BIOPUR KIT EXTRAÇÃO MINI CENT CENTRIFUGAÇÃO
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1. Placa de Liga o de DNA Tipo C Placa de Coleta 2 mL na ca apa da centr fuga e centrifugar a 1 400 1 700 x g 3700 4000 rpm por 6 minutos em temperatura ambiente Retirar todo o bloco da centr fuga e desprezar o filtrado Reencaixar a Placa de Liga o de DNA Tipo C na Placa de Coleta 2 mL 5 Adicionar 600 uL de Tamp o de Lavagem e cobrir a placa com a Tampa Pl stica Colocar todo o bloco Tampa de Placa Placa de Liga o de DNA Tipo C Placa de Coleta 2 mL na ca apa da centrifuga e centrifugar a 1 400 1 700 x g 3700 4000 rpm por 3 minutos em temperatura ambiente Retirar todo o bloco da centrifuga e desprezar o filtrado Reencaixar a Placa de Liga o de DNA Tipo C na Placa de Coleta 2 mL Outra op o encaixar a placa de liga o de DNA Tipo C na Placa de Coleta 2 mL que foi usada na etapa de lise P asa ES RE DR T sv BIOXPUR Rev 09 Jun 2014 6 Adicionar 700 uL de Tamp o de Lavagem Il e cobrir a placa com a Tampa Pl stica Colocar todo o bloco Tampa Pl stica Placa de Liga o de DNA Tipo C Placa de Coleta 2 mL na ca apa da centrifuga e centrifugar a 1 400 1 700 x g 3700 4000 rpm por 3 minutos em temperatura ambiente Retirar todo o bloco da centrifuga e desprezar o filtrado Reencaixar a Placa de Liga o de DNA Tipo C na Placa de Coleta 2 mL 7 Repetir o passo anterior 8 Colocar todo o bloco Tampa Pl stica Placa de Liga o de DNA Tipo C Placa de Coleta 2 mL na2. o correta do BIOPUR Kit Extra o Mini CENT Centrifugsa o para as aplica es conforme descritas neste manual assegurando um produto de consistente qualidade 12 INFORMA ES PARA PEDIDO PRODUTO TAMANHO DA EMBALAGEM C DIGO DO PRODUTO BIOPUR Kit Extra o Mini CENT z Centrifuga o 4X96 384 extra es BP079 384 BIOPUR Kit Extra o Mini CENT A Centrifuga o 12X96 1152 extra es BP080 1152 10 EO AE ENE PN y Ra x a A 1 d s NEA ARADAN U AR EA S NY ps BIOXPUR Rev 09 Jun 2014 13 INFORMA ES DO FABRICANTE SR Com rcio de Produtos para Laborat rios Ltda EPP Rua Para so do Norte 866 CEP 83 324 221 Pinhais PR CNPJ 04 645 160 0001 49 Respons vel T cnica Franciele Camila Kimura CRF PR 19247 14 DISTRIBUIDOR Biometrix Diagn stica Ltda Rua Estrada da Graciosa 1081 Curitiba Paran Brasil CEP 82 840 360 Tel 41 2108 5250 Fax 41 2108 5252 DDG 0800 726 0504 E mail biometrixebiometrix com br Site www biometrix com br CNPJ 06 145 976 0001 39 Respons vel T cnica Fl via Stival CRF PR 26565 Aprova o 04 07 2014 x Koda don wa Rafaela Wassmansdorf Laborat rio Assinado por rwassmansdorf
3. 20 C recomenda se dividir a solu o em al quotas para armazenamento em freezer Congelamentos e descongelamentos repetidos devem ser evitados Esta solu o pode eventualmente apresentar aspecto leitoso principalmente em fun o de repetidos ciclos de congelamento e descongelamento armazenamento prolongado ou dilui o errada Tais situa es devem ser evitadas Entretanto verificou se que esse aspecto leitoso n o interfere no desempenho do produto N o recomendado dar spin na solu o leitosa pois pode haver forma o de pellet levando perda de atividade Tamp es de Lavagem Os Tamp es de Lavagem e Il nos quais foi adicionado etanol devem ser fechados e armazenados apropriadamente em temperatura ambiente entre 15 e 30 C Antes de cada uso ter certeza que os componentes est o em temperatura ambiente Se alguma solu o apresentar precipitado dissolv lo com cuidadoso aquecimento at 30 C 5 INFORMA O DE SEGURAN A Sempre que estiver trabalhando com solu es qu micas e amostras biol gicas EPIs s o recomendados conforme normas de seguran a regulamentadas Depois de receber o kit verificar se as embalagens dos componentes est o danificadas ou se h vazamento dos l quidos Se os frascos de tamp es estiverem danificados ou com vazamento usar luvas e culos de prote o ao descart los para evitar acidentes N o usar componentes danificados pois eles podem gerar baixo rendimento Sempre tr
4. ca apa da centr fuga e centrifugar a velocidade m xima por ao menos 10 minutos em temperatura ambiente para eliminar completamente o etanol Retirar todo o bloco da centr fuga repousar a Placa de Liga o de DNA Tipo C sobre uma folha de papel toalha e descartar a Placa de Coleta 2 mL 9 Encaixar a Placa de Liga o de DNA Tipo C sobre a Placa de Elui o 0 5 mL Adicionar 80 a 200 uL de Tamp o de Elui o pr aquecido e incubar por 5 minutos em temperatura ambiente Cobrir a placa com a Tampa Pl stica e colocar todo o bloco Tampa Pl stica Placa de Liga o de DNA Tipo C Placa de Elui o 0 5 mL na ca apa da centr fuga e centrifugar a 1 400 1 700 x g 3700 4000 rpm por 3 minutos Retirar todo o bloco da centr fuga e descartar a Placa de Liga o de DNA Tipo C Fechar a Placa de Elui o 0 5 mL com Filme Adesivo para uma armazenagem mais segura das amostras de DNA NOTA O DNA pode tamb m ser elu do com pouco mas n o menos que 30 LL ou grande volume de Tamp o de Elui o dependendo do rendimento esperado ou concentra o necess ria do DNA PROTOCOLO 2 e Extra o de DNA gen mico de 25 uL de sangue de n o mam fero Nota Se for empregar amostras de aves ou peixes que apresentam eritr citos nucleados recomenda se o uso de apenas 10 a 15 pL de amostra IMPORTANTE Aliquotar a quantidade de Tamp o de Elui o necess ria para o n mero de amostras e colocar no termomixer a 56 C 1 Transf
5. mero de c lulas presentes na amostra que varia conforme a idade do paciente e seu estado de sa de e conforme condi es de transporte armazenamento e idade das amostras Normalmente uma amostra de 200 uL de sangue total contagem de c lulas brancas intervalo de 3 x 10 a 1 x 10 c lulas mL de um indiv duo sadio rende de 3 a 10 ug de DNA O rendimento t pico do kit de 3 a 10 Lg de DNA Se uma amostra de sangue total for tratada com solu es tamp o contendo anticoagulantes a contagem total de leuc citos diminuir e o rendimento de DNA do processo de extra o ser reduzido O rendimento pode ser aumentado se o tempo de incuba o com o Tamp o de Elui o pr aquecido for prolongado Para a maioria das amostras de sangue total uma nica elui o com 200 uL de Tamp o de Elui o o suficiente Para amostras com elevada concentra o de c lulas brancas aproximadamente 80 do DNA ser elu do nos primeiros 200 uL e os outros 20 na elui o seguinte de 200 yL O rendimento e a qualidade do DNA gen mico extra do aplic vel em qualquer sistema de detec o de diagn stico molecular Os testes de diagn stico devem ser realizados de acordo com as especifica es do fabricante 3 COMPOSI O DO KIT INFORMA ES PRINCIPAIS C digo do produto 1x96 Amostra BP082 96 BP079 384 BP080 1152 Tamp o de Lise HL 1x25 mL 1x80 mL 3x 80 mL Proteinase K 2 x Tipo G volume fi
6. 26 Proteinase K R36 37 38 42 S2 22 24 26 36 37 Tamp o de Lavagem l R20 21 22 32 52 53 S2 13 61 LEGENDA DE RISCOS R11 Altamente inflam vel R20 21 22 Nocivo por inala o contato com a pele e se ingerido R32 Contato com gases muito t xicos liberados de cidos R36 Irritante para os olhos R36 37 38 Irritante para os olhos sistema respirat rio e pele R41 Risco s rio de danos aos olhos R42 Pode causar sensibiliza o pela inala o R52 53 Nocivo para organismos aqu ticos pode causar cause efeitos adversos em longo prazo no ambiente aqu tico R67 Vapores podem causar sonol ncia e tonturas S2 Manter fora do alcance das crian as S7 Manter o recipiente bem fechado S13 Manter longe de comida bebida e comida de animais S16 Manter longe de fontes de igni o N o fumar S22 N o inalar o p S24 25 Evitar contato com a pele e olhos S24 Evitar contato com a pele 526 Em caso de contato com os olhos lavar imediatamente com gua abundante e procurar aconselhamento m dico S36 37 Usar roupas e luvas protetoras e adequadas S61 Evitar libera o no meio ambiente Consultar instru es especiais ficha de seguran a 6 AMOSTRAGEM E ARMAZENAMENTO DE ACORDO COM O TIPO DE AMOSTRA BIOL GICA Sangue Total e Creme leucocit rio Buffy coat Rev 09 Jun 2014 Os melhores resultados s o obtidos empregando amostras frescas Amostras de sangue total conservadas com EDTA ou citrato podem ser armazenadas a te
7. Tipo G e misturar cuidadosamente e Adicionar 40 mL de etanol P A ao Tamp o de Lavagem Misturar cuidadosamente e manter o recipiente bem fechado e Adicionar 105 mL de etanol P A ao Tamp o de Lavagem Il Misturar cuidadosamente e manter o recipiente bem fechado Kit 4x96 e Adicionar 8 mL de gua ultrapura bidestilada ou de inje o ao frasco da Proteinase K Tipo I e misturar cuidadosamente e Adicionar 40 mL de etanol P A ao Tamp o de Lavagem Misturar cuidadosamente e manter o recipiente bem fechado e Adicionar 105 mL de etanol P A ao Tamp o de Lavagem Il Misturar cuidadosamente e manter o recipiente bem fechado Kit 12x96 e Adicionar 25 mL de gua ultrapura bidestilada ou de inje o ao frasco da Proteinase K Tipo K e misturar cuidadosamente e Adicionar 125 mL de etanol P A ao Tamp o de Lavagem Misturar cuidadosamente e manter o recipiente bem fechado e Adicionar 287 mL de etanol P A ao Tamp o de Lavagem Il Misturar cuidadosamente e manter o recipiente bem fechado sv BIOXPUR Rev 09 Jun 2014 10 PROTOCOLOS As instru es a seguir s o v lidas para todos os protocolos Antes de iniciar o procedimento e Ligar o termomixer a 56 C e Aquecer a quantidade necess ria do Tamp o de Elui o a 56 C para o passo final de elui o Nota As velocidades de rota o rpm necess rias podem variar de uma marca de centrifuga para outra PROTOCOLO 1 e Extra o de DNA gen mico de 200 uL
8. a es de PCR ou outras rea es n o sejam retidas pela membrana de s lica NOTA DNA e RNA s o purificados em paralelo se ambos estiverem presentes na amostra Se um DNA gen mico livre de RNA for necess rio recomenda se adicionar 20 uL de Solu o estoque RNase A 20 mg mL amostra antes da adi o do Tamp o de Liga o HL Remo o dos Contaminantes Residuais Os contaminantes s o eficientemente removidos usando Tamp o de Lavagem e Il este ltimo com duas lavagens enquanto o DNA gen mico permanece ligado membrana Depois da lavagem a membrana dever ser seca por centrifuga o sv BIOXPUR Rev 09 Jun 2014 Elui o do DNA gen mico O DNA gen mico elu do usando o Tamp o de Elui o O DNA elu do est pronto para uso para diferentes aplica es em Biologia Molecular e pode ser armazenado entre 4 e 8 C por no m nimo 2 meses ou por at 5 anos se armazenado a 20 C 8 EQUIPAMENTOS E REAGENTES NECESS RIOS MAS N O FORNECIDOS Centr fuga para microplaca po o fundo deep well Termomixer 56 C Vortex Proveta 250 mL Micropipetas multicanais e monocanais e ponteiras com filtro Reservat rios de reagentes para micropipeta multicanal Etanol P A gua ultrapura bidestilada ou de inje o PBS 1X opcional 9 PREPARO DOS REAGENTES Kit 1x96 Amostra e Adicionar 1100 uL de gua ultrapura bidestilada ou de inje o ao frasco da Proteinase K
9. ar o volume com PBS 1X ou gua ultrapura bidestilada ou de inje o 2 Adicionar 200 L de Tamp o de Lise HL e homogeneizar por pipetagem repetitiva Selar a placa com o Filme Adesivo e incubar com agita o por 3 minutos a 56 C ou por 5 minutos a temperatura ambiente 3 Adicionar 20 uL de Proteinase K e homogeneizar por pipetagem repetitiva Selar a placa com Filme Adesivo e incubar por 5 minutos a 56 C ou por 10 minutos a temperatura ambiente 4 Proceder como descrito no Protocolo 1 etapas 4 a 9 PROTOCOLO 4 e Extra o de DNA gen mico de swabs ou de solu o de enx gue de swabs IMPORTANTE Aliquotar a quantidade de Tamp o de Elui o necess ria para o n mero de amostras e colocar no termomixer a 56 C A Amostras de swabs sem meio de transporte 1 Adicionar 180 uL de PBS 1X ou gua ultrapura bidestilada ou de inje o a um microtubo 1 5 mL n o fornecido Inserir o swab no microtubo e incubar por 3 minutos 2 Adicionar 200 uL de Tamp o de Lise HL e homogeneizar por pipetagem repetitiva Incubar o microtubo com agita o por 3 minutos a 56 C ou por 5 minutos a temperatura ambiente 3 Adicionar 20 uL de Proteinase K e homogeneizar por pipetagem repetitiva Incubar com agita o por 15 minutos a 56 C ETR SNL A E R ecoa TIS E ARADAN ART o EA S UM SIA ate sv BIOXPUR Rev 09 Jun 2014 NOTA Para obter o m ximo de rendimento de DNA imprescind vel deixar o swab no tubo d
10. de sangue total humano ou de mam feros e Extra o de DNA gen mico de 30 uL de creme leucocit rio buffy coat IMPORTANTE Aliquotar a quantidade de Tamp o de Elui o necess ria para o n mero de amostras e colocar no termomixer a 56 C 1 Transferir 200 uL de amostra de sangue total ou 30 uL de creme leucocit rio em cada po o da Placa de Coleta de 2 mL Para amostra com volume menor de 200 uL completar o volume com PBS 1X ou gua ultrapura bidestilada ou de inje o 2 Adicionar 200 uL de Tamp o de Lise HL e homogeneizar por pipetagem repetitiva Selar a placa com Filme Adesivo e incubar com agita o por 3 minutos a 56 C ou em repouso por 5 minutos em temperatura ambiente 3 Adicionar 20 uL de Proteinase K e homogeneizar por pipetagem repetitiva Selar a placa com Filme Adesivo e incubar com agita o por 5 minutos a 56 C ou em repouso por 10 minutos em temperatura ambiente 4 Adicionar 200 uL de Tamp o de Liga o HL e homogeneizar por pipetagem repetitiva Cobrir a placa com a Tampa Pl stica Colocar a Placa de Coleta de 2 mL na centr fuga e proceder uma breve centrifuga o centrifugar at 200 x g 1000 rpm e parar Encaixar a Placa de Liga o de DNA Tipo C sobre a outra nova Placa de Coleta 2 mL Transferir toda a suspens o da Placa de Coleta centrifugada para Placa de Liga o de DNA Tipo C Cobrir a Placa de Liga o de DNA Tipo C com a Tampa Pl stica Colocar todo o bloco Tampa Pl stica
11. erir no m ximo 25 uL de amostra de sangue de n o mam feros em cada po o da Placa de Coleta 2 mL Completar o volume das amostras para 200 uL com PBS 1X ou gua ultrapura bidestilada ou de inje o 2 Adicionar 200 uL de Tamp o de Lise HL e homogeneizar por pipetagem repetitiva Selar a placa com Filme Adesivo e incubar com agita o por 3 minutos a 56 C ou por 5 minutos em temperatura ambiente 3 Adicionar 20 uL de Proteinase K e homogeneizar por pipetagem repetitiva Selar a placa com Filme Adesivo e incubar com agita o por 5 minutos a 56 C ou por 10 minutos a temperatura ambiente 4 Proceder como descrito no Protocolo 1 etapas 2 a 9 sv BIOXPUR Rev 09 Jun 2014 PROTOCOLO 3 e Extra o de DNA gen mico de 200 pL de fluido cerebroespinhal e Extra o de DNA gen mico de 20 uL de medula ssea IMPORTANTE Aliquotar a quantidade de Tamp o de Elui o necess ria para o n mero de amostras e colocar no termomixer a 56 C A Amostras frescas e Adicionar 200 uL de fluido cerebroespinhal ou e 20 uL de medula ssea em microtubo de 1 5 mL n o fornecido B Amostras n o frescas e Umedecer a amostra seca com uma gota de PBS 1X e Adicionar 180 uL de PBS 1X em um microtubo 1 5 mL n o fornecido e Raspar a amostra para dentro do tubo e homogeneizar por pipetagem repetitiva 1 Transferir 200 uL de amostra em cada po o da Placa de Coleta 2 mL Para amostras com volumes menores de 200 uL complet
12. mitir um manuseio seguro de amostras potencialmente contaminantes Devido alta pureza o DNA gen mico extra do fica pronto para uso em um grande painel de aplica es em Biologia Molecular ou poder ser armazenado a 20 C para uso subsequente Aplica es em Biologia Molecular e PCR e An lise RFLP e Digest o por enzima de restri o e Hibridiza o e Tipagem HLA e An lise SNP e Genotipagem O produto indicado para uso por profissionais treinados em t cnicas de biologia molecular Quaisquer resultados gerados utilizando o procedimento de prepara o de amostras em conjunto com qualquer an lise de diagn stico devem ser interpretados considerando outras conclus es cl nicas e laboratoriais Para minimizar irregularidades nos resultados de diagn sticos controles adequados devem ser empregados Ar i AEE A N SA A Koy NEA ARADAN U AR EA S SY AS to BO ON Rev 09 Jun 2014 2 CARACTER STICAS DO PRODUTO AMOSTRA INICIAL RENDIMENTO TEMPO RAZ O 1 200 uL de sangue total de mam feros 1 30 uL de creme leucocit rio buffy coat De 3 10 ug dependendo da 1 25 uL de sangue total de n o mam feros qualidade origem e idade da 70 A2Z60 A280 1 200 uL fluido cerebroespinhal amostra seu transporte e minutos 1 6 2 0 1 20 uL de medula ssea armazenamento Swabs ou solu o de enx gue de swabs A quantidade de DNA purificado depende do tipo de amostra e do n
13. mperatura ambiente por 2 a 3 horas para uma armazenagem r pida at 24 horas as amostras podem ser estocadas a 4 C Para longo per odo de estocagem recomendado o congelamento das amostras a 20 C ou 80 C Congelamento e descongelamentos seguidos antes da extra o do DNA devem ser evitados Se houver a presen a de crioprecipitados formados no descongelamento de amostras congeladas evitar aspir los pois eles poder o entupir a membrana da Placa de Liga o V rios tipos de tubos prim rios sistema de coleta de sangue e anticoagulantes podem ser usados para a coleta de sangue com exce o de heparina Creme leucocit rio a fra o do sangue total rica em c lulas brancas Para preparar e extrair a camada de creme leucocit rio recomenda se o seguinte processo usar uma amostra de sangue total 4 Re BIOXPUR Rev 09 Jun 2014 anticoagulantes EDTA citrato mas n o heparina com uma fra o sedimento celular proveniente de um repouso durante a noite a 4 C A camada clara logo abaixo ao plasma o creme leucocit rio contendo leuc citos que podem ser facilmente distinguidos dos eritr citos da camada inferior Um fator de enriquecimento de 10 esperado a partir desse processo portanto devido a esse enriquecimento leucocit rio ficar atento para evitar uma sobrecarga no processo de extra o de DNA Fluido Cerebroespinhal CSF e Medula ssea Os melhores resultados s o obtidos de amostras frescas As amost
14. nal 2x1100 uL 1 x Tipo I volume final 1x8 mL 1 x Tipo K volume final 1x25 mL Tamp o de Liga o HL 2x11 mL 1x 80 mL 3 x 80 mL Tamp o de Lavagem I 1x 40 mL volume final 1x80 mL 3 x 40 mL volume final 3x80 mL 3 x 125 mL volume final 3x250 mL Tamp o de Lavagem II 1x45 mL volume final 1x150 mL 4 x 45 mL volume final 4x150 mL 4x 123 mL volume final 4x410 mL Tamp o de Elui o 1x20 mL 1x 80 mL 3 x 80 mL Placa de Liga o de DNA Tipo C 1 unid 4 unid 12 unid Placa de Coleta 2 mL 2 unid 8 unid 24 unid Placa de Elui o 0 5 mL 1 unid 4 unid 12 unid Filme Adesivo 3 unid 12 unid 36 unid Tampa de Placa 1 unid 4 unid 12 unid Manual de Instru es 1 unid 1 unid 1 unid Verificar item 8 Reagentes e Equipamentos necess rios mas n o fornecido e item 9 Preparo dos Reagentes sv BIOXPUR Rev 09 Jun 2014 4 ARMAZENAMENTO DOS REAGENTES Todos os tamp es e componentes do BIOPUR Kit Extra o Mini CENT Centrifuga o devem ser armazenados em temperatura ambiente entre 15 e 30 C e sob estas condi es s o est veis at a data de validade impressa na embalagem OBS Ap s abertura do kit armazenar a Proteinase K liofilizada em temperatura refrigerada 2 a 8 C Proteinase K A Proteinase K reconstituida deve ser armazenada a
15. ocar as ponteiras entre as transfer ncias de l quidos para evitar a contamina o cruzada recomendado o uso de ponteiras com filtro Toda a centrifuga o deve ser realizada em temperatura ambiente N o misturar componentes de kits diferentes se n o forem do mesmo lote Evitar contamina o microbiana dos reagentes do kit Para minimizar risco de contamina es recomendado trabalhar em c mara de fluxo laminar Este kit deve ser usado apenas por pessoal treinado Armazenar os qu micos e pl sticos em condi es pr prias para uso em laborat rio Os res duos gerados pelo uso dos kits n o foram testados Contamina es causadas pelos res duos s o rar ssimas mas n o podem ser completamente descartadas Portanto os res duos devem ser considerados como material infeccioso e devem ser manuseados de acordo com as normas de seguran a regulamentadas Se forem necess rias mais informa es a respeito do produto favor entrar em contato com a Biometrix solicitando a Ficha de Informa es de Seguran a de Produto Qu mico FISPQ do produto 3 Ver a seguir classifica o de riscos e frases de seguran a utilizadas internacionalmente que se BO ON aplicam aos componentes do BIOPUR Kit Extra o Mini CENT Centrifuga o PRODUTO RISCOS Tamp o de Lise HL R36 S2 24 Tamp o de Liga o HL R11 22 41 67 S16 24 25
16. ras podem ser armazenadas a 4 C por 2 a 3 horas Para um per odo maior congelar as amostras a 20 C comum ocorrer o ressecamento das amostras As amostras secas devem ser armazenadas em refrigerador a 4 C em ambiente livre de umidade Swabs O protocolo de trabalho pode ser aplicado tanto para amostras frescas de swabs como para amostras secas Lembrar que amostras secas e armazenadas de swabs frequentemente caracterizam extra o de DNA apopt tico visualizado em gel de agarose como banda padr o t pica de DNA apopt tico O protocolo n o foi validado para a extra o de DNA a partir de swabs que foram armazenados em tamp es de armazenamento 7 PROCEDIMENTO O BIOPUR Kit Extra o Mini CENT Centrifuga o abrange as seguintes etapas 1 Lise da amostra 2 Liga o do DNA gen mico membrana da Placa de Liga o 3 Lavagem da membrana e elimina o do etanol 4 Elui o do DNA gen mico Lise Para um melhor resultado as amostras devem estar em temperatura ambiente antes da lise As amostras sofrem lise na presen a de Tamp o de Lise HL e Proteinase K em temperaturas elevadas Liga o do DNA gen mico Pela adi o de Tamp o de Liga o HL ao lisado ser o obtidas condi es timas para a liga o As amostras s o transferidas para a Placa de Liga o e o DNA gen mico ir se ligar membrana da placa As condi es timas de pH e salina garantem que contaminantes como prote nas que podem inibir re
17. sv BIOXPUR Rev 09 Jun 2014 BIOPUR KIT EXTRA O MINI CENT CENTRIFUGA O Instru es de Uso 1 USO PRETENDIDO O BIOPUR Kit Extra o Mini CENT Centrifuga o a ferramenta ideal para extra o e purifica o manual simples r pida e eficiente de DNA gen mico empregando placa filtro de 96 po os Devido ao alto grau de pureza o DNA extra do est pronto para ser utilizado em an lises de diagn stico in vitro e em outras aplica es aplicado para as seguintes amostras e Sangue total de mam feros e Creme leucocit rio buffy coat e Sangue de n o mam feros tais como aves e peixes e Fluido cerebroespinhal CSF e Medula ssea e Swabs ou solu o de enx gue de swabs N o existe estudo de valida o para a extra o de DNA gen mico de c lulas isoladas ou oriundas de cultura tecidos manchas de sangue seco amostras de urina ou fezes bact rias fungos parasitas ou para extra o de RNA A aplica o do kit para a extra o e purifica o de DNA viral n o foi avaliada Para outras valida es entrar em contato com o nosso Laborat rio O BIOPUR Kit Extra o Mini CENT Centrifuga o designado para o processamento de m ltiplas amostras simultaneamente O procedimento r pido e n o requer uma extra o com fenol e clorof rmio ou precipita o em etanol requerendo m nima intera o com o usu rio O procedimento foi desenvolvido para evitar contamina o cruzada de amostras e per
18. urante todo o tempo de incuba o para a lise da amostra Pode se cortar a haste do swab para que seja poss vel fechar o microtubo durante a incuba o por m a lise tamb m pode ser feita com o microtubo aberto 1 Ap s a rea o de lise pressionar cuidadosamente o swab na parede do tubo antes de descart lo Transferir o lisado para a Placa de Coleta 2 mL 2 Proceder como descrito no Protocolo 1 etapas 4 a 9 B Amostras de swabs com meio de transporte ou solu o de enx gue de swabs 1 Se for utilizado com meio para transporte verificar a composi o do meio e entrar em contato com o distribuidor para certificar se da compatibilidade das amostras com aos reagentes do kit 2 Para obter a solu o de enx gue enxaguar cada swab com 200 500 uL de gua ultrapura bidestilada ou de inje o ou PBS 1X e homogeneizar por agita o 3 Transferir 200 uL da solu o de enx gue para um po o da Placa de Coleta de 2 mL 4 Adicionar 200 L de Tamp o de Lise HL e homogeneizar por pipetagem repetitiva Selar a placa com Filme Adesivo e incubar com agita o por 3 minutos a 56 C ou por 5 minutos em temperatura ambiente 5 Adicionar 20 uL de Proteinase K e homogeneizar por pipetagem repetitiva Selar a placa com Filme Adesivo e incubar por 5 minutos a 56 C ou por 10 minutos em temperatura ambiente 6 Proceder como descrito no Protocolo 1 etapas 4 a 9 11 CONTROLE DE QUALIDADE O fabricante e o distribuidor garantem a fun
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