVIA 120 Zentrifuge Softwareversionen 1 4 Korrelationskoeffizient r Parameter Hauptkomponentengleichung y mx b Einheit f Version1 Version2 Version3 Version4 n 111 n 30 n 63 n 30 HCT I I r 0 913 0 918 0 955 0 975 y 0 95x 0 03 0 94x 0 05 1 09x 0 0 1 05x 0 02 n s p lt 0 05 p lt 0 01 logarithmierte Werte 82 Eigene Untersuchungen Fur die untersuchten Parameter WBC RBC HGB HCT MCV und MCH ist die Korrelation sowohl mit den Ergebnissen des H 1 als auch mit den Ergebnissen des F 800 sowie der Zentrifuge Uber alle Versionen als sehr gut zu bewerten Korrelationskoeffizient r lt 0 9 Signifikanzniveau p lt 0 001 Die Korrelation der Ergebnisse des ADVIA 120 mit denen des H 1 ist f r die Thrombozytenzahlung PLT mit r gt 0 9 ebenfalls als sehr gut zu bezeichnen Dagegen liefert der Methodenvergleich mit dem F 800 in Version 1 und 3 deutlich schlechtere Ergebnisse r lt 0 78 Die Richtigkeit der MPV Messung ist im Verg
191. wird f r jede Softwareversion vgl Kapitel 3 1 10 eine eigene Korrelation angegeben 83 Eigene Untersuchungen Tab 19 Korrelation der Werte des ADVIA 120 mit denen der Panoptischen Farbung PAN f r die Parameter der Blutzelldifferenzierung vergleichend f r alle Korrelationskoeffizient r gleichung y mx b logarithmierte Werte Ig y Ig mx b Signifikanz Softwareversionen fur alle Parameter p lt 0 001 ADVIA 120 Panoptische Farbung Softwareversionen 1 4 Korrelationskoeffizient r arama Hauptkomponentengleichung y mx b Einheit Version1 Version2 Version3 Version4 n 110 n 30 n 62 n 29 Neutrophile G r 0 838 0 925 0 573 0 945 y 1 25x 3 86 1 19x 0 66 1 44x 9 40 1 03x 3 51 Lymphozyten r 0 833 0 932 0 550 0 895 y 1 33x 0 60 1 26x 0 48 1 59x 1 06 1 09x 0 16 Monozyten r 0 289 0 151 0 276 0 395 y 4 31x 2 82 6 62x 3 9 2 13x 0 74 1 57x 0 39 Eosinophile G r 0 845 0 906 0 716 0 798 y 1 24x 0 12 1 22x 0 15 1 28x 0 22 1 53x 0 39 Basophile G r 0 062 0 221 0 113 0 152 y 0 08x 0 55 4 17x 0 16 0 09x 0 57 9 20x 0 16 n s p lt 0 05 logarithmierte Werte Hauptkomponenten 84 Eigene Untersuchungen Tab 20 Korrelation der Werte des ADVIA 120 mit denen der zytochemischen Farbung POX fur die Parameter der Blutzelldifferenzierung vergleichend f r alle Softwareversionen r Korrelationskoeffizient
192. yten ber den Untersuchungszeitraum graphisch aufgetragen Eine Lagerung bei 4 C kann die Abnahme der Monozytenzahl geringgradig verz gern 110 Eigene Untersuchungen 3 2 5 Antikoagulanzienvergleich Der Einflu unterschiedlicher Antikoagulanzien wurde anhand von zehn Rinderblutproben mittels Dreifachmesseung festgestellt Verglichen wurden die Gerinnungshemmer K3 EDTA Li Heparin und Na Citrat Die Ergebnisse unter Verwendung von Na Citrat wurden aufgrund der Verd nnung von 1 10 bei der Zellz hlung mit dem Faktor 1 1 multipliziert Die Mittelwerte aus den Dreifachmessung der einzelnen Antikoagulanzien wurden zur Ermittlung einer globalen Signifikanz einer einfaktoriellen Varianzanalyse mit Me wiederholung im Einflu faktor Antikoagulanz zugef hrt Parameter mit signifikanten p gt 0 05 Unterschieden der Mittelwerte wurden daraufhin paarweise mittels t Test f r verbundene Stichproben ausgewertet Bei der einfaktoriellen Varianzanalyse konnten f r die Parameter HCT HGB MCH RDW MPV sowie hinsichtlich des prozentualen Anteils der neutrophilen Granulozyten Lymphozyten Monozyten und Retikulozyten keine signifikanten Unterschiede zwischen den Antikoagulanzien festgestellt werden Die Tabellen 28 und 29 zeigen die Resultate der paarweisen Berechnung f r die Parameter mit signifikantem Unterschied bei der globalen Bestimmung der Signifikanzen Eigene Untersuchungen 111 Tab 27 Darstellung des mittleren und relativen Unterschiedes
193. zum Alter von 24 Monaten Regressionsgeraden Altersgruppe lt 6 Monate Altersgruppe 6 24 Monate gleichung SB y Ig 0 216 y Ig 0 077 0 013x DFV y lg 0 216 y Ig 0 077 0 013x Normbereichsgrenze 1g0 332 1g0 332 t Wert 2 0262 1 976 Signifikanzen Rasseabhangigkeit p lt 0 05 n s Altersabh ngigkeit n s p lt 0 001 Freiheitsgrade SB n 19 n 89 DFV n 21 n 63 Eigene Untersuchungen 147 1 4 1 2 1 0 0 8 0 6 Monozyten G I 0 4 O DFV SB SB DFV Alter Jahre Abb 65 Altersabh ngige Entwicklung der Monozytenzahl f r die Rinderrassen schwarzbunte Holstein und Deutsch Fleckvieh Dargestellt sind Mittelwert sowie oberer und unterer Grenzwert f r die Altersgruppe zwischen zwei und zehn Jahren Regressionsgeraden Altersgruppe gt 2 Jahre gleichung SB y lg 0 32 DFV y lg 0 43 Normbereichsgrenze 1g0 288 t Wert 1 97 Signifikanzen Rasseabhangigkeit p lt 0 001 Altersabh ngigkeit n s Freiheitsgrade SB n 105 DFV n 135 Abbildung 66 und 67 zeigen die Entwicklung der eosinophilen Granulozyten bis zum Alter von 10 Jahren f r die Rassen SB und DFV Eine Unterteilung in der Altersgruppe lt 24 Monate war hier nicht erforderlich 148 Eigene Untersuchungen 2 0 i on oO O1 Eosinophile Granulozyten G I gt 0 0 O DV SB SB DFV Alter Monate Abb 66 Altersabhangige Entwicklung der abs

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