SeroCTTM IgG - Savyon Diagnostics
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1. se poss vel apresentar o r tulo 4 Todos os componentes deste kit foram calibrados e testados por lotes N o se recomenda a mistura de componentes provenientes de lotes diferentes pois poder afectar os resultados Conserva o e Estabilidade dos Reagentes Material necess rio mas n o fornecido 1 Tubos de ensaio limpos para dilui o dos soros dos pacientes 2 Frasco de pl stico descart vel para dilui o do conjugado HRP anti lgG humana Micropipetas ajust veis ou pipetas multicanal 5 50 50 200 e 200 1000 ul e pontas descart veis Bal o volum trico de um litro Uma proveta volum trica de 50 ml Frasco de lavagem Papel absorvente Agitador autom tico Banho a 37 C com cobertura ou c mara h mida colocada numa incubadora a 37 C 10 Leitor de ELISA com filtro de 450 nm 11 Agua destilada ou desionizada o OND O E 1 Todos os reagentes fornecidos devem ser armazenados a 2 8 C Os frascos n o abertos de reagentes s o est veis at a expira o da data de validade na embalagem do kit A exposi o temperatura ambiente dos componentes selados ou fechados no local de origem durante algumas horas n o provocar danos nos reagentes N O CONGELAR 2 Uma vez aberto os elementos deste kit conservam se at 90 dias 3 As tiras n o usadas devem ser conservadas na bolsa de alum nio com a sua saqueta dessecante enrolando a extremidade e selando com fita ade2. 1992 Proposal of Chlamydia pecorum sp nov for Chlamydia strains derived from ruminants Int J Syst Bacteriol 42 306 308 Stephens R S Tam M R Kuo C C and Nowinski R C 1982 Monoclonal antibodies to Chlamydia trachomatis antibody specificities and antigen characterization J Immunol 128 1083 1089 Stephens R S Sanchez Pescador R Wagar E A Inouye C and Urdea M S 1987 Diversity of Chlamydia trachomatis major outer membrane protein genes J Bacteriol 169 3879 3885 Yuan Y Zhang Y X Watkins N G and Caldwell H D 1989 Nucleotide and Deduced Amino Acid Sequences for the Four Variable Domains of the Major Outer Membrane Proteins of the 15 Chlamydia trachomatis Serovars Infection and Immunity 57 1040 1049 Copyright 1989 American Society for Microbiology Wang S P Kuo C C Barnes R C Stephens R S and Grayston J T 1985 Immunotyping of Chlamydia trachomatis with monoclonal antibodies J Infect Dis 152 791 800 Treharne J D 1985 The community epidemiology of trachoma Rev Infect Dis 7 760 763 Piura B Sarov l Sarov B Kleinman D Chaim W and Insler V 1985 Serum IgG and IgA antibodies specific for Chlamydia trachomatis in salpingitis patients as determined by the immunoperoxidase assay Eur J Epidemiol 1 110 116 Wang S P Grayston J T Kuo C C Alexander E R and Holmes K K 1977 SeroDiagnosis of Chlamydia trachomatis infe
3. C 0483 SeroCT IgG ELISA para detec o de anticorpos IgG contra Chlamydia trachomatis em soro humano Manual de Instru es Kit de teste para 96 determina es Cat logo N A181 01 Kit de teste para 192 determina es Cat logo N B181 01 Para Diagn stico In Vitro Apenas para uso profissional Armazenar a 2 8 C N o Congelar Savyon Diagnostics Ltd 3 Habosem St Ashdod 77610 ISRAEL Tel 972 8 8562920 Fax 972 8 85231 76 E mail support savyondiagnostic com Interesse Clinico O kit SerocT IgG foi designado para a detec o de anticorpos IgG espec ficos contra Chlamydia trachomatis em soro humano O kit Savyon SeroCT IgG pertence a uma nova gera o de testes ELISA qualitativos com base em pept deos sint ticos espec ficos de Chlamydia trachomatis O SeroCT utilizado como auxiliar de diagn stico de infec o espec fica por Chlamydia trachomatis SeroCT IgG deve ser realizado e interpretado em conjunto com o kit Savyon SeroCT IgA Para diagn stico In Vitro Apenas para uso profissional Introdu o Chlamydia uma bact ria gram negativa intracelular obrigat ria que provoca doen as agudas e cr nicas quer em esp cies mamiferas como de aves O g nero Chlamydia compreende quatro esp cies C trachomatis C pneumoniae C psittaci e C pecorum 1 4 C trachomatis est dividida em 15 serovares 5 8 Os serovares A B Ba e
4. C s o agentes de tracoma 9 a principal causa de cegueira evit vel end mica nos pa ses do terceiro mundo Os serovares L L s o agentes de linfogranuloma ven reo Os serovares D K s o a causa mundial mais comum de infec es genitais sexualmente transmiss veis cervicite endometrite salpingite 10 nas mulheres e uretrite 11 tanto nos homens como nas mulheres A endometrite salpingite poder conduzir oclus o tubular aumentando o risco de gravidez extra M181 01P 03 10 13 uterina e de infertilidade A infec o genital poder causar uma infec o aguda e persistente ocasionalmente sem quaisquer sintomas cl nicos Geralmente estas infec es s o trat veis aquando do seu diagn stico No entanto sem qualquer tratamento a infec o poder progredir para uma inflama o cr nica severa conduzindo a infertilidade gravidez ect pica indu o de aborto e parto prematuro Al m do mais crian as de mulheres infectadas podem ser infectadas aquando do nascimento podendo provocar conjuntivites ou pneumonia 12 14 C pneumoniae um patog nio respirat rio importante nos humanos e provoca at 10 dos casos de pneumonia adquirida em comunidade Foi associada a doen as respirat rias agudas pneumonia asma bronquite faringite s ndrome pulmonar agudo da drepanocitose doen a coron ria e s ndrome Guillain Barr 15 17 C psittaci infecta uma gama de esp cies hospedeiras diversa desde moluscos at a
5. Tsunekawa T and Kumamoto Y 1989 A study of IgA and IgG titers of C trachomatis in serum and prostatic secretion in chronic prostatitis J J A Inf Dis 63 2 130 137 Kaneti J et al 1988 IgG and IgA antibodies specific for Chlamydia trachomatis in acute epididymitis Europ Urol 14 323 327 Sarov l Kleinman D Cevenini R Holcberg G Potashnik G Sarov B and Insler V 1986 Specific IgG and IgA antibodies to Chlamydia trachomatis in infertile women Int J Fertil 31 3 193 197 0483 Representante Europeu Autorizado Obelis S A Boulevard G n ral Wahis 53 B 1030 Brussels Tel 32 2 732 59 54 Fax 32 2 732 60 03 E mail mail obelis net Tim 32 475 45 46 60
6. ction with the microimmunofluorescence test In Nongonoccolcal urethritis and related infection D Hobson and K K Holmes Eds P American Society for Microbiology Washington DC p 237 248 Richard L S Schachter J and Landers D V z 1983 Chlamydial Infections in Obstetrics and Gynecology Clinical Obstetrics and Gynecology 26 143 Thompson Ill S E and Dretler R H 1982 Epidemiology and Treatment of Chlamydial Infections in Pregnan Women and Infants Review of Infectious Diseases 4 8747 Mardh A Ripa T Svensson L and Westrom S 1977 Chlamydia Trachomatis Infection in M181 01P 03 10 13 15 16 17 18 19 20 Patients with Acute Salpingitis Chlamydia Trachomatis and Acute Salpingitis N Engl J Med No 24 296 1377 1379 Grayston J T Campbell L A Kuo C C Mordhorst C H Saikku P Thom D H and Wang S P 1990 A new respiratory tract pathogen Chlamydia pneumoniae strain TWAR J Infect Dis 161 618 625 Hahn D L Dodge R W and Golubjatnikow R 1991 Association of Chlamydia pneumoniae strain TWAR infection with wheezing asthmatic bronchitis and adult onset asthma JAMA 266 225 230 Saikku P Mattila K Nieminen M S Huttunen J K Leinonen M Ekman M R Makela P H and Valtonen V 1988 Serological evidence of an association of a novel Chlamydia TWAR with chronic coronary heart disease and acute myocardial infection Lancet 11 983 986
7. fec o aguda por Chlamydia No entanto a sua aus ncia n o exclui a presen a de uma infec o especialmente nos casos recorrentes e cr nicos A utiliza o de IgA espec ficas como marcadores de infec o activa por Chlamydia desempenha um papel importante devido sua vida m dia mais curta enquanto persistir a estimula o antig nica As IgA no entanto s o mais adequadas monitoriza o p s tratamento A IgG marcador de resposta imune positiva para Chlamydia quer em infec es correntes cr nicas ou passadas As reac es serol gicas cruzadas ocorrem entre tr s esp cies diferentes de Chlamydia A maioria dos testes serol gicos de diagn stico para Chlamydia utilizam como antig nios quer corpos elementares purificados testes de microimunofluoresc ncia MIF e ELISA quer lipopolissacar deos LPS ou prote nas maiores da membrana externa purificadas MOMP Em todos aqueles antig nios est o presentes g neros espec ficos de ep topos e logo observa se uma baixa especificidade de esp cie Al m do mais uma grande propor o da popula o esteve exposta a C pneumoniae sem quaisquer sinais cl nicos resultando numa elevada preval ncia de anticorpos anti Chlamydia Assim a utiliza o dos testes serol gicos convencionais de monitoriza o MIF EISA EIA etc para a diferencia o entre anticorpos espec ficos para C pneumoniae e C trachomatis n o suficiente A Savyon Diagnostic de
8. leitura usando um leitor de ELISA com um comprimento de onda a 450 nm A absorv ncia proporcional quantidade de anticorpos espec ficos que se ligaram aos pept deos imobilizados Resumo do Procedimento Po os da microplaca de titula o revestidos com antig nios espec ficos de C trachomatis Adicionar 2 x 50 ul de Controlo Negativo Adicionar 1 x 50 ul de Controlo Positivo e amostras dilu das Cobrir a placa e incubar 1 ha 37 C e 100 de humidade Lavar 3 vezes com Tamp o de Lavagem Adicionar 50 pl de Conjugado HRP dilu do 1 300 Cobrir a placa e incubar 1 h a 37 C e 100 de humidade Lavar 3 vezes com Tamp o de Lavagem M181 01P 03 10 13 Kit de teste para 96 determina es Cat logo N A181 01M 1 Placa de microtitula o revestida com antig nios de C trachomatis 96 po os separ veis 8 x 12 revestida com pept deos espec ficos de C trachomatis embaladas numa bolsa de alum nio que cont m uma saqueta dessecante 1 placa 2 Tamp o de Lavagem concentrado 20x um tamp o PBS Tween 1 frasco 100 ml 3 Diluente do Soro Azul Solu o tamp o pronta a usar Cont m menos de 0 05 de conservante proclin 1 frasco 30 ml 4 Diluente do Conjugado Verde Solu o tamp o pronta a usar Cont m menos de 0 05 de conservante proclin 1 frasco 40 ml 5 Controlo Negativo Soro humano negativo para IgG anti C trachomatis pronto a usar Cont m menos de 0 05 de conserva
9. nda amostra tamb m se encontra na zona limite dever considerar se negativa O D gt COV x 1 1 gt 1 1 Positivo N veis detect veis de anticorpos IgG anti C trachomatis Tabela 2 Interpreta o dos resultados com base na determinagao de anticorpos IgG e IgA Tabela 5 Especificidade do SeroCT IgG em grupos controlo diferentes N veis de anticorpos espec ficos anti C trachomatis Interpreta o dos IgG IgA Resultados Negativo Negativo Negativo ou abaixo da sensibilidade deste teste Positivo Negativo ou Poder indicar infec o Limite passada ou corrente Limite Limite E necess rio testar uma segunda amostra ap s 14 21 dias Se se repetir o resultado limite dever se considerar negativo Positivo Positivo Poder indicar infec o aguda ou cr nica Negativo Positivo Poder indicar infec o aguda ou cr nica Grupo Testado N de Negativos Especificidade Soros em do SerocT SeroCT IgG IgG Dadores de 250 230 92 sangue Individuos negativos para 35 33 94 C trachomatis e positivos para C pneumoniae MIF Crian as 30 29 97 saud veis Mulheres 30 28 93 gr vidas saud veis Limita es do Teste 1 N o se dever utilizar apenas um teste serol gico para o diagn stico final Todos os dados cl nicos e laboratoriais dever o ser tomados em considera
10. nsibilidade e Especificidade do SeroCT IgG comparada com microimunofluoresc ncia MIF A precis o intra ensaio aquando do procedimento do teste SeroCT IgG apresentada a seguir Amostra N de Valor m dio CV r plicas Positiva 10 0 835 2 5 Negativa 10 0 149 8 8 A precis o inter ensaio ent SeroCT IgG apresentada a seguir re procedimentos do teste SeroCT IgG MIF Positivo Negativo Positivo 58 55 3 Negativo 50 5 45 Total 108 60 48 Amostra N de Valor m dio CV r plicas Positiva 10 0 902 2 9 Negativa 10 0 167 5 5 Sensibilidade 55 58 x 100 95 Especificidade 45 50 x 100 90 Coer ncia geral 100 108 93 M181 01P 03 10 13 Bibliografia 10 11 12 13 14 Sarov I B Shemer A Y Manor E Zvilich M Lunenfeld E Piura B Chaim W and Hagay Z 1989 Current topics in Chlamydia trachomatis Research In Serio Ed Perspectives in Andrology Raven Press New York 53 355 366 Grayston J T Kuo C C Wang S P and Altman J 1986 The new Chlamydia psitacci strain TWAR Isolated in acute respiratory tract infections New Eng J Med 315 161 168 Grayston J T Kuo C C Campbell L A and Wang S P 1989 Chlamydia pneumoniae sp nov for Chlamydia sp strain TWAR Int J Syst Bacteriol 39 88 90 Fukushi H and Hirai K
11. nte limpo Valida o do Teste Para que o teste seja v lido devem cumprir se os crit rios seguintes Se estes crit rios n o forem cumpridos o teste dever ser considerado inv lido e dever ser repetido 1 Controlo Positivo O valor da absorv ncia dever ser gt 0 8 a 450 nm 2 Controlo Negativo O valor m dio da absorv ncia do Controlo Negativo realizado em duplicado dever ser 0 1 lt CN lt 0 4 a 450 nm C lculo do Valor de Cut off COV e o ndice de Cut off COI O valor de cut off calculado de acordo com a seguinte f rmula COV CN x 2 CN Valor m dio da absorvancia a 450 nm do Controlo Negativo realizado em duplicado Para normalizar os resultados obtidos em testes diferentes dever se calcular o indice de cut off de acordo com a seguinte formula COI absorvancia da amostra de soro a 450 nm COV Interpreta o dos Resultados Tabela 1 Correla o entre a absorv ncia a 450 nm e a presen a de anticorpos IgG anti C trachomatis Absorv ncia a COI Resultado Interpreta o dos 450 nm Resultados O D O D lt COV lt 1 0 Negativo Anticorpos IgG anti C trachomatis n o detect veis COV lt O D 1 1 1 Limite lt COV x 1 1 Nao se consegue determinar a presenga ou aus ncia de niveis detectaveis limite de anticorpos IgG anti C trachomatis Dever obter se uma segunda amostra de soro ap s 14 21 dias para repetir teste Quando a segu
12. nte proclin e menos de 0 1 de azida s dica 1 frasco 2 5 ml 6 Controlo Positivo Soro humano positivo para IgG anti C trachomatis pronto a usar Cont m menos de 0 05 de conservante proclin e menos de 0 1 de azida s dica 1 frasco 2 ml 7 Conjugado HRP concentrado 300x Peroxidase de r bano HRP conjugada a anti lgG humana espec fico para a cadeia gama Cont m menos de 0 05 de conservante proclin 1 frasco 0 2 ml 8 Substrato TMB Solu o pronta a usar que cont m o cromag neo 3 3 5 5 tetrametilbenzidina e a peroxidase como substrato 1 frasco 14 ml 9 Solu o Stop Solu o pronta a usar Cont m H gt SO4 a 1M 1 frasco 15 ml 10 Tampa da placa 1 unidade 11 Manual de Instru es 1 Kit de teste para 192 determina es Cat logo N B181 01M 1 Placa de microtitula o revestida com antig nios de C trachomatis 96 po os separ veis 8 x 12 revestida com pept deos espec ficos de C trachomatis embaladas numa bolsa de alum nio que cont m uma saqueta dessecante 2 placas 2 Tampao de Lavagem concenirado 20x Tampao PBS Tween 2 frascos 100 ml cada 3 Diluente do Soro Azul Solu o tamp o pronta a usar Cont m menos de 0 05 de conservante proclin 1 frasco 60 ml 4 Diluente do Conjugado Verde Solu o tamp o pronta a usar Cont m menos de 0 05 de conservante proclin 1 frasco 80 ml 5 Controlo Negativo Soro humano negativo para IgG anti C trachomatis p
13. o 2 As amostras obtidas demasiado cedo durante a infec o prim ria poder o n o conter suspeitar de detect veis Se se anticorpos infec o por Chlamydia dever obter se uma segunda amostra 14 21 dias depois e dever ser testada em paralelo com a amostra inicial Caracter sticas de Desempenho do SeroCT IgG Tabela 6 Especificidade do SeroCT IgG comparado com dois testes MIF diferentes A especificidade do SeroCT IgG foi determinada por compara o com dois estudos MIF independentes cada um usando um teste MIF diferente As amostras de soro usadas em cada estudo foram classificadas por MIF como negativas para anticorpos quer de C trachomatis como C pneumoniae MIF Ct Cp ou como negativas para C trachomatis e positivas para C pneumoniae MIF Tabela 3 Sensibilidade do SeroCT IgG comparado com a cultura O estudo foi realizado num laborat rio de refer ncia em pacientes com culturas positivas para C trachomatis Ct Cp MIF MIF SerocT SerocT Ct Ct IgG IgG cp Cp Negativo Positivo Estudo 1 MIF 0 64 58 91 Estudo 2 SeroFIA M 30 100 117 90 Savyon Conclus o SeroCT IgG demonstra uma especificidade superior a 90 para C trachomatis Precis o SeroCT IgG Cultura Positiva Positivo Negativo 45 35 10 Sensibilidade 35 45 x 100 78 Tabela 4 Se
14. ronto a usar Cont m menos de 0 05 de conservante proclin e menos de 0 1 de azida s dica 1 frasco 2 4 ml 6 Controlo Positivo Soro humano positivo para IgG anti C trachomatis pronto a usar Cont m menos de 0 05 de conservante proclin e menos de 0 1 de azida s dica 1 frasco 1 25 ml 7 Conjugado HRP concentrado 300x Peroxidase de r bano HRP conjugada a anti lgG humana espec fico para a cadeia gama Cont m menos de 0 05 de conservante proclin 1 frasco 0 2 ml 8 Substrato TMB Solu o pronta a usar que cont m o cromag neo 3 3 5 5 tetrametilbenzidina e a peroxidase como substrato 1 frasco 24 ml 9 Solu o Stop Solu o pronta a usar Cont m H gt SO4 a 1M 1 frasco 30 ml 11 Tampa da placa 2 unidades 12 Manual de Instru es 1 humano todos os componentes sangu neos fornecidos neste kit devem ser manipulados como soros ou sangue potencialmente infecciosos de acordo com a recomenda es publicadas no manual da CDC NIH Bio seguran a em Laborat rios Microbiol gicos e Bio m dicos 1988 2 A solu o Substrato TMB um produto que provoca irrita o na pele e membranas mucosas Evitar o contacto directo 3 O cido sulf rico dilu do 1 M um agente que provoca irrita o nos olhos e pele No caso de contacto com os olhos lavar imediatamente a rea com gua e consultar um cl nico N o derramar gua neste produto No caso de acidente ou desconforto consultar um cl nico
15. senvolveu um ensaio onde os ep topos espec ficos da esp cie C trachomatis derivados de diferentes serotipos s o usados num teste ELISA Este teste exclui os ep topos que possam ter reac es cruzadas entre esp cies e permite uma determina o mais precisa e especifica de anticorpos IgG e IgA contra C trachomatis Adicionar 100 ul a Substrato TMB Cobrir a placa e incubar i5 mih temperatura ambiente Adicionar 100 alde Solu o Stop Ler Sbsonvancia a 450 nm Calcular e interpretar resultados Composicao do Kit Fundamento do Teste m As placas SeroCT est o revestidas com pept deos espec ficos de C trachomatis O soro a testar dilu do e incubado na placa SeroCT pr revestida a 37 C durante 1 h Neste passo os anticorpos espec ficos contra C trachomatis ligam se aos pept deos espec ficos de C trachomatis imobilizados m Os anticorpos n o espec ficos s o removidos aquando da lavagem m E adicionado o conjugado peroxidase de r bano HRP anti lgG humana e incubada 1 h a 37 C Neste passo o conjugado HRP liga se com complexo antig nio anticorpo j ligado placa n O conjugado que n o se liga removido aquando da lavagem Aquando da adi o do subtrato TMB o substrato hidrolisado pela peroxidase produzindo uma colora o azul do substrato reduzido Aquando da adi o da solu o stop a colora o azul passa a amarela e deve se proceder
16. siva toda o comprimento da abertura 4 Poder se o formar cristais no Tamp o de Lavagem concentrado 20x durante o armazenamento no frio o que perfeitamente normal Dissolver os cristais aquecendo o tamp o a 37 C antes da sua dilui o Uma vez dilu do a solu o pode ser armazenada a 2 8 C at 21 dias Colheita das Amostras Preparar os soros a partir de amostras colhidas assepticamente usando as t cnicas padronizadas N o se devem usar soros inactivados por aquecimento N o recomend vel a utiliza o de soros turvos lip micos A presen a de part culas de material e precipitados nos soros poder o conduzir a resultados err neos Tais amostras dever o ser clarificadas por centrifuga o ou filtra o pr via sua utiliza o Conserva o Avisos e Precau es Para diagn stico In Vitro 1 Este kit cont m soros humanos que foram testados por t cnicas aprovadas pela FDA e deram resultados negativos para antig nios de HBV e HCV e para anticorpos de HIV 1 amp 2 Uma vez que nenhum m todo oferece seguran a total quando a nao transmissibilidade de infec es a partir de sangue M181 01P 03 10 13 As amostras dever o ser armazenadas a 2 8 C e testadas at 7 dias altamente recomend vel a adi o 0 1 se azida s dica Se se prever um maior per odo de armazenamento fazer al quotas das amostras e conservar abaixo dos 20 C Evitar descongela es suces
17. sivas Procedimento do Teste Manual Protocolo para automatiza o dispon vel sob requisi o A Prepara o de Reagentes 1 Colocar todos os componentes e amostras cl nicas temperatura ambiente Agitar bem o Controlo Positivo o Controlo Negativo e as amostras antes de usar 2 Determinar o n mero total de amostras a testar Para al m das amostras deve se juntar os seguintes reagentes a cada teste dois po os de Controlo Negativo e um po o de Controlo Positivo 3 Retirar a placa de microtitula o da bolsa de alum nio cortando a extremidade mais pr xima da por o selada Deixar o n mero necess rio de tiras de acordo com o n mero de amostras a testar do suporte de 96 po os 4 Fazer uma dilui o de 1 20 do Tamp o de Lavagem concentrado com gua desionizada ou destilada Por exemplo para preparar um litro de Tamp o de Lavagem adicionar 50 ml de Tamp o de Lavagem concentrado a 950 ml de gua desionizada ou destilada Incubagao das amostras de soros e controlos Diluir cada soro 1 21 com o Diluente de Soro fornecido da seguinte forma adicionar 10 ul de soro a 200 ul de Diluente do Soro 6 Depositar 50 ul de Controlo Positivo Controlo Negativo e soros dilu dos 1 21 em po os separados da tira de teste O Controlo Negativo dever ser depositado em dois po os separados 7 Cobrir as tiras com a tampa da placa e incubar durante 1 h a 37 C numa c mara h mida 8 Esvaziar o con
18. te do l quido dos po os 9 Lavagem Encher totalmente cada po o com Tamp o de Lavagem e depois esvaziar todo o conte do repetir este passo duas vezes para um total de tr s passos de lavagem 10 Secar as tiras e suporte batendo suavemente sobre papel absorvente limpo C Incuba o com o Conjugado 11 0 conjugado HRP anti lgG humana deve ser dilu do imediatamente antes de usar Fazer uma dilui o 1 300 do conjugado HRP com o Diluente do Conjugado Por exemplo para duas tiras preparar no m nimo de 3 ml de Conjugado HRP dilu do 10 ul de Conjugado HRP concentrado em 3 ml de Diluente do Conjugado 12 Depositar 50 ul de conjugado dilu do em cada po o 13 Cobrir as tiras com a tampa da placa e incubar durante 1 h a 37 C numa c mara h mida 14 Esvaziar o conte do dos po os e lavar como descrito nos passos 9 10 D Incuba o com o Substrato TMB 15 Depositar 100 ul de Substrato TMB em cada po o cobrir com a tampa da placa e incubar temperatura ambiente durante 15 minutos 16 Parar a reac o adicionando 100 ul de Solu o Stop H2SO0 a 1M em cada po o E Determina o dos resultados 17 Determinar a absorvancia a 450 nm e registar os resultados A determina o n o dever ser realizada mais de 30 minutos ap s a paragem da reac o cromog nica aw M181 01P 03 10 13 Nota Qualquer bolha de ar devera ser removida antes da leitura O fundo da placa de ELISA dever ser cuidadosame
19. ves e mam feros e tamb m provoca pneumonia severa Nos animais C psittaci e C pecorum conseguem induzir diversas s ndromes como pneumonia enterite poliserosite encefalite e conjuntivite Os testes serol gicos actualmente estabelecidos em muitos pa ses t m se mostrado como uma boa resposta detec o de infec es por Chlamydia trachomatis Em infec es profundamente localizadas a amostra de soro reduz a necessidade de procedimentos invasivos requeridos para a detec o directa de antig nios No caso de infec es da parte inferior do trato urogenital as limita es da colheita nomeadamente a efic cia do procedimento de amostragem por raspagem as dificuldades na manipula o e transporte da amostra devem ser ponderadas Acima de tudo existe o problema de que a maioria das infec es por Chlamydia s o assintom ticas Assim uma infec o pode persistir ao longo do tempo ascender ao trato genital superior causando uma infec o profunda e cr nica aumentando a probabilidade de resultados falsos negativos aquando da detec o directa de antig nios O teste serol gico para C trachomatis pela detec o de v rios anticorpos espec ficos hoje em dia uma op o metodol gica eficaz e muito aceit vel 10 11 18 19 Novas tecnol gicas mais precisas aplicam os marcadores imunol gicos IgM IgA e IgG para caracterizar a presen a e o est dio da infec o A presen a de IgM espec ficos indica uma in
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