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Brucella V 12 eng NEU

1. O 2
2. 14 8 2 lt 0 25 OD SERION ELISA classic OD H OD
3. SERION ELISA classic Ba
4. 7 2 EDTA TIG 8 7 2 1 Apa won V1 VA V2 SERION ELISA class
5. IgG IgG IgG IgG IgG IgG dev SERION ELISA classic
6. H 3 4 KAI TOY KIT e 12 96 MTP 1 STD 2x2ml HBs B avri HCV lt 0 1
7. O TIG Brucella melitensis Brucella suis H
8. OD IU ml U ml 8 4 SERION ELISA classic H TOU TOV 8 5 SERI
9. ELISA IgA IgG IgM 3 SERION ELISA classic To ELISA Enzyme Linked Immunosorbent Assay H SERION ELISA classic TOU
10. KIT va Ta AVADU DIA C R34 10 2 20 11 1 2 3 4 5 6 7 8 9 Araj G F Lulu A R Khateeb M l Saadah M A Shakir R A 1988 ELISA versus routine tests in the diagnosis of patients with systemic and neurobrucellos
11. 7 3 2 opoi Ol OITTAOUV Hf 7 3 3 IgA IgG IgM AP
12. Apa won rov KOWTE HE
13. 7 TO H Tn vortex TOU
14. F 1 O OD 2 F H YEON F STD STD 3 4 IU ml U ml TIC 16 8 3 2 SERION evaluate on line
15. 100 pl IgA IgG IgM A1 1 C1 D1 E1 1 60 5 min 37 C 1 C 300 ul 3
16. 620 nm 690 nm 650 nm va 12 7 6 SERION ELISA Immunomat DYNEX DSX DS2 H 7 7 SERIO
17. TO WOTE 9 7 2 2 7 2 8 C lt 20 va 2 8 7 3 TOU KIT 7 3 1
18. pe IgM SERION Z200 20 ml 100 H Rf TOU 15 4 H o Vo Vi Vo Va 1 4 200 ul Rf 800 ul Va Rf V3 V4 V3 11100 10 ul 1000 ul
19. 36 7 SERION ELISA classic 7 1 Na SERION ELISA classic SERION ELISA classic Ta SERION ELISA classic KIT TO SERION ELISA classic
20. O NEG 2 ml HBs B avri HCV lt 0 1 Acoau vn V IgA IgG IgM APC 13 ml IgA IgG IgM 0 01 0 01 96 1000 ml WASH 33 3 ml Tween 20 30 mM Tris HCl pH 7 4 lt 0 1 DILB 2x50ml Tween 20
21. SERION ELISA classic TO SERION evaluate TOU TO 1 24 H 20 1 24 H IU ml U ml op H
22. op OPO 100 y 60 Min 37 C 4 x 300 ul DIL WASH 100 ul Vv 30 Min 37 C 4 x 300 ul DIL WASH pNPP 100 30 Min 37 C y STOP 100 405 nm SERION ELISA classic Borrelia burgdorferi IgG IgM EBV EA IgG B19 IgM Hanta Puumala IgG IgM ria 11 7 5 1 2
23. gt A 2 gt B 3 c C 4 gt D Virion Serion ENE W rzburg KIT SERION ELISA classic SERION evaluate ro Microsoft Excel SERION activity
24. IgM 33 09 Francisella tularensis 8 7 SERION ELISA classic Brucella IgA IgG IgM 180 179 99 4 96 SERION ELISA classic Brucella IgG 0 6 180 SERION ELISA classic Brucella IgA 180 100 180 SERION
25. 20 96 va 8 3 SERION ELISA classic Brucella IgA IgG IgM 8 3 1 Mn SERION ELISA classic KIT OD va OD 1 cut off OD T X OD 0 502 x MW STD
26. 7 9 4 TO V1 1 30 Vo V2 33 3 ml 1 000 ml 1 0 ml 30 ml 7 9 5 7 3 6 7 3 7 10 7 4 SERION ELISA classic Brucella IgA IgG IgM IgM 7 2 1 15 4 C dilution 11100 apalmp va
27. lt 0 1 0 01 g l STOP 15 ml 1 2 pNPP 13 ml lt 0 1 INFO 2 IU ml U ml EP A AN AA 4 5 IgM Rf SERION Z200 20 ml 405 nm OUVIOTWHE
28. 7 7 8 8 1 4PL 8 2 8 3 SERION ELISA classic Brucella IgA IgG IgM 8 4 8 5 8 6 8 7 9 9 1 9 2 10 10 1 10 2 11 B V 12 11 12 1 B V 11 11 05 1 SERION ELISA classic Brucella IgA IgG IgM in vitro SERION ELISA classic Brucella IgA ESR116A SERION ELISA classic Brucella IgG ESR116G SERION ELISA classic Brucella IgM ESR116M 1 SERION ELISA classic Brucella IgA
29. IgM IgG IgA IgM Ba IgG dev IgM IgG IgA IgG IgA apx pevn 60 IgG IgA
30. Conjugado anti IgA IgG ou IgM humano pronto para uso APC 13 ml Anticorpo policlonal dirigido contra IgA IgG ou IgM humanos conjugado com fosfatase alcalina estabilizado em solu o proteica conservante metilisotiazolona a 0 01 96 bromonitrodioxano a 0 01 96 Concentrado de solu o de lavagem suficiente para 1000 ml WASH 33 3 ml Soluc o de cloreto de s dio com Tween 20 e 30 mM Tris HCI pH 7 4 conservante azida de s dio a 0 1 96 Tampao de dilui o DILB 2x50ml Tamp o de fosfato contendo prote na e Tween 20 conservante azida de s dio a 0 1 96 corante azul de bromofenol 0 01 g l Soluc o de parada STOP 15 ml 1 2 N hidr xido de s dio Substrato pronto para uso pNPP 13 ml Para nitrofenilfosfato em tamp o isento de solventes conservante azida de s dio a 0 1 96 No frasco ainda fechado o substrato pode apresentar uma colorac o ligeiramente amarelada Isto n o compromete a qualidade do produto Certificado de controle de qualidade com curva padr o e tabela de valores 2 p ginas INFO quantificac o dos anticorpos em Ul ml ou U ml portugu s 4 5 MATERIAIS NECESS RIOS MAS NAO FORNECIDOS equipamentos comuns de laborat rio para a detecc o de IgM absorvente Fr SERION c digo n Z200 20 ml Leitor de ELISA fotom trico para microplacas com filtro compr
31. cut off OD 0 352 x MW STD cut off 0 64 OD TOU cut off 0 225 0 321 OD 15 2 F WG OD Tp youoa OI va
32. 102 103 104 105 1051 1052 106 107 108 109 110 112 118 114 116 117 118 120 1201 121 122 1231 1232 125 126 1261 Masern Virus Measles Virus Rougeole Mumps Virus Parotitis virus Oreillons Varicella Zoster Virus VZV Herpes simplex Virus 1 2 Herpes simplex Virus 1 Herpes simplex Virus 2 Legionella pneumophila 1 7 Echinococcus Tetanus Cytomegalovirus Toxoplasma gondii FSME Virus TBE Virus Resp Syncytial Virus RSV Dengue Virus Brucella Candida albicans Helicobacter pylori Bordetella pertussis Bordetella pertussis Toxin Borrelia burgdorferi Parvovirus B19 Influenza A Virus Influenza B Virus Leptospira Parainfluenza Virus 1 2 3 Parainfluenza Virus 1 1262 1263 127 128 129 130 1311 1312 132 133 134 135 1361 1362 1363 137 1371 1372 138 139 140 142 143 144 145 Parainfluenza Virus 2 Parainfluenza Virus 3 Mycoplasma pneumoniae Adenovirus R teln Virus Rubella virus virus de rub ole Diphtherie Diphtheria Coxiella burnetii Q Fieber Pha
33. WASH PNPP STOP INFO RTU CONC DIL AQUA IVD Waschl sungskonzentrat washing solution concentrate concentr de solution de lavage soluzione di lavaggio concentrata concentrado de soluci n de lavado concentrado de solu o de lavagem koncentr t promyvac ho roztoku vaskeoplesningskoncentrat tv ttl sningskoncentrat Stezony roztw r do plukania koncentr t premyvacieho roztoku koncentrat za raztopino za izpiranje Vaskelesningskonsentrat pNPP Substrat pNPP substrate substrat Pnpp substrato pNPP pNPP cy6crpar sustrato pNPP pNPP substrato pNPP pNPP substrat pNPP substrat pNPP substrat Substrat pNPP substr t pNPP substrat pNPP pNPP substrat Stoppl sung stopping solution solution d arr t soluzione di arresto cron pacrBop soluci n de parada solu o de paragem zastavovac roztok stopoplesning stoppl sning roztw r zatrzymujacy reakcje ukon ovaci roztok raztopina za ustavitev reakcije stoppelasning atzend corrosive corrosif corrosivo enkwA corrosivo corrosivo rav aetsende fr tande czynnik korozyjny koroz vne jedko etsende atzend corrosive corrosif corrosivo enkwA corrosivo
34. 96 suficiente para 96 ensaios sta na 96 test nok til 96 test tillr ckligt for 96 tester Wystarcza na 96 test w posta uje na 96 testov Zadostuje za 96 testov Tilstrekkelig til 96 tester Charge lot lot lotto lote lote Sarze lot lot seria ar a serija lot lot Referenz oder Bestellnummer reference or order number num ro de r f rence ou de commande numero di riferimento o ordinazione ccbinka unu HoMep Ana 38 838 referencia o n mero de pedido refer ncia ou n mero para encomenda reference nebo slo objedn vky reference eller bestillingsnummer referens eller bestallningsnummer Numer referencyjny lub numer zam wienia referen n slo alebo slo objedn vky referen na ali katalo ka Stevilka Referanse eller ordrenummer Lagern zwischen 2 und 8 Grad Celsius store between 2 and 8 degree celsius entre 2 et 8 degr celsius conservare a temperatura compresa tra 2 e 8 gradi centigradi xpaHuTb npn Temnepatype oT 2 no 8 rpanycoB uenecua conservar entre 2 y 8 grados celsius 2 8 Armazenar entre 2 e 8 Celsius uchov vejte pri teplot 2 az 8 C opbevares mellem 2 og 8 grader celsius f rvara vid 2 till 8 grader Celsius Przechowywa w temp pomiedzy 2 a 8 stopni Celsjusza skladovat pri teplote 2 a 8 stup ov Celzia Shranjujte pri
35. 8 3 1 Non automated Evaluation For the SERION ELISA classic test evaluation a lot specific quality control certificate with standard curve and an evaluation table is included in the test kit so that the obtained OD values may be assigned to the corresponding antibody activities The substrate blank must be substracted from all OD values prior to evaluation Method 1 Qualitative Evaluation To fix the cut off ranges multiply the mean value of the measured standard OD with the numerical data of the quality control certificate see special case formulas e g OD 0 502 x MW STD with upper cut off OD 0 352 x MW STD with lower cut off If the measured mean absorbance value of the standard serum is 0 64 OD the range of the cut off is in between 0 225 0 321 OD english 15 Method 2 Continuous Determination of Antibody Activities using the Standard Curve So called interassay variations day to day deviations and laboratory to laboratory deviations are compensated by multiplication of the current measured value obtained with a patient s sample with the correction factor F This factor is calculated as follows OD reference value of standard serum OD current value of standard serum The procedure is necessary to adjust the current test level of the user with the lot specific standard curve First daily deviations have to be corrected by calculating the correction factor F 1 The mean of the two OD values of the standard
36. corrosivo rav eetsende fr tande czynnik korozyjny koroz vne jedko etsende Gebrauchsanweisung Zertifikat Standardkurve und Auswertetabelle CD instructions certificate standard curve and evaluation table CD instructions certificat courbe de r f rence et tableau d valuation CD istruzioni per l uso certificato curva standard e tabella interpretativa CD VHCTpyKuma CEpTu ukaT cTaHgapTHaA kpuBaa n Tabnuua ANA oueHku KOMNAKTHBI instrucciones certificado curva patr n y tabla de evaluaci n CD CD instru es certificado curva padr o e tabela de avaliac o CD standardni kfivka a vyhodnocovaci tabulka CD brugsanvisning certifikat standardkurve og evalueringstabel CD instruktioner certifikat standardkurva och utv rderingstabell CD Instrukcje certyfikat krzywa standardowa i tabela do okre lania wynik w CD pokyny certifik t tandardn krivka a hodnotiaca tabulka disk CD navodila certifikat standardna krivulja in ocenjevalna tabela CD Instruksjoner sertifikat standardkurve og evalueringstabell CD gebrauchsfertig ready to use pr t l emploi pronto per l uso roToBB K listo para usar pronto a utilizar p ipraven k pou it klar
37. e budete pokyny p esn dodr ovat Kvantitativn imunoanal za SERION ELISA classic je platn pouze v p pad e budou spln na hodnot c krit ria specifick pro danou ar i uveden na osv d en o kontrole kvality Adekv tn prom v n zabra uje nespecifick m v sledk m test Proto je zapot eb p i prom v n postupovat pe liv V echny jamky s ploch m dnem se mus naplnit stejn m objemem prom vac ho pufru Na konci prom v n dbejte na to aby byl z jamek odstran n ve ker prom vac pufr a aby nedo lo k efekt m nekontrolovan ho ed n Zabra te vzniku p ny Dbejte na to abyste nepo kodili popis patogen t da protil tek na prouzc ch mikrotitra n ch test b hem prom v n a ods v n jinak by mohlo doj t k z m n 7 2 P prava vzorku a uchov v n Lipemick hemolytick nebo ikterick vzorky s rum nebo plazma by se m ly testovat velmi opatrn O ividn kontaminovan vzorky by se testovat nem ly Mezi vhodn vzorky pat s rum nebo plazma EDTA citr t heparin odebran podle standardn ch laboratorn ch postup Vzorky se nesm tepeln inaktivovat 7 2 1 ed n vzork P ed prov d n m testu se mus vzorky od pacienta na edit ed c m pufrem V n sleduj c m zp sobem SERION ELISA classic Brucella IgG IgA Vi V2 1 100 pridejte 10 ul vzorku od pacienta k 1000 ul ed c ho pufru Po na ed n a p ed pipetov
38. C Avoid repeated freezing and thawing of samples Diluted samples can be stored at 2 8 C for one week english 9 7 3 Preparation of Kit Reagents 7 3 1 7 3 2 7 3 3 7 3 4 7 3 5 7 3 6 7 3 7 Bring all reagents to room temperature before testing Microtiter Test Strips The microtiter test strips in frames are packed with a desiccant in an aluminum bag Take unrequired cavities out of the frame and put them back into the aluminum bag Close bag carefully to ensure airtight conditions Control Sera Standard Sera Control and standard sera are ready to use and must not be diluted any further For each test run independent of the number of microtiter test strips to be used control and standard sera must be included The standard sera should be set up in duplicate Do not treat control sera with Rf absorbent Anti human IgA IgG or IgM AP Conjugate ready to use Conjugates with the same concentration and of the same immunoglobulin class are interchangeable Avoid contamination of ready to use conjugates e g by using sterile tips Washing Solution Dilute washing buffer concentrate 1 30 with aqua dest to a final volume of V Example Buffer concentrate Final volume V2 33 3 ml 1000 ml 1 0 ml 30 ml Dilution Buffer for Samples ready to use Substrate ready to use Avoid contamination of the ready to use substrate solution e g by using sterile tips Stoppi
39. IgG IgM H va 2 AIATNOZTIKH gram apvntikd Or Brucella melitensis Brucella abortus Bang Brucella suis To H
40. ch jamek s v jimkou hol ho substr tu blanku Inkubace substr tu po dobu 30 minut 1 minuta p i 37 C 1 C ve zvlh ovac komo e Po inkubaci promyjte v echny jamky prom vac m roztokem viz v e P davek substr tu P idejte 100 ul roztoku substr tu p ipraven ho k pou it do ka d jamky v etn jamky pro hol substr t blank Inkubace substr tu po dobu 30 minut 1 minuta p i 37 C 1 C ve zvlh ovac komo e Zastaven reakce P idejte 100 ul zastavovac ho roztoku do ka d jamky jemn t epejte mikrotitra n desti kou pro lep prom ch n Ode ten extinkce Ode t te optickou denzitu OD b hem 60 minut p i vlnov d lce 405 nm proti hol mu substr tu blanku referen n vlnov d lka 620 nm a 690 nm nap 650 nm Pros m nezapome te e za zvl tn ch pracovn ch podm nek m e b t v laborato i nezbytn vnit n prava inkuba n doby esky 12 7 6 Postup pri automatick m zpracov n testu SERION ELISA je vhodn pro zpracov n na automatech vyhodnocen pou it pomoc p stroje Immunomat i DYNEX DSX a DS2 Automatick zpracov n se prov d analogicky jako p i manu ln m pou it Pros m nezapome te e za zvl tn ch pracovn ch podm nek m e b t v laborato i nezbytn vnit n prava inkuba n doby 7 7 Pozitivn kontrola kontrola p esnosti Pro stanoven p esnosti a spolehlivost
41. k pou it chra te p ed kontaminac nap pou it m steriln ch pi ek Prom vac roztok Na e te koncentr t prom vac ho pufru 1 30 destilovanou vodou na kone n objem Vo P klad Koncentr t pufru Kone n objem V3 33 3 ml 1000 ml 1 0 ml 30 ml Red c pufr pro vzorky p ipraven k pou it Substr t p ipraven k pou it Roztok substr tu p ipraven k pou it chra te p ed kontaminac nap pou it m steriln ch pi ek Zastavovac roztok p ipraven k pou it 10 7 4 P ehled pracovn postup SERION ELISA classic Brucella IgA IgG IgM kvantitativni V pr pad detek n IgM absorpce revmatoidniho faktoru viz odstavec 7 2 1 Inkubace 15 minut p i pokojov teplot nebo p es noc p i teplot 4 C ed n vzorku vzorky od pacienta 1 100 Pipetujte na ed n vzorky a kontroln s ra p ipraven k pou it standardn s ra do mikrotitra n ch jamek 100 pl y INKUBACE 60 minut 37 C zvlh ovac komora PROM V N 4 x 300 ul DIL WASH Pipetov n roztoku konjug tu APC 100 ul N Vv INKUBACE 30 minut 37 C zvlh ovac komora Y PROMYVANI 4 x 300 ul DIL WASH Y Pipetov n roztoku substr tu pNPP 100 N INKUBACE 30 minut 37 C zvlh ovaci komora Pipetov n zastavovac ho rozto
42. ku z hlin kov f lie po otev en p i 2 8 C roztok p ipraven k pou it p i 2 8 C Chra te p ed kontaminac nap pou it m steriln ch pi ek Neotev en po otev en p i 2 8 C Zakalen roztoky zlikvidujte Koncentr t po otev en p i 2 8 C pracovn ed n p i 2 8 C pracovn ed n p i pokojov teplot L hve pou it pro pracovn ed n se mus pravideln istit Zakalen roztoky zlikvidujte roztok p ipraven k pou it p i 2 8 C chra te p ed sv tlem Chra te p ed kontaminac nap pou it m steriln ch pi ek Zlikvidujte pokud roztok ze loutne extinkce v porovn n s destilovanou vodou gt 0 25 OD viz datum exspirace minim ln trvanlivost ty i t dny trvanlivost v p pad spr vn ho pou v n a skladov n do data exspirace viz datum exspirace 24 m s c ode dne v roby viz datum exspirace 28 m s c ode dne v roby viz datum exspirace 36 m s c ode dne v roby 24 m s c viz datum exspirace 2 t dny 1 t den viz datum exspirace 36 m s c ode dne v roby Zastavovac roztok Po otev en p i pokojov teplot viz datum exspirace esky 6 7 SERION ELISA classic POSTUP PRI TESTU 7 1 D kaz o zhorseni kvality P i pou v n kvantitativn imunoanalyzy SERION ELISA classic pou vejte pouze reagencie SERION ELISA classic Slo ky se nesm vym nit
43. lt 0 1 azid sodn zbarven 0 01 g l bromfenolov mod Zastavovac roztok STOP 15 ml 1 2 N hydroxid sodn Substr t p ipraven k pou it pNPP 13 ml Para nitrofenylfosf t v pufru bez rozpou t dla konzerva n prost edek lt 0 1 azid sodn Substr t v neotev en lahvi m e m t m rn na loutl zabarven kter nesni uje kvalitu p pravku Osv d en o kontrole kvality se standardn k ivkou a vyhodnocovac tabulkou 2 str nky INFO kvantifikace protil tek v IU ml nebo U ml LIS Sa PE NO NE II II PH RE A cesky 4 5 POZADOVANY MATERIAL KTERY NEN PREDM TEM DOD VKY cesky b zn laboratorni vybaveni pro detekci IgM SERION Rf Absorbent kat Z200 20 ml spektrofotometr pro mikrotitra n desky s filtrem vlnov d lka 405 nm doporu en referen n vlnov d lka 620 nm 690 nm nap 650 nm inkub tor 37 C zvlh ovac komora destilovan voda Uzav rac svorky kat VT120 6 UCHOV V N A STABILITA Reagens Uchov v n Stabilita Mikrotitra ni prouzky potazen antigenem Kontrolni s ra standardni s ra Konjugat Red c pufr Promyvac roztok Substr t neotevren po otev en p i 2 8 C v uzav en m s ku z hlin kov f lie s desikantem Prou ky kter se nepou ij se mus ulo it v suchu v uzav en m s
44. m no do branco do substrato Incubac o do conjugado durante 30 minutos 1 min a 37 C 1 C em c mara h mida Parada da reac o Adicionar 100 ul da solu o de parada em cada um dos pocos e agitar levemente a microplaca para misturar a solu o Leitura da absorc o Dentro de 60 minutos determinar a densidade tica DO a 405 nm contra o branco do substrato comprimento de onda de refer ncia entre 620 nm e 690 nm p ex 650 nm Leve em considera o que sob condi es de trabalho especiais poder ser necess rio ajustar os tempos de incuba o internos do laborat rio portugu s 12 7 6 Realiza o do teste pelo m todo automatizado Os testes SERION ELISA s o adequados para o processamento automatizado tendo sido validados com os equipamentos Immunomat DYNEX DSX e DYNEX DS2 O processamento automatizado realizado de maneira an loga ao m todo manual Leve em considerac o que sob condic es de trabalho especiais poder ser necess rio ajustar os tempos de incubac o internos do laborat rio 7 7 Controle positivo Controlo da exatid o Para verificac o peri dica do m todo do teste em conformidade com os requisitos dos sistemas internos de gest o de qualidade do laborat ro recomendamos a utilizac o dos Controles SERION ELISA controls para determinar a precis o e a confiabilidade dos testes realizados com os kits SERION ELISA classic A utilizac o dos Controles SERION ELISA co
45. 3 Calculation SERION ELISA classic Brucella IgA IgG IgM 8 4 Limits of Quantification 8 5 Borderline Ranges 8 6 Interpretation of Results 8 7 Reference Range of healthy Individuals 9 PERFORMANCE CHARACTERISTICS 9 1 Sensitivity and Specificity 9 2 Reproducibility 10 SAFETY MEASURES 10 1 Statements of Warning 10 2 Disposal 11 REFERENCES current version No V 12 11 12 1 previous version V 11 11 05 1 SERION ELISA classic Brucella IgA IgG IgM Enzyme immunoassay for determination of human antibodies for in vitro diagnostic use SERION ELISA classic Brucella IgA Order Nr ESR116A SERION ELISA classic Brucella IgG Order Nr ESR116G SERION ELISA classic Brucella IgM Order Nr ESR116M 1 INTENDED USE SERION ELISA classic Brucella IgA IgG and IgM tests are quantitative and qualitative immunoassays for the detection of human antibodies in serum and plasma directed against human pathogenic Brucella ssp The evaluation of individual immunoglobulin classes can be used for the determination of pathogen contact and disease stage 2 DIAGNOSTIC RELEVANCE Brucella ssp are gram negative non motile bacteria which live as intracellular parasites in a wide spectrum of farm animals Human infection is primarily caused by Brucella melitensis Malta fever Brucella abortus Morburs Bang and Brucella suis The pathogen is transmitted by infected animals zoonosis their excrement and contaminated food particularly unpasteurized dair
46. 8 C 2 8 C O1 Arropp ure 2 8 gt 0 25 24 28 36 24 2 1
47. ELISA classic Brucella IgM 178 opo 98 9 0 6 96 0 6 96 1 96 9 9 1 SERION ELISA classic IgG IgM IgA 108 132 44 7 ELISA SERION ELISA classic Brucella IgA gt 99 gt 99 S
48. ELISA classic Brucella IgM Interference with rheumatoid factors Rheumatoid factors are autoantibodies mainly of the IgM class which preferably bind to IgG immune complexes The presence of non specific IgM antibodies rheumatoid factors can lead to false positive results in the IgM assay Furthermore the possibility exists that weak binding pathogen specific IgM antibodies may be displaced by stronger binding IgG antibodies leading to a false negative IgM result Therefore it is necessary to pretreat samples with rheumatoid factor absorbens prior to IgM detection SERION RF Absorbent Order Nr Z200 20 ml 100 tests Rf absorption is performed by incubation of the patient s sample in Rf dilution buffer for 15 minutes at room temperature or over night at 4 C The test procedure is described in a separate instruction manual Before running the test rheumatoid factor absorbent must be diluted 1 4 in dilution buffer Vo V4 V22 Va 1 4 add 200 ul Rf absorbent each to 800 ul dilution buffer Patient s samples V4 must be diluted in this Rf dilution buffer V3 Va Va 2 14100 add 10 ul patient s sample each to 1000 ul Hf dilution buffer After dilution and before pipetting into the microtiter plate the samples must be mixed thoroughly to prepare a homogenous solution 7 2 2 Sample Storage The patient s samples should not be stored for more than 7 days at 2 8 C Extended storage is possible at lt 20
49. Use safety glasses gloves and laboratory coat while handling 10 2 Disposal Please observe the relevant statutory requirements english 20 11 REFERENCES 1 2 3 4 5 6 7 8 9 Araj G F Lulu A R Khateeb Saadah M A Shakir R A 1988 ELISA versus routine tests in the diagnosis of patients with systemic and neurobrucellosis APMIS 96 171 6 Ariza J Pellicer T Pallares R Foz A Gudiol F 1992 Specific antibody profile in human brucellosis Clin Infect Dis 14 131 40 BgVV RKI 1996 Brucellosen Erkennung und Behandlung Merkblatt fiir rzte Brouqui P Raoult D 2000 Endocarditis due to rare and fastidious bacteria Clin Microbiol Rev 14 177 207 Corbel M J 1997 Brucellosis an overview Emerg Infect Dis 3 213 21 Gad El Rab M O Kambal A M 1998 Evaluation of a Brucella enzyme immunoassay test ELISA in comparison with bacteriological culture and agglutination J Infect 36 197 201 Gazapo E Gonzalez Lahoz J Subiza J L Baquero M Gil J de la Concha E G 1989 Changes in IgM and IgG antibody concentrations in brucellosis over time Importance for diagnosis and follow up J Infect Dis 159 219 25 Pellicer T Ariza J Foz A Pallares R Gudiol F 1988 Specific antibodies during relapse of human brucellosis J Infect Dis 157 918 24 Yagupsky P 1999 Detection of Brucellae in blood cultures J Cl
50. absor o do soro padr o F valor de refer ncia absor o soro padr o valor m dio absor o soro padr o 3 Todos os valores de absor o das amostras dos pacientes s o multiplicados por F Com base na curva padr o e nos valores de medi o corrigidos podem ser determinadas as atividades de anticorpos em Ul ml ou U ml portugu s 16 8 3 2 Validac o autom tica do teste com o software SERION evaluate Depois de introduzidos os quatro par metros e o valor de refer ncia do soro padr o as atividades dos anticorpos s o calculadas pelo programa de avaliac o SERION evaluate ap s o processamento e a medic o dos testes SERION ELISA classic Se a densidade tica DO do padr o estiver fora do intervalo de validade a seguinte mensagem ser mostrada em ingl s Standard values out of ranges in following groups Group 1 24 ou Standard value differ more than 20 in following groups Group 1 24 Nestes casos o teste inv lido devendo ser repetido Os par metros e o valor de refer ncia s dever o ser mudados em caso de troca do lote os par metros e o valor de refer ncia est o indicados na tabela de valores E poss vel verificar se os dados espec ficos do lote foram introduzidos corretamente com base na atividade em Ul ml ou U ml atribu da ao soro padr o O valor m dio das unidades resultante dever corresponder ao valor de unidade indicado no certificado espec fico do lote Uma correc
51. aby se zabr nilo odpa ov n a kontaminaci S ek z hlin kov f lie mikrotitra n desti ky otev ete tak e odd l te pouze horn st vyzna en strany aby bylo zaru eno e jej bude mo n znovu spr vn uzav t Prou ky nepou vejte bude li hlin kov s ek po kozen nebo nebude li s ek obsahuj c zb vaj c prou ky a desikant dn znovu uzav en P em st n alikvotn ch mno stv ze zkumavek s reagenciemi prov d jte aseptick mi postupy aby se zabr nilo kontaminaci Aby nedo lo k fale n pozitivn m v sledk m dbejte na to aby p i pipetov n konjug tu nedo lo ke kontaktu s horn st st n jamek ani k jejich zkr p n D vejte pozor na to aby se nepom chaly l hve nebo ampulky Reprodukovatelnost v sledk testu je z visl na d kladn m prom ch n reagenci P ed pou it m d kladn prot epejte lahvi ky obsahuj c kontroln s ra a stejn tak postupujte u v ech vzork po na ed n nap pomoc vortexu esky 7 Dbejte na pe liv pipetovani a dodr ov n stanoven ch inkuba n ch as a teplot V znamn asov rozd ly mezi pipetov n m do prvn a posledn jamky mikrotitra n desky p i d vkov n vzork kontroln ch s r konjug tu i substr tu mohou v st k r zn m p edinkuba n m dob m kter mohou ovlivnit p esnost a reprodukovatelnost v sledk Optim ln ch v sledk Ize dos hnout pouze v p pad
52. and chronic Brucellosis the method of choice is ELISA which offers sensitivity specificity and the possibility of differentiating between IgA IgG and IgM english 2 3 TEST PRINCIPLE SERION ELISA classic The ELISA Enzyme Linked Immunosorbent Assay is an immunoassay which is particularly suited to the determination of antibodies in the field of infectious serology The reaction is based on the specific interaction of antibodies with their corresponding antigen The test strips of the SERION ELISA classic microtiter plate are coated with specific antigens of the pathogen of interest If antibodies in the patients serum sample are present they bind to the fixed antigen A secondary antibody which has been conjugated with the enzyme alkaline phosphatase detects and binds to the immune complex The colourless substrate p nitrophenylphosphate is then converted into the coloured product p nitrophenol The signal intensity of this reaction product is proportional to the concentration of the analyte in the sample and is measured photometrically english 3 4 KIT COMPONENTS Test Components Pieces Volume Break apart microtiter test strips each with eight antigen coated single wells 12 pieces altogether 96 MTP 1 frame The coating material is inactivated Standard serum ready to use STD 2x2ml Human serum in protein containing phosphate buffer negative for anti HIV Ab HBs Ag Hepatitis B Virus surface antigen and anti H
53. de pipetear a la placa de microtitulaci n se deben mezclar a fondo las muestras para preparar una soluci n homog nea espa ol 8 SERION ELISA classic Brucella IgM Interferencia con factores reumatoides Los factores reumatoides son autoanticuerpos principalmente de la clase de las IgM que se unen preferiblemente a complejos inmunes de IgG La presencia de anticuerpos IgM no especificos factores reumatoides puede conducir a resultados falsos positivos en el inmunoensayo de IgM Ademas existe la posibilidad de que anticuerpos especificos de pat genos de baja afinidad de uni n a IgM puedan quedar desplazados por anticuerpos de mayor afinidad de uni n a IgG conduciendo a un resultado falso negativo para IgM Por lo tanto es necesario tratar previamente las muestras con un absorbente de factor reumatoide antes de la detecci n de IgM absorbente de factor reumatoide SERION N de pedido Z200 20 ml 100 pruebas La absorci n Rf se realizar mediante incubaci n de la muestra del paciente en soluci n amortiguadora de diluci n Rf durante 15 minutos a temperatura ambiente o durante la noche a 4 C El procedimiento de la prueba se describe en un manual de instrucciones por separado Antes de efectuar el an lisis el material absorbente del factor reumatoide V se debe diluir 1 4 en soluci n amortiguadora V2 Vi Vo 2 Va 1 4 a adir 200ul Material absorbente de Hf a 800 ul soluci n amortiguadora de diluci n Las m
54. entre 2 8 C diluci n de trabajo a temperatura ambiente Los frascos utilizados para la diluci n de trabajo se deben limpiar regularmente Deseche las soluciones turbias soluci n lista para usar entre 2 8 C conservar protegida de la luz Evite la contaminaci n p ej utilizando puntas est riles Desechar si la soluci n se vuelve amarilla extinci n frente al agua destilada 0 25 DO ver fecha de caducidad per odo de conservaci n m nimo cuatro semanas per odo de conservaci n en caso de utilizaci n y conservaci n adecuadas hasta la fecha de caducidad ver fecha de caducidad 24 meses desde su producci n ver fecha de caducidad 28 meses desde su producci n ver fecha de caducidad 36 meses desde su producci n 24 meses ver fecha de caducidad 2 semanas 1 semana ver fecha de caducidad 36 meses desde su producci n Tras la apertura a temperatura ambiente ver fecha de caducidad 7 PROCEDIMIENTO DE LA PRUEBA SERION ELISA classic 7 1 Evidencia de deterioro Utilice nicamente reactivos SERION ELISA classic al utilizar inmunoensayos SERION ELISA classic Los componentes no deben intercambiarse con reactivos de otros fabricantes Los sueros patr n y control de los inmunoensayos SERION ELISA classic immunoassays est n definidos exclusivamente para el kit de pruebas que se va a utilizar y no deben utilizarse en otros lotes La soluci n amortiguadora de diluci n
55. hodnot m OD p i adit odpov daj c aktivity protil tek Hodnota hol ho substr tu blanku mus b t p ed vyhodnocov n m ode tena od v ech hodnot OD Metoda 1 Kvalitativn hodnocen Pro ur en horn a doln hranice norm ln ch hodnot cut off hodnota vyn sobte pr m rnou hodnotu nam en standardn OD seln mi daji z osv d en o kontrole kvality viz speci ln p padov vzorce nap OD 0 502 x MW STD horn hranice norm ln ch hodnot OD 0 352 x MW STD doln hranice norm ln ch hodnot Jestli e je nam en pr m rn hodnota absorbance standardn ho s ra 0 64 rozsah horn a doln hranice norm ln ch hodnot cut off je 0 225 a 0 321 esky 15 Metoda 2 Pr b n stanoven aktivit protil tek pomoc standardn k ivky Takzvan odchylky mezi anal zami odchylky mezi jednotliv mi dny a odchylky mezi laborato emi se kompenzuj vyn soben m aktu ln nam en hodnoty z skan ze vzorku od pacienta korek n m faktorem F Tento faktor se vypo t n sledovn Referen n hodnota OD standardn ho s ra Aktu ln hodnota OD standardn ho s ra Je nezbytn upravit aktu ln rove testu u ivatele pomoc standardn k ivky specifick pro jednotlivou ar i Za prv se mus denn odchylky opravit vypo t n m korek n ho faktoru F 1 Mus se vypo tat pr m r dvou hodnot OD standardn ho s ra a zkontrolovat zda je v dan
56. la parte superior del lado marcado nicamente para garantizar poder cerrarla de nuevo adecuadamente No utilice las tiras si la bolsa de aluminio est da ada o si la bolsa con las tiras restantes y el desecante no ha sido cerrada de nuevo adecuadamente Utilice t cnicas as pticas al retirar al cuotas de los tubos de reactivos para evitar la contaminaci n Para evitar resultados falsos positivos aseg rese de no entrar en contacto o salpicar las paredes superiores de los pocillos mientras se pipetea el conjugado Tenga cuidado para no mezclar los tapones de los frascos y o viales espa ol 7 La reproducibilidad de los resultados de las pruebas es dependiente de una mezcla a fondo de los reactivos Agite los matraces que contienen sueros control antes de usar tambi n todas las muestras tras la diluci n por ejemplo utilizando un mezclador de v rtice Aseg rese de pipetear con cuidado y respetar los tiempos y temperaturas de incubaci n proporcionados Diferencias significativas de tiempos entre el pipeteo del primer y el ltimo pocillo de la placa de microtitulaci n al dispensar muestras de sueros control conjugado o sustrato pueden dar como resultado diferentes tiempos de preincubaci n lo que puede influir en la precisi n y reproducibilidad de los resultados Solamente se pueden lograr resultados ptimos si se siguen estrictamente las instrucciones El inmunoensayo SERION ELISA classic es v lido nicamente si se cumplen
57. la soluci n de lavado el sustrato y la soluci n de parada se pueden utilizar para todos los inmunoensayos SERION ELISA classic Independientemente del lote y de la prueba Existen tres concentraciones de conjugado diferentes para cada clase de inmunoglobulina BAJO MEDIO ALTO La clasificaci n aparece escrita en cada etiqueta como sigue p ej IgG Conjugado de IgG de baja concentraci n IgG Conjugado de IgG de media concentraci n IgG Conjugado de IgG de alta concentraci n En raros casos es necesaria la utilizaci n de un conjugado especial para garantizar una calidad constante de nuestros productos Los conjugados especiales se producen en un lote por separado y no llevan el signo y no son intercambiables con otros conjugados Preste mucha atenci n a la informaci n de las etiquetas Si no han sido abiertos todos los componentes de las pruebas SERION ELISA classic pueden si se conservan como corresponde ser utilizados hasta las fechas de caducidad proporcionadas en las etiquetas Los reactivos no se pueden utilizar despu s de la fecha de caducidad La diluci n o alteraci n de los reactivos puede dar como resultado una p rdida de sensibilidad Evite la exposici n de los reactivos a la luz intensa durante la conservaci n e incubaci n Los reactivos deben estar firmemente cerrados tras su uso para evitar evaporaci n y contaminaci n Para abrir la bolsa de aluminio de la placa de microtitulaci n corte
58. ligac o mais fraca espec ficos do micr bio patog nico serem suplantados pelos anticorpos IgG de ligac o mais forte Um despiste IgM pode assim originar um falso resultado negativo Por esta razao necess rio submeter as amostras para a determinac o de IgM a um tratamento preliminar com absorvente de fator reumat ide Absorvente SERION de Fator Reumat ide artigo n Z200 20 ml 100 testes Para executar a absor o de Fr a amostra do doente em tamp o de diluic o Fr incubada durante 15 minutos temperatura ambiente ou durante a noite a 4 C O procedimento encontra se descrito num manual de instruc es espec fico Antes do ensaio necess rio efetuar primeiro uma diluic o 1 4 do absorvente de fator reumat ide com tamp o de dilui o Vo Vi Vo 2 Va 1 4 200 ul de absorvente Fr 800 ul de tamp o de diluic o As amostras dos pacientes V4 ter o de ser dilu das neste tamp o de dilui o Fr Vs Va Va 14100 em 10 ul de amostra do paciente por 1000 ul de tamp o de dilui o Fr Ap s cada dilui o e antes da pipetagem na microplaca as amostras devem ser bem misturadas a fim de se obter uma solu o homog nea 7 2 2 Armazenamento das amostras As amostras dos pacientes n o dever o ser armazenadas entre 2 e 8 C por um per odo maior que 7 dias E poss vel armazenar as amostras durante mais tempo se as mesmas forem armazenadas a um temperatura menor ou igual a 20 C Evit
59. m valida n m rozmez hodnot 2 V po et faktoru F dan referen n hodnota se vyd l pr m rnou extinkc standardn ho s ra F referen n hodnota extinkce standardn ho s ra pr m rn hodnota extinkce standardn ho s ra 3 VSechny nam ren hodnoty vzork od pacienta se vynasobi F Aktivity protil tek v IU ml nebo U ml Ize ur it ze standardn k ivky pomoc opraven ch hodnot esky 16 8 3 2 Automatick hodnocen testu pomoc softwaru SERION evaluate Po zad n ty parametr a referen n hodnoty standardn ho s ra se aktivity protil tek vypo taj online ze zpracovan ch a nam en ch pr b h testu SERION ELISA classic pomoc softwaru SERION evaluate Jestli e je optick denzita standardu mimo rozmez validity objev se n sleduj c hl en Standardn hodnoty mimo rozmez v n sleduj c ch skupin ch Skupina 1 24 nebo Standardn hodnota se li o v ce ne 20 v n sleduj c ch skupin ch Skupina 1 24 V t chto p padech je pr b h testu neplatn a m l by b t opakov n Parametry a referen n hodnota se mus zm nit pouze v p pad e do lo ke zm n ar e vyhodnocovac tabulka ukazuje parametry a referen n hodnoty Spr vn zad n daj specifick ch pro danou Sarzi Ize zkontrolovat na z klad aktivity standardn ho s ra v IU ml nebo U ml p i azen standardn mu s ru Vypo tan pr m rn hodnota jednotek
60. mus odpov dat jednotkov hodnot uveden na osv d en specifick m pro danou ar i U nam en ch hodnot se prov d automatick oprava Ve standardn verzi je na v tisku uvedeno n sleduj c K d vzorku Hodnota OD IU ml nebo U ml Vyhodnocen 8 4 Meze kvantifikace Meze kvantifikace jsou uvedeny na osv d en kontroly kvality testu SERION ELISA classic Linearita ed n byla vtomto rozsahu prok z na komplexn mi hodnot c mi studiemi V p pad Ze vzorek pacienta d v v sledek testu nad horn mez kvantifikace vzorek Ize testovat p i vy m ed n Takto stanoven aktivita protil tek se mus vyn sobit faktorem dodate n ho ed n 8 5 Hrani n rozp t Hrani n rozp t testu SERION ELISA classic Brucella IgA lgG lgM jsou stanovena na osv d en ch kontroly kvality a indikuj rozp t hrani n ch v sledk test Hodnoty z skan p i testov n vzorku pacienta kter jsou ni ne toto rozp t indikuj negativn v sledek testu hodnoty nad hrani n m rozp t m jsou vykl d na jako pozitivn V p pad e v sledky budou v r mci hrani n ho rozp t definitivn interpretace v sledk nen mo n V takov ch p padech je test t eba opakovat soub n s n sleduj c m vzorkem odebran m 1 a 2 t dny pozd ji esky 17 8 6 Interpretace vysledk Diagn za akutn infekce Brucella je mozna pomoc detekce protil tek IgM IgG a
61. n ch syst mech lze prov st v punkt tu krve kostn d en synovie nebo mo i ale speci ln nutri n n roky Brucella to komplikuj a omezuj na specializovan laborato e Rychlej v sledky Ize z skat pomoc s rologick ch metod nap klad aglutina n mi testy nebo testy fixace komplementu Pro rozli en mezi akutn a chronickou brucel zou se jako metoda prvn volby pou v ELISA kter nab z citlivost specifi nost a mo nost diferenciace mezi IgA IgG a IgM esky 2 3 PRINCIP TESTU SERION ELISA classic ELISA Enzyme Linked Immunosorbent Assay enzymov imunosorp ni kvantitativn analyza je imunologicky test ktery je zvl st vhodny ke stanoveni protil tek v infek n s rologii Reakce je zalo ena na specifick interakci protil tek s p slu n m antigenem Testovac prou ky mikrotitra n desti ky SERION ELISA classic jsou pokryty specifick mi antigeny vy et ovan ho patogenu Pokud jsou ve vzorku s ra pacienta p tomny protil tky v se na fixovan antigen Sekund rn protil tka kter byla konjugov na s enzymovou alkalickou fosfat zou detekuje imunitn komplex a v e se na n j Pot je bezbarv substr t p nitrofenylfosf t p em n n na barevn produkt p nitrofenol Intenzita sign lu tohoto reak n ho produktu je p mo m rn koncentraci analytu ve vzorku a m se fotometricky esky 3 4 SLO EN KITU Slo ky testu Kusy objem Odd len
62. n m na mikrotitra n desti ku se vzorky mus d kladn prom chat aby vznikl homogenn roztok esky 8 SERION ELISA classic Brucella IgM Interference revmatoidniho faktoru Revmatoidn faktory jsou autoprotilatky p ev n t dy IgM kter se p ednostn v ou na imunitn komplexy IgG P tomnost nespecifick ch protil tek IgM revmatoidn ch faktor m e v st k fale n pozitivn m v sledk m v imunoanal ze IgM Nav c je mo n e slab se v c patogen specifick IgM protil tky jsou vyt sn ny IgG protil tkami se siln j vazbou co vede k fale n negativn m v sledk m pro IgM Proto je nezbytn vzorky p ed detekc IgM p edem upravit absorbentem revmatoidn ho faktoru SERION RF Absorben kat Z200 20 ml 100 test Absorpce Rf se prov d inkubac vzorku pacienta bu v ed c m pufru Rf po dobu 15 minut p i pokojov teplot nebo p es noc p i 4 C Postup testu je pops n v samostatn m n vodu k pou it P ed prov d n m testu mus byt absorbent revmatoidn ho faktoru na ed n 4 d ly ed c ho pufru V V4 V22 Va 1 4 pridejte 200 ul Rf absorbentu k 800 ul ed c ho pufru Vzorky od pacienta V4 mus b t na ed ny t mto Rf ed c m pufrem V3 V4 Va 2 1 100 pridejte 10 ul vzorku od pacienta k 1000 ul Rf pufru Po nafed n a p ed pipetov n m na mikrotitra n desti ku se vzorky mus d kl
63. prou ky mikrotitra n ho testu ka d s osmi odd litelnymi jamkami 12 kus pota en mi antigenem spole n 96 MTP 1 r me ek Materi l pro pota en je inaktivov n Standardn s rum p ipraven k pou it STD 2x2ml Lidsk s rum ve fosf tov m pufru s proteinem negativn na protil tky proti HIV HBs Ag povrchov antigen viru hepatitidy B a proti HCV konzerva n prost edek lt 0 1 azid sodn zbarven amaranth O Negativn kontroln s rum p ipraven k pou it NEG 2ml Lidsk s rum ve fosf tov m pufru s proteinem negativn na protil tky proti HIV HBs Ag povrchov antigen viru hepatitidy B a proti HCV konzerva n prost edek lt 0 1 azid sodn zbarven lisaminov zele V Protil tkovy konjug t proti hum nn m IgA IgG nebo IgM p ipraven k pou it 13 ml APC Polyklon ln protil tka proti hum nn m IgA IgG nebo IgM Konjugovana s alkalickou fosfatazou stabilizovana roztokem obsahujicim protein konzerva n prost edek 0 01 methylisothiazolon 0 01 bromnitrodioxan Koncentr t prom vac ho roztoku dosta uje pro 1000 ml WASH 33 3 ml Roztok chloridu sodn ho s Tween 20 a 30 mM Tris HCL pH 7 4 konzerva n prost edek lt 0 196 azid sodn ed c pufr DILB 2 x 50 ml Fosf tovy pufr obsahuj c protein s Tween 20 konzerva n prost edek
64. serum has to be calculated and checked that it is within the given validity range 2 Calculation of the factor F the given reference value is divided by the mean of the extinction of the standard serum F reference value extinction STD serum mean value extinction STD serum 3 All measured values of patient s samples are multiplied by F Antibody activities in IU ml or U ml can be determined from the standard curve with the corrected values english 16 8 3 2 Automatic Test Evaluation with Software SERION evaluate After input of the four parameters and the reference value of the standard serum antibody activities are calculated online from processed and measured SERION ELISA classic test runs by the evaluation software SERION evaluate If the optical density of the standard is out of the validity range the following message will appear Standard values out of ranges in following groups Group 1 24 or Standard values differ more than 20 in following groups Group 1 24 In these cases the test run is invalid and should be repeated Parameters and reference value need to be changed only if there is a change of lot evaluation table shows parameters and reference values Correct input of the lot specific data can be checked on the basis of the standard serum activity in IU ml or U ml assigned to the standard serum The calculated mean value of the units has to correspond to the unit value indicated on the lot spe
65. suis Es posible la curaci n espont nea o una transici n a una fase cr nica con un amplio espectro de s ntomas Pueden estar afectados m ltiples rganos o sistemas de rganos huesos o articulaciones durante la fase cr nica Histol gicamente se observan granulomas caracter sticos en los tejidos infectados La endocarditis bacteriana es fatal si se deja sin tratamiento Durante el estadio tard o de la brucelosis pueden ocurrir manifestaciones neurol gicas e incluso psiqui tricas Para el diagn stico diferencial se deber n tener en cuenta las siguientes enfermedades tifus abdominal linfoma tuberculosis tularemia borreliosis hepatitis v rica influenza Debido a la situaci n cl nica variable de la brucelosis cr nica el diagn stico es posible nicamente mediante la detecci n directa del pat geno o detecci n de una respuesta espec fica de anticuerpos en el suero o LCR La detecci n directa del pat geno en sistemas de cultivo se puede llevar a cabo con siembras de sangre m dula sea sinovia u orina pero las demandas especiales de nutrientes de Borrelia dificultan esto y lo limitan espa ol 2 a laboratorios especializados Se pueden obtener resultados m s r pidos utilizando m todos serol gicos tales como la aglutinaci n o pruebas de fijaci n del complemento Para diferenciar entre la brucelosis aguda y la cr nica el m todo de elecci n que ofrece sensibilidad especificidad y la posibilidad de diferenci
66. temperaturi od 2 do 8 C Oppbevares mellom 2 og 8 grader Celsiu CE Markierung bei Erf llung der IVD Richtlinie 98 79 EG CE marking according to IVD guideline 98 79 EC Etiquetage CE selon les directives DIV marcatura CE in conformit alla direttiva IVD 98 79 EC mapkupoBka CE cornacHo aupekruBam IVD 98 79 marca CE seg n la directiva IVD 98 79 CE CE IVD 98 79 EE Marca o CE de acordo com a Directiva 98 79 znacen CE podle sm rnice IVD 98 79 ES CE meerkning iht IVD retningslinje 98 79 EF CE m rkning enligt riktlinjerna f r IVD i direktiv 98 79 EC Oznakowanie CE zgodne z wytycznymi dot diagnostyki in vitro 98 79 EC oznacenie CE podla smernice IVD 98 79 ES oznaka CE skladna s smernico IVD 98 79 ES CE merking i henhold til IVD retningslinjer 98 79 EGF CE Markierung bei Erf llung der IVD Richtlinie 98 79 EG gemaB Anhang Liste B CE marking according to IVD guideline 98 79 EC according to annex II list B tiquetage CE selon les directives DIV 98 79 CE selon l annexe ll liste B marcatura CE in conformit alla direttiva IVD 98 79 EC secondo l allegato elenco B mapkupoBka CE cornacHo ampextuBam IVD 98 79 npunoxenue cnucok B marca CE seg n la directiva IVD 98 79 CE de acuerdo con el anexo lista B CE IVD 98 79 EE ro II B Marca o CE de ac
67. til brug bruksfardig gotowy do uzycia pripraven na pouzitie pripravljen za uporabo klar til bruk Konzentrat concentrate concentr concentrato koHueurpar concentrado concentrado koncentr t koncentrat koncentrat Koncentrat koncentr t koncentrat Konsentrat verd nnen oder l sen in dilute or disolve in diluez ou dissoudre dans diluire o sciogliere in pas6aBuTb nnn pacrBopurb B diluir o disolver en diluir ou dissolver em na e te nebo rozpus te v fortynd eller opl s i sp d eller l s i Rozcienczy lub rozpu ci w rozriedi alebo rozpustit v razred ite ali raztopite v Fortynnes eller leses oppi destilliertes Wasser aqua detillata eau distill e acqua distillata aucrunnupoBaHHaa Bona agua destilada agua destilada destilovan voda destilleret vand destillerat vatten woda destylowana destilovan voda destilirana voda Destillert vann In vitro Diagnostik Anwendung in vitro diagnostic use utilisation en diagnostic in vitro uso diagnostico in vitro ucnonb30BaHve B MarHocTuke MH BUTpo uso diagn stico in vitro in vitro para diagn stico in vitro diagnostick pouzit in vitro til in vitro diagnostik in vitro diagnostisk anvandning do diagnostyki in vitro diagnostick pouzitie in vitro uporaba pri diagnostiki in vitro In vitro diagnostisk bruk SERION ELISA classic
68. za reagencie od jin ch v robc Standardn a kontroln s ra kvantitativn ch imunoanal z SERION ELISA classic jsou definov ny v lu n pro testovac soupravu kter bude pou ita a nesm se pou t v jin ch ar ch Red c pufr prom vac roztok substr t a zastavovac roztok Ize pou vat se v emi kvantitativn mi imunoanal zami SERION ELISA classic bez ohledu na ar i a test Pro ka dou t du imunoglobulin existuj t i odli n koncentrace konjug tu N ZK ST EDN VYSOK Klasifikace je uvedena na ka d m ozna en n sledovn nap IgG konjug t IgG n zk koncentrace IgG konjug t IgG st edn koncentrace IgG konjug t IgG vysok koncentrace Ve vz cn ch p padech je nutn pou t speci ln konjug t aby byla zaru ena konzistentn kvalita na ich v robk Speci ln konjug ty se vyr b v samostatn ar i nejsou ozna eny symbolem a nejsou zam niteln za jin V nujte pros m velkou pozornost informac m na t tc ch Pokud z stanou neotev en mohou b t v echny slo ky test SERION ELISA classic pou v ny a do doby uveden na t tc ch jestli e jsou spr vn skladov ny Reagencie nepou vejte po uplynut data exspirace ed n i pozm ov n reagenci m e zp sobit ztr tu citlivosti B hem skladov n a inkubace chra te reagencie p ed siln m sv tlem Reagencie mus b t po pou it pevn uzav eny
69. 18 9 2 Reprodutibilidade A reprodutibilidade intra ensaio foi averiguada com soros de reatividade diferente em preparac o m ltipla n 20 dentro de uma preparac o do ensaio Para a determinac o da reprodutibilidade interensaio foram testados soros com reatividades diferentes em 10 preparacdes realizadas independentemente Desvio padr o Coeficiente de variac o CV Valor m dio SERION ELISA classic Brucella IgA Intra ensaio CV Valor m dio Interensaio OD CV Valor m dio OD positivo fraco positivo positivo forte SERION ELISA classic Brucella IgG Intra ensaio CV Valor m dio Interensaio OD CV Valor m dio OD positivo fraco positivo positivo forte SERION ELISA classic Brucella IgM Intra ensaio CV Valor m dio Interensaio OD CV Valor m dio OD positivo fraco positivo positivo forte portugu s 19 10 MEDIDAS DE SEGURANCA 10 1 Advert ncias e medidas de precauc o O SERION ELISA classic destina se a ser utilizado unicamente por pessoal especializado que domine por completo as t cnicas de trabalho A manipulac o dos reagentes do teste e das amostras dos pacientes devem seguir os princ pios das boas pr ticas de laborat rio Este kit cont m componentes de soros humanos Embora todos os soros de controle sejam negativos para Ac anti HIV Ag HBs ant geno de superf cie do v rus da hepatite B e Ac anti HCV el
70. 4 100 ul IgA IgG IgM_ 30 1 min 37 C 1 C rou 100 ul 30 1 min 37 C 1 C 100 ul OD 60 405 nm
71. 4 7 5 2 266 7 5 strong positive 3 415 1 2 SERION ELISA classic Brucella IgG Mean Value Intraassay Mean Value Interassay OD CV OD CV weak positive 0 595 5 5 11 3 positive 1 239 7 2 S 13 3 strong positive 6 4 SERION ELISA classic Brucella IgM Mean Value Intraassay Mean Value Interassay OD CV OD weak positive 0 431 14 5 positive 1 551 6 6 strong positive english 19 10 SAFETY MEASURES 10 1 Statements of Warning The SERION ELISA classic is designed for use by qualified personnel who are familiar with good laboratory practice All kit reagents and human specimens should be handled carefully using established good laboratory practice This kit contains human blood components Although all control and cut off sera have been tested and found negative for anti HIV ab HBs Ag Hepatitis B Virus surface Antigen and anti HCV ab they should be considered potentially infectious Do not pipette by mouth Do not smoke eat or drink in areas in which specimens or kit reagents are handled Wear disposable gloves laboratory coat and safety glasses while handling kit reagents or specimens Wash hands thoroughly afterwards Patient s material and other potentially infectious material should be decontaminated after the test run Reagents should be stored safely and be unaccessible to unauthorized access e g children Stopping solution corrosive C causes acid burn R34
72. 5 Intervalos dudosos Los intervalos dudosos de la prueba del SERION ELISA classic Brucella IgA lgG lgM se especifican en el certificado de control de calidad e indican el intervalo para resultados dudosos de las pruebas Los valores obtenidos al analizar una muestra de un paciente que caen por debajo de este intervalo indican un resultado negativo de la prueba los valores por encima del intervalo dudoso se interpretan como positivos En los casos en los que los resultados est n dentro del intervalo dudoso no es posible una interpretaci n definitiva del resultado En tales casos se debe repetir la prueba en paralelo con una muestra de seguimiento tomada de 1 a 2 semanas m s tarde par de suero espa ol 17 8 6 Interpretaci n de resultados El diagn stico de una infecci n aguda por Brucella se puede realizar mediante detecci n de anticuerpos espec ficos IgM IgG e IgA o bien un resultado positivo para IgM solo En el plazo de dos a cuatro meses tras un tratamiento con xito puede ser evidente una reducci n significativa de los t tulos de IgG sin embargo en la mayor a de los pacientes est no ser tan pronunciada como para que aparezcan como seronegativos Los t tulos de anticuerpos lgM normalmente decrecen tras dos a tres meses pero en algunos casos pueden persistir durante varios meses despu s de la infecci n Los par metros m s importantes para el diagn stico de la brucelosis cr nica son los t tulos de IgG e IgA Unos
73. 59 219 25 Pellicer T Ariza J Foz A Pallares R Gudiol F 1988 Specific antibodies during relapse of human brucellosis J Infect Dis 157 918 24 Yagupsky P 1999 Detection of Brucellae in blood cultures J Clin Microbiol 37 3437 42 espa ol 21 V 12 11 12 1 V 11 11 05 1 5 7 2 1 SERION ELISA classic Brucella IgA IgG IgM NEPIEXOMENON 1 MPOOPIZOMENH SERION ELISA classic TOY KIT C AEN NO a DB WO ND SERION ELISA classic 7 1 7 2 7 3 7 4 7 5 7 6
74. CV Ab preservative lt 0 1 sodium azide colouring Amaranth O Negative control serum ready to use NEG 2 ml Human serum in protein containing phosphate buffer negative for anti HIV Ab HBs Ag Hepatitis B Virus surface antigen and anti HCV Ab preservative lt 0 1 sodium azide colouring Lissamin Green V Anti human IgA IgG or IgM conjugate ready to use APC 13 ml Anti human IgA IgG or IgM polyclonal antibody conjugated to alkaline phosphatase stabilised with protein stabilisation solution preservative 0 01 methylisothiazolone 0 01 bromnitrodioxane Washing solution concentrate sufficient for 1000 ml WASH 33 3 ml Sodium chloride solution with Tween 20 and 30 mM Tris HCl pH 7 4 preservative lt 0 1 sodium azide Dilution buffer DILB 2 x50 ml Protein containing phosphate buffer with Tween 20 preservative 0 1 96 sodium azide colouring 0 01 g l Bromphenol blue Stopping solution STOP 15 ml 1 2 N sodium hydroxide Substrate ready to use pNPP 13 ml Para nitrophenylphosphate in solvent free buffer preservative lt 0 1 sodium azide Substrate in unopened bottle may have a slightly yellow coloring which does not reduce the quality of the product Quality control certificate with standard curve and evaluation table INFO 2 pages qu
75. D OD 0 431 1 551 19 10 10 1 SERION ELISA classic TO KIT AUTO Av opo cut off HBs B
76. D For each lot the standard curve is evaluated by Institut Virion Serion GmbH W rzburg Germany in repeated test runs under optimal conditions Time consuming and cost intensive construction of the standard curve by the user is not necessary For evaluation of antibody concentrations a lot specific standard curve as well as a lot specific evaluation table is included with each SERION ELISA classic test kit The evaluation software SERION evaluate as well as the Microsoft Excel based software tool SERION activity are available on request To compensate for normal test variations and also for test run control a standard serum is used in each individual test run For this control serum a reference value with a validity range is determined by the quality control of the producer Within this range a correct quantification of antibody concentration is ensured english 14 8 2 Criteria of Validity The substrate blank must be lt 0 25 OD The negative control must produce a negative test result By use of quantitative SERION ELISA classic tests the mean OD value after subtraction of the substrate blank of the standard serum must be within the validity range which is given on the lot specific quality control certificate The variation of OD values of the standard serum may not be higher than 20 If these criteria are not met the test is not valid and must be repeated 8 3 Calculation SERION ELISA classic Brucella IgA IgG IgM
77. ERION ELISA classic Brucella IgA gt 99 96 99 3 96 SERION ELISA classic Brucella IgA 91 3 96 gt 99 96 18 9 2 H 20 H 10 SERION ELISA classic Brucella IgA CV 96 OD OD SERION ELISA classic Brucella IgG OD CV OD CV 0 595 5 5 BeTIK 1 239 7 2 E SERION ELISA classic Brucella IgM CV 96 O
78. G e IgM s o imunoensaios quantitativos e qualitativos para a detec o de anticorpos humanos no soro ou no plasma contra os agentes patog nicos humanos Brucella spp A avalia o de cada classe de imunoglobulinas pode ser utilizada para a determina o do contato com o agente patog nico e do estado patol gico 2 RELEV NCIA DIAGN STICA As bact rias Brucella spp s o Gram negativas e im veis vivendo como parasitas intracelulares num leque variado de animais de cria o A infec o humana provocada sobretudo por Brucella melitensis febre de Malta Brucella abortus doen a de Bang e Brucella suis O patog nio transmitido por animais infectados zoonose pelos seus excrementos e por alimentos contaminados sobretudo atrav s de lactic nios n o pasteurizados A doenca inicia se geralmente com sintomas gerais que progridem para febre moderada medida que a fase aguda comeca sendo esta caracterizada pelo aumento da febre ao fim do dia hepatomegalia e esplenomegalia ou edema dos n dulos linf ticos A febre ondulante com intervalos afebris caracter stica das infec es por Brucella melitensis e Brucella suis A doenca pode sarar espontaneamente ou transitar para um est dio cr nico com v rios quadros cl nicos Durante a fase cr nica podem ser afetados diversos rg os ou sistemas de rg os ossos e articula es Histologicamente observam se nos tecidos infectados granulomas caracter sticos A
79. ISA classic Brucella IgG Valor de la Valor de la i Intraensayo E media media DO OWA DO Interensayo CV d bilmente positivo positivo fuertemente positivo SERION ELISA classic Brucella IgM Valor de la Valor de la Intraensayo media media DO inve DO Interensayo CV 96 d bilmente positivo positivo fuertemente positivo espa ol 19 10 MEDIDAS DE SEGURIDAD 10 1 Declaraciones de advertencia El SERION ELISA classic est dise ado para ser utilizado por personal cualificado y familiarizado con las buenas pr cticas de laboratorio Todos los reactivos del kit y las muestras humanas deben manipularse con cuidado de acuerdo a la buena pr ctica de laboratorio establecida Este kit contiene componentes de sangre humana Aunque todos los sueros de control y de corte han sido analizados y el resultado ha sido negativo para anti HIV ab anticuerpo anti VIH HBs Ag ant geno de superficie del virus de hepatitis B y anti HCV ab anticuerpo anti VHC se deber n considerar como potencialmente infecciosos No pipetear con la boca No fume coma ni beba en zonas en las que se manipulen muestras o reactivos del kit Utilice guantes desechables bata de laboratorio y gafas de seguridad mientras manipula reactivos del kit o muestras L vese las manos a fondo despu s El material del paciente y dem s material potencialmente infeccioso se debe descontaminar despu s de la eje
80. IgA nebo pozitivn m v sledkem detekce samotn ch IgM B hem dvou a ty ech m s c po sp n terapii m e b t zjevn v znamn redukce titr IgG ov em u v t iny pacient nebude platit to e se projev jako s ronegativn Titry protil tek IgM obvykle klesaj po 2 a 3 m s c ch ov em v n kter ch p padech mohou perzistovat n kolik m s c po infekci Nejd le it j mi parametry pro diagn zu chronick brucel zy jsou titry IgG a IgA Zv en titry protil tek IgG a IgA jsou diagnosticky v znamn a jsou projevem asn nebo persistuj c chronick infekce Bylo v ak zaznamen no e pouze v 60 p pad je zv en titru IgG doprov zeno soub n m zv en m IgA Naproti tomu pouze 33 pacient vykazuje zv en titr IgM b hem chronick f ze Mus se v ak vz t v vahu zk en reakce mezi Brucella Yersinia enterocolitica 09 Francisella tularensis a Vibrio cholerae Jsou i mo n pozitivn reakce po o kov n proti chole e 8 7 Referen n rozsah zdrav ch jednotlivc Testov n n hodn ch s r d rc krve shrom d n ch v oblasti ji n ho N mecka testy SERION ELISA classic Brucella IgA IgG a IgM poskytlo n sleduj c rozd len Z t chto 180 s r v p pad testov n testem SERION ELISA classic Brucella IgG bylo 179 99 4 negativn ch a jeden vzorek 0 6 dal pozitivn v sledek Ze 180 testovan ch s r testem SERION ELISA classic Brucell
81. N ELISA controls SERION ELISA classic SERION ELISA controls 13 8 SERION ELISA classic Brucella IgA IgG IgM 8 1 4PL H OD O SERION ELISA classic 4 4 PL D A 146 B C In Conc A B C D 1
82. ON ELISA classic Brucella IgA lgG lgM TOU TO TO 17 8 6 H va
83. VIH Acs HB HBs Ag ant geno de superficie del virus de la hepatitis B y Ac anti VHC conservante azida s dica lt 0 1 96 colorante Amaranto O Suero control negativo listo para usar NEG Suero humano en tamp n fosfato que contiene prote na negativo para Ac anti VIH Acs HB HBs Ag ant geno de superficie del virus de la hepatitis B y Ac anti VHC conservante azida s dica lt 0 1 3 colorante Verde Lissamin Green V Conjugado FA de IgA IgG o IgM anti humana listo para usar APC 13 ml Anticuerpo policlonal IgA IgG o IgM anti humano conjugado con fosfatasa alcalina estabilizado con soluci n que contiene prote nas conservante metilisotiazolona al 0 01 bromonitrodioxano al 0 01 Concentrado de diluci n de lavado suficiente para 1000 ml WASH 33 3 ml Soluci n de cloruro de sodio con Tween 20 y 30 mM Tris HCl pH 7 4 conservante azida s dica lt 0 1 Soluci n amortiguadora de diluci n DILB 2x50ml Tamp n fosfato con Tween 20 que contiene prote na conservante azida s dica lt 0 1 3 colorante 0 01 g l de azul de bromofenol Soluci n de parada STOP 15 ml hidr xido de sodio 1 2 N Sustrato listo para usar pNPP 13 ml Para nitrofenilfosfato en soluci n amortiguadora sin disolvente conservante azida s dica 0 1 96 El sustrato en un frasco sin a
84. VO 620 nm 690 nm 650 nm 37 C Click VT120 5 6 KAI ZTAOEPOTHTA 2 8 C oi Ver ro 2 8 C 2 8 C TN 2 8 C 2
85. YOUR GLOBAL PARTNER virion serion virion serion IN DIAGNOSTICS SERION ELISA classic Brucella IgA IgG IgM Manufacturer Fabricante Fabricante Vyrobce SERION ELISA classic Brucella IgA IgG IgM Institut Virion Serion GmbH Friedrich Bergius Ring 19 Instructions English D 97076 W rzburg Germany Telefon 49 0 9 31 30 450 Fax 49 0 9 31 30 45 100 E Mail dialog virion serion de Internet www virion serion de KAL116 2 Instrucciones de empleo Espanol Instruc es de emprego Portugu s E Pokyny Cesky Version Versi n Ek oon Vers o Verze 12 11 12 1 Updates Please pay attention to the differences in comparison to the previous version Current version Nr V 12 11 12 1 Previous version V 11 11 05 1 Update in section 5 7 2 1 SERION ELISA classic Brucella IgA IgG IgM CONTENTS 1 INTENDED USE DIAGNOSTIC RELEVANCE TEST PRINCIPLE SERION ELISA classic C KIT COMPONENTS MATERIAL REQUIRED BUT NOT SUPPLIED STORAGE AND STABILITY NO a AR WO ND TEST PROCEDURE SERION ELISA classic 7 1 Evidence of Deterioration 7 2 Sample Preparation and Storage 7 3 Preparation of Kit Reagents 7 4 Overview Test Procedure 7 5 Manual Test Procedure 7 6 Automated Test Procedure 7 7 Positive Control Accuracy Control 8 TEST EVALUATION 8 1 Single Point Quantification with the 4PL Method 8 2 Criteria of Validity 8
86. a 1 as ntota inferior c par metro A 2 pendiente de la curva c par metro B 3 punto de inflexi n c par metro C 4 as ntota superior c par metro D Para cada lote la curva patr n es evaluada por el Institut Virion Serion GmbH W rzburg Alemania en pruebas repetidas bajo condiciones ptimas No es necesaria una costosa y dilatada construcci n de la curva est ndar por el usuario Para la evaluaci n de concentraciones de anticuerpo se incluye una curva est ndar espec fica del lote y tambi n una tabla de evaluaci n espec fica del lote con cada kit de pruebas SERION ELISA classic El software de evaluaci n SERION evaluate as como el instrumento de software basado en Microsoft Excel SERION activity est n disponibles bajo petici n Para compensar las variaciones normales de las pruebas y tambi n para el control de la ejecuci n de las pruebas se utiliza un suero patr n en cada carga de pruebas individual Para este suero control se determina un valor de referencia con un intervalo de validez mediante el control de calidad del fabricante Dentro de este intervalo est garantizada una correcta cuantificaci n de la concentraci n de anticuerpos espafiol 14 8 2 Criterios de validez El blanco de sustrato debe ser lt 0 25 DO El control negativo debe producir un resultado negativo de la prueba Mediante el uso de pruebas cuantitativas SERION ELISA classic el valor de DO medio despu s de restar el
87. a IgA bylo 180 100 negativn ch Krom toho v sledky testov n 180 s r v testu SERION ELISA classic Brucella IgM byly n sleduj c 178 98 9 testovan ch s r bylo negativn ch jedno s rum 0 6 bylo pozitivn a jedno s rum 0 6 96 bylo hrani n Toto rozd len indikuje m ru s roprevalence pozad 1 96 v celkov populaci 9 CHARAKTERISTIKY VYSLEDK 9 1 Citlivost a specifi nost Pro stanoven charakteristik chov n test SERION ELISA classic IgG IgM a IgA byla provedena studie vyu vaj c k testov n 108 s r od zdrav ch d rc krve 132 s r od d t hospitalizovan pacienti d tsk nemocnice 44 s r od hospitalizovan ch pacient s jin mi nemocemi a od 27 pacient s podez en m na brucel zu kdy byly v sledky porovn ny s komer n dostupn m testem ELISA Mezn v sledky nebyly zahrnuty do v po tu citlivosti a specificity Charakteristiky v sledk Citlivost Specificita SERION ELISA classic Brucella IgA gt 99 gt 99 SERION ELISA classic Brucella IgG gt 99 99 3 SERION ELISA classic Brucella IgM 91 3 96 gt 99 cesky 18 9 2 Reprodukovatelnost Reprodukovatelnost uvnit stanoven intra assay byla stanovena testov n m s r r zn reaktivity dvacetkr t v pr b hu jednoho testu Reprodukovatelnost mezi stanoven mi inter assay byla stanovena testov n m vzork s r r zn reaktivity v 10 nez visl ch anal z ch Sm rodatn
88. a em toalhas de papel portugu s 11 7 5 Realiza o do teste pelo m todo manual 1 2 10 11 Colocar o n mero necess rio de po os na moldura da microplaca e preparar a folha de protocolo Adicionar 100 ul de cada uma das amostras dilu das ou dos controles prontos para uso nos respectivos po os das tiras da microplaca Deixe um po o livre para o Branco do substrato p ex IgA IgG IgM quantitativo po o n po o A1 branco do substrato po o B2 controle negativo po o C1 soro padr o po o D1 soro padr o po o E1 paciente 1 incuba o das amostras durante 60 minutos 5 min a 37 C 1 C em c mara h mida No fim do tempo de incuba o lavar todos os po os com equipamento automatizado ou manual Aspirar ou esvaziar o l quido de incuba o dos po os Encher cada po o com 300 ul de solu o de lavagem Aspirar ou esvaziar a solu o de lavagem Repetir o processo mais 3 vezes isto lavar 4 vezes no total Esvaziar a placa batendo a sobre toalhas de papel Adi o do conjugado Adicionar 100 ul do conjugado IgA IgG IgM pronto para uso nos respectivos po os exceto branco do substrato Incubac o do conjugado durante 30 minutos 1 min a 37 C 1 C em c mara h mida No fim do tempo de incubac o lavar todos os pocos como descrito acima Adic o do substrato Adicionar 100 ul do substrato pronto para uso em cada um dos pocos tamb
89. a strips P ytka mikrotitracyjna paski do odrywania mikrotitra n platni ka rozlomiteln pr zky vsebnik za mikrotitriranje z razdelki ki jih je mogo e odlomiti Mikrotiterplate avbrytbare strips Antigen antigen Antig ne antigene aHtureH antigeno antig nio antigen antigen antigen Antygen antig n antigen Antigen CAG STD POS C O NEG APC RF DILB DILBS1 DILBS2 DILBS3 Antik rper antibodies Anticorps anticorpi aHrurena anticuerpos anticorpos protil tky antistoffer antikroppar Przeciwciata protil tky protitelesa Antistoffer Kontrollantigen control antigen antig ne de contr le antigene di controllo KOHTponbHbIA aHTureH antigeno de control ant geno de controre kontroln antigen kontrolantigen kontrollantigen antygen kontrolny kontrolny antig n kontrolni antigen kontrollantigen Standardserum standard serum S rum standard siero standard ctaHgapTHas suero patr n soro padr o standardni s rum standardserum standardserum Surowica standardowa Standardn s rum standardni serum Standardserum Positivkontrolle positive control Contr le positif controllo positivo non
90. aci n entre IgA IgG e IgM es ELISA 3 PRINCIPIO DE LA PRUEBA SERION ELISA classic La prueba ELISA Enzyme Linked Immunosorbent Assay an lisis de inmunoabsorci n ligado a enzimas es un inmunoensayo que es particularmente apropiado para la determinaci n de anticuerpos en el campo de la serolog a infecciosa La reacci n se basa en la interacci n espec fica de anticuerpos con su ant geno correspondiente Las tiras reactivas de la placa de microtitulaci n de SERION ELISA classic se recubren con ant genos espec ficos del agente pat geno de inter s Si los anticuerpos en la muestra de suero del paciente est n presentes se unen al ant geno fijado Un anticuerpo secundario que se ha conjugado con la enzima fosfatasa alcalina detecta y se une al complejo inmune El sustrato incoloro p nitrofenolfosfato se convierte entonces en el producto coloreado p nitrofenol La intensidad de la se al de este producto de reacci n es proporcional a la concentraci n del analito en la muestra y se mide fotom tricamente espa ol 3 4 COMPONENTES DEL KIT Componentes de la prueba partes Volumen Pocillos de microtitulaci n en tiras separables cada una de ellas con ocho 12 partes pocillos individuales recubiertos de ant geno En total son 96 MTP 1 bastidor El material de recubrimiento est inactivado Suero patr n listo para usar STD 2x2ml Suero humano en tamp n fosfato que contiene prote na negativo para Ac anti
91. adn prom chat aby vznikl homogenn roztok 7 2 2 Uchov v n vzork Vzorky od pacienta by se nem ly uchov vat d le ne 7 dn p i teplot 2 a 8 C P i teplot lt 20 C Ize dobu uchov v n prodlou it Chra te vzorky p ed opakovan m zmrazov n m a rozmrazov n m Na ed n vzorky Ize skladovat po dobu jednoho t dne p i teplot ch od 2 do 8 C cesky 9 7 3 P prava reagenci soupravy 7 3 1 7 3 2 7 3 3 7 3 4 7 3 5 7 3 6 7 3 7 cesky Pred provad nim test nechte vSechny reagencie dos hnout pokojov teploty Prouzky mikrotitra n ho testu Prou ky mikrotitra n ho testu v r me c ch jsou zabaleny s desikantem v s ku z hlin kov f lie Z r me ku odstra te ne douc jamky a vlo te je zp t do hlin kov ho s ku Pe liv uzav ete s ek aby se zajistila vzduchot snost Kontroln s ra standardn s ra Kontroln a standardn s ra jsou p ipravena k pou it a nesm se d le edit Do ka d ho proveden ho testu nez visle na po tu pou it ch prou k mikrotitra n ho testu mus b t zahrnuto pozitivn kontroln a standardn s rum Standardn s ra je t eba p ipravit dvojmo Kontroln s ra nezpracov vejte Rf absorbentem Protil tkov konjug t proti hum nn m IgA IgG nebo IgM p ipraven k pou it Konjug ty se stejnou koncentrac a vr mci stejn t dy imunoglobulin jsou zam niteln Konjug ty p ipraven
92. antification of antibodies in IU ml or U ml english 4 5 MATERIAL REQUIRED BUT NOT SUPPLIED common laboratory equipment for the IgM detection SERION Rf Absorbent order no Z200 20 ml photometer for microtitre plates with filter wavelength 405 nm recommended reference wavelength 620 nm 690 nm e g 650 nm incubator 37 C moist chamber distilled water Click Clips order no VT120 english 5 6 STORAGE AND STABILITY Microtiter strips unopened see expiry date coated with antigen after opening at 2 8 C in closed aluminum bag with minimum shelf life desiccant four weeks Strips which are not used must be stored dry in the shelf life in case of closed aluminum bag proper use and storage until expiry date Control sera after opening at 2 8 C see expiry date Standard sera 24 months as of production Conjugate ready to use solution at 2 8 C see expiry date Avoid contamination e g by using sterile tips 28 months as of production Dilution buffer Unopened see expiry date 36 months as of production after opening at 2 8 C 24 months Discard cloudy solutions Washing solution Concentrate after opening at 2 8 C see expiry date working dilution at 2 8 C 2 weeks working dilution at room temperature 1 week Bottles used for the working dilution should be cleaned regularly Discard cloudy solutions Substrate ready to use solutio
93. ar congelamento e descongelamento repetidas vezes As amostras dilu das poder o ser guardadas entre 2 e 8 C durante uma semana portugu s 9 7 3 Prepara o dos reagentes do kit 7 3 1 7 3 2 7 3 3 7 3 4 7 3 5 7 3 6 7 3 7 Deixar todos os reagentes atingirem a temperatura ambiente antes de os utilizar Tiras da microplaca As 12 tiras da microplaca estao embaladas em uma moldura juntamente com um agente dessecante num saco de aluminio Retirar da moldura os pocos que nao ser o utilizados e coloc los novamente no saco de alum nio com o dessecante fechando a hermeticamente Soros de controle soros padr o Os controles e padr es s o prontos para uso e n o dever o ser dilu dos Independentemente do n mero de tiras de microplaca utilizado em cada teste dever o ser inclu dos soros de controle em determina es simples e soros padr o em determina es duplas duplicata N o tratar os soros de controle com absorvente de Fr Conjugado AP anti IgA IgG ou IgM humanos pronto para uso Os conjugados com a mesma concentra o e a mesma classe de imunoglobulina s o permut veis Evitar a contamina o de conjugados prontos para uso p ex utilizando pontas de pipetas esterilizadas Solu o de lavagem Diluir o concentrado de solu o de lavagem V1 1 30 com gua destilada a um volume final V2 Exemplo Concentrado de solu o de Volume final V2 lavagem 33 3 m
94. asal del 1 en la poblaci n general 9 CARACTER STICAS DE FUNCIONAMIENTO 9 1 Sensibilidad y especificidad Para determinar las caracter sticas de funcionamiento de SERION ELISA classic IgG IgM e IgA se ensay en un estudio que utilizaba suero de 108 donantes de sangre sanos 132 sueros de ni os pacientes ingresados en un hospital infantil 44 sueros de pacientes ingresados con otras entermedades y tambi n 27 pacientes con brucelosis sospechada y se compar con una prueba ELISA disponible comercialmente Los resultados dudosos no se incluyeron en los c lculos de la sensibilidad y especificidad Caracter sticas de funcionamiento Sensibilidad Especificidad SERION ELISA classic Brucella IgA gt 99 96 99 96 SERION ELISA classic Brucella IgG gt 99 99 3 SERION ELISA classic Brucella IgM 91 3 gt 99 espa ol 18 9 2 Reproducibilidad La reproducibilidad intraensayo se determin mediante ensayo de sueros de diferentes reactividades 20 veces en una carga de pruebas La reproducibilidad interensayo se determin mediante ensayo de sueros de diferentes reactividades en 10 cargas independientes de pruebas Desviaci n t pica Coeficiente de variaci n CV Valor de la media SERION ELISA classic Brucella IgA Valor de la media DO Valor de la media DO Intraensayo CV Interensayo CV d bilmente positivo positivo fuertemente positivo SERION EL
95. assic Brucella IgM test were as follows 178 sera 98 9 tested negative one serum 0 6 positive and one 0 6 sample was borderline This distribution indicates a background seroprevalence rate of 1 in the general population 9 PERFORMANCE CHARACTERISTICS 9 1 Sensitivity and Specificity To determine the performance characteristics of SERION ELISA classic IgG IgM and IgA a study utilizing 108 healthy blood donor sera 132 sera from children in patients of a children s hospital 44 sera of in patients with other diseases as well as 27 patients with suspected Brucellosis were tested and compared with a commercially available ELISA test Borderline results were not included in the calculations of sensitivity and specificity Performance Characteristics Sensitivity Specificity SERION ELISA classic Brucella IgA gt 99 gt 99 SERION ELISA classic Brucella IgG gt 99 99 3 SERION ELISA classic Brucella IgM 91 3 96 gt 99 english 18 9 2 Reproducibility Intraassay reproducibility was determined by testing sera of different reactivities 20 times in one test run Interassay reproducibility was determined by testing sera of different reactivities in 10 independent test runs Standard deviation Coefficient of Variation CV Mean value SERION ELISA classic Brucella IgA Mean Value Intraassay Mean Value interassay OD CV OD E weak positive 0 598 12 1 0 758 positive 1 79
96. assic C COMPONENTES DO KIT MATERIAIS NECESS RIOS MAS N O FORNECIDOS ARMAZENAMENTO E VALIDADE DOS REAGENTES NO a KAR ND Execuc o do teste SERION ELISA classic 7 1 Instruc es gerais 7 2 Preparac o e armazenamento das amostras 7 3 Preparac o dos reagentes do kit 7 4 Execuc o do teste apresentac o resumida 75 Realizac o do teste pelo m todo manual 7 6 Realizagao do teste pelo m todo automatizado 7 7 Controle positivo Controlo da exatid o 8 VALIDAC O DO TESTE 8 1 Quantificac o de um ponto de acordo com o m todo 4PL 8 2 Crit rios de validac o do teste 8 3 C lculos SERION ELISA classic Brucella IgA IgG IgM 8 4 Limites de quantificac o 8 5 Intervalos borderline 8 6 Interpretac o dos resultados 8 7 Intervalo de refer ncia de indiv duos saud veis 9 CARACTER STICAS DE DESEMPENHO 9 1 Sensibilidade e especificidade 9 2 Reprodutibilidade 10 MEDIDAS DE SEGURANCA 10 1 Advert ncias e medidas de precau o 10 2 Elimina o de res duos 11 LITERATURA vers o atual N V 12 11 12 1 vers o anterior V 11 11 05 1 SERION ELISA classic Brucella IgA IgG IgM Ensaio imunoenzimatico para a determinacao de anticorpos humanos para uso em diagn stico in vitro SERION ELISA classic Brucella IgA C digo n ESR116A SERION ELISA classic Brucella IgG C digo n ESR116G SERION ELISA classic Brucella IgM C digo n ESR116M 1 UTILIZA O PREVISTA Os testes SERION ELISA classic Brucella IgA Ig
97. blanco de sustrato del suero patr n debe estar dentro del intervalo de validez que se proporciona en el certificado de control de calidad espec fico del lote La variaci n de valores DO del suero patr n no puede ser superior al 20 Si no se cumplen estos criterios la prueba no es v lida y se debe repetir 8 3 C lculos del SERION ELISA classic Brucella IgA IgG IgM 8 3 1 Evaluaci n no automatizada Para la evaluaci n de la prueba SERION ELISA classic se incluye un certificado de control de calidad espec fico del lote con una curva patr n y una tabla de evaluaci n en el kit de pruebas de modo que los valores de DO obtenidos se pueden asignar a las correspondientes actividades de anticuerpo El blanco de sustrato se debe restar de todos los valores de DO antes de la evaluaci n M todo 1 Evaluaci n cualitativa Para fijar los intervalos de corte multiplique el valor medio de la DO est ndar medida con los datos num ricos del certificado de control de calidad ver f rmulas de casos especiales p ej DO 0 502 x PM STD con corte superior DO 0 352 x PM STD con corte inferior Si el valor de absorbancia medio medido del suero patr n es 0 64 DO el intervalo de corte est entre 0 225 0 321 DO espa ol 15 M todo 2 Determinaci n continua de actividades de anticuerpo utilizando la curva est ndar Las as llamadas variaciones interensayo desviaciones de un d a a otro y de un laboratorio a otro se compe
98. brir puede tener una coloraci n ligeramente amarilla lo que no reduce la calidad del producto Certificado de control de calidad con curva patr n y tabla de evaluaci n INFO 2 p ginas chaise lon og ante neos emma Eum espafiol 4 5 MATERIAL NECESARIO PERO NO SUMINISTRADO equipo habitual de laboratorio Para la detecci n de IgM Absorbente Rf SERION n de pedido Z200 20 ml fot metro para placas de microtitulaci n con filtro longitud de onda 405 nm longitud de onda de referencia recomendada 620 nm 690 nm p ej 650 nm incubador a 37 C E c mara de humectaci n agua destilada Clips de cierre por presi n Click Clips n de pedido VT120 espa ol 5 6 CONSERVACI N Y ESTABILIDAD Tiras de microtitulaci n recubiertas con ant geno Sueros control Sueros patr n Conjugado Soluci n amortiguadora de diluci n Soluci n de lavado Sustrato Soluci n de parada espa ol sin abrir tras la apertura entre 2 8 C en una bolsa de aluminio cerrada con desecante Las tiras que no se utilizan se deben conservar secas en la bolsa de aluminio cerrada tras la apertura entre 2 8 C soluci n lista para usar entre 2 8 C Evite la contaminaci n p ej utilizando puntas est riles Sin abrir tras la apertura entre 2 8 C Deseche las soluciones turbias Concentrado tras la apertura entre 2 8 C diluci n de trabajo
99. cific certificate There is an automatic correction of the measured values In the standard version the printout displays the following Sample code OD value IU ml or U ml Evaluation 8 4 Limits of Quantification The limits of quantification are specified on the quality control certificate of the SERION ELISA classic test The linearity of dilution within this range has been demonstrated in comprehensive evaluation studies In case a patient sample shows a test result above the upper limit of quantification the sample may be tested at a higher dilution The thereby determined antibody activity must be multiplied by the additional dilution factor 8 5 Borderline Ranges The borderline ranges of the SERION ELISA classic Brucella IgA IgG IgM tests are specified on the quality control certificates and indicate the range for borderline test results Values obtained when testing a patient s sample which fall below this range indicate a negative test result values above the borderline range are interpreted positive In cases where the results are within the borderline range a definitive interpretation of the result is not possible In such cases the test should be repeated in parallel with a follow up sample taken one to two weeks later Serum pair english 17 8 6 Interpretation of Results Diagnosis of acute Brucella infection can be made by specific IgM IgG and IgA antibody detection or a positive IgM result alone Within two to fo
100. control y patr n Los sueros control deber n configurarse por duplicado No trate los sueros control con material absorbente de Rf Conjugado FA de IgA IgG o IgM anti humana listo para usar Los conjugados con la misma concentraci n y de la misma clase de inmunoglobulinas son intercambiables Evite la contaminaci n de los conjugados listos para usar p ej utilizando puntas est riles Soluci n de lavado Diluya concentrado de soluci n amortiguadora de lavado Vi 1 30 con agua destilada hasta un volumen final de V2 Ejemplo Concentrado de soluci n Volumen final V2 amortiguadora 33 3 ml 1 000 ml 1 0 ml 30 ml Soluci n amortiguadora de diluci n para muestras lista para usar Sustrato listo para usar Evite la contaminaci n de la soluci n de sustrato lista para usar p ej utilizando puntas est riles Soluci n de parada lista para usar espa ol 10 7 4 Visi n general procedimiento de la prueba SERION ELISA classic Brucella IgA IgG IgM cuantitativo En caso de IgM detecci n absorci n de factor reumatoide ver N 7 2 1 Incubaci n 15 minutos a temperatura ambiente o durante la noche a 4 C diluci n de la muestra muestras del paciente 14100 Pipetear muestras diluidas y control listo para usar sueros patr n en los pocillos de micro an lisis 100 ul y INCUBACI N 60 Min 37 C c mara de humectaci n LAVAR 4 x 300 ul DIL WASH Pipetear sol
101. cuci n de la prueba Los reactivos se deben conservar de modo seguro y deben ser inaccesibles a un acceso no autorizado p ej ni os Soluci n de parada gt corrosivo C produce quemadura acida R34 Utilice gafas de seguridad guantes y bata de laboratorio al manipular 10 2 Eliminaci n Cumpla con los requisitos reglamentarios pertinentes espa ol 20 11 BIBLIOGRAF A 1 2 3 4 5 6 7 8 9 Araj G F Lulu A R Khateeb M l Saadah M A Shakir R A 1988 ELISA versus routine tests in the diagnosis of patients with systemic and neurobrucellosis APMIS 96 171 6 Ariza J Pellicer T Pallares R Foz A Gudiol F 1992 Specific antibody profile in human brucellosis Clin Infect Dis 14 131 40 BgVV RKI 1996 Brucellosen Erkennung und Behandlung Merkblatt fiir rzte Brouqui P Raoult D 2000 Endocarditis due to rare and fastidious bacteria Clin Microbiol Rev 14 177 207 Corbel M J 1997 Brucellosis an overview Emerg Infect Dis 3 213 21 Gad El Rab M O Kambal A M 1998 Evaluation of a Brucella enzyme immunoassay test ELISA in comparison with bacteriological culture and agglutination J Infect 36 197 201 Gazapo E Gonzalez Lahoz J Subiza J L Baquero M Gil J de la Concha E G 1989 Changes in IgM and IgG antibody concentrations in brucellosis over time Importance for diagnosis and follow up J Infect Dis 1
102. de uma infecc o aguda por Brucella pode ser efetuado mediante a detecc o de anticorpos IgM IgG e IgA espec ficos ou meramente pela obtenc o de um resultado positivo para IgM No espaco de dois a quarto meses ap s uma terap utica bem sucedida pode ser evidente uma reduc o significativa dos t tulos de IgG contudo na maioria dos doentes esta nao ser de dimens es tais que os doentes parecam ser seronegativos Os t tulos de anticorpos IgM diminuem ap s dois a tr s meses mas nalguns casos persistem por v rios meses ap s a infecc o Os par metros mais importantes para o diagn stico da brucelose cr nica s o os t tulos de IgG e IgA T tulos de IgG e IgA elevados sao relevantes para o diagn stico e indicam uma infec o cr nica inicial ou persistente Contudo h registo de que apenas 60 dos casos apresentam um aumento do t tulo de IgG acompanhado por um aumento simult neo de IgA Pelo contr rio s 33 dos doentes exibem um aumento dos t tulos de IgM durante a fase cr nica Ha que considerar a possibilidade de ocorrerem rea es cruzadas entre Brucella e Yersinia enterocolitica 09 Francisella tularensis e Vibrio cholerae E tamb m poss vel que ocorram reacdes positivas ap s a vacinac o contra a c lera 8 7 Intervalo de refer ncia de indiv duos saud veis A an lise de soros de dadores de sangue aleat rios colhidos na regi o do sul da Alemanha com os testes SERION ELISA classic Brucella IgA e IgG resultou
103. e results Optimum results can only be achieved if the instructions are strictly followed The SERION ELISA classic immunoassay is only valid if the lot specific validation criteria on the quality control certificate are fulfilled Adequate washing avoids test unspecificities Therefore the washing procedure should be carried out carefully All of the flat bottom wells should be filled with equal volumes of washing buffer At the end of the procedure ensure that the wells are free of all washing buffer in order to avoid uncontrolled dilution effects Avoid foaming Take care not to damage the inscription pathogen antibody class on the microtiter test strips during washing and aspiration to avoid confusion 7 2 Sample Preparation and Storage Lipaemic hemolytic or icteric samples serum or plasma should only be tested with caution Obviously contaminated samples should not be tested Serum or plasma EDTA citrate heparin collected according to standard laboratory methods are suitable samples Samples must not be thermally inactivated 7 2 1 Dilution of Samples Before running the test patient samples must be diluted in dilution buffer V2 as follows SERION ELISA classic Brucella IgA IgG Vi V2 1 100 add 10 ul patient s sample each to 1000 ul dilution buffer After dilution and before pipetting into the microtiter plate the samples must be mixed thoroughly to prepare a homogenous solution english 8 SERION
104. en equipos autom ticos y ha sido evaluado para su uso con Immunomat as como con DYNEX DSX y DS2 El proceso automatizado se realiza de manera an loga al uso manual Se advierte que bajo condiciones de trabajo especiales internas del laboratorio pueden ser necesarias adaptaciones de los tiempos de incubaci n 7 7 Control positivo control de exactitud Para la verificaci n peri dica del m todo de prueba y para satisfacer los requisitos de los sistemas de gesti n de calidad internos de laboratorio recomendamos la utilizaci n de SERION ELISA controls para determinar la precisi n y fiabilidad de las cargas de pruebas SERION ELISA classic La utilizaci n de SERION ELISA controls se describe en manuales de instrucciones espec ficos espa ol 13 8 EVALUACI N DE LAS PRUEBAS SERION ELISA classic Brucella IgA IgG IgM 8 1 Cuantificaci n de punto simple con el m todo 4PL La asignaci n optimizada de las se ales de extinci n para valores cuantitativos se garantiza mediante la utilizaci n de funciones no lineales que se ajustan a una curva sigmoide sin ninguna transformaci n adicional a valores de DO La determinaci n de las concentraciones de anticuerpo con SERION ELISA classic se lleva a cabo mediante el modelo logar tmico log stico de cuatro par metros 4 PL que es ideal para un ajuste exacto de las curvas Est basado en la f rmula Los par metros A B C y D son representativos para la forma exacta de la curv
105. endocardite bacteriana fatal se n o for tratada Durante a fase tardia da brucelose podem ocorrer manifesta es neurol gicas e mesmo psiqui tricas No diagn stico diferencial h que considerar as seguintes doencas typhus abdominalis linfoma tuberculose tularemia borreliose hepatite viral e influenza Devido ao quadro cl nico vari vel da brucelose cr nica s poss vel efetuar um diagn stico mediante a detecc o direta do agente patog nico ou da detecc o da resposta de anticorpos espec ficos no soro ou no l quido cefalorraquidiano A detecc o direta do agente patog nico em sistemas de cultura pode ser realizada por punc o e obtendo se portugu s 2 sangue medula ssea l quido sinovial ou urina mas as exig ncias nutritivas espec ficas da Borrelia tornam na dif cil de cultivar e limitada a laborat rios especializados Podem obter se resultados mais r pidos utilizando m todos serol gicos como testes de aglutinac o ou testes de fixac o do complemento Para distinguir entre brucelose aguda e cr nica o m todo de escolha a ELISA que oferece sensibilidade especificidade e a possibilidade de diferenciar IgA IgG e IgM 3 PRINC PIO DO ENSAIO SERION ELISA classic O teste ELISA Enzyme Linked Immunosorbent Assay um imunoensaio que especialmente adequado para a determinac o de anticorpos no campo das doencas infecciosas A reac o baseia se na interac o espec fica de anticorpos com os ant geno
106. er el siguiente mensaje Valores est ndar fuera de intervalos en los siguientes grupos grupo 1 24 o El valor est ndar difiere m s del 20 en los siguientes grupos grupo 1 24 En estos casos la ejecuci n de la prueba es invalida y debe repetirse Los par metros y el valor de referencia deben ser modificados nicamente si existe un cambio de lote la tabla de evaluaci n muestra par metros y valores de referencia La entrada correcta de los datos espec ficos del lote se puede comprobar bas ndose en la actividad del suero patr n en Ul ml o U ml asignada al suero patr n El valor medio calculado de las unidades debe corresponderse con el valor unitario indicado en el certificado espec fico del lote Hay una correcci n autom tica de los valores medidos En la versi n est ndar el resultado muestra lo siguiente C digo de la muestra Valor DO Ul ml U ml Evaluaci n 8 4 L mites de cuantificaci n Los l mites de cuantificaci n se especifican en el certificado de control de calidad de la prueba SERION ELISA classic La linealidad de la diluci n dentro de este intervalo ha sido demostrada en estudios de evaluaci n exhaustivos En caso de que una muestra del paciente muestre un resultado de la prueba por encima del l mite superior de cuantificaci n se puede ensayar la prueba a una diluci n mayor La actividad de anticuerpo determinada as se debe multiplicar por el factor de diluci n adicional 8
107. es dever o ser considerados potencialmente infecciosos N o pipetar com a boca Nas reas onde se trabalha com reagentes de teste ou com amostras de pacientes n o dever ser permitido comer beber ou fumar Na manipula o de reagentes do teste e de amostras de pacientes deve se utilizar jaleco de laborat rio luvas descart veis e culos de prote o A seguir lavar muito bem as m os As amostras dos pacientes e todos os materiais potencialmente infecciosos dever o ser descontaminados ap s a realiza o do teste Guardar os reagentes fora do alcance de crian as Solu o de parada L corrosiva C causa gueimaduras cidas R34 Utilizar culos de protec o luvas e jaleco de laborat rio 10 2 Eliminac o de residuos Observar as respectivas disposi es legais vigentes portugu s 20 11 LITERATURA 1 2 3 4 5 6 7 8 9 Araj G F Lulu A R Khateeb Saadah M A Shakir R A 1988 ELISA versus routine tests in the diagnosis of patients with systemic and neurobrucellosis APMIS 96 171 6 Ariza J Pellicer T Pallares R Foz A Gudiol F 1992 Specific antibody profile in human brucellosis Clin Infect Dis 14 131 40 BgVV RKI 1996 Brucellosen Erkennung und Behandlung Merkblatt fiir rzte Brouqui P Raoult D 2000 Endocarditis due to rare and fastidious bacteria Clin Microbiol Rev 14 177 207 Corbel M J 1997 B
108. ests may if stored accordingly be used up to the expiry dates given on the labels Reagents may not be used after date of expiry Dilution or alteration of the reagents may result in a loss of sensitivity Avoid exposure of reagents to strong light during storage and incubation Reagents must be tightly closed after use to avoid evaporation and contamination To open the aluminum bag of the microtiter plate please cut off the top of the marked side only in order to guarantee proper reclosing Do not use the strips if the aluminum bag is damaged or if the bag with remaining strips and desiccant was not properly reclosed Use aseptic techniques when removing aliquots from the reagent tubes to avoid contamination To avoid false positive results ensure not to contact or splash the top walls of wells while pipetting conjugate Take care not to mix the caps of the bottles and or vials Reproducibility of test results is dependent on thorough mixing of the reagents Agitate the flasks containing control sera before use and also all samples after dilution e g by using a vortex mixer Be sure to pipette carefully and comply with the given incubation times and temperatures Significant time differences between pipetting the first and last well of the microtiter plate english 7 when dispensing samples and control sera conjugate or substrate can result in different pre incubation times which may influence the precision and reproducibility of th
109. fosfataze antihumani Alkalisk fosfatase konjugat anti humant niedrig konzentriertes Konjugat conjugate with low concentration conjugu faible concentration coniugato a concentrazione bassa koHblorar HU3KO koHueHTpauum conjugado con concentraci n baja conjugado de baixa concentrac o konjug t s n zkou koncentrac konjugat med lav koncentration konjugat med l g koncentration koniugat o niskim stezeniu konjug t so strednou koncentr ciou konjugat z majhno koncentracijo Konjugat med lav konsentrasjon mittel konzentriertes Konjugat conjugate with medium concentration conjugu a concentration moyenne coniugato a concentrazione media koHbtorar cpenHel KoHueHTPALMU conjugado con concentraci n media conjugado de concentra o interm dia konjug t se stfedni koncentrac konjugat med medium koncentration konjugat med medelh g koncentration koniugat o rednim stezeniu konjug t so strednou koncentr ciou konjugat s srednjo koncent Konjugat med middels konsentrasjon hoch konzentriertes Konjugat conjugate with high concentration conjugu a concentration lev e coniugato a concentrazione alta BbICOKOKOHLIEHTPUPOBAHHBI conjugado con concentraci n alta conjugado de elevada concentrac o konjug t S vysokou koncentrac konjugat
110. i pr b hu test SERION ELISA classic a periodick ov en testovac metody doporu ujeme pou vat SERION ELISA controls aby byly spln ny po adavky vnit n ch syst m zen kvality laborato e Pou v n SERION ELISA controls je pops no v p slu n ch n vodech k pou it esky 13 8 HODNOCENI TESTU SERION ELISA classic Brucella IgA IgG IgM 8 1 Jednobodov kvantifikace pomoc metody 4PL Optimalizovan p i azen extink n ch sign l kvantitativn m hodnot m je zaru eno pou it m neline rn ch funkc kter upravuj esovitou k ivku bez jak koliv dal transformace hodnot OD Ur en koncentrac protil tek pomoc metody SERION ELISA classic se prov d logisticko logaritmick m modelem 4 PL ty parametrov kter je ide ln pro p esn stanoven k ivky Je zalo ena na vzorci D A C In koncentrace 1 e 5 Parametry A B C a D jsou pro p esn tvar k ivky vypov daj c 1 doln asymptota c parametr A 2 Sklon kfivky c parametr B 3 bod zlomu c parametr C 4 horn asymptota c parametr D U ka d ar e se vyhodnocuje standardn k ivka v Institut VirioniSerion GmbH W rzburg N mecko pomoc opakovan ch test za optim ln ch podm nek Nen tedy nutn aby u ivatel prov d l asov n ro nou a n kladnou konstrukci standardn k ivky Ka d testovac souprava SERION ELISA classic obsahuje specifickou standardn k ivku pro hodnoce
111. ic Brucella IgA IgG V1 14100 10 1000 ul WOTE SERION ELISA classic Brucella IgM IgM Ta IgG H IgM IgM IgM va IgG IgM
112. imento de onda 405 nm comprimento de onda de refer ncia recomendado na gama de 620 nm a 690 nm p ex 650 nm incubadora 37 C camara humida agua destilada clipes de press o c digo n VT 120 portugu s 5 6 ARMAZENAMENTO E VALIDADE DOS REAGENTES Tiras de microtitula o revestidas com ant geno Soros de controle soros padr o Conjugados Tamp o de dilui o Solu o de lavagem Substrato Fechadas Ap s a abertura entre 2 e 8 C no saco de alum nio fechada junto com o dessecante As tiras n o utilizadas devem ser armazenadas secas no saco de alum nio hermeticamente fechado Ap s a abertura entre 2e 8 C Solu o pronta para uso entre 2 e 8 C Evitar contamina o p ex utilizando somente pontas de pipetas esterilizadas Fechado Ap s a abertura entre 2e 8 C Rejeitar as solu es turvas Concentrado ap s a abertura entre 2 e 8 C Dilui o de utiliza o entre 2 e 8 C Dilui o de utiliza o temperatura ambiente Limpar regularmente os recipientes utilizados para a dilui o de utiliza o Rejeitar as solu es turvas Solu o pronta para uso entre 2 e 8 C armazenada protegida da luz Evitar contamina o p ex utilizando somente pontas de pipetas esterilizadas Rejeitar no caso de colora o amarela mais intensa extin o contra gua destilada gt 0 25 DO ver o prazo de validade prazo de validade ou 4
113. in Microbiol 37 3437 42 english 21 Actualizaciones Preste atenci n a las diferencias en comparaci n con la versi n anterior N de la versi n actual V 12 11 12 1 Versi n anterior V 11 11 05 1 Actualizaci n en la secci n 5 7 2 1 SERION ELISA classic Brucella IgA IgG IgM CONTENIDO 1 USO PREVISTO PERTINENCIA DIAGN STICA PRINCIPIO DE LA PRUEBA SERION ELISA classic COMPONENTES DEL KIT MATERIAL NECESARIO PERO NO SUMINISTRADO CONSERVACI N Y ESTABILIDAD NO a R WO N PROCEDIMIENTO DE LA PRUEBA SERION ELISA classic 7 1 Evidencia de deterioro 7 2 Preparaci n y conservaci n de la muestra 7 3 Preparaci n de reactivos del kit 7 4 Visi n general procedimiento de la prueba 7 5 Procedimiento manual 7 6 Procedimiento automatizado 7 7 Control positivo control de exactitud 8 EVALUACI N DE LAS PRUEBAS 8 1 Cuantificaci n de punto simple con el m todo 4PL 8 2 Criterios de validez 8 3 C lculos del SERION ELISA classic Brucella IgA IgG IgM 8 4 L mites de cuantificaci n 8 5 Intervalos dudosos 8 6 Interpretaci n de resultados 8 7 Intervalos de referencia de individuos sanos 9 CARACTER STICAS DE FUNCIONAMIENTO 9 1 Sensibilidad y especificidad 9 2 Reproducibilidad 10 MEDIDAS DE SEGURIDAD 10 1 Declaraciones de advertencia 10 2 Eliminaci n 11 BIBLIOGRAF A N de la versi n actual V 12 11 12 1 Versi n previa V 11 11 05 1 SERION ELISA classic Brucella IgA IgG IgM Enzimoinmunoensayo para la determi
114. ipetagem do conjugado Tome cuidado para n o trocar as tampas dos frascos portugu s 7 A reprodutibilidade dos resultados depende dentre outros fatores da mistura cuidadosa dos reagentes preparados Antes de utilizar os soros de controle e o conjugado os recipientes dever o ser bem agitados As amostras tamb m devem ser bem misturadas ap s a diluic o p ex com um v rtex A pipetagem deve ser efetuada cuidadosamente observando se os tempos e temperaturas de incuba o prescritos Grandes diferen as de tempo entre a pipetagem do primeiro e do ltimo poco na adi o de amostras soros de controle conjugado e substrato levam a tempos de pr incuba o diferentes o que poder influenciar consideravelmente a precis o e a reprodutibilidade dos valores medidos S o cumprimento rigoroso destas instruc es garante resultados corretos O teste SERION ELISA classic s ser v lido se forem observados os crit rios de validac o espec ficos para o lote Estes crit rios est o indicados no certificado de controle de qualidade contido no kit Uma lavagem correta evita testes inespec ficos Por isso as instru es de utiliza o dos aparelhos de lavagem dever o ser observadas Os po os de fundo plano devem ser enchidos uniformemente com solu o de lavagem Ao fim do procedimento importante certificar se de que a solu o de lavagem foi completamente removida dos po os a fim de evitar efeitos de dilui o incon
115. is APMIS 96 171 6 Ariza J Pellicer T Pallares R Foz A Gudiol F 1992 Specific antibody profile in human brucellosis Clin Infect Dis 14 131 40 BgVV RKI 1996 Brucellosen Erkennung und Behandlung Merkblatt fiir rzte Brouqui P Raoult D 2000 Endocarditis due to rare and fastidious bacteria Clin Microbiol Rev 14 177 207 Corbel M J 1997 Brucellosis an overview Emerg Infect Dis 3 213 21 Gad El Rab M O Kambal A M 1998 Evaluation of a Brucella enzyme immunoassay test ELISA in comparison with bacteriological culture and agglutination J Infect 36 197 201 Gazapo E Gonzalez Lahoz J Subiza J L Baquero M Gil J de la Concha E G 1989 Changes in IgM and IgG antibody concentrations in brucellosis over time Importance for diagnosis and follow up J Infect Dis 159 219 25 Pellicer T Ariza J Foz A Pallares R Gudiol F 1988 Specific antibodies during relapse of human brucellosis J Infect Dis 157 918 24 Yagupsky P 1999 Detection of Brucellae in blood cultures J Clin Microbiol 37 3437 42 21 Atualizacoes Favor observar as altera es em compara o com a vers o anterior Vers o atual n V 12 11 12 1 Vers o anterior n V 11 11 05 1 Atualizac o na sec o 5 7 2 1 SERION ELISA classic Brucella IgA IgG IgM INDICE 1 UTILIZAGAO PREVISTA RELEVANCIA DIAGNOSTICA PRINC PIO DO ENSAIO SERION ELISA cl
116. k well B1 Negative Control well C1 Standard serum well D1 Standard serum well E1 Patient 1 Sample incubation for 60 minutes 5 min at 37 C 1 C in moist chamber After incubation wash all wells with washing solution by automated washer or manually aspirate or shake out the incubation solution fill each well with 300 ul washing solution aspirate or shake out the washing buffer repeat the washing procedure 3 times altogether 4 times dry by tapping the microtiter plate on a paper towel Addition of conjugate Add 100 ul of the ready to use IgA lgG lgM conjugate to the appropriate wells except substrate blank Conjugate incubation for 30 minutes 1 min at 37 C 1 C in moist chamber After incubation wash all wells with washing solution see above Addition of substrate Add 100 ul of ready to use substrate solution to each well including well for substrate blank Substrate incubation for 30 minutes 1 min at 37 C 1 C in moist chamber Stopping of the reaction Add 100 ul stopping solution to each well shake microtiter plate gently to mix Read extinction Read optical desity OD within 60 minutes at 405 nm against substrate blank reference wave length between 620 nm and 690 nm e g 650 nm Please note that under special working conditions internal laboratory adaptations of the incubation times may be necessary english 12 7 6 Automated Test Procedu
117. ku STOP 100 ul ODECTEN pri 405 nm 1 Speci ln pufry pro n sleduj c testy SERION ELISA classic IgG IgM Borrelia burgdorferi EBV EA IgG IgM Parvovirus B19 a IgG IgM Hantavirus Puumala Pro ru n pou it na konci promyvac ho procesu vyklepn te desticku na pap rovy ru n k cesky 11 7 5 Postup p i ru n m zpracov n testu 1 2 Umist te do ramecku pozadovany pocet jamek a pfipravte si pipetovac protokol Do p slu n ch jamek prou k mikrotitra n ho testu p idejte 100 pl nared n ho vzorku a kontroln s ra p ipraven k pou it Jednu jamku nechte volnou pro hol substr t blank nap IgA IgG IgM kvantitativn Jamka Jamka A1 Holy substr t blank Jamka B1 Negativn kontroln s rum Jamka C1 Standardn s rum Jamka D1 Standardn s rum Jamka E1 Pacient 1 Inkubace vzorku po dobu 60 minut 5 minut p i 37 C 1 C ve zvlh ovac komo e Po inkubaci promyjte v echny jamky prom vac m roztokem automatickou prom va kou nebo manu ln odsajte nebo vyt epte inkuba n roztok napl te ka dou jamku 300 ul prom vac ho roztoku odsajte nebo vyt epte prom vac pufr opakujte prom vac proces 3kr t dohromady 4kr t vysu te odkap n m mikrotitra n desky na filtra n m pap ru P id n konjug tu P idejte 100 jul konjug tu IgA IgG IgM do p slu n
118. l 1000 ml 1 0 ml 30 ml Tampao de dilui o para amostras pronto para uso Substrato pronto para uso Evitar a contaminac o da soluc o pronta para uso do substrato p ex utilizando pontas de pipetas esterilizadas Soluc o de parada pronto para uso portugu s 10 7 4 Execu o do teste apresenta o resumida SERION ELISA classic Brucella IgA IgG IgM quantitativo No caso de detecc o de IgM com absorc o de fator reumat ide ver N 7 2 1 Incubac o durante 15 minutos temperatura ambiente ou durante a noite a 4 C Dilui o das amostras Amostras dos doentes 11100 Adic o das amostras dilu das e dos soros de controle padr o prontos a utilizar 100 pl y INCUBACAO 60 min 37 C camara humida LAVAGEM 4 x 300 ul DIL WASH Adi o da solu o de conjugado APC 100 ul v INCUBACAO 30 min 37 C c mara h mida LAVAGEM 4 x 300 ul DIL WASH Adic o da soluc o de substrato pNPP 100 ul Vv r INCUBAGAO 30 min 37 C camara humida y Adi o da solu o de parada STOP 100 ul y LEITURA DA ABSORGAO a 405 nm Tamp es de dilui o especiais para os seguintes testes SERION ELISA classic Borrelia burgdorferi IgG IgM EBV EA IgG Parvovirus B19 IgM e Hantavirus Puumala IgG IgM Para lavagem manual no fim do procedimento bata suavemente a plac
119. los criterios de validaci n espec ficos del lote en el certificado de control de calidad Un lavado adecuado evita la falta de especificidad de la prueba Por lo tanto el procedimiento de lavado se debe llevar a cabo cuidadosamente Todos los pocillos de fondo plano se deben rellenar con vol menes iguales de soluci n amortiguadora de lavado Al final del procedimiento aseg rese de que los pocillos no tienen nada de soluci n amortiguadora de lavado para evitar efectos de diluci n no controlados Evite la formaci n de espuma Tenga cuidado para no da ar la inscripci n pat geno clase de anticuerpo en las tiras de prueba de microtitulaci n durante el lavado y aspiraci n para evitar confusiones 7 2 Preparaci n y conservaci n de la muestra Las muestras lip micas hemol ticas o ict ricas Suero o plasma nicamente deben analizarse con precauci n No se deben realizar pruebas de muestras evidentemente contaminadas El suero o plasma EDTA citrato heparina recogido de acuerdo con m todos normalizados de laboratorio son muestras apropiadas Las muestras no deben estar inactivadas por temperatura 7 2 1 Diluci n de muestras Antes de efectuar el an lisis las muestras del paciente se deben diluir en soluci n amortiguadora V2 como sigue SERION ELISA classic Brucella IgA IgG Vi V2 1 100 anadir 10 ul de la muestra del paciente a 1000 ul soluci n amortiguadora de diluci n Tras la diluci n y antes
120. lta concentra o Em raros casos faz se necess rio o emprego de conjugados especiais a fim de assegurar a qualidade dos nossos produtos Os conjugados especiais s o produzidos em lotes separados e n o apresentam o sinal Sendo assim n o podem ser substitu dos por outros conjugados Observar com aten o os avisos registados nas etiquetas Em estado fechado todos os componentes dos testes SERION ELISA classic poder o ser utilizados at o seu limite de validade vide as indica es da etiqueta desde que sejam armazenados corretamente Os reagentes n o devem ser utilizados ap s a data de validade Qualquer altera o ou a dilui o incorreta dos reagentes poder causar uma perda da sensibilidade Os reagentes do teste dever o ser protegidos contra a luz forte durante o armazenamento e a incuba o Ap s a utiliza o devem ser bem fechados a fim de evitar que sequem ou sejam contaminados O saco de alum nio para a microplaca somente deve ser cortado nos lugares previstos do lado marcado para que possa ser fechado novamente Em caso de danifica o do saco de alum nio ou de fechamento incompleto do mesmo as tiras n o utilizadas n o devem mais ser empregadas para testes Para evitar a contamina o empregar sempre t cnicas ass pticas para extrair as al quotas de reagentes Para evitar falsos resultados positivos a ponta da pipeta nunca dever tocar nem molhar a borda superior dos po os durante a p
121. med hgj koncentration konjugat med h g koncentration koniugat wysokim stezeniu konjug t s vysokou koncentr ciou konjugat z veliko koncentracijo Konjugat med hoy konsentrasjon Rheumafaktor Absorbens Rf Absorbens rheumatoid factor absorbent rf absorbent absorbant de facteur rhumato de rf absorbant adsorbente del fattore reumatoide adsorbente Rf a6cop6eur peBMarounHoro cakropa Rf a6cop6eur absorbente de factor reumatoide material absorbente de Hf Rf absorvente de factor reumat ide absorvente de Fr absorbent revmatoidn ho faktoru rf absorbent reumafaktor absorptionsmiddel rf absorptionsmiddel reumafaktor absorptionsmedel rf absorptionsmedel Absorbent czynnika reumatoidalnego absorbent RF absorbent reumatoidn ho faktora absorbent rf absorbent revmatoidnega faktorja absorbent RF Revmatoid faktor absorbent rf absorbent Verd nnungspuffer f r Serum dilution buffer for sera s rum pour le tampon de dilution tampone di diluizione per sieri pas6aBnatoLynh 6ycpep ana cbiBopoTku soluci n amortiguadora para los sueros tamp o de dilui o para soro edic pufr pro s ra fortyndingsbuffer til sera spadningsbuffert f r serum bufor rozcie czajacy do surowic pufor na riedenie s r pufer za red enje seruma Fortynningsbuffer til serum
122. n koncentrac protil tek a specifickou hodnot c tabulku pro danou ar i Na po d n je k dispozici hodnot c software SERION evaluate spole n se softwarov m n strojem SERION activity kter je zalo en na programu Microsoft Excel P i ka d m individu ln m testu se pou v standardn s rum pro kompenzaci b n ch odchylek testu a rovn pro kontrolu pr b hu testu Pro toto kontroln s rum stanov kontrola kvality v robce referen n hodnotu s rozmez m validity V tomto rozmez je zaji t na spr vn kvantifikace koncentrace protil tek esky 14 8 2 Krit ria validity OD hol ho substr tu blanku mus byt lt 0 25 Negativn kontrola mus d t negativn vysledek testu Pri pouzit kvantitativnich test SERION ELISA classic musi byt prum rna hodnota OD standardniho s ra po odecteni hol ho substratu blanku v rozmezi validity kter je ur eno konkr tn m osv d en m kontroly kvality pro danou ar i Odchylka hodnot OD standardn ho s ra nesm b t vy ne 20 Pokud tato krit ria nebudou spln na test nen platn a mus b t opakov n 8 3 V po et SERION ELISA classic Brucella IgA IgG IgM 8 3 1 Neautomatizovan hodnocen Pro hodnocen testu SERION ELISA classic je k testovac souprav p id no osv d en kontroly kvality specifick pro danou Sarzi se standardn k ivkou spole n s vyhodnocovac tabulkou aby bylo mo n z skan m
123. n at 2 8 C see expiry date stored protected from light Avoid contamination e g by using sterile tips 36 months as of Discard if solution turns yellow extinction against production aqua dest 0 25 OD Stopping solution After opening at room temperature see expiry date english 6 7 TEST PROCEDURE SERION ELISA classic 7 1 Evidence of Deterioration Only use SERION ELISA classic reagents when using SERION ELISA classic immunoassays The components must not be exchanged for reagents of other manufacturers Standard and control sera of SERION ELISA classic immunoassays are defined exclusively for the test kit to be used and must not be used in other lots Dilution buffer washing solution substrate and stop solution can be used for all SERION ELISA classic immunoassays irrespective of the lot and the test There are three different conjugate concentrations for each immunoglobulin class LOW MEDIUM HIGH The classification is written on each label as follows eg IgG low concentrated IgG conjugate IgG medium concentrated IgG conjugate IgG high concentrated IgG conjugate In rare cases the use of special conjugate is necessary to guarantee consistent quality of our products Special conjugates are produced in a separate lot and do not carry the sign and are not exchangeable with other conjugates Please pay close attention to information on labels Unopened all components of the SERION ELISA classic t
124. na distribuic o que se segue Dos 180 soros 179 99 496 foram negativos quando analisados com o teste SERION ELISA classic Brucella IgG e um soro 0 6 originou resultados positivos Dos 180 soros testados com o teste SERION ELISA classic Brucella IgA 180 100 foram negativos Al m disso os resultados da an lise dos 180 soros com o teste SERION ELISA classic Brucella IgM foram 178 soros 98 9 foram negativos 1 soro 0 6 reagiu de forma positiva e 1 soro 0 6 apresentou valores limite Esta distribuic o indica uma taxa de seropreval ncia de fundo de 1 na populac o em geral 9 CARACTER STICAS DE DESEMPENHO 9 1 Sensibilidade e especificidade Para determinar as caracter sticas de desempenho do teste SERION ELISA classic IgG IgM e IgA foi realizado um estudo que utilizou soros de 108 dadores de sangue saud veis e 132 soros de criancas internadas num hospital pedi trico 44 soros de doentes internados com outras doencas assim como de 27 doentes com suspeita de brucelose estes foram testados e comparados com um teste ELISA dispon vel no mercado Os resultados pr ximos dos valores limite n o foram inclu dos no c lculo da sensibilidade e da especificidade Caracter sticas de desempenho Sensibilidade Especificidade SERION ELISA classic Brucella IgA gt 99 gt 99 SERION ELISA classic Brucella IgG gt 99 96 99 3 SERION ELISA classic Brucella IgM 91 3 96 gt 99 portugu s
125. nacion de anticuerpos humanos Para uso diagnostico in vitro SERION ELISA classic Brucella IgA N de pedido ESR116A SERION ELISA classic Brucella IgG N de pedido ESR116G SERION ELISA classic Brucella IgM N de pedido ESR116M 1 USO PREVISTO Las pruebas de SERION ELISA classic Brucella IgA IgG e IgM son inmunoensayos cuantitativos y cualitativos para la detecci n de anticuerpos humanos en suero y plasma dirigidos frente al pat geno Brucella ssp La evaluaci n de clases de inmunoglobulinas individuales se puede utilizar para la determinaci n del contacto con el pat geno y el estad o de la enfermedad 2 PERTINENCIA DIAGN STICA Brucella ssp son bacterias gram negativas no m viles que viven como par sitos intracelulares en un amplio espectro de animales de granja La infecci n en seres humanos es producida principalmente por Brucella melitensis Fiebre de malta Brucella abortus enfermedad de Bang y Brucella suis El pat geno se transmite mediante animales infectados zoonosis sus excrementos y alimentos contaminados en particular productos l cteos no pasteurizados La enfermedad comienza con s ntomas generales que avanzan hasta fiebre moderada cuando comienza la fase aguda caracterizada por un aumento vespertino de la fiebre hepatomegalia y esplenomegalia o ganglios linf ticos inflamados La fiebre fluctuante con intervalos infebriles son caracter sticas de las infecciones por Brucella melitensis y Brucella
126. ng Solution ready to use english 10 7 4 Overview Test Procedure SERION ELISA classic Brucella IgA IgG IgM quantitative In case of IgM detection absorption of rheumatoid factor see No 7 2 1 Incubation 15 minutes at room temperature or over night at 4 C sample dilution patient s samples 14100 Pipette diluted samples and ready to use control standard sera into the microtest wells 100 ul y INCUBATION 60 Min 37 C moist chamber WASH 4 x 300 ul DIL WASH Pipette conjugate solution APC 100 ul INCUBATION 30 Min 37 C moist chamber WASH 4 x 300 ul DIL WASH Pipette substrate solution pNPP 100 INCUBATION 30 Min 37 C moist chamber y Pipette stopping solution STOP 100 ul y READ EXTINCTION at 405 nm Special dilution buffers for the following SERION ELISA classic tests Borrelia burgdorferi IgG IgM EBV EA IgG Parvovirus B19 IgM and Hantavirus Puumala IgG IgM For manual use tap plate at the end of the wash procedure on paper towel english 11 7 5 Manual Test Procedure 1 2 Place the required number of cavities in the frame and prepare a protocol sheet Add each 100 ul of diluted sample or ready to use controls into the appropriate wells of microtiter test strips Spare one well for substrate blank e g IgA lgG lgM quantitative well no well A1 Substrate blan
127. nsan mediante la multiplicaci n del valor medido actual obtenido con una muestra del paciente con el factor de correcci n F este factor se calcula como sigue Valor de referencia DO de suero patr n Valor actual DO de suero patr n El procedimiento es necesario para ajustar el nivel actual de la prueba del usuario con la curva est ndar espec fica del lote En primer lugar las desviaciones diarias tienen que ser corregidas calculando el factor de correcci n F 1 Se debe calcular la media de los dos valores DO del suero patr n y comprobar que se encuentra dentro del intervalo de validez dado 2 C lculo del factor F el valor de referencia dado se divide por la media de la extinci n del suero patr n F valor referencia extinci n suero STD valor medio extinci n suero STD 3 Todos los valores medidos de las muestras de pacientes se multiplican por F Las actividades de anticuerpo en Ul ml o U ml se pueden determinar a partir de la curva est ndar con los valores corregidos espa ol 16 8 3 2 Evaluaci n autom tica de la prueba con el software SERION evaluate Despu s de la entrada de los cuatro par metros y el valor de referencia del patr n de suero las actividades de anticuerpos se calculan en l nea a partir de cargas de pruebas SERION ELISA classic test procesadas y medidas mediante el software de evaluaci n SERION evaluate Si la densidad ptica del patr n est fuera del intervalo de validez aparec
128. ntrola kontrola p esnosti 8 HODNOCEN TESTU 8 1 Jednobodov kvantifikace pomoc metody 4PL 8 2 Krit ria validity 8 3 V po et SERION ELISA classic Brucella IgA IgG IgM 8 4 Meze kvantifikace 8 5 Hrani n rozp t 8 6 Interpretace v sledk 8 7 Referen n rozsah zdrav ch jednotlivc 9 CHARAKTERISTIKY V SLEDK 9 1 Citlivost a specifi nost 9 2 Reprodukovatelnost 10 BEZPE NOSTN OPAT EN 10 1 V stra n upozorn n 10 2 Likvidace 11 ODKAZY Sou asn verze V V 12 11 12 1 p edchoz verze V 11 11 05 1 SERION ELISA classic Brucella IgA IgG IgM Enzymova imunoanalyza ke stanoveni humannich protilatek pro pou it v diagnostice in vitro SERION ELISA classic Brucella IgA Kat ESR116A SERION ELISA classic Brucella IgG Kat ESR116G SERION ELISA classic Brucella IgM Kat ESR116M 1 POU IT Testy SERION ELISA classic Brucella IgA IgG a IgM jsou kvantitativn a kvalitativn imunoanal zy k detekci hum nn ch protil tek proti hum nn patogenn Brucella ssp v s ru a plazm Hodnocen individu ln ch imunoglobulinov ch t d Ize pou t ke stanoven kontaktu s patogenem a st dia nemoci 2 DIAGNOSTICK RELEVANCE Brucella ssp jsou gramnegativni nepohybliv bakterie kter Ziji jako intracelul rn parazit Sirok ho spektra zem d lskych zvifat Hum nn infekce je prim rn zp sobena druhy Brucella melitensis maltska hore ka Brucella abortus Bangova choroba B
129. ntrols encontra se descrita em manual de instru es espec fico portugu s 13 8 VALIDA O DO TESTE SERION ELISA classic Brucella IgA IgG IgM 8 1 Quantificac o de um ponto de acordo com o m todo 4PL Uma atribuic o otimizada dos sinais de absorc o para valores quantitativos garantida pelo uso de fun es n o lineares que ajustam uma curva sigmoide sem qualquer transforma o posterior para valores de DO A determina o da concentra o de anticorpos com o kit SERION ELISA classic realiza se de acordo com o modelo 4 parameter logistic log 4PL cuja fun o matem tica descrita pela f rmula seguinte D A C em conc 149 Os par metros A B C e D representam exatamente o perfil da curva e definem 1 ass ntota inferior c par metro A 2 subida da curva c par metro B 3 ponto de inflex o da curva c par metro C 4 ass tota superior c par metro D O Instituto Virion Serion GmbH W rzburg Alemanha averigua as curvas padr o para cada lote do kit em testes repetidos realizados sob timas condi es Desta forma os laborat rios poupam os elevados custos e tempo dispendidos na construc o da curva padr o Para avaliar as concentrac es de anticorpos em cada embalagem do kit SERION ELISA classic fornecida uma curva padr o e uma tabela de valores espec ficos para o lote O software de avaliac o SERION evaluate e a ferramenta para Microsoft Excel SERION avidity est o disp
130. o dos valores de absorc o efetuada automaticamente Na impress o dos valores de absorc o vers o padr o aparecer C digo da amostra Valor DO Ul ml ou U ml Avaliac o 8 4 Limites de quantificac o Os limites de quantificac o est o especificados no certificado de controle de qualidade do teste SERION ELISA classic A linearidade da diluic o dentro deste intervalo foi demonstrada em estudos de avaliac o abrangentes No caso de a amostra do paciente apresentar um resultado acima do limite de quantificac o a amostra poder ser analisada com uma dilui o maior A atividade de anticorpo determinada deste modo dever ser multiplicada pelo fator de dilui o adicional 8 5 Intervalos borderline Os intervalos borderline dos testes SERION ELISA classic Brucella IgA IgG IgM est o especificados nos certificados de controle de qualidade e indicam as gamas dos resultados de teste limites Valores de teste obtidos de amostras de pacientes que se situem abaixo deste intervalo indicam resultados negativos valores que se situem acima deste intervalo s o interpretados como positivos Nos casos em que os resultados se encontrem dentro do intervalo borderline n o poss vel uma interpreta o definitiva Nestes casos o teste deve ser repetido paralelamente a uma outra amostra colhida do paciente uma ou duas semanas depois par s rico portugu s 17 8 6 Interpreta o dos resultados O diagn stico
131. odchylka Varia n koeficient CV x 100 Pr m rn hodnota OD SERION ELISA classic Brucella IgA Pr mern Pr m rn Vzorek hodnota y hodnota OD 9 OD Inter assay CV slab pozitivn pozitivn siln pozitivn SERION ELISA classic Brucella IgG Pr mern jitta asss Pr m rn Vzorek hodnota y hodnota OD OD Inter assay CV slab pozitivn pozitivn siln pozitivn SERION ELISA classic Brucella IgM Pr mern intpacases Pr m rn Vzorek hodnota y hodnota OD 65 OD Inter assay CV slab pozitivn pozitivn siln pozitivn esky 19 10 BEZPE NOSTN OPAT EN 10 1 V stra n upozorn n SERION ELISA classic je ur ena k pou v n kvalifikovan m person lem kter je obezn men se spr vnou laboratorn prax Se v emi reagenciemi v souprav a vzorky hum nn ch biologick ch materi l se mus pe liv nakl dat s uplatn n m z sad zaveden spr vn laboratorn praxe Tato souprava obsahuje slo ky lidsk krve A koliv v echna kontroln s ra a s ra pro stanoven horn a doln hranice norm ln ch hodnot cut off s ra byla negativn s ohledem na protil tky proti HIV HBs Ag povrchov antigenu viru hepatitidy B a HCV je zapot eb je pova ovat za potenci ln infek n Nepipetujte sty Neku te nejezte ani nepijte v m stech kde se nakl d se vzork
132. on veis sob solicitac o Para compensar varia es normais de testes e para poder verificar a qualidade dos testes realizados utiliza se o soro padr o a cada teste No controle de qualidade do fabricante s o atribu dos a este soro de controle um valor de refer ncia e um intervalo de validade Dentro deste intervalo a quantificac o da concentrac o de anticorpos segura e confi vel portugu s 14 8 2 Crit rios de validac o do teste O branco de substrato dever ter um valor DO lt 0 25 O controle negativo dever produzir um resultado de teste negativo Nos testes quantitativos SERION ELISA classic o valor DO m dio do soro padr o ap s a deduc o do branco de substrato dever encontrar se dentro do intervalo de validade indicado no certificado de controle de qualidade espec fico para o lote A variac o dos valores DO do soro padr o n o dever ser maior que 20 Se estes crit rios n o forem satisfeitos o teste ser inv lido e dever ser repetido 8 3 C lculos SERION ELISA classic Brucella IgA IgG IgM 8 3 1 Avaliac o nao automatizada Para a avaliac o dos testes SERION ELISA classic fornecido em cada kit um certificado de controle de qualidade espec fico para o lote que cont m a curva padr o e uma tabela de valores Com base nestas os valores DO obtidos poder o ser atribu dos as atividades de anticorpos correspondentes O branco de substrato dever ser descontado de todos os valo
133. ordo com a Directiva 98 79 CE relativo aos dispositivos m dicos de diagn stico in vitro segundo a lista B do anexo zna en CE podle sm rnice IVD 98 79 ES podle p loh seznamu B CE meerkning iht IVD retningslinje 98 79 EF iflg anneks liste B CE markning enligt riktlinjerna f r IVD i direktiv 98 79 EC bilaga II lista B Oznakowanie CE zgodne z wytycznymi dot diagnostyki in vitro 98 79 EC zgodnie z aneksem Il lista B ozna enie CE podla smernice IVD 98 79 ES v znen dodatku zoznam B oznaka CE skladna s smernico IVD 98 79 ES in seznamom B v Dodatku II CE merking i henhold til IVD retningslinjer 98 79 EGF tillegg liste B Verfallsdatum expiry date date d expiration data di scadenza rogHoctu no fecha de caducidad data de validade datum exspirace udlobsdato f rfallodatum data up ywu waznosci datum exspir cie datum izteka roka uporabnosti utlapsdatp Mikrotiterplatte brechbare Streifen microtiter plate breakable strips plaque de microtitration bandelettes d tachables piastra per microtitolazione strisce separabili mukpoTuTpoBanbHaa naHenb OTpbIBHbIe placa de microtitulaci n tiras rompibles pikporirAorro nong placa de microtitulac o tiras quebr veis mikrotitra n deska rozlomiteln prou ky mikrotiterplade afbraekkelige strimler mikrotiterplatta brytbar
134. oxvTenbHble KOHTponn control positivo controlo positivo pozitivn kontrola positiv kontrol positiv kontroll Kontrola pozytywna pozitivna kontrola pozitivna kontrola Positiv kontroll Grenzwertiges Serum cut off serum S rum seuil siero cut off cowuwrerbHble norpaHuyHbie suero de corte cut off soro cut off cut off s rum cutoff serum cutoff serum Surowica cut off s rum na ur enie hrani nej hodnoty mejni serum Stoppserum Negativkontrolle negative control Contr le n gatif controllo negativo KOHTPONM control negativo controlo negativo negativn kontrola negativ kontrol negativ kontroll Kontrola negatywna negat vna kontrola negativna kontrola Negativ kontroll Alkalisches Phosphatase Konjugat antihuman alkaline phosphatase conjugate anti human conjugu phosphatase alcaline anti humain coniugato con fosfatasi alcalina anti umano aHruuenoBeuecku LUENOYHON cpocoparasb conjugado anti humano de fosfatasa alcalina conjugado anti humano com fosfatase alcalina konjug t alkalick fosfat zy anti hum nn alkalisk phosphatase konjugat antihumant antihumant alkaliskt fosfatas konjugat Anty ludzki koniugat fosfatazy alkalicznej konjug t antihum nnej alkalickej fosfat zy konjugat alkalne
135. re SERION ELISA are suited for processing on automats and evaluated for use with Immunomat as well as with DYNEX DSX and DS2 The automated processing is performed analogous to manual use Please note that under special working conditions internal laboratory adaptations of the incubation times may be necessary 7 7 Positive Control Accuracy Control For the periodic verification of the test method in order to fulfil the requirements of laboratory internal quality management systems we recommend using SERION ELISA controls to determine precision and accuracy of SERION ELISA classic test runs The use of SERION ELISA controls is described in specific instruction manuals english 13 8 TEST EVALUATION SERION ELISA classic Brucella IgA IgG IgM 8 1 Single Point Quantification with the 4PL Method Optimised assignment of extinction signals to quantitative values is guaranteed by using non linear functions which adjust a sigmoide curve without any further transformation to OD values Determination of antibody concentrations with the SERION ELISA classic is carried out by the 4 parameter logistic log model 4 PL which is ideal for exact curve fitting It is based on the formula D A C In Conc 149 The parameters A B C and D are representative for the exact shape of the curve 1 lower asymptote c parameter A 2 slope of the curve c parameter B 3 turning point c parameter C 4 upper asymptote c parameter
136. res DO antes das avalia es M todo 1 Avalia o qualitativa Para a determina o do intervalo cut off multiplica se o valor m dio da DO do soro padr o pelos valores num ricos indicados no certificado de controle de qualidade vide as f rmulas para os sistemas especiais p ex DO 0 502 x valor m dio PADR O no limite superior de cut off DO 0 352 x valor m dio PADRAO no limite inferior de cut off Se por exemplo o valor m dio de absor o do soro padr o for de 0 64 o intervalo cut off ser de 0 225 a 0 321 portugu s 15 M todo 2 Determinac o cont nua das atividades de anticorpos por meio da curva padr o As varia es interensaios varia es nos testes que ocorrem no dia a dia ou de laborat rio para laborat rio s o compensadas atrav s da multiplicac o do valor de medic o atual das amostras dos pacientes pelo fator de correc o F Este fator calculado do seguinte modo valor DO de refer ncia do soro padr o valor DO atual do soro padr o Este procedimento necess rio para ajustar o n vel atual do teste do t cnico do laborat rio curva padr o espec fica do lote Primeiro as varia es di rias dever o ser corrigidas por meio do c lculo do fator F 1 Calcular o valor m dio dos dois valores DO do padr o e verificar se o valor se encontra na gama de validade indicada 2 C lculo do fator F o valor de refer ncia indicado dever ser dividido pelo valor m dio da
137. rucella suis a Brucella canis Patogen se p en infikovan mi zv aty zoon za jejich v kaly a kontaminovanou stravou zvl t nepasterizovan mi ml n mi v robky Onemocn n za n v eobecn mi p znaky kter se rozv jej do st edn siln hore ky v za tku akutn f ze co se projevuje hore kou zvy uj c se ve er hepatomegali a splenomegali p padn otekl mi lymfatick mi uzlinami Pro infekce Brucella melitensis a Brucella suis je charakteristick hore ka unduluj c ho charakteru s afebriln mi intervaly Je mo n spont nn uzdraven nebo p echod do chronick ho st dia se irok m spektrem p znak V chronick m st diu m e b t zasa eno v ce org n i org nov ch syst m kost nebo kloub Z histologick ho pohledu se vinfikovan ch tk n ch objevuj charakteristick granulomy Bakteri ln endokarditida je smrteln pokud nen l ena B hem pozdn ho st dia brucel zy se mohou vyskytnout neurologick a dokonce i psychiatrick manifestace Pro diferenci ln diagn zu je t eba br t v vahu n sleduj c onemocn n b i n tyfus lymfom tuberkul za tular mie boreli za virov loutenka ch ipka D ky prom nn mu klinick mu obrazu chronick brucel zy je diagnostika mo n pouze po p m m zji t n patogenu nebo detekci specifick protil tkov odezvy v s ru nebo mozkom n m moku P m zji t n patogenu v kultiva
138. rucellosis an overview Emerg Infect Dis 3 213 21 Gad El Rab M O Kambal A M 1998 Evaluation of a Brucella enzyme immunoassay test ELISA in comparison with bacteriological culture and agglutination J Infect 36 197 201 Gazapo E Gonzalez Lahoz J Subiza J L Baquero M Gil J de la Concha E G 1989 Changes in IgM and IgG antibody concentrations in brucellosis over time Importance for diagnosis and follow up J Infect Dis 159 219 25 Pellicer T Ariza J Foz A Pallares R Gudiol F 1988 Specific antibodies during relapse of human brucellosis J Infect Dis 157 918 24 Yagupsky P 1999 Detection of Brucellae in blood cultures J Clin Microbiol 37 3437 42 portugu s 21 Aktualizace V nujte prosim pozornost rozd l m pri porovnani s predchozi verzi Cislo aktualni verze V 12 11 12 1 Predchoz verze V 11 11 05 1 Aktualizace v odstavci 5 7 2 1 SERION ELISA classic Brucella IgA IgG IgM OBSAH 1 POUZIT 2 DIAGNOSTICK RELEVANCE 3 PRINCIP TESTU SERION ELISA classic 4 SLOZEN KITU 5 POZADOVANY MATERI L KTERY NEN PREDM TEM DOD VKY 6 UCHOV V N A STABILITA 7 SERION ELISA classic POSTUP PRI TESTU 7 1 D kaz o zhor en kvality 7 2 P prava vzorku a uchov v n 7 3 P prava reagenci soupravy 7 4 P ehled pracovn postup 7 5 Postup p i ru n m zpracov n testu 7 6 Postup p i automatick m zpracov n testu 7 7 Pozitivn ko
139. s correspondentes As cavidades da microplaca do kit SERION ELISA classic s o revestidas com ant genos espec ficos do agente patog nico de interesse Se existirem anticorpos na amostra de soro do paciente eles s o ligados ao ant geno fixo Um anticorpo secund rio que foi conjugado com a enzima fosfatase alcalina detecta e liga se ao complexo imune O substrato incolor p nitrofenilfosfato ent o convertido no produto corado p nitrofenol A intensidade do sinal do produto desta reac o proporcional concentrac o do analito na amostra e medido por fotometria portugu s 3 4 COMPONENTES DO KIT Componentes do teste Unidades volume Tiras de microplacas quebr veis cada uma com oito pocos individuais 12 revestidos com ant genos unidades total de 96 po os MTP 1 moldura de microplaca O material de revestimento est inativado Soro padr o pronto para uso STD 2x2ml Soro humano dilu do em solu o proteica tamponada negativo para Ac anti HIV Ag HBs ant geno de superf cie do v rus da hepatite B e Ac anti HCV conservante azida de s dio a lt 0 1 96 corante amaranto O Soro de controle negativo pronto para uso NEG 2 ml Soro humano dilu do em solu o proteica tamponada negativo para Ac anti HIV Ag HBs ant geno de superf cie do v rus da hepatite B e Ac anti HCV conservante azida de s dio a 0 1 96 corante verde lissamina V
140. se 1 Coxiella burnetii Q fever phase 1 Coxiella burnetii Q Fieber Phase 2 Coxiella burnetii Q fever phase 2 Aspergillus fumigatus Enterovirus Coxsackievirus Echovirus Epstein Barr Virus VCA Epstein Barr Virus EBNA 1 Epstein Barr Virus Early Antigen Chlamydia Chlamydia pneumoniae Chlamydia trachomatis Yersinia Campylobacter jejuni Bacillus anthracis Francisella tularensis Tyroperoxidase Thyroglobulin Hantavirus Puumala
141. semanas no caso de utiliza o e conserva o corretas at expirar o prazo de validade ver o prazo de validade 24 meses a partir da data de fabrica o ver o prazo de validade 28 meses a partir da data de fabrica o ver o prazo de validade 36 meses a partir da data de fabrica o 24 meses ver o prazo de validade 2 semanas 1 semana ver o prazo de validade 36 meses a partir da data de fabrica o Solu o de parada Ap s a abertura temperatura ambiente ver o prazo de validade portugu s 7 Execu o do teste SERION ELISA classic 7 1 Instru es gerais Utilizar exclusivamente os reagentes SERION ELISA classic uma vez que est o otimizados para o sistema e n o os substituir por reagentes de outros fabricantes Os soros padr o e os soros de controle dos imunoensaios SERION ELISA classic est o ajustados para o lote espec fico dos testes dos kits e n o podem ser utilizados em outros lotes O tamp o de dilui o a solu o de lavagem o substrato e a solu o de parada poder o ser utilizados em todos os testes SERION ELISA classic independentemente do lote e do kit Para cada classe de imunoglobulina existem tr s concentra es diferentes de conjugado BAIXA MEDIA ALTA A classifica o consta em cada etiqueta conforme descrito a seguir p ex IgG conjugado IgG de baixa concentra o IgG conjugado IgG de m dia concentra o IgG conjugado IgG de a
142. t tulos elevados de anticuerpos IgG e IgA son relevantes en el diagn stico e indican una infecci n cr nica temprana o persistente Sin embargo se ha registrado que solamente en el 60 de los casos un aumento del t tulo de IgG viene acompa ado de un aumento concomitante de IgA Por contraste solamente el 33 de los pacientes muestra un aumento en los t tulos de IgM durante la fase cr nica Debe considerarse la posibilidad de reacciones cruzadas entre Brucella y Yersinia enterocolitica 09 Francisella tularensis y Vibrio cholerae Tambi n son posibles reacciones positivas despu s de una vacunaci n contra el c lera 8 7 Intervalos de referencia de individuos sanos Las pruebas de sueros de donantes de sangre elegidos al azar recogidos en la regi n del sur de Alemania con las pruebas de SERION ELISA classic Brucella IgA IgG e IgM dieron como resultado la distribuci n siguiente De 180 sueros 179 99 4 fueron negativos cuando se ensayaron con la prueba de SERION ELISA classic Brucella IgG y una muestra 0 6 arroj un resultado positivo De 180 sueros ensayados con la prueba de SERION ELISA classic Brucella IgA 180 100 fueron negativos Adem s los resultados del ensayo de 180 sueros en la prueba de SERION ELISA classic Brucella IgM fueron como sigue 178 sueros 98 9 ensayados fueron negativos un suero 0 6 positivo y una 0 6 muestra fue de resultado dudoso Esta distribuci n indica una tasa de seroprevalencia b
143. te la soluci n de incubaci n Llene cada pocillo con 300 ul de soluci n de lavado aspire o agite la soluci n amortiguadora de lavado repita el procedimiento de lavado 3 veces jen total son 4 veces s quelo dando ligeros golpecitos a la placa de microtitulaci n sobre una toallita de papel Adici n de conjugado A ada 100 ul of del conjugado listo para usar IgA IgG IgM a los pocillos apropiados excepto el sustrato en blanco Incubaci n del conjugado durante 30 minutos 1 min a 37 C 1 C en la c mara de humectaci n Tras la incubaci n lave todos los pocillos con soluci n de lavado ver m s arriba Adici n de sustrato A ada 100 ul de soluci n de sustrato listo para usar a cada pocillo incluyendo el pocillo para el sustrato en blanco Incubaci n del sustrato durante 30 minutos 1 min a 37 C 1 C en la c mara de humectaci n Parada de la reacci n A ada 100 ul de soluci n de parada a cada pocillo agite suavemente la placa de microtitulaci n para mezclar Lectura de la extinci n Lea la densidad ptica DO en los siguientes 60 minutos a 405 nm frente al sustrato blanco la longitud de onda de referencia entre 620 nm y 690 nm p ej 650 nm Se advierte que bajo condiciones de trabajo especiales internas del laboratorio pueden ser necesarias adaptaciones de los tiempos de incubaci n espafiol 12 7 6 Procedimiento automatizado SERION ELISA es apto para el procesado
144. trol veis Evite a forma o de espuma Durante a lavagem e a aspira o tome cuidado para n o danificar a inscri o pat geno classe de anticorpo das tiras de microtitula o a fim de evitar equ vocos 7 2 Prepara o e armazenamento das amostras Amostras lip micas hemol ticas ou ict ricas soro ou plasma s dever o ser utilizadas sob cuidado espec fico Obviamente amostras contaminadas n o devem ser testadas As amostras de soro ou plasma EDTA citrato heparina coletadas de acordo com m todos laboratoriais padronizados s o consideradas ideais As amostras n o devem ser inativadas termicamente 7 2 1 Dilui o das amostras Antes do inicio do teste diluir as amostras dos pacientes em tamp o de dilui o V2 do seguinte modo SERION ELISA classic Brucella IgA IgG Vi V2 1 100 em 10 ul de amostra do paciente por 1000 ul de tamp o de dilui o Ap s cada dilui o e antes da pipetagem na microplaca as amostras devem ser bem misturadas a fim de se obter uma solu o homog nea portugu s 8 SERION ELISA classic Brucella IgM Interfer ncia de fatores reumat ides Os fatores reumat ides sao predominantemente anticorpos da classe IgM que se ligam de prefer ncia aos imunocomplexos IgG A presenca de anticorpos IgM inespec ficos fatores reumat ides pode produzir falsos resultados positivos na prova espec fica de IgM Al m disso existe a possibilidade de os anticorpos lgM de
145. uci n conjugado APC 100 ul v INCUBACI N 30 Min 37 C c mara de humectaci n LAVAR 4 x 300 ul DIL WASH Pipetear soluci n sustrato pNPP 100 INCUBACI N 30 Min 37 C c mara de humectaci n i Pipetear soluci n parada STOP 100 ul i LEER EXTINCI N a 405 nm Soluciones amortiguadoras de diluci n especiales para las siguientes pruebasSERION ELISA classic Borrelia burgdorferi IgG IgM EBV EA IgG Parvovirus B19 IgM y Hantavirus puumala IgG IgM Para uso manual Ligeros golpecitos al final del procedimiento de lavado sobre toallita de papel espa ol 11 7 5 Procedimiento manual 1 2 10 11 Coloque el n mero necesario de pocillos en el bastidor y prepare una hoja de protocolo A ada 100 ul de muestra diluida o controles listos para usar en los pocillos apropiados de las tiras de prueba de microtitulaci n Reserve un pocillo para el blanco del sustrato p ej IgA IgG IgM cuantitativo N pocillo pocillo A1 Sustrato en blanco pocillo B1 Control negativo pocillo C1 Suero patr n pocillo D1 Suero patr n pocillo E1 1 del paciente Incubaci n de la muestra durante 60 minutos 5 min a 37 C 1 C en la c mara de humectaci n Tras la incubaci n lave todos los pocillos con soluci n de lavado mediante dispositivo automatizado o manualmente aspire o agi
146. uestras del paciente V4 se deben diluir en esta soluci n amortiguadora de diluci n Rf V3 Va Va 2 14100 a adir 10ul della muestra del paciente a 1000 ul soluci n amortiguadora de diluci n Rf Tras la diluci n y antes de pipetear a la placa de microtitulaci n se deben mezclar a fondo las muestras para preparar una soluci n homog nea 7 2 2 Conservaci n de las muestras Las muestras del paciente no se deben conservar durante m s de 7 d as a 2 8 C Es posible ampliar la conservaci n a lt 20 C Evite la congelaci n y descongelaci n repetida de las muestras Las muestras diluidas se pueden almacenar a 2 8 durante una semana espa ol 9 7 3 Preparaci n de reactivos del kit 7 3 1 7 3 2 7 3 3 7 3 4 7 3 5 7 3 6 7 3 7 Lleve todos los reactivos hasta la temperatura ambiente antes de realizar las pruebas Tiras de prueba de microtitulaci n Las tiras de pruebas de microtitulaci n han sido envasadas junto con un desecante en una bolsa de aluminio Extraiga del bastidor los huecos no necesarios y p ngalos dentro de la bolsa de aluminio Cierre cuidadosamente la bolsa para garantizar condiciones herm ticas Sueros control sueros patr n Los sueros control y patr n est n listos para usar y no se deben diluir m s Para cada ejecuci n de las pruebas independientemente del n mero de tiras de pruebas de microtitulaci n que se vayan a utilizar se deben incluir los sueros
147. ur months after successful therapy a significant reduction in IgG titers may be evident however in the majority of patients this will not be such that they appear to be seronegative IgM antibody titers usually decrease after two to three months but may in some cases persist for several months after infection The most important parameters for diagnosis of chronic brucellosis are IgG and IgA titers Elevated IgG and IgA antibody titers are diagnostically relevant and indicate an early or persisting chronic infection However it has been recorded that only in 60 of cases is an increase in IgG titer accompanied by a concomitant increase in IgA In contrast only 33 of patients display a rise in IgM titers during the chronic phase Crossreactions between Brucella and Yersinia enterocolitica 09 Francisella tularensis Virbrio cholerae have to be considered Positive reactions after cholera vaccination are also possible 8 7 Reference Range of healthy Individuals Testing of random blood donor sera collected in the region of southern Germany with the SERION ELISA classic Brucella IgA IgG and IgM tests resulted in the following distribution Of 180 sera 179 99 4 were negative when tested with the SERION ELISA classic Brucella IgG test and one sample 0 6 yielded a positive result From 180 sera tested with the SERION ELISA classic Brucella IgA test 180 100 were negative In addition results from testing 180 sera in the SERION ELISA cl
148. y nebo reagenciemi kitu Pou vejte rukavice na jedno pou it laboratorn pl a bezpe nostn br le p i pr ci s reagenciemi v kitu nebo se vzorky Pot si d kladn omyjte ruce Materi l od pacienta a dal potenci ln infek n materi l mus b t po dokon en testu dekontaminov n Reagencie mus b t uchov v ny na bezpe n m m st a chr n ny p ed neopr vn n mi osobami nap d tmi Zastavovac roztok rav C zp sobuje polept n R34 P i manipulaci pou vejte rukavice na jedno pou it laboratorn pl a bezpe nostn br le 10 2 Likvidace Pros m dodr ujte p slu n z konn po adavky esky 20 11 ODKAZY 1 2 3 4 5 6 7 8 9 cesky Araj G F Lulu A R Khateeb M I Saadah M A Shakir R A 1988 ELISA versus routine tests in the diagnosis of patients with systemic and neurobrucellosis APMIS 96 171 6 Ariza J Pellicer T Pallares R Foz A Gudiol F 1992 Specific antibody profile in human brucellosis Clin Infect Dis 14 131 40 BgVV RKI 1996 Brucellosen Erkennung und Behandlung Merkblatt fiir rzte Brouqui P Raoult D 2000 Endocarditis due to rare and fastidious bacteria Clin Microbiol Rev 14 177 207 Corbel M J 1997 Brucellosis an overview Emerg Infect Dis 3 213 21 Gad El Rab M O Kambal A M 1998 Evaluation of a Brucella enzyme immunoassa
149. y products The disease starts with general symptoms progressing to moderate fever as the acute phase begins characterized by rising fever in the evenings hepatomegaly and splenomegaly or swollen lymph nodes Undulating fever with afebrile intervals are characteristic for Brucella melitensis and Brucella suis infections Spontaneous healing or transition into a chronic stage with a wide spectrum of symptoms is possible Multiple organs or organ systems bones or joints can be affected during the chronic stage Histologically characteristic granulomas are observed in infected tissues Bacterial endocarditis is fatal if it remains untreated During the late stage of brucellosis neurologic and even psychiatric manifestations can occur For differential diagnosis the following diseases should be considered typhus abdominalis lymphoma tuberculosis tularemia borreliosis viral hepatitis influenza Due to the variable clinical picture of chronic brucellosis diagnosis is possible only by direct detection of the pathogen or detection of specific antibody response in serum or CSF Direct pathogen detection in culture systems can be performed with punctate from blood bone marrow synovia or urine but the special nutrient demands of Borrelia makes this difficult and limited to specialist laboratories More rapid results can be obtained using serological methods such as agglutination tests or complement fixation tests To differentiate between acute
150. y test ELISA in comparison with bacteriological culture and agglutination J Infect 36 197 201 Gazapo E Gonzalez Lahoz J Subiza J L Baquero M Gil J de la Concha E G 1989 Changes in IgM and IgG antibody concentrations in brucellosis over time Importance for diagnosis and follow up J Infect Dis 159 219 25 Pellicer T Ariza J Foz A Pallares R Gudiol F 1988 Specific antibodies during relapse of human brucellosis J Infect Dis 157 918 24 Yagupsky P 1999 Detection of Brucellae in blood cultures J Clin Microbiol 37 3437 42 21 SERION ELISA classic V 11 12 1 Symbole auf den Etiketten symbols on labels symboles et tiquettes simboli sulle etichette cumBonbi Ha aTukeTkax s mbolos sobre las etiquetas s mbolos nos r tulos Symboly na t tc ch symboler p etiketter symboler p etiketterna Symbole na etykietach symboly na ozna en Simboli na oznakah symbol p etiketter REF 20 0197 MTP AG Hersteller Manufacturer Fabricant Produttore TIpousBonurenbe Fabricante Fabricante Vyrobce Fremstiller Tillverkare Producent Vyrobca Izdelovalec Produsent Ausreichend f r 96 Tests sufficient for 96 tests suffisant pour 96 tests sufficiente per 96 test ana 96 suficiente para 96 pruebas

Brucella V 12 eng NEU

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