ELISA HTLV I/II 3.0
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1. Fa Diagnostics ELISA HTLV MI 3 0 Ce 0123 DATA DE REVIS O 05 05 Observa o altera es MBJ 0011 BRA O real adas REF 21080 096 kit de 96 testes 21080 192 kit de 192 testes 21080 480 kit de 480 testes NOME E APLICA O O TESTE ELISA HTLV Ni da MP DIAGNOSTICS MPD uma prova imunoenzim tica para a detec o de anticorpos para HTLV I e HTLV II no soro ou plasma humanos Destina se a ser usado como prova de triagem sendo necess ria a repeti o dos testes das amostras inicialmente reativas DESCRI O DE S MBOLOS USADOS Os s mbolos gr ficos usados ou encontrados nos produtos e embalagens MP Diagnostics est o indicados a seguir Estes s o os s mbolos mais comuns em dispositivos m dicos e respectivas embalagens estes s mbolos s o explicados com mais detalhes no British and European Standard BS EN 980 2008 7 Usar at Dispositivo Sin nimos IVD m dico Data de validade para diagn stico in vitro C digo do lote LOT Sin nimos N mero de N mero do lote cat logo N mero da remessa EN en o AN Ver Instru es X Limites de temperatura de Uso Representante taal Fabricante Ec REP Autorizado na Comunidade Europ ia Cont m o suficiente z 7 para lt n gt testes onsulte as CH instru es de uso Q N o reutilize INTRODU O Estudos epidemiol gicos recentes nos Estados Unidos e Europa confirmaram a ocorr ncia predomina2. pode causar efeitos adversos a longo prazo em ambiente aqu tico Poss veis riscos de efeitos irrevers veis S28 36 37 Ap s contato com a pele lave imediatamente com gua em abund ncia e procure orienta o m dica Usar vestu rio de laborat rio apropriado e luvas descart veis S45 60 61 Em caso de acidente ou se sentir mal em contato com os componentes procure imediatamente orienta o m dica Exibir a bula se poss vel Esse material e seus componentes devem ser descartados como material de risco de contamina o Evite libera o no meio ambiente Refere se as instru es especiais Folhas de dados de seguran a 10 11 12 13 14 15 Evite a contamina o microbiana dos reagentes ao abrir e retirar al quotas dos frascos originais N o pipete com a boca Manuseie as amostras as microplacas os controles reativos e os controles n o reativos como agentes potencialmente infecciosos Use vestu rio de laborat rio e luvas descart veis durante a realiza o do teste Descarte as luvas em sacos pl sticos para descarte de lixo biol gico perigoso A seguir lave bem as m os altamente recomend vel que este teste seja realizado em uma c mara adequada para material biol gico perigoso Mantenha todo o material longe de alimentos e bebidas Em caso de acidente ou contato com os olhos lave imediatamente com gua em abund ncia e procure ajuda m dica Consulte imediatamente um m dico caso
3. O fabricante n o oferece nenhuma outra garantia expressa sen o a de que o kit de teste funcionar como um ensaio de diagn stico in vitro dentro das especifica es e limita es descritas no Manual de Instru es do produto quando usado em conformidade com as instru es nele contidas O fabricante isenta se de qualquer responsabilidade expressa ou impl cita incluindo as garantias expressas ou impl citas em rela o capacidade de comercializa o de utiliza o ou utilidade impl cita para quaisquer outros fins A responsabilidade do fabricante limita se substitui o do produto ou ao reembolso do pre o de compra do produto O fabricante n o ser considerado respons vel pelo comprador ou por terceiros por quaisquer danos preju zos ou perdas de car ter econ mico causados pelo uso ou aplica o do produto PROBLEMAS T CNICOS E QUEIXAS Caso haja algum problema t cnico ou queixa solicitamos proceder da seguinte forma 1 Anote o n mero de lote do kit e a data de validade 2 Conserve o kite os resultados obtidos 3 Contate o escrit rio MP Biomedicals mais pr ximo ou o seu distribuidor local REFER NCIAS 1 PoisezB J etal Detection and isolation of type C retrovirus particles from fresh and cultured lymphocytes of a patient with cutaneous T cell lymphoma Proc Natl Acad Sci USA 1980 77 7145 7419 2 Kalyanaraman V S et al A new subtype of human T cell leukemia vi
4. sejam ingeridos materiais contaminados ou haja contato destes com feridas abertas ou outras solu es de continuidade da pele O cido sulf rico causa queimaduras graves e a OPD um irritante EVITE CONTATO COM ESTES DOIS REAGENTES Caso estes reagentes entrem em contato com a pele lave com gua em abund ncia Evite o contato de OPD e de cido sulf rico com qualquer agente oxidante ou metal N o exponha a pastilha e a solu o tamp o do substrato luz forte Use pin as n o met licas para manusear a pastilha de OPD Nunca adicione gua Solu o de Interrup o Limpe imediatamente derramamentos de materiais infecciosos com papel absorvente e esfregue imediatamente a rea contaminada com solu o de hipoclorito de s dio a 1 antes de continuar o trabalho O hipoclorito de s dio n o deve ser usado em derramamentos que contenham cidos a menos que a rea seja primeiro enxugada com papel absorvente O material usado tamb m as luvas descart veis deve ser descartado como material biol gico potencialmente perigoso N o esterilize em autoclave material que contenha hipoclorito de s dio Antes do descarte esterilize em autoclave todo o material usado e contaminado a 121 C 15 psi durante 30 minutos Alternativamente descontamine o material em solu o de hipoclorito de s dio a 5 durante 30 a 60 minutos antes de descartar em sacos para lixo biol gico perigoso Descontamine todos os produtos qu micos
5. teste dever ser repetido C lculo do VALOR LIMITE Valor LIMITE 0 450 NRCX Exemplo NRCx 0 021 Valor LIMITE 0 450 0 021 0 471 INTERPRETA O DOS RESULTADOS 1 Amostras com valores de absorb ncia menores que o valor LIMITE s o consideradas N o Reativas pelo ELISA HTLV 1 11 3 0 MPD Amostras com valores de absorb ncia maior ou igual ao valor LIMITE CUT OFF s o consideradas inicialmente reativas pelos crit rios do ELISA HTLV I II 3 0 MPD e devem ser analisadas uma segunda vez em duplicata antes da interpreta o Amostras Reativas em um segundo teste podem ser interpretadas como repetidamente reativas para anticorpos contra HTLV I II pelos crit rios do ELISA HTLV 1 11 3 0 MPD Amostras inicialmente reativas e que se comportam como N o Reativas quando analisadas pela segunda vez s o consideradas negativas pelos crit rios do ELISA HTLV III 3 0 MPD Amostras repetidamente reativas no ELISA HTLV III 3 0 MPD devem ser analisadas por testes adicionais mais espec ficos como o HTLV BLOT 2 4 MPD CARACTER STICAS ESPEC FICAS DE DESEMPENHO O desempenho do ELISA HTLV I II 3 0 MPD para a detec o de anticorpos para HTLV I e HTLV II foi avaliado usando HTLV I Il soropositivo e amostras negativas Sensibilidade 420 amostras reativas ELISA e ou Western Blot positivas foram estudadas e avaliadas separadamente e conduzidas em tr s locais diferentes no local de trabalho Su c
6. CONJUGADO N mero de testes Vol de Conjugado ul Vol de diluente mI 24 10 0 5 0 48 15 0 7 5 72 20 0 10 0 96 24 0 12 0 2 SOLU O DE TRABALHO DE SUBSTRATO a Prepare a SOLU O DE TRABALHO DE SUBSTRATO pelo menos 15 minutos antes do uso Uma vez preparada a solu o permanecer est vel durante 60 minutos temperatura ambiente b Transfira o volume necess rio de SOLU O TAMP O PARA SUBSTRATO para um recipiente adequado usando uma pipeta limpa c Transfira as pastilhas de OPD para a SOLU O TAMP O PARA SUBSTRATO usando uma pin a n o met lica d Dissolva uma pastilha para cada 5 ml da SOLU O TAMP O PARA SUBSTRATO Misture bem Antes de usar verifique se a dissolu o foi completa Proteja da luz ASOLU O DE TRABALHO DE SUBSTRATO deve ser incolor ou de tom amarelo p lido para desempenho adequado do teste Qualquer outra cor pode indicar deteriora o da solu o tamp o ou das pastilhas de substrato ou sujeira no recipiente PROTOCOLO DE PREPARA O DO SUBSTRATO N mero de testes Pastilhas Solu o tamp o para substrato ml 24 il 5 0 48 2 10 0 72 2 10 0 96 3 15 0 so SOLU O TAMP O DE LAVAGEM DILU DA a A SOLU O TAMP O DE LAVAGEM DILU DA deve ser preparada logo antes do uso b Dilua um volume de CONCENTRADO PARA LAVAGEM DE PLACAS com 19 volumes de gua destilada qualidade reagente Misture bem Para la
7. EP MP Biomedicals Asia Pacific Pte Ltd 85 Science Park Drive 04 01 The Cavendish Singapore Science Park Cingapura 118259 Tel N 65 6775 0008 Fax N 65 6775 4536 E mail enquiry_ap mpbio com Medical Technology Promedt Consulting GmbH Altenhofstrasse 80 D 66386 St Ingbert Alemanha Tel 49 68 94 58 1020 Fax 49 68 94 58 1021 Email info mt procons com Escrit rios Regionais MP Biomedicals Suisse S A Halle de Fret Aeroport P O Box 1015 1211 Genebra 5 Su a Tel N 4122 788 1908 Fax N 4122 788 1986 E mail mpbiosuisse O mpbio com Patente Austr lia Patente EUA Patente Canad Patente Europa atente Jap o 613350 667189 690540 5 066 579 5 614 366 5 763 572 5 814 441 5 871 933 5 643 714 1337799 0395634 2559482 O nome e o logotipo Genelabs s o licenciados da Genelabs Technologies Inc
8. Lote Dois lotes de microplacas foram testados em quarto ocasi es diferentes com 3 duplicatas de cada kit controle e 8 duplicatas das amostras restantes em cada ocasi o Intra Lote Um lote de microplaca foi testado duas vezes em um dia com 8 duplicatas de cada amostra incluindo os kits controles para cada teste corrido em quatro dias separados Os resultados indicaram que o Coeficiente de Varia o CV estava entre 3 8 para as amostras testadas LIMITA ES DO M TODO Resultados repetidamente positivos do ELISA HTLV I II 3 0 MPD constituem indica es da presen a de anticorpos para HTLV I I na amostra Um resultado N O REATIVO do ELISA HTLV MII 3 0 MPD indica prov vel aus ncia de anticorpos detect veis para HTLV I II na amostra Contudo n o existem dados suficientes que permitam excluir a transmiss o do HTLV I ll em amostras de sangue definidas como n o reativas pelo ELISA HTLV I II 3 0 MPD Um resultado NEGATIVO n o exclui a possibilidade de exposi o a ou de infec o pelo HTLV II Pode se suspeitar de resultados falsos reativos com um kit para testes desta natureza A propor o de falsos reativos depender da sensibilidade e da especificidade do kit de teste Para a maioria dos testes de triagem quanto mais elevada a preval ncia de anticorpos contra HTLV I II na popula o menor ser a propor o de amostras falsas reativas ISEN O DE RESPONSABILIDADE EXPL CITA E LIMITADA
9. a tampa de placa Incube a microplaca durante 30 minutos a 37 C n o utilize banho maria a 37 C para a incuba o Prepare a SOLU O DE TRABALHO DE SUBSTRATO conforme as instru es de PREPARA O DE REAGENTES Proteja a solu o de substrato da luz O excesso de solu o deve ser descartado ap s o uso Remova e descarte a tampa da placa Repita o procedimento de lavagem como nas etapas 11 e 12 Preencha um recipiente de reagente com SOLU O DE TRABALHO DE SUBSTRATO Usando um pipetador multicanal adicione 100 ul de SOLU O DE TRABALHO DE SUBSTRATO a cada po o Coloque uma tampa de placa Incube durante 15 minutos em local escuro a 37 C N o utilize banho maria a 37 C para a incuba o Remova e descarte a tampa da placa Usando um pipetador multicanal adicione 50 ul de SOLU O DE INTERRUP O a cada po o Misture suavemente batendo na placa Determine a absorb ncia de cada po o a 492 nm Caso seja usado um instrumento de filtro duplo o comprimento de onda de refer ncia deve ser de 620 nm 100 il 30 minutos 100 ul 15 minutos 50 ui NOTA A absorb ncia deve ser lida no prazo de uma hora ap s a adi o da SOLU O DE INTERRUP O CONTROLE DE QUALIDADE 1 Em todas as placas de todos os processamentos de amostras deve se testar o BRANCO e o CONTROLE N O REATIVO em duplicata e o CONTROLE REATIVO em triplicata 2 Os valores do Branco devem ter a
10. anho maria a 37 C para a incuba o Antes de lavar a microplaca prepare o CONJUGADO DE TRABALHO conforme descrito em PREPARA O DE REAGENTES Remova e descarte a tampa da placa lave ent o a microplaca com SOLU O TAMP O DE LAVAGEM DILU DA usando um dos dois m todos recomendados Lavadora Autom tica ou Semi Autom tica de Microplacas Lave seis 6 vezes com pelo menos 300 ul por po o e por lavagem Lavadora Manual de Microplacas Aspire completamente o conte do de todos os po os levando suavemente a ponta do aspirador at o fundo de cada po o CUIDADO PARA N O ARRANHAR A SUPERF CIE INTERNA DO PO O Preencha toda a placa com pelo menos 300 ul po o e depois aspire imediatamente na mesma ordem Execute este ciclo seis 6 vezes 200 ul 20 ul 20 ul 20 ul 20 ul 60 minutos 300 ul por po o e por lavagem 300 ul por po o 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 Seque completamente invertendo a microplaca sobre papel absorvente e dando batidas firmes na placa Toda a solu o tamp o de lavagem residual da placa deve ser totalmente eliminada Se houver res duos de solu o tamp o de lavagem na placa poder ocorrer inibi o de desenvolvimento de cor durante a incuba o do substrato Preencha um recipiente de reagente com CONJUGADO DE TRABALHO Usando um pipetador multicanal adicione 100 ui de CONJUGADO DE TRABALHO a cada po o Coloque outr
11. bsorb ncia de lt 0 100 3 Os valores de absorb ncia do Controle N o Reativo devem ser iguais a 0 000 e lt que 0 100 depois de subtra do o valor do Branco 4 Pelo menos 2 dos 3 valores dos Controles Reativos devem ter absorb ncia gt 0 800 depois da subtra do o Branco Quaisquer valores fora desta faixa n o devem ser usados para o c lculo da M dia do Controle Reativo RCX 5 Caso 2 ou mais valores de Controle Reativo se desviarem em mais de 30 da MEDIA o processamento considerado INVALIDO e deve ser repetido 6 Para que o teste seja v lido a diferen a entre as absorb ncias m dias do Controle Reativo e do Controle N o Reativo RCX NRCX deve ser igual a 0 700 Caso contr rio a t cnica pode ser colocada sob suspeita e o teste dever ser repetido Caso esta diferen a M DIA de absorb ncia RCX NRCX seja sempre baixa pode ter ocorrido deteriora o dos reagentes RESULTADOS Cada microplaca deve ser considerada em separado para o c lculo e a interpreta o dos resultados do teste independentemente do n mero de placas processadas OS VALORES M DIOS DE ABSORB NCIA DO BRANCO DEVEM SER SUBTRA DOS DE TODOS OS VALORES DE ABSORB NCIA DA PLACAANTES DA INTERPRETA O DOS RESULTADOS A presen a ou aus ncia de anticorpos espec ficos para HTLV II determinada comparando a absorb ncia das amostras com o VALOR LIMITE Cut off value COV da placa O VALOR LIMITE calculad
12. cri o dos Componentes MICROPLATE MICROPLACA HTLV Doze tiras com oito po os por placa Cada po o da microplaca cont m prote nas recombinantes de HTLV I e HTLV II absorvidas Conservar entre 2 C e 8 C A CONTROLE N O REATIVO Soro Normal humano n o reativo para anti HCV anti HIV 1 2 anti HTLV I II e HBsAg Cont m timerosal e azida s dica como conservantes Conte do 280 ul por frasco Conservar entre 2 C e 8 C AN CONTROLE REATIVO Soro humano inativado contendo alto t tulo de anticorpos espec fico para HTLV I II e n o reativo para anti HCV anti HIV 1 2 e HBsAg Cont m timerosal e azida s dica como conservantes Conte do 300 ul por frasco Conservar entre 2 C e 8 C AN DILUENTE Solu o salina com Tris contendo soro caprino normal tratado por calor soro albumina bovina e estabilizantes Cont m Bronidox como conservante Conte do 100 ml por frasco Conservar entre 2 C e 8 C AN CONCENTRADO 20X PARA LAVAGEM DE PLACAS Solu o tamp o fosfato com Tween 20 Cont m cloroacetamida como conservante Conte do 120 ml por frasco Conservar entre 2 C e 8 C CONJUGADO Anticorpo caprino anti IgG humana marcado com peroxidase de r bano Conte do 45 ul por frasco Conservar entre 2 C e 8 C A SOLU O TAMP O PARA SUBSTRATO Solu o tamp o citrato contendo per xido de hidrog nio Conservar em local escuro entre 2 Ce8 C Conte do 120 ml por
13. e reagentes usados adicionando um volume suficiente de hipoclorito de s dio de forma a obter uma concentra o final de pelo menos 1 Deixe agir durante 30 minutos para garantir uma descontamina o eficiente PRECAU ES ANAL TICAS iy Amostras de soro ou plasma coletadas em EDTA heparina ou citrato de s dio podem ser utilizadas Antes de armazenar assegurar que as amostras de soro foram separadas por centrifuga o Para garantir um desempenho perfeito do teste necess rio SEGUIR RISCA os procedimentos descritos neste Manual de Instru es A inobserv ncia destes procedimentos pode acarretar resultados an malos N O MODIFIQUE NEM SUBSTITUA REAGENTES DE UM LOTE DO KIT POR OUTRO Os controles o conjugado e as microplacas s o combinados entre si para oferecer um desempenho perfeito Use somente reagentes fornecidos com o kit N o use componentes do kit ap s a data de validade impressa na caixa do kit 10 11 12 18 14 15 16 17 18 19 20 21 22 28 24 Evite a contamina o microbiana dos reagentes ao abrir e retirar al quotas dos frascos originais A contamina o reduz prematuramente a vida til dos kits e fornece resultados err neos Use t cnicas ass pticas incluindo pipetas ou ponteiras de pipetas descart veis para retirar al quotas dos frascos Para evitar a contamina o cruzada use uma ponteira de pipeta nova para cada amostra aliquotada n
14. frasco tPLACA 2PLACAS 5 PLACAS frascos frascos frascos frascos frascos frascos suss oro AN PASTILHA DE SUBSTRATO 4 8 20 o fenilenodiamina 2HCI pastilhas pastilhas pastilhas Conservar entre 2 C e 8 C SoLNTETor H5o Jam A SOLU O DE 1 1 1 INTERRUP O frasco frasco frasco Solu o de cido sulf rico 2M Conservar em local escuro entre 2 Ce8BC Conte do 30 ml por frasco TAMPAS DAS PLACAS 4 8 20 Tampas adesivas para uso unidades unidades unidades durante a incuba o das microplacas MANUAL DE INSTRU ES 1 1 1 c pia c pia c pia Bronidox marca registrada da Henkel Chemical Co AVISOS E PRECAU ES 1 Para uso exclusivo em diagn stico in vitro 2 Exclusivamente para uso profissional 3 Solicitamos consultar a documenta o dos produtos para informa es sobre componentes potencialmente perigosos INFORMA ES DE SA DE E SEGURAN A CUIDADO Este kit cont m material de origem A humana Nenhum m todo de teste pode oferecer garantia total que os produtos de sangue humano n o transmitam infec es MANUSEIE AS AMOSTRAS E OS CONTROLES REATIVOS E N O REATIVOS COMO AGENTES POTENCIALMENTE INFECCIOSOS Recomenda se que os componentes e as amostras do teste sejam manuseados de acordo com as boas pr ticas de laborat rio O descarte dever ser realizado de acordo com os procedimentos de seguran a vigentes O Controle Reativo e o Controle N o Reat
15. ia e Austr lia Na Su cia n 163 o estudo indica sensibilidade compar vel ao sistema de compara os Ao passo que na Austr lia n 155 a avalia o apresentou sensibilidade de 100 no local de trabalho uma avalia o de sensibilidade de 99 105 106 baseado em amostras comerciais e T tulos Misturados do pain l PRP206 Uma nica amostra apresentou resultado negativo com ELISA HTLV Ill 3 0 MPD no local de trabalho A avalia o tamb m apresentou um resultado negativo com um outro teste ELISA de fabricante de qualidade e apresentou o resultado como indeterminado no Western Blot com a presen a fraca das bandas GD21 e p19 Astr s avalia es indicaram uma sensibilidade superior a 99 7 Especificidade Um total de 5300 amostras abrangendo amostras de soros de doadores casuais 5 000 amostras cl nicas 200 amostras potencialmente interferidas 100 foram testadas Diagnostico especif co em doadores de sangue casuais amostras cl nicas e amostras potencialmente interferidas grupos foram encontrados sendo 99 8 98 and 97 respectivamente ELISA HTLV I II 3 0 MPD apresentou alta especificidade maior que 99 para todos os tr s sets de amostras testados Reprodutibilidade O inter lote e intra lote reprodutibilidade do ELISA HTLV I II 3 0 MPD foi avaliado no local de trabalho usando kits controle HTLV I amostras positivas HTLV II amostras negativas e ACCURUN 24 um multi marcador Confirmat rio Controle da BBI Inter
16. ivo cont m timerosal e azida s dica A azida s dica pode reagir com o cobre e o chumbo usados em alguns sistemas de canaliza o formando sais explosivos Embora as quantidades usadas neste kit sejam pequenas o descarte de materiais contendo azida deve ser feito por lavagem com volumes relativamente altos de gua de forma a evitar a forma o de azida met lica no sistema de canaliza o Segue abaixo o Risco apropriado R e frases de Seguran a S R20 21 22 Prejudicial por inala o em contato com a pele e em caso de ingest o R32 Em contato com cidos h a libera o de gases t xicos S7 32 Mantenha os frascos bem fechados N o inalar S35 Esse material e seus componentes devem ser mantidos em lugar seguro S36 Usar vestu rio de laborat rio apropriado S46 Se ingerido procurar orienta o m dica imediatamente e apresentar essa bula O Diluente cont m Bronidox e Tris os quais s o classificados pela Comunidade Econ mica Europ ia CEE por aplic vel Diretrizes como Irritante Xi Segue abaixo o Risco apropriado R e frases de Seguran a S R36 38 Irritante para os olhos e pele S26 28 Em caso de contato com os olhos lave com gua em abund ncia e procure orienta o m dica Depois de contato com a pele lavar imediatamente com gua O Concentrado 20X para Lavagem de placa cont m 2 Cloroacetamida o qual classificado pela Comunidade Econ mica Europ ia CEE por aplic vel Diretrize
17. mentares como o Western Blot HTLV BLOT 2 4 MPD PRINC PIOS QU MICOS E BIOL GICOS DO PROCEDIMENTO Os po os das tiras de poliestireno da microplaca s o recobertos com uma mistura de ant genos recombinantes de HTLV I e HTLV II que correspondem aos segmentos de alta antigenicidade do HTLV I e do HTLV II As amostras de soro ou plasma humano dilu das na solu o tamp o de dilui o s o incubadas nestes po os revestidos Os anticorpos espec ficos contra HTLV I Il caso presentes se unir o aos ant genos imobilizados na fase s lida Os po os s o cuidadosamente lavados para retirada de material n o ligado e adicionado aos po os um anticorpo caprino anti lgG humana purificado por afinidade e marcado com peroxidase do r bano Este anticorpo marcado se ligar a todos os complexos ant geno anticorpo anteriormente formados e o excesso de anticorpos marcados n o ligados removido por lavagem Uma solu o de substrato contendo per xido de hidrog nio e diidrocloreto de o fenilenodiamina OPD 2HCI ent o adicionada a cada po o A presen a de anticorpos espec ficos indicada pelo desenvolvimento de colora o amarelo alaranjada ap s a adi o do substrato A rea o interrompida pela adi o de cido sulf rico A intensidade da cor medida em espectrofot metro a 492 nm e proporcional quantidade de anticorpos presentes na amostra COMPONENTES DO KIT Quantidade Fornecida Des
18. ntemente mista de HTLV I e HTLV II nas diferentes popula es de alto risco como em usu rios de drogas intravenosas e receptores de transfus es Baseando se na reatividade cruzada dos soros anti HTLV I e anti HTLV II para o lisado viral a primeira gera o de kits de teste utilizava um lisado viral de HTLV I a segunda gera o de kits de teste utilizava um lisado viral de HTLV I acrescido de ant genos recombinantes para os testes de triagem Contudo os testes de triagem atualmente dispon veis de primeira e segunda gera o baseados em lisado viral de HTLV I II n o t m sensibilidade para determinar a infec o pelo HTLV II e apresentam alto grau de falsos positivos em soros de indiv duos n o infectados necess rio um teste HTLV I II ELISA que seja altamente sens vel e espec fico para a detec o de anticorpos anti HTLV e anti HTLV II O teste ELISA HTLV Iil 3 0 da MP Diagnostics utiliza unicamente uma combina o de ant genos recombinantes Este tipo de teste garante a detec o do HTLV I e do HTLV II por ep topos espec ficos O teste ELISA HTLV II 3 0 da MP Diagnostics um teste imunoenzim tico qualitativo para a detec o de anticorpos contra HTLV I e contra HTLV II encontrados no soro ou plasma humanos Destina se a ser usado como primeira medida de triagem sendo necess rias a repeti o dos testes das amostras inicialmente reativas e a confirma o das amostras repetidamente reativas por provas suple
19. o como 0 45 unidades de absorb ncia Absorb ncia M dia do Controle N o Reativo VALOR LIMITE 0 45 NRCX C LCULO DOS RESULTADOS 1 C lculo da Absorb ncia M dia do Controle N o Reativo NRCx Exemplo Po o N Absorb ncia C1 0 020 D1 0 022 Total 0 042 M dia 0 042 2 0 021 NRCX Os valor Individual do Controle N o Reativo deve ser lt 0 100 unidade Caso um valor do Controle N o Reativo n o satisfa a algum dos crit rios anteriores o teste ser considerado inv lido e dever ser repetido C lculo da Absorb ncia M dia do Controle Reativo RCX Exemplo Po o N Absorb ncia E1 1 221 F1 1 144 G1 1 298 Total 3 663 M dia 3 663 3 1 221 RCX O valor do Controle Reativo deve ser igual a 0 800 e Caso um valor do Controle Reativo n o satisfa a algum dos crit rios anteriores deve ser exclu do como anormal A m dia do Controle Reativo RCX deve ser ent o recalculada usando se os valores restantes de Controle Reativo Todos os restantes valores de Controle Reativo devem satisfazer os crit rios anteriores ou o teste ser considerado inv lido e dever ser repetido C lculo da diferen a entre RCX e NRCX Exemplo NRCx 0 021 RCX 1 221 RCx NRCX 1 221 0 021 1 200 Para que o teste seja v lido o valor de RCx deve ser igual a 0 700 Caso contr rio deve se suspeitar que a t cnica tenha sido incorreta ou que houve deteriora o de reagentes e o
20. o tocar ou respingar a borda do po o com conjugado N o sopre na micropipeta Recomenda se usar pipetagem reversa sempre que poss vel A utiliza o de amostras muito hemolisadas soros com coagula o incompleta amostras de plasma contendo fibrina ou amostras com contamina o microbiana pode fornecer resultados err neos N O USE BANHO MARIA PARA INCUBAR AS PLACAS N o use incubadoras de CO Durante a incuba o a 37 C deve se evitar a evapora o Cubra as placas com as tampas adesivas fornecidas Evite abrir e fechar repetidamente a porta da incubadora durante as etapas de incuba o N o mantenha a solu o de interrup o em recipiente raso nem a retorne ao frasco ap s o uso Verifique se o fundo da placa est limpo e seco e se n o h bolhas na superf cie do l quido antes de iniciar a leitura da placa Remova todas as bolhas da placa e g por pancadas leves Se usar equipamento autom tico confira se est aferido antes do uso altamente recomend vel fazer a manuten o de rotina do sistema de aspira o e lavagem para evitar contamina o por passagem de amostras muito reativas para amostras n o reativas INSTRU ES DE ARMAZENAMENTO 1 Conserve o kit ELISA HTLV III 3 0 da MPD e seus componentes entre 2 C e 8 C quando n o estiver sendo usado 2 Todos os reagentes e tiras de microplacas do teste quando conservados entre 2 C e 8 C permanecem est veis at data de validade f
21. o toque no topo ou no fundo das tiras na borda dos po os ou no l quido dos po os com os dedos ou com as ponteiras das pipetas Recomenda se que a vidraria a ser usada com os reagentes seja lavada com cido clor drico 2M e enxaguada abundantemente com gua destilada ou deionizada antes do uso Para obter os melhores resultados deixe que todos os reagentes e amostras atinjam a temperatura ambiente 25 C 3 C antes do uso Imediatamente ap s o uso volte a armazenar entre 2 C e 8 C Use somente gua de qualidade grau reagente deionizada ou destilada para diluir os reagentes Todos os reagentes devem ser bem misturados antes do uso A solu o de Conjugado de Trabalho a Solu o Tamp o de Substrato e a Solu o Tamp o de Lavagem Dilu da devem ser preparadas logo antes do uso N o exponha os reagentes nem realize testes em reas contendo altos n veis de vapores de desinfetantes qu micos e g vapores de hipoclorito durante as etapas de armazenamento ou de incuba o O contato inibe a rea o colorida Da mesma forma n o exponha os reagentes luz intensa N o retire as microplacas das bolsas de alum nio at imediatamente antes do uso As tiras abertas n o usadas devem ser conservadas entre 2 C e 8 C nas respectivas bolsas de armazenamento com o dessecante fornecido Em cada processamento de amostras de pacientes deve se testar os controles do kit em paralelo Deve tomar se o cuidado de n
22. ornecida no kit N o congele os reagentes 3 Pode ocorrer forma o de precipitado quando o Diluente conservado entre 2 C e 8 C Isto n o afetar o desempenho do kit 4 Quando o Concentrado 20x para Lavagem de Placas 20x mantido entre 2 C e 8 C pode ocorrer forma o de cristais Estes dever o ser dissolvidos por aquecimento a 37 C antes do uso 5 As tiras de microplacas abertas e n o usadas devem ser mantidas em bolsa fechada com o dessecante fornecido entre2 Ce8 C COLETA TRANSPORTE E ARMAZENAMENTO DE AMOSTRAS Amostras de soro ou plasma coletadas em EDTA heparina ou citrate de s dio podem ser utilizadas Antes de armazenar assegurar que as amostras de soro foram separadas por centrifuga o As amostras devem ser conservadas entre 2 C a 8 C seo teste for realizado dentro de sete dias ap s a coleta ou congelados a 20 C se for previsto que o teste ser realizado em mais de 7 dias ap s coleta As amostras l mpidas n o hemolisadas s o prefer veis Amostras lip micas ict ricas ou contaminadas part culas devem ser filtradas 0 45 um ou centrifugadas antes do teste Os soros dos pacientes podem ser inativados mas esta n o uma exig ncia para o perfeito desempenho do teste native da seguinte forma 1 Afrouxe as tampas dos recipientes de soro 2 Aque a o soro a 56 C durante 30 minutos em banho maria 3 Deixe o soro esfriar antes de aperta
23. r novamente as tampas 4 Osoro pode ser mantido congelado at a an lise Recomendamos que os soros dos pacientes n o sejam submetidos v rios ciclos de congelamento e descongelamento MATERIAL ADICIONAL NECESS RIO MAS N O FORNECIDO Papel absorvente para forrar bancadas e toalhas de papel Tubos ou recipientes de polipropileno Pipetas graduadas 5 ml 10 ml Pipetador multicanal capaz de distribuir 50 ul 100 ul e 200 yl Pipetador capaz de distribuir 1 1000 ui Ponteiras de pipetas descart veis Recipientes cubas de reagentes com capacidade para 25 ml gua deionizada ou destilada qualidade reagente Frascos 500 ml 1 litro O Lavadora de microplaca ELISA Alternativamente a lavagem pode ser realizada manualmente usando um pipetador multicanal dispensando 0 3 ml do volume e um aspirador 11 Uma incubadora a 37 1 C 12 Um leitor de microplacas de comprimento de onda duplo A oo Aso0 OU Simples A sp 13 Solu o de hipoclorito de s dio 5 ou gua sanit ria para uso dom stico NON BON 0 00 PREPARA O DOS REAGENTES 1 CONJUGADO DE TRABALHO a O CONJUGADO DE TRABALHO deve ser preparado logo antes do uso b Para preparar o conjugado dilu do dilua o conjugado a 1 500 com o diluente fornecido no kit por exemplo 20 ui de conjugado para 10 ml de diluente c Use exclusivamente recipientes ou tubos de polipropileno PROTOCOLO DE PREPARA O DE
24. rus HTLV II associated with a T cell variant of hairy cell leukemia Science 1982 218 571 573 3 Williams A E et al Seroprevalence and epidemiological correlates of HTLV I infection in U S blood donors Science 1988 240 643 646 4 Lipka J J et al 1990 Enhancing the sensitivity of HTLV I immunoassays in Human Retrovirology HTLV Edt W A Blattner Raven Press NY pp 409 475 5 Lee H et al High rate of HTLV II infection in seropositive IV drug abusers in New Orleans Science 1989 244 471 475 6 Lipka J J et al Modified Western Blot Assay for confirmation and differentiation of Human T cell Lymphotropic Virus Type l and Il J Infect Dis 1991 164 400 408 7 LipkadJ J et al Segregation of Human T Cell Lymphotropic Virus Type l and Il infections by Antibody Reactivity to Unique Viral Epitopes J Infect Dis 1992 165 268 272 8 Hadlock K G Goh C J Bradshaw P A Perkins S Lo J Habbas R K Kaplan I and Foung S K H Delineation of an Immunodominant and highly HTLV specific epitope within the HTLV I transmembrane glycoprotein Blood 1995 68 4 392 1399 9 Varma M Rudolph D Knuchel M Switzer W Hadlock K G Velligan M Chan l Foung S K H and Lal R B Enhanced specificity of truncated transmembrane protein for serologic confirmation of HTLV I and HTLV II infection by Western Blot assay containing recombinant envelope glycoproteins J Clin Micro 1995 33 12 3239 3244 Ec R
25. s como Irritante Xi Segue abaixo o Risco apropriado R e frases de Seguran a S R22 43 Prejudicial se ingerido Pode causar sensibilidade em contato com a pele S22 36 37 45 N o inalar Usar vestu rio apropriado e luvas descart veis Em caso de ingest o acidental procurar imediatamente orienta o m dica Apresentar a bula se poss vel A Solu o de Interrup o Stop Solution 2M cido Sulf rico o qual classificado pela Comunidade Econ mica Europ ia CEE por aplic vel Diretrizes como corrosivo C Segue abaixo o Risco apropriado R e frases de Seguran a S R35 Causa queimaduras grave S26 30 45 Caso entre em contato com os olhos lave imediatamente com gua em abund ncia e procure orienta o m dica Nunca adicione gua a este produto Em caso de acidente ou se sentir mal em contato com os componentes procure imediatamente orienta o m dica Apresentar a bula se poss vel A Pastilha de Substrato cont m o fenilenodiamina o qual classificado pela Comunidade econ mica Europ ia CEE por aplic vel Diretrizes como t xico T e perigoso para o ambiente N Segue abaixo o Risco aproriado R e frases de Seguran a S R20 21 25 Prejudicial se inalado e em contato com a pele T xico se ingerido R36 40 43 Irritatante para os olhos Evid ncia limitada de um efeito carcin geno Pode causar sensibiliza o em contato com a pele R50 53 68 Muito t xico a organismos aqu ticos
26. var uma placa s o necess rios aproximadamente 400 ml de solu o tamp o para lavagem de placas PROCEDIMENTO DO TESTE IMPORTANTE Os imunoensaios desta natureza s o sens veis temperatura e dependentes do tempo necess rio seguir risca os procedimentos do teste para garantir um desempenho perfeito Altera es em rela o ao procedimento recomendado podem acarretar resultados an malos 10 11 Remova a microplaca da bolsa de alum nio Agite os frascos de amostras e de controle antes do uso Preencha um recipiente de reagente com DILUENTE Usando um pipetador multicanal adicione 200 ul de DILUENTE em todos os po os Os po os A1 e B1 s o BRANCOS N O ADICIONE AMOSTRAS A ESTES PO OS Acrescente 20 ul adicionais de diluente a estes po os Acrescente 20 ul de amostra ao po o designado come ando pelo po o H1 Isto resultar em uma concentra o final da amostra de 1 11 N O COLOQUE AMOSTRA EM UM PO O VAZIO Ap s adicionar a amostra a ser analisada acrescente 20 ul po o de CONTROLE N O REATIVO aos po os C1 e D1 Adicione 20 ul de CONTROLE REATIVO por po o aos po os E1 F1 e G1 Misture bem batendo levemente em todos os lados da microplaca tendo o cuidado de manter a placa plana sobre a bancada Para evitar evapora o durante a incuba o cubra cuidadosamente a microplaca com uma tampa de placa fornecida Incube durante 60 minutos a 37 C n o utilize b
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