RTS-1C - Manuale de uso
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1. CHE Medical Biological Research amp Technologies RTS 1 RIS 1C Registratore di crescita cellulare Real time Manuale d uso per la versione Certificato V 1AW Contenuti DOGO I 10 11 12 Precauzioni di sicurezza Informazioni generali Operazioni preliminari Calibrazione Funzionamento Metodi approvati per la coltura di microrganismi Raccomandazioni per creare impostazioni personali per la coltura di microrganismi Punti da prendere in considerazione 7 1 Microrganismi specifici in base alla distribuzione della temperatura psicrofili mesofili termofili 7 2 Crescita cellulare in base all intensit della rotazione 7 3 Aerazionee tipi di provette raccomandate 7 4 Crescita cellulare in base alla frequenza di misurazione aerobi anaerobi 7 4 Dimensione delle particelle e coefficienti di calibrazione 600 850 nm 7 5 Intervallo lineare di misurazione della DO in funzione del volume medio Specifiche Manutenzione Calibrazione del dispositivo per manutenzione Garanzia e reclami Dichiarazione di conformit 1 Precauzioni di sicurezza Il seguente simbolo significa A Attenzione Assicurarsi di aver letto attentamente e compreso il presente manuale prima di utilizzare l attrezzatura Prestare particolare attenzione alle sezioni contrassegnate con questo simbolo SICUREZZA GENERALE e Utilizzare solo secondo le indicazioni specificate nel manuale d uso allegato e Questa unit non de2. Influenza del volume del mezzo LB Broth sull intervallo lineare di misurazione di DO ADO A 850nm At in base al tempo di fermentazione ore Come si pu vedere nella Fig 7 il dispositivo registra la densit ottica del campione con intervallo lineare fino a 15 DO A 600 nm per un volume di 10 ml fino a 8 DO A 600 nm per un volume di 20 ml e fino a 6 DO A 600 nm per un volume 30 ml 8 Specifiche L unit progettata per essere utilizzata a una temperatura compresa tra 4 C e 40 C in assenza di condensazione e a una massima umidit relativa dell 80 per le temperature inferiori a 31 C con riduzione lineare fino al 50 di umidit relativa a 40 C misurazione min Risoluzione delle impostazioni di i tempo min Punto pi basso del range di 15 C al di sotto della controllo C temperatura ambiente temperatura ambiente Punto pi alto del range di controllo T C 70 Stabilit C Volume del campione ml Range di velocit rpm 250 2000 Risoluzione delle impostazioni di velocit rpm Display o O_O Risoluzione dell impostazione C Specifiche generali RTS 1 RTS 1C LCD Dimensioni generali larghezza x 130x212x200 profondit x altezza mm Corrente di ingresso Consumo di 12V DC energia o ooy OO 3 3A 40W 5A 60W Alimentatore esterno Ingresso CA 100 240V 50 60Hz Uscita CC 12V Biosan si impegna a seguire un programma continuo di perfezionamento e si riserva il diritto di modi
3. Se questo valore pari a 0 0 05 DO il dispositivo conforme alle impostazioni di precalibrazione in fabbrica ed pronto all uso 5 Funzionamento Raccomandazioni di utilizzo 5 1 5 2 5 3 5 4 59 5 6 5 7 5 8 9 9 5 10 Rimuovere la provetta Falcon dal suo alloggiamento prima di collegare o scollegare l alimentatore esterno durante l utilizzo Prima dell utilizzo si raccomanda di lasciare il dispositivo acceso per circa 15 minuti tempo necessario per la stabilizzazione nella modalit lavoro Collegare l alimentatore esterno alla corrente elettrica fig 1 1 Accendere l unit premendo l interruttore di alimentazione situato sul pannello posteriore Fig 1 3 Inserire la provetta nell alloggiamento fig 1 4 Premere il tasto Select seleziona fig 2 1 per selezionare il parametro che si desidera modificare il parametro attivo lampeggia Utilizzare i tasti A and W fig 2 2 per impostare i valori necessari se si tiene premuto il tasto per pi di 2 secondi il parametro cambia pi velocemente possibile impostare parametri quali tempo tra misurazioni della densit ottica fig 2 3 velocit di rotazione fig 2 4 temperatura fig 2 5 tempo tra rotazioni invertite fig 2 8 volume operativo fig 2 11 valori effettivi di temperatura e velocit sono visualizzati sul display fig 2 6 e fig 2 7 Nota Dopo l accensione l unit inizia a scaldarsi e
4. 90 10 0 110 120 130 140 150 Hours 7 3 Aerazione e tipi di provette raccomandate Per i microrganismi aerobici raccomandiamo l utilizzo delle provette fornite in dotazione TPP TubeSpin Bioreactor 50 ml ma per gli anaerobi aerotolleranti come Lactobacillus acidophilus necessario utilizzare provette con tappi ermetici non a membrana Per ottenere risultati ottimali di crescita negli anaerobi aerotolleranti necessario sigillare con nastro adesivo il cappuccio a vite della provetta TPP TubeSpin Bioreactor 50ml possibile utilizzare anche provette per centrifuga di tipo Falcon da 50 ml considerando che sono trasparenti come le provette TPP TubeSpin Bioreactor 16 7 4 19 Dimensione delle particelle e coefficienti di calibrazione 600 nm 850 nm La calibrazione dello strumento pensata per specifiche dimensioni dei microrganismi pari a 0 4 0 8 x 1 3 um e per volumi cellulari pari a circa 0 6 0 7 um Nel caso vengano superate le dimensioni consentite il sistema di misurazione non funzioner in modo corretto Il coefficiente del tasso di conversione di densit ottica DO A 850 nm in DO A 600 nm uguale a 2 2 Esempio di calcolo per convertire 3 5 DO A 850 nm in DO A 600 nm basta moltiplicare il valore per 2 2 e il risultato 7 7 DO A 600 nm Intervallo lineare di misurazione di DO in funzione del volume del mezzo Fig 7 Volume influence on RTS 1 OD measurement linearity Fig 7
5. mantiene sempre la temperatura indipendentemente dallo svolgimento di altre operazioni Premere il tasto Run Stop avvio arresto fig 2 9 per l avvio e l arresto dell operazione Premere il tasto Run Stop avvio arresto fig 2 9 per l arresto dell operazione Attenzione L arresto dell operazione non interromper il processo di riscaldamento Per interrompere il processo di riscaldamento necessario diminuire manualmente la temperatura impostata finch non compare l indicazione off fig 2 5 Una volta terminata l operazione spegnere l unit utilizzando l interruttore Power fig 1 3 Scollegare l alimentatore esterno dalla corrente elettrica fig 1 1 6 Metodi approvati per la coltura di microrganismi Sappiamo bene che il mondo dei microrganismi infinito e che ogni ceppo necessita di una specifica ottimizzazione delle proprie condizioni di crescita Di sicuro saranno sviluppati nuovi metodi di coltura di microrganismi per mezzo della tecnologia RTS 1 e noi terremo informati i nostri clienti al riguardo Ecco i 3 metodi approvati sviluppati dai laboratori Biosan 6 1 6 2 6 3 6 4 6 5 12 Anaerobio facoltativo Escherichia Coli 2000 rpm velocit di rotazione del recipiente 1 s frequenza di rotazione invertita RSF 37 C temperatura dell alloggiamento 15 ml volume del campione nel recipiente di analisi 10 min ma non meno frequenza di misurazione MF Aerob
6. e il produttore per informazioni sul possibile utilizzo dell unit in atmosfere specifiche Non azionare l unit se questa danneggiata o se non stata installata in modo corretto Non utilizzare al di fuori delle stanze di laboratorio Non controllare la temperatura toccando l unit Utilizzare un termometro Pulire e decontaminare il rotore dopo ogni utilizzo SICUREZZA BIOLOGICA responsabilit dell utente effettuare l adeguata decontaminazione nel caso in cui una sostanza pericolosa venga versata sull unit o penetri al suo interno 2 Informazioni generali Il registratore di crescita cellulare Real time un dispositivo che pu essere utilizzato come incubatore con misurazione della densit ottica in tempo reale Il controllo della temperatura consente di utilizzare RTS 1 RTS 1C come incubatore ad esempio per la coltura di cellule Grazie a un innovativa tecnologia di miscelazione rotazione invertita del campione intorno al proprio asse possibile misurare la densit ottica in tempo reale senza interferenza della sonda Il software stato sviluppato per visualizzare analizzare e registrare i dati in tempo reale Il modello RTS 1C dispone di un unit di raffreddamento che consente il raffreddamento del campione fino a 4 C e l elaborazione del profilo della temperatura attraverso il software Il registratore di crescita cellulare Real time utilizzabile nei seguenti settori e Biologia molec
7. ficare la struttura e le specifiche dell apparecchiatura senza ulteriore avviso Specifiche di temperatura RTS 1 RTS 1C Range di impostazione C 25 70 24 70 5 C sopra la Accuratezza 10 18 9 1 92 9 3 9 4 10 10 1 10 2 10 3 10 4 10 5 10 6 10 7 10 8 10 9 Manutenzione Se l unit necessita di manutenzione scollegarla dalla corrente e contattare Biosan o il rappresentante Biosan locale Tutte le operazioni di manutenzione e riparazione devono essere effettuate solo da personale qualificato e specializzato Per la pulizia e la decontaminazione dell unit possibile utilizzare una soluzione standard di etanolo 75 o altri detergenti raccomandati per la pulizia delle attrezzature da laboratorio Pulire il rotore del dispositivo da goccioline di liquido e da possibili sostanze contaminanti una volta concluso il processo di fermentazione Calibrazione del dispositivo per manutenzione Nota Utilizzare questa procedura di calibrazione solo se il sistema di misurazione non funziona in modo corretto Accendere il dispositivo Inserire nel dispositivo una provetta per centrifuga da 50 ml riempita con 10ml di H20 Impostare il parametro del volume su 10 ml Utilizzando il pannello di controllo o il pannello di controllo software impostare RPM a 2000 Premere il pulsante Run Stop avvio arresto Tenere premuto il pulsante Select seleziona finch sul display
8. io termofilo specie Thermophilus 2000 rpm RSF 1 s 70 C la temperatura effettiva della provetta inferiore di 5 C 15ml MF 10 min Tasso di evaporazione a 70 C 5 ml 24 h regolare di conseguenza il parametro del volume per il corretto funzionamento del sistema di misurazione Anaerobio aerotollerante L acidophilus 0 rpm RSF 0 s 37 C 30 ml MF 10 min Raccomandiamo l utilizzo del dispositivo di programmazione per Definizione profilo Ripetizione ciclica No mixing OD meas non miscelare misurazione DO per la distribuzione omogenea della sospensione cellulare nella provetta del bioreattore prima della misurazione Sono attualmente in corso degli studi per comprendere i vantaggi della tecnologia di rotazione invertita reverse spin RS per la crescita di diversi tipi di microrganismi come i lieviti e i batteri dell acido lattico L utente finale non pu contattare il produttore per consigliare o suggerire che venga testato un determinato ceppo o microrganismo per la coltura Contattare il dipartimento R amp S di Biosan ai seguenti indirizzi email science biosan lv igor biosan lIv Igor Bankovsky biotecnologo consulente in questioni applicative 7 Raccomandazioni per creare impostazioni personali per la coltura di microrganismi Punti da prendere in considerazione 7 4 Microrganismi specifici in base alla distribuzione della temperatura psicrofili mesofili termofili Le temperature otti
9. mali per la crescita dei microrganismi si dividono in tre gruppi principali see Fig 3 Fig 3 Limiti di temperatura e intervalli ottimali per la crescita dei procarioti e loro classificazione Psicrofili 1 2 facoltativi Il Mesofili Ill termofili 3 termotollerranti 4 facoltativi 5 obbligati 6 estremofili punti in cui la linea pi spessa indicano la temperatura ottimale per la crescita 7 1 1 Per gli psicrofili il dispositivo deve essere installato in una cella frigorifera o in una camera refrigerata Nonostante il dispositivo di raffreddamento attivo il campione si riscalda attraverso la parte aperta della provetta Falcon Inoltre va anche considerato che la temperatura effettiva del reattore sempre diversa dalla temperatura effettiva del campione a causa della sua rotazione a basse temperature inferiori ai 10 C e sar quindi superiore 7 1 2 Peri microrganismi mesofili il dispositivo pu essere posto a temperatura ambiente 7 1 3 Per i microrganismi termofili fare riferimento alla fig 4 in cui vengono confrontate la temperatura del termoblocco e la temperatura effettiva della provetta al variare dell intensit di rotazione Real T C inside the tube Fig 4 Confronto della temperatura del termoblocco e della temperatura effettiva della provetta in base all intensit di rotazione dati di end point sono stati raccolti 1 30h dopo l inizio del processo di riscaldamento a par
10. non comparir il comando lampeggiante CC Premere il pulsante A e sul display comparir il numero lampeggiante 0 00 Attendere 15 secondi quindi premere il pulsante V Il dispositivo ora calibrato e far una misurazione di prova 11 Garanzia e reclami Il Produttore garantisce che l unit conforme ai requisiti indicati nelle Specifiche a condizione che il Cliente segua le istruzioni di utilizzo immagazzinamento e trasporto La vita utile garantita dell unit di 24 mesi a partire dalla data di consegna al Cliente Contattare il proprio distributore locale per verificare la disponibilit di un estensione della garanzia Se il Cliente rileva difetti di fabbricazione dovr compilare e autenticare un reclamo per prodotto non soddisfacente e inviarlo al distributore locale Per avere il modulo di reclamo visita www biosan lv alla sezione Assistenza tecnica Nel caso fosse necessario servirsi del servizio di assistenza di garanzia o post garanzia saranno richieste le seguenti informazioni Completa la tabella qui sotto e conservala Registratore di crescita cellulare Real time RTS 1 RTS 1C con raffreddamento Numerodiserie S O Data divendita 20 12 Dichiarazione di conformit 21 Biosan SIA Ratsupites 7 build 2 Riga LV 1067 Lettonia Telefono 371 67860693 371 67426137 Fax 371 67428101 http www biosan lv Versione 1 01 Agosto 2014
11. olare e Biologia cellulare e Biotecnologie e Biochimica e Chimica e Microbiologia Caratteristiche e Miscelazione innovativa grazie alla rotazione invertita delle provette contenenti il campione intorno al proprio asse e Grazie alla innovativa tecnologia di miscelazione possibile misurare la densit ottica e la diffusione della luce del campione in tempo reale senza interferenza della sonda mantenendo la sterilit del processo e La possibilit di modificare parametri quali temperatura giri al minuto e tempo di rotazione in una direzione oltre alla possibilit di sviluppare algoritmi sperimentali tra cui elaborazione del profilo della temperatura e del profilo dell intensit di miscelazione controllo della densit ottica ecc consente di eseguire una complessa sequenza di algoritmi per il processo di fermentazione e di ottenere risultati uniformi e ripetibili Funzionalit del software Monitoraggio e controllo remoti del processo di fermentazione Registrazione in tempo reale della cinetica di crescita cellulare o dei processi di aggregazione disaggregazione delle sospensioni di particelle Grafici per l utente compresi grafici 3D Pausa Salvataggio e caricamento dei risultati Fogli elettronici Excel e PDF per resoconti Connessione simultanea di un massimo di 10 unit che consente da una parte di esaminare l influenza di diversi fattori fisici e chimici sul processo di fermentazione e dall altra di st
12. ovette Falcon necessario usare provette per TPP TubeSpin Bioreactor 50 per utilizzare il kit con fori Volume di lavoro 10 ml Forma conica 5 fori A B C D E di dimensioni diverse sul filtro in PTFE permeabile ai gas e sterile del cappuccio a vite fori possono essere chiusi per consentire la regolazione dello scambio secondo le proprie esigenze Lo scambio di gas sterile garantito dal filtro a membrana da 0 22 um Anche in presenza di un elevata densit cellulare la quantit di ossigeno fornita attraverso i fori sufficiente La provetta destinata a un rotore di centrifuga standard da 50 ml 4 Calibrazione Il dispositivo precalibrato in fabbrica per l utilizzo con provette Falcon da 50 ml a un intervallo di temperatura compreso tra 15 C e 70 C 4 C e 70 C per RTS 1C e salva i dati di calibrazione una volta spento Per verificare la conformit della calibrazione seguire le seguenti procedure 10 Prendere una provetta Falcon da 50 ml Aggiungere 10 0 1 ml di acqua distillata Chiudere bene il cappuccio della Falcon Inserire la Falcon nell alloggiamento fig 1 4 Impostare sul display i parametri di volume dell acqua distillata fig 2 11 Premere il tasto Run Stop avvio arresto fig 2 9 il dispositivo avvier il ciclo di misurazione DO accelerando la velocit fino a 2000 rpm Il ciclo di misurazione completo dopo 15 20 secondi e sul display compare il valore DO
13. tire dalla temperatura ambiente 14 1 2 A 850 1 2 1 Crescita cellulare in base all intensit della rotazione noto che l aerazione influisce sulla crescita e sul tasso di crescita dei microrganismi aerobici La frequenza della rotazione invertita influisce sul tasso di assorbimento dell ossigeno nel bioreattore risultati ottenuti indicano che il tasso massimo di divisione cellulare avviene a una frequenza di 1 rotazione invertita al secondo 1 s a una velocit di 2000 rpm L aumento della pausa tra le rotazioni invertite riduce il tasso di crescita cellulare fino al 50 del valore massimo quando la RSF pari a 30 s Fig 5 e Fig 6 OD over tme E 305 M 45 oettet8f0ES 185538535 n 1 AE E 163 E 25 E s 8a50LR0b y P ansorB0LPR O 3 U U 5 0 5U U 5 0 90 100 170 120 130 140 150 Hours srowth rate Legenda dell esperimento Fig 5 stato utilizzato un registratore di crescita cellulare Real time RTS 1 con LED da 850 nm volume del mezzo LB nella provetta Falcon da 50 ml pari a circa 15 ml RSF 1 2 4 8 16 30 s 1 frequenza di misurazione MF di circa 10 min velocit di rotazione del reattore 2000 rpm temperatura 37 C diametro dei pori del filtro di aerazione 0 25 um 15 Growth rate 0 014 0 013 0012 0 011 0 01 0 009 0 008 3 0 007 0 006 0 005 0 004 0 003 0 002 da 00 0 001 ettee 30s E 4s Bis E 16s E 2s E ss 1 0 20 3 0 40 50 60 7 0 80
14. udiare l interdipendenza di quei fattori per mezzo di matrici sperimentali 3 1 3 2 Operazioni preliminari Disimballaggio Rimuovere con cautela l imballaggio e conservarlo per un eventuale spedizione futura e per l immagazzinamento dell unit Esaminare attentamente l unit per individuare eventuali danni riportati durante il trasporto La garanzia non copre i danni riportati durante il trasporto Set completo Il set contiene RTS 1 registratore di crescita cellulare Real time o RTS 1C registratore di crescita cellulare Real time con raffreddamento 1 pezzo 0 0 2 01 0 PRO RO RA I META ORE 1 pezzo Recipienti per bioreattore TPP TubeSpin Bioreactor 50 ml 20 pezzi CIO ddl 1 pezzo Disco USB con file di installazione del software e manuale di installazione 1 pezzo Alimentatore esterno i 1 pezzo Manuale d uso certificato 1 copia 4 RTS 1 Real Time Cell Growth Logger wm 0 biosa 2 Fig 1 Pannello posteriore Fig 2 Pannello di controllo 3 3 Installazione Posizionare l unit su un piano di lavoro orizzontale e liscio Collegare l alimentatore esterno alla presa fig 1 1 situata sul lato posteriore dell unit Accendere il computer Installare il software seguendo la procedura di installazione descritta nel manuale di installazione del software Caratteristiche dei recipienti per bioreattore pr
15. ve essere utilizzata se danneggiata o se caduta e Dopo il trasporto o l immagazzinamento tenere l unit a temperatura ambiente per 2 ore prima di collegarla alla corrente elettrica e Utilizzare esclusivamente le procedure di pulizia e decontaminazione raccomandate dal produttore e Non modificare la struttura dell unit SICUREZZA ELETTRICA e Non collegare l unit alla presa di alimentazione n utilizzare un cavo di prolunga senza prima aver effettuato la messa a terra e Connettere solo a un alimentazione con voltaggio corrispondente a quello indicato sull etichetta con numero di serie e Utilizzare solo l alimentatore esterno fornito insieme a questo prodotto e Assicurarsi che l alimentatore esterno e l interruttore siano facilmente raggiungibili durante l utilizzo e Scollegare l unit dalla corrente prima di spostarla e Spegnere l unit spegnendo l interruttore di alimentazione e scollegando l alimentatore esterno dalla presa di corrente e Se una sostanza liquida penetra all interno dell unit scollegarla dall alimentatore esterno e rivolgersi a un tecnico di manutenzione per il controllo e la riparazione e Non mettere in funzione l unit in ambienti in cui pu formarsi della condensa Le condizioni operative dell unit sono indicate nella sezione Specifiche DURANTE IL FUNZIONAMENTO Non azionare l unit in ambienti in cui sono presenti miscele chimiche aggressive o esplosive Contattar
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