0210-Influenza A
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1. Repita a reac o utilizando um adaptador de silicone para placas de 96 e ou adicione leo mineral 132. o ao lote anterior est o detalhadas na tabela abaixo Modifica o Motivo N A Folha de Dados de Seguran a 2 3 Material Safety Data Sheet MSDS 4 Informa o Toxicol gica Qu mico Toxicidade Glicerol LD50 oral 4090 mg kg ratinho LD50 oral 12600 mg kg rato LD50 oral 1480 mg kg humano 5 Estabilidade e reactividade Condi es a evitar Calor e humidade Incompatibilidades Bases e agentes oxidantes fortes 6 Protec o pessoal Protec o das m os use luvas apropriadas resistentes a qu micos Protec o dos olhos recomenda se o uso de culos de protec o qu mica 7 Manipula o e armazenamento Manipula o evite o contacto directo com a subst ncia Armazenamento armazene temperatura aconselhada proteja do contacto com a luz Danifica o da embalagem protectora rejeitar o constituinte contido na embalagem 8 Perigos Os componentes da mistura de reac o podem ser perigosos se inalados ingeridos ou absorvidos pela pele Este material pode causar irrita o da pele dos olhos e do tracto respirat rio A ingest o de grandes quantidades desta mistura pode causar dores de est mago v mitos ou diarreia 9 Medidas de Primeiros Socorros No caso de contacto com os olhos deve lavar imediatamente os olhos com gua abundante por cerca de 15 minutos Deve consultar o seu m dico No caso de contacto com a pele deve lavar imediatamente a zona afectada com gua corrente e
3. Controlo Influenza A 3 Po o Interno Interpreta o v rus 188pb x 101pb Amostra Influenza A Validado ar virus Positivo Amostra Influenza A Validado virus Negativo positivo CN Controlo Validado Negativo Tamanho da banda espec fica Tamanho da banda de Controlo Interno Valida o Tabela I1 Interpreta o de an lises n o v lidas Influenza A Controlo Interpreta o kiaissa virus Interno E A Positivo reac o E RE E negativo reac o E E reac o ES Ra E reac o BARNEA e reac ao PE e EA reac ao reac ao A reac o 12 Guia de resolu o de problemas PROBLEMAS Bandas controlo e espec ficas fracas Os controlos internos falharam em diversos po os POSSIVEIS CAUSAS Concentra o da amostra de RNA baixa SUGEST ES Verifique a qualidade e concentra o do RNA Reextraia a amostra de RNA ou tente n o adicionar gua mistura de reac o Repita a reac o com um RNA de boa qualidade Presen a de inibidores da Taq polimerase nas amostras de RNA Repurifique a amostra de RNA Repita a reac o com um RNA de boa qualidade Concentra o de cDNA Presen a de inibidores da Taq polimerase nas amostras de cDNA Repita a reac o de baixa RE reversa Repita a reac o com um cDNA de boa qualidade Produtos de amplifica o secos Verifique a selagem das placas
4. Mistura de primers Acido Desoxiribonucleico Oligonucle tido Mistura de reac o Desoxiribonucle tidos Nucle tidos Tamp o Cloreto de Magn sio Mgci2 Vermelho de Cresol Glicerol DNA polimerase Controlo interno Acido Desoxiribonucleico Oligonucle tido Controlo positivo Acido Desoxiribonucleico DNA Controlo negativo H20 gua bidestilada est ril 3 Propriedades f sico qu micas Componente Aspecto Cor Odor Mistura de primers l quido incolor nenhum Mistura de reac o l quido vermelho rosa nenhum Controlo Interno l quido incolor nenhum Controlo Positivo l quido incolor nenhum Controlo Negativo l quido incolor nenhum 20 O kit Influenza A virus Qual PCR Box 1 0 foi testado com plasm deos amplificados com a sequ ncia alvo DNA e cDNA de outras esp cies de v rus obtendo amostras positivas e negativas A Genebox garante a qualidade e a fiabilidade do seu kit Influenza A virus Qual PCR Box 1 0 Especificidade O kit Influenza A virus Qual PCR Box 1 0 espec fico para a detec o do gene segmento 7 do genoma de Influenza A virus em amostras biol gicas A sua especificidade foi comprovada com plasm deos amplificados com a sequ ncia alvo de Influenza A virus e outras esp cies de v rus obtendo amostras positivas e negativas A especificidade do kit Influenza A virus Qual PCR Box 1 0 conferida por INFLUA mix que apresenta 100 de homologia com todas as sequ ncias de todas as esp cies de Influenza A virus r
5. es da Directiva Europeia 98 79 CE sobre dispositivos m dicos de diagn stico in vitro conformidade de acordo com o Anexo IV transposto para as leis nacionais dos estados membros da Uni o Europeia Europeia A ficha e os documentos t cnicos deste produto s o mantidos na geneBOX biocant centro de inova o em biotecnologia 3060 197 Cantanhede Portugal Sandra Balseiro Directora T cnica 19 geneBOX investiga o e desenvolvimento de testes de diagn stico garante que os primers presentes no Influenza A virus Qual PCR Box apresentam as especificidades dadas nas folhas e tabelas de interpreta o de resultados do produto 1 INFLUA mix Cl CP e CN Armazenamento a 202C INFLUA mix CI CP e CN permanecem est veis durante 12 meses a partir da data de produ o ver validade do lote na embalagem Armazenamento a 42C de INFLUA mix CI CP e CN permanecem est veis durante 15 dias a partir da data de recep o temperatura ambiente INFLUA mix CI CP e CN permanecem est veis durante 3 dias a partir da data de recep o INFLUA mix CI CP e CN nunca devem ser deixados ou armazenados com a tampa aberta 2 RNA e cDNA As amostras de RNA e cDNA armazenadas em gua livre de RNases permanecem est veis durante 2 anos a 202C ou 80 C geneBOX investiga o e desenvolvimento de testes de diagn stico responsabiliza se perante os seus clientes pelos defeitos no material e componentes dos seus produtos aplicados
6. concentra o exacta Repita a reac o com um cDNA de boa qualidade Problemas com tamp o de electroforese Fora de prazo ou Use um tamp o recomendado novo composi o errada Protocolo de electroforese em gel de agarose Prepara o do gel de agarose a 4 I 2 3 4 5 6 7 Dissolver 8 gramas de p agarose em 200 ml de tamp o TAE 1X Dissolver completamente a agarose aquecendo a no microondas Arrefe a o gel at aproximadamente 502C Adicione pelo menos 20 pl de brometo de et dio 10 mg ml ou de Sybr Safe 10000x concentrado agarose Agite at estar completamente incorporado Numa superf cie nivelada monte a placa do gel com 96 po os Verta uma camada de gel com cerca de 5mm Deixe o gel arrefecer Aten o este reagente um forte agente mutag nico leia atentamente a MSDS do produto Electroforese 1 Submirja o gel na tina de electroforese com tamp o TAE 1X 2 Remova os pentes com cuidado do gel 3 Adicione 10 pl do produto de PCR em cada po o 4 Ligue a tina de electroforese corrente com uma voltagem m dia 115V 5 Deixe a electroforese correr por cerca de 20 minutos ou at o corante estar a 2 3 da linha 6 Ponha o gel no transiluminador 7 Fotografe o gel e identifique o 8 Use a Tabela de interpreta o de resultados para interpretar os resultados 11 LEPSER ES Jet PD ESE DS Tabela I Interpreta o de an lises v lidas
7. em condi es normais Os produtos da empresa que apresentam esta garantia devem ser substitu dos sem encargos para o cliente Esta garantia aplica se s para produtos que sejam manipulados e armazenados de acordo com as especifica es e recomenda es de utiliza o As reclama es devem ser enviadas por escrito directamente para a geneBOX e devem ser acompanhadas por uma c pia da guia de transporte ou factura do produto Este produto n o pode ser reformulado reembalado ou revendido em nenhuma forma sem o expresso consentimento da geneBOX investiga o e desenvolvimento de testes de diagn stico 18 Protocolo de amplifica o por PCR 1 4 Pr an lise 1 Colheita de amostras Para garantir um teste de alta qualidade das amostras devem ser colhidas nas seguintes condi es A Plasma e soro A amostra de sangue deve ser colhida para Tubos de colheita 2 10ml BD Vacutainer Blood EDTA ou Tubos de colheita Vacutainer BD Blood Serum vidro ou pl stico Alternativamente podem ser usados tubos de colheita com marca o CE de outras marcas N O UTILIZAR AMOSTRAS HEPARINIZADO COM ESTE M TODO B Zaragatoas A amostra deve ser colhida com uma zaragatoa Dacron de pl stico Alternativamente podem ser usadas zaragatoas de pl stico com marca o CE de outras marcas N o use zaragatoas de alum nio ou madeira Ap s a colheita as amostras podem ser transportados em meio de cultura 1 2 ml como nos s
8. Ce ege Uo geneBox 906 DESENVOLVIMENTO E PRODU O DE TESTES DE DIAGN STICO geneBOX R amp D Diagnostic Tests biocant centro de inova o em biotecnologia n cleo 4 lote 3 3060 197 Cantanhede Portugal tel 351 231410946 fax 351 231 410947 e mail infoogenebox com 24 C digo do Produto 0210 Influenza A virus Qual PCR Box 1 0 Dispositivo para utiliza o in vitro Manual de I nstru es geneBox DESENVOLVIMENTO E PRODU O DE TESTES DE DIAGN STICO Vers o1 1 Abril de 2011 Apresenta o uiaszsassamadeiisaria oncearassensiasandaninmes na santa ma sadena ad 4 Altera es e Melhoramento do produto ss 4 Controlo da Qualidade 5 Sensibilidade e Especificidade s 5 Componentes do Influenza A virus Box 1 0 Kit 6 Pr an li S nia 7 Colheita ssspasasspragessorscopesnoaaso peasriesrioipaaniadassnagisman s 7 Armazemamento 7 EANSD ONO desses vestia cincis rearea 8 Extrac o de RNA sssimacsitasteatsacastisteiaaiaisaa tada 9 Reagent eSis 9 Amplifica o por PCR sta 9 Par metros do programa de PCR 10 Protocolo de electroforese em gel de agarose 11 Prepara o do gel a 4 11 Electrotone SE ciis esreseoiaeieseise eiei 11 Tabela de interpreta o dos Resultados ss 12 Guia de resolu o de problemas 13 Avisos precau es eikai nraere rrenan 15 Guia T CNICO ssissisisaaasis
9. a Utilize micropipetas luvas e batas espec ficas para cada rea Utilize preferencialmente luvas sem talco uma vez que o talco pode inibir a reac o de PCR Utilize pontas de filtro de forma a minimizar contamina es cruzadas Verifique periodicamente as micropipetas de forma a assegurar a varia o de pipetagem inferior a 5 Utilize micropipetas adaptadas a cada volume de pipetagem Verifique periodicamente os termocicladores de forma a assegurar a varia o de temperaturas inferiores a 1 Abra e feche os reagentes com cuidado Depois de utilizar armazene os restantes componentes do kit s temperaturas recomendadas devidamente fechados N o utilize o kit com a validade expirada 15 PROBLEMAS Falsos negativos de uma banda espec fica com o controlo interno normal POSSIVEIS CAUSAS Degrada o da amostra de RNA SUGEST ES Reextraia a amostra de RNA de material fresco Degrada o da amostra de cDNA Repita a reac o de transcri o reversa com um RNA de boa qualidade Repita a reac o com um cDNA de boa qualidade Esfrega o de bandas Degrada o da amostra de RNA Reextraia a amostra de RNA de material fresco Degrada o do cDNA da amostra Repita a reac o com um cDNA de boa qualidade Amostra de cDNA muito concentrada Verifique a qualidade e concentra o do cDNA Dissolva o cDNA em ddH20 de forma a obter a
10. ec cooling rate superior a 1 5 C sec gama de temperaturas 4 1002C uniformidade de temperaturas 0 5 C heated lid superior a 100 C 6 Validade Como especificado na embalagem Se os problemas persistirem por favor contactem com o apoio t cnico para o 351 231 410 946 17 Avisos e precau es 2 2 Os componentes dos kits s o resistentes s temperaturas de armazenamento indicadas O armazenamento dos kits a temperaturas n o recomendadas pode levar a rupturas no material e contamina o dos reagentes dos kits Os materiais pl sticos fornecidos neste kit s o resistentes gama de temperaturas de utiliza o e armazenamento recomendado A sua utiliza o em gamas distintas de temperaturas pode causar rupturas impossibilitando a utiliza o normal do kit Verifique a concentra o e qualidade de todas as amostras de RNA e cDNA antes de utilizar este kit Instru es de gerais de seguran a no laborat rio N o coma beba ou fume dentro do laborat rio Utilize sempre luvas descart veis e mude as com frequ ncia Utilize batas limpas e proteja os olhos sempre que se justifique Lave as m os antes e depois de qualquer manipula o de amostras ou reagentes Lave a rea de trabalho antes e depois de qualquer manipula o N o pipete com a boca 16 Protocolo de amplifica o por PCR 3 4 Extrac o de RNA A sensibilidade do teste pode ser reduzido se voc usar um m
11. egistadas em bases de dados Sensibilidade A sensibilidade do kit Influenza A virus Qual PCR Box 1 0 foi testada e a Genebox garante a detec o de n veis m nimos do gene segmento 7 do genoma de Influenza A virus at 25x10 ng de cDNA Mistura de reac o INFLUA 1 tubo INFLUA mix 1 ml conservar de 30 a 15 C Controlo Interno CI 1 tubo CI 100 ul conservar de 30 a 15 2C Controlo Positivo CP ltubo CP 50ul conservar de 30 a 15 2C Controlo Negativo CN 1tubo CN 50 l conservar de 30 a 152C Manual de instru es 1 Manual de Instru es Componentes da PCR Master Mix Nucle tidos concentra o final de cada dNTP 1000 uM Tamp o da PCR concentra es finais s o 3 3x NH4 2 0 mM MgCl e 0 4 u ul Taq DNA polimerase pH 8 3 Glicerol concentra o final 16 6 Vermelho de cresol concentra o final de 300ug ml Nome do Produto Influenza A virus Qual PCR Box 1 0 Numero do Produto GB 0210 Utiliza o Detec o de Influenza A virus Produ o geneBOX R amp D Diagnostic Tests biocant centro de inova o em biotecnologia n cleo 4 lote 3 3060 197 cantanhede portugal N s geneBOX investiga o e desenvolvimento de testes de diagn stico indubitavelmente declaramos que este produto ao qual se relaciona esta declara o de conformidade est em conformidade com os seguintes documentos normativos ISO 9001 2008 e ISO 13485 2004 Seguindo ainda as indica
12. eguintes exemplos STM AMPLICOR meio de transporte da amostra Roche Inc Kit para colheita de zaragatoas Digene Corporation M dio de PBS a 10 Home made Precau o Todas as amostras t m de ser tratadas como material potencialmente infeccioso NOTA Os Nossos Kits tamb m podem ser usado com amostras de fezes e urina desde que se utilize um kit de extrac o adequado 2 Armazenamento da Amostra A sensibilidade do teste pode ser reduzida com o processo repetitivo de congela o descongela o ou com longos per odos de armazenamento Protocolo de amplifica o por PCR 2 4 A Plasma e soro Se o plasma ou soro for testado dentro de 24 horas ap s a sua colheita as amostras podem ser armazenadas temperatura ambiente 15 25 C Se o teste realizado dentro de uma semana as amostras devem ser armazenadas no frio 2 8 C ou por per odos mais longos entre 15 30 C B Zaragatoas Se a amostra for testada dentro de 24 horas ap s a sua colheita as zaragatoas podem ser armazenadas no frio 2 8 C Se o teste realizado dentro de uma semana ou por per odos mais longos as amostras devem ser armazenadas entre 15 30 C 3 Transporte de amostras A sensibilidade do teste pode ser comprometida se as amostras forem expostas a altas temperaturas por um longo per odo de tempo A Plasma e soro O sangue colhido deve ser armazenado a frio 2 8 C at ao envio e deve ser transportad
13. ird flu news php 23 Folha de Dados de Seguran a 3 3 Material Safety Data Sheet MSDS Equipamento especial de combate ao inc ndio quando s o libertadas grandes quantidades de subst ncia trabalhe apenas com protec o adequada para olhos e pele 11 Medidas a tomar no caso de derrame acidental Precau es pessoais evite o contacto directo com a subst ncia Limpeza limpe normalmente a rea afectada n o s o necess rios cuidados adicionais Protec o da pele use uma bata de laborat rio 12 Informa o ecol gica N o existem dados dispon veis 13 Informa o sobre a elimina o Elimine o material de acordo com toda a regulamenta o aplic vel Grupo IV res duos hospitalares espec ficos 14 Informa o sobre o transporte No transporte dos Kits devem estar a seguradas as temperaturas n o devendo ultrapassar os 152C A dura o do transporte n o deve ser superior a 3 dias de modo a garantir que todos os componentes do Kit cheguem em perfeitas condi es aos seus destinat rios 15 Contactos teis N mero Nacional de Emerg ncia 112 Centro de Informa o Anti Venenos 808 250 143 16 Outras informa es As informa es acima dispon veis s o baseadas no n vel de conhecimento actual devendo ser utilizado apenas como guia A geneBOX R amp D Diagnostic Tests n o se responsabiliza por qualquer dano causado pela manipula o inapropriada ou pelo contacto com os referidos produtos Pa
14. ma reac o CP e CN 3 Para o controlo positivo proceder como em 2 substituindo o DNA de amostra por 1 ul de Tubo Controlo Positivo CP 4 Para o controlo negativo proceder como em 2 substituindo o Controlo Interno por 1 ul de gua bidestilada est ril e o DNA de amostra por 1 ul de Tubo controlo negativo CN 5 Coloque os componentes da reac o no termociclador e corra o seguinte programa de PCR Programa PCR Fim 42C Infinito 1 6 Detecte os produtos do PCR com uma electroforese em gel de agarose a 4 Use a Tabela de interpreta o de resultados para interpretar os resultados 10 Avisos e precau es 1 2 A amplifica o por PCR permite nos obter milh es de c pias de DNA a partir de uma pequena quantidade de amostra Infelizmente isto tamb m verdade para o DNA contaminante que pode comprometer performance da nossa reac o Consequentemente pr ticas laboratoriais espec ficas podem evitar a presen a de amplifica es inespec ficas Em baixo encontram se descriminadas as recomenda es da Genebox Separe fisicamente as reas de pr PCR e de p s PCR O fluxo Laboratorial deve ser sempre unidireccional da rea pr PCR para a rea p s PCR Deve sempre utilizar se equipamentos espec ficos para cada area de trabalho prepara o de amostras pr amplifica o amplifica o e p s amplifica o Todos os equipamentos utilizados na rea de p s PCR n o devem sais desta zon
15. o em conformidade com as instru es nacionais para o transporte amostras Biol gicas patog nicos Para garantir uma boa qualidade da amostra estas devem ser transportadas dentro de 24h B Zaragatoas A amostra colhida deve ser armazenada a frio 2 8 C at ao envio e deve ser transportada em conformidade com as instru es nacionais para o transporte amostras Biol gicas patog nicos Para garantir uma boa qualidade da amostra estas devem ser transportadas dentro de 24h 1 Pureza e Concentra o do RNA Para obter bons resultados com o Influenza A virus Qual PCR Box 1 0 recomenda se o uso de kits de extrac o de RNA e de transcri o reversa que apresentem marca o CE de modo a obter um RNA extra puro e uma transcri o reversa com bom rendimento e que garanta a qualidade do cDNA obtido 2 DNA Polimerase O Influenza A virus Qual PCR Box 1 0 foi intensivamente testado utilizando a DNA polimerase da Reagente 5 Reagente 5 Lisboa Portugal 3 INFLUA mix Para uma boa performance detec o de Influenza A virus com o Influenza A virus Qual PCR Box 1 0 obrigat ria a utiliza o da INFLUA Mix fornecida com o Kit 4 Procedimentos de amplifica o Para uma correcta utiliza o do kit aconselha se a seguir o programa de PCR apresentado neste Manual de Instru es 5 Termociclador Recomenda se utiliza o de qualquer Termociclador que apresente as seguintes caracter sticas heating rate superior a 2 5 C s
16. ra mais esclarecimentos por favor contactem com o apoio t cnico para o 351 231 410 946 22 Folha de da Refer ncias dos de seguran ismassaseessessasesarasraso seonieisasaopasdo Apresenta o O v rus Influenza do tipo A um g nero pertencente fam lia Orthomyxoviridae dos v rus e o agente etiol gico da gripe influenza em aves e em alguns mam feros nomeadamente su nos Ocasionalmente os v rus podem ser transmitidos de aves selvagens para animais dom sticos podendo originar surtos de gripe influenza e pandemias em humanos Os v rus influenza A s o classificados de acordo com o tipo de hemaglutinina H1 a H16 e o tipo de neuraminidase N1 e N9 sendo que ao n vel estrutural os v rus influenza do tipo A s o todos semelhantes O genoma formado por cerca de 13588 bases e organizado em oito cadeias de RNA simples de sentido negativo que codificam onze prote nas Influenza A virus Qual PCR Box 1 0 um teste para diagn stico molecular da infec o por Influenza A virus com maior sensibilidade especificidade e rapidez do que os m todos tradicionais por cultura Influenza A virus Qual PCR Box 1 0 detecta o gene segmento 7 de Influenza A virus Este produto pode ser melhorado de modo a incluir novas variantes que venham a ser descritas bem como para aumentar o seu rendimento As altera es adi es ou modifica es de INFLUA Mix Controlo Interno Controlo Positivo ou Controlo Negativo em rela
17. sab o Lave a roupa contaminada antes da sua utiliza o No caso de ingest o lave a boca com gua abundante Deve contactar o seu m dico se necess rio No caso de inala o mudar a v tima para um local arejado Se encontrar inanimado aplique respira o artificial Se apresentar dificuldades respirat rias aplique oxig nio Deve consultar o seu m dico 10 Medidas a tomar em caso de inc ndio Meios de extin o gua di xido de carbono p qu mico seco ou espuma apropriada Meios de extin o n o aconselhados n o existem restri es conhecidas Perigos espec ficos de exposi o em caso de inc ndio podem emitir fumos t xicos de di xido e mon xido de carbono nitrog nio f sforo cloreto de hidrog nio e g s hidrog nio 21 Folha de Dados de Seguran a 1 3 Material Safety Data Sheet MSDS geneBOX R amp D Diagnostic Tests PCR Kits Produtos PCR da geneBOX Esta folha de dados de seguran a aplic vel a todos os produtos de PCR da geneBOX 1 Produtos Qu micos e Identifica o da Companhia Data de realiza o Dezembro de 2010 Grupo do produto Produtos de PCR da geneBOX Manufactura o geneBOX R amp D Diagnostic Tests biocant centro de inova o em biotecnologia n cleo 4 lote 3 3060 197 Cantanhede Portugal tel 351 231410 946 fax 351 231 410 947 e mail info genebox com 2 Composi o e Informa o sobre os reagentes Componente Qu mico Nome vulgar N de lote
18. siasassaisasesenraaiisniasistissia aana 17 Garantia sspssssssssasbsspsspasiseiosfasbes biasena Sion da dninni Aitari ainiaan 18 Aviso de Garantia sssssiapesisassssasiiaisagasstadasasr as pesesaasapansetns gar a 18 Declara o de Conformidade aeaas 19 Refer ncias 1 Alexander Nagy Veronika Vostinakova Zuzana Pirchanova Lenka Cernikova Zuzana Dirbakova Miroslav Mojzis Helena Jirincova Martina Havlickova Adam Dan Krisztina Ursu Stefan Vilcek Jitka Hornickova 2010 Development and evaluation of a one step real time RT PCR assay for universal detection of influenza A viruses from avian and mammal species Arch Virol 155 665 673 2 Bao Y Bolotov P Dernovoy D Kiryutin B Zaslavsky L Tatusova T Ostell J Lipman D 2008 The Influenza Virus Resource at the National Center for Biotechnology Information J Virol 82 596 601 http www ncbi nlm nih gov genomes FLU FLU html 3 Fouchier RAM Bestebroer TM Herfst S Van Der Kemp L Rimmelzwaan GF Osterhaus DME 2000 Detection of influenza A viruses from different species by PCR amplification of conserved sequences in the matrix gene J Clin Microbiol 38 4096 4101 4 Hoffmann E Stech J Guan Y Webster RG Perez DR 2001 Universal primer set for the full length amplification of all influenza A viruses Arch Virol 146 2275 2289 5 http www cdc gov 6 http www thepigsite com diseaseinfo 118 swine influenza virus si flu 7 http www thepoultrysite com bird flu b
19. todo de isolamento de RNA ineficiente A detec o destes tipo de v rus requer amostras de RNA altamente puras e integras As quantidade e qualidade das amostras dependem do protocolo de isolamento de RNA usado Recomenda se a kits de isolamento seguintes tanto para plasma soro como para zaragatoas QlAamp RNesy Mini Kit from QIAGEN QlAamp RNA Viral Mini Kit from QIAGEN Alternativamente podem ser usados outros kits com a marca o CE para extrac o de RNA que garantam bons niveis de concentra o e integridade da amostra S ntese de cDNA Para a detec o de Influenza A virus por PCR necess rio cDNA Recomenda se que a transcri o reversa para cDNA seja realizada utilizando kits com marca o CE que garantam a qualidade dos produtos finais obtidos Reagentes Amostra de cDNA Mistura de reac o INFLUA mix Controlo interno CI Controlo positivo CP Controlo negativo CN gua bi destilada est ril n o fornecida Este componente apresenta alto potencial contaminante dado conter cDNA do v rus Influenza A recomenda se o m ximo cuidado no seu manuseamento Protocolo de amplifica o por PCR 4 4 Amplifica o por PCR 1 Agite brevemente todos os tubos do kit e os tubos de DNA 2 Para cada detec o pipete de acordo com a tabela Tabela Tubo INFLUA mix Doo su Tubo Controlo Interno CI DNA de amostra Volume final NOTA Por cada utiliza o do kit deve correr pelo menos u
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