ELISA HEV - MP Biomedicals
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1. G Kuo A J Weiner L R Overby D W Bradley and M Houghton 1990 Isolation of a cDNA clone derived from a blood borne non A non B hepatitis genome Science 244 359 7 Bradley D W 1990 Enterically transmitted non A non B hepatitis pp 442 461 In A J Zuckerman ed British Medical Bulletin 46 2 Churchill Livingstone New York 8 Purcell R H and J R Ticehurst 1988 Enterically transmitted non A non B hepatitis Epidemiology and clinical characteristis pp 131 137 In A J Zuckerman ed Viral Hepatitis and Liver Disease Alan R Liss Inc New York 9 Reyes G R M A Purdy J P Kim K C Luk L M Young K E Fry and D Bradley 1990 Isolation of a cDNA from the virus responsible for enterically transmitted non A non B hepatitis Science 247 1335 10 Yarbough P O A W Tam K E Fry K Krawczynski K A McCaustland D W Bradley and G R Reyes 1991 Hepatitis E virus Identification of type common epitopes Journal of Virology 65 5790 MP Biomedicals Asia Pacific Pte Ltd 85 Science Park Drive H04 01 The Cavendish Singapore Science Park Cingapura 118259 Tel N 65 6775 0008 Fax N 65 6775 4536 E mail enquiry ap mpbio com Medical Technology Promedt EC REP Consulting GmbH Altenhofstrasse 80 D 66386 St Ingbert Alemanha Tel N 49 68 94 58 1020 Fax N 49 68 94 58 1021 E mail info O mt procons com Escrit rios Regionais MP Biomedicals Suisse S A2. no kit se conservados entre 2 C e 8 C N o congele os reagentes 3 Quando o Concentrado 20x para lavagem de placas mantido entre 2 C e 8 C pode ocorrer forma o de cristais Estes dever o ser dissolvidos por aquecimento a 37 C antes do uso 4 Pode ocorrer forma o de precipitado quando o Diluente conservado entre 2 C e 8 C Isto n o afetar o desempenho do kit 5 As tiras de microplacas abertas e n o usadas devem ser mantidas em bolsa fechada com o dessecante fornecido entre 2 Ce8BC COLETA TRANSPORTE E ARMAZENAMENTO DE AMOSTRAS As amostras devem ser conservadas entre 2 C a 8 C seo teste for realizado dentro de 7 dias ap s a coleta ou congelados a 20 C se for previsto que o teste ser realizado em mais de 7 dias ap s coleta As amostras l mpidas n o hemolisadas s o prefer veis Amostras lip micas ict ricas ou contaminadas part culas devem ser filtradas 0 45um ou centrifugadas antes do teste Os soros dos pacientes podem ser inativados mas esta n o uma exig ncia para o perfeito desempenho do teste Inative da seguinte forma 1 Afrouxe as tampas dos recipientes de soro 2 Aque a o soro a 56 C durante 30 minutos em banho maria 3 Deixe o soro esfriar antes de apertar novamente as tampas 4 O soro pode ser mantido congelado at a an lise Recomendamos que os soros dos pacientes n o sejam submetidos a v rios ciclos de congelamento e descongelamento
3. o necess rios aproximadamente 400 ml de solu o tamp o para lavagem de placas PROCEDIMENTO DO TESTE IMPORTANTE Os imunoensaios desta natureza s o sens veis temperatura e dependentes do tempo necess rio seguir risca os procedimentos do teste para garantir um desempenho perfeito Altera es em rela o ao procedimento recomendado podem acarretar resultados err neos 1 Remova a microplaca da bolsa de alum nio Agite os frascos de amostras e de controle antes do uso Preencha um recipiente de reagente com DILUENTE Usando um pipetador multicanal adicione 200 ul de DILUENTE em todos os po os Os po os A1 e B1 s o BRANCOS N O ADICIONE AMOSTRAS A ESTES PO OS Acrescente 10 ul adicionais de diluente a estes po os Acrescente 10 ul de amostra ao po o designado come ando pelo po o H1 Isto resultar numa concentra o final da amostra de 1 21 N O COLOQUE AMOSTRA NUM PO O VAZIO Ap s adicionar a amostra a ser analisada acrescente 10 ul po o de CONTROLE N O REATIVO a cada um dos po os C1 D1 amp Ei Adicione 10 ul de CONTROLE REATIVO por po o aos po os F1 e G1 Misture bem batendo levemente em todos os lados da microplaca tendo o cuidado de manter a placa plana sobre a bancada Para evitar evapora o durante a incuba o cubra cuidadosamente a microplaca com uma tampa de placa fornecida Incube durante 30 minutos a 37 C n o utilize banho maria a 37 C par
4. pelo HEV ELISA MPD 2 Amostras com valores de absorb ncia iguais ou superiores ao valor LIMITE s o consideradas inicialmente reativas pelos crit rios do HEV ELISA MPD e devem ser novamente analisadas em duplicata antes da interpreta o 3 Amostras reativas na segunda an lise devem ser interpretadas como repetidamente reativas para anticorpos para HEV pelos crit rios do HEV ELISA MPD 4 Amostras inicialmente reativas e que comportam se como N o Reativas quando analisadas pela segunda vez s o consideradas negativas pelos crit rios do HEV ELISA MPD CARACTER STICAS ESPEC FICAS DE DESEMPENHO Ao testar amostras de doadores de sangue de reas n o end micas como Alemanha e Austr lia a soropositividade tende a ser bastante baixa aproximadamente 1 2 Contudo em pa ses como a China e Hong Kong onde ocorrem surtos epid micos de HEV durante a esta o das chuvas a soropositividade elevada sendo de aproximadamente 15 A soropositividade no HEV ELISA MPD indica exposi o anterior A soropositividade entre indiv duos sadios em popula es de baixo risco tende a ser baixa aproximadamente lt 1 enquanto a soropositividade entre indiv duos saud veis dentro de reas end micas tende a ser um pouco mais elevada Uma propor o consider vel das infec es por HEV assintom tica e esta a raz o para a soropositividade na aus ncia da doen a LIMITA O DO METODO Resultados repetidamente positivos do
5. HEV ELISA MPD constituem evid ncia presuntiva da presen a de anticorpos para HEV na amostra Um resultado N O REATIVO do HEV ELISA MPD indica prov vel aus ncia de anticorpos detect veis para HEV na amostra Um resultado NEGATIVO n o exclui a possibilidade de exposi o a ou de infec o pelo HEV Pode se suspeitar de resultados falsos reativos com um kit para testes desta natureza A propor o de falsos reativos depender da sensibilidade e da especificidade do kit de teste Para a maioria dos ensaios de triagem ou rastreamento quanto mais elevada a preval ncia de anticorpos na popula o menor ser a propor o de amostras falsas reativas ISEN O DE RESPONSABILIDADE EXPL CITA E LIMITADA O fabricante n o oferece nenhuma outra garantia expressa sen o a de que o kit de teste funcionar como um ensaio de diagn stico in vitro dentro das especifica es e limita es descritas neste Manual de Instru es do produto quando usado em conformidade com as instru es nele contidas O fabricante isenta se de qualquer responsabilidade expressa ou impl cita incluindo as garantias expressas ou impl citas em rela o capacidade de comercializa o de utiliza o ou utilidade impl cita para quaisquer outros fins A responsabilidade do fabricante limita se a substitui o do produto ou ao reembolso do pre o de compra do produto O fabricante n o ser considerado respons vel pelo comprador ou por terceiros por quai
6. Halle de Fret Aeroport P O Box 1015 1211 Genebra 5 Su a Tel N 4122 788 1908 Fax N 4122 788 1986 E mail mpbiosuisse mpbio com Patente EUA 5 741 490 5 770 689 5 885 768 5 686 239 Patente Cingapura 39445 49225 Austr lia 644878 Taiwan 63167 Cor ia do Sul 178399 180530 Outras patentes pendentes O nome e o logotipo Genelabs s o licenciados da Genelabs Technologies Inc
7. MATERIAL ADICIONAL NECESS RIO MAS N O FORNECIDO Papel absorvente para forrar bancadas e toalhas de papel Tubos ou recipientes de polipropileno Pipetas graduadas 5 ml 10 ml Pipetador multicanal capaz de distribuir 50 ul 100 ul e 200 ul Pipetador capaz de distribuir 1 1000 ui 6 Ponteiras de pipetas descart veis 7 Recipientes cubas de reagentes com capacidade para 25 ml 8 gua deionizada ou destilada qualidade reagente 9 Frascos 500 ml 1 litro 10 Uma incubadora a 37 C 11 Um leitor de microplacas de comprimento de onda duplo A so As gt o OU Simples A350 12 Solu o de hipoclorito de s dio 5 ou gua sanit ria para uso dom stico AON 7 PREPARA O DOS REAGENTES 1 CONJUGADO DE TRABALHO a O CONJUGADO DE TRABALHO deve ser preparado imediatamente antes do uso b Para preparar o conjugado dilu do dilua o conjugado a 1 500 com o diluente fornecido no kit por exemplo 10 ul de conjugado para 5 ml de diluente c Use exclusivamente recipientes ou tubos de polipropileno PROTOCOLO DE PREPARA O DE CONJUGADO N mero de testes Vol de conjugado ul Vol de diluente ml 96 24 0 2 SOLU O TAMP O DE LAVAGEM DILU DA a ASOLU O TAMP O DE LAVAGEM DILU DA deve ser preparada imediatamente antes do uso b Dilua 1 volume de CONCENTRADO PARA LAVAGEM DE PLACAS com 19 volumes de gua destilada qualidade reagente Misture bem Para lavar uma placa s
8. Os valores do Controle N o Reativo devem ser lt 0 100 Caso algum valor do Controle N o Reativo n o satisfa a qualquer um dos crit rios anteriores deve ser exclu do como anormal A m dia do Controle N o Reativo RCX deve ser ent o recalculada usando se os valores individuais restantes de Controle N o Reativo Todos os restantes valores de Controle N o Reativo devem satisfazer os crit rios anteriores ou o teste ser considerado inv lido e dever ser repetido 2 C lculo da absorb ncia m dia do Controle Reativo RCX Exemplo Po o N Absorb ncia F1 1 048 G1 1 056 Total 2 104 M dia 2 104 2 1 052 RCX a O Controle Reativo deve ser gt 0 700 Caso um dos valores de Controle Reativo n o satisfizer ambos os crit rios anteriores o teste ser considerado inv lido e dever ser repetido 3 C lculo da diferen a entre RCx e NRCX Exemplo NRCx 0 047 RC x 1 052 RCx NRCx 1 052 0 047 1 005 Para que o teste seja v lido o valor de RCX NRCx deve ser gt 0 600 Caso contr rio deve se suspeitar que a t cnica tenha sido incorreta ou que houve deteriora o de reagentes e o teste dever ser repetido 4 C lculo do VALOR DE CORTE CUT OFF VALOR DE CORTE 0 500 NRCx Exemplo NRCx 0 047 VALOR DE CORTE 0 500 0 047 CUT OFF 0 547 INTERPRETA O DOS RESULTADOS 1 Amostras com valores de absorb ncia inferiores ao VALOR DE CORTE CUT OFF s o consideradas N o Reativas
9. a a incuba o Antes de lavar a microplaca prepare o CONJUGADO DE TRABALHO conforme descrito em PREPARA O DE REAGENTES Remova e descarte a tampa da placa lave ent o a microplaca com SOLU O TAMP O DE LAVAGEM DILU DA usando um dos dois m todos recomendados A Lavadora Autom tica ou Semi Autom tica de Microplacas Lave seis 6 vezes com pelo menos 300 ul por po o e por lavagem 200 ul 10 ul 10 ul 10 ul 10 ul 30 minutos 300 ul por po o x 6 12 18 14 15 16 17 18 19 20 B Lavadora Manual de Microplacas Aspire completamente o conte do de todos os po os levando suavemente a ponta do aspirador at o fundo de cada po o CUIDADO PARA N O ARRANHAR A SUPERF CIE INTERNA DO PO O Preencha toda a placa com pelo menos 300 ul po o e depois aspire imediatamente na mesma ordem Execute este ciclo seis 6 vezes Seque completamente invertendo a microplaca sobre papel absorvente e dando batidas firmes na placa Toda a solu o tamp o de lavagem residual da placa deve ser totalmente eliminada Se houver res duos de solu o tamp o de lavagem na placa poder ocorrer inibi o de desenvolvimento de cor durante a incuba o do substrato Preencha um recipiente de reagente com CONJUGADO DE TRABALHO Usando um pipetador multicanal adicione 100 ul de CONJUGADO DE TRABALHO a cada po o Coloque outra tampa de placa Incube a microplaca durante 30
10. das microplacas MANUAL DE INSTRU ES 1 c pia Bronidox marca registrada da Henkel Chemical Co AVISOS E PRECAU ES 1 Para uso exclusivo em diagn stico in vitro Exclusivamente para uso profissional 3 Solicitamos consultar a documenta o dos produtos para informa es sobre componentes potencialmente perigosos INFORMA ES DE SAUDE E SEGURAN A CUIDADO Este kit cont m material de origem N humana Nenhum m todo de teste pode oferecer garantia total que os produtos de sangue humano n o transmitam infec es MANUSEIE AS AMOSTRAS E OS CONTROLES REATIVOS E N O REATIVOS COMO AGENTES POTENCIALMENTE INFECCIOSOS Recomenda se que os componentes e as amostras do teste sejam manuseados de acordo com as boas pr ticas de laborat rio O descarte dever ser realizado de acordo com os procedimentos de seguran a vigentes O Controle Reativo e o Controle N o Reativo cont m tiomersal e azida s dica A azida s dica pode reagir com o cobre e o chumbo usados em alguns sistemas de canaliza o formando sais explosivos Embora as quantidades usadas neste kit sejam pequenas o descarte de materiais contendo azida deve ser feito por lavagem com volumes relativamente altos de gua de forma a evitar a forma o de azida met lica no sistema de canaliza o 1 Evite a contamina o microbiana dos reagentes ao abrir e retirar al quotas dos frascos originais 2 N o pipete com a boca 3 Manuseie as am
11. ed Diagnostics ELISA HEV Ce DATA DE REVIS O 05 05 Observa o altera es MBK 0011 BRA 0 real adas 21150 096T kit de 96 testes NOME E APLICA O O TESTE HEV ELISA DA MP Diagnostics MPD uma prova imunoenzim tica para a detec o de anticorpos IgG para o v rus da hepatite E HEV no soro ou plasma humanos INTRODU O O diagn stico da hepatite viral devida infe o pelo v rus da hepatite A HAV e pelo v rus da hepatite B HBV poss vel gra as disponibilidade de testes sorol gicos confi veis e sens veis para marcadores apropriados A aus ncia cl nica e diagn stica de marcadores para HAV e HBV levou identifica o de outro grupo de agentes da hepatite viral coletivamente designados v rus da hepatite n o A n o B HNANB 1 2 Foram reconhecidas duas formas epidemiologicamente distintas de HNANB transmitidas seja por via parenteral seja por via fecal ou oral 3 4 5 O v rus respons vel pela maioria dos casos de HNANB com transmiss o parenteral foi clonado 6 A clonagem deste agente denominado v rus da hepatite C HCV levou ao desenvolvimento de testes de diagn stico para a presen a de anticorpos anti HCV Uma segunda forma epidemiologicamente diferente de HNANB denominada HNANB de transmiss o ent rica HNANB TE foi encontrada em pa ses em desenvolvimento Os principais surtos de HNANB TE ocorreram na Asia ex Uni o Sovi tica Am rica Central e frica 7 8 A e
12. it em paralelo Deve tomar se o cuidado de n o tocar ou respingar a borda do po o com conjugado N o sopre na micropipeta Recomenda se usar pipetagem reversa sempre que poss vel A utiliza o de amostras muito hemolisadas soros com coagula o incompleta amostras de plasma contendo fibrina ou amostras com contamina o microbiana pode fornecer resultados err neos N O USE BANHO MARIA PARA INCUBAR AS PLACAS N o use incubadoras de CO Durante a incuba o a 37 C deve se evitar a evapora o Cubra as placas com as tampas adesivas fornecidas Evite abrir e fechar repetidamente a porta da incubadora durante as etapas de incuba o N o mantenha a solu o de interrup o em recipiente raso nem retorne a ao frasco ap s o uso Verifique se o fundo da placa est limpo e seco e se n o h bolhas na superf cie do l quido antes de iniciar a leitura da placa Remova todas as bolhas da placa e g por pancadas leves Se usar equipamento autom tico confira se est aferido antes do uso altamente recomend vel fazer a manuten o de rotina do sistema de aspira o e lavagem para evitar contamina o por passagem de amostras muito reativas para amostras n o reativas INSTRU ES DE ARMAZENAMENTO 1 Conserve o kit HEV ELISA MPD e seus componentes entre 2 C e 8 C quando n o estiver sendo utilizado 2 Todos os reagentes e microplacas do teste s o est veis at a data de validade fornecida
13. lte as instru es de uso Q N o reutilize PRINC PIOS QU MICOS E BIOL GICOS DO PROCEDIMENTO Os po os das tiras de poliestireno da microplaca s o revestidos com tr s ant genos recombinantes do HEV que correspondem s regi es estruturais do v rus da hepatite E As amostras de soro ou plasma humano dilu das na solu o tamp o de dilui o s o incubadas nestes po os revestidos Os anticorpos anti HEV caso presentes se unir o aos ant genos HEV da fase s lida Ap s lavagem completa dos po os para retirada de material n o ligado adiciona se aos po os anti lgG humana purificada por afinidade e marcada com peroxidase do r bano Este anticorpo marcado se ligar a todos os complexos ant geno anticorpo anteriormente formados e o excesso de anticorpos n o ligados removido por lavagem Uma solu o de substrato contendo 3 3 5 5 tetramethylbenzidine TMB ent o adicionada a cada po o A presen a de anticorpos espec ficos indicada pelo desenvolvimento de colora o azul ap s a adi o do substrato A rea o interrompida pela adi o de cido cloridrico A intensidade da cor medida em espectrofot metro a 450 nm e proporcional quantidade de anticorpos presentes na amostra COMPONENTES DO KIT Descri o dos Componentes Quantidade Fornecida MICROPLACA HEV 1 placa Doze tiras de 8 po os por placa 96 po os lacradas em bolsas de alum nio com dessecante Cada po o da micr
14. minutos a 37 C n o utilize banho maria a 37 C para a incuba o Remova e descarte a tampa de placa Repita o procedimento de lavagem como nas etapas 11 e 12 Preencha um recipiente de reagente com SOLU O DE SUBSTRATO Usando um pipetador multicanal adicione 100 ul de SOLU O DE SUBSTRATO a cada po o Coloque uma tampa de placa Incube durante 15 minutos em local escuro e temperatura ambiente 25 3 C Remova e descarte a tampa da placa Usando um pipetador multicanal adicione 100 ul de SOLU O DE INTERRUP O a cada po o Misture suavemente batendo na placa Determine a absorb ncia de cada po o a 450 nm Caso seja usado um instrumento de filtro duplo o comprimento de onda de refer ncia deve ser de 620 nm 100 ul 30 minutos 300 ul por po o x 6 100 ul 15 minutos 100 ul NOTA A absorb ncia deve ser lida no prazo de uma 10 minutos ap s a adi o da SOLU O DE INTERRUP O CONTROLE DE QUALIDADE 1 Em todas as placas de todos os processamentos de amostras deve se testar o BRANCO e o CONTROLE REATIVO em duplicata eo CONTROLE N O REATIVO em triplicata 2 Os valores de absorb ncia do branco devem ser lt 0 100 3 Os valores de absorb ncia do Controle N o Reativo devem ser lt 0 100 depois de subtra do o Branco 4 Pelo menos 2 dos 3 valores de absorb ncia do Controle N o Reativo devem ser lt 0 100 depois de subtra do o Branco 5 Cada um dos 2 valo
15. no fundo das tiras na borda dos po os ou no l quido dos po os com os dedos ou com as ponteiras das pipetas Recomenda se que a vidraria a ser usada com os reagentes seja lavada com cido clor drico 2M e enxag ada abundantemente com gua destilada ou deionizada antes do uso Para obter os melhores resultados deixe que todos os reagentes e amostras atinjam a temperatura ambiente 25 C 3 C antes do uso Imediatamente ap s o uso volte a armazenar entre 2 C e 8 C 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 Use somente gua de qualidade reagente deionizada ou destilada para diluir os reagentes Todos os reagentes devem ser bem misturados antes do USO A solu o de conjugado de trabalho e a solu o tamp o de lavagem dilu da devem ser preparadas imediatamente antes do uso N o exponha os reagentes nem realize testes em reas contendo altos n veis de vapores de desinfetantes qu micos e g vapores de hipoclorito durante as etapas de armazenamento ou de incuba o O contato inibe a rea o colorida Da mesma forma n o exponha os reagentes luz intensa N o retire as microplacas das bolsas de alum nio at imediatamente antes do uso As tiras abertas n o usadas devem ser conservadas entre 2 C e 8 C em suas bolsas de armazenamento com o dessecante fornecido Em cada processamento de amostras de pacientes deve se testar os controles do k
16. oplaca cont m prote nas HEV recombinantes adsorvidas Conservar entre 2 C e 8 C controL CONTROLE N O REATIVO 1 frasco Soro humano normal inativado 160 ul n o reativo para anti HCV anti HEV HBsAg e anti HIV 1 Cont m tiomersal e azida s dica como conservantes Conservar entre gt 2 Ce8BC CONTROLE REATIVO 1 frasco Soro humano inativado contendo 120 ul t tulo elevado de anticorpos IgG espec ficos para HEV Cont m tiomersal e azida s dica como conservantes Conservar entre 2 CeBC DILUENTE 1 frasco Solu o salina com Tris contendo 100 ml soro caprino normal tratado por calor soro albumina bovina e estabilizantes Cont m Bronidox M como conservante Conservar entre 2 C e8 C WASH PLATE aox CONCENTRADO 20X PARA 1 frasco LAVAGEM DE PLACAS 120 ml Solu o tamp o fosfato com Tween 20 Cont m cloroacetamida como conservante Conservar entre 2 Ce8 C CONJUGADO 1 frasco Anti lgG humana preparada em 70 ul cabra e marcada com peroxidase de r bano Cont m tiomersal como conservantes Conservar entre 2 Ce8 C SUBS TMB SUBSTRATO 1 frasco Solu o tamp o contendo 3 12 5 ml 3 5 5 tetramethylbenzidine Conservar em local escuro entre 2 Ce o E sonnfsrosmaTa SOLU O DE INTERRUP O 1 frasco AN Solu o de cido cloridrico 1N 30 ml Conservar em local escuro entre 2 Ce8 C TAMPAS DAS PLACAS 4 unidades Tampas adesivas para uso durante a incuba o
17. ostras as microplacas os controles reativos e os controles n o reativos como agentes potencialmente infecciosos 4 Use vestu rio de laborat rio e luvas descart veis durante a realiza o do teste Descarte as luvas em sacos pl sticos para descarte de lixo biol gico perigoso A seguir lave bem as m os 5 altamente recomend vel que este teste seja realizado em uma c mara adequada para material biol gico perigoso 6 Mantenha todo o material longe de alimentos e bebidas 7 Em caso de acidente ou contato com os olhos lave imediatamente com gua em abund ncia e procure ajuda m dica 8 Consulte imediatamente um m dico caso sejam ingeridos materiais contaminados ou haja contato destes com feridas abertas ou outras solu es de continuidade da pele 9 Nunca adicione gua Solu o de Interrup o 10 11 12 Limpe imediatamente derramamentos de materiais infecciosos com papel absorvente e esfregue imediatamente a rea contaminada com solu o de hipoclorito de s dio a 1 antes de continuar o trabalho O hipoclorito de s dio n o deve ser usado em derramamentos que cont m cidos a menos que a rea seja primeiro enxugada com papel absorvente O material usado incluindo as luvas descart veis deve ser descartado como material biol gico potencialmente perigoso N o esterilize em autoclave material que contenha hipoclorito de s dio Antes do descarte esterilize em autoclave todo o mate
18. res de absorb ncia do Controle Reativo deve ser gt 0 700 depois de subtra do o Branco Caso 1 ou mais valores de Controle Reativo apresente desvio gt 30 da m dia dos seus respectivos controles o processamento considerado inv lido e dever ser repetido 6 Para que o teste seja v lido a diferen a entre as absorb ncias m dias do Controle Reativo e do Controle N o Reativo RCX NRCx deve ser igual ou maior que 0 600 Caso contr rio a t cnica pode ser colocada sob suspeita e o teste dever ser repetido Caso a RCX NRCx seja sempre baixa pode ter ocorrido deteriora o dos reagentes RESULTADOS Cada microplaca deve ser considerada em separado para o c lculo e a interpreta o dos resultados do teste independentemente do n mero de placas processadas OS VALORES M DIOS DE ABSORB NCIA DO BRANCO DEVEM SER SUBTRA DOS DOS VALORES DE ABSORB NCIA DOS CONTROLES E DAS AMOSTRAS ANTES DA INTERPRETA O DOS RESULTADOS A presen a ou aus ncia de anticorpos IgG espec ficos para HEV determinada comparando a absorb ncia das amostras com o VALOR DE CORTE CUT OFF da placa O VALOR DE CORTE CUT OFF para o HEV ELISA MPD calculado como sendo 0 500 a absorb ncia m dia do Controle N o Reativo C LCULO DOS RESULTADOS 1 C lculo da absorb ncia m dia do Controle N o Reativo NRCX Exemplo Po o N Absorb ncia C1 0 048 D1 0 046 E1 0 047 Total 0 141 M dia 0 141 3 0 047 NRCX a
19. rial usado e contaminado a121 C 15 psi durante 30 minutos Alternativamente descontamine o material em solu o de hipoclorito de s dio a 5 durante 30 60 minutos antes de descartar em sacos para lixo biol gico perigoso Descontamine todos os produtos qu micos e reagentes usados adicionando um volume suficiente de hipoclorito de s dio de forma a obter uma concentra o final de pelo menos 1 Deixe agir durante 30 minutos para garantir uma descontamina o eficiente PRECAU ES ANAL TICAS 1 Para garantir um desempenho perfeito do teste necess rio SEGUIR RISCA os procedimentos descritos neste Manual de Instru es A desobedi ncia destes procedimentos podem acarretar resultados err neos N O MODIFIQUE NEM SUBSTITUA REAGENTES DE UM LOTE DO KIT POR OUTRO Os controles o conjugado e as microplacas s o combinados entre si para oferecer um desempenho perfeito Use somente reagentes fornecidos com o kit N o use componentes do kit ap s a data de validade impressa na caixa do kit Evite a contamina o microbiana dos reagentes ao abrir e retirar al quotas dos frascos originais A contamina o reduz prematuramente a vida til dos kits e fornece resultados err neos Use t cnicas ass pticas incluindo pipetas ou ponteiras de pipetas descart veis para retirar al quotas dos frascos Para evitar a contamina o cruzada use uma ponteira de pipeta nova para cada amostra aliquotada n o toque no topo ou
20. squer danos preju zos ou perdas de car ter econ mico causados pelo uso ou aplica o do produto O fabricante n o apresenta nenhuma declara o expressa ou impl cita que este produto n o infringir os direitos de propriedade intelectual de terceiros PROBLEMAS T CNICOS E QUEIXAS Caso haja algum problema t cnico ou queixa solicitamos proceder da seguinte forma 1 Anote o n mero de lote do kit e a data de validade 2 Conserve o kite os resultados obtidos 3 Contate o escrit rio MP Biomedicals mais pr ximo ou o seu distribuidor local REFER NCIAS 1 Feinstone S A Z Kapikian R H Purcell H J Alter and P V Holland 1975 Transfusion associated hepatitis not due to viral hepatitis type A or B New England Journal of Medicine 292 767 2 Prince A M G F Grady and C Hazzi 1974 Long incubation post transfusion hepatitis without serological evidence of exposure to hepatitis B virus Lancet 2 241 3 Alter H J R H Purcell P V Holland and H Popper 1978 Transmissible agent in non A non B hepatitis Lancet 1 459 4 Balayan M S A G Andzhapandze S S Savinskaya E S Ketiladze D M Braginski A P Savinow V F Poleschuk 1983 Evidence for a virus in non A non B hepatitis transmitted via the fecal oral route Intervirology 20 23 5 Tabor E R J Gerety J A Drucker et al 1978 Transmission of non A non B hepatitis from man to chimpanzee Lancet 1 463 6 Choo Q L
21. volu o da doen a geralmente aguda com cura espont nea e sem desenvolvimento de sequelas cr nicas Contudo ocorre uma elevada incid ncia de mortalidade 10 20 em mulheres gr vidas 7 e uma taxa de mortalidade de 1 2 na popula o geral o que 10 vezes superior do HAV O agente etiol gico da HNANB TE foi clonado 9 e denominado v rus da hepatite E HEB A clonagem do HEV por pesquisadores levou identifica o de ep topos virais comuns ao tipo viral teis para o desenvolvimento de um teste de diagn stico para anticorpos anti HEV 10 O HEV ELISA da MP Diagnostics utiliza estes ant genos recombinantes do HEV oriundos da regi o estrutural do genoma viral para detectar a presen a de anticorpos para o HEV DESCRI O DE S MBOLOS USADOS Os s mbolos gr ficos usados ou encontrados nos produtos e embalagens MP Diagnostics est o indicados a seguir Estes s o os s mbolos mais comuns em dispositivos m dicos e respectivas embalagens estes s mbolos s o explicados com mais detalhes no British and European Standard BS EN 980 2008 Usar at Dispositivo Sin nimos m dico x Data de validade para diagn stico in vitro C digo do lote Sin nimos N mero de LOT N mero do lote s cat logo N mero da remessa Aten o Ver Instru es X Limites de temperatura de Uso Representante pa Fabricante EC REP Autorizado na Comunidade Europ ia NV Cont m o suficiente para lt n gt testes CH Consu
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