2410 Coxiella burnetti1
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1. o de DNA que apresente marca o CE de modo a obter um DNA extra puro 2 DNA Polimerase O Coxiella burnetti Qual PCR Box 1 0 foi intensivamente testado utilizando a DNA polimerase da Reagente 5 Reagente 5 Lisboa Portugal 3 COXB mix Para uma boa performance detec o de Coxiella burnetti com o Coxiella burnetti Qual PCR Box 1 0 obrigat ria a utiliza o da COXB Mix fornecida com o Kit 4 Procedimentos de amplifica o Para uma correcta utiliza o do kit aconselha se a seguir o programa de PCR apresentado neste Manual de Instru es 5 Termociclador Recomenda se utiliza o de qualquer Termociclador que apresente as seguintes caracter sticas heating rate superior a 2 5 C sec cooling rate superior a 1 5 C sec gama de temperaturas 4 1002C uniformidade de temperaturas 0 5 C heated lid superior a 100 C 6 Validade Como especificado na embalagem Se os problemas persistirem por favor contactem com o apoio t cnico para o 351 231 410 946 17 Avisos e precau es Os componentes dos kits s o resistentes s temperaturas de armazenamento indicadas O armazenamento dos kits a temperaturas n o recomendadas podem levar a rupturas no material e contamina o dos reagentes dos kits Os materiais pl sticos fornecidos neste kit s o resistentes gama de temperaturas de utiliza o e armazenamento recomendadas A sua utiliza o em gamas distintas de temperaturas pode causar r2. Repurifique a amostra de DNA Repita a reac o com um DNA de boa qualidade Repurifique a amostra de DNA Repita a reac o com um DNA de boa qualidade Produtos de amplifica o secos Verifique a selagem das placas Repita a reac o utilizando um adaptador de silicone para placas de 96 e ou adicione leo mineral
3. corrente com uma voltagem m dia 115V 5 Deixe a electroforese correr por cerca de 20 minutos ou at o corante estar a 2 3 da linha 6 Ponha o gel no transiluminador 7 Fotografe o gel e identifique o 8 Use a Tabela de interpreta o de resultados para interpretar os resultados 11 Tabela de Interpreta o de resultados Tabela I Interpreta o de an lises v lidas Po o Coxiella Controlo burnetti Interno Interpreta o Valida o 256pb 101pb Amostra coxo burnetti Validado Negativo Tamanho da banda espec fica Tamanho da banda de Controlo Interno Tabela Il Interpreta o de an lises n o v lidas Po o Coxiella Controlo burnetti Interno 256pb 101pb pre RO Interpreta o Valida o Coxiella burnetti Po reac o negativo inv lido reac o Controlo negativo inv lido reac o Control Rep li reac o o de EEE 12 PROBLEMAS Bandas controlo e espec ficas fracas Os controlos internos falharam em diversos po os POSSI VEI S CAUSAS Concentra o da amostra de DNA baixa Guia de resolu o de problemas SUGEST ES Verifique a qualidade e concentra o do DNA Reextraia a amostra de DNA ou tente n o adicionar gua mistura de reac o Repita a reac o com um DNA de boa qualidade Presen a de inibidores da Taq polimerase nas amostras de DNA Presen a de inibidores da Taq polimerase nas amostras de DNA
4. data de recep o COXB mix Cl CP e CN nunca devem ser deixados ou armazenados com a tampa aberta 2 DNA O DNA extra do por salting out ou por qualquer outro m todo deve ser armazenado a 4 C ou 20 C Ao optar pela congela o das amostras devem ser evitadas ciclos repetidos de congela o descongela o de modo a impedir a degrada o da amostra As amostras de DNA armazenadas em dH20 permanecem est veis durante pelo menos 4 semanas a 4 C ou 2 anos a 20 C As amostras de DNA armazenadas em tamp o TE permanecem est veis durante pelo menos 2 anos a 4 C ou 5 anos a 20 C geneBOX investiga o e desenvolvimento de testes de diagn stico responsabiliza se perante os seus clientes pelos defeitos no material e componentes dos seus produtos aplicados em condi es normais Os produtos da empresa que apresentam esta garantia devem ser substitu dos sem encargos para o cliente Esta garantia aplica se s para produtos que sejam manipulados e armazenados de acordo com as especifica es e recomenda es de utiliza o As reclama es devem ser enviadas por escrito directamente para a geneBOX e devem ser acompanhadas por uma c pia da guia de transporte ou factura do produto Este produto n o pode ser reformulado reembalado ou revendido em nenhuma forma sem o expresso consentimento da geneBOX investiga o e desenvolvimento de testes de diagn stico 18 Protocolo de amplifica o por PCR
5. 1 4 Pr an lise 1 Colheita de amostras Para garantir um teste de alta qualidade das amostras devem ser colhidas nas seguintes condi es A Plasma e soro A amostra de sangue deve ser colhida para Tubos de colheita 2 10ml BD Vacutainer Blood EDTA ou Tubos de colheita Vacutainer BD Blood Serum vidro ou pl stico Alternativamente podem ser usados tubos de colheita com marca o CE de outras marcas N O UTILIZAR AMOSTRAS HEPARINIZADO COM ESTE M TODO B Zaragatoas A amostra deve ser colhida com uma zaragatoa Dacron de pl stico Alternativamente podem ser usadas zaragatoas de pl stico com marca o CE de outras marcas N o use zaragatoas de alum nio ou madeira Ap s a colheita as amostras podem ser transportados em meio de cultura 1 2 ml como nos seguintes exemplos STM AMPLI COR meio de transporte da amostra Roche Inc Kit para colheita de zaragatoas Digene Corporation M dio de PBS a 10 Home made Precau o Todas as amostras t m de ser tratadas como material potencialmente infeccioso NOTA Os Nossos Kits tamb m podem ser usado com amostras de fezes e urina desde que se utilize um kit de extrac o adequado 2 Armazenamento da Amostra A sensibilidade do teste pode ser reduzida com o processo repetitivo de congela o descongela o ou com longos per odos de armazenamento Protocolo de amplifica o por PCR 2 4 A Plasma e soro Se o plasma ou soro for testado d
6. 2 3079 8 Hassig M Sager H Reitt K et al 2003 Neospora caninum in sheep a herd case report Vet Parasitol 117 213 220 9 Heinzen RA Frazier ME Mallavia LP 1990 Nucleotide sequence of Coxiella burnetii superoxide dismutase Nucleic Acids Res 18 6437 10 Hurtado A Aduriz G Moreno B et al 2001 Single tube nested PCR for the detection of Toxoplasma gondii in fetal tissues from naturally aborted ewes Vet Parasitol 102 17 27 11 Kim SG Kim EH Lafferty CJ Dubovi E Coxiella burnetii in bulk tank milk samples United States Emerg Infect Dis 2005 23 Folha de Dados de Seguran a 3 3 Material Safety Data Sheet MSDS Equipamento especial de combate ao inc ndio quando s o libertadas grandes quantidades de subst ncia trabalhe apenas com protec o adequada para olhos e pele 11 Medidas a tomar no caso de derrame acidental Precau es pessoais evite o contacto directo com a subst ncia Limpeza limpe normalmente a rea afectada n o s o necess rios cuidados adicionais Protec o da pele use uma bata de laborat rio 12 Informa o ecol gica N o existem dados dispon veis 13 Informa o sobre a elimina o Elimine o material de acordo com toda a regulamenta o aplic vel Grupo IV res duos hospitalares espec ficos 14 Informa o sobre o transporte No transporte dos Kits devem estar a seguradas as temperaturas n o devendo ultrapassar os 15 C A dura o do transporte n o deve se
7. Qu micos e Identifica o da Companhia Data de realiza o Mar o de 2011 Grupo do produto Produtos de PCR da geneBOX Manufactura o geneBOX R amp D Diagnostic Tests biocant centro de inova o em biotecnologia n cleo 4 lote 3 3060 197 Cantanhede Portugal tel 351 231410 946 fax 351 231 410 947 e mail info genebox com 2 Composi o e Informa o sobre os reagentes Componente Qu mico Nome vulgar N de lote Mistura de primers Acido Desoxiribonucleico Oligonucle tido Mistura de reac o Desoxiribonucle tidos Nucle tidos Tamp o Cloreto de Magn sio Mgci2 Vermelho de Cresol Glicerol DNA polimerase Controlo interno Acido Desoxiribonucleico Oligonucle tido Controlo positivo Acido Desoxiribonucleico DNA Controlo negativo H20 gua bidestilada est ril 3 Propriedades f sico qu micas Componente Aspecto Cor Odor Mistura de primers l quido incolor nenhum Mistura de reac o l quido vermelho rosa nenhum Controlo Interno l quido incolor nenhum Controlo Positivo l quido incolor nenhum Controlo Negativo l quido incolor nenhum 20 Controlo de Qualidade O kit Coxiella burnetti Qual PCR Box 1 0 foi testado com plasm deos amplificados com a sequ ncia alvo e DNAs outras esp cies de bact rias obtendo amostras positivas e negativas A Genebox garante a qualidade e a fiabilidade do seu kit Coxiella burnetti Qual PCR Box 1 0 Especificidade O kit Coxiella burnetti Qual PCR Box 1 0 espec fico
8. de causar irrita o da pele dos olhos e do tracto respirat rio A ingest o de grandes quantidades desta mistura pode causar dores de est mago v mitos ou diarreia 9 Medidas de Primeiros Socorros No caso de contacto com os olhos deve lavar imediatamente os olhos com gua abundante por cerca de 15 minutos Deve consultar o seu m dico No caso de contacto com a pele deve lavar imediatamente a zona afectada com gua corrente e sab o Lave a roupa contaminada antes da sua utiliza o No caso de ingest o lave a boca com gua abundante Deve contactar o seu m dico se necess rio No caso de inala o mudar a v tima para um local arejado Se encontrar inanimado aplique respira o artificial Se apresentar dificuldades respirat rias aplique oxig nio Deve consultar o seu m dico 10 Medidas a tomar em caso de inc ndio Meios de extin o gua di xido de carbono p qu mico seco ou espuma apropriada Meios de extin o n o aconselhados n o existem restri es conhecidas Perigos espec ficos de exposi o em caso de inc ndio podem emitir fumos t xicos de di xido e mon xido de carbono nitrog nio f sforo cloreto de hidrog nio e g s hidrog nio 21 Folha de Dados de Seguran a 1 3 Material Safety Data Sheet MSDS geneBOX R amp D Diagnostic Tests PCR Kits Produtos PCR da geneBOX Esta folha de dados de seguran a aplic vel a todos os produtos de PCR da geneBOX 1 Produtos
9. ege eUe geneBox 000 DESENVOLVIMENTO E PRODU O DE TESTES DE DIAGN STICO geneBOX R amp D Diagnostic Tests biocant centro de inova o em biotecnologia n cleo 4 lote 3 3060 197 Cantanhede Portugal tel 351 231410946 fax 351 231 410947 e mail info genebox com 24 C digo do Produto 2410 Coxiella burnetti Qual PCR Box 1 0 Dispositivo para utiliza o in vitro Manual de Instru es 0 eo genesox 000 DESENVOLVIMENTO E PRODU O DE TESTES DE DIAGN STICO Vers o1 1 Abril de 2011 Apresenta O ic assim sssnemistaiceadesiesdeimaiaiseaseiridiea ias Te meme 4 Altera es e Melhoramento do produto 4 Controlo da Qualidade cseteteeeerereereeeerneeerarneeents 5 Sensibilidade e Especificidade s 5 Componentes do Coxiella burnetti Box 1 0 Kit 6 Protocolo de amplifica o por PCR 7 Pr an lise 7 Colheita seinntear anina 7 Armazemamento s ssa 7 Transporte 8 Extrac o de DNA usincirua sa dineairnaa dies tendanas 9 REAGENTES rereana sigam 9 Amplifica o por PCR sia 9 Par metros do programa de PCR 10 Protocolo de electroforese em gel de agarose 11 Prepara o do gel a 4 11 Electroforese 11 Tabela de interpreta o dos Resultados n se 12 Guia de resolu o de problemas sssecsereieirerneees 13 AVv SOS precaU eS eseeseserreirirerisierrrerirnrteranisiririsinenrn
10. eneBOX R amp D Diagnostic Tests biocant centro de inova o em biotecnologia n cleo 4 lote 3 3060 197 cantanhede portugal N s geneBOX investiga o e desenvolvimento de testes de diagn stico indubitavelmente declaramos que este produto ao qual se relaciona esta declara o de conformidade est em conformidade com os seguintes documentos normativos ISO 9001 2008 e ISO 13485 2004 Seguindo ainda as indica es da Directiva Europeia 98 79 CE sobre dispositivos m dicos de diagn stico in vitro conformidade de acordo com o Anexo IV transposto para as leis nacionais dos estados membros da Uni o Europeia Europeia A ficha e os documentos t cnicos deste produto s o mantidos na geneBOX biocant centro de inova o em biotecnologia 3060 197 Cantanhede Portugal Sandra Balseiro Directora T cnica 19 geneBOX investiga o e desenvolvimento de testes de diagn stico garante que os primers presentes no Coxiella burnetti Qual PCR Box apresentam as especificidades dadas nas folhas e tabelas de interpreta o de resultados do produto 1 COXB mix Cl CP e CN Armazenamento a 202 C COXB mix CI CP e CN permanecem est veis durante 12 meses a partir da data de produ o ver validade do lote na embalagem Armazenamento a 42C de COXB mix Cl CP e CN permanecem est veis durante 15 dias a partir da data de recep o temperatura ambiente COXB mix Cl CP e CN permanecem est veis durante 3 dias a partir da
11. entro de 24 horas ap s a sua colheita as amostras podem ser armazenadas temperatura ambiente 15 25 C Se o teste realizado dentro de uma semana as amostras devem ser armazenadas no frio 2 8 C ou por per odos mais longos entre 15 30 C B Zaragatoas Se a amostra for testada dentro de 24 horas ap s a sua colheita as zaragatoas podem ser armazenadas temperatura ambiente 15 25 C Se o teste realizado dentro de uma semana as amostras devem ser armazenadas no frio 2 8 C ou por per odos mais longos entre 15 30 C 3 Transporte de amostras A sensibilidade do teste pode ser reduzida se as amostras forem expostas a altas temperaturas por um longo per odo de tempo A Plasma e soro O sangue colhido deve ser armazenado a frio 2 8 C at ao envio e deve ser transportado em conformidade com as instru es nacionais para o transporte amostras Biol gicas patog nicos Para garantir uma boa qualidade da amostra estas devem ser transportadas dentro de 24 48h B Zaragatoas A amostra colhida deve ser armazenada a frio 2 8 C at ao envio e deve ser transportada em conformidade com as instru es nacionais para o transporte amostras Biol gicas patog nicos Para garantir uma boa qualidade da amostra estas devem ser transportadas dentro de 24 48h 1 Pureza e Concentra o do DNA Para obter bons resultados com o Coxiella burnetti Qual PCR Box 1 0 recomenda se o uso de qualquer kit de extrac
12. ficas podem evitar a presen a de amplifica es inespec ficas Em baixo encontram se descriminadas as recomenda es da Genebox Separe fisicamente as reas de pr PCR e de p s PCR O fluxo Laboratorial deve ser sempre unidireccional da rea pr PCR para a rea p s PCR Deve sempre utilizar se equipamentos espec ficos para cada area de trabalho prepara o de amostras pr amplifica o amplifica o e p s amplifica o Todos os equipamentos utilizados na rea de p s PCR n o devem sais desta zona Utilize micropipetas luvas e batas espec ficas para cada rea Utilize preferencialmente luvas sem talco uma vez que o talco pode inibir a reac o de PCR Utilize pontas de filtro de forma a minimizar contamina es cruzadas Verifique periodicamente as micropipetas de forma a assegurar a varia o de pipetagem inferior a 5 Utilize micropipetas adaptadas a cada volume de pipetagem Verifique periodicamente os termocicladores de forma a assegurar a varia o de temperaturas inferiores a 1 Abra e feche os reagentes com cuidado Depois de utilizar armazene os restantes componentes do kit s temperaturas recomendadas devidamente fechados N o utilize o kit com a validade expirada 15 PROBLEMAS Falsos negativos de uma banda espec fica com o controlo interno normal POSSIVEIS CAUSAS Degrada o da amostra de DNA SUGEST ES Reextraia a amostra de DNA de ma
13. para a detec o do gene da superoxide dismutase de Coxiella burnetti em DNA de amostras biol gicas A sua especificidade foi comprovada com plasm deos amplificados com a sequ ncia alvo e DNAs outras esp cies de bact rias obtendo amostras positivas e negativas A especificidade do kit Coxiella burnetti Qual PCR Box 1 0 conferida por COXB mix que apresenta 100 de homologia com todas as sequ ncias de Coxiella burnetti registadas em bases de dados Sensibilidade A sensibilidade do kit Coxiella burnetti Qual PCR Box 1 0 foi testada e a Genebox garante a detec o de n veis m nimos de superoxide dismutase do genoma de Coxiella burnetti at 0 1 ng de DNA Mistura de reac o COXB 1 tubo COXB mix 1 ml conservar de 30 a 15 C Controlo Interno CI 1 tubo CI 100 ul conservar de 30 a 15 2C Controlo Positivo CP ltubo CP 50ul conservar de 30 a 15 2C Controlo Negativo CN 1tubo CN 50 l conservar de 30 a 152C Manual de instru es 1 Manual de Instru es Componentes da PCR Master Mix Nucle tidos concentra o final de cada dNTP 600 uM Tamp o da PCR concentra es finais s o 3 3x NH4 2 0 mM MgCl e 0 4 u ul Taq DNA polimerase pH 8 3 Glicerol concentra o final 16 6 Vermelho de cresol concentra o final de 300ug ml Nome do Produto Coxiella burnetti Qual PCR Box 1 0 Numero do Produto GB 2410 Utiliza o Detec o de Coxiella burnetti Produ o g
14. r superior a 3 dias de modo a garantir que todos os componentes do Kit cheguem em perfeitas condi es aos seus destinat rios 15 Contactos teis N mero Nacional de Emerg ncia 112 Centro de Informa o Anti Venenos 808 250 143 16 Outras informa es As informa es a cima dispon veis s o baseados no n vel de conhecimento actual devendo ser utilizado apenas como guia A geneBOX R amp D Diagnostic Tests n o se responsabiliza por qualquer dano causado pela manipula o inapropriada ou pelo contacto com os referidos produtos Para mais esclarecimentos por favor contactem com o apoio t cnico para o 351 231 410 946 22 Folha de da Refer ncias dos de seguran isassaseessessasesarasraso seonieisasnopas o Apresenta o A Coxiella burnetii uma bact ria Gram negativa intracelular conhecida por ser o agente etiol gico da Febre Q Esta bact ria extremamente resistente ao stress ambiental n o sendo facilmente eliminada por temperaturas altas desinfectantes comuns e luz ultavioleta A bact ria pode ser isolada durante a fase aguda da doen a a partir de sangue pulm es ba o e f gado de animais infectados e do tero e gl ndulas mam rias na fase cr nica da infec o por Coxiella burnetii Coxiella burnetti Qual PCR Box 1 0 detecta o gene que codifica a prote na Superoxide dismutase da bact ria Coxiella burnetti Qual PCR Box 1 0 um teste para diagn stico molecular da infec o pela bac
15. rnt 15 Guia t cnico nasinci ca ni sassa dans ra gama naramarado 17 Gafas ensine ainara aasian 18 Aviso de Garantia as szsosesssesassesrsrsasaesromenorpdo pes ni EE Sa aaia 18 Declara o de Conformidade 19 Refer ncias 1 Giovanna Masala Rosaura Porcu Cinzia Daga Stefano Denti Giuliana Canu Cristiana Patta Sebastiana Tola 2007 Detection of pathogens in ovine and caprine abortion samples from Sardinia Italy by PCR J Vet Diagn Invest 19 96 98 2 Ausubel FM Brent R Kingstone RE et al 1993 Current protocols in molecular biology vol 1 Wiley Interscience New York 3 Berri M Souriau A Crosby M Rodolakis A 2002 Shedding of Coxiella burnetii in ewes in two pregnancies following an episode of Coxiella abortion in a sheep flock Vet Microbiol 85 55 60 4 Beuzon CR Schiaffino A Leori G et al 1997 Identification of Salmonella abortusovis by PCR amplification of a serovarspecific 15200 element Appl Environ Microbiol 63 2082 2085 5 Brodie TA Duncan JL Harvey MJA 1983 Role of enzootic abortion and toxoplasmosis in an outbreak of abortion in a Scottish sheep flock Vet Rec 5 437 440 6 Ellis JJ McMillan D Ryce C et al 1999 Development of a single tube nested polymerase chain reaction assay for the detection of Neospora caninum DNA Int J Parasitol 29 1589 1596 7 Hartley JC Kaye S Stevenson S et al 2001 PCR detection and molecular identification of Chlamydiaceae species Clin Microbiol 39 307
16. t ria Coxiella burnetti com maior sensibilidade especificidade e rapidez do que os m todos tradicionais por cultura Altera es e melhoramento do Produto Este produto pode ser melhorado ao n vel do seu rendimento interpreta o especificidade de forma a incluir novas variantes que venham a ser descritas As altera es adi es ou modifica es de COXB Mix Controlo Interno Controlo Positivo ou Controlo Negativo em rela o ao lote anterior est o detalhadas na tabela abaixo Modifica o Motivo N A Folha de Dados de Seguran a 2 3 Material Safety Data Sheet MSDS 4 Informa o Toxicol gica Qu mico Toxicidade Glicerol LD50 oral 4090 mg kg ratinho LD50 oral 12600 mg kg rato LD50 oral 1480 mg kg humano 5 Estabilidade e reactividade Condi es a evitar Calor e humidade Incompatibilidades Bases e agentes oxidantes fortes 6 Protec o pessoal Protec o das m os use luvas apropriadas resistentes a qu micos Protec o dos olhos recomenda se o uso de culos de protec o qu mica 7 Manipula o e armazenamento Manipula o evite o contacto directo com a subst ncia Armazenamento armazene temperatura aconselhada proteja do contacto com a luz Danifica o da embalagem protectora rejeitar o constituinte contido na embalagem 8 Perigos Os componentes da mistura de reac o podem ser perigosos se inalados ingeridos ou absorvidos pela pele Este material po
17. terial fresco Repita a reac o com um DNA de boa qualidade Esfrega o de bandas Degrada o da amostra de DNA Reextraia a amostra de DNA de material fresco Repita a reac o com um DNA de boa qualidade Amostra de DNA muito concentrada Verifique a qualidade e concentra o do DNA Dissolva o DNA em ddH20 de forma a obter a concentra o exacta Repita a reac o com um DNA de boa qualidade Problemas com tamp o de electroforese Fora de prazo ou composi o errada Use um tamp o recomendado novo Protocolo de electroforese em gel de agarose Prepara o do gel de agarose a 4 1 2 3 4 5 6 7 Dissolver 8 gramas de p agarose em 200 ml de tamp o TAE 1X Dissolver completamente a agarose aquecendo a no microondas Arrefe a o gel at aproximadamente 502C Adicione pelo menos 20 pl de brometo de et dio 10 mg ml ou de Sybr Safe 10000x concentrado agarose Agite at estar completamente incorporado Numa superf cie nivelada monte a placa do gel com 96 po os Verta uma camada de gel com cerca de 5mm Deixe o gel arrefecer Aten o este reagente um forte agente mutag nico leia atentamente a MSDS do produto Electroforese 1 Submirja o gel na tina de electroforese com tamp o TAE 1X 2 Remova os pentes com cuidado do gel 3 Adicione 10 pl do produto de PCR em cada po o 4 Ligue a tina de electroforese
18. ua bi destilada est ril n o fornecida Este componente apresenta alto potencial contaminante dado conter DNA de plasm deo de Coxiella burnetti recomenda se o m ximo cuidado no seu manuseamento Protocolo de amplifica o por PCR 4 4 Amplifica o por PCR 1 Agite brevemente todos os tubos do kit e os tubos de DNA 2 Para cada detec o pipete de acordo com a tabela Tabela TuboCoXBmx eu Tubo Controlo Interno CI DNA de amostra Volume final NOTA Por cada utiliza o do kit deve correr pelo menos uma reac o CP e CN 3 Para o controlo positivo proceder como em 2 substituindo o DNA de amostra por 1 ul de Tubo Controlo Positivo CP 4 Para o controlo negativo proceder como em 2 substituindo o Controlo Interno por 1 ul de gua bidestilada est ril e o DNA de amostra por 1 ul de Tubo controlo negativo CN 5 Coloque os componentes da reac o no termociclador e corra o seguinte programa de PCR Programa PCR Fim 42C Infinito 1 6 Detecte os produtos do PCR com uma electroforese em gel de agarose a 4 Use a Tabela de interpreta o de resultados para interpretar os resultados 10 Avisos e precau es A amplifica o por PCR permite nos obter milh es de c pias de DNA a partir de uma pequena quantidade de amostra Infelizmente isto tamb m verdade para o DNA contaminante que pode comprometer performance da nossa reac o Consequentemente pr ticas laboratoriais espec
19. upturas impossibilitando a utiliza o normal do kit Verifique a concentra o e qualidade de todas as amostras de DNA antes de utilizar este kit Instru es de gerais de seguran a no laborat rio N o coma beba ou fume dentro do laborat rio Utilize sempre luvas descart veis e mude as com frequ ncia Utilize batas limpas e proteja os olhos sempre que se justifique Lave as m os antes e depois de qualquer manipula o de amostras ou reagentes Lave a rea de trabalho antes e depois de qualquer manipula o N o pipete com a boca 16 Protocolo de amplifica o por PCR 3 4 Extrac o de DNA A sensibilidade do teste pode ser reduzido se voc usar um m todo de isolamento de DNA ineficiente A detec o destes tipo de bact ria requer amostras de DNA altamente puras e concentradas As quantidade e qualidade das amostras dependem do protocolo de isolamento de DNA usado Recomenda se a kits de isolamento seguintes tanto para plasma soro como para zaragatoas QlAamp DNA Mini Kit from QIAGEN QlAamp DNeasy Kit from QIAGEN QlAamp DNA Blood Mini Kit from QIAGEN Alternativamente podem ser usados outros kits com a marca o CE para extrac o de DNA que garantam DNA com r cio DO260 280 superior a 1 6 e concentra es entre 1ng 200 ng yl Reagentes Amostra de DNA Mistura de reac o COXB mix Controlo interno CI Controlo positivo CP Controlo negativo CN g
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