Cellbind Screen K7000
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1. es a a T Interpreta o Nas reac es positivas os eritr citos ser o capturados no topo da matriz de gel Nas reac es negativas apenas se ver um discreto bot o de eritr citos no fundo da microcoluna Os padr es de reac o resultantes constam da figura abaixo apresentada 4 3 2 1 NEG YYUUUU A quantidade de eritr citos sensibilizados capturados pelo topo da matriz de gel depender de par metros como a densidade antig nica dos eritr citos e o t tulo e a afinidade do anticorpo Esta quantidade igualmente determinada pela dura o da segunda fase de centrifuga o e da for a centrifugadora aplicada durante a terceira fase Assim se uma reac o for mais fraca do que 4 surgir o c lulas tamb m no fundo da microcoluna O mesmo padr o vis vel em reac es de campo misto Detec o ou identifica o de anticorpos As reac es positivas indicam a presen a de anticorpos eritrocit rios no plasma ou no soro As reac es negativas indicam a aus ncia de anticorpos eritrocit rios Um autocontrolo positivo indica a presen a de auto anticorpos Tipagem de antig nios de grupos sangu neos As reac es positivas com reagentes de tipagem de sangue indicam a presen a dos antig nios correspondentes nos eritr citos As reac es negativas com reagentes de tipagem de sangue indicam que a presen a dos antig nios correspondentes nos eritr citos n o pode ser detectada Teste dire2. na 16 x 3 ml REEIK7231 Suspens es de eritr citos reagentes a 0 5 tratados com papa na para a identifica o de anticorpos Materiais Centr fuga Cellbind REEJK7302 Rotor Cellbind REFJK 7303 Incubadora Cellbind REF K7304 Dispensador Cellbind REFIK7300 Esta o de trabalho Cellbind IREFIK7301 Suspens es de eritr citos Para a detec o ou identifica o de anticorpos aconselha se a utilizar as suspens es eritrocit rias de reagente Cellbind a 0 5 No caso de ser utilizado outro painel celular deve preparar se uma suspens o a 0 5 em Cellbind LISS de acordo com o protocolo de prepara o abaixo Nota Este protocolo apenas pode ser aplicado a c lulas que n o tenham sido tratadas com enzimas Se for necess rio testar com c lulas que n o tenham sido tratadas com enzimas deve utilizar se Cellbind P3 P REE K7211 ou Cellbind ID16 P REE K7231 Para o autocontrolo e para o teste directo de antiglobulina modificado deve se preparar uma suspens o a 0 5 de eritr citos do paciente em Cellbind LISS O mesmo se aplica para os eritr citos do dador ou do paciente na tipagem de sangue e na tipagem cruzada Prepara o de suspens es eritrocit rias a 0 5 11 ul de concentrado de eritr citos 2 ml de Cellbind LISS ou 200 ul de eritr citos reagentes a 3 1 ml de Cellbind LISS Procedimento de utiliza o da centr fuga Cellbind Para utilizar a centr fuga Hettich para cart es Cellbind devem se efe
3. Cellbind antes da utiliza o Os cart es do Cellbind Screen n o devem ser utilizados para al m do prazo de validade impresso no r tulo dos cart es Ap s a leitura dos resultados os cart es podem ser tapados e armazenados numa posi o vertical a uma temperatura de 2 8 C durante uma semana Cloranfenicol a lt 0 1 usado como conservante N o de todo adequado assumir que os reagentes se encontram isentos de agentes infecciosos A manipula o e a destrui o de cada recipiente devem ser efectuadas com cuidado A elimina o de res duos deve ser tratada de acordo com o regulamento do seu laborat rio depois de completado o teste Colheita e prepara o das amostras Esp cimen As amostras de sangue devem ser colhidas com assepsia com ou sem adi o de anticoagulantes Aconselha se vivamente a centrifuga o dos tubos de colheita de sangue durante 5 minutos a 3000 rcf antes da colheita das amostras de soro ou plasma A colheita das amostras de soro ou de plasma deve ser efectuada usando uma pipeta e n o vertendo o plasma ou o soro As amostras de plasma ou de soro devem permanecer isentas de leuc citos de fragmentos de gel e ou de res duos de fibrina a fim de evitar o bloqueio da matriz de gel Para a detec o ou identifica o de anticorpos eritrocit rios aconselha se o uso de plasma fresco ou de soro nas 48 horas seguintes ap s a colheita As amostras de soro ou de plasma que n o sejam imediatamente testadas po
4. Sanquin Reagents Phone 31 20 512 3599 Plesmanlaan 125 Fax 31 20 512 3570 1066 CX Amsterdam reagentsQsanquin nl Sanquin The Netherlands Www sanquinreagents com Exclusivamente para uso profissional No 060 010112 Cellbind Screen K7000 C Teste de microcoluna para a detec o ou identifica o de eritr citos bem como para a tipagem de sangue Informa o geral O ensaio com Cellbind Screen um sistema de teste de microcoluna no qual os eritr citos sensibilizados duma suspens o s o capturados por uma matriz de gel que cont m anti lgG anti lgM e anti C3d num meio incentivante de alta densidade Cada cart o filtro consiste em seis microcolunas contendo o gel num meio de alta densidade O Cellbind Screen destina se a ser utilizado na detec o ou identifica o de anticorpos eritrocit rios bem como para a tipagem de sangue tipagem cruzada e para o teste directo de antiglobulina modificado TDA para a detec o da cobertura in vivo de eritr citos com anticorpos e componentes de complemento O Cellbind Screen adequado para ser utilizado em sistemas manuais autom ticos e semiautom ticos O ensaio com Cellbind Screen preenche os requisitos dos padr es e directrizes aplic veis As caracter sticas de desempenho encontram se mencionadas nos documentos de autoriza o que a pedido s o fornecidos com o produto O teste baseia se na imunofixa o de eritr citos sensibilizados numa microcoluna que cont m uma m
5. atriz de gel Adiciona se a suspens o de c lulas ao compartimento de incuba o da microcoluna juntamente com o plasma o soro ou o reagente da tipagem sangu nea a ser testada Durante a fase de incuba o os eritr citos antig nio positivos ligar se o aos respectivos anticorpos anti eritrocit rios presentes no plasma no soro ou no reagente A seguir os cart es s o submetidos a tr s fases de centrifuga o Na primeira fase o meio de elevada densidade ir provocar a separa o dos eritr citos do plasma do soro ou do reagente Na segunda fase os eritr citos sensibilizados ser o aglutinados e capturados no topo da matriz de gel na microcoluna enquanto na terceira fase os eritr citos n o sensibilizados e muito fracamente sensibilizados ir o dirigir se para o fundo da microcoluna Recomenda se vivamente a inclus o de controlos positivos e negativos por cada s rie de determina es de grupo sangu neo Precau es Exclusivamente para o diagn stico in vitro Os cart es do Cellbind Screen devem ser armazenados na vertical a uma temperatura de 2 8 C Se tal n o acontecer devem ser mantidos numa posi o vertical durante cerca de 15 minutos antes de serem utilizados de forma a permitir que a matriz de gel assente novamente Eventuais bolhas de ar introduzidas durante o transporte no meio de alta densidade ou na matriz de gel podem ser removidas na maioria dos casos girando os cart es selados do Cellbind Screen na centr fuga
6. cto de antiglobulina modificado TDA As reac es positivas s o indicativas da exist ncia de cobertura in vivo de eritr citos com anticorpos e ou componentes de complemento Cruzamento As reac es positivas s o indicativas da incompatibilidade do sangue do dador com o do receptor As reac es negativas s o indicativas da compatibilidade do sangue do dador com o do receptor Limita es Resultados positivos inesperados devidos a pseudoaglutina o autoaglutina o reac o de campo misto certos f rmacos ou concentra es eritrocit rias demasiado elevadas ou eritr citos sensibilizados in vivo com anticorpos e ou outros componentes Resultados inesperadamente negativos ou fracos devidos a antig nios fracos reac o de campo misto ou actividade reduzida dos reagentes Podem ocorrer falsos resultados positivos ou negativos pela presen a de bolhas de ar na matriz de gel contamina o de materiais de teste ou devido a algum desvio das t cnicas recomendade Quando se usam amostras fortemente hemol ticas podem ocorrer reac es n o espec ficas Se uma amostra cont m res duos de fibrina esse facto poder provocar o sequestro de c lulas n o sensibilizadas durante a centrifuga o resultando numa fina linha vermelha no topo da matriz de gel Bibliografia 1 Race R R and Sanger R Blood Groups in Man 6 ed Oxford Blackwell Scientific Publishers 1975 2 Issit P D Applied Blood Group Serology 3 ed Montgome
7. ctuar os seguintes passos 1 Introduzir o rotor Cellbind de acordo com o manual de utiliza o da Hettich 2 O rotor reconhecido pela centr fuga e automaticamente programado de acordo com o protocolo Cellbind 3 Para os passos de centrifuga o mencionados nos procedimentos de teste Cellbind abaixo indicados unicamente necess rio pressionar start e a centr fuga inicia as rota es conforme os 3 passos seguintes 0 2 minutos 75 ref 780 rpm 2 3 minutos 200 rcf 1280 rpm 3 10 minutos 1790 ref 3840 rpm 4 Terminada a centrifuga o pode se abrir a tampa e retirar os cart es Procedimentos do teste Permitir que todos os reagentes alcancem a temperatura ambiente 18 25 C N o utilize os cart es do Cellbind Screen se estes apresentarem bolhas de ar na matriz de gel selos rompidos ou sinais de secagem n vel de l quido acima da matriz de gel irregular ou inexistente Detec o ou identifica o de anticorpos Retirar a tira de cobertura do n mero de colunas necess rio Adicionar 40 50 ul da suspens o de c lulas a testar a 0 5 ao compartimento de incuba o Adicionar o mesmo volume 40 50 ul de plasma ou soro ao compartimento de incuba o Incubar durante 15 minutos a 37 C na incubadora Cellbind Introduzir os cart es na centr fuga Cellbind 10 minutos Os par metros de centrifuga o foram j programados Ler as reac es a ana Tipagem de antig nios de grupos sangu neos 1 R
8. dem ser armazenadas durante 48 horas a uma temperatura de 2 8 C ou por um per odo mais prolongado a uma temperatura lt 18 C Aconselha se a centrifuga o das amostras de soro ou de plasma antes do teste a 3000 rcf e ap s 5 minutos de descongelamento a fim de remover quaisquer precipitados Para o teste directo de antiglobulina modificado deve ser utilizado sangue fresco colhido preferencialmente para tubo com EDTA de forma a prevenir a cobertura in vitro dos eritr citos com componentes de complemento O plasma n o indicado para a detec o de anticorpos de liga o ao complemento dado que os anticoagulantes inibir o a activa o do complemento Reagentes Cellbind Screen REF K7000 Caixa contendo 48 cart es com 6 microcolunas cada Cellbind LISS 250 ml REF K7100 100 ml REE K7110 meio de incuba o para preparar suspens es de eritr citos a 0 5 Cellbind P2 2 x 10 ml REF K7200 Suspens es de eritr citos reagentes a 0 5 para a detec o de anticorpos eritrocit rios Cellbind P3 3 x 10 ml REFJK7210 Suspens es de eritr citos reagentes a 0 5 para a detec o de anticorpos eritrocit rios Cellbind P3 P papa na 3 x 10 ml REFIK7211 Suspens es de eritr citos reagentes a 0 5 tratados com papa na para a detec o de anticorpos eritrocit rios Cellbind ID16 16 x 3 ml REEIK7230 Suspens es de eritr citos reagentes a 0 5 para a identifica o de anticorpos Cellbind ID16 P papa
9. etirar a tira de cobertura do n mero de colunas necess rio 2 Adicionar 40 50 ul da suspens o de eritr citos a 0 5 no compartimento de incuba o 3 Adicionar 20 ul de reagente da tipagem sangu nea da Sanquin no compartimento de incuba o Nota Est dispon vel a pedido uma lista dos reagentes de tipagem de sangue Sanquin validados O uso de qualquer outro tipo de reagente pode conduzir a resultados anormais pelo que os mesmos devem ser validados pelo utilizador 4 Introduzir os cart es na centr fuga Cellbind 10 minutos Os par metros de centrifuga o foram j programados 5 Ler as reac es Teste directo de antiglobulina modificado TDA 1 Retirar a tira de cobertura do n mero de colunas necess rio 2 Adicionar uma gota 40 50 ul da suspens o de eritr citos a 0 5 do paciente no compartimento de incuba o 3 Introduzir os cart es na centr fuga Cellbind 10 minutos Os par metros de centrifuga o foram j programados 4 Ler as reac es Cruzamento Retirar a tira de cobertura do n mero de colunas necess rio Adicionar 40 50 ul da suspens o de eritr citos a 0 5 do dador no compartimento de incuba o Adicionar o mesmo volume 40 50 ul de plasma ou soro do paciente no compartimento de incuba o Incubar durante 15 minutos a 37 C na incubadora Cellbind Introduzir os cart es na centr fuga Cellbind 10 minutos Os par metros de centrifuga o foram j programados 6 Ler as reac
10. ry Scientific Publications Miami Florida USA 1985 3 Daniels G Human Blood Groups Blackwell Science Ltd 1995 4 Mollison P L et al Blood Transfusion In Clinical Medicine 9 ed Blackwell Oxford 1993
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